CN1305384A - Mmtv抗原的免疫调节组合物及其使用方法 - Google Patents

Mmtv抗原的免疫调节组合物及其使用方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及在人体中诱导针对MMTV抗原的免疫应答的方法,用来在人体中治疗或预防因感染MMTV或接触能与抗MMTV抗原的抗体发生反应的生物或化学试剂而引起的疾病或紊乱。

Description

MMTV抗原的免疫调节组合物及其使用方法
                        1．引言
本发明涉及对有此需要的人体给药一种免疫调节组合物的方法，该免疫调节组合物至少包含一种小鼠乳腺瘤病毒(MMTV)抗原，用来诱导针对这种抗原的免疫应答。本发明还涉及由MMTV核酸编码的重组MMTV抗原和含有这种重组MMTV抗原的免疫调节组合物，以及有效制备这种抗原的方法。本发明还涉及用于被动免疫治疗的、含有针对MMTV抗原的抗体的组合物。
                       2．发明背景
乳腺癌本身多种多样，妇女中乳腺癌的发病在世界范围内各不相同，Parkin等，1992,Ⅵ IARC Scientific Publications No.120,国际癌症研究机构。例如，极地附近的因纽特与丹麦、加拿大和康涅狄格相比，只有大约一半的发病率，Miller等，1996,ActaOncologica,35:577-580。膳食中辅因子或促进因子的改变曾被认为是人乳腺癌发病率不同的原因，这包括植物雌激素，Wu等，1996，《癌症流行病学、生物标记和预防》，5卷，901-906页；和异雌激素，Davis等，1995，《科学美国人》，10月刊，166-172页。但是，高脂肪膳食和环境异雌激素引起人乳腺癌增加的证据是不令人信服的，Modan等，1975，《癌症研究》，35卷，3503-3506页；Hunter等，1996，《新英格兰医学杂志》，334卷，356-361页；Krieger等，1994,J.Nat.Cancer Inst.86卷，590-599页。
一个已知的乳腺癌诱导试剂是小鼠乳腺瘤病毒，尽管是在小鼠中。小鼠乳腺瘤病毒是一种B型逆转录病毒，它通过插入诱变在易感小鼠中诱导乳腺瘤(乳腺癌)。与其他逆转录病毒相似，MMTV基因组编码三种类型的结构蛋白：非糖基化的病毒核心蛋白(gag)、病毒逆转录酶(pol)以及病毒包膜糖蛋白(env)。主要的结构蛋白根据它们的分子量进行命名，包括糖蛋白(gp)55、gp34、蛋白(p)28、p18、p14和p12。病毒基因组的3’和5’末端由被称为病毒长末端重复(LTR)的重复序列组成，LTR的大小约为1300碱基对(bp)。LTR的3’区域内是一个约为1000bp的开放阅读框(orf)，其蛋白产物被称为超抗原(SAg)，它对宿主T细胞群体介导深远的影响。
不像其他致癌逆转录病毒，MMTV不携带独特的癌基因。而是通过感染乳腺上皮细胞，将MMTV前病毒插入宿主基因组的int-1或int-2或其他未鉴定的基因区域，通过MMTV LTR中的糖皮质激素应答元件的增强子活性，导致这些基因的活化。
已经证明，不携带MMTV的小鼠通常能方便地用MMTV抗原进行免疫，从而对MMTV感染的乳腺瘤组织的移植物攻击具有较低的易感性或具有完全的抗性，B1air,1971，《以色列医学科学杂志》7卷，161-186页；Wei等，1993，《癌症生物学》，4卷，205-213页。
通过寻找病毒颗粒、免疫交叉反应或序列同源性以证明病毒在人乳腺癌中存在的努力已得到了相互矛盾的结果。已在以下样品中发现了可检测到的MMTV env基因相关的抗原反应：乳腺癌组织切片，Mesa-Tejada等，1978，《美国科学院院刊》75卷，1529-1533页；Levine等，1980《美国癌症研究协会进展》21卷，170页；Lloyd等，1983，《癌症》51卷，654-661页；培养的乳腺癌细胞，Litvinov和Golovkina,1989,Acta Virologica,33卷，137-142页；人奶，Zotter等，1980，《欧洲癌症杂志》16卷，455-467页；病人血清，Day等，1981，《美国科学院院刊》78卷，2483-2487页；囊肿液，Witkin等，1981，《临床探索杂志》67卷，216-222页；人乳腺癌细胞系产生的颗粒，Keydar等，1984，《美国科学院院刊》81卷，4188-4192页。已经发现人DNA在低严谨条件下与MMTV具有序列同源性，Callahan等，1992，《美国科学院院刊》79卷，5503-5507页，并且已经在人乳腺癌细胞中检测到与MMTV有关的RNA,Axel等，1972，《自然》235卷，32-36页。MMTV相关序列在患有乳腺癌病人的淋巴细胞中存在以及在他们的单核细胞中检测到逆转录酶(RT)活性已由Crepin等人报道，1984，《生物化学生物物理研究通讯》118卷，324-331页。Al-Sumidaie等，1988，《癌症研究》49卷：3879-3883报道了按串联重复方式排列的MMTV样序列仅在来自乳腺癌细胞的DNA中存在。
但是，以相对近一些时候发现的人内源逆转录序列(“HERs”)的观点来看，Westley等，1986，《病毒学杂志》60卷，743-749页，Ono等，1986，《病毒学杂志》60卷，589-598页，Faff等，1992，《普通病毒学杂志》73卷，1087-1097页，国际专利出版物WO97/17470，这些结果很难解释。可以解释为证明MMTV相关序列存在的数据更容易用人内源逆转录序列进行解释，Pogo和Holland,1997，《生物痕量元素研究》56卷，131-142页。更为增加混乱的是，在人蛋白的表位中检测到了env基因相关的抗原性，Hareuveni等，1990，《国际癌症杂志》46卷，1134-1135页。因此，对于乳腺癌的原因，已经有多种相互矛盾的解释。
在这里或本申请的任何其他章节引用的参考文献不应理解为这些参考文献是本发明的现有技术。
                       3．发明简述
本发明的方法涉及对人给药一种免疫调节组合物，该组合物至少包含一种MMTV抗原，用来诱导针对MMTV的细胞或体液免疫应答的增加，预防或治疗人体因MMTV感染而引起的疾病或紊乱。本发明部分基于以下发现，MMTV人兽互传给人的发生以及MMTV感染能在人中引起疾病和紊乱，包括乳腺癌和非霍奇金氏淋巴瘤。本发明的发明者已经确定，乳腺癌在全世界的不同发病率与不同地理区域中小鼠的MMTV流行和病毒载量有关。
本发明的方法还可用于预防或治疗人体中由一种能与抗MMTV抗原的抗体反应的生物或化学试剂引起的疾病或紊乱。这种免疫调节组合物至少包含一种MMTV抗原和一种可药用的载剂。
在本发明的另一个实施方案中，该组合物至少包含一种针对MMTV抗原的抗体，这种组合物可用于被动免疫治疗，预防或治疗人体中因MMTV感染引起的疾病或紊乱，或者预防或治疗人体中由一种能与抗MMTV抗原的抗体反应的生物或化学试剂引起的疾病或紊乱。
本发明还通过测定一种试验MMTV抗原是否能与一种获自对MMTV抗原已经显示免疫应答的个体(即个体如已经接触或感染MMTV的人或小鼠)的抗体或免疫细胞反应，或者通过测定试验抗原是否能与一种获自用MMTV抗原免疫的个体的抗体或免疫细胞反应，来提供选择能诱导免疫应答的MMTV抗原的方法，以及这种所选抗原在本发明的免疫调节组合物中的应用。
本发明还通过用获自对MMTV抗原已经显示免疫应答的个体的抗体或免疫细胞对文库(例如，包括但不限于组合肽库、随机肽库或噬菌体表达文库)进行筛选，或者用获自MMTV抗原免疫的个体的抗体或免疫细胞(例如一种中和性的鼠多克隆或单克隆抗体)进行筛选，来提供获得一种MMTV的肽模拟物的方法。文库的反应阳性成员(模拟物)可用于本发明的免疫调节组合物。这种模拟物可代表MMTV抗原的连续或不连续表位。
                       3.1定义
以下词在这里使用时将含有后面指明的意思。
“MMTV抗原”是指一种肽，它包含一种MMTV编码肽的全长天然氨基酸序列或其一个部分，例如，包括但不限于包膜肽、逆转录酶、核心蛋白或编码的超抗原。该词还指肽的类似物，这种类似物是功能上例如抗原性上的等价肽，例如一种肽模拟物。优选的类似物为基本上与相应的天然氨基酸同源的类似物，并且至少包含一种天然MMTV表位，例如一种中和表位。“MMTV抗原”一词还指编码一种肽的核酸分子，该肽包含一种MMTV编码蛋白的全长天然氨基酸序列或其一个部分。该词还指核酸分子的类似物，这种类似物在功能上是等价的，例如编码一种MMTV肽的分子。类似物可以是基本上与相应天然核苷酸序列同源的和编码至少含有一种天然MMTV表位如中和表位的肽的类似物。“MMTV抗原”一词还指一种肽，这种肽至少含有MMTV的不连续表位，或者是这种肽的类似物。该词还指编码一种肽的核酸分子，其中肽至少含有一种MMTV的不连续表位，或者是这种核酸分子的类似物。
“不连续表位”是指这样一种表位，它含有源自肽原始氨基酸序列中不同位置但在肽的三维结构中彼此相邻的氨基酸序列。这种不连续表位也被称为构象表位，它可由包含编码这些三维上相邻的氨基酸序列的核酸分子编码。它与连续表位相对，连续表位被定义为这样一种表位，其中抗原性残基存在于一个短的氨基酸序列中，即相互连续。
“有效数量”是指足以在被给药的受体中诱导可检测的免疫应答的抗原数量。免疫应答可包括能与抗原反应性抗体产生的诱导或细胞或体液免疫的诱导，但这不是限制。
“免疫调节组合物”是指含有一种MMTV抗原和一种可药用载剂的组合物，当这种组合物被给药于受体时能在受体的免疫系统功能中引起一种可检测的改变，例如免疫特异性抗体的产生或能引发细胞介导的免疫应答的抗体的产生。
“可药用载剂”是指一种不干扰活性成分的生物活性有效性的载体基质，它在化学特性上是惰性的，并且对给予了给药数量的病人没有毒性。
“治疗或预防由MMTV引起的疾病或紊乱”是指抑制MMTV病毒的复制，抑制MMTV的转移，或防止MMTV在其宿主中组装，或减轻或缓解MMTV感染引起的疾病的症状，包括但不限于乳腺癌和非霍奇金氏淋巴瘤。该词还包括减轻或缓解由一种能与抗MMTV抗原的抗体反应的生物或化学试剂引起的疾病的症状。如果存在病毒载量例如血液中病毒的拷贝数减少、致死性和/或致病性降低的情况，该处理就被认为是治疗性的。
                     4．附图简述
图1显示了一株鼠乳腺瘤病毒的完整前病毒基因组的核苷酸序列(SEQ ID NO:1)。
图2显示了gag-pol-pro多肽的编码氨基酸序列(SEQ ID NO:2)。
图3显示了gag-pro多肽的编码氨基酸序列(SEQ ID NO:3)。
图4显示了gag多肽的编码氨基酸序列(SEQ ID NO:4)。
图5显示了env多肽的编码氨基酸序列(SEQ ID NO:5)。
图6显示了超抗原(SAg)多肽的编码氨基酸序列(SEQ ID NO:6)。
                       5．发明详述
本发明的方法涉及对人给药一种免疫调节组合物，该组合物至少含有一种MMTV抗原，用于诱导抗MMTV的细胞或体液免疫应答的增加，来预防或治疗人体中因MMTV感染引起的疾病或紊乱。本发明的方法还可用于预防或治疗人体中由一种能与抗MMTV抗原的抗体反应的生物或化学试剂引起的疾病或紊乱。该免疫调节组合物至少含有一种MMTV抗原和一种可药用的载剂。如同上文所定义的，MMTV抗原可特别地是一种肽、肽类似物或编码这种肽或肽类似物的核酸分子。这种肽可包括MMTV的gag、pol和包膜蛋白及其部分。本发明进一步涉及表达MMTV抗原的方法，包括表达载体和细胞系(真核、原核以及病毒表达载体)，以及这种表达抗原在本发明的免疫调节组合物中的应用。
在本发明的另一个实施方案中，组合物至少含有一种针对MMTV抗原的抗体，该组合物可用于被动免疫治疗，用来预防或治疗人体中因MMTV感染引起的疾病或紊乱，或者用来预防或治疗人体中由一种能与抗MMTV抗原的抗体反应的生物或化学试剂引起的疾病或紊乱。
本发明还通过测定一种试验MMTV抗原是否能与一种获自对MMTV抗原已经显示免疫应答的个体(即个体例如已经接触或感染MMTV的人或小鼠)的抗体或免疫细胞反应，或者通过测定试验抗原是否能与一种获自用本发明的免疫调节组合物免疫的个体的抗体或免疫细胞反应，来提供选择能诱导免疫应答的MMTV抗原的方法，以及这种所选抗原在本发明的免疫调节组合物中的应用。例如，抗体可以是一种中和性的鼠多克隆或单克隆抗体。
本发明还通过用获自对MMTV抗原已经显示免疫应答的个体的抗体或免疫细胞对文库(例如，包括但不限于组合肽库、随机肽库或噬菌体表达文库)进行筛选，或者用获自用本发明的免疫调节组合物免疫的个体的抗体或免疫细胞(例如一种中和性的鼠多克隆或单克隆抗体)进行筛选，来提供获得一种MMTV抗原的肽模拟物的方法。文库的反应阳性成员(模拟物)可用于本发明的免疫调节组合物。
在本发明的一个实施方案中，至少一种抗原性或免疫原性的MMTV肽被用于本发明的免疫调节组合物中。在本发明的另一个实施方案中，至少有一种MMTV核苷酸序列被用于本发明的免疫调节组合物中，该核苷酸序列在表达于一种合适的宿主细胞时，至少产生一种抗原性或免疫原性的MMTV肽。一种抗原性的肽能被针对该肽的抗体免疫特异性地结合。一种免疫原性的肽能够激发针对该肽的免疫应答，例如产生能免疫特异性地结合该肽的抗体或引发针对该肽的细胞介导的免疫应答。
这种免疫调节组合物可单独以预防的方式用于那些没有接触MMTV或者MMTV抗体反应性生物或化学试剂的受体，或在受体已经感染或接触了MMTV或接触了MMTV抗体反应性生物或化学试剂或者同时接触了上述两种物质后用于治疗程序。本发明的MMTV抗原还可用于诊断免疫试验、被动免疫治疗和产生抗独特型抗体。
                     5.1．MMTV肽
本发明包括MMTV肽及其免疫原性或抗原性部分，以及这种肽或部分的类似物，具有至少代表一种MMTV的不连续表位的氨基酸序列的肽，和它们在本发明的免疫调节组合物中的应用。本发明的肽包括以下：(1)任何具有一个能与抗MMTV抗体免疫反应的氨基酸序列的肽；(2)任何具有一个包含如图2-6中所示的任一氨基酸序列(SEQ IDNO:2-6)或其至少6个连续氨基酸的免疫原性或抗原性部分的氨基酸序列的肽；以及(3)任何具有一个代表MMTV抗原的不连续表位的氨基酸序列并能与一种MMTV肽反应性抗体反应的肽。例如，图2中所示的、可用于本发明的组合物的、一种肽的抗原性部分具有选自大约aax至大约aay的氨基酸序列，其中aax表示大约从SEQ ID NO:2的1号氨基酸至大约1746号氨基酸，aay是SEQ ID NO:2的约x+9号氨基酸，即一个选自含有如下氨基酸序列的氨基酸序列：从SEQ ID NO:2的大约aa1至大约aa10，
          大约aa2    至大约 aa11，大约    aa3    至大约  aa12，大约  aa4    至大约aa13，  大约   aa5     至大约aa14， 大约    aa6至大约aa15，大约    aa7     至大约 aa16，大约    aa8    至大约  aa17，大约  aa9     至大约aa18，  大约   aa10    至大约aa19， 大约    aa11至大约aa20，大约    aa12    至大约 aa21，大约    aa13   至大约  aa22，大约  aa14    至大约aa23，  大约   aa15    至大约aa24， 大约    aa16至大约aa25，大约aa17        至大约 aa26，大约    aa18   至大约  aa27，大约  aa19    至大约aa28，  大约   aa20    至大约aa29， 大约    aa21至大约aa30，大约    aa22    至大约 aa11，大约    aa23   至大约  aa32，大约  aa24    至大约aa33，  大约   aa25    至大约aa34， 大约    aa26至大约aa35，大约    aa27    至大约 aa36，大约    aa28   至大约  aa37，大约  aa29    至大约aa38，  大约   aa30    至大约aa39， 大约    aa31至大约aa40，大约    aa32    至大约 aa41，大约    aa33   至大约  aa42，大约  aa34    至大约aa43，  大约   aa35    至大约aa44， 大约    aa36至大约aa45， 大约    aa37  至大约aa46，大约    aa38  至大约aa47，大约  aa39     至大约aa48，大约  aa40    至大约aa49，大约  aa41至大约aa50， 大约    aa42  至大约aa51，大约    aa43  至大约aa52，大约  aa44     至大约aa53，大约  aa45    至大约aa54，大约  aa46至大约aa55， 大约    aa47  至大约aa56，大约    aa48  至大约aa57，大约  aa49     至大约aa58，大约  aa50    至大约aa59，大约  aa51至大约aa60， 大约    aa52  至大约aa61，大约    aa53  至大约aa62，大约  aa54     至大约aa63，大约  aa55    至大约aa64，大约  aa56至大约aa65， 大约    aa57  至大约aa66，大约    aa58  至大约aa67，大约  aa59     至大约aa68，大约  aa60    至大约aa69，大约  aa61至大约aa70， 大约    aa62  至大约aa71，大约    aa63  至大约aa72，大约  aa64     至大约aa73，大约  aa65    至大约aa74，大约  aa66至大约aa75， 大约    aa67  至大约aa76，大约    aa68  至大约aa77，大约  aa69     至大约aa78，大约  aa70    至大约aa79，大约  aa71至大约aa80， 大约    aa72  至大约aa81，大约    aa73  至大约aa82，大约  aa74     至大约aa83，大约  aa75    至大约aa84，大约  aa76至大约aa85， 大约    aa77  至大约aa86，大约    aa78  至大约aa87，大约  aa79     至大约aa88，大约  aa80    至大约aa89，大约  aa81至大约aa90， 大约    aa82  至大约aa91，大约    aa83  至大约aa92，大约  aa64     至大约aa93，大约  aa85    至大约aa94，大约  aa86至大约aa95， 大约    aa87  至大约aa96，大约    aa88  至大约aa97，大约  aa89     至大约aa98，大约  aa90    至大约aa99，大约  aa91至大约aa100，大约    aa92  至大约aa101，大约   aa93  至大约aa102，大约  aa94     至大约aa103，大约 aa95    至大约aa104，大约 aa96
至大约aa105，大约  aa97  至大约aa106，大约  aa98  至大约aa107，大约  aa99  至大约aa108，大约  aa100  至大约aa109，大约aa101  至大约aa110，大约  aa102  至大约aa111，大约  aa103至大约aa112，大约  aa104  至大约aa113，大约  aa105  至大约aa114，大约  aa106  至大约aa115，大约  aa107  至大约aa116，大约  aa108  至大约aa117，大约  aa109  至大约aa118，大约  aa110
至大约aa119，大约  aa111  至大约aa120，大约  aa111  至大约aa121，大约  aa113  至大约aa122，大约  aa114  至大约aa123，大约  aa115  至大约aa124，大约  aa116  至大约aa125，大约  aa117
至大约aa126，大约  aa118  至大约aa127，大约  aa119  至大约aa128，大约  aa120  至大约aa129，大约  aa121  至大约aa130，大约  aa122  至大约aa131，大约  aa123  至大约aa132，大约  aa124
至大约aa133，大约  aa125  至大约aa134，大约  aa126  至大约aa135，大约  aa127  至大约aa136，大约  aa128  至大约aa137，大约  aa129  至大约aa138，大约  aa130  至大约aa139，大约  aa131
至大约aa140，大约  aa132  至大约aa141，大约  aa133  至大约aa142，大约  aa134  至大约aa143，大约  aa135  至大约aa144，大约  aa136  至大约aa145，大约  aa137  至大约aa146，大约  aa138
