CN1271922C - 苦草快速繁殖的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了快速繁殖苦草的方法，该方法以苦草的地下茎尖为培养物，将苦草培养物经消毒、诱导培养、分化与增殖及生根培养，可快速繁殖苦草，一棵苦草地下茎尖一年可繁殖上万株苦草种苗，为水体植被恢复和水簇箱布景提供大量的种苗。

Description

苦草快速繁殖的方法
技术领域：
本发明涉及一种水生植物的组织培养方法，更具体涉及苦草Hydrocharitaceae Vallisnera Linn.的一种快速繁殖方法，属于生物技术在水体植被恢复和水簇箱中水草种苗生产中的应用。
背景技术：
苦草Hydrocharitaceae Vallisnera Linn.属水鳖科苦草属，以其叶翠绿或略带紫红色供观赏、而且较抗污染、是生物食物链中的重要植物资源，又是水体植被恢复中的主要先锋水草。苦草的叶子呈线形或带形，在清水中栩栩如生，也是水簇箱中的常用品种。在自然界中繁殖系数低，如利用常规的分株法繁殖，形成不了规模化生产，难以满足水体植被恢复和水簇箱中植物材料的需求。
组织培养作为生物技术领域中的一种重要手段，利用植物细胞的全能性，如：茎尖、嫩芽等组织，通过离体培养，产生愈伤组织、分化成苗、诱导生根，从而形成植物的无性系快速繁殖的植株。虽然组织培养是一种比较成熟的技术，其基本培养基一般采用MS，但对不同植物，从产生愈伤组织、分化成苗、诱导生根的不同生长阶段需要不同的营养配置，以及不同的生长条件。因此对苦草的组织培养，也需要特殊的培养基和培养条件。
发明内容：
本发明的目的是，提供一种苦草快速繁殖的方法，该方法利用组织培养技术，将苦草培养物经消毒、诱导培养、分化与增殖及生根培养，可快速繁殖苦草，为水体植被恢复和水簇箱布景提供大量的种苗。
为了达到上述目的，一种快速繁殖苦草的方法按下列步骤进行：
(1)取长度为2～3厘米的苦草地下茎尖作为苦草培养物；
(2)将苦草培养物用流水冲冼20～30分钟，再用75％的酒精棉球擦洗苦草培养物的表面，然后用0.1％的氯化汞浸泡5～8分钟，无菌水冲洗8～10分钟；
(3)将经步骤(2)处理的苦草培养物接入诱导培养基中，培养20～30天；诱导培养基为：每升MS基本培养基中加入0.1毫克KT(6-呋喃氨基嘌呤)、0.1毫克2，4-D(2，4-二氯苯氧乙酸)、30克蔗糖、6克琼脂；其中每升MS基本培养基含：
NH4NO3(硝酸铵)                  1650毫克
KNO3(硝酸钾)                     1900毫克
CaCI2·2H2O(二水氯化钙)        440毫克
MgSO4.7H2O(硫酸镁)             370毫克
KH2PO4(磷酸二氢钾)              170毫克
KI(碘化钾)                        0.83毫克
H3BO3(硼酸)                     6.2毫克
MnSO4·4H2O(硫酸锰)            22.3毫克
ZnSO4·7H2O(硫酸锌)            8.6毫克
Na2MoO4·2H2O(钼酸钠)             0.25毫克
CuSO4·5H2O(硫酸铜)                0.025毫克
CoCI2·6H2O(氯化钴)                0.025毫克
FeSO4·7H2O(硫酸亚铁)              27.8毫克
乙二胺四乙酸二钠                      37.3毫克
肌醇                                  100毫克
烟酸                                  0.5毫克
盐酸吡哆醇                            0.5毫克
盐酸硫胺素                            0.1毫克
甘氨酸                                2毫克
余者为水；
(4)将经步骤(3)培养的苦草培养物转接于分化与增殖培养基，培养30～40天长出许多苦草芽；分化与增殖培养基为：每升MS基本培养基中加入1毫克BA(6-苄基腺嘌呤)、0.1毫克NAA(萘乙酸)、30克蔗糖、6克琼脂；
(5)若将步骤(4)的苦草芽分株，可作为新的苦草培养物，重复步骤(4)可得到大量的苦草芽；
(6)若将步骤(4)的苦草芽转接于生根培养基中诱导生根，培养25～30天即得到苦草苗；生根培养基为：每升MS基本培养基中加入1升蒸馏水、0.4毫克IBA(吲哚丁酸)、40克蔗糖、12克琼脂。
本发明具有如下优点：本发明的诱导培养基、分化与增殖培养基及生根培养基是最适合苦草三个不同生长阶段---诱导培养、分化与增殖及生根培养的最佳培养基配方，一个苦草地下茎尖经反复增殖，一年可繁殖上万株种苗，为水体植被恢复和水簇箱布景提供大量的种苗。
具体实施方式：
一种苦草快速繁殖的方法，该方法按下列步骤进行：
(1)取长度为2～3厘米的苦草地下茎尖作为苦草培养物；
(2)将苦草培养物用流水冲冼20～30分钟，再用75％的酒精棉球擦洗苦草培养物的表面，然后用0.1％的氯化汞浸泡5～8分钟，无菌水冲洗8～10分钟；
(3)将经步骤(2)处理的苦草培养物接入诱导培养基中，培养20～30天，苦草培养物开始萌动、生长；诱导培养基为：每升MS基本培养基中加入0.1毫克KT(6-呋喃氨基嘌呤)、0.1毫克2，4-D(2，4-二氯苯氧乙酸)、30克蔗糖、6克琼脂；其中每升MS基本培养基含：
NH4NO3(硝酸铵)                 1650毫克
KNO3(硝酸钾)                    1900毫克
CaCI2·2H2O(二水氯化钙)       440毫克
MgSO4.7H2O(硫酸镁)            370毫克
KH2PO4(磷酸二氢钾)             170毫克
KI(碘化钾)                       0.83毫克
H3BO3(硼酸)                    6.2毫克
MnSO4·4H2O(硫酸锰)           22.3毫克
ZnSO4·7H2O(硫酸锌)           8.6毫克
Na2MoO4·2H2O(钼酸钠)       0.25毫克
CuSO4·5H2O(硫酸铜)          0.025毫克
CoCI2·6H2O(氯化钴)          0.025毫克
FeSO4·7H2O(硫酸亚铁)        27.8毫克
乙二胺四乙酸二钠                37.3毫克
肌醇                            100毫克
烟酸                            0.5毫克
盐酸吡哆醇                      0.5毫克
盐酸硫胺素                      0.1毫克
甘氨酸                          2毫克
余者为水；
(4)将经步骤(3)培养的苦草培养物转接于分化与增殖培养基，培养30～40天长出许多苦草芽；分化与增殖培养基为：每升MS基本培养基中加入1毫克BA(6-苄基腺嘌呤)、0.1毫克NAA(萘乙酸)、30克蔗糖、6克琼脂；
(5)若将步骤(4)的苦草芽分株，可作为新的苦草培养物，重复步骤(4)可得到大量的苦草芽；
(6)若将步骤(4)的苦草芽转接于生根培养基中诱导生根，培养25～30天即得到苦草苗；生根培养基为：每升MS基本培养基中加入1升蒸馏水、0.4毫克IBA(吲哚丁酸)、40克蔗糖、12克琼脂。
实施本发明，可在短期内得到大量的苦草试管苗。

