CN1282339A - 抗α2－巨球蛋白单克隆抗体及其在检测葡聚糖中的应用 - Google Patents

抗α2－巨球蛋白单克隆抗体及其在检测葡聚糖中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及与属α2－巨球蛋白特异结合的单克隆抗体。在内毒素而不是葡聚糖存在下,优选的单克隆抗体抑制鲎属阿米巴状细胞裂解物,酸促活化形成凝胶块或裂解显色底物。单克隆抗体尤其可以应用于纯化鲎属α2－巨球蛋白,并且优选的抗体用于使用一种阿米巴状细胞裂解物特异性地检测测试样中的葡聚糖的方法中。

Description

抗α2-巨球蛋白单克隆抗体及其在检测葡聚糖中的应用
发明的技术领域
本发明涉及葡聚糖检测领域。更具体地说，本发明涉及用鲎属阿米巴状细胞裂解物葡聚糖。
发明背景
鲎属阿米巴状细胞裂解物通过两种酶途径完成凝胶块(凝胶)的形成。这些酶途径包含一系列在存在内毒素或葡聚糖时被激活的丝氨蛋白酶，得益于这种活性，阿米巴状细胞裂解物被广泛应用分析以检测内毒素的存在。例如在水及生物测试样本中。
然而，由于对内毒素的存在比对葡聚糖更敏感。因此，现有技术不能开发出一种成功的用阿米巴状细胞裂解物(LAL)分析葡聚糖的方法。当试图用阿米巴状细胞裂解物检测葡聚糖时，检测样中仅仅小量存在的内毒素就可以导致假阳性结果。因此，在本领域中仍需要一种能用于特异性地检测测试样品中的葡聚糖的方法。
发明概述
本发明的目的之一是提供一种分离，纯化的单克隆抗体。
本发明另一个目的是提供一种能够产生与鲎属α2-巨球蛋白特异结合的单克隆抗体的杂交瘤细胞。
本发明的另一个目的是提供一种用于纯化鲎属α2-巨球蛋白的固体底物。
本发明的另一个目的是提供一种纯化鲎属α2-巨球蛋白的方法。
本发明的另一个目的是提供一种特异性地检测测试样品中的葡聚糖的方法及试剂。
本发明的另一个目的是提供一种特异性地检测测试样品中的葡聚糖的试剂盒。
本发明的这些及其它目的通过一个或多个下述的实施方案来提供。
本发明的一个实施方案提供特异性地结合于鲎属α2-巨球蛋白的分离，纯化的单克隆抗体。
本发明的另一个实施方案提供一种产生与鲎属α2-巨球蛋白特异性结合的单克隆抗体的杂交瘤细胞。
本发明的另一个实施方案提供一种用于纯化鲎属α2-巨球蛋白的固体底物。此固体底物包含一种与鲎属α2-巨球蛋白特异性结合的单克隆抗体。
本发明的另一个实施方案提供一种特异性地检测测试样品的葡聚糖的试剂。该试剂包括一种阿米巴状细胞裂解物和一种与鲎属α2-巨球蛋白特异性结合的单克隆抗体。在内毒素而不是葡聚糖存在下，向阿米巴状细胞裂解物中加入单克隆抗体抑制阿米巴状细胞裂解物的酶促活化。
本发明的另一个实施方案提供一种特异性的检测测试样品中的葡聚糖的方法。将阿米巴状细胞裂解物与特异性地结合于鲎属α2-巨球蛋白的单克隆抗体接触。在内毒素存在下，向阿米巴状细胞裂解物中加入该单克隆抗体抑制阿米巴状细胞裂解物的酶促活化。然后，将阿米巴状细胞裂解物与测试样品接触，阿米巴状细胞裂解物的酶促活化指示测试样品中葡聚糖的存在。
本发明的另一个具体实施方案提供一种纯化鲎属α2-巨球蛋白的方法。将包含特异性地结合于鲎属α2-巨球蛋白的单克隆抗体的固体底物与阿米巴状细胞裂解物在下面的条件下接触，其中单克隆抗体可逆地结合于鲎属阿米巴状细胞裂解物中的α2-巨球蛋白。从固体底物上去除不与单克隆抗体特异性结合的蛋白质，而后鲎属α2-巨球蛋白从单克隆抗体上释放出来。在从单克隆抗体上释放出来时，鲎属α2-巨球蛋白已基本上无阿米巴状细胞裂解物的其它蛋白质。