至大约aa147，大约  aa139  至大约aa148，大约  aa140  至大约aa149，大约  aa141  至大约aa150，大约  aa142  至大约aa151，大约  aa143  至大约aa152，大约  aa144  至大约aa153，大约  aa145
至大约aa154，大约  aa146  至大约aa155，大约  aa147  至大约aa156，大约  aa148  至大约aa157，大约  aa149  至大约aa158，大约  aa150  至大约aa159，大约  aa151  至大约aa160，大约  aa152
至大约aa161，大约  aa153  至大约aa162，大约  aa154  至大约aa163，大约  aa155  至大约aa164，大约  aa156  至大约aa165，大约  aa157  至大约aa166，大约  aa158  至大约aa167，大约  aa159
至大约aa168，大约  aa160  至大约aa169，大约  aa161  至大约aa170，大约  aa162  至大约aa171，大约  aa163  至大约aa172，大约  aa164  至大约aa173，大约  aa165  至大约aa174，大约  aa166
至大约aa175，大约  aa167  至大约aa176，大约  aa168  至大约aa177，大约  aa169  至大约aa178，大约  aa170  至大约aa179，大约  aa171  至大约aa180，大约  aa172  至大约aa181，大约  aa173
至大约aa182，大约  aa174  至大约aa183，大约  aa175  至大约aa184，大约  aa176  至大约aa185，大约  aa177  至大约aa186，大约  aa178  至大约aa187，大约  aa179  至大约aa188，大约  aa180
至大约aa189，大约  aa181  至大约aa190，大约  aa182  至大约aa191，大约  aa183  至大约aa192，大约  aa184  至大约aa193，大约  aa185  至大约aa194，大约  aa186  至大约aa195，大约  aa187
至大约aa196，大约  aa188  至大约aa197，大约  aa189  至大约aa198，大约  aa190  至大约aa199，大约  aa191  至大约aa200，大约  aa192  至大约aa201，大约  aa193  至大约aa202，大约  aa194
至大约aa203，大约  aa195  至大约aa204，大约  aa196  至大约aa205，大约  aa197  至大约aa206，大约  aa198  至大约aa207，大约  aa199  至大约aa208，大约  aa200  至大约aa209，大约  aa201
至大约aa210，大约  aa202  至大约aa211，大约  aa203  至大约aa212，大约  aa204  至大约aa213，大约  aa205  至大约aa214，大约  aa206  至大约aa215，大约  aa207  至大约aa216，大约  aa208
至大约aa217，大约  aa209  至大约aa218，大约  aa210  至大约aa219，大约  aa211  至大约aa220，大约  aa212  至大约aa221，大约  aa213  至大约aa222，大约  aa214  至大约aa223，大约  aa215
至大约aa224，大约  aa216  至大约aa225，大约  aa217  至大约aa226，大约  aa218  至大约aa227，大约  aa219  至大约aa228，大约  aa220  至大约aa229，大约  aa221  至大约aa230，大约  aa222
至大约aa231，大约  aa223  至大约aa232，大约  aa224  至大约aa233，大约  aa225  至大约aa234，大约  aa226  至大约aa235，大约  aa227  至大约aa236，大约  aa228  至大约aa237，大约aa229
至大约aa238，大约  aa230  至大约aa239，大约  aa231  至大约aa240，大约  aa232  至大约aa241，大约  aa233  至大约aa242，大约  aa234  至大约aa243，大约  aa235  至大约aa244，大约  aa236
至大约aa245，大约  aa237  至大约aa246，大约  aa238  至大约aa247，大约  aa239  至大约aa248，大约  aa240  至大约aa249，大约  aa241  至大约aa250，大约  aa242  至大约aa251，大约  aa243
至大约aa252，大约  aa244  至大约aa253，大约  aa245  至大约aa254，大约  aa246  至大约aa255，大约  aa247  至大约aa256，大约  aa248  至大约aa257，大约  aa249  至大约aa258，大约  aa250
至大约aa259，大约  aa251  至大约aa260，大约  aa252  至大约aa261，大约  aa253  至大约aa262，大约  aa254  至大约aa263，大约  aa255  至大约aa264，大约  aa256  至大约aa265，大约  aa257
至大约aa266，大约  aa258  至大约aa267，大约  aa259  至大约aa268，大约  aa260  至大约aa269，大约  aa261  至大约aa270，大约  aa262  至大约aa271，大约  aa263  至大约aa272，大约  aa264
至大约aa273，大约  aa265  至大约aa274，大约  aa266  至大约aa275，大约  aa267  至大约aa276，大约  aa268  至大约aa277，大约  aa269  至大约aa278，大约  aa270  至大约aa279，大约  aa271
至大约aa280，大约  aa272  至大约aa281，大约  aa273  至大约aa282，大约  aa274  至大约aa283，大约  aa275  至大约aa284，大约  aa276  至大约aa285，大约  aa277  至大约aa286，大约  aa278
至大约aa287，大约  aa279  至大约aa288，大约  aa280  至大约aa289，大约  aa281  至大约aa290，大约  aa282  至大约aa291，大约  aa283  至大约aa292，大约  aa284  至大约aa293，大约  aa285
至大约aa294，大约  aa286  至大约aa295，大约  aa287  至大约aa296，大约  aa288  至大约aa297，大约  aa289  至大约aa298，大约  aa290  至大约aa299，大约  aa291  至大约aa300，大约  aa292
至大约aa301，大约  aa293  至大约aa302，大约  aa294  至大约aa303，大约  aa295  至大约aa304，大约  aa296  至大约aa305，大约  aa297  至大约aa306，大约  aa298  至大约aa307，大约aa299
至大约aa308，大约  aa300  至大约aa309，大约  aa301  至大约aa310，大约  aa302  至大约aa311，大约  aa303  至大约aa312，大约  aa304  至大约aa313，大约  aa305  至大约aa314，大约  aa306
至大约aa315，大约  aa307  至大约aa316，大约  aa308  至大约aa317，大约  aa309  至大约aa318，大约  aa310  至大约aa319，大约  aa311  至大约aa320，大约  aa312  至大约aa321，大约  aa313
至大约aa322，大约  aa314  至大约aa323，大约aa315  至大约aa324，大约  aa316  至大约aa325，大约  aa317  至大约aa326，大约  aa318  至大约aa327，大约  aa319  至大约aa328，大约  aa320
至大约aa329，大约  aa321  至大约aa330，大约  aa322  至大约aa331，大约aa323  至大约aa332，大约  aa324  至大约aa333，大约  aa325  至大约aa334，大约  aa325  至大约aa335，大约  aa327
至大约aa336，大约  aa328  至大约aa337，大约  aa329  至大约aa338，大约  aa330  至大约aa339，大约  aa331  至大约aa340，大约  aa332  至大约aa341，大约  aa333  至大约aa342，大约  aa334
至大约aa343，大约  aa335  至大约aa344，大约  aa336  至大约aa345，大约  aa337  至大约aa346，大约  aa338  至大约aa347，大约  aa339  至大约aa348，大约  aa340  至大约aa349，大约  aa341
至大约aa350，大约  aa342  至大约aa351，大约  aa343  至大约aa352，大约  aa344  至大约aa353，大约  aa345  至大约aa354，大约  aa346  至大约aa355，大约  aa347  至大约aa356，大约  aa348
至大约aa357，大约  aa349  至大约aa358，大约  aa350  至大约aa359，大约  aa351  至大约aa360，大约  aa352  至大约aa361，大约  aa353  至大约aa362，大约  aa354  至大约aa363，大约  aa355
至大约aa364，大约  aa356  至大约aa365，大约  aa357  至大约aa366，大约  aa358  至大约aa367，大约  aa359  至大约aa368，大约  aa360  至大约aa369，大约  aa361  至大约  aa370，大约  aa362
至大约aa371，大约  aa363  至大约aa372，大约  aa364  至大约aa373，大约  aa365  至大约aa374，大约  aa366  至大约aa375，大约  aa367  至大约aa376，大约  aa368  至大约aa377，大约  aa369
至大约aa378，大约  aa370  至大约aa379，大约  aa371  至大约aa380，大约  aa372  至大约aa381，大约  aa373  至大约aa382，大约  aa374  至大约aa383，大约  aa375  至大约aa384，大约  aa376
至大约aa385，大约  aa377  至大约aa386，大约  aa378  至大约aa387，大约  aa379  至大约aa388，大约  aa380  至大约aa389，大约  aa381  至大约aa390，大约  aa382  至大约aa391，大约  aa383
至大约aa392，大约  aa384  至大约aa393，大约  aa385  至大约aa394，大约  aa386  至大约aa395，大约  aa387  至大约aa396，大约  aa388  至大约aa397，大约  aa389  至大约aa398，大约  aa390
至大约aa399，大约  aa391  至大约aa400，大约  aa392  至大约aa401，大约aa393  至大约aa402，大约  aa394  至大约aa403，大约  aa395  至大约aa404，大约aa396  至大约aa405，大约  aa397
至大约aa406，大约  aa398  至大约aa407，大约  aa399  至大约aa408，大约  aa400  至大约aa409，大约  aa401  至大约aa410，大约  aa402  至大约aa411，大约  aa403  至大约aa412，大约  aa404
至大约aa413，大约  aa405  至大约aa414，大约  aa406  至大约aa415，大约  aa407  至大约aa416，大约  aa408  至大约aa417，大约  aa409  至大约aa418，大约  aa410  至大约aa419，大约  aa411
至大约aa420，大约aa412  至大约aa421，大约  aa413  至大约aa422，大约  aa414  至大约aa423，大约  aa415  至大约aa424，大约  aa416  至大约aa425，大约  aa417  至大约aa426，大约  aa418
至大约aa427，大约  aa419  至大约aa428，大约  aa420  至大约aa429，大约  aa421  至大约aa430，大约  aa422  至大约aa431，大约  aa423  至大约aa432，大约  aa424  至大约aa433，大约  aa425
至大约aa434，大约  aa426  至大约aa435，大约  aa427  至大约aa436，大约  aa428  至大约aa437，大约  aa429  至大约aa438，大约  aa430  至大约aa439，大约  aa431  至大约aa440，大约  aa432
至大约aa441，大约  aa433  至大约aa442，大约  aa434  至大约aa443，大约  aa435  至大约aa444，大约  aa436  至大约aa445，大约  aa437  至大约aa446，大约  aa438  至大约aa447，大约  aa439
至大约aa448，大约  aa440  至大约aa449，大约  aa441  至大约aa450，大约  aa442  至大约aa451，大约  aa443  至大约aa452，大约  aa444  至大约aa453，大约  aa445  至大约aa454，大约  aa446
至大约aa455，大约  aa447  至大约aa456，大约  aa448  至大约aa457，大约  aa449  至大约aa458，大约  aa450  至大约aa459，大约  aa451  至大约aa460，大约  aa452  至大约aa461，大约  aa453
至大约aa462，大约  aa454  至大约aa463，大约  aa455  至大约aa464，大约  aa456  至大约aa465，大约  aa457  至大约aa466，大约  aa468  至大约aa467，大约  aa459  至大约aa468，大约  aa460
至大约aa469，大约  aa461  至大约aa470，大约  aa462  至大约aa471，大约  aa463  至大约aa472，大约  aa464  至大约aa473，大约  aa465  至大约aa474，大约  aa466  至大约aa475，大约  aa467
至大约aa476，大约  aa468  至大约aa477，大约  aa469  至大约aa478，大约  aa470  至大约aa479，大约  aa471  至大约aa480，大约  aa472  至大约aa481，大约  aa473  至大约aa482，大约  aa474
至大约aa483，大约  aa475  至大约aa484，大约  aa476  至大约aa485，大约  aa477  至大约aa486，大约  aa478  至大约aa487，大约  aa479  至大约aa488，大约  aa480  至大约aa489，大约  aa481
至大约aa490，大约  aa482  至大约aa491，大约  aa483  至大约aa492，大约  aa484  至大约aa493，大约  aa485  至大约aa494，大约  aa486  至大约aa495，大约  aa487  至大约aa496，大约  aa488
至大约aa497，大约  aa489  至大约aa498，大约  aa490  至大约aa499，大约  aa491  至大约aa500，大约  aa492  至大约aa501，大约  aa493  至大约aa502，大约  aa494  至大约aa503，大约  aa495
至大约aa504，大约  aa496  至大约aa505，大约  aa497  至大约aa506，大约  aa498  至大约aa507，大约  aa499  至大约aa508，大约  aa500  至大约aa509，大约  aa501  至大约aa510，大约  aa502
至大约aa511，大约  aa503  至大约aa512，大约  aa504  至大约aa513，大约  aa505  至大约aa514，大约  aa506  至大约aa515，大约  aa507  至大约aa516，大约  aa508  至大约aa517，大约  aa509
至大约aa518，大约  aa510  至大约aa519，大约  aa511  至大约aa520，大约  aa512  至大约aa521，大约  aa513  至大约aa522，大约  aa514  至大约aa523，大约  aa515  至大约aa524，大约  aa516
至大约aa525，大约  aa517  至大约aa526，大约  aa518  至大约aa527，大约  aa519  至大约aa528，大约  aa520  至大约aa529，大约  aa521  至大约aa530，大约  aa522  至大约aa531，大约  aa523
至大约aa532，大约  aa524  至大约aa533，大约  aa525  至大约aa534，大约  aa526  至大约aa535，大约  aa527  至大约aa536，大约  aa528  至大约aa537，大约  aa529  至大约aa538，大约  aa530
至大约aa539，大约  aa531  至大约aa540，大约  aa532  至大约aa541，大约  aa533  至大约aa542，大约  aa534  至大约aa543，大约  aa535  至大约aa544，大约  aa536  至大约aa545，大约  aa537
至大约aa546，大约  aa538  至大约aa547，大约  aa539  至大约aa548，大约  aaa540  至大约aa549，大约  aa541  至大约aa550，大约  aa542  至大约aa551，大约  aa543  至大约aa552，大约  aa544
至大约aa553，大约  aa545  至大约aa554，大约  aa546  至大约aa555，大约  aa547  至大约aa556，大约  aa548  至大约aa557，大约  aa549  至大约aa558，大约  aa550  至大约aa559，大约  aa551
至大约aa560，大约  aa552  至大约aa561，大约  aa553  至大约aa562，大约  aa554  至大约aa563，大约  aa555  至大约aa564，大约  aa556  至大约aa565，大约  aa557  至大约aa566，大约  aa558
至大约aa567，大约  aa559  至大约aa568，大约  aa560  至大约aa569，大约  aa561  至大约aa570，大约  aa562  至大约aa571，大约  aa563  至大约aa572，大约  aa564  至大约aa573，大约  aa565
至大约aa574，大约  aa566  至大约aa575，大约  aa567  至大约aa576，大约  aa568  至大约aa577，大约  aa569  至大约aa578，大约  aa570  至大约aa579，大约  aa571  至大约aa580，大约  aa572
至大约aa581，大约  aa573  至大约aa582，大约  aa574  至大约aa583，大约  aa575  至大约aa584，大约  aa576  至大约aa585，大约aa577  至大约aa586，大约  aa578  至大约aa587，大约  aa579
至大约aa588，大约  aa580  至大约aa589，大约  aa581  至大约aa590，大约  aa582  至大约aa591，大约  aa583  至大约aa592，大约  aa584  至大约aa593，  大约  aa585  至大约aa594，大约  aa586
至大约aa595，大约  aa587  至大约aa596，大约  aa588  至大约aa597，大约  aa589  至大约aa598，大约  aa590  至大约aa599，大约aa591  至大约aa600，大约  aa592  至大约aa601，大约  aa593
至大约aa602，大约  aa594  至大约aa603，大约  aa595  至大约aa604，大约  aa596  至大约aa605，大约  aa597  至大约aa606，大约  aa598  至大约aa607，大约  aa599  至大约aa608，大约  aa600
