CN1289255A - 制备可吸收微粒的方法 - Google Patents

制备可吸收微粒的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN1289255A
CN1289255A CN99802448A CN99802448A CN1289255A CN 1289255 A CN1289255 A CN 1289255A CN 99802448 A CN99802448 A CN 99802448A CN 99802448 A CN99802448 A CN 99802448A CN 1289255 A CN1289255 A CN 1289255A
Authority
CN
China
Prior art keywords
microgranule
peptide
polymer
combined
base unit
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN99802448A
Other languages
English (en)
Inventor
托马斯·恰兰·洛克曼
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Kinerton Ltd
Original Assignee
Kinerton Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Kinerton Ltd filed Critical Kinerton Ltd
Publication of CN1289255A publication Critical patent/CN1289255A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6921—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere
    • A61K47/6927—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/58—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. poly[meth]acrylate, polyacrylamide, polystyrene, polyvinylpyrrolidone, polyvinylalcohol or polystyrene sulfonic acid resin
    • A61K47/585—Ion exchange resins, e.g. polystyrene sulfonic acid resin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/593—Polyesters, e.g. PLGA or polylactide-co-glycolide

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本发明涉及制备被包覆被结合微粒的方法,所述微粒持续地释放含有一种或多种肽、一种或多种蛋白或它们的混合物的配合物,该配合物固定在具有可吸收聚合物包衣的可吸收聚合物微粒上,其中所述方法包括将被结合微粒雾化为一种分散体。