本发明的另一个实施方案提供一种特异性地检测测试样品中葡聚糖的试剂盒。该试剂盒包含一种阿米巴状细胞裂解物及一种与鲎属α2-巨球蛋白结合的单克隆抗体。在内毒素而不是葡聚糖存在下，向阿米巴状细胞裂解物中加入该单克隆抗体，抑制阿米巴状细胞裂解物的酶促活化。
因此，本发明为现有技术提供与一种鲎属α2-巨球蛋白特异性地结合的单克隆抗体。该单克隆抗体尤其可以被用于纯化鲎属α2-巨球蛋白以及用于一种使用阿米巴状细胞裂解物特异性地检测测试样品中的葡聚糖的方法中。
附图简述
图1图1表明在单克隆抗体7A10存在下，鲎属阿米巴状细胞裂解物内毒素反应的抑制。
优选实施方案详述
本文公开了特异性地与鲎属α2-巨球蛋白结合的单克隆抗体。本发明的发现之一是，与鲎属α2-巨球蛋白特异性地结合的某些单克隆抗体能够对内毒素而非葡聚糖产生反应，抑制阿米巴状细胞裂解物的酶促活化。鲎属α2-巨球蛋白特异性单克隆抗体也能够用于纯化鲎属α2-巨球蛋白以及从阿米巴状细胞裂解物中产生一种葡聚糖特异性分析方法。鲎属α2-巨球蛋白，一种常用的蛋白酶抑制因子，存在于鲎属阿米巴状细胞裂解物中，在Iwaki等，欧洲生物化学杂志242，822(1996)中公开了鲎属α2-巨球蛋白的氨基序列，该文献在此被引作参考。然而，以前的研究显示，纯化的鲎属α2-巨球蛋白不抑制参与与内毒素反应相关的裂解物凝胶块形成的丝氨酸蛋白酶。因此，惊奇地发现与鲎属α2-巨球蛋白特异性结合的单克隆抗体对内毒素的存在产生应答，在鲎属阿米巴状细胞裂解物中，对酶促级联反应具有抑制作用。
根据本发明，用标准杂交瘤技术纯化的鲎属α2-巨球蛋白可被用作免疫原产生单克隆抗体，其所用于进行本发明各个实施方案。参照试剂盒所提供的技术手册，单克隆抗体可以用ClonaCellTM-HY杂交克隆试剂盒产生(干细胞技术公司，(StemCell Technologies Inc．))。该试剂盒包含一种甲基纤维素基培养基，其中该增养基含有生长因子，B-细胞激刺因子以及促进单细胞生长的培养基补充物。
在产生单克隆抗体过程中，用作免疫原的鲎属α2-巨球蛋白，可以用标准的生化技术对其纯化，例如：分子排阻层析，硫酸分级分离，离子交换层析，亲合层析，结晶，电聚焦及制备凝胶电泳。鲎属α2-巨球蛋白也可以根据Iwaki等(1996年)公布的序列通过重组或化学合成产生。
与鲎属α2-巨球蛋白特异结合的单克隆抗体特异性地结合于该蛋白中存在的抗原表位，该蛋白为例如具有Iwaki等(1996)公开的氨基顺序的鲎属α2-巨球蛋白。优选地，被单克隆抗体识别的α2-巨球蛋白的表位在其它鲎属蛋白中不存在。通常至少必需6，8，10，12个连续的氨基才能形成一个表位。然而包含非连续氨基酸的表位可能需要更多氨基酸，例如至少15，25或50个氨基酸。当用于蛋白质印迹或其它免疫化学方法分析中时，特异与鲎属α2-巨球蛋白结合的单克隆抗体产生比其它蛋白质产生的检测信号至少高5，10，或20倍的检测信号。优选地，特异结合于鲎属α2-巨球蛋白的单克隆抗体，在免疫化学分析中，不检测到其它蛋白质，并且它能从溶液中免疫沉淀鲎属α2-巨球蛋白。
当在内毒素而非葡聚糖存在下，单克隆抗体与阿米巴状细胞裂解物中的鲎属α2-巨球蛋白特异结合时，尤其可用于本发明的广泛实践中的单克隆抗体抑制裂解物的酶促活化，其中该抑制作用可以通过显色底物的裂解或形成凝胶块来检测。适用于阿米巴状细胞裂解物-内毒素分析的显色底物也适于葡聚糖分析。任何对裂解物反应性具有这种优先影响的单克隆抗体都包含在本发明范围内。在一个更优选实施方案中，该单克隆抗体是单克隆抗体7A10。使用纯化的鲎属α2-巨球蛋白及一种ClonaCellTM-HY杂交瘤克隆试剂盒(StemCellTechnologies Inc．)在小鼠中产生这种抗体及其它三个特异性地与鲎属α2-巨球蛋白结合的单克隆抗体。除了融合前培养基(pre-fusion medium)，即培养基A不含庆大霉素外，按照标准的ClonacellTM-HY试剂盒方案进行。这些单克隆抗体能够被用于纯化鲎属α2-巨球蛋白的方法中。