至大约aa609，大约  aa601  至大约aa610，大约  aa602  至大约aa611，大约  aa603  至大约aa612，大约  aa604  至大约aa613，大约  aa605  至大约aa614，大约  aa606  至大约aa615，大约  aa607
至大约aa616，大约  aa608  至大约aa617，大约  aa609  至大约aa618，大约  aa610  至大约aa619，大约  aa611  至大约aa620，大约  aa612  至大约aa621，大约  aa613  至大约aa622，大约  aa614
至大约aa623，大约  aa615  至大约aa624，大约  aa616  至大约aa625，大约  aa617  至大约aa626，大约  aa618  至大约aa627，大约  aa619  至大约aa628，大约  aa620  至大约aa629，大约  aa621
至大约aa630，大约  aa622  至大约aa631，大约  aa623  至大约aa632，大约  aa624  至大约aa633，大约  aa625  至大约aa634，大约  aa626  至大约aa635，大约  aa627  至大约aa636，大约  aa628
至大约aa637，大约  aa629  至大约aa638，大约  aa630  至大约aa639，大约  aa631  至大约aa640，大约  aa632  至大约aa641，大约  aa633  至大约aa642，大约  aa634  至大约aa643，大约  aa635
至大约aa644，大约  aa636  至大约aa645，大约  aa637  至大约aa646，大约  aa638  至大约aa647，大约  aa639  至大约aa648，大约  aa640  至大约aa649，大约  aa641  至大约aa650，大约  aa642
至大约aa651，大约  aa643  至大约aa652，大约  aa644  至大约aa653，大约  aa645  至大约aa654，大约  aa646  至大约aa655，大约  aa647  至大约aa656，大约  aa648  至大约aa657，大约  aa649
至大约aa658，大约  aa650  至大约aa659，大约  aa651  至大约aa660，大约  aa652  至大约aa661，大约  aa653  至大约aa662，大约  aa654  至大约aa663，大约  aa655  至大约aa664，大约  aa656至大约aa665，大约  aa657  至大约aa666，大约  aa658  至大约aa667，大约  aa659  至大约aa668，大约  aa660  至大约aa669，大约  aa661  至大约aa670，大约  aa662  至大约aa671，大约  aa663
至大约aa642，大约  aa664  至大约aa673，大约  aa665  至大约aa674，大约  aa666  至大约aa675，大约  aa667  至大约aa676，大约  aa668  至大约aa677，大约  aa669  至大约aa678，大约  aa670至大约aa679，大约  aa671  至大约aa680，大约  aa672  至大约aa681，大约  aa673  至大约aa682，大约  aa674  至大约aa683，大约  aa675  至大约aa684，大约  aa676  至大约aa685，大约  aa677
至大约aa686，大约  aa678  至大约aa687，大约  aa679  至大约aa688，大约  aa680  至大约aa689，大约  aa681  至大约aa690，大约  aa682  至大约aa691，大约  aa683  至大约aa692，大约  aa684
至大约aa693，大约  aa685  至大约aa694，大约  aa686  至大约aa695，大约  aa687  至大约aa696，大约  aa688  至大约aa697，大约  aa689  至大约aa698，大约  aa690  至大约aa699，大约  aa691
至大约aa700，大约  aa692  至大约aa701，大约  aa693  至大约aa702，大约  aa694  至大约aa703，大约  aa695  至大约aa704，大约  aa696  至大约aa705，大约  aa697  至大约aa706，大约  aa698
至大约aa707，大约  aa699  至大约aa708，大约  aa700  至大约aa709，大约  aa701  至大约aa710，大约  aa702  至大约aa711，大约  aa703  至大约aa712，大约  aa704  至大约aa713，大约  aa705
至大约aa714，大约  aa706  至大约aa715，大约  aa707  至大约aa716，大约  aa708  至大约aa717，大约  aa709  至大约aa718，大约  aa710  至大约aa719，大约  aa711  至大约aa720，大约  aa712
至大约aa721，大约  aa713  至大约aa722，大约  aa714  至大约aa723，大约  aa715  至大约aa724，大约  aa716  至大约aa725，大约  aa717  至大约aa726，大约  aa718  至大约aa727，大约  aa719
至大约aa728，大约  aa720  至大约aa729，大约  aa721  至大约aa730，大约  aa722  至大约aa731，大约  aa723  至大约aa732，大约  aa724  至大约aa733，大约  aa725  至大约aa734，大约  aa726
至大约aa735，大约  aa727  至大约aa736，大约  aa728  至大约aa737，大约  aa729  至大约aa738，大约  aa730  至大约aa739，大约  aa731  至大约aa740，大约  aa732  至大约aa741，大约  aa733
至大约aa742，大约  aa734  至大约aa743，大约  aa735  至大约aa744，大约  aa736  至大约aa745，大约  aa737  至大约aa746，大约  aa738  至大约aa747，大约  aa739  至大约aa748，大约  aa740
至大约aa749，大约  aa741  至大约aa750，大约  aa742  至大约aa751，大约  aa743  至大约aa752，大约  aa744  至大约aa753，大约  aa745  至大约aa754，大约  aa746  至大约aa755，大约  aa747
至大约aa756，大约  aa748  至大约aa757，大约  aa749  至大约aa758，大约  aa750  至大约aa759，大约  aa751  至大约aa760，大约  aa752  至大约aa761，大约  aa753  至大约aa762，大约  aa754
至大约aa763，大约  aa755  至大约aa764，大约  aa756  至大约aa765，大约  aa757  至大约aa766，大约  aa758  至大约aa767，大约  aa759  至大约aa768，大约  aa760  至大约aa769，大约  aa761
至大约aa770，大约  aa762  至大约aa771，大约  aa763  至大约aa472，大约  aa764  至大约aa773，大约  aa765  至大约aa774，大约  aa766  至大约aa775，大约  aa767  至大约aa776，大约  aa768
至大约aa777，大约  aa769  至大约aa778，大约  aa770  至大约aa779，大约  aa772  至大约aa780，大约  aa772  至大约aa781，大约  aa773  至大约aa782，大约  aa774  至大约aa783，大约  aa775
至大约  aa784，大约  aa776  至大约aa785，大约  aa777  至大约aa786，大约  aa778  至大约aa787，大约  aa779  至大约aa788，大约  aa780  至大约aa789，大约  aa781  至大约aa790，大约  aa782
至大约aa791，大约  aa783  至大约aa792，大约  aa784  至大约aa793，大约  aa785  至大约aa794，大约  aa786  至大约aa795，大约  aa787  至大约aa796，大约  aa788  至大约aa797，大约  aa789
至大约aa798，大约  aa790  至大约aa799，大约  aa791  至大约aa800，大约  aa792  至大约aa802，大约  aa793  至大约aa802，大约  aa794  至大约aa803，大约  aa795  至大约aa804，大约  aa796
至大约aa805，大约  aa797  至大约aa806，大约  aa798  至大约aa807，大约  aa799  至大约aa808，大约  aa800  至大约aa809，大约  aa801  至大约aa810，大约  aa802  至大约aa811，大约  aa803
至大约aa812，大约aa804  至大约aa813，大约  aa805  至大约aa814，大约  aa806  至大约aa815，大约  aa807  至大约aa816，大约  aa808  至大约aa817，大约  aa809  至大约aa818，大约  aa810至大约aa819，大约  aa811  至大约aa820，大约  aa612  至大约aa821，大约  aa813  至大约aa822，大约aa814  至大约aa823，大约  aa815  至大约aa824，大约  aa816  至大约aa825，大约  aa817
至大约aa826，大约  aa818  至大约aa827，大约  aa819  至大约aa828，大约  aa820  至大约aa829，大约  aa821  至大约aa830，大约  aa822  至大约aa831，大约  aa823  至大约aa832，大约  aa824
至大约aa833，大约  aa825  至大约aa834，大约  aa826   至大约aa835，大约  aa827  至大约aa836，大约  aa828  至大约aa837，大约  aa829  至大约aa838，大约  aa830  至大约aa839，大约  aa831至大约aa840，大约  aa832  至大约aa841，大约  aa833  至大约aa842，大约  aa834  至大约aa843，大约  aa835  至大约aa844，大约  aa836  至大约aa845，大约  aa837  至大约aa846，大约  aa838
至大约aa847，大约  aa839  至大约aa848，大约  aa840  至大约aa849，大约  aa841  至大约aa850，大约  aa842  至大约aa851，大约  aa843  至大约aa852，大约  aa844  至大约aa853，大约  aa845
至大约aa854，大约  aa846  至大约aa855，大约  aa847  至大约aa856，大约  aa848  至大约aa854，大约  aa849  至大约aa858，大约  aa850  至大约aa859，大约  aa851  至大约aa860，大约  aa852
至大约aa861，大约  aa853  至大约aa862，大约  aa854  至大约aa863，大约  aa855  至大约aa864，大约  aa856  至大约aa865，大约  aa857  至大约aa866，大约  aa858  至大约aa867，大约  aa859
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至大约aa875，大约  aa867  至大约aa876，大约  aa868  至大约aa877，大约  aa869  至大约aa878，大约  aa870  至大约aa879，大约  aa871  至大约aa880，大约  aa872  至大约aa881，大约  aa873
至大约aa882，大约  aa874  至大约aa883，大约  aa875  至大约aa884，大约  aa876  至大约aa885，大约  aa877  至大约aa886，大约  aa878  至大约aa887，大约  aa879  至大约aa888，大约  aa880
至大约aa889，大约  aa881  至大约aa890，大约  aa882  至大约aa891，大约  aa883  至大约aa892，大约  aa884  至大约aa893，大约  aa885  至大约aa894，大约  aa886  至大约aa895，大约  aa887
至大约aa896，大约   aa888  至大约aa897，大约  aa889  至大约aa898，大约  aa890  至大约aa899，大约  aa891  至大约aa900，大约  aa892  至大约aa901，大约  aa893  至大约aa902，大约  aa894
至大约aa903，大约  aa895  至大约aa904，大约  aa896  至大约aa905，大约  aa897  至大约aa906，大约  aa898  至大约aa907，大约  aa899  至大约aa908，大约  aa900  至大约aa909，大约  aa901
至大约aa910，大约  aa902  至大约aa911，大约  aa903  至大约aa912，大约  aa904  至大约aa913，大约  aa905  至大约aa914，大约  aa906  至大约aa915，大约  aa907  至大约aa916，大约  aa908
至大约aa917，大约  aa909  至大约aa916，大约  aa910  至大约aa919，大约  aa911  至大约aa920，大约  aa912  至大约aa921，大约  aa913  至大约aa922，大约  aa914  至大约aa923，大约  aa915
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至大约aa952，大约  aa944  至大约aa953，大约  aa945  至大约aa954，大约  aa946  至大约aa955，大约  aa947  至大约aa956，大约  aa948  至大约aa957，大约  aa949  至大约aa958，大约  aa950
至大约aa959，大约  aa951  至大约aa960，大约  aa952  至大约aa961，大约  aa953  至大约aa962，大约  aa954  至大约aa963，大约  aa955  至大约aa964，大约  aa956  至大约aa965，大约  aa957
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至大约aa973，大约  aa965  至大约aa974，大约  aa966  至大约aa975，大约  aa967  至大约aa976，大约  aa968  至大约aa977，大约  aa969  至大约aa978，大约  aa970  至大约aa979，大约  aa971
至大约aa980，大约  aa972  至大约aa981，大约  aa973  至大约aa982，大约  aa974  至大约aa983，大约  aa975  至大约aa984，大约  aa976  至大约aa985，大约  aa977  至大约aa986，大约  aa978
至大约aa987，大约  aa949  至大约aa988，大约  aa980  至大约aa989，大约  aa981  至大约aa990，大约  aa982  至大约aa991，大约  aa983  至大约aa992，大约  aa984  至大约aa993，大约  aa985
至大约aa994，大约  aa986  至大约aa995，大约  aa987  至大约aa996，大约  aa988  至大约aa997，大约  aa989  至大约aa998，大约  aa990  至大约aa999，大约  aa991  至大约aa1000，大约aa992  至大约aa1001，大约  aa998  至大约  aa1002，大约  aa994至大约aa1003，大约  aa995  至大约aa1004，大约  aa996  至大约aa1005，大约  aa997  至大约aa1006，大约  aa998  至大约aa1007，大约  aa999  至大约aa1008，大约  aa1000  至大约aa1009，大约aa1001  至大约aa1010，大约  aa1002  至大约aa1011，大约  aa1003至大约aa1012，大约  aa1004  至大约aa1013，大约  aa1005  至大约aa1014，大约  aa1006  至大约aa1015，大约  aa1007  至大约  aa1016，大约  aa1008  至大约aa1017，大约  aa1009  至大约aa1018，大约aa1010  至大约  aa1019，大约  aa1011  至大约aa1020，大约  aa1012至大约aa1021，大约  aa1013  至大约aa1022，大约  aa1014  至大约aa1023，大约  aa1015  至大约aa1024，大约  aa1016  至大约  aa1025，大约  aa1017  至大约aa1026，大约  aa1018  至大约aa1027，大约aa1019  至大约aa1028，大约  aa1020  至大约aa1029，大约  aa1021至大约aa1030，大约  aa1022  至大约aa1031，大约  aa1023  至大约aa1032，大约  aa1024  至大约aa1033，大约  aa1025  至大约  aa1034，大约  aa1026  至大约aa1035，大约  aa1027  至大约aa1036，大约aa1028  至大约aa1037，大约  aa1029  至大约aa1038，大约  aa1030至大约aa1039，大约  aa1031  至大约aa1040，大约  aa1032  至大约aa1041，大约  aa1033  至大约aa1042，大约  aa1034  至大约  aa1043，大约  aa1035  至大约aa1044，大约  aa1036  至大约aa1045，大约aa1037  至大约  aa1046，大约  aa1038  至大约aa1047，大约  aa1039至大约aa1048，大约  aa1040  至大约aa1049，大约  aa1041  至大约aa1050，大约  aa1042  至大约aa1051，大约  aa1043  至大约  aa1052，大约  aa1044  至大约aa1053，大约  aa1045  至大约aa1054，大约aa1046  至大约aa1055，大约  aa1047  至大约  aa1056，大约  aa1048至大约aa1057，大约  aa1049  至大约aa1058，大约  aa1050  至大约aa1059，大约  aa1051  至大约aa1060，大约  aa1052  至大约aa1061，大约  aa1053  至大约aa1062，大约  aa1054  至大约aa1063，大约aa1055  至大约aa1064，大约  aa1056  至大约aa1065，大约  aa1057至大约aa1046，大约  aa1058  至大约aa1067，大约  aa1059  至大约aa1068，大约  aa1060  至大约aa1069，大约  aa1061  至大约aa1070，大约  aa1062  至大约aa1071，大约  aa1063  至大约aa1072，大约aa1064  至大约aa1073，大约  aa1065  至大约aa1074，大约  aa1066至大约aa1075，大约  aa1067  至大约aa1076，大约  aa1068  至大约aa1077，大约  aa1069  至大约aa1078，大约  aa1070  至大约aa1079，大约  aa1071  至大约aa1080，大约  aa1072  至大约aa1081，大约aa1073  至大约aa1082，大约  aa1074  至大约aa1083，大约  aa1075至大约aa1084，大约  aa1076  至大约aa1085，大约  aa1077  至大约aa1086，大约  aa1078  至大约aa1087，大约  aa1079  至大约  aa1088，大约  aa1080  至大约aa1089，大约  aa1081  至大约aa1090，大约aa1082  至大约aa1091，大约  aa1083  至大约aa1092，大约  