Description

制备可吸收微粒的方法
技术领域
本发明涉及制备被包覆被结合微粒的方法，所述微粒持续地释放一种或多种肽、一种或多种蛋白或它们的混合物的配合物，该配合物固定在具有可吸收包覆用聚合物的可吸收聚合物微粒上。用本发明的方法制备的这种微粒配合物含有：一种或多种肽和/或一种或多种蛋白，它们每个分子有至少一个氨基和/或至少一个羧基；固态可吸收聚酯微粒，它具有足够量的表面和次表面(subsurface)羧基或氨基以结合上述一种或多种肽和/或一种或多种蛋白，使固定化的这些一种或多种肽和/或一种或多种蛋白占微粒配合物总重量的0.1-30％，所述微粒配合物被可吸收包覆用聚合物单个地或成组地包覆以控制这些固定化的一种或多种肽和/或一种或多种蛋白的释放。
技术背景
已经开发、试验和使用了很多药物传递体系用于药物组合物的体内受控释放。例如，已经使用了聚酯类如聚(DL-乳酸)、聚(乙醇酸)、聚(ε-己内酯)和各种其它共聚物来释放生物活性分子如孕酮；它们呈现为微囊、薄膜或小棒的形式(M.Chasin和R.Langer编辑，“作为药物传递体系的可生物降解聚合物”，Dekker,NY 1990)。这些聚合物/治疗剂组合物一旦植入体内，如通过皮下或肌内，治疗剂在一特定时间段释放。这类生物相容的可生物降解聚合物体系被设计成允许被俘获的治疗剂从聚合物基质中扩散出来。一旦治疗剂释放出来，聚合物基质在体内降解，避免了将植入体外科取出。虽然对导致聚合物基质降解的因素不甚了解，但据信聚酯的这种降解可以由酯键对聚合物成分的非-酶自动催化水解的可及性进行调节。
例如，Deluca(EPO公开0467389A2)描述了疏水性可生物降解聚合物与蛋白或多肽之间的物理相互作用。所形成的这种组合物是治疗剂与疏水聚合物的混合体，在植入受治疗者后，疏水聚合物支持治疗剂从基质中扩散释放出来。
Hutchinson(美国专利US4767628)通过在聚合物装置中的均匀分散作用控制治疗剂的释放。据它公开，这种制剂装置通过交叠的两个阶段提供受控的连续释放：第一，依赖于药物从制剂表面浸出的散播；第二，通过由聚合物的降解产生的含水通道的释放。
其它原位形成的可生物降解植入体和形成它们的方法在Dunn等人的美国专利US5278201(‘201专利)和美国专利US5077049(‘049专利)中有描述。Dunn等人的专利公开了用于协助在牙周袋的牙周组织的康复和用于延缓上皮细胞沿牙根表面的迁移的方法。‘049专利公开的方法涉及在邻近牙齿表面放置原位形成的可生物降解的障壁。这种障壁是多微孔的，含有一定尺寸的孔并能够包容生物活性剂。这种障壁的形成是通过将一种可生物降解聚合物的液体溶液，如可与水溶混的热塑性可水-凝结的聚(d1-丙交酯-共-乙交酯)、非毒性有机溶剂如N-甲基吡咯烷酮(即达到约为50％的一般聚合物浓度)放置在牙周袋中得到的。所述有机溶剂消散在牙周液中而可生物降解的水中可凝结的聚合物原位形成固体可生物降解植入体。溶剂的消散在固体可生物降解植入体内形成孔，用以促进细胞向内生长。‘859专利类似地公开了同样特征的方法，该方法涉及由可生物降解、可固化热固性预聚合物、固化剂和水溶性材料如盐、糖和水溶性聚合物的液体混合物形成可生物降解的障壁。所述可固化热固性预聚合物被描述为以丙烯酸-酯为终端的可吸收的聚合物。
此外，在文献中公开了将生物活性化合物受控分配到各处的若干体系。例如，Fujioka等人的美国专利US 5011692公开了带有含药聚合物材料层的进行持续脉冲式释放的药物制剂。聚合物材料层仅含有微量药物或不含药物。整个表面沿着与层平面垂直的方向伸延并且被水不溶性聚合物材料包覆。这种类型的脉冲式释放的药物制剂适合在皮下植入。
Chesterfield等人的美国专利US5366756描述了多孔的可生物吸收的外科植入体材料的制备方法。该方法包括提供一定量的可生物吸收植入体材料的颗粒，和用至少一种生长因子包覆可生物吸收植入体材料的颗粒。所述植入体也可以含有抗菌剂。
Yamhira等人的美国专利US5385738公开了一种持续式释放注射体系，该体系含有在用于注射的黏性溶剂(如植物油、聚乙二醇、聚丙二醇、硅氧烷油和中等级长链脂肪酸甘油三酯)中的粉末悬浮液，所述粉末含有活性成分和药用可生物降解载体(如蛋白、多糖和合成高分子化合物，优选胶原、不全胶原、明胶和它们的混合物)。在该药物制剂中的活性成分是以下述的状态加入到可生物降解载体中的：(ⅰ)活性成分以化学方式与载体基质结合；(ⅱ)活性成分通过分子间相互作用与载体结合；或(ⅲ)活性成分以物理方式包埋在载体基质内。
此外，在文献中先前所描述的那些体系，如Dunn等人(美国专利US4938763)中所描述的那些中，公开了通过一种聚合物在有机溶剂如N-甲基-2-吡咯烷酮的溶液中的凝结在活体中原位形成可生物降解、多微孔的、固体植入体。不过，溶剂的使用，包括低分子量有机溶剂的使用，易于使所用溶液从植入处迁移，从而导致活体组织的损伤，包括细胞脱水和坏死。溶剂大量流失会导致凝结物皱缩并与周围组织脱离。
美国专利US5612052描述了典型地由含羧基的聚酯链构成的阳离子交换性微粒，其中碱性生物活性剂固定在所述聚酯链上，用以提供在可吸收成胶(gel-forming)液态聚酯内的受控释放体系。美国专利US5612052的内容引入本文作为参考。与碱性多肽离子地共轭的羧酸本体，在现有技术中已有记述，如美国专利US5672659和美国专利US5665702所述。不过，这些配合物是可溶性化学实体，通过单个的碱成分和羧酸成分在它们各自的溶液中的分子间反应形成，生成定义明确的离子-轭合物，成为具有新物理化学性质的化学实体。
本发明的描述
本发明涉及一种方法(方法A)，即，用于制备被包覆被结合的一个微粒或多个微粒的方法，其中被包覆被结合的一个或多个微粒含有被结合的一个或多个微粒和一种可吸收的包覆用聚合物，其中所述被结合的一个微粒或多个微粒含有可吸收的杂链聚合物芯和固定在上述可吸收杂链聚合物芯上的一种或多种肽、一种或多种蛋白或它们的混合物，每种肽独立地选自促生长激素释放肽(GHRP)、促黄体素释放激素(LHRH)、促生长素抑制素、铃蟾肽、促胃液素释放肽(GRP)、降钙素、缓激肽、galanin、促黑激素(MSH)、促生长激素释放因子(GRF)、淀粉不溶素、速激肽、肠促胰液肽、甲状旁腺激素(PTH)、脑啡肽(enkaphelin)、内皮缩血管肽、促降钙素基因释放肽(CGRP)、神经调节肽、甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)、高血糖素、神经降压素、促肾上腺皮质激素(ACTH)、肽YY(PYY)、促高血糖素释放肽(GLP)、血管活性肠肽(VIP)、垂体腺苷酸环化酶活化肽(PACAP)、胃动素、物质P、神经肽Y(NPY)、TSH和它们的类似物、片段或它们的可药用的盐；其中每种蛋白独立地选自生长激素、红细胞生成素、粒性白细胞集落刺激因子、粒性白细胞-巨噬细胞集落刺激因子和干扰素；
上述方法包括以下步骤：
制取一种分散体，该分散体含有在可吸收包覆用聚合物的溶液中的被结合固体微粒，所述分散体通过将上述被结合固体微粒匀化并同时将之分散到一种可吸收包覆用聚合物溶液中来制取；和
通过雾化探头将上述分散体在一种介质中雾化，其中上述探头的工作超声频率范围是12-36kHz，这里的介质是上述可吸收包覆用聚合物的非溶剂，流速约为1-15毫升/分钟。
方法A中的一个优选方法，被称为方法B，其中介质包括异丙醇或乙醇。
方法B中的一个优选方法，被称为方法C，其中所述可吸收聚合物的溶液包含约50％-30％的可吸收聚合物并且介质的温度是从室温至约-80℃。
方法A中的一个优选方法，被称为方法D，其中被结合微粒中的一种肽或多种肽、一种蛋白或多种蛋白和它们的混合物占被结合微粒总重量的0.1-30％。
方法D中的一个优选的方法，被称为方法E，其中可吸收聚合物芯含有羟乙酸酯单元和柠檬酸残基，其中羟乙酸酯单元与柠檬酸残基之比是约7-1到约20-1；或含有羟乙酸酯单元和酒石酸残基，其中羟乙酸酯单元与酒石酸残基之比是约7-1到约20-1；或含有羟乙酸酯单元和马来酸残基，其中羟乙酸酯单元和马来酸残基之比是约7-1到约20-1。
方法E中的一个优选的方法，被称为方法F，其中可吸收包覆用聚合物含有
(a)1-丙交酯基单元和乙交酯基单元，其中1-丙交酯基单元和乙交酯基单元之比为约60-40到约90-10，
(b)d,1-丙交酯基单元和乙交酯基单元，其中d,1-丙交酯基单元和乙交酯基单元之比为约60-40到约90-10，
(c)d,1-丙交酯基单元，或
(d)1-丙交酯基单元和d,1-丙交酯基单元，其中1-丙交酯基单元与d,1-丙交酯基单元之比为约80-20。
方法F中的一个优选的方法，被称为方法G，其中可吸收包覆用聚合物占被包覆被结合的一个或多个微粒总重量的5-70％。
方法G中的一个优选的方法，被称为方法H，其中可吸收包覆用聚合物占被包覆被结合的一个或多个微粒总重量的20-60％。
方法H中的一个优选的方法，被称为方法I，其中可吸收包覆用聚合物占被包覆被结合的一个或多个微粒总重量的30-50％。
方法I中的一个优选的方法，被称为方法J，其中肽是一种LHRH类似物。
方法J中的一个优选的方法，被称为方法K，其中LHRH类似物是p-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2。
方法I中的一个优选的方法，被称为方法L，其中肽是促生长素抑制素类似物。
方法L中的一个优选的方法，被称为方法M，其中促生长素抑制素类似物是H-β-D-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2，其中两个Cys残基由二硫键连接。
方法L中另一个优选的方法是其中促生长素抑制素类似物是N-羟乙基哌嗪基-乙酰基-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2，其中两个Cys残基由二硫键连接。
方法L中还有另一个优选的方法是其中促生长素抑制素类似物是N-羟乙基哌嗪基-乙磺酰基-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2，其中两个Cys残基由二硫键连接。