分泌单克隆抗体7A10的杂交瘤细胞于1997年10月7日保藏于美国典型培养物保藏中心(ATCC)，12301 parklawn Drive，RockVille，Maryland 20852，保藏号为ATCC HB-12415。该保藏物将根据布达佩斯条约予以保藏，在此被作引参考。在保藏物与本文的文字描述之间发生矛盾时，以该保藏物的内为准。
其它特异性地结合于鲎属α2-巨球蛋白表位的单克隆抗体，也能够用常规的杂交瘤方法产生，其中单克隆抗体7A10特异性地与该表位结合。可通过竞争分析法中使用候选抗体和标记的7A10竞争鲎属α2-巨球蛋白相同表位的抗体，这是一种本领域技术人员已知的常规方法。抗体7A10可以被标记，如用放射性标记或荧光标记，并且另一种单克隆抗体与标记的7A10抗体竞争鲎属α2-巨球蛋白的特异性表位的功能可以被检测，如用荧光活化细胞分选，闪烁记数，或其它本领域中所知道的方法。
对于各种特定的抗体，达到对阿米巴状细胞裂解物对特定水平或浓度的内毒素的反应的最大抑制所需的单克隆抗体的浓度可以如下面实施例1中所述的进行测定。在一个优选的实施方案中，使用单抗7A10，达到完全抑制(100％)对0．5EU／ml内毒素的裂解物应答所需的抗体浓度为约6μg／ml。
本发明中的单克隆抗体可以为本领域已知的任何方法来分离纯化。例如可将杂交瘤细胞培养物通过一个具有抗体识别表位的鲎属α2-巨球蛋白与其结合柱子来亲合纯化单克隆抗体。优选使用含有固定化的G蛋白柱子，例如ImmunoPure plus(pierce)的抗体纯化。然后，结合的抗体可以用例如一种高盐浓度的缓冲液从柱中洗脱。
阿米巴状细胞裂解物对加入的含有内毒素或葡聚糖的样品的反应可以如本领域熟知的，例如通过此方法来检测，例如通过观察凝胶块形成或通过显色法。为此分析制备阿米巴状细胞裂解物是常规操作，且为用来完成本发明的分析方法，本领域熟知的任何制备裂解物的方法都可以使用。来源于革兰氏阳性茵如表皮葡萄球菌，金黄色葡萄球菌，嗜血链球菌中的多糖或合成的脂A衍生物，如磷脂酸，磷脂酸甘油，或磷脂酰乙醇胺，可以用于测定阿米巴状细胞裂解物在鲎属α2-巨球蛋白特异单克隆抗体存在下，对内毒素的反应。优选地，使用如10ng／ml，1ng／ml，500pg／ml，125pg／ml，62．5pg／ml，31．25pg／ml，15．6pg／ml，7．8pg／ml及0．00pg／ml的浓度范围的内毒素来评估和确保在单克隆抗体存在下内毒素反应的最大抑制剂量。
合成的(1，3)-β-D-葡聚糖，如“Curdlan”或“Packiman”或来源于酵母如白色假丝酵母，犬小孢子茵(Microsporum canis)，烟曲霉成啤酒糖酵母的真菌多糖，能够用于测试含有鲎属α2-巨球蛋白特异性单抗的阿米巴状细胞裂解物对葡聚糖反应的酶促活化。另外，葡聚糖的浓度范围，如10ng／ml，5ng／ml，2．5pg／ml，1．25pg／ml及0．00pg／ml，被推荐为在内毒素而非葡聚糖存在下，使单克隆抗体抑制的中酶促活化的能力有效。裂解物的酶促活化可以通过凝胶块形成或通过显色底物裂解来检测，如Iwanaga等，Hemostasis7：18b-188(1978)及美国专利4，510，241中所公开的方法。