aa1084至大约aa1093，大约  aa1085  至大约aa1094，大约  aa1086  至大约aa1095，大约  aa1087  至大约aa1096，大约  aa1088  至大约aa1097，大约  aa1089  至大约aa1098，大约  aa1090  至大约aa1099，大约aa1091  至大约aa1100，大约  aa1092  至大约aa1101，大约  aa1093至大约aa1102，大约  aa1094  至大约aa1103，大约  aa1095  至大约aa1104，大约  aa1096  至大约aa1105，大约  aa1097  至大约  aa1106，大约  aa1098  至大约aa1107，大约  aa1099  至大约aa1108，大约aa1100  至大约aa1109，大约  aa1101  至大约aa1110，大约  aa1102至大约aa1111，大约  aa1103  至大约aa1112，大约  aa1104  至大约aa1113，大约  aa1105  至大约aa1114，大约  aa1106  至大约  aa1115，大约  aa1107  至大约aa1116，大约  aa1108  至大约aa1117，大约aa1109  至大约aa1118，大约  aa1110  至大约aa1119，大约  aa1111至大约aa1120，大约  aa1112  至大约aa1121，大约  aa1113  至大约aa1122，大约  aa1114  至大约aa1123，大约  aa1115  至大约  aa1124，大约  aa1116  至大约aa1125，大约  aa1117  至大约aa1126，大约aa1118  至大约aa1127，大约  aa1119  至大约aa1128，大约  aa1120至大约aa1129，大约  aa1121  至大约aa1130，大约  aa1122  至大约aa1131，大约  aa1123  至大约aa1132，大约  aa1124  至大约  aa133，大约  aa1125  至大约aa1134，大约  aa1126  至大约aa1135，大约aa1127  至大约aa1136，大约  aa1128  至大约aa1137，大约  aa1129至大约aa1138，大约  aa1130  至大约aa1139，大约  aa1131  至大约aa1140，大约  aa1132  至大约aa1141，大约  aa1133  至大约  aa1142，大约  aa1134  至大约aa1143，大约  aa1135  至大约aa1144，大约aa1136  至大约aa1145，大约  aa1137  至大约aa1146，大约  aa1138至大约aa1147，大约  aa1139  至大约aa1148，大约  aa1140  至大约aa1149，大约  aa1141  至大约aa1150，大约  aa1142  至大约  aa1151，大约  aa1143  至大约aa1152，大约  aa1144  至大约aa1153，大约aa1145  至大约aa1154，大约  aa1146  至大约aa1155，大约  aa1147至大约aa1156，大约  aa1148  至大约aa1157，大约  aa1149  至大约aa1158，大约  aa1150  至大约aa1159，大约  aa1151  至大约aa1160，大约aa1152  至大约aa1161，大约  aa1153  至大约aa1162，大约aa1154  至大约aa1163，大约  aa1155  至大约aa1164，大约  aa1156至大约aa1165，大约  aa1157  至大约aa1166，大约  aa1158  至大约aa1167，大约  aa1159  至大约aa1168，大约  aa1160  至大约aa1169，大约  aa1161  至大约aa1170，大约  aa1162  至大约aa1171，大约aa1163  至大约aa1172，大约  aa1164  至大约aa1173，大约  aa1165至大约aa1174，大约  aa1166  至大约aa1175，大约  aa1167  至大约aa1176，大约  aa1168  至大约aa1177，大约  aa1169  至大约aa1178，大约  aa1170  至大约aa1179，大约  aa1171  至大约aa1180，大约aa1172  至大约aa1181，大约  aa1173  至大约aa1182，大约  aa1174至大约aa1183，大约  aa1175  至大约aa1184，大约  aa1176  至大约aa1185，大约  aa1177  至大约aa1186，大约  aa1148  至大约aa1187，大约  aa1179  至大约aa1188，大约  aa1180  至大约aa1189，大约aa1181  至大约aa1190，大约  aa1182  至大约aa1191，大约  aa1183至大约aa1192，大约  aa1184  至大约aa1193，大约  aa1185  至大约aa1194，大约  aa1186  至大约aa1195，大约  aa1187  至大约aa1196，大约  aa1188  至大约aa1197，大约  aa1189  至大约aa1198，大约aa1190  至大约aa1199，大约  aa1191  至大约aa1200，大约  aa1192至大约aa1201，大约  aa1193  至大约aa1202，大约  aa1194  至大约aa1203，大约  aa1195  至大约aa1204，大约  aa1196  至大约aa1205，大约  aa1197  至大约aa1206，大约  aa1198  至大约aa1207，大约aa1199  至大约aa1208，大约  aa1200  至大约aa1209，大约  aa1201至大约aa1210，大约  aa1202  至大约aa1211，大约  aa1203  至大约aa1212，大约  aa1204  至大约aa1213，大约  aa1205  至大约aa1214，大约  aa1206  至大约aa1215，大约  aa1207  至大约aa1216，大约aa1208  至大约aa1217，大约aa1209  至大约aa1218，大约  aa1210至大约aa1219，大约  aa1211  至大约aa1220，大约  aa1212  至大约aa1221，大约  aa1213  至大约aa1222，大约  aa1214  至大约aa1223，大约  aa1215  至大约aa1224，大约  aa1216  至大约aa1225，大约aa1217  至大约aa1226，大约  aa1218  至大约aa1227，大约  aa1219至大约aa1228，大约  aa1220  至大约  aa1229，大约  aa1221  至大约aa1230，大约  aa1222  至大约aa1231，大约  aa1223  至大约aa1232，大约  aa1224  至大约aa1233，大约  aa1225  至大约aa1234，大约aa1226  至大约aa1235，大约  aa1227  至大约aa1236，大约  aa1228至大约aa1237，大约  aa1229  至大约aa1238，大约aa1230  至大约aa1239，大约  aa1231  至大约aa1240，大约  aa1232  至大约aa1241，大约  aa1233   至大约aa1242，大约  aa1234  至大约aa1243，大约aa1235  至大约aa1244，大约  aa1236  至大约aa1245，大约  aa1237至大约aa1246，大约  aa1238  至大约aa1247，大约  aa1239  至大约aa1248，大约  aa1240  至大约aa1249，大约  aa1241  至大约aa1250，大约  aa1242  至大约aa1251，大约  aa1243  至大约aa1252，大约aa1244  至大约aa1253，大约  aa1245  至大约aa1254，大约  aa1246至大约aa1255，大约  aa1247  至大约aa1256，大约  aa1248  至大约aa1257，大约  aa1249  至大约aa1258，大约  aa1250  至大约aa1259，大约  aa1251  至大约aa1260，大约  aa1252  至大约aa1261，大约aa1253  至大约aa1262，大约  aa1254  至大约aa1263，大约  aa1255至大约aa1264，大约  aa1256  至大约aa1265，大约  aa1257  至大约aa1266，大约  aa1258  至大约aa1267，大约  aa1259  至大约aa1268，大约  aa1260  至大约aa1269，大约  aa1261  至大约aa1270，大约aa1262  至大约aa1271，大约  aa1263  至大约aa1272，大约  aa1264至大约aa1273，大约  aa1265  至大约aa1274，大约  aa1256  至大约aa1245，大约  aa1267  至大约aa1276，大约  aa1268  至大约aa1277，大约  aa1269  至大约aa1278，大约  aa1270  至大约aa1279，大约aa1271  至大约aa1280，大约  aa1272  至大约aa1281，大约  aa1273至大约aa1282，大约  aa1274  至大约aa1283，大约  aa1275  至大约aa1284，大约  aa1276  至大约aa1285，大约  aa1277  至大约aa1286，大约  aa1278  至大约aa1287，大约  aa1279  至大约aa1288，大约aa1280  至大约aa1289，大约  aa1281  至大约aa1290，大约  aa1282至大约aa1291，大约  aa1283  至大约aa1292，大约  aa1284  至大约aa1293，大约  aa1285  至大约aa1294，大约  aa1286  至大约aa1295，大约  aa1287  至大约aa1296，大约  aa1288  至大约aa1297，大约aa1289  至大约aa1298，大约  aa1290  至大约aa1299，大约  aa1291至大约aa1300，大约  aa1292  至大约aa1301，大约  aa1293  至大约aa1302，大约  aa1294  至大约aa1303，大约  aa1295  至大约aa1304，大约  aa1296  至大约aa1305，大约  aa1297  至大约aa1306，大约aa1298  至大约aa1307，大约  aa1299  至大约aa1308，大约  aa1300至大约aa1309，大约  aa1301  至大约aa1310，大约  aa1302  至大约aa1311，大约  aa1303  至大约aa1312，大约  aa1304  至大约aa1313，大约  aa1305  至大约aa1314，大约  aa1306  至大约aa1315，大约aa1307  至大约aa1316，大约  aa1308  至大约aa1317，大约  aa1309至大约aa1318，大约  aa1310  至大约aa1319，大约aa1311  至大约aa1320，大约  aa1312  至大约aa1321，大约  aa1313  至大约aa1322，大约aa1314  至大约aa1323，大约  aa1315  至大约aa1324，大约aa1316  至大约aa1325，大约  aa1317  至大约aa1326，大约  aa1318至大约aa1327，大约  aa1319  至大约aa1328，大约  aa1320  至大约aa1329，大约aa1321  至大约aa1330，大约  aa1322  至大约aa1331，大约aa1323  至大约aa1332，大约  aa1324  至大约aa1333，大约aa1325  至大约aa1334，大约  aa1326  至大约aa1335，大约  aa1327至大约aa1336，大约  aa1328  至大约aa1337，大约aa1329  至大约aa1338，大约aa1330  至大约aa1339，大约  aa1331  至大约aa1340，大约  aa1332  至大约aa1341，大约  aa1333  至大约aa1342，大约aa1334  至大约aa1343，大约  aa1335  至大约aa1344，大约  aa1336至大约aa1345，大约  aa1337  至大约aa1346，大约  aa1338  至大约aa1347，大约  aa1339  至大约aa1348，大约  aa1340  至大约aa1349，大约  aa1341  至大约aa1350，大约  aa1342  至大约aa1351，大约aa1343  至大约aa1352，大约  aa1344  至大约aa1353，大约  aa1345至大约aa1354，大约  aa1346  至大约aa1355，大约  aa1347  至大约aa1356，大约  aa1348  至大约aa1357，大约  aa1349  至大约aa1358，大约  aa1350  至大约aa1359，大约  aa1351  至大约aa1360，大约aa1352  至大约aa1361，大约  aa1353  至大约aa1362，大约  aa1354至大约aa1363，大约  aa1355  至大约aa1364，大约  aa1356  至大约aa1365，大约  aa1357  至大约aa1366，大约  aa1358  至大约aa1367，大约  aa1359  至大约aa1368，大约  aa1360  至大约aa1369，大约aa1361  至大约aa1370，大约  aa1362  至大约aa1341，大约  aa1363至大约aa1372，大约  aa1364  至大约aa1373，大约  aa1365  至大约aa1374，大约  aa1366  至大约aa1375，大约  aa1367  至大约aa1376，大约  aa1368  至大约aa1377，大约  aa1369  至大约aa1378，大约aa1370  至大约aa1379，大约  aa1371  至大约aa1380，大约  aa1372至大约aa1381，大约  aa1343  至大约aa1382， 大约  aa1374  至大约aa1383，大约  aa1375  至大约aa1384，大约  aa1376  至大约aa1385，大约  aa1377  至大约aa1386，大约  aa1378  至大约aa1387，大约aa1379  至大约aa1388，大约  aa1380  至大约aa1389，大约  aa1381至大约aa1390，大约  aa1382  至大约aa1391，大约  aa1383  至大约aa1392，大约  aa1384  至大约aa1393，大约  aa1385  至大约aa1394，大约  aa1386  至大约aa1395，大约  aa1387  至大约aa1396，大约aa1388  至大约aa1397，大约  aa1389  至大约aa1398，大约  aa1390至大约aa1399，大约  aa1391  至大约aa1400，大约  aa1392  至大约aa1401，大约  aa1393  至大约aa1402，大约  aa1394  至大约aa1402，大约  aa1395  至大约aa1404，大约  aa1396  至大约aa1405，大约aa1397  至大约aa1406，大约  aa1398  至大约aa1407，大约  aa1399至大约aa1408，大约  aa1400  至大约aa1409，大约  aa1401  至大约aa1410，大约  aa1402  至大约aa1411，大约  aa1403  至大约aa1412，大约  aa1404  至大约aa1413，大约  aa1405  至大约aa1414，大约aa1406  至大约aa1415，大约  aa1407  至大约aa1416，大约  aa1408至大约aa1417，大约  aa1409  至大约aa1418，大约  aa1410  至大约aa1418，大约  aa1411  至大约aa1420，大约  aa1412  至大约aa1421，大约  aa1413  至大约aa1422，大约  aa1414  至大约aa1423，大约aa1415  至大约aa1424，大约  aa1416  至大约aa1425，大约  aa1417至大约aa1426，大约  aa1418  至大约aa1427，大约  aa1419  至大约aa1428，大约  aa1420  至大约aa1429，大约  aa1421  至大约aa1430，大约  aa1422  至大约aa1431，大约  aa1423  至大约aa1432，大约aa1424  至大约aa1433，大约  aa1425  至大约aa1434，大约  aa1426至大约aa1435，大约  aa1427  至大约aa1436，大约  aa1428  至大约aa1437，大约  aa1429  至大约aa1438，大约  aa1430  至大约aa1439，大约  aa1431  至大约aa1440，大约  aa1432  至大约aa1441，大约aa1433  至大约aa1442，大约  aa1434  至大约aa1443，大约  aa1435至大约aa1444，大约  aa1436  至大约aa1445，大约  aa1437  至大约aa1446，大约  aa1438  至大约aa1447，大约  aa1439  至大约aa1448，大约  aa1440  至大约aa1449，大约  aa1441  至大约aa1450，大约aa1442   至大约aa1451，大约  aa1443  至大约aa1452，大约  aa1444至大约aa1453，大约  aa1445  至大约aa1454，大约  aa1446  至大约aa1455，大约  aa1447  至大约aa1456，大约  aa1446  至大约aa1457，大约  aa1449  至大约aa1458，大约  aa1450  至大约aa1459，大约aa1451  至大约aa1460，大约  aa1452  至大约aa1461，大约  aa1453至大约aa1462，大约  aa1454  至大约aa1463，大约  aa1455  至大约aa1464，大约  aa1456  至大约aa1465，大约  aa1457  至大约aa1466，大约  aa1458  至大约aa1467，大约  aa1459  至大约aa1468，大约aa1460  至大约aa1469，大约  aa1461  至大约aa1470，大约  aa1462至大约aa1471，大约  aa1463  至大约aa1472，大约  aa1464  至大约aa1473，大约  aa1465  至大约aa1474，大约  aa1466  至大约aa1475，大约  aa1467  至大约aa1476，大约  aa1468  至大约aa1477，大约aa1469  至大约aa1478，大约  aa1470  至大约aa1479，大约  aa1471至大约aa1480，大约  aa1472  至大约aa1481，大约  aa1473  至大约aa1482，大约  aa1474  至大约aa1483，大约  aa1475  至大约aa1484，大约  aa1476  至大约aa1485，大约  aa1477  至大约aa1486，大约aa1478  至大约aa1487，大约  aa1479  至大约aa1488，大约  aa1480至大约aa1489，大约  aa1481  至大约aa1490，大约  aa1482  至大约aa1491，大约  aa1483  至大约aa1492，大约  aa1484  至大约aa1493，大约  aa1485  至大约aa1494，大约  aa1486  至大约aa1495，大约aa1497  至大约aa1496，大约  aa1488  至大约aa1497，大约  aa1489至大约aa1498，大约  aa1490  至大约aa1499，大约  aa1491  至大约aa1500，大约  aa1492  至大约aa1501，大约  aa1493  至大约aa1502，大约  aa1494  至大约aa1503，大约  aa1495  至大约aa1504，大约aa1496  至大约aa1505，大约  aa1497  至大约aa1506，大约  aa1498至大约aa1507，大约  aa1499  至大约aa1508，大约  aa1500  至大约aa1509，大约  aa1501  至大约aa1510，大约  aa1502  至大约aa1511，大约  aa1503  至大约aa1512，大约  aa1504  至大约aa1513，大约aa1505  至大约aa1514，大约  aa1506  至大约  