这里所使用的术语“可吸收”是指水溶性材料，如在生物环境中经受链离解作用生成水溶性副产物的聚合物。
这里所使用的术语“微粒”是指可吸收聚酯颗粒，它优选基本上呈球形。
这里所使用的术语“被结合微粒”是指带有以离子方式固定在微粒上的一种或多种肽和/或一种或多种蛋白的微粒。
这里所使用的术语“被包覆的微粒”是指带有聚合物包衣的被结合微粒，其中聚合物包衣不必是完全闭合的。
这里所使用的术语“聚合物芯”是微粒的另一种表述方式。
这里所使用的术语“包覆用聚合物”是指用于包覆被结合微粒的聚合物。
这里所使用的术语“成胶液态聚酯”是指如下的材料，它吸收溶剂(如水)，产生相变并能够可逆的变形地保持三维网结构。
本申请使用本领域的技术人员已知的三字母缩写来表示氨基酸，如Ala=丙氨酸。
在本发明的方法中使用的微粒是晶体并且由可吸收聚酯构成，如在各个链上有一个或多个羧基基团的聚乙交酯，它们在微粒的表面上和在微粒到配合物的紧接的次表面上生成足够高浓度的羧基基团，并以离子方式固定了带有一个或多个碱性基团的一种或多种肽和/或一种或多种蛋白。或者，聚乙交酯的羧基可以被酰胺化，例如用二胺，优选伯或仲胺或它们的混合物，其中的胺形成配合物，该配合物以离子方式将有一个或多个酸性基团的一种或多种肽和/或一种或多种蛋白固定。由于微粒的表面不必是均匀的，术语“次表面”是指在微粒表面上发现的缝隙和类似物。这种被结合微粒提供了一种给患者受控释放一种或多种肽和/或一种或多种蛋白的手段。为进一步控制被固定的肽和/或蛋白的释放，本发明的方法用可吸收包覆用聚合物单个或成组地包覆这些被结合微粒。该被结合微粒在为期约二天-约三个月，优选约一周-约三个月的时间里给患者释放肽和/蛋白。被包覆的微粒在为约三天-六个月，优选约二周-五个月的时间内给患者释放肽和/或蛋白。
能够固定或结合于在本发明中使用的微粒上的肽的典型例子包括，但不限于，促生长激素释放肽(GHRP)、促黄体素释放激素(LHRH)、促生长素抑制素、铃蟾肽、促胃液素释放肽(GRP)、降钙素、缓激肽、galanin、促黑激素(MSH)、促生长激素释放因子(GRF)、淀粉不溶素、速激肽、肠促胰液肽、甲状旁腺激素(PTH)、脑啡肽、内皮缩血管肽、促降钙素基因释放肽(CGRP)、神经调节肽、甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)、高血糖素、神经降压素、促肾上腺皮质激素(ACTH)、肽YY(PYY)、促高血糖素释放肽(GLP)、血管活性肠肽(VIP)、垂体腺苷酸环化酶活化肽(PACAP)、胃动素、物质P、神经肽Y(NPY)、TSH和它们的类似物和片段。能够固定或结合于在本发明中使用的微粒上的蛋白的例子有生长激素、红细胞生成素、粒性白细胞集落刺激因子、粒性白细胞-巨噬细胞集落刺激因子和干扰素。
微粒可以由基于丙交酯的聚合物或半晶体聚内酯如聚乙交酯构成，后者通过含酸的羟基引发剂如羟基乙酸、乳酸、苹果酸、酒石酸和柠檬酸的开环聚合反应形成。本发明中使用的一种微粒可以按照以下方法合成。在反应容器里将基于丙交酯的单体和/或内酯(如乙交酯)与酸引发剂(如酒石酸、苹果酸或柠檬酸)混合。将反应容器加温至约35-45℃，优选40℃，并置于真空下约20-60分钟，优选30分钟。将反应器的温度再升至105-115℃，优选110℃。一旦达到这一温度，将反应容器置于无氧的氮气氛中，并搅拌混合物。当混合物熔融时，加入催化量的适合开环聚合反应的有机金属催化剂，如在非质子溶剂如甲苯中的2-乙基-己酸亚锡溶液。再次置于真空下约30-90秒钟以除去甲苯而不大量除去单体。在进一步将温度升至约145-150℃之前，把混合物的温度升至约115-125℃，优选120℃约5-10分钟。在恒定机械搅拌下在此温度保持约3-5小时，优选4小时。
生成的聚合物用Knife-grinder(刀-磨机)通过初始研磨进行微粒化。然后将聚合物用加压的干燥氮气流在Aljet Micronizer中微粒化。平均颗粒直径的尺寸用体积分布模型和200/5 cS硅氧烷油作为分散剂在Malvern Mastersizer/E中进行分析。
将聚合物纯化并通过将微粒化的聚合物分散于丙酮中和将它置于声波粉碎器(sonicator)中，优选约30分钟，以形成它们的钠盐。在此期间，还将分散体用匀化器以约8000-24000rpm，优选9500rpm，进行匀化。在这种声波粉碎/匀化作用步骤之后将分散体用离心机以约3000-7000rpm，优选5000rpm，离心分离优选约30分钟。丢弃上层清液，将离心所得残饼在新丙酮中重新制成悬浮液，重复声波粉碎/匀化作用步骤。当完成第二次离心分离后，丢弃上层清液并在去离子水中将残饼再制成悬浮液。然后进行最后一步的声波/匀化步骤以去除任何存留的丙酮，将分散体再一次以约5000rpm的转速离心分离约30分钟。
将离心所得残饼用去离子水再次制成悬浮液并监视分散体的pH值。伴随搅拌加入足够量的弱碱溶液，如0.2M碳酸钠溶液，将pH值提高到约8-9之间。在用滤纸进行真空过滤之前将分散体搅拌约30分钟。所得滤饼再用去离子水清洗、冷冻并冷冻干燥。
纯化作用使用差示扫描量热法(DSC)监视，以约5℃-15℃/分钟，优选10℃/分钟的速率加热。
阴离子交换剂微粒如下制备：取阳离子交换剂微粒并将它在二胺的热稀释溶液(～80℃)中保温，优选的是，该二胺是在一种惰性气体如氩的气氛下的已知浓度的在二噁烷或THF中的伯胺或仲胺或伯胺与仲胺的混合物。在二噁烷或THF中二胺的浓度用酸度计测定。当反应实际停止发生时，将酰胺化的微粒通过过滤进行分离、用二噁烷或THF清洗并在减压下干燥。
按照下述方法能够将一种或多种肽和/或一种或多种蛋白固定在微粒上。将微粒的钠盐分散在这些肽和/或蛋白游离碱的水溶液中。在过滤出被结合微粒之前，伴随搅拌在室温将这些分散体保温约2小时。滤饼再用去离子水清洗、冷冻并冷冻干燥。试样然后用元素分析法分析氮，以确定被固定的一种或多种肽和/或一种或多种蛋白的量。
微粒的尺寸对本发明的微粒能够固定的肽和/或蛋白的量起一定的作用。微粒的尺寸越小，微粒体越具有更多的表面积，从而每个微粒体能够固定的肽和/或蛋白越多。如上所述，微粒的尺寸能够减小到微米或亚微米级。微粒直径能够在约0.5-100微米范围，优选1-15微米，更优选3-10微米范围。
可吸收包覆用聚合物可以是结晶或非结晶丙交酯/乙交酯共聚物、无定形的1-丙交酯/d,1-丙交酯共聚物、己内酯/乙交酯共聚物或三亚甲基碳酸酯/乙交酯共聚物，它们可溶于常规的有机溶剂中，如氯仿、二氯甲烷、丙酮、乙腈、乙酸乙酯和甲酸乙酯或它们的混合物。这类可吸收包覆用聚合物的非溶剂包括水、低沸点醇类和烃类或它们的混合物。可吸收包覆用聚合物可以通过交酯的催化开环聚合反应合成，或在链引发剂的存在下(如羟基聚羧酸)，通过环状单体的聚合合成，如ε-己内酯、对二噁烷酮(p-dioxanone)、三亚甲基碳酸酯、1,5-dioxepan-2-one或1,4-dioxepan-2-one。还有另外的方法涉及将有机聚羧酸与预成型的聚酯进行反应，在美国专利US5612052中作了公开，其内容引入本文作为参考。
对于被结合微粒的包覆，通过本发明的方法可以实现：该方法涉及超声超微粉碎机的使用，其中在可吸收包覆用聚合物溶液中的被结合微粒的分散体作为微滴被加入到冷却的非溶剂介质中(冷却的非溶剂介质是可吸收包覆用聚合物的非溶剂)。被结合微粒用丙交酯与乙交酯的可吸收包覆用共聚物利用固体微粒的凝结作用进行包覆，固体微粒在聚合物溶液中被包覆并通过超声超微粉碎机(喷雾器)输入到对于包覆用聚合物是非溶剂的液体介质中，不过这种非溶剂的液体介质却能够萃取在被包覆固体微粒周围的包覆用聚合物溶液的溶剂。喷雾器探头喷射的频率是约12-36kHz。优选所使用的探头能够达到34-36kHz的频率。探头能够产生的频率与其对本发明的方法的影响之间的关系是，更高的频率允许本发明的方法能够处理更粘的溶液并且在可吸收包覆用聚合物溶液中被结合微粒的分散体的流速也更高。取决于用于包覆微粒的聚合物溶液的浓度，在被包覆微粒中的原始被结合微粒的数目可以从1至几百之间变动，被包覆微粒平均直径范围为0.5-100微米。
下面的方法涉及通过喷雾作用制备被包覆的负载了肽和/或负载了蛋白(下文称之为负载了肽)的阳离子交换剂(CE)。将相关的包覆用共聚物溶于溶剂中，如乙腈、乙酸乙酯或甲酸乙酯。使用足够重量的这种溶液用于分散负载了肽的CE，使负载了肽的CE对包覆用共聚物的重量比在约30∶70至80∶20的范围内。分散作用通过高速匀化作用来获得。将负载了肽的阳离子交换剂分散在包覆用共聚物的乙腈或乙酸乙酯溶液中。包覆用聚合物在溶液中的浓度范围，对于乙酸乙酯为10-25％(重量/重量)而对于乙腈为12.5-30％(重量/重量)，这取决于所要求的颗粒性质(形态、尺寸、比表面积)。使用匀化器，如带有附加的分散工具的Ultra-turrax T25(IKA,Staufen，德国)来匀化溶液。10-号分散器用于1毫升至50毫升大小的批料，而25-号分散器用于50毫升至2.5升大小的批料。这些分散器的转速可以在8000-24000rpm范围内变动。这种匀化/分散步骤确保了负载了多肽的阳离子交换剂在包覆用聚合物溶液中均匀分散而无须使用声波或涡旋。将分散体以1-10毫升/分钟的流量注入可变频率超声雾化喷嘴中--所述频率能够从12kHz至36kHz变化--较高频率允许较高的流速同时保持粒子的特征。此后，分散体雾化进入收集洗涤槽(collecting sink)中，后者还容纳了至少1-10倍过量(与所使用的包覆用共聚物溶剂的体积比较)的介质如异丙醇或乙醇，介质处于室温下或用足量干冰颗粒(一般每升IPA 0.5-1千克)冷却，以使淤浆的温度在整个雾化作用中保持在-50℃和-80℃之间。将淤浆在300-700rpm搅拌，依其体积而定。对于乙腈或乙酸乙酯作为溶剂的情形，雾化的液滴一接触淤浆马上冻结。当雾化完成时，在真空过滤之前，全部分散体可以根据自己的情形在10℃和室温之间融化。滤饼用去离子水洗涤以除去过量非溶剂。得到的颗粒在d,1-丙交酯包覆用共聚物为主的情形中具有光滑的微粒外观；当包覆用共聚物以1-丙交酯为主要成分时它们看上去稍微起皱。