本发明的单克隆抗体也可附着于固体底物上并用于从阿米巴状细胞裂解物中亲合纯化鲎属α2-巨球蛋白。该固体底物可以是任何能与蛋白质连接的固体底物，包括但不局限于颗粒(如玻璃、胶乳、琼脂糖或纤维素珠)，滤膜(由如硝酸纤维素或尼龙组成)，试管内表面(如玻璃或塑料试管)或玻璃或塑料玻璃或平皿如平皿或6、12、24、48、96孔板。固体底物表面可以用一些物质如层粘连蛋白，聚赖氨酸，聚鸟氨酸包被而使抗体附着更容易。选择地，固体底物表面也可以用化学反应基团衍生，如本领域中所熟知的羧基，巯基或胺基团，以提供抗体附着位点。
对于亲合纯化鲎属α2-巨球蛋白，将抗体包被的固体底物与阿米巴状细胞裂解物作用。裂解物由本领域中熟知的方法制备。接触步骤在一定条件下进行，其中单克隆抗体可逆地结合于裂解物中的鲎属α2-巨球蛋白，例如，在4℃，并且允许足够的时间允许特异结合发生。结合后，对固体底物进行洗涤，如用低盐缓冲溶液，以除去特异结合的蛋白质洗涤步骤后，可逆结合于单克隆抗体的α2-巨球蛋白可被释放出来。这种释放可以通过例如用含有一种单一浓度或一种递增浓度梯度的洗脱液的缓冲液而达到洗涤固体底物来完成。其中递增浓度梯度的洗脱液为如0．01-1M HCl，0．1-1M醋酸，pH2．0，0．01M NH4OH，0．025M Na2CO3，0．5MNaCl，ph10到11．5，2-4M KSCN或NaSCN，2-4MMgCl2，1-6M盐酸胍，或1-6M脲。释放的α2-巨球蛋白可以用本领域中所知的方法从缓冲液中浓缩如透析，通过特定分子量截断滤膜的加压过滤，电泳或其它冷冻干燥。
如此获得的α2-巨球蛋白的制备基本上没有鲎属阿米巴状细胞裂解物其它蛋白质。制备物的纯度可以用任何本领域已知的方法进行评价，如SDS-聚丙烯酰胶凝胶电泳。优选地，α2-巨球蛋白制备物纯度至少为80％；更优选地，制备物的纯度为90％，95％或99％。
对于纯化鲎属α2-巨球蛋白，优先使用单抗7A10或其它与7A10特异结合于鲎属α2-巨球蛋白表位反应的单克隆抗体。本发明其它的单克隆抗体也可被用来从鲎或其它含有与使用的特定单抗有交叉反应的α2-巨球蛋白的其它种类中纯化α2-巨球蛋白。这些种类包括其它鲎如鲎(Tachypleus tridentatus)或巨大鲎(Tachypleusgigas)；其它节肢动物如螯虾Pacifastacus leniusculus；及背椎动物包括哺乳动物如小鼠、大鼠、奶牛及人。
本发明的单克隆抗体可被用来提供一种特异性检测测试样品中葡聚糖的存在的试剂与方法。该试剂包含一种阿米巴状细胞裂解物和一种单克隆抗体，其中该单抗特异性地结合于鲎属α2-巨球蛋白上的表位并在内毒素存在下抑制裂解物酶促活化形成凝胶块。阿米巴状细胞裂解物可以通过标准方法从鲎阿米巴状细胞制备，如从多音鲎(Limulus polyphemus)，鲎或巨大鲎。阿米巴状细胞裂解物是优选的。在内毒素而非葡聚糖存在下，向阿米巴状细胞裂解物中加入单抗，抑制阿米巴状细胞裂解物酶促活化。单克隆抗体7A10是优选的，但可使用其它特异性地与7A10与其特异结合的α2-巨球蛋白的相同表位结合的单克隆抗体，与α2-巨球蛋白其它表位结合并导致抑制对内毒素反应的裂解物酶促活化的抗体。这样的单克隆抗体可以通过使用如上所述标准的杂交瘤方法和常规筛选方法获得。
本发明的试剂可在用于特异性检测样品中葡聚糖的试剂盒中提供。测试样品可以是任何样品，其中它将可用于酵母污染，包括水及生物样品，包括但不局限于组织培养基，血及血清。试剂盒包含一种阿米巴状细胞裂解物，优选多音鲎阿米巴状细胞裂解物及一种单克隆抗体，其中该单克隆抗体与鲎属α2-巨球蛋白结合，并在内毒素而非葡聚糖存在下抑制阿米巴状细胞裂解物的酶促活化。因此，该试剂盒可以用于检测内毒素或当向裂解物中加入单抗后，甚至在内毒素存在下特异检测葡聚糖。
提供下面的实施例仅用于说明的目的，并不限制以上广义描述的本发明的范围。
实施例1
本实施例证明，在单克隆抗体7A10存在下，对阿米巴状细胞裂解物对内毒素而不是葡聚糖反应的抑制。