aa1515，大约  aa1507至大约aa1516，大约  aa1508  至大约aa1517，大约  aa1509  至大约aa1518，大约  aa1510  至大约aa1519，大约  aa1511  至大约aa1520，大约  aa1512  至大约aa1521，大约  aa1513  至大约aa1522，大约aa1514  至大约aa1523，大约  aa1515  至大约  aa1524，大约  aa1516至大约aa1525，大约  aa1517  至大约aa1526，大约  aa1518  至大约aa1527，大约  aa1519  至大约aa1528，大约  aa1520  至大约aa1529，大约  aa1521  至大约aa1530，大约  aa1522  至大约aa1531，大约aa1523  至大约aa1532，大约  aa1524  至大约aa1523，大约  aa1525至大约aa1534，大约  aa1526  至大约aa1535，大约  aa1527  至大约aa1536，大约  aa1528  至大约aa1537，大约  aa1529  至大约aa1538，大约  aa1530  至大约aa1539，大约  aa1531  至大约aa1540，大约aa1532  至大约aa1541，大约  aa1533  至大约aa1542，大约  aa1534至大约aa1543，大约  aa1535  至大约aa1544，大约  aa1536  至大约aa1545，大约  aa1537  至大约aa1546，大约  aa1538  至大约aa1547，大约  aa1539  至大约aa1548，大约  aa1540  至大约aa1549，大约aa1541  至大约aa1550，大约  aa1542  至大约aa1551，大约  aa1543至大约aa1552，大约  aa1544  至大约aa1553，大约  aa1545  至大约aa1554，大约  aa1546  至大约aa1555，大约  aa1547  至大约aa1556，大约  aa1548  至大约aa1557，大约  aa1549  至大约aa1558，大约aa1550  至大约aa1559，大约  aa1551  至大约aa1560，大约  aa1552至大约aa1561，大约  aa1553  至大约aa1562，大约  aa1554  至大约aa1563，大约  aa1555  至大约aa1564，大约  aa1556  至大约aa1565，大约  aa1557  至大约aa1566，大约  aa1558  至大约aa1567，大约aa1559  至大约aa1568，大约  aa1560  至大约aa1569，大约  aa1561至大约aa1570，大约  aa1562  至大约aa1571，大约  aa1563  至大约aa1572，大约  aa1564  至大约aa1573，大约  aa1565  至大约aa1574，大约  aa1566  至大约aa1575，大约  aa1567  至大约aa1576，大约aa1568  至大约aa1577，大约  aa1569  至大约aa1578，大约  aa1570至大约aa1579，大约  aa1571  至大约aa1580，大约  aa1572  至大约aa1581，大约  aa1573  至大约aa1582，大约  aa1574  至大约aa1583，大约  aa1575  至大约aa1584，大约  aa1576  至大约aa1585，大约aa1577  至大约aa1586，大约  aa1578  至大约aa1587，大约  aa1579至大约aa1588，大约  aa1580  至大约aa1589，大约  aa1581  至大约aa1590，大约  aa1582  至大约aa1591，大约  aa1583  至大约aa1592，大约  aa1584  至大约aa1593，大约  aa1585  至大约aa1594，大约aa1586  至大约aa1595，大约aa1587  至大约aa1596，大约  aa1588至大约aa1597，大约  aa1589  至大约aa1598，大约  aa1590  至大约aa1599，大约  aa1591  至大约aa1600，大约  aa1592  至大约aa1601，大约  aa1593  至大约aa1602，大约  aa1594  至大约aa1603，大约aa1595  至大约aa1604，大约  aa1596  至大约aa1605，大约  aa1597至大约aa1606，大约  aa1598  至大约aa1604，大约  aa1599  至大约aa1608，大约  aa1600  至大约aa1609，大约  aa1601  至大约aa1610，大约  aa1602  至大约aa1611，大约  aa1603  至大约aa1612，大约aa1604  至大约aa1613，大约  aa1605  至大约aa1614，大约  aa1606至大约aa1615，大约  aa1607  至大约aa1616，大约  aa1608  至大约aa1617，大约  aa1609  至大约aa1618，大约  aa1610  至大约aa1619，大约  aa1611  至大约aa1620，大约  aa1612  至大约aa1621，大约aa1613  至大约aa1622，大约  aa1614  至大约aa1623，大约  aa1615至大约aa1624，大约  aa1616  至大约aa1625，大约  aa1617  至大约aa1626，大约  aa1618  至大约aa1627，大约  aa1619  至大约aa1628，大约  aa1620  至大约aa1629，大约  aa1621  至大约aa1630，大约aa1622  至大约aa1632，大约  aa1623  至大约aa1632，大约  aa1624至大约aa1633，大约  aa1625  至大约aa1634，大约  aa1626  至大约aa1635，大约  aa1627  至大约aa1636，大约  aa1628  至大约aa1637，大约  aa1629  至大约aa1638，大约  aa1630  至大约aa1639，大约aa1631  至大约aa1640，大约  aa1632  至大约aa1641，大约  aa1633至大约aa1642，大约  aa1634  至大约aa1643，大约  aa1635  至大约aa1644，大约  aa1636  至大约aa1645，大约  aa1637  至大约aa1646，大约  aa1638  至大约aa1647，大约  aa1639  至大约aa1648，大约aa1640  至大约aa1649，大约  aa1641  至大约aa1650，大约  aa1642至大约aa1651，大约  aa1643  至大约aa1652，大约  aa1644  至大约aa1653，大约  aa1645  至大约aa1654，大约  aa1646  至大约aa1655，大约  aa1647  至大约aa1656，大约  aa1648   至大约aa1657，大约aa1649  至大约aa1658，大约  aa1650  至大约aa1659，大约  aa1651至大约aa1660，大约  aa1652  至大约aa1661，大约  aa1653  至大约aa1662，大约  aa1654  至大约aa1663，大约  aa1655  至大约aa1664，大约  aa1656  至大约aa1665，大约  aa1657至大约aa1666，大约aa1658  至大约aa1667，大约  aa1659  至大约  aa1668，大约  aa1660至大约aa1669，大约  aa1661  至大约aa1670，大约  aa1662  至大约aa1671，大约  aa1663  至大约aa1672，大约  aa1664  至大约aa1673，大约  aa1665  至大约aa1674，大约  aa1666  至大约aa1675，大约aa1667  至大约aa1676，大约  aa1668  至大约aa1677，大约  aa1669至大约aa1678，大约  aa1670  至大约aa1679，大约  aa1671  至大约aa1680，大约  aa1672  至大约aa1681，大约  aa1673  至大约aa1682，大约  aa1674  至大约aa1683，大约  aa1675  至大约aa1684，大约aa1676  至大约aa1685，大约  aa1677  至大约aa1686，大约  aa1678至大约aa1687，大约  aa1679  至大约aa1688，大约  aa1680  至大约aa1689，大约  aa1681  至大约aa1690，大约  aa1682  至大约aa1691，大约  aa1683  至大约aa1692，大约  aa1684  至大约aa1693，大约aa1685  至大约aa1694，大约  aa1686  至大约aa1695，大约  aa1687至大约aa1696，大约  aa1688  至大约aa1697，大约  aa1689  至大约aa1698，大约  aa1690  至大约aa1699，大约  aa1691  至大约aa1700，大约  aa1692  至大约aa1701，大约  aa1693  至大约aa1702，大约aa1694  至大约aa1703，大约  aa1695  至大约aa1704，大约  aa1696至大约aa1705，大约  aa1697  至大约aa1706，大约  aa1698  至大约aa1707，大约  aa1699  至大约aa1708，大约  aa1700  至大约aa1709，大约  aa1701  至大约aa1710，大约  aa1702  至大约aa1711，大约aa1703  至大约aa1712，大约  aa1704  至大约aa1713，大约  aa1705至大约aa1714，大约  aa1706  至大约aa1715，大约  aa1707  至大约aa1716，大约  aa1708  至大约aa1717，大约  aa1709  至大约aa1718，大约  aa1710  至大约aa1719，大约  aa1711  至大约aa1720，大约aa1712  至大约aa1721，大约  aa1713  至大约aa1722，大约  aa1714至大约aa1723，大约  aa1715  至大约aa1724，大约  aa1716  至大约aa1725，大约  aa1717  至大约aa1726，大约  aa1718  至大约aa1727，大约  aa1719  至大约aa1728，大约  aa1720  至大约aa1729，大约aa1721  至大约aa1730，大约  aa1722  至大约aa1731，大约  aa1723至大约aa1732，大约  aa1724  至大约aa1733，大约  aa1725  至大约aa1734，大约  aa1726  至大约aa1735，大约  aa1727  至大约aa1736，大约  aa1728  至大约aa1737，大约  aa1729  至大约aa1738，大约aa1730  至大约aa1739，大约  aa1731  至大约aa1740，大约  aa1732至大约aa1741，大约  aa1733  至大约aa1742，大约  aa1734  至大约aa1743，大约  aa1735  至大约aa1744，大约  aa1736  至大约aa1745，大约  aa1737  至大约aa1746，大约  aa1738  至大约aa1447，大约aa1739  至大约aa1748，大约  aa1740  至大约aa1749，大约  aa1741至大约aa1750，大约  aa1742  至大约aa1751，大约  aa1743  至大约aa1752，大约  aa1744  至大约aa1753，大约  aa1745  至大约aa1754，大约  aa1746  至大约aa1755。
在另一个实施例中，图2中所示的、可用于本发明组合物的肽的抗原性部分具有选自大约aax至大约aay的氨基酸序列，其中aax表示大约从SEQ ID NO:2的1号氨基酸至大约1750号氨基酸，aay是SEQID N0:2的约x+5号氨基酸，即一个选自含有如下氨基酸序列的氨基酸序列：从SEQ ID NO:2的约aa1至约aa6，约aa2至约aa7，约aa3至约aa8，约aa4至约aa9，约aa5至约aa10，以及等等，直至约aa1749至约aa1754和约aa1750至约aa1755。
此外，本发明还包括在功能上与上面介绍的MMTV肽或由上文介绍的核酸分子编码的MMTV肽等价的肽类似物，这种功能等价由多种标准进行判断，包括但不限于，等价的肽被一种MMTV反应性抗体识别的能力。这种等价MMTV肽可在氨基酸序列中含有氨基酸残基的删除、添加或取代，但它们产生一种静默改变，从而产生一种在功能上等价的MMTV肽。氨基酸取代可根据所涉及残基的极性、电荷、可溶性、疏水性、亲水性和/或两亲性本质来进行。例如，非极性(疏水性)氨基酸包括丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和甲硫氨酸；极性中性氨基酸包括甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺；正电荷(碱性)氨基酸包括精氨酸、赖氨酸和组氨酸；负电荷氨基酸包括天冬氨酸和谷氨酸。用于此处，“功能上等价”是指一种蛋白质能被MMTV肽反应性抗体识别。
虽然(使用本领域技术人员熟知的随机诱变技术)可以对MMTV核苷酸序列进行随机突变，并对所产生的MMTV编码肽进行活性检测，但可以用遗传工程的方法对MMTV的编码序列进行位点特异性诱变(使用本领域技术人员熟知的位点特异性诱变技术)，制备具有提高的功能的突变MMTV肽，例如产生提高的表达或抗原性。
用于本发明的免疫调节组合物的MMTV肽是基本上纯的或均一的。当一种样品显示至少60至75％为单一一种肽序列时，该样品被认为是基本上纯的。一种基本上纯的肽应优选含有60至90％的一种肽样品，更优选约95％，最优选99％。本领域的技术人员熟知的方法可用于测定纯度或均一性，例如样品的聚丙烯酰胺凝胶电泳，并接着在染色后的胶上观察到一条单一肽条带。此外，还可使用HPLC或本领域熟知的其他类似方法获得解决方案。通常参见Sambrook等，1989，《分子克隆实验手册》，Cold Spring Harbor Laboratory Press，和Ausubel等(编辑)，1989，《当代分子生物学方法》Ⅰ卷，Green PublishingAssociates,Inc.和John Wiley&Sons,Inc.,New York。
本发明包括MMTV肽在免疫调节组合物中的应用，MMTV肽通常纯化自表达了编码MMTV肽的重组核苷酸序列的宿主细胞。这种蛋白纯化可通过本领域熟知的各种方法来完成。在一个实施方案中，本发明的MMTV肽以与谷胱甘肽-S-转移酶融合的融合蛋白形式表达，所产生的重组融合蛋白通过亲和层析进行纯化，并且将MMTV肽结构域从异源半分子中切割下来，产生一种基本上纯的MMTV肽样品。其他方法也可以使用，例如参见《酶学方法》1990,Academic Press,Inc.,San Diego；《蛋白纯化，原理和实践》，1982,Springer-Verlag,New York中介绍的技术。
                    5.2．MMTV核酸
本发明还包括编码至少一种MMTV肽或其免疫原性或抗原性部分以及这种肽或部分的类似物的核酸分子，和具有一个代表至少一个MMTV的不连续表位的氨基酸分子的肽及其在本发明的免疫调节组合物中的应用。本发明的核酸分子包括如下：(1)具有一个包含图1(SEQ IDNO:1)中所示核苷酸序列或其至少18个连续核苷酸的部分的核苷酸序列的分子；(2)任何含有一个编码能与抗MMTV肽抗体进行免疫反应的肽的核苷酸序列的核酸分子；(3)任何含有一个编码如下一种肽的核苷酸序列的核酸分子，这种肽包含图2-6(SEQ ID NO:2-6)中任何一个所示的氨基酸序列或其至少6个连续氨基酸的部分；(4)任何含有一个编码至少一个MMTV的不连续表位的核苷酸序列的核酸分子；(5)任何含有如下一种核苷酸序列的核酸分子，这种核苷酸序列可与图1(SEQ ID NO:1)中所示DNA序列的互补物在高度严谨条件下杂交，例如在0.5M NaHPO4,7％十二烷基磺酸钠(SDS),1mM EDTA中在65℃与滤膜结合的DNA杂交，并在0.1×SSC/0.1％的SDS中在68℃进行洗涤(Ausubel等编辑，1989，《当代分子生物学方法》Ⅰ卷，Green Publishing Associates,Inc.,和John Wiley&Sons，Inc.,New York，第2.10.3)，并编码一种功能上等价的MMTV肽；(6)任何含有如下一种核苷酸序列的核酸分子，这种核苷酸序列可与图1(SEQ ID NO:1)中所示DNA序列的组分在低一些的严谨条件下杂交，例如中等严谨条件下，如在0.2×SSC/0.1％的SDS中在42℃进行洗涤(Ausubel等，1989，上文)，并编码一种功能上等价的MMTV肽；以及(7)任何含有如下一种核苷酸序列的核酸分子，这种核苷酸序列可与图1(SEQ ID NO:1)中所示DNA序列的互补物在低严谨条件下杂交，例如在0.2×SSC/0.1％的SDS中在37℃进行洗涤，并编码一种功能上等价的MMTV肽。
例如，可用于本发明的方法中的一种核酸分子具有这样一种核苷酸序列，它含有一个选自图1(SE ID NO:1)中所示的序列的大约ntx至大约nty的核苷酸序列，其中ntx表示从SEQ ID NO:1的大约1号核苷酸至大约8786号核苷酸，nty是SEQ ID NO:1的大约x+17号核苷酸；即这样一种核苷酸，它选自含有SEQ ID NO:1的从大约nt1至大约nt20，大约nt2至大约nt21，大约nt3至大约nt22，大约nt4至大约nt23，大约nt5至大约nt24，等等，直至大约nt8785至大约nt8804以及大约nt8786至大约nt8805的核苷酸序列。
在另一个实施例中，可用于本发明的方法中的一种核酸分子具有这样一种核苷酸序列，它含有一个选自图1(SEQ ID NO:1)中所示的序列的大约ntx至大约nty的核苷酸序列，其中ntx表示从SEQ ID NO:1的大约1号核苷酸至大约8786号核苷酸，nty是SEQ ID NO:1的大约x+29号核苷酸；即这样一种核苷酸，它选自含有SEQ ID NO:1的从大约nt1至大约nt30，大约nt2至大约nt31，大约nt3至大约nt32，大约nt4至大约nt33，大约nt5至大约nt34，等等，直至大约nt8775至大约nt8804以及大约nt8776至大约nt8805的核苷酸序列。
此外，本发明还包括这样一种核酸分子，它编码在功能上与这里介绍的MMTV肽等价的MMTV肽类似物，这种功能等价由多种标准进行判断，包括但不限于，等价的肽被一种MMTV反应性抗体识别的能力。这种等价MMTV肽可在氨基酸序列中含有氨基酸残基的删除、添加或取代，但它们产生一种静默改变，从而产生一种在功能上等价的MMTV肽。这种MMTV核酸的免疫等价类似物可通过如下方法进行鉴定：(1)制备核酸分子的类似物，使之编码在序列的5’和3’末端被剪切和/或具有一个或多个内部删除的肽；(2)表达这种核苷酸序列类似物；并(3)确定所产生的表达肽是否能与一种MMTV反应性抗体进行免疫反应或是否能在体内诱导这种抗体的产生。
用于本发明的免疫调节组合物的核酸分子是基本上纯的或均一的。当一种样品显示至少60至75％为单一一种核酸序列时，该核酸样品被认为是基本上纯的。一种基本上纯的核酸应优选含有60至90％的一种核酸样品，更优选约95％，最优选99％。本领域的技术人员熟知的方法可用于测定纯度或均一性，例如样品的聚丙烯酰胺凝胶电泳，并接着在染色后的胶上观察到一条单一核酸条带。此外，还可使用HPLC或本领域熟知的其他类似方法获得更高的分辨率。通常参见Sambrook等，1989，《分子克隆实验手册》，Cold Spring Harbor LaboratoryPress，和Ausubel等(编辑)，1989，《当代分子生物学方法》Ⅰ卷，Green Publishing Associates,Inc.和John Wiley&Sons,Inc.,New York。
本发明还包括(1)含有任何前述核酸分子与调节元件操纵连接的核酸表达载体，其中所说的调节元件指导核苷酸编码序列的表达，和(2)经过遗传工程构建的宿主细胞，这种细胞含有与调节元件操纵连接的任何前述编码MMTV肽的核酸分子，其中所说的调节元件指导核苷酸编码序列的表达。用于此处，调节元件包括但不限于诱导型或非诱导型启动子、增强子、操纵子和其他本领域技术人员熟知的能驱动和调节表达的元件。更具体的讨论，见下文的章节5.4和5.5。