Claims (1)

1、一种苦草快速繁殖的方法，其特征在于，该方法按下列步骤进行：
(1)取长度为2～3厘米的苦草地下茎尖作为苦草培养物；
(2)将苦草培养物用流水冲冼20～30分钟，再用75％的酒精棉球擦洗苦草培养物的表面，然后用0.1％的氯化汞浸泡5～8分钟，无菌水冲洗8～10分钟；
(3)将经步骤(2)处理的苦草培养物接入诱导培养基中，培养20～30天；诱导培养基为：每升MS基本培养基中加入0.1毫克6-呋喃氨基嘌呤、0.1毫克2，4-二氯苯氧乙酸、30克蔗糖、6克琼脂；
(4)将经步骤(3)培养的苦草培养物转接于分化与增殖培养基，培养30～40天长出许多苦草芽；分化与增殖培养基为：每升MS基本培养基中加入1毫克6-苄基腺嘌呤、0.1毫克萘乙酸、30克蔗糖、6克琼脂；
(5)将步骤(4)的苦草芽分株，作为新的苦草培养物，重复步骤(4)可得到大量的苦草芽；
(6)将步骤(4)的苦草芽转接于生根培养基中诱导生根，培养25～30天即得到苦草苗；生根培养基为：每升MS基本培养基中加入1升蒸馏水、0.4毫克吲哚丁酸、40克蔗糖、12克琼脂。
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