将单克隆抗体7A10加入至鲎属阿米巴状细胞裂解物中至终浓度为1．560μg／ml，3，125μg／ml，及6．250μg／ml。裂解物对内毒素反应的抑制百分率，通过测量无单抗的对照裂解物及加入不同浓度单抗的裂解物样品中的显色底物裂解的抑制进行评估。每一个裂解物样品中加入0．5Eu／ml内毒素进行激发。
裂解物样品对这一水平的内毒素反应在单抗7A10的浓度为6．250μg／ml时被完全抑制(图1)。升高浓度的第二种单克隆抗体2D5，在这一水平的内毒素存在下，对酶促活化没有抑制作用应，其中该单克隆D也与鲎属α2-巨球蛋白上的一个表位特异性地结合。
加入纯化的单克隆抗体7A10可以被用来抑制阿米巴状细胞裂解物对内毒素的反应。结果，单抗7A10使得能进行特异检测样品中葡聚糖的分析。
可以理解，尽管本发明已结合其具体的实施方案进行了描述，前面的描述及实施例并不限制发明范围。其它的方面，优点及修改对于本发明涉及的本领域技术人员是显而易见的，这些方面及修改均在仅由所附权利要求限定的本发明的范围内。
权利要求书按照条约第19条的修改
1．一种分离纯化的与鲎属α2-巨球蛋白特异性结合的单克隆抗体。
2．权利要求1的分离纯化的单克隆抗体，其中在内毒素而非葡聚糖存在下，向鲎属阿米巴状细胞裂解物中加入单克隆抗体抑制裂解物的酶促活化。
3．权利要求1的分离纯化的单克隆抗体，其中单克隆抗体特异性地与一种鲎属α2-巨球蛋白的表位结合，且该表位也与ATCC登记号HB-12415的杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体特异性地结合。
4．权利要求1的分离纯化的单克隆抗体，其中单克隆抗体是ATCC登记号HB-12415的杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体。
5．一种产生单克隆抗体的杂交瘤细胞，其中单克隆抗体特异性地与一种鲎属α2-巨球蛋白相结合。
6．权利要求5的杂交瘤细胞，其中在内毒素而非葡聚糖存在下，向鲎属阿米巴状细胞裂解物中加入单克隆抗体抑制裂解物酶促活化。
7．权利要求5的杂交瘤细胞，其中单克隆抗体与鲎属α2-巨球蛋白的表位特异结合，且该表位也与ATCC登记号HB-12415的杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体特异性地结合。
8．权利要求5的杂交瘤细胞，其中ATCC登记号为HB-12415。
9．用于纯化鲎属α2-巨球蛋白的固体底物，其中该固体底物包含一种与鲎属α2-巨球蛋白的特异性结合的单克隆抗体。
10．权利要求9的固体底物，其中单克隆抗体特异性地与鲎属α2-巨球蛋白上的一个表位结合，且该表位也与ATCC登记号HB-12415的杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体特异性地结合。
11．权利要求9的固体底物，其中单克隆抗体是ATCC登记号HB-12415的杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体。
12．一种特异性地检测测试样品中葡聚糖的试剂，包含：一种阿米巴状细胞裂解物，和一种与鲎属α2-巨球蛋白结合的单克隆抗体，其中，在内毒素而非葡聚糖存在下向阿米巴状细胞裂解物中加入单克隆抗体，抑制阿米巴状细胞裂解物的酶促活化。
13．权利要求12的试剂，其中阿米巴状细胞裂解物来自来源于多音鲎，鲎及巨大鲎的阿米巴状细胞。
14．权利要求12的试剂，其中单克隆抗体特异性地结合于鲎属α2-巨球蛋白上的一个表位，且该表位也与ATCC登记号HB-12415的杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体的特异性地结合。