微粒离子交换剂的结合能力可以如下测量。例如，对于阳离子交换剂微粒，在预定量的微粒中有效的羧基用已知当量浓度的冷的稀碳酸钠水溶液中和。中和后的微粒经过滤分离出来并用冷去离子水彻底清洗然后用气流干燥。固体微粒然后在已知浓度的盐酸毛果芸香硷的稀溶液中保温以提供稍微过量的碱性药物(超过预定结合能力数据的量)。监视在含水介质中剩余的盐酸毛果芸香硷的浓度一段时间直到能够记录到的由微粒俘获的碱不明显变化时为止。在微粒上固定的碱的百分比从消耗数据确定然后通过氮元素分析进行校验。
阴离子交换剂(酰胺化的颗粒)的结合能力通过(1)氮元素分析和(2)结合萘普生的程度(通过使用HPLC测量从稀溶液除去萘普生的含量)测定。后者用已知浓度的稀氢氧化钠溶液释放被固定的萘普生来证实。
由本发明制备的被包覆的微粒可以经本领域的技术人员熟知的施药途径施药给患者，如非肠道给药或口服给药。优选作为粉剂或悬浮剂经鼻内途径给药，或作为吸入剂经肺系统给药。当经非肠道给药时优选作为在等渗的含水介质中或在不含水的可吸收成胶液体聚酯中的分散体给药。
施药给患者的按本发明的方法制备的被包覆微粒的有效剂量可以由就诊医师或兽医决定，并且取决于所预想的一种或多种肽和/或一种或多种蛋白合适的剂量和在微粒上固定的一种或多种肽和/或一种或多种蛋白的量。这些剂量或者是已知的，或者可以由本领域普通技术人员确定。
实施本发明的方案
实施例Ⅰ
以柠檬酸引发的用作阳离子交换剂(CE)的
聚(羟基乙酸)聚合物(PGCA)的制备、微粒化和纯化
实施例Ⅰ(a):7/1 PGCA-将242.63克乙交酯(Purac Biochem，Arkelsedijk，荷兰)和57.37克柠檬酸(Aldrich,Gillingham,Dorset,英国)装入500毫升玻璃反应器中。所用柠檬酸已经在Abderhalden装置(Aldrch,St.Louis,Missouri，美国)中用硅胶(Fisher Scientific,Loughborough，Leics,英国)进一步干燥过了。将反应器浸没在约40℃的油浴中并置于真空下(0.04毫巴)约30分钟。然后将浴槽降低并将其温度升至约110℃。当达到这一温度后将反应器置于无氧氮气氛中并再次浸入。使用Heidolph搅拌器(Heidolph Elektro GmbH,Kelheim,德国)以约100rpm转速搅拌内容物。在反应器内容物熔融时加入1.09毫升0.1M 2-乙基-己酸亚锡(Sigma,St.Louis,Missouri,美国)的甲苯(Riedel de-Haen,Seelze,德国)溶液(化学计量比为50ppm)。用液氮捕集器再施真空约30秒钟以除去甲苯而不明显除去单体。油浴温度在升至约150℃之前先升至约120℃约5分钟。在约100rpm恒定机械搅拌下保持150℃的温度约4小时。获得了标题聚合物。
实施例Ⅰ(b):10/1 PGCA-仿效实施例Ⅰa的方法制取标题聚合物，但使用257.40克乙交酯，42.60克柠檬酸和1.10毫升的0.1M 2-乙基-己酸亚锡甲苯溶液(化学计量比为50ppm)。
实施例Ⅰ(c):15/1 PGCA-将乙交酯(2.586摩尔，300克)、无水柠檬酸(0.172摩尔，33克)和辛酸亚锡(0.2 M甲苯溶液，862毫升，0.172毫摩尔)装入用火焰干燥过的装设有机械搅拌器和氩气进口的树脂反应釜中。该聚合反应器和其内容物用干氩气吹洗若干次。聚合反应物熔融后将反应物在约160℃加热并搅拌直到聚合物开始从熔融物中沉淀时为止。在部分沉淀后不久，终止搅拌而使反应继续在约160℃进行约2小时。在聚合反应终了时，将温度降至低于120℃并在减压下将过量单体除去。分离出的聚合物的组成用远红外和NMR光谱法查证。
微粒化-实施例Ⅰ(a)、Ⅰ(b)和Ⅰ(c)的每种聚合物先用Knife-grinder(IKA,Staufen，德国)磨碎。然后使用加压干氮气流在AljetMicronizer(Fluid Energy Aljet,Plumsteadsville,Pennsylvania,美国)中微粒化。使用体积分布模型和200/5 cS硅氧烷油(Dow Corning,Seneffe,比利时)作为分散剂在Malvern Mastersizer/E(Malvern,Worcs.,英国)中进行分析，实施例Ⅰ(a)的平均粒径为24.84微米。微粒化后，实施例Ⅰ(b)和Ⅰ(c)的平均粒径分别为4.69微米和6.31微米。
纯化/钠盐化-将批料为50克的实施例Ⅰ(a)、Ⅰ(b)和Ⅰ(c)分散在2升丙酮(Riedel de-Haen,Seelze，德国)中并置于声波粉碎器(BransonUltrasonics BV,Soest,荷兰)中约30分钟。在此期间分散体也用Ultra-turrax T25匀化器(IKA,Staufen,德国)以9500rpm的转速进行匀化。在这种声波粉碎/匀化作用步骤之后将分散体用Sorvall离心机(Sorvall,Wilmington,Delaware,美国)以约5000rpm的转速离心分离约30分钟。丢弃上层清液，将离心所得残饼在新丙酮中重新制成悬浮液，重复声波粉碎/匀化作用步骤。当完成第二次离心分离后，丢弃上层清液并在去离子水中将所得残饼再制成悬浮液。然后进行最后一步的声波/匀化步骤以去除任何存留的丙酮，将分散体再一次以约5000rpm的转速离心分离约30分钟。
将离心所得残饼用新鲜去离子水再次制成悬浮液并监视分散体的pH值。每次都加入(伴随搅拌)足够量的0.2M碳酸钠溶液，以便将pH值提高到约8-9之间。在用Whatman no.1(直径24厘米)滤纸进行真空过滤(Whatman Intl.Ltd.,Maidstone,Kent,英国)之前，将分散体搅拌约30分钟。将滤饼再用去离子水清洗、在Edwards SuperModulyo冷冻干燥机(Edwards,Crawley,West Sussex,英国)中冻结并冷冻干燥。
纯化作用使用差示扫描量热法(DSC)监视，使用TA DSC 912S(TAInstruments,New Castle,Delaware,美国)以约10℃/分钟的速率加热。每种情形得到的DSC热分析图都未显示单体乙交酯的任何吸热线峰值，但对于实施例Ⅰ(a)、Ⅰ(b)和Ⅰ(c)则分别在176℃、178℃和180℃显示出热吸收峰。
实施例Ⅱ
乙交酯/苹果酸共聚物PGMA阳离子交换剂微粒的制备
标题微粒按照实施例Ⅰ(c)所述的方法合成，但使用乙交酯(2.586摩尔，300克)、无水苹果酸(0.172摩尔，23克)和辛酸亚锡(0.2M甲苯溶液，862毫升，0.172毫摩尔)。使用差示扫描量热仪测定聚合物的熔融温度(Tm=206℃)。
使用Wiley磨，将固体聚合物粉碎得到约125微米的平均粒径。使用输入加压干氮气流的喷射磨进一步减小颗粒尺寸到约5-10微米。得到的微粒用丙酮洗涤以除去痕量的单体和低分子量低聚物。然后将产物在减压下在40℃干燥直到使用时为止。微粒的平均直径使用粒度分析仪测量。
实施例Ⅲ
以酒石酸引发的用作阳离子交换剂(CE)的聚(羟基乙酸)
聚合物(PGTA)的制各、微粒化和纯化
实施例Ⅲ(a):10/1 PGTA-将264.65克乙交酯(Purac Biochem,Arkelsedijk，荷兰)和34.22克L-酒石酸(Riedel de-Haen,Seelze,德国)装入500毫升玻璃反应器中。所用酒石酸已经在Abderhalden装置(Aldrch,St.Louis,MO)中用硅胶(Fisher Scientific,Loughborough,Leics,英国)进一步干燥过了。将反应器浸没在约40℃的油浴中并置于真空下(0.04毫巴)约30分钟。然后将浴槽降下并将其温度升至约110℃。当达到这一温度后将反应器置于无氧氮气氛中并再次浸入。使用Heidolph搅拌器(Heidolph Elektro GmbH,Kelheim，德国)以约100rpm转速搅拌内容物。在反应器内容物熔融时加入1.14毫升0.1M 2-乙基-己酸亚锡(Sigma,St.Louis,Missouri,美国)甲苯(Riedel de-Haen,Seelze，德国)溶液(化学计量比为50ppm)。用液氮捕集器再施真空约30秒钟以除去甲苯而不明显除去单体。在将油浴温度在升至约150℃之前先升至约120℃约5分钟。在约100rpm恒定机械搅拌下保持150℃温度约4小时。获得了标题聚合物。
微粒化-实施例Ⅲ(a)先用Knife-grinder(IKA,Staufen，德国)磨碎。然后使用加压干氮气流在Aljet Micronizer(Fluid Energy Aljet,Plumsteadsville,Pennsylvania,美国)中微粒化。使用体积分布模型和200/5 cS硅氧烷油(Dow Coming,Seneffe，比利时)作为分散剂用MalvemMastersizer/E(Malvem,Worcs.,英国)进行分析，平均粒径为12.42微米。
纯化/钠盐化-将批料为50克的实施例Ⅲ(a)分散在2升丙酮(Riedelde-Haen)中并置于声波粉碎器(Branson Ultrasonics BV,Soest,荷兰)中约30分钟。在此期间分散体也用Ultra-turrax T25匀化器(IKA,Staufen,德国)以9500rpm的转速进行匀化。在这种声波粉碎/匀化作用步骤之后将分散体用Sorvall离心机(Sorvall,Wilmington,Delaware，美国)以约5000rpm的转速离心分离约30分钟。丢弃上层清液，将离心所得残饼在新丙酮中重新制成悬浮液，重复声波粉碎/匀化作用步骤。当完成第二次离心分离后，丢弃上层清液并在去离子水中将所得残饼再制成悬浮液。然后进行最后一步的声波/匀化步骤以去除任何存留的丙酮，将分散体再一次以约5000rpm的转速离心分离约30分钟。
将离心所得残饼用新鲜去离子水再次制成悬浮液并监视分散体的pH值。加入足够量0.2M碳酸钠溶液，以便将pH值提高到约8-9之间。在用Whatman no.1(直径24厘米)滤纸(Whatman Intl.Ltd.,Maidstone,Kent，英国)进行真空过滤之前，将分散体搅拌约30分钟。滤饼再用去离子水清洗、冻结、在Edwards SuperModulyo冷冻干燥机(Edwards,Crawley,West Sussex,英国)中冷冻干燥。
