CN1249438C - 一种蛋白芯片 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种蛋白芯片,它包括基质材料及设于其上的捕获探针,所述基质材料是指孔径0.6微米以下的多孔纤维素膜。所述纤维素膜孔径的优选范围是0.2-0.6微米,最优范围是0.2-0.45微米。本发明不仅具有很高的蛋白质吸附能力,对蛋白质的吸附上限可达每平方厘米80微克牛血清白蛋白,而且被吸附的蛋白质在膜表面分布十分均匀,灵敏性高和稳定性好,反应处在高速动态反应状态,大大缩短了反应时间,反应平衡时间只需5分钟以下。
Description
本发明涉及检测和分析基因表达产物蛋白质和多肽的技术领域。
从理论上讲,蛋白芯片技术具有快速高效、灵敏特异、操作简便、廉价实用等优点,在众多生命学科如预防医学、基础医学、临床医学等领域具有十分广泛的应用前景。在蛋白芯片技术中,芯片基质是核心构件之一,寻找和研制具有良好性能的蛋白芯片基质材料是当前该领域中急待解决的问题之一。目前,正在研制的蛋白芯片多采用玻璃片作为芯片的基质材料,这种基质材料存在两个严重的缺陷:(1)蛋白质吸附能力差,直接影响蛋白芯片技术的灵敏性和稳定性;(2)生物分子反应必须在固相状态下进行,反应速度很慢,需2小时才能达到反应平衡。
本发明的目的是提供一种高蛋白质吸附容量、灵敏性高和稳定性好的蛋白芯片。
本发明进一步的目的是在实现上述目的的基础上,提供一种可以使生物分子反应速度快的蛋白芯片。
为实现本发明的目的,本发明采用以下技术方案:它包括基质材料及设于基质材料上的捕获探针,所述基质材料是指孔径0.6微米以下的多孔纤维素膜。
为实现本发明进一步的目的,在采用以上技术方案的同时,本发明再采用以下进一步的技术方案:所述纤维素膜孔径的优选范围是0.2-0.6微米。
上述纤维素膜孔径的最优范围是0.2-0.45微米。
上述纤维素膜的优选是聚偏二氟乙烯印迹膜(即PVDF膜)。。
上述纤维素膜的优选是硝酸纤维素膜。
所述捕获探针是以微阵列方式喷印在多孔纤维素膜上。
由于采用上述技术方案,纤维素膜与玻璃片相比,不仅具有很高的蛋白质吸附能力,对蛋白质的吸附上限可达每平方厘米80微克牛血清白蛋白,而且被吸附的蛋白质在膜表面分布十分均匀,以此作为基质材料的蛋白芯片灵敏性高和稳定性好。具有进一步效果的是,纤维素膜还可做成多孔状,孔径采用0.2-0.6微米,尤其是0.2-0.45微米,可使参与反应的生物分子在反应腔室中膜的上下自由运动,反应处在高速动态反应状态,大大缩短了反应时间,反应平衡时间只需5分钟以下,同时也有益于蛋白芯片的灵敏性和稳定性。
下面结合附图和实施例对本发明作进一步描述。
图1为本发明的放大示意图。
实施例1
本发明包括基质材料1及设于基质材料上的捕获探针2,所述基质材料是孔径0.3微米的多孔纤维素膜,该纤维素膜是PVDF膜。
实施例2
本发明包括基质材料1及设于基质材料上的捕获探针2,所述基质材料是孔径0.35微米的多孔纤维素膜,该纤维素膜是PVDF膜。
实施例3
本发明包括基质材料1及设于基质材料上的捕获探针2,所述基质材料是孔径0.25微米的多孔纤维素膜,该纤维素膜是硝酸纤维素膜。
实施例4
本发明包括基质材料1及设于基质材料上的捕获探针2,所述基质材料是孔径0.4微米的多孔纤维素膜,该纤维素膜是硝酸纤维素膜。
实施例5
本发明包括基质材料1及设于基质材料上的捕获探针2,所述基质材料是孔径0.2微米的多孔纤维素膜,该纤维素膜是醋酸纤维素膜。
实施例6
本发明包括基质材料1及设于基质材料上的捕获探针2,所述基质材料是孔径0.45微米的多孔纤维素膜,该纤维素膜是硝酸醋酸混合纤维素膜。
实施例7
本发明包括基质材料1及设于基质材料上的捕获探针2,所述基质材料是孔径0.15微米的多孔纤维素膜,该纤维素膜是硝酸纤维素膜。
实施例8
本发明包括基质材料1及设于基质材料上的捕获探针2,所述基质材料是孔径0.5微米的多孔纤维素膜,该纤维素膜是PVDF膜。
实施例9
本发明包括基质材料1及设于基质材料上的捕获探针2,所述基质材料是孔径0.1微米的多孔纤维素膜,该纤维素膜是硝酸纤维素膜。
实施例10
本发明包括基质材料1及设于基质材料上的捕获探针2,所述基质材料是孔径0.55微米的多孔纤维素膜,该纤维素膜是PVDF膜。
实施例11
本发明包括基质材料1及设于基质材料上的捕获探针2,所述基质材料是孔径0.05微米的多孔纤维素膜,该纤维素膜是醋酸纤维素膜。
实施例12
本发明包括基质材料1及设于基质材料上的捕获探针2,所述基质材料是孔径0.6微米的多孔纤维素膜,该纤维素膜是硝酸醋酸混合纤维素膜。
本发明可采用以下方法制造:(1)用不锈钢无菌手术刀片裁取所需大小及所需孔径的多孔纤维素膜,如1平方厘米的0.2微米孔径PVDF膜,浸入无水甲醇中5分钟;(2)用无菌平头镊子将该膜转入0.1M PBS、PH7.4的缓冲液中浸没5分钟,取出置室温凉干;(3)用微量喷印设备将捕获探针以微阵列形式喷印到PVDF膜上,每点0.5微升,室温凉干;(4)用含有1%的牛血清白蛋白的0.1MPBS、PH7.4的缓冲液,37℃封闭1小时;(5)80℃真空干燥2小时即为制备好的蛋白芯片。
Claims (4)
1、一种蛋白芯片,包括基质材料及设于基质材料上的捕获探针,其特征在于所述基质材料是指孔径0.2-0.45微米的多孔纤维素膜。
2、如权利要求1所述的一种蛋白芯片,其特征在于所述多孔纤维素膜是聚偏二氟乙烯印迹膜。
3、如权利要求1所述的一种蛋白芯片,其特征在于所述多孔纤维素膜是硝酸纤维素膜。
4、如权利要求1、2或3任一项所述的一种蛋白芯片,其特征在于所述捕获探针是以微阵列方式喷印在多孔纤维素膜上。
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