15．权利要求12的试剂，其中单克隆抗体是ATCC登记号HB-12415的杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体。
16．一种特异性地检测测试样品中葡聚糖的方法，包含以下步骤：阿米巴状细胞裂解物与特异结合于一种鲎属α2-巨球蛋白的单克隆抗体接触，其中，当接触步骤完成后，在内毒素存在下，阿米巴状细胞裂解物的酶促活化受到抑制，以后，将该阿米巴状细胞裂解物与测试样品接触，其中阿米巴状细胞裂解物的酸促活化表明测试样品中葡聚糖的存在。
17．权利要求16的方法，其中单克隆抗体特异性地与一种鲎属α2-巨球蛋白的上的一个表位结合，且该表位也与ATCC登记号HB-12415的杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体特异性地结合。
18．权利要求16的方法，其中单克隆抗体是ATCC登记号HB-12415的杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体。
19．权利要求16的方法，其中阿米巴状细胞裂解物来自来源于多音鲎，鲎及巨大鲎的阿米巴状细胞。
20．一种纯化鲎属α2-巨球蛋白的方法，包含以下步骤：将一种固体底物与一种阿米巴状细胞裂解物接触，其中该固体底物包含一种与鲎属α2-巨球蛋白特异性结合的单克隆抗体，所述接触发生在其中阿米巴状细胞裂解物中的α2-巨球蛋白可逆性地与单克隆抗体接合的条件下；从固体底物中除去与未与单克隆抗体特异性结合的蛋白质；和单克隆抗体上释放α2-巨球蛋白，其中，当α2-巨球蛋白从单克隆抗体上释放时，它已基本上不含阿米巴状细胞裂解物的其它蛋白质。
21．权利要求20的方法，其中单克隆抗体特异性地与一种鲎属α2-巨球蛋白上的一个表位结合，且该表位也与ATCC登记号HB-12415的杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体特异性地结合。
22．权利要求20的方法，其中单克隆抗体为ATCC登记号HB-12415的杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体。
23．一种特异性地检测测试样品中葡聚糖的试剂盒，包含：一种阿米巴状细胞裂解物加一种与鲎属α2-巨球蛋白结合的单克隆抗体，其中在内毒素而非葡聚糖存在下，向阿米巴状细胞裂解物中加入该单克隆抗体，抑制阿米巴状细胞裂解物的酶促活性。
24．权利要求23的试剂盒，其中阿米巴状细胞裂解物来自来源于多音鲎，鲎及巨大鲎的阿米巴状细胞。
25．权利要求23的试剂盒，其中单克隆抗体特异性地与一种鲎属α2-巨球蛋白上的一个表位结合，且该表位也与ATCC登记号HB-12415的杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体特异性地结合。
26．权利要求23的试剂盒，其中单克隆抗体是ATCC登记号HB-12415的杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体。

Claims (26)

1．一种分离纯化的与鲎属α2-巨球蛋白特异性结合的单克隆抗体。
2．权利要求1的分离纯化的单克隆抗体，其中在内毒素而非葡聚糖存在下，向鲎属阿米巴状细胞裂解物中加入单克隆抗体抑制裂解物的酶促活化。
3．权利要求1的分离纯化的单克隆抗体，其中单克隆抗体特异性地与一种鲎属α2-巨球蛋白的表位结合，且该表位也与单抗7A10特异性地结合。