MMTV肽或其部分或非连续表位可通过重组DNA技术使用本领域熟知的技术进行制备。因此，这里将讨论通过表达含有MMTV核苷酸序列的核酸分子来制备本发明的肽的方法。本领域的技术人员熟知的方法可用来构建含有MMTV核苷酸序列和合适的转录和翻译控制信号的表达载体。这些方法包括诸如体外重组DNA技术、合成技术和体内遗传重组。见诸如Sambrook等，1989，《分子克隆实验手册》，Cold SpringHarbor Laboratory Press，和Ausubel等，1989，上文中介绍的技术。此外，能够编码一种MMTV肽的RNA或其一个部分可使用诸如合成仪进行化学合成。参见，诸如《寡核苷酸合成》，1984,Gait编辑，IRL Press,Oxford中介绍的技术，该文在此全文引入作为参考。
            5.3．为免疫调节组合物选择抗原
本发明还通过测定候选MMTV抗原是否能与一种获自接触或感染了MMTV的个体或接触了一种能与抗MMTV抗体如鼠中和性多克隆或单克隆抗体进行反应的化学或生物试剂的个体的抗体或免疫细胞发生反应，来提供选择或鉴定能够引发一种免疫应答的候选MMTV抗原的方法。所鉴定或选择的抗原可用于本发明的免疫调节组合物。
在本发明的一个实施方案中，该方法是建立一个肽库，这种肽库含有所有可能的MMTV肽中含有的给定长度的肽。这个文库将代表该肽的完全的肽扫描。然后该肽扫描文库可用获自诸如感染了MMTV的个体的血清或免疫细胞进行筛选，来确定哪些肽代表一种抗原性肽，并因而确定哪些肽可以包含在免疫调节组合物中，用来在个体中诱导一种免疫反应。例如血清可获自感染了MMTV的小鼠。这样一种完全的肽扫描已由Baughn等在1996，《感染与免疫》，64卷，2457-2466，关于Treponema pallidum的15kDa中介绍。合成重叠的十肽(10个氨基酸)，每种肽与后一种肽重叠9个氨基酸并后移1个氨基酸，这样就合成了该蛋白的一套完全的十肽。然后用来自患梅毒的兔的血清在ELISA(酶联免疫吸附试验)中进行筛选，来发现那些能与抗梅毒抗体反应的肽。相似的方法可用于本发明，即使用人血清来筛选可用于本发明的组合物的MMTV抗原。
另一个方法涉及组合的噬菌体显示文库，包括随机肽噬菌体显示文库，在这种文库中编码MMTV肽的核酸分子被插入到一个噬菌体显示文库中，表达，并用于一个筛选试验，使用获自感染了MMTV的个体或获自接触了能与MMTV抗体反应的生物或化学试剂的个体或具有MMTV反应性抗体的个体的免疫血清或免疫细胞进行筛选。例如，血清或免疫细胞可获自感染了MMTV的小鼠。使用这种组合噬菌体显示文库，连续和不连续抗原表位都被筛选到。连续表位被定义为这样一种表位，其中抗原性残基位于一个短的氨基酸序列内，即相互连续。不连续表位由来自一级氨基酸序列的不同位置但在蛋白的三维结构中接近的氨基酸序列组成。不连续表位也被称为构象肽，它可由含有编码在三维结构中接近的氨基酸序列的核苷酸序列的核酸分子编码。
这种噬菌体肽库通常以下面的方式构建。噬菌体由衣壳蛋白包围的DNA组成，这种结构使噬菌体能够感染细菌并复制其自身，产生大量的噬菌体拷贝。为利用这种特征，将编码目标肽的DNA序列插入到编码噬菌体衣壳蛋白的基因中。只要这些插入不干扰噬菌体的生命周期，这些修饰的噬菌体将具有显示外源肽的衣壳蛋白。丝状噬菌体是优选的载体，因为它们的两种衣壳蛋白很容易修饰来在它们的表面显示外源肽和外源表位。一般说来，这些修饰具有很好的耐受性。但是，即使修饰不被耐受，噬菌体仍能通过多种技术保持存活，这包括共感染一种野生型噬菌体，后者在本领域中被称为辅助噬菌体。
丝状类型的噬菌体如M13、fd和f2的两种衣壳蛋白已知为pⅢ和pⅧ。在噬菌体衣壳中只有5个拷贝的pⅢ，而在衣壳中有大约2700个拷贝的pⅧ。但是，pⅢ通常能耐受高达几百个氨基酸长度的大的插入，而pⅧ只能耐受5或6个氨基酸的插入。如同上文的介绍，其他的技术可用来保持在pⅧ蛋白中含有较大插入的噬菌体的存活。
在本发明的一个实施方案中，可以通过MMTV基因组的基本上消化即90％或更大程度的消化，来获得多样性的核酸片段，并将消化所获得的片段插入到噬菌体中，构建一种连续的肽库。然后表达这些核酸片段，并用获自诸如感染了MMTV的个体或能与MMTV抗原进行免疫反应的个体的免疫血清或免疫细胞对噬菌体进行反应性筛选。纯化可以与免疫血清或免疫细胞反应的噬菌体，并将MMTV核酸片段或编码的肽包含在免疫组合物中，用于人体给药。
在本发明的另一个实施方案中，可以通过MMTV基因组的基本上消化即90％以上程度的消化，来获得多样性的核酸片段，使片段连接，形成至少一个连接片段，并将消化所得的连接片段插入噬菌体，构建一种不连续的肽库。然后表达连接的核酸片段。并用获自诸如接触或感染了MMTV的个体或能与MMTV抗原进行免疫反应的个体例如获自感染了MMTV的小鼠的免疫血清或免疫细胞对噬菌体进行反应性筛选。纯化可以与免疫血清或免疫细胞反应的噬菌体，并将含有不连续表位的核酸片段或编码的肽包含在免疫组合物中，用于人体给药。
在本发明的另一个实施方案中，获自任何来源的随机肽噬菌体显示文库可用于筛选MMTV表位。
                    5.4．表达系统
本发明包括表达系统的使用，这包括真核和原核表达载体以及病毒表达载体，它们可用于表达全长和剪切部分的MMTV肽以及使用上文章节5.3中的方法鉴定的不连续表位。
在本发明的一个实施方案中，编码一种MMTV肽的图1的核苷酸序列或其一个部分在真核、原核或病毒表达载体中进行了表达。图1-6中描述的核酸和氨基酸序列获自GenBank，号码为No.AF033807，并描述了MMTV的一个分离株的核苷酸和编码氨基酸序列。可以想象，其他MMTV分离株的其他核苷酸和氨基酸序列也可用于本发明。在另一个实施方案中，用上文章节5.3中介绍的方法分离的一种核苷酸序列在真核、原核或病毒表达载体中进行了表达。
本发明的一个实施方案包括在一种杆状病毒系统中表达MMTV肽。本发明的另一个实施方案包括在一种杆状病毒系统中表达一种编码不连续MMTV表位的核苷酸序列。本发明的另一个实施方案包括在一种哺乳动物细胞系统中表达一种编码不连续MMTV表位的核苷酸序列。
多种宿主一表达载体系统可用来表达本发明的核苷酸序列。这种宿主一表达载体系统代表这样一种载体，通过这种载体，可以制备和基本上纯化目标核苷酸编码序列，并且还代表这样一种细胞，当这种细胞用合适的核苷酸编码序列转化或转染时，可在细胞表面表达本发明的MMTV肽。它们包括但不限于微生物例如用含有MMTV核苷酸编码序列的重组噬菌体DNA、质粒DNA或粘粒DNA表达载体转化的细菌(例如大肠杆菌、枯草芽孢杆菌)、用含有MMTV肽编码序列的重组酵母表达载体转化的酵母(如酵母、毕赤酵母)、感染了含有MMTV核苷酸编码序列的重组病毒表达载体(如杆状病毒)的昆虫细胞系统、感染了含有MMTV核苷酸编码序列的重组病毒表达载体(如花椰菜花叶病毒CaMV、烟草花叶病毒TMV)或转化了重组质粒表达载体(如Ti质粒)的植物细胞系统、以及携带了含有处于来自哺乳动物细胞基因组(如金属硫蛋白启动子)或来自哺乳动物病毒(如腺病毒晚期启动子、痘病毒7.5k启动子)的启动子控制之下的MMTV核苷酸编码序列的重组表达结构物的哺乳动物细胞系统(例如COS、CHO、BHK、293、3T3)。
在细菌系统中，可根据所要表达的MMTV核苷酸序列的使用目的，优先选择多种表达载体。例如，在要制备大量的肽时，如制备药物组合物用于产生针对肽的抗体时，或将肽包含在药物组合物中时，能够指导肽高水平表达并使之能很方便地纯化的载体将是可取的。这种载体包括但不限于，大肠杆菌表达载体pUR278(Ruther等，1983,EMBOJ.2卷，1791)，其中本发明的编码核苷酸序列可分别连接到载体中，与lacZ编码区处于同一阅读框内，产生一种融合蛋白；pIN载体(Inouye&Inouye,1985，《核酸研究》13卷，3101-3109；Van Heeke&Schuster,1989，《生物化学杂志》264卷，5503-5509)等等。pGEX载体也可用于以与谷胱甘肽S转移酶(GST)的融合蛋白形式表达外源肽。一般来说，这种融合蛋白是可溶性的，能够通过与谷胱甘肽-琼脂珠吸附并接着用存在有游离谷胱甘肽的洗脱液进行洗脱，很方便地从裂解的细胞中纯化。pGEX载体设计为包含有凝血酶或Ⅹa因子的蛋白酶切位点，从而使克隆的靶基因的产物可从GST半分子上释放出来。
在昆虫系统中苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcNPV)可用作载体来表达外源基因。该病毒生长于草地夜蛾细胞中。一种MMTV基因编码序列如pol蛋白编码序列可插入到该病毒的非必需区域(例如多角体基因)中，并置于一种AcNPV启动子(例如多角体启动子)的控制之下。成功地插入一种肽编码序列将导致多角体基因失活，产生非封闭型的重组病毒(即缺少由多角体基因编码的蛋白型衣壳的病毒)。然后将这些重组病毒用于感染用来表达插入基因的草地夜蛾细胞。(例如，参见Smith等，1983，《病毒学杂志》46卷，584页；Smith等，美国专利No.4,215,051)。
在哺乳动物宿主细胞中，可以使用多种以病毒为基础的表达系统。在一种腺病毒被用作表达载体的场合，一种目标MMTV核酸分子可连接至一种腺病毒转录/翻译控制复合物，例如晚期启动子和三联前导序列。然后可将这种嵌合基因通过体外或体内重组插入到腺病毒基因组中。在病毒基因组的非必需区域(例如区域E1或E3)的插入将导致这样一种重组病毒，这种病毒能够在感染的宿主细胞中存活，并能够表达目标核酸分子编码的肽。(例如，参见Logan&Shenk,1984，《美国科学院院刊》81卷，3655-3659)。特殊的起始信号对插入的编码序列的有效翻译来说也是必需的。这些信号包括ATG起始密码子和其他相邻的序列。在一个完整的基因，包括其自己的起始密码子和相邻序列被插入到合适的表达载体的场合，就不需要另外的翻译控制信号。但是，在仅有编码序列的一个部分被插入的场合，就需要提供外源的翻译控制信号，这可能包括ATG起始密码子。而且，起始密码子必须与目标编码序列处于同一阅读框，来保证整个插入的翻译。这些外源翻译控制信号和起始密码子可以有多种来源，天然和合成的都可以。表达的效率可通过包含合适的转录增强子元件、转录终止子等等来提高。(参见Bittner等，1987，《酶学方法》，153卷，516-544)。
其他的病毒表达系统也可用于本发明。这种系统包括但不限于，痘苗病毒、重组病毒或金丝雀痘病毒表达系统等等。
                     5.5细胞系
本发明包括MMTV肽在动物和昆虫细胞系中的表达。在本发明的一个实施方案中，env糖蛋白或其一个部分用一种杆状病毒表达载体在一种昆虫细胞系中进行了表达。在本发明的另一个实施方案中，gag蛋白或其一个部分在一种稳定转染的哺乳动物细胞系中进行了表达。在另一个实施方案中，一种含有一个编码MMTV的不连续表位的核苷酸序列的核酸分子在哺乳动物细胞系中进行了表达。
可以选择能够调节核酸编码序列的表达或以所需的特殊方式修饰和加工表达肽的宿主细胞菌株。表达肽的这种修饰(如糖基化)和加工(如切割)对其功能如抗原性来说可能是重要的。不同的宿主细胞具有特征性的和特殊的机制来对表达肽进行翻译后加工和修饰。可以选择适当的细胞系或宿主系统来保证表达的肽的正确修饰。为这一目的，可以使用拥有能够对表达肽进行原初转录本的正确加工、糖基化和磷酸化的细胞机制的真核宿主细胞。这种哺乳动物宿主细胞包括但不限于CHO、VERO、BHK、HeLa、COS、MDCK、293、3T3和WI38细胞系。
对于重组蛋白的长期、高产量的制备来说，优选稳定表达。例如，可以通过遗传工程构建能够稳定地表达env糖蛋白或其一个部分的细胞系。除了使用含有病毒复制起始区域的表达载体，宿主细胞可用位于合适表达控制元件(如启动子、增强子序列、转录终止子、聚腺苷酸化位点等)和一种选择标记控制之下的DNA进行转化。在导入外源DNA后，可将工程细胞在一种加富培养基中生长1-2天，然后转入一种选择培养基。重组质粒中的选择标记提供对选择压力的抗性，使细胞能将质粒稳定地整合到其染色体中，生长形成转化灶，对后者可进行克隆，并形成细胞系。这种方法可优选用于能够表达诸如MMTV env糖蛋白的工程细胞系。
可以使用多种选择系统，包括但不限于，单纯疱疹病毒胸腺嘧啶激酶(Wigler等，1977，《细胞》11卷，223页)、次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(Szybalska&Szybalski,1962，《美国科学院院刊》48卷，2026页)和腺嘌呤磷酸核糖转移酶(Lowy等，1980，《细胞》22卷，817页)，这些基因可分别应用于tk-、hgprt-或arpt-细胞。对下列基因来说，抗代谢物抗性也可作选择的基础：dhfr，它提供对氨甲蝶呤的抗性(Wigler等，1980，《美国科学院院刊》77卷，3567页；O’Hare等，1981，《美国科学院院刊》78卷，1527页)；gpt，它提供对霉酚酸的抗性(Mulligan&Berg,1981，《美国科学院院刊》78卷，2072页)；neo，它提供对氨基糖苷G-418的抗性(Colberre-Garapin等，1981，《分子生物学杂志》150卷，1页)；以及hygro，它提供对潮霉素的抗性(Santerre等，1984，《基因》30卷，147页)。
此外，任何表达肽都可方便地使用一种针对该表达肽的抗体进行纯化。例如Janknecht等介绍的一种系统可允许对人细胞系中表达的非变性融合蛋白方便地进行纯化(Janknecht等，1991，《美国科学院院刊》88卷，8972-8976页)。在该系统中，目标基因被亚克隆到一种痘苗重组质粒中，使该基因的开放阅读框与一个由6个组氨酸残基组成的氨基末端标记在翻译时融合。将来自感染了重组痘苗病毒的细胞的抽提物上样到Ni2+氮川乙酸一琼脂糖柱，用含有咪唑的缓冲液选择性地洗脱表达的组氨酸标记的肽。
            5.6免疫调节组合物和给药方法
本发明的免疫调节组合物包括一种有效剂量的免疫原性活性成分即一种或多种MMTV抗原和一种可药用的载剂，其中活性成分能够有效地在受体中产生一种可测量的针对抗原的免疫应答。
含有一种免疫原性肽或一种编码这种肽的核酸分子作为活性成分的免疫调节组合物的制备，对本领域的技术人员来说是熟知的。
             5.6.1免疫调节组合物效果的测定
MMTV抗原的免疫能力可通过在用MMTV抗原免疫后在试验动物中监测免疫应答或通过使用本领域任何已知的免疫试验来测定。体液(抗体)应答和/或细胞介导的免疫可用作免疫应答的指征。试验动物可包括小鼠、仓鼠、犬、猫、猴、兔、猩猩等以及人。
导入免疫调节组合物的方法可包括口、脑内、皮内、肌肉、腹膜内、静脉、皮下、鼻内或任何其他标准的免疫途径。试验受体的免疫应答可通过多种方法如所产生的免疫血清与MMTV抗原的反应性，用已知的的技术如免疫吸附试验(ELISA)、免疫印迹、放射免疫沉淀等，进行分析，或者在MMTV抗原显示抗原性或免疫原性的场合，通过为免疫动物提供对MMTV感染的保护，或在免疫宿主中减轻因感染MMTV而产生的症状，或减轻因接触一种能与抗MMTV抗原的抗体发生反应的化学或生物试剂而产生的症状，来进行分析。
作为MMTV免疫组合物的合适动物试验的一个例子，本发明的一种组合物可在小鼠中试验其诱导一种对MMTV抗原应答的抗体的能力。可以使用BALB/c小鼠。每个试验组接受一个固定浓度的组合物。对照组接受一个缓冲液注射，如注射不含MMTV抗原的1mM Tris-HCl pH9.0。
从小鼠中每1或2周抽取血样，分析血清中的抗MMTV抗原的抗体。可以使用诸如ELISA分析针对抗原的抗体的存在。
                  5.6.2免疫组合物
这种组合物的合适配方包括可注射的液体溶液或悬浮液，也可制备在注射前溶于或悬浮于液体的固体形式。为用于这样一种配方，组合物也可以是乳化的，或者MMTV抗原可以包裹在脂质体中或与多糖和/或其他聚合物接合。活性的免疫原性成分通常与可药用的并与活性成分相匹配的赋形剂混合。合适的赋形剂为诸如盐水、葡聚糖、甘油、乙醇等以及它们的组合物。此外，在需要时，组合物也可包括少量的辅助物质如湿润或乳化试剂、pH缓冲液试剂、和/或能增强组合物的效果的佐剂。
可能有效的佐剂的例子包括但不限于，矿物凝胶如氢氧化铝、表面活性物质如溶血卵磷脂、多聚醇、聚阴离子、油乳化物、明矶、MDP、N-乙酰-胞壁酰-L-苏氨酰-D-异谷氨酰胺(thr-MDP)、N-乙酰-去甲-胞壁酰-L-丙氨酰-D-异谷氨酰胺和N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酰-D-异谷氨酰胺酰-L-丙氨酰-2-(1’-2’-二棕榈基-sn-甘油酰-3-羟基磷酰氧)-乙胺。一种佐剂的有效性可通过测定在存在或不存在各种佐剂的情况下测量针对含有MMTV抗原的组合物的抗体的诱导来确定。
MMTV抗原可配制成中性或盐形式的组合物。可药用的盐包括酸加成盐(与肽的游离氨基基团形成)和与无机酸如盐酸、磷酸或与有机酸如乙酸、草酸、酒石酸、马来酸等形成的盐。与游离羧基基团形成的盐也可从无机碱如钠、钾、铵、钙或铁的氢氧化物以及有机碱如异丙胺、三甲基胺、2-乙胺乙醇、组氨酸、普鲁卡因等衍生。
本发明的组合物可以是多价的或单价的。多价组合物可以从指导一种以上抗原表达的重组病毒制备。
多种方法可用来导入本发明的免疫调节组合物。这些包括但不限于口、皮内、肌肉、腹膜内、静脉、皮下、鼻途径以及通过划痕(擦破皮肤的表层，例如使用一种分支的针)。口服组合物可包括标准的载剂如药用级的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁等。含有本发明的核酸的组合物可通过任何本领域已知的用于将一种核酸传递给一种受体的方法进行给药，例如按照这里的介绍。
被给药本发明的一种免疫调节组合物的患者是一种哺乳动物，优选是人，但也可以是一种非人类的动物，包括但不限于奶牛、马、羊、猪、家禽(如鸡)、山羊、猫、犬、仓鼠、小鼠和大鼠。患者最优选是一个没有接触过MMTV的人或一个对MMTV抗原没有免疫反应的人。
一般来说，各成分以单位剂量形式单独或混合在一起提供，例如以标明了活性成分数量的密封容器如安瓶或小袋中的冻干粉末或无水浓缩物的形式进行提供。当组合物通过注射给药时，可以提供一安瓶的无菌稀释剂，使成分在给药前可以混合。
在一个特殊实施方案中，本发明的一种冻干MMTV抗原在第一个容器中提供，第二个容器含有溶剂，溶剂由50％甘油、0.25％酚和一种抗菌剂(例如0.005％的亮绿)的水溶液组成。
一种免疫调节组合物使用的准确剂量也可根据给药途径、患者的体质来决定，并可按照医师的判断和每个患者的状况按照标准的临床技术来决定。一种有效的免疫剂量是足以在给药了组合物的宿主中产生一种针对该抗原的免疫应答的数量。
将纯化的抗原用作免疫调节组合物可通过标准的方法进行。例如，纯化的肽应被调整为一个合适的浓度，用任何合适的佐剂进行配制，包装待用。当MMTV抗原是一种半抗原时，半抗原是一种具有抗原性的分子，它能选择性地与相关抗体发生反应，但没有免疫原性，它不能引发一种免疫应答。半抗原可共价结合于一种载体或免疫原性分子，例如一种大的蛋白如血清白蛋白可为与之偶联的半抗原提供免疫原性。半抗原-载体可配制来用作一种免疫调节组合物。
本发明的组合物在人体中的有效剂量也可从动物模型试验系统获得的剂量应答曲线推知。
         5.6.3本发明的组合物产生的抗体的应用
通过给药本发明的MMTV抗原产生的针对该抗原的抗体也可用于诊断免疫试验、被动免疫治疗和产生抗独特型抗体。
所产生的抗体可用本领域熟知的标准技术进行分离(例如免疫吸附层析、离心、沉淀等等)，并用于诊断免疫试验。抗体也可用来监测治疗和/或疾病过程。本领域熟知的任何免疫试验系统，例如下文所列出的，都可用于这一目的，它们包括但不限于，使用技术如放射免疫、ELISA(酶联免疫吸附试验)、“夹心”免疫试验、沉淀素反应、凝胶扩散沉淀素反应、免疫扩散试验、凝集试验、补体固定试验、免疫放射分析试验、荧光免疫试验、蛋白A免疫试验和免疫电泳试验的竞争性和非竞争性试验系统，仅举出一小部分。
本发明的免疫调节组合物也可用来制备抗体，用于被动免疫治疗，在这种治疗过程中，通过给药预先形成的针对MMTV抗原的抗体，宿主获得短期的保护。
用本发明的免疫调节组合物制备的抗体也可用于产生抗独特型抗体。然后抗独特型抗体又可用来进行免疫，来产生一个能结合最初的病原微生物抗原或试剂的抗体亚群(Jerne,1974，《免疫学年鉴》(Paris)125c,373页；Jerne等，1982,EMBO J,1卷，234页)。
                      5.6.4包装
在需要时，组合物可存在于一个包装或分配装置中，后者包括一个或多个含有活性成分的单位剂量形式。例如包装可包括金属或塑料薄片，例如一种blister包装。包装或分配装置可伴随有给药指示。与这种包装或分配装置相关的是管理制造者的政府机构签发的关于药物或生物制品的使用或销售的注意事项，该注意事项反映制造管理部门同意人体给药的使用或销售。含有配制在一种匹配的药用载剂中的本发明的一种抗原的组合物也可在一个合适的容器中制备、放置，并标明用于治疗适应症。
本发明并不限于这里介绍的特殊实施方案的范围。事实上，对本领域的技术人员来说，根据前面的介绍，除了这里介绍的修改，本发明的各种修改都是显而易见的。这种修饰也在后面所附的权利要求的范围内。
这里引用了各种参考文献，它们的内容在此全文引如作为参考。序列表(1)一般信息(ⅰ)发明人：Stewart,T.