纯化作用使用差示扫描量热法(DSC)监视，使用TA DSC 912S(TAInstruments,New Castle,Delaware，美国)以约10℃/分钟的速率加热。得到的DSC热分析图未显示单体乙交酯的任何吸热线峰值，但在181℃显示出热吸收峰。
实施例Ⅲ(b):15/1 PGTA-仿效实施例(Ⅰc)的方法制取标题聚合物，但使用乙交酯(2.586摩尔，300克)、无水酒石酸(0.172摩尔，26.8克)和辛酸亚锡(0.2M甲苯溶液，862毫升，0.172毫摩尔)。使用差示扫描量热仪测定聚合物的熔融温度(Tm=204℃)。
使用Wiley磨将固体聚合物粉碎得到约125微米的平均粒径。使用输入加压干氮气流的喷射磨进一步减小颗粒尺寸到约5-10微米。得到的微粒用丙酮洗涤以除去痕量的单体和低分子量低聚物。然后将产物在减压下在40℃干燥直到使用时为止。微粒的平均直径使用粒度分析仪测量。
实施例Ⅳ
聚乙交酯基微粒化阴离子交换剂(AE-1)的制备
阴离子交换剂的制备分两个步骤。第一，用与实施例Ⅰ(c)相似的方法制备低分子量聚乙交酯，但使用下述的聚合反应物料：乙交酯(1摩尔，116克)，作为引发剂的1,3-丙二醇(30毫摩尔，2.22克)和辛酸亚锡(0.03毫摩尔)。对聚合物随后进行的减小尺寸和纯化也与实施例Ⅰ(c)相同。第二步，将实际上的非离子微粒在二胺的热稀溶液(～80℃)中保温，例如在氩气氛下的在二噁烷中的已知浓度的己二胺中保温。在二噁烷中的二胺的浓度用酸度计测定。当反应实际停止发生时，将酰胺化的微粒通过过滤进行分离、用二噁烷清洗并在减压下干燥。所得阴离子交换剂(酰胺化的颗粒)的结合能力通过(1)氮元素分析和(2)结合萘普生的程度(通过使用HPLC测量从稀溶液除去药物的含量)测定。后者通过用已知浓度的稀氢氧化钠溶液释放被固定的萘普生来证实。
实施例Ⅴ
用作包覆用材料的由丙二醇引发的聚(丙交酯-共-乙交酯)共聚物(LPGPD)的制备
实施例Ⅴ(a):75/25 P(1)LGPD--将235.01克1-丙交酯(Purac Biochem,Arkelsedijk，荷兰)、63.09克乙交酯(Purac Biochem,Arkelsedijk，荷兰)和1.09克丙二醇(Riedel de-Haen,Seelze,德国)装入500毫升玻璃反应器中，然后加入3.96毫升0.1M 2-乙基-己酸亚锡(Sigma,St.Louis,Missouri,美国)甲苯(Riedel de-haen,Seelze,德国)溶液(化学计量比为200ppm)。在真空下干燥约一小时除去甲苯后，将反应器置于无氧氮气氛中并浸没在预热到约160℃的油浴中。用Heidolph搅拌器(Heidolph ElektroGmbH,Kelheim,德国)以约100rpm转速搅拌反应器内容物。一当内容物熔融，将温度升至约180℃并保持这一温度约3小时。得到无定形共聚物。在Waters 510泵上采用凝胶渗透色谱法(GPC)，在Wyatt Minidawn光散射探测器(Wyatt Technology Corporation,Santa Barbara,California,美国)上以光散射探测法，用Waters 410示差光折射计(Waters,Milford,Massachusetts，美国)，发现这种聚合物的分子量(MW)约为12500g/mol。
实施例Ⅴ(b):90/10 P(1)LGPD-标题聚合物按照实施例Ⅴ(a)的方法合成，但使用274.31克1-丙交酯，24.55克乙交酯、1.14克丙二醇和3.89毫升0.1M 2-乙基-己酸亚锡甲苯溶液(化学计量比为200ppm)。得到晶体共聚物。用GPC测定，发现所得共聚物的分子量为约20780g/mol。
实施例Ⅴ(c):90/10 P(d,1)LGPD-标题聚合物按照实施例Ⅴ(a)的方法合成，但使用274.31克d,1-丙交酯，24.55克乙交酯、1.14克丙二醇和3.86毫升0.1M 2-乙基-己酸亚锡甲苯溶液(化学计量比为200ppm)。得到无定形共聚物。用GPC测定，发现所得共聚物的分子量为约20650g/mol。
实施例Ⅴ(d):用作包覆用材料的由丙二醇引发的聚(1-丙交酯-共-d,1-丙交酯)共聚物，80/20 P(1)L(d,1)LPD
标题产物按照实施例Ⅴ(a)的方法获得，但使用239.09克1-丙交酯，59.77克d,1-丙交酯(Purac Biochem,Arkelsedijk，荷兰)、1.14克丙二醇和3.96毫升0.1M 2-乙基-己酸亚锡甲苯溶液(化学计量比为200ppm)。得到无定形共聚物。用GPC测定，发现所得共聚物的分子量(MW)为约22320g/mol。用DSC测量，其玻璃态转化在48℃。
纯化-实施例Ⅴ(a)、Ⅴ(b)和Ⅴ(c)每一种都通过30％(W/W)乙腈(Labscan,Dublin，爱尔兰)水溶液的雾化作用以8毫升/分钟的流量输入去离子水中，在6升有夹套的反应器中，将去离子水冷却到约2℃，与循环浴槽连接并用Heidolph搅拌器(Heidolhp Elektro GmbH,Kelheim,德国)以约350rpm的转速搅拌。溶液使用Masterflex泵(Cole ParmerInstrument Co.,Niles,Illinois,美国)输送至Vibra-Cell VC 50雾化喷嘴(Biobloek,Illkireh，法国)中而雾化作用通过使用12kHz声波频率获得。得到的分散体用Whatman No.1(直径24厘米)滤纸(Whatman Intl.Ltd.,Maidstone,Kent,英国)过滤，滤饼用去离子水清洗、冻结、在EdwardsSuperModulyo冷冻干燥机(Edwards,Crawley,West Sussex,英国)中冷冻干燥。
纯度通过差示扫描量热法(DSC)确定，使用TA DSC 912S(TAInstruments,New Castle,Delaware，美国)以约10℃/分钟的速率加热，显示出实施例Ⅴ(a)、Ⅴ(b)、Ⅴ(c)和Ⅴ(d)玻璃态转化温度(Tg)分别为44℃、49℃、45℃和48℃。
实施例Ⅵ
负载了肽的阳离子交换剂的制备
实施例Ⅵ(a):负载肽A(p-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2,LHRH的类似物)--将实施例Ⅰ(a)、Ⅰ(b)、Ⅰ(c)和Ⅱ(a)的钠盐各4克分散在溶解了1.33克肽A游离碱(Kinerton Ltd.,Dublin，爱尔兰)的70毫升去离子水的溶液中。将分散体在用9厘米直径的Whatman No.1滤纸(Whatman Intl.Ltd.,Maidstone,Kent，英国)过滤之前，在室温下伴随搅拌保温2小时。滤饼再用去离子水清洗、冻结、在EdwardsSuperModulyo冷冻干燥机(Edwards,Crawley，West Sussex，英国)中冷冻干燥。然后通过元素分析分析试样中的氮，以测量被结合的肽A的量。得到以下的结果：
实施例 CE实施例-＃ CE聚合物 被结合的肽A重量％
    Ⅵ(a)(ⅰ)     Ⅰ(a) 7/1 PGCA     24.52
    Ⅵ(a)(ⅱ)     Ⅰ(b) 10/1 PGCA     12.60
    Ⅵ(a)(ⅲ)     Ⅰ(c) 15/1 PGCA     19.29
    Ⅵ(a)(ⅵ)     Ⅲ(a) 10/1 PGTA     17.60
实施例Ⅵ(b)：负载肽B(H-β-D-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2，其中两个Cys由二硫键连接，促生长素抑制素的类似物--按照实施例Ⅵ(b)的方法，使用实施例Ⅰ(a)、Ⅰ(b)、Ⅰ(c)和Ⅱ(a)的钠盐各4克和1.33克肽B游离碱(Kinerton Ltd.,Dublin，爱尔兰)，得到肽B固定在其上的实施例Ⅰ(a)、Ⅰ(b)和Ⅰ(c)的被结合微粒。然后通过元素分析分析试样中的氮，以测量被结合的肽B的量。得到以下的结果：
实施例 CE实施例-＃ CE聚合物 被结合的肽A重量％
Ⅵ(b)(ⅰ)     Ⅰ(a) 7/1 PGCA     25.20
 Ⅵ(b)(ⅱ)     Ⅰ(b) 10/1 PGCA     13.10
 Ⅵ(b)(ⅲ)     Ⅰ(c) 15/1 PGCA     19.64
 Ⅵ(b)(ⅵ)     Ⅲ(a) 10/1 PGTA     14.23
实施例Ⅶ
通过雾化作用制备被包覆的负载了多肽的阳离子交换剂
如下所述，将负载了多肽的阳离子交换剂分散于包覆用聚合物的乙腈(Labscan,Dublin，爱尔兰)溶液中。该分散是通过Ultra-turraxT25(IKA,Staufen，德国)以转速约9500rpm匀化约5分钟获得。包覆用共聚物/乙腈溶液的浓度范围为12.5％-25％(重量/重量)，而包覆用共聚物与负载了多肽的阳离子交换剂之比的范围为1∶1-1.3∶1(重量)。
分散之后，将分散体使用陶瓷活塞泵(FMI,Oyster Bay,N.Y.,美国)以2毫升/分钟的流量输送至具有16kHz声波频率的Vibra-Cell VC 50雾化喷嘴(Bioblock,Illkirch，法国)。一旦到达喷嘴，分散体即被雾化进入由附加的干冰颗粒(A.I.G.,Dublin，爱尔兰)冷却到约-80℃的异丙醇(IPA)(Labscan,Dublin爱尔兰)中。IPA起收集非溶剂的作用并用Heidolph搅拌器(Heidolph Elektro GmbH,Kelheim,德国)以约300rpm转速搅拌。一旦雾化完成，将全部分散体在10℃和室温之间的温度下解冻。被包覆的微粒通过真空过滤在Whatman No.1滤纸(Whatman Intl.Ltd.,Maidstone，Kent，英国)上回收。滤饼用去离子水清洗、冻结、在Edwards SuperModulyo冷冻干燥机(Edwards,Crawley,West Sussex,英国)中冷冻干燥。得到的被包覆微粒使用Malvern Mastersizer/E(Malvern Wores.,英国)和1％吐温-20水分散剂进行粒度分析。被包覆微粒也通过元素分析分析氮含量以确定肽含量。下表列出了各个包覆实验：