4．权利要求1的分离纯化的单克隆抗体，其中单克隆抗体是单抗7A10。
5．一种产生单克隆抗体的杂交瘤细胞，其中单克隆抗体特异性地与一种鲎属α2-巨球蛋白相结合。
6．权利要求5的杂交瘤细胞，其中在内毒素而非葡聚糖存在下，向鲎属阿米巴状细胞裂解物中加入单克隆抗体抑制裂解物酶促活化。
7．权利要求5的杂交瘤细胞，其中单克隆抗体与鲎属α2-巨球蛋白的表位特异结合，且该表位也与单抗7A10特异性地结合。
8．权利要求5的杂交瘤细胞，其中单克隆抗体是单抗7A10。
9．用于纯化鲎属α2-巨球蛋白的固体底物，其中该固体底物包含一种与鲎属α2-巨球蛋白的特异性结合的单克隆抗体。
10．权利要求9的固体底物，其中单克隆抗体特异性地与鲎属α2-巨球蛋白上的一个表位结合，且该表位也与单抗7A10特异性地结合。
11．权利要求9的固体底物，其中单克隆抗体是单抗7A10。
12．一种特异性地检测测试样品中葡聚糖的试剂，包含：一种阿米巴状细胞裂解物，和一种与鲎属α2-巨球蛋白结合的单克隆抗体，其中，在内毒素而非葡聚糖存在下向阿米巴状细胞裂解物中加入单克隆抗体，抑制阿米巴状细胞裂解物的酶促活化。
13．权利要求12的试剂，其中阿米巴状细胞裂解物来自来源于多音鲎，鲎及巨大鲎的阿米巴状细胞。
14．权利要求12的试剂，其中单克隆抗体特异性地结合于鲎属α2-巨球蛋白上的一个表位，且该表位也与单抗7A10的特异性地结合。
15．权利要求12的试剂，其中单克隆抗体是单抗7A10。
16．一种特异性地检测测试样品中葡聚糖的方法，包含以下步骤：阿米巴状细胞裂解物与特异结合于一种鲎属α2-巨球蛋白的单克隆抗体接触，其中，当接触步骤完成后，在内毒素存在下，阿米巴状细胞裂解物的酶促活化受到抑制，以后，将该阿米巴状细胞裂解物与测试样品接触，其中阿米巴状细胞裂解物的酸促活化表明测试样品中葡聚糖的存在。
17．权利要求16的方法，其中单克隆抗体特异性地与一种鲎属α2-巨球蛋白的上的一个表位结合，且该表位也与单克隆抗体7A10特异性地结合。
18．权利要求16的方法，其中单克隆抗体是单抗7A10。
19．权利要求16的方法，其中阿米巴状细胞裂解物来自来源于多音鲎，鲎及巨大鲎的阿米巴状细胞。
20．一种纯化鲎属α2-巨球蛋白的方法，包含以下步骤：将一种固体底物与一种阿米巴状细胞裂解物接触，其中该固体底物包含一种与鲎属α2-巨球蛋白特异性结合的单克隆抗体，所述接触发生在其中阿米巴状细胞裂解物中的α2-巨球蛋白可逆性地与单克隆抗体接合的条件下；从固体底物中除去与未与单克隆抗体特异性结合的蛋白质；和单克隆抗体上释放α2-巨球蛋白，其中，当α2-巨球蛋白从单克隆抗体上释放时，它已基本上不含阿米巴状细胞裂解物的其它蛋白质。
21．权利要求20的方法，其中单克隆抗体特异性地与一种鲎属α2-巨球蛋白上的一个表位结合，且该表位也与单抗7A10特异性地结合。
22．权利要求20的方法，其中单克隆抗体为单抗7A10。
23．一种特异性地检测测试样品中葡聚糖的试剂盒，包含：一种阿米巴状细胞裂解物加一种与鲎属α2-巨球蛋白结合的单克隆抗体，其中在内毒素而非葡聚糖存在下，向阿米巴状细胞裂解物中加入该单克隆抗体，抑制阿米巴状细胞裂解物的酶促活性。
24．权利要求23的试剂盒，其中阿米巴状细胞裂解物来自来源于多音鲎，鲎及巨大鲎的阿米巴状细胞。
25．权利要求23的试剂盒，其中单克隆抗体特异性地与一种鲎属α2-巨球蛋白上的一个表位结合，且该表位也与单克隆抗体7A10特异性地结合。
26．权利要求23的试剂盒，其中单克隆抗体是单抗7A10。
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