        Gershoni,J.(ⅱ)发明名称：MMTV抗原的免疫调节组合物及其使用方法(ⅲ)序列数：6(ⅳ)联系地址：
(A)联系人：Pennie&Edmonds LLP
(B)街道：1155 Avenue of Americas
(C)城市：New York
(D)州：New York
(E)国家：USA
(F)ZIP:10036(ⅴ)计算机可读形式：
(A)介质类型：磁盘
(B)计算机：IBM兼容
(C)操作系统：DOS
(D)软件：FastSEQ Version2.0(ⅵ)现申请日期：
(A)申请号：(B)    提交日期：(C)    分类(ⅶ)律师/代理人信息：
(A)姓名：Gordon,Jennifer
(B)登记号：30,753
(C)参考/登记号：9345-004(ⅸ)电信信息：
(A)电话：212-790-9090(B)    传真：212-869-9741(C)    电传：66141 PENNIE(2)SEQ ID NO:1的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：8805碱基对
(B)类型：核酸
(C)线型：单链
(D)拓扑构型：线形(ⅱ)分子类型：DNA(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:1:GCAACAGTCC TAACATTCAC CTCTCGTGTG TTTGTGTCTG TTCGCCATCC CGTCTCCGCT      60CGTCACTTAT CCTTCACTTT CCAGAGGGTC CCCCCGCAGA CCCCGGTGAC CCTCAGGTCG     120GCCGACTGCG GCAGCTGGCG CCCGAACAGG GACCCTCGGA TAAGTGACCC TTGTCTCTAT     180TTCTACTATT TTGTGTTCGT CTTGTTTTGT CTCTATCTTA TCTGGCTATT ATCACAAGAG     240CGGAACGGAC TCACCACAGG GAACTGCAGT CTCGCCTACA GAGAAGAGGT AGGTTACGGT     300GAGCCATTGG AAATGGGGGT CTCGGGATCA AAAGGGCAGA AACTCTTTGT TTCTGTTCTA     360CAAAGACTCC TCTCAGAGAG GGGTCTTCAT GTGAAAGAGA GCAGTGCAAT AGAGTTTTAT     420CAGTTCCTAA TAAAGGTCTC TCCTTGGTTT CCCGAAGAAG GAGGATTAAA TTTACAAGAT     480TGGAAAAGGG TGGGAAGAGA GATGAAGAGG TACGCAGCAG AACATGGGAC GGATAGTATA     540CCAAAGCAGG CTTACCCCAT TTGGCTTCAG TTGAGAGAGA TACTGACAGA GCAATCAGAC     600TTGGTTTTGT TATCTGCAGA AGCCAAGTCC GTGACTGAAG AGGAATTAGA GGAAGGTTTA     660ACCGGACTAC TATCGACAAG TTCACAGGAA AAAACTTATG GGACTAGGGG AACAGCATAT     720GCAGAAATAG ATACAGAGGT AGACAAGCTG TCTGAACATA TTTATGATGA ACCATATGAA     780GAAAAGGAGA AGGCAGATAA AAATGAGGAA AAGGACCATG TTAGAAAAAT AAAGAAGGTA     840GTACAAAGAA AAGAAAATAG TGAGGGTAAG AGAAAAGAGA AGGATTCAAA GGCCTTTTTA     900GCCACAGATT GGAACGATGA TGACCTGTCC CCTGAGGATT GGGACGATTT AGAGGAACAA     960GCGGCACATT ATCATGATGA TGATGAGCTA ATCCTTCCAG TAAAAAGGAA GGTGGTTAAG    1020AAGAAACCTC AGGCACTCAG AAGGAAACCC CTGCCTCCGG TGGGTTTTGC AGGAGCGATG    1080GCAGAGGCCA GGGAAAAAGG AGATTTGACT TTTACGTTTC CTGTAGTTTT TATGGGAGAG    1140AGTGATGAAG ATGACACGCC TGTTTGGGAA CCGCTGCCAT TGAAAACCTT AAAGGAATTG    1200CAATCGGCAG TTAGGACCAT GGGACCATCT GCTCCCTACA CCCTGCAGGT GGTAGACATG    1260GTGGCTAGTC AATGGCTCAC CCCGAGTGAC TGGCACCAAA CAGCCAGAGC TACCTTGTCT    1320CCTGGAGACT ATGTTTTATG GAGAACTGAA TATGAAGAGA AAAGTAAAGA AATGGTACAA    1380AAGGCTGCAG GCAAGCGAAA GGGCAAGGTC TCTCTTGATA TGTTACTGGG GACTGGCCAA    1440TTCCTGTCCC CTTCTTCTCA GATAAAATTG TCTAAGGATG TCTTAAAAGA TGTCACCACA    1500AATGCTGTGT TAGCATGGAG GGCCATTCCG CCTCCTGGAG TTAAAAAGAC TGTATTAGCA    1560GGATTAAAAC AGGGAAATGA AGAGTCTTAT GAGACTTTCA TTTCAAGGCT CGAGGAAGCT    1620GTTTACCGAA TGATGCCCAG AGGGGAAGGG TCGGATATAT TGATCAAACA ATTGGCGTGG    1680GAGAATGCAA ATTCATTGTG TCAGGATCTC ATCCGCCCAA TACGTAAAAC AGGAACTATA    1740CAGGATTATA TTCGTGCTTG TCTGGACGCT TCTCCCGCAG TTGTTCAGGG TATGGCATAT    1800GCAGCAGCCA TGAGAGGACA AAAGTATTCT ACCTTTGTAA AGCAAACATA TGGTGGGGGA    1860AAAGGAGGTC AAGGAGCAGA AGGGCCAGTT TGTTTTTCCT GTGGTAAGAC AGGACACATC    1920AGAAAAGACT GTAAGGATGA AAAGGGCTCA AAAAGGGCCC CTCCTGGGCT CTGCCCCAGA    1980TGTAAGAAAG GCTATCACTG GAAGAGTGAG TGTAAATCTA AATTTGACAA AGATGGGAAT    2040CCACTTCCTC CCTTGGAAAC TAATGCTGAA AATTCAAAAA ACTTGTAAAG GGGCAGTCCC    2100CTAGCCCCGC TCAAAAGGGG GATGGAGTTA AGGGCTCAGG ATTAAATCCT GAAGCCCCAC    2160CTTTCACAAT ACATGATTTG CCTCGAGGCA CCCCTGGAAG TGCAGGTTTA GACCTGTCAT    2220CACAGAAGGA TTTGATCCTC TCTCTAGAAG ATGGAGTATC ATTGGTACCC ACCTTAGTGA    2280AAGGCACCCT CCCTGAAGGG ACTACTGGAC TAATAATAGG TAGAAGTTCT AATTATAAAA    2340AGGGACTTGA GGTTTTACCA GGAGTCATTG ACTCCGATTT CCAAGGAGAA ATCAAGGTTA    2400TGGTTAAGGC CGCAAAAAAT GCGGTCATCA TTCACAAAGG AGAAAGAATA GCACAACTGC    2460TGTTGCTGCC ATATTTAAAA TTACCCAATC CTGTAATCAA GGAAGAACGA GGCTCAGAAG    2520GCTTCGGATC AACAAGTCAT GTGCATTGGG TGCAGGAAAT AAGTGACTCC AGACCCATGC    2580TTCACATTTA CTTAAATGGA AGAAGATTCC TCGGTCTCTT GGATACCGGG GCAGATAAAA    2640CTTGCATAGC AGGCAGAGAC TGGCCAGCTA ATTGGCCCAT TCACCAAACT GAGAGTTCTC    2700TTCAAGGTTT AGGCATGGCC TGTGGGGTGG CGCGTAGTAG TCAGCCACTC CGTTGGCAAC    2760ATGAGGATAA ATCAGGAATT ATACATCCTT TTGTGATCCC TACACTGCCT TTCACCTTAT    2820GGGGAAGAGA TATTATGAAA GATATAAAGG TCAGATTGAT GACAGACTCA CCAGATGATT    2880CACAGGATTT ATGATAGGGG CCATTGAGAG CAATCTCTTT GCAGACCAAA TATCTTGGAA    2940GTCAGACCAG CCTGTATGGC TTAATCAATG GCCCCTTAAA CAAGAAAAGT TACAGGCTTT    3000ACAACAGTTA GTGACAGAAC AATTACAACT GGGCCACTTA GAAGAGAGCA ATAGCCCTTG    3060GAATACGCCT GTTTTTGTCA TTAAAAAGAA GTCAGGAAAA TGGAGACTGT TACAAGACCT    3120ACGTGCAGTT AATGCTACAA TGCACGATAT GGGAGCATTA CAACCCGGCT TGCCGTCCCC    3180TGTAGCAGTC CCTAAAGGAT GGGAAATAAT CATAATAGAT CTACAAGATT GCTTTTTTAA    3240TATAAAACTG CATCCTGAAG ATTGTAAAAG ATTTGCTTTT AGTGTGCCCT CCCCTAATTT    3300TAAGAGACCT TATCAA GAT TCCAATGGAA AGTTTTGCCC CAGGGTATGA AAAATAGCCC    3360TACTTTATGT CAAAAATTTG TGGACAAAGC TATATTGACT GTAAGGGATA AATACCAAGA    3420CTCATATATT GTGCATTACA TGGATGACAT TCTTTTGGCA CACCCATCAA GATCCATTGT    3480CGATGAAATA CTTACTTCCA TGATACAGGC CCTTAACAAA CATGGCCTTG TAGTATCCAC    3540AGAGAAGATT CAAAAATATG ATAATCTCAA ATATTTGGGA ACTCATATAC AGGGTGATTC    3600AGTGTCTTAT CAAAAATTAC AGATTAGGAC AGATAAATTA AGAACCTTAA ATGATTTCCA    3660AAAGCTATTA GGAAATATTA ATTGGATACG TCCTTTCTTA AAATTAACTA CGGGAGAGTT    3720AAAACCTCTC TTTGAAATTC TTAATGGAGA TTCTAATCCG ATCTCAACAA GAAAACTTAC    3780TCCTGAGGCA TGCAAAGCTC TTCAATTAAT GAATGAGAGA CTATCTACCG CTCGGGTAAA    3840GAGGCTAGAT TTATCACAGC CTTCGTCTCT ATGTATATTA AAGACTGAAT ATACCCCCAC    3900AGCATGCCTC TGGCAGGATG GAGTTGTAGA ATGGATACAT TTGCCTCATA TTTCACCAAA    3960GGTGATTACT   CCTTATGATA   TCTTTTGTAC   ACAACTTATT   ATTAAGGGCC   GACACCGCTC        4020TAAAGAATTA   TTTAGTAAAG   ACCCTGATTA   TATTGTTGTG   C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ACA   TACTCATTCT   CTGCTGCAAA   CTTGGCATAG   CTCTGCTTTG   CCTGGGGCTA        7560TTGGGGGAAG   TTGCGGTTCG   TGCTCGCAGG   GCTCTCACCC   TTGACTCTTT   TAATAGCTCT        7620TCTGTGCAAG   ATTACAATCT   AAACGATTCG   GAGAACTCGA   CCTTCCTCCT   GAGGCAAGGA         7680CCACAGCCAA   CTTCCTCTTA   CAAGCCGCAT   CAACCTTGTC   CTTCAGAAAT   AGAAATAAGA         7740ATGCTTGCTA   AAAATTATAT   TTTTACCAAT   AAGACCAATC   CAATAGGTAG   ATTATTAGTT         7800ACTATGTTAA   GAAATGAATC   ATTACCTTTT   AGTACTATTT   TTACTCAAAT   TCAAAGGTTA         7860GAAATGGGAA   TAGAAAATAG   AAAGAGACAC   TCAACCTCAG   TTGAAGAACA   GGTGCAGGGA         7920CTAAGGGCCT   CAGGCCTAGA   AGTAAAAAGG   GGAAAGAGGA   GTGCGCTTGT   CAAAATAGGA         7980GACAGGTGGT   GGCAACCAGG   GACTTATAGG   GGACCTTACA   TCTACAGACC   AACAGATGCC         8040CCCTTACCGT   ATACAGGAAG   ATATGACCTA   AATTTTGATA   GGTGGGTCAC   AGTCAATGGC         8100TATAAAGTGT   TATACAGGTC   CCTCTCCTTT   CGTGAAAGGC   TCGCCAGGGC   TAGACCTCCT         8160TGGTGTATGT   TGACTCAGGA   AGAGAAAAAC   GACATGAAAC   AACAGGTACA   TGATTATATT         8220TATTTGGGAA   CAGGAATGAG   CAGCATTTGG   GGAAAGATTT   TTCATACCAA   GGAGAGGACA         8280GTGGCTGCAC   TAATAGAGCA   CTATTCTGCA   AAGACTTATG   GCATGAGTTA   TTATGGATTAG        8340CCTTTATTAG   CCCAATCTTG   TGGTTCCCAA   GGTTTAAGTA   AGTTCATGGT   CACAGACTGT         8400TCTTAAAACA   AGGATGTGAG   ACAAGTGGTT   TCCTGACTTG   GCTTGGTATC   AAATGTTTTG         8460ATCTAAGCTC   TAAATGCTCT   AACCTCCTAT   GTTCTTTTGG   ATTCTATCCA   AGTTTTATGT         8520AAATGCTTAT   GTAAACCATG   ATATAAAAGA   GTGCTAAATT   TTTGAGTAAA   CTTGCAACAG         8580TCCTAACATT   CACCTCTCGT   GTGTTTGTGT   CTGTTCGCCA   TCCCGTCTCC   GCTCGTCACT         8640TATCCTTCAC   TTTCCAGAGG   GTCCCCCCGC   AGACCCCGGT   GACCCTCAGG   TCGGCCGACT         8700GCGGCACGTC   AGCTCGAGCA   GAACCACCCG   TGAGTTAGGT   CGAGCAGAGC   CAAAGCCCCC         8760GGTGCTTCGT   CGCGGGTTCG   CTCGCTAGCT   ATCTGGATCA   CTCCC                           8805(2)SEQ ID NO:2的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：1755氨基酸
(B)类型：氨基酸
(C)线型：
(D)拓扑构型：未知(ⅱ)分子类型：肽(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:2:Met Gly Val Ser Gly Ser Lys Gly Gln Lys Leu Phe Val Ser Val Leu1               5                  10                  15Gln Arg Leu Leu Ser Glu Arg Gly Leu His Val Lys Glu Ser Ser Ala
        20                  25                  30Ile Glu Phe Tyr Gln Phe Leu Ile Lys Val Ser Pro Trp Phe Pro Glu
    35                  40                  45Glu Gly Gly Leu Asn Leu Gln Asp Trp Lys Arg Val Gly Arg Glu Mer
50                  55                  60Lys Arg Tyr Ala Ala Glu His Gly Thr Asp Ser Ile Pro Lys Gln Ala65                  70                  75                  80Tyr Pro Ile Trp Leu Gln Leu Arg Glu Ile Leu Thr Glu Gln Ser Asp
            85                  90                  95Leu Val Leu Leu Ser Ala Glu Ala Lys Ser Val Thr Glu Glu Glu Leu
        100                 105                 110Glu Glu Gly Leu Thr Gly Leu Leu Ser Thr Ser Ser Gln Glu Lys Thr
    115                 120                 125Tyr Gly Thr Arg Gly Thr Ala Tyr Ala Glu Ile Asp Thr Glu Val Asp
130                 135                 140Lys Leu Ser Glu His Ile Tyr Asp Glu Pro Tyr Glu Glu Lys Glu Lys145                 150                 155                 160Ala Asp Lys Asn Glu Glu Lys Asp His Val Arg Lys Ile Lys Lys Val
            165                 170                 175Val Gln Arg Lys Glu Asn Ser Glu Gly Lys Arg Lys Glu Lys Asp Ser
        180                 185                 190Lys Ala Phe Leu Ala Thr Asp Trp Asn Asp Asp Asp Leu Ser Pro Glu
    195                 200                 205Asp Trp Asp Asp Leu Glu Glu Gln Ala Ala His Tyr His Asp Asp Asp
210                 215                 220Glu Leu Ile Leu Pro Val Lys Arg Lys Val Val Lys Lys Lys Pro Gln225                 230                 235                 240Ala Leu Arg Arg Lys Pro Leu Pro Pro Val Gly Phe Ala Gly Ala Met
            245                 250                 255Ala Glu Ala Arg Glu Lys Gly Asp Leu Thr Phe Thr Phe Pro Val Val
        260                 265                 270Phe Met Gly Glu Ser Asp Glu Asp Asp Thr Pro Val Trp Glu Pro Leu
    275                 280                 285Pro Leu Lys Thr Leu Lys Glu Leu Gln Ser Ala Val Arg Thr Met Gly
290                 295                 300Pro Ser Ala Pro Tyr Thr Leu Gln Val Val Asp Met Val Ala Ser Gln305                 310                 315                 320Trp Leu Thr Pro Ser Asp Trp His Gln Thr Ala Arg Ala Thr Leu Ser
            325                 330                 335Pro Gly Asp Tyr Val Leu Trp Arg Thr Glu Tyr Glu Glu Lys Ser Lys
        340                 345                 350Glu Met Val Gln Lys Ala Ala Gly Lys Arg Lys Gly Lys Val Ser Leu
    355                 360                 365Asp Met Leu Leu Gly Thr Gly Gln Phe Leu Ser Pro Ser Ser Gln Ile
370                 375                 380Lys Leu Ser Lys Asp Val Leu Lys Asp Val Thr Thr Asn Ala Val Leu385                 390                 395                 400Ala Trp Arg Ala Ile Pro Pro Pro Gly Val Lys Lys Thr Val Leu Ala
            405                 410                 415Gly Leu Lys Gln Gly Asn Glu Glu Ser Tyr Glu Thr Phe Ile Ser Arg
        420                 425                 430Leu Glu Glu Ala Val Tyr Arg Met Met Pro Arg Gly Glu Gly Ser Asp
    435                 440                 445Ile Leu Ile Lys Gln Leu Ala Trp Glu Asn Ala Asn Ser Leu Cys Gln
450                 455                 460Asp Leu Ile Arg Pro Ile Arg Lys Thr Gly Thr Ile Gln Asp Tyr Ile465                 470                 475                 480Arg Ala Cys Leu Asp Ala Ser Pro Ala Val Val Gln Gly Met Ala Tyr
            485                 490                 495Ala Ala Ala Met Arg Gly Gln Lys Tyr Ser Thr Phe Val Lys Gln Thr
        500                 505                 510Tyr Gly Gly Gly Lys Gly Gly Gln Gly Ala Glu Gly Pro Val Cys Phe
    515                 520                 525Ser Cys Gly Lys Thr Gly His Ile Arg Lys Asp Cys Lys Asp Glu Lys
530                 535                 540Gly Ser Lys Arg Ala Pro Pro Gly Leu Cys Pro Arg Cys Lys Lys Gly545                 550                 555                 560Tyr His Trp Lys Ser Glu Cys Lys Ser Lys Phe Asp Lys Asp Gly Asn
            565                 570                 575Pro Leu Pro Pro Leu Glu Thr Asn Ala Glu Asn Ser Lys Asn Leu Val
        580                 585                 590Lys Gly Gln Ser Pro Ser Pro Ala Gln Lys Gly Asp Gly Val Lys Gly
    595                 600                 605Ser Gly Leu Asn Pro Glu Ala Pro Pro Phe Thr Ile His Asp Leu Pro
610                 615                 620Arg Gly Thr Pro Gly Ser Ala Gly Leu Asp Leu Ser Ser Gln Lys Asp625                 630                 635                 640Leu Ile Leu Ser Leu Glu Asp Gly Val Ser Leu Val Pro Thr Leu Val
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        660                 665                 670Ser Asn Tyr Lys Lys Gly Leu Glu Val Leu Pro Gly Val Ile Asp Ser
    675                 680                 685Asp Phe Gln Gly Glu Ile Lys Val Met Val Lys Ala Ala Lys Asn Ala
690                 695                 700Val Ile Ile His Lys Gly Glu Arg Ile Ala Gln Leu Leu Leu Leu Pro705                 710                 715                 720Tyr Leu Lys Leu Pro Asn Pro Val Ile Lys Glu Glu Arg Gly Ser Glu
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  755                 760                 765Leu Leu Asp Thr Gly Ala Asp Lys Thr Cys Ile Ala Gly Arg Asp Trp
770                 775                 780Pro Ala Asn Trp Pro Ile His Gln Thr Glu Ser Ser Leu Gln Gly Leu785                 790                 795                 800Gly Met Ala Cys Gly Val Ala Arg Ser Ser Gln Pro Leu Arg Trp Gln
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850                 855                 860Ile Glu Ser Asn Leu Phe Ala Asp Gln Ile Ser Trp Lys Ser Asp eln865                 870                 875                 880Pro Val Trp Leu Asn eln Trp Pro Leu Lys Gln Glu Lys Leu Gln Ala
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           1445                1450                1455Phe Gln Phe His Ile Thr Arg Glu Gln Ala Arg Glu Ile Val Lys Leu
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   1475                1480                1485Pro Arg Gly Leu Lys Pro Arg Val Leu Trp Gln Met Asp Val Thr His1490                1495                1500Val Ser Glu Phe Gly Lys Leu Lys Tyr Val His Val Thr Val Asp Thr1505               1510                1515                1520Tyr Ser His Phe Thr Phe Ala Thr Ala Arg Thr Gly Glu Ala Thr Lys
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   1635                1640                1645Ala Asp Pro Lys Pro Met Val Met Trp Lys Asp Leu Leu Thr Gly Ser1650                1655                1660Trp Lys Gly Pro Asp Val Leu Ile Thr Ala Gly Arg Gly Tyr Ala Cys1665               1670                1675                1680Val Phe Pro Gln Asp Ala Glu Thr Pro Ile Trp Val Pro Asp Arg Phe
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(A)长度：860氨基酸
(B)类型：氨基酸
(C)线型：