实验＃ 负载了肽的CE：实验＃ 包覆用共聚物实验＃ 乙腈中包覆用共聚物的浓度 包覆用共聚物：负载了肽的CE 平均粒径(微米) 负载肽重量％
 Ⅶ(a) Ⅵ(a)(ⅱ) Ⅴ(a) 24.31％     1∶1     122.14  5.38％肽A
 Ⅶ(b) Ⅵ(a)(ⅱ) Ⅴ(b) 22.41％     1∶1     120.15  6.38％肽A
 Ⅶ(c) Ⅵ(a)(ⅲ) Ⅴ(b) 12.5％     1∶1     79.30  7.76％肽A
 Ⅶ(d) Ⅵ(a)(ⅲ) Ⅴ(c) 12.5％     1∶1     77.85  8.93％肽A
 Ⅶ(e) Ⅵ(a)(ⅳ) Ⅴ(c) 14.95％     1∶1     136.74  8.75％肽A
 Ⅶ(f) Ⅵ(a)(ⅰ) Ⅴ(c) 14.92％     1.27∶1     80.59  10.31％肽A
 Ⅶ(g) Ⅵ(b)(ⅱ) Ⅴ(a) 25.37％     1∶1     140.58  2.63％肽B
 Ⅶ(h) Ⅵ(b)(ⅱ) Ⅴ(b) 20％     1.15∶1     96.77  5.98％肽B
 Ⅶ(i) Ⅵ(b)(ⅲ) Ⅴ(b) 12.5％     1∶1     102.56  7.69％肽B
 Ⅶ(j) Ⅵ(b)(ⅲ) Ⅴ(c) 12.5％     1∶1     83.72  7.90％肽B
 Ⅶ(k) Ⅵ(b)(ⅳ) Ⅴ(c) 14.95％     1∶1     135.14  6.69％肽B
 Ⅶ(l) Ⅵ(b)(ⅰ) Ⅴ(c) 14.92％     1.26∶1     123.18  10.11％肽B
在体内和/或体外实验之前将全部试样过180微米的筛子(Bioblock,Illkirch,法国)
被结合微粒或被包覆微粒可以通过下述方法在体外实验以评估被结合肽或被结合蛋白的释放速度。约50毫克重量的被结合微粒或被包覆微粒的等分试样被放置在连续流式池装置(continuous flow-cellsystem)中，用pH值约7.2、温度约37℃的磷酸盐缓冲溶液以约45毫升/小时的流量穿流过全部的被结合微粒或被包覆微粒。含有释放出来的药物的缓冲液试样在4℃被收集并且以1-或2-天的间隔分析肽和/或蛋白的浓度。每一种微粒的释放曲线以2周为周期进行测量。
被结合微粒或被包覆微粒可以通过下述方法在体内系统里进行实验以评估被结合肽或被结合蛋白的释放速度。试样通过对雄性Wistar大鼠(Bioresources,Trinity College,Dublin，爱尔兰)大腿肌注施药。悬浮体介质由3％羧甲基纤维素和1％吐温-20盐水溶液构成。对于负载了肽A的试样，有效等价剂量是40微克/千克/天。对于负载了肽B的试样，该剂量是1毫克/千克/天。试样经心脏穿刺术取得而血浆肽浓度通过肽A和肽B特异性放射免疫测定法(RIA)监视。对于负载了肽A的试样(肽A是LHRH类似物)，还使用睾酮RIA以监视睾酮抑制。作为悬浮体介质可代替的方案，在某些情况下可以使用成胶物(gel-former)。结果列于下表A和B中。
表A
肽A实施例 肽A(＞150pg/ml)天数 睾酮(＜1ng/ml)天数
    Ⅶ(a)     20     21
    Ⅶ(b)     10     10
    Ⅶ(c)     2     11
    Ⅶ(d)     2     11
    Ⅶ(e)     2     13
    Ⅶ(f)     2     16
 Ⅶ(a)，用成胶物     25     44
表B
    肽B实施例 肽B(＞1000pg/ml)天数
    Ⅶ(g)     未测
    Ⅶ(h)     未测
    Ⅶ(i)     未测
    Ⅶ(j)     15
    Ⅶ(k)     10
    Ⅶ(l)     10
实施例Ⅷ
Ⅷ(a)：使用乙腈作为溶剂和室温的IPA作为非溶剂的雾化
将1.06克实施例Ⅰ(c)制得的阳离子交换剂(没有结合多肽)分散于25.24％(重量/重量)实施例Ⅴ(a)的包覆用共聚物乙腈(Labscan,Dublin,爱尔兰)溶液中，使阳离子交换剂与包覆用共聚物的比列为约1.03∶1(重量)。这种分散是通过Ultra-turrax T25(IKA,Staufen，德国)以转速约9500rpm匀化约5分钟获得的。
分散之后，将分散体使用陶瓷活塞泵(FMI,Oyster Bay,N.Y.,美国)以2毫升/分钟的流量输送至具有16kHz声波频率的Vibra-Cell VC 50雾化喷嘴(Biobloek,Illkirch，法国)。一旦到达喷嘴，分散体即被雾化进入室温(17-22℃)的异丙醇(IPA)(Labscan,Dublin，爱尔兰)中。这种IPA起收集非溶剂的作用并用Heidolph搅拌器(Heidolph Elektro GmbH,Kelheim,德国)以约300rpm转速搅拌。雾化完成后将分散体在室温搅拌另外60分钟，然后通过真空过滤在Whatman No.1滤纸(Whatman Intl.Ltd.,Maidstone,Kent,英国)上回收被包覆的颗粒。滤饼用去离子水清洗、冻结、在Edwards SuperModulyo冷冻干燥机(Edwards,Crawley,West Sussex,英国)中冷冻干燥。得到的颗粒使用Malvem Mastersizer/E(Malvern Worcs.,英国)和1％吐温-20水分散剂进行粒度分析。生成的颗粒平均粒度(d(0.5))是84.75微米。
Ⅷ(b)：使用乙酸乙酯作为溶剂和室温的IPA作为非溶剂的雾化
雾化基本上按照Ⅷ(a)的方法进行，但使用分散于24.88％(重量/重量)实施例Ⅴ(a)的包覆用共聚物乙酸乙酯(Riedel-de Haen,Seelze，德国)溶液中的约0.99克实施例Ⅰ(c)的阳离子交换剂(没有结合多肽)，使阳离子交换剂与包覆用共聚物的比列为约0.96∶1(重量)。生成的颗粒的平均粒度(d(0.5))是100.56微米。
Ⅷ(c)：使用乙酸乙酯作为溶剂和高频探头的雾化
将约1.02克实施例Ⅰ(c)的阳离子交换剂(没有结合多肽)分散于15.14％(重量/重量)实施例Ⅴ(a)的包覆用共聚物的乙酸乙酯(Riedel-deHaen)溶液中，使阳离子交换剂与包覆用共聚物的比列为约1.05∶1(重量)。这种分散是通过Ultra-turrax T25(IKA,Staufen，德国)以转速约9500rpm匀化约5分钟获得。
分散之后，将分散体使用陶瓷活塞泵装置(FMI,Oyster Bay,N.Y.,美国)以5毫升/分钟的流量输送至超声频率设定在约34.6kHz的MartinWalter 400 GSIP雾化器(Sodeva,Le Bouget du Lac，法国)中。一旦到达喷嘴，分散体即被雾化进入由附加的干冰颗粒(A.I.G.,Dublin，爱尔兰)冷却到约-77℃的IPA(Labscan,Dublin，爱尔兰)中。这种IPA起收集非溶剂的作用并用Heidolph搅拌器(Heidolph Elektro GmbH,Kelheim,德国)以约300rpm转速搅拌。一旦雾化完成，将包覆的颗粒通过真空过滤在Whatman No.1滤纸(Whatman Intl.Ltd.Maidstone,Kent,英国)上回收。滤饼用去离子水清洗、冻结、在Edwards SuperModulyo冷冻干燥机(Edwards,Crawley,West Sussex,英国)中冷冻干燥。得到的颗粒使用Malvern Mastersizer/E(Malvern Worcs.,英国)和1％吐温-20水分散剂进行粒度分析。生成的颗粒的平均粒度(d(0.5))是95.69微米。
实施例Ⅸ
结合到CE上并随后包覆促生长素抑制素类似物肽C和D
Ⅸ(a)：负载肽C
将约1.01克实施例Ⅰ(c)的钠盐分散于含有的0.25克肽C游离碱溶于40毫升去离子水的溶液中，肽C具有N-羟乙基哌嗪基-乙酰基-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2结构，其中两个Cys残基由二硫键连接(Kinerton Ltd.,Dublin，爱尔兰)。在用9直径厘米Whatman No.1滤纸(Whatman Intl.Ltd.,Maidstone,Kent，英国)过滤之前，将分散体伴随搅拌进行保温2小时。滤饼用另外的去离子水清洗、冻结、在EdwardsSuperModulyo冷冻干燥机(Edwards,Crawley,West Sussex，英国)中冷冻干燥。然后将试样送去进行氮分析以确定被结合的肽的量，为20.21％。
Ⅸ(b)：负载肽D
应用实施例Ⅸ(a)的方法但使用约2.04克实施例Ⅰ(c)的钠盐，后者被分散于含有0.51克肽D游离碱溶于80毫升去离子水中的溶液中，肽D具有N-羟乙基哌嗪基-乙磺酰基-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2结构，其中两个Cys残基由二硫键连接(Kinerton Ltd.,Dublin，爱尔兰)。将试样然后送去进行氮分析以确定被结合的肽的量，为19.53％。
实施例Ⅹ
将实施例Ⅸ(a)和Ⅸ(b)的被结合的微粒按照实施例Ⅶ所述进行包覆，得到以下的结果：
实施例序号 负载了肽的CE 包覆用共聚物 包覆用共聚物在乙腈中的浓度(重量/重量) 包覆用共聚物：负载了肽的CE 平均粒度(微米) 肽负载量(重量)％
Ⅹ(a) Ⅸ(a) Ⅴ(c)     12.51％     1∶1  83.33  9.48％
Ⅹ(b) Ⅸ(b) Ⅴ(c)     12.48％     0.98∶1  72.15  8.87％
Ⅹ(c) Ⅸ(b) Ⅴ(d)     12.35％     0.98∶1  86.03  6.74％

Claims (16)

1．制备被包覆被结合的一个微粒或多个微粒的方法，其中所述被包覆被结合的一个微粒或多个微粒含有被结合的一个微粒或多个微粒和可吸收的包覆用聚合物，其中
被结合的一个微粒或多个微粒含有可吸收的杂链聚合物芯和一种或多种肽、一种或多种蛋白或它们的混合物，该混合物固定在上述可吸收的杂链聚合物芯上，每种肽独立地选自促生长激素释放肽(GHRP)、促黄体素释放激素(LHRH)、促生长素抑制素、铃蟾肽、促胃液素释放肽(GRP)、降钙素、缓激肽、galanin、促黑素(MSH)、促生长激素释放因子(GRF)、淀粉不溶素、速激肽、肠促胰液肽、甲状旁腺激素(PTH)、脑啡肽、内皮缩血管肽、促降钙素基因释放肽(CGRP)、神经调节肽、甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)、高血糖素、神经降压素、促肾上腺皮质激素(ACTH)、肽YY(PYY)、促高血糖素释放肽(GLP)、血管活性肠肽(VIP)、垂体腺苷酸环化酶活化肽(PACAP)、胃动素、物质P、神经肽Y(NPY)、TSH和它们的类似物、片段或它们的可药用的盐；其中每种蛋白独立地选自生长激素、红细胞生成素、粒性白细胞集落刺激因子、粒性白细胞-巨噬细胞集落刺激因子和干扰素；
上述方法包括以下步骤：
通过将被结合固体微粒匀化并同时将之分散到一种可吸收包覆用聚合物溶液中来制取一种分散体，该分散体含有在可吸收包覆用聚合物的溶液中的上述被结合固体微粒；和
通过雾化探头将上述分散体在一种介质中雾化，其中所述探头的工作超声频率范围是12-36kHz，这里的介质是上述可吸收包覆用聚合物的非溶剂，流速约为1-15毫升/分钟。
2．权利要求1的方法，其中所述介质包括异丙醇和乙醇。
3．权利要求2的方法，其中所述可吸收聚合物的溶液含有约5％-30％的可吸收聚合物，并且所述介质的温度为从室温至约-80℃。
4．权利要求1的方法，其中所述被结合微粒中的一种肽或多种肽、一种蛋白或多种蛋白或它们的混合物占该被结合微粒总重量的0.1％-30％。
5．权利要求4的方法，其中可吸收聚合物芯含有羟乙酸酯单元和柠檬酸残基，其中羟乙酸酯单元与柠檬酸残基之比是约7-1到约20-1；或含有羟乙酸酯单元和酒石酸残基，其中羟乙酸酯单元与酒石酸残基之比是约7-1到约20-1；或含有羟乙酸酯单元和马来酸残基，其中羟乙酸酯单元和马来酸残基之比是约7-1到约20-1。
6．权利要求5的方法，其中可吸收包覆用聚合物含有
(a)1-丙交酯基单元和乙交酯基单元，其中1-丙交酯基单元和乙交酯基单元之比为约60-40到约90-10，
(b)d,1-丙交酯基单元和乙交酯基单元，其中d,1-丙交酯基单元和乙交酯基单元之比为约60-40到约90-10，
(c)d,1-丙交酯基单元，或
(d)1-丙交酯基单元和d,1-丙交酯基单元，其中1-丙交酯基单元与d,1-丙交酯基单元之比为约80-20。
7．权利要求6的方法，其中可吸收包覆用聚合物占被包覆被结合的一个或多个微粒总重量的5-70％。
8．权利要求7的方法，其中可吸收包覆用聚合物占被包覆被结合的一个或多个微粒总重量的20-60％。
9．权利要求8的方法，其中可吸收包覆用聚合物占被包覆被结合的一个或多个微粒总重量的30-50％。
10．权利要求9的方法，其中肽是一种LHRH类似物。
11．权利要求10的方法，其中LHRH类似物是p-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2。
12．权利要求9的方法，其中肽是促生长素抑制素类似物。
13．权利要求12的方法，其中促生长素抑制素类似物是H-β-D-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2，其中两个Cys残基由二硫键连接。
14．权利要求12的方法，其中促生长素抑制素类似物是N-羟乙基哌嗪基-乙酰基-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2，其中两个Cys残基由二硫键连接。
15．权利要求12的方法，其中促生长素抑制素类似物是N-羟乙基哌嗪基-乙磺酰基-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2，其中两个Cys残基由二硫键连接。
16．权利要求1的方法，用于制备被包覆被结合一个微粒或多个微粒，该方法基本上如本说明书和权利要求所述和说明。
CN99802448A 1998-01-29 1999-01-25 制备可吸收微粒的方法 Pending CN1289255A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
IE980054 1998-01-29
IE980054 1998-01-29