(D)拓扑构型：未知(ⅱ)分子类型：肽(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:3：Met Gly Val Ser Gly Ser Lys Gly Gln Lys Leu Phe Val Ser Val Leu1               5                  10                  15Gln Arg Leu Leu Ser Glu Arg Gly Leu His Val Lys Glu Ser Ser Ala
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610                 615                 620Arg Gly Thr Pro Gly Ser Ala Gly Leu Asp Leu Ser Ser Gln Lys Asp625                 630                 635                 640Leu Ile Leu Ser Leu Glu Asp Gly Val Ser Leu Val Pro Thr Leu Val
            645                 650                 655Lys Gly Thr Leu Pro Glu Gly Thr Thr Gly Leu Ile Ile Gly Arg Ser
        660                 665                 670Ser Asn Tyr Lys Lys Gly Leu Glu Val Leu Pro Gly Val Ile Asp Ser
    675                 680                 685Asp Phe Gln Gly Glu Ile Lys Val Met Val Lys Ala Ala Lys Asn Ala
690                 695                 700Val Ile Ile His Lys Gly Glu Arg Ile Ala Gln Leu Leu Leu Leu Pro705                 710                 715                 720Tyr Leu Lys Leu Pro Asn Pro Val Ile Lys Glu Glu Arg Gly Ser Glu
            725                 730                 735Gly Phe Gly Ser Thr Ser His Val His Trp Val Gln Glu Ile Ser Asp
         740                 745                 750Ser Arg Pro Met Leu His Ile Tyr Leu Asn Gly Arg Arg Phe Leu Gly
    755                 760                 765Leu Leu Asp Thr Gly Ala Asp Lys Thr Cys Ile Ala Gly Arg Asp Trp
770                 775                 780Pro Ala Asn Trp Pro Ile His Gln Thr Glu Ser Ser Leu Gln Gly Leu785                790                 795                 800Gly Met Ala Cys Gly Val Ala Arg Ser Ser Gln Pro Leu Arg Trp Gln
            805                 810                 815His Glu Asp Lys Ser Gly Ile Ile His Pro Phe Val Ile Pro Thr Leu
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850                 855                 860(2)SEQ ID NO:4的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：591氨基酸
(B)类型：氨基酸
(C)线型：
(D)拓扑构型：未知(ⅱ)分子类型：肽(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:4：Met Gly Val Ser Gly Ser Lys Gly Gln Lys Leu Phe Val Ser Val Leu1               5                  10                  15Gln Arg Leu Leu Ser Glu Arg Gly Leu His Val Lys Glu Ser Ser Ala
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            85                  90                  95Leu Val Leu Leu Ser Ala Glu Ala Lys Ser Val Thr Glu Glu Glu Leu
        100                 105                 110Glu Glu Gly Leu Thr Gly Leu Leu Ser Thr Ser Ser Gln Glu Lys Thr
    115                 120                 125Tyr Gly Thr Arg Gly Thr Ala Tyr Ala Glu Ile Asp Thr Glu Val Asp
130                 135                 140Lys Leu Ser Glu His Ile Tyr Asp Glu Pro Tyr Glu Glu Lys Glu Lys145                 150                 155             160Ala Asp Lys Asn Glu Glu Lys Asp His Val Arg Lys Ile Lys Lys Val
            165                 170             175Val Gln Arg Lys Glu Asn Ser Glu Gly Lys Arg Lys Glu Lys Asp Ser
        180                 185             190Lys Ala Phe Leu Ala Thr Asp Trp Asn Asp Asp Asp Leu Ser Pro Glu
    195                 200             205Asp Trp Asp Asp Leu Glu Glu Gln Ala Ala His Tyr His Asp Asp Asp
210                 215             220Glu Leu Ile Leu Pro Val Lys Arg Lys Val Val Lys Lys Lys Pro Gln225                 230             235                     240Ala Leu Arg Arg Lys Pro Leu Pro Pro Val Gly Phe Ala Gly Ala Met
            245             250                     255Ala Glu Ala Arg Glu Lys Gly Asp Leu Thr Phe Thr Phe Pro Val Val
        260             265                     270Phe Met Gly Glu Ser Asp Glu Asp Asp Thr Pro Val Trp Glu Pro Leu
    275             280                     285Pro Leu Lys Thr Leu Lys Glu Leu Gln Ser Ala Val Arg Thr Met Gly
290             295                     300Pro Ser Ala Pro Tyr Thr Leu Gln Val Val Asp Met Val Ala Ser Gln305                 310                 315                 320Trp Leu Thr Pro Ser Asp Trp His Gln Thr Ala Arg Ala Thr Leu Ser
             325                 330                 335Pro Gly Asp Tyr Val Leu Trp Arg Thr Glu Tyr Glu Glu Lys Ser Lys
        340                 345                 350Glu Met Val Gln Lys Ala Ala Gly Lys Arg Lys Gly Lys Val Ser Leu
    355                 360                 365Asp Met Leu Leu Gly Thr Gly Gln Phe Leu Ser Pro Ser Ser Gln Ile
370                 375                 380Lys Leu Ser Lys Asp Val Leu Lys Asp Val Thr Thr Asn Ala Val Leu385                 390                 395                 400Ala Trp Arg Ala Ile Pro Pro Pro Gly Val Lys Lys Thr Val Leu Ala
            405                 410                 415Gly Leu Lys Gln Gly Asn Glu Glu Ser Tyr Glu Thr Phe Ile Ser Arg
        420                 425                 430Leu Glu Glu Ala Val Tyr Arg Met Met Pro Arg Gly Glu Gly ser Asp
    435                 440                 445Ile Leu Ile Lys Gln Leu Ala Trp Glu Asn Ala Asn Ser Leu Cys Gln
450                 455                 460Asp Leu Ile Arg Pro Ile Arg Lys Thr Gly Thr Ile Gln Asp Tyr Ile465                 470                 475                 480Arg Ala Cys Leu Asp Ala Ser Pro Ala Val Val Gln Gly Met Ala Tyr
            485                 490                 495Ala Ala Ala Met Arg Gly Gln Lys Tyr Ser Thr Phe Val Lys Gln Thr
        500                 505                 510Tyr Gly Gly Gly Lys Gly Gly Gln Gly Ala Glu Gly Pro Val Cys Phe
    515                 520                 525Ser Cys Gly Lys Thr Gly His Ile Arg Lys Asp Cys Lys Asp Glu Lys
530                 535                 540Gly Ser Lys Arg Ala Pro Pro Gly Leu Cys Pro Arg Cys Lys Lys Gly545                 550                 555                 560Tyr His Trp Lys Ser Glu Cys Lys Ser Lys Phe Asp Lys Asp Gly Asn
            565                 570                 575Pro Leu Pro Pro Leu Glu Thr Asn Ala Glu ASn Ser Lys Asn Leu
        580                 585                 590(2)SEQ ID NO:5的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：688氨基酸
(B)类型：氨基酸
(C)线型：
(D)拓扑构型：未知(ⅱ)分子类型：肽(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:5：Met Pro Lys His Gln Ser Gly Ser Pro Thr Asp Ser Ser Asp Leu Leu1               5                  10                  15Leu Ser Gly Lys Lys Gln Arg Pro His Leu Ala Leu Arg Arg Lys Arg
        20                  25                  30Arg Arg Glu Met Arg Lys Ile Asn Arg Lys Val Pro Arg Met Asn Leu
    35                  40                  45Val Pro Ile Lys Glu Lys Thr Ala Trp Gln His Leu Gln Ala Leu Ile
50                  55                  60Ser Glu Ala Glu Glu Val Leu Lys Thr Ser Gln Thr Pro Gln Thr Sar65                  70                  75                  80Leu Thr Leu Phe Leu Ala Leu Leu Ser Val Leu Gly Pro Pro Pro Val
            85                  90                  95Thr Gly Glu Ser Tyr Trp Ala Tyr Leu Pro Lys Pro Pro Ile Leu His
        100                 105                 110Pro Val Gly Trp Gly Ser Thr Asp Pro Ils Arg Val Leu Thr Asn Gln
    115                 120                 125Thr Met Tyr Leu Gly Gly Ser Pro Asp Phe His Gly Phe Arg Asn Met
130                 135                 140Ser Gly Asn Val His Phe Glu Gly Lys Ser Asp Thr Leu Pro Ile Cys145                 150                 155                 160Leu Ser Phs Ser Phs Ser Thr Pro Thr Gly Cys Phs Gln Val Asp Lys
            165                 170                 175Gln Val Phe Leu Ser Asp Thr Pro Thr Val Asp Asn Asn Lys Pro Gly
        180                 185                 190Gly Lys Gly Asp Lys Arg Arg Met Trp Glu Leu Trp Leu Thr Thr Leu
    195                 200                 205Gly Asn Ser Gly Ala Asn Thr Lys Leu Val Pro Ile Lys Lys Lys Leu
210                 215                 220Pro Pro Lys Tyr Pro His Cys Gln Ile Ala Phe Lys Lys Asp Ala Phe225                 230                 235                 240Trp Glu Gly Asp Glu Ser Ala Pro Pro Arg Trp Leu Pro Cys Ala Phe
            245                 250                 255Pro Asp Gln Gly Val Ser Phe Ser Pro Lys Gly Ala Leu Gly Leu Leu
        260                 265                 270Trp Asp Phe Ser Leu Pro Ser Pro Ser Val Asp Gln Ser Asp Gln Ile
    275                 280                 285Lys Ser Lys Lys Ash Leu Phe Gly Asn Tyr Thr Pro Pro Val Asn Lys
290                 295                 300Glu Val His Arg Trp Tyr Glu Ala Gly Trp Val Glu Pro Thr Trp Phe305                 310                 315                 320Trp Glu Asn Ser Pro Lys Asp Pro Asn Asp Arg Asp Phe Thr Ala Leu
            325                 330                 335Val Pro His Thr Glu Leu Phe Arg Leu Val Ala Ala Ser Arg His Leu
        340                 345                 350Ile Leu Lys Arg Pro Gly Phe Gln Glu His Glu Met Ile Pro Thr Ser
    355                 360                 365Ala Cys Val Thr Tyr Pro Tyr Ala Ile Leu Leu Gly Leu Pro Gln Leu
370                 375                 380Ile Asp Ile Glu Lys Arg Gly Ser Thr Phe His Ile Ser Cys Ser Ser385                 390                 395                 400Cys Arg Leu Thr Ash Cys Leu Asp Ser Ser Ala Tyr Asp Tlr Ala Ala
            405                 410                 415Ile Ile Val Lys Arg Pro Pro Tyr Val Leu Leu Pro Val Asp Ile Gly
        420                 425                 430Asp Glu Pro Trp Phe Asp Asp Ser Ala Ile Gln Thr Phe Arg Tyr Ala
    435                 440                 445Thr Asp Leu Ile Arg Ala Lys Arg Phe Val Ala Ala Ile Ile Leu Gly
450                 455                 460Ile Ser Ala Leu Ile Ala Ile Ile Thr Ser Phe Ala Val Ala Thr Thr465                 470                 475                 480Ala Leu Val Lys Glu Met Gln Thr Ala Thr Phe Val Asn Asn Leu His
            485                 490                 495Arg Asn Val Thr Leu Ala Leu Ser Glu Gln Ar9 Ile Ile Asp Leu Lys
        500                 505                 510Leu Glu Ala Arg Leu Asn Ala Leu Glu Glu Val Val Leu Glu Leu Gly
    515                 520                 525Gln Asp Val Ala Asn Leu Lys Thr Arg Met Ser Thr Arg Cys His Ala
530                 535                 540Asn Tyr Asp Phe Ile Cys Val Thr Pro Leu Pro Tyr Asn Ala Thr Glu545                 550                 555                 560Asn Trp Glu Arg Thr Arg Ala His Leu Leu Gly Ile Trp Asn Asp Asn
            565                 570                 575Glu Ile Ser Tyr Asn Ile Gln Glu Leu Thr Asn Leu Ile Ser Asp Met
        580                 585                 590Ser Lys Gln His Ile Asp Ala Val Asp Leu Ser Gly Leu Ala Gln Ser
    595                 600                 605Phe Ala Asn Gly Val Lys Ala Leu Asn Pro Leu Asp Trp Thr Gln Tyr
610                 615                 620Phe Ile Phe Ile Gly Val Gly Ala Leu Leu Leu Val Ile Val Leu Met625                 630                 635                 640Ile Phe Pro Ile Val Phe Gln Cys Leu Ala Lys Ser Leu Asp Gln Val
            645                 650                 655Gln Ser Asp Leu Asn Val Leu Leu Leu Lys Lys Lys Lys Gly Gly ASn
        660                 665                 670Ala Ala Pro Ala Ala Glu Met Val Glu Leu Pro Arg Val Ser Tyr Thr
    675                 680                 685(2)SEQ ID NO:6的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：320氨基酸
(B)类型：氨基酸
(C)线型：
(D)拓扑构型：未知(ⅱ)分子类型：肽(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:6：Met Pro Arg Leu Gln Gln Lys Trp Leu Asn Ser Arg Glu Cys Pro Thr1               5                  10                  15Leu Arg Gly Glu Ala Ala Lys Gly Leu Phe Pro Thr Lys Asp Asp Pro
        20                  25                  30Ser Ala His Lys Arg Met Ser Pro Ser Asp Lys Asp Ile Leu Ile Leu
    35                  40                  45Cys Cys Lys Leu Gly Ile Ala Leu Leu Cys Leu Gly Leu Leu Gly Glu
50                  55                  60Val Ala Val Arg Ala Arg Arg Ala Leu Thr Leu Asp Ser Phe Asn Ser65                  70                  75                  80Ser Ser Val Gln Asp Tyr Asn Leu Asn Asp Ser Glu Asn Ser Thr Phe
            85                  90                  95Leu Leu Arg Gln Gly Pro Gln Pro Thr Ser Ser Tyr Lys Pro His Gln
        100                 105                 110Pro Cys Pro Ser Glu Ile Glu Ile Arg Met Leu Ala Lys Asn Tyr Ile
    115                 120                 125Phe Thr Asn Lys Thr Asn Pro Ile Gly Arg Leu Leu Val Thr Met Leu
130                 135                 140Arg Asn Glu Ser Leu Pro Phe Ser Thr Ile Phe Thr Gln Ile Gln Arg145                 150                 155                 160Leu Glu Met Gly Ile Glu Asn Arg Lys Arg His Ser Thr Ser Val Glu
            165                 170                 175Glu Gln Val Gln Gly Leu Arg Ala Ser Gly Leu Glu Val Lys Arg Gly
        180                 185                 190Lys Arg Ser Ala Leu Val Lys Ile Gly Asp Arg Trp Trp Gln Pro Gly
    195                 200                 205Thr Tyr Arg Gly Pro Tyr Ile Tyr Arg Pro Thr Asp Ala Pro Leu Pro
210                 215                 220Tyr Thr Gly Arg Tyr Asp Leu Asn Phe Asp Arg Trp Val Thr Val Asn225                 230                 235                 240Gly Tyr Lys Val Leu Tyr Arg Ser Leu Ser Phe Arg Glu Arg Leu Ala
            245                 250                 255Arg Ala Arg Pro Pro Trp Cys Met Leu Thr Gln Glu Glu Lys Asn Asp
        260                 265                 270Met Lys Gln Gln Val His Asp Tyr Ile Tyr Leu Gly Thr Gly Met Ser
     275                280                 285Ser Ile Trp Gly Lys Ile Phe His Thr Lys Glu Arg Thr Val Ala Ala
290                 295                 300Leu Ile Glu His Tyr Ser Ala Lys Thr Tyr Gly Met Ser Tyr Tyr Asp305                 310                 315                 320

Claims (20)

1．在人受体中诱导针对MMTV的免疫应答的方法，包括对受体给药一种免疫调节组合物，该组合物含有一种药用载剂和至少一种MMTV抗原，其中抗原的数量足以引起MMTV特异的细胞或体液应答提高。
2．权利要求1的方法，其中抗原是MMTV env肽或其一个部分。
3．权利要求2的方法，其中所说的部分包含MMTV env肽的至少6个连续氨基酸。
4．权利要求1的方法，其中抗原是MMTV核心肽或其一个部分。
5．权利要求4的方法，其中所说的部分包含MMTV核心肽的至少6个连续氨基酸。
6．权利要求1的方法，其中抗原是MMTV pol肽或其一个部分。
7．权利要求6的方法，其中所说的部分包含MMTV pol肽的至少6个连续氨基酸。
8．权利要求1的方法，其中抗原是一种核酸分子，该核酸分子编码至少一种MMTV抗原。
9．权利要求8的方法，其中核酸分子编码MMTV env肽或其一个部分。
10．权利要求9的方法，其中所说的部分编码MMTV env肽的至少6个连续氨基酸。
11．权利要求8的方法，其中核酸分子编码MMTV核心肽或其一个部分。
12．权利要求11的方法，其中所说的部分编码MMTV核心肽的至少6个连续氨基酸。
13．权利要求8的方法，其中核酸分子编码MMTV pol肽或其一个部分。
14．权利要求13的方法，其中所说的部分编码MMTV pol肽的至少6个连续氨基酸。
15．权利要求8的方法，其中核酸编码MMTV的一个不连续表位。
16．权利要求1的方法，其中人受体在给药该免疫调节组合物前没有接触或感染过MMTV。
17．权利要求1的方法，其中人受体在给药该免疫调节组合物前对MMTV抗原没有免疫反应性。
18．权利要求1的方法，其中免疫调节组合物通过选自口、鼻内途径、皮下途径、静脉途径、腹膜内途径和皮下途径的途径进行给药。
19．使用一种方法制备的MMTV的不连续表位，该方法包括(a)基本上消化MMTV的基因组，产生多样性的MMTV核酸片段；(b)将片段连接，产生至少一种连接的核酸片段，后者至少编码一种肽；(c)在一种表达系统中表达该连接片段，使编码的肽表达；(d)用血清对表达的肽进行筛选，其中血清含有能与至少一种MMTV抗原反应的抗体或免疫细胞；和(e)将与抗体或免疫细胞反应阳性的表达肽纯化。
20．在人受体中诱导针对MMTV的免疫应答的方法，包括将一种免疫调节组合物给药于该受体，其中该组合物包含一种可药用载剂和一种MMTV的不连续表位，其中该不连续表位通过下面的方法制备，包括(a)基本上消化MMTV的基因组，产生多样性的MMTV核酸片段；(b)将片段连接，产生至少一种连接的核酸片段，后者至少编码一种肽；(c)在一种表达系统中表达该连接片段，使编码的肽表达；(d)用血清对表达的肽进行筛选，其中血清含有能与至少一种MMTV抗原反应的抗体或免疫细胞；和(e)将与抗体或免疫细胞反应阳性的表达肽纯化，使其数量足以引发MMTV特异的细胞或体液应答的增加。
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