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN1289255A true CN1289255A (zh) 2001-03-28

Family

ID=11041696

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN99802448A Pending CN1289255A (zh) 1998-01-29 1999-01-25 制备可吸收微粒的方法

Country Status (17)

Country Link
US (1) US6555156B1 (zh)
EP (1) EP1051194B9 (zh)
JP (1) JP2002501907A (zh)
CN (1) CN1289255A (zh)
AR (1) AR014069A1 (zh)
AT (1) ATE240121T1 (zh)
AU (1) AU740493B2 (zh)
CA (1) CA2318513A1 (zh)
DE (1) DE69907870T2 (zh)
DK (1) DK1051194T3 (zh)
ES (1) ES2194437T3 (zh)
HU (1) HUP0102373A2 (zh)
IL (1) IL137349A0 (zh)
NO (1) NO20003804L (zh)
PL (1) PL342135A1 (zh)
PT (1) PT1051194E (zh)
WO (1) WO1999038535A1 (zh)

Families Citing this family (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6413539B1 (en) * 1996-10-31 2002-07-02 Poly-Med, Inc. Hydrogel-forming, self-solvating absorbable polyester copolymers, and methods for use thereof
US6861053B1 (en) 1999-08-11 2005-03-01 Cedars-Sinai Medical Center Methods of diagnosing or treating irritable bowel syndrome and other disorders caused by small intestinal bacterial overgrowth
US7048906B2 (en) 1995-05-17 2006-05-23 Cedars-Sinai Medical Center Methods of diagnosing and treating small intestinal bacterial overgrowth (SIBO) and SIBO-related conditions
IES990700A2 (en) 1999-08-18 2001-08-22 Kinerton Ltd Process to make a sustained release formulation
US6756480B2 (en) 2000-04-27 2004-06-29 Amgen Inc. Modulators of receptors for parathyroid hormone and parathyroid hormone-related protein
US7186692B2 (en) 2002-12-17 2007-03-06 Nastech Pharmaceutical Company Inc. Compositions and methods for enhanced mucosal delivery and non-infused administration of Y2 receptor-binding peptides and methods for treating and preventing obesity
US7229966B2 (en) 2002-12-17 2007-06-12 Nastech Pharmaceutical Company Inc. Compositions and methods for enhanced mucosal delivery of Y2 receptor-binding peptides and methods for treating and preventing obesity
AU2003299722A1 (en) 2002-12-17 2004-07-14 Mdrna, Inc. Compositions and methods for enhanced mucosal delivery of y2 receptor-binding peptides and methods for treating and preventing obesity
US7166575B2 (en) 2002-12-17 2007-01-23 Nastech Pharmaceutical Company Inc. Compositions and methods for enhanced mucosal delivery of peptide YY and methods for treating and preventing obesity
CA2552757A1 (en) * 2004-01-13 2005-08-04 Vasogenix Pharmaceuticals, Inc. Methods of using cgrp for cardiovascular and renal indications
CA2552758A1 (en) * 2004-01-13 2005-08-04 Vasogenix Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating acute myocardial infarction by administering calcitonin gene related peptide and compositions containing the same
WO2005067890A2 (en) * 2004-01-13 2005-07-28 Vasogenix Pharmaceuticals, Inc. Controlled release cgrp delivery composition for cardiovascular and renal indications
US7578951B2 (en) * 2004-01-27 2009-08-25 Hewlett-Packard Development Company, L.P. Method of making microcapsules utilizing a fluid ejector
EP1802315A2 (en) 2004-10-19 2007-07-04 Achillion Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy for treating viral infections
FR2880272A1 (fr) * 2005-01-04 2006-07-07 Jean Marc Ruiz Preparation contenant des microparticules d'un sel de polymere insoluble portant un principe actif, ainsi que son procede de fabrication
CA2677045C (en) 2007-01-31 2016-10-18 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Stabilized p53 peptides and uses thereof
AU2008232709C1 (en) 2007-03-28 2015-01-15 President And Fellows Of Harvard College Stitched polypeptides
CA2730760A1 (en) * 2008-07-16 2010-01-21 Surmodics Pharmaceuticals, Inc. Process for preparing microparticles containing bioactive peptides
US8968787B2 (en) * 2010-05-24 2015-03-03 Micro Powders, Inc. Composition comprising biodegradable polymers for use in a cosmetic composition
SI2603600T1 (sl) 2010-08-13 2019-04-30 Aileron Therapeutics, Inc. Peptidomimetični makrocikli
DE102011114864A1 (de) 2011-10-05 2013-04-11 Acino Ag Verfahren zur Herstellung einer homogenen Pulvermischung und Verfahren zur Herstellung eines Implantats sowie Implantat
TWI643868B (zh) 2011-10-18 2018-12-11 艾利倫治療公司 擬肽巨環化合物
KR102112373B1 (ko) 2012-02-15 2020-05-18 에일러론 테라퓨틱스 인코포레이티드 펩티드모방체 마크로사이클
US8987414B2 (en) 2012-02-15 2015-03-24 Aileron Therapeutics, Inc. Triazole-crosslinked and thioether-crosslinked peptidomimetic macrocycles
AU2013337388B2 (en) 2012-11-01 2018-08-02 Aileron Therapeutics, Inc. Disubstituted amino acids and methods of preparation and use thereof
WO2016049359A1 (en) 2014-09-24 2016-03-31 Aileron Therapeutics, Inc. Peptidomimetic macrocycles and uses thereof
MX2017011834A (es) 2015-03-20 2018-04-11 Aileron Therapeutics Inc Macrociclos peptidomimeticos y usos de los mismos.
US10953103B2 (en) 2015-11-06 2021-03-23 Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V Composition comprising a biocompatible and biodegradable polymer, nanocarriers and a drug and methods of making and using the same

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IE52535B1 (en) 1981-02-16 1987-12-09 Ici Plc Continuous release pharmaceutical compositions
US5385738A (en) 1983-10-14 1995-01-31 Sumitomo Pharmaceuticals Company, Ltd. Sustained-release injection
EP0230654B1 (en) 1985-12-28 1992-03-18 Sumitomo Pharmaceuticals Company, Limited Sustained pulsewise release pharmaceutical preparation
US4938763B1 (en) 1988-10-03 1995-07-04 Atrix Lab Inc Biodegradable in-situ forming implants and method of producing the same
US5077049A (en) 1989-07-24 1991-12-31 Vipont Pharmaceutical, Inc. Biodegradable system for regenerating the periodontium
CA2046830C (en) 1990-07-19 1999-12-14 Patrick P. Deluca Drug delivery system involving inter-action between protein or polypeptide and hydrophobic biodegradable polymer
JPH07503700A (ja) * 1991-01-03 1995-04-20 アルカーメス　コントロールド　セラピューティックス，　インコーポレイテッド カチオン生体ポリマーによるタンパク質の安定化
US5366756A (en) 1992-06-15 1994-11-22 United States Surgical Corporation Method for treating bioabsorbable implant material
US5672659A (en) 1993-01-06 1997-09-30 Kinerton Limited Ionic molecular conjugates of biodegradable polyesters and bioactive polypeptides
EP0712421A1 (en) * 1993-07-23 1996-05-22 Massachusetts Institute Of Technology Nanoparticles and microparticles of non-linear hydrophilic-hydrophobic multiblock copolymers
US5612052A (en) 1995-04-13 1997-03-18 Poly-Med, Inc. Hydrogel-forming, self-solvating absorbable polyester copolymers, and methods for use thereof
US5665702A (en) 1995-06-06 1997-09-09 Biomeasure Incorporated Ionic molecular conjugates of N-acylated derivatives of poly(2-amino-2-deoxy-D-glucose) and polypeptides
US5874029A (en) * 1996-10-09 1999-02-23 The University Of Kansas Methods for particle micronization and nanonization by recrystallization from organic solutions sprayed into a compressed antisolvent
US6270700B1 (en) * 1998-07-23 2001-08-07 Societe De Conseils De Recherches Et D'applications Scientifiques, Sas Encapsulation of water soluble peptides

Also Published As

Publication number Publication date
EP1051194B9 (en) 2003-11-05
DK1051194T3 (da) 2003-09-01
EP1051194B1 (en) 2003-05-14
ES2194437T3 (es) 2003-11-16
JP2002501907A (ja) 2002-01-22
WO1999038535A1 (en) 1999-08-05
PT1051194E (pt) 2003-09-30
AR014069A1 (es) 2001-01-31
AU740493B2 (en) 2001-11-08
DE69907870T2 (de) 2004-03-04
IL137349A0 (en) 2001-07-24
NO20003804L (no) 2000-09-20
NO20003804D0 (no) 2000-07-25
US6555156B1 (en) 2003-04-29
PL342135A1 (en) 2001-05-21
DE69907870D1 (de) 2003-06-18
ATE240121T1 (de) 2003-05-15
EP1051194A1 (en) 2000-11-15
CA2318513A1 (en) 1999-08-05
AU2296699A (en) 1999-08-16
HUP0102373A2 (hu) 2001-10-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN1289255A (zh) 制备可吸收微粒的方法
JP3842042B2 (ja) 吸収可能なマイクロ粒子
CN1186012C (zh) 持续释放离子结合物
CZ292449B6 (cs) Farmaceutická kompozice a způsob její přípravy
CN101637454B (zh) 一种重组人骨形态发生蛋白-2壳聚糖微球及其制备方法
CN103269689A (zh) 含有生理活性肽的微粒及其制备方法和包括该微粒的药物组合物
RU2211694C1 (ru) Способ получения состава с замедленным высвобождением активного ингредиента
CZ20002654A3 (cs) Absorbovatelné mikročástice
CZ20002640A3 (cs) Způsob výroby absorbovatelných mikročástic

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication