CN1249080C - 电泳系统 - Google Patents

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Abstract

由二维电泳将样品分离成组分的方法使用在空间上分隔并在一个通常为平面的单独支撑装置上处理的IPG条和凝胶板。首先将平面支撑机构定位在通常垂直的平面，将第一电泳分离介质定位在第二电泳分离介质上方或下方并相隔一定间隙的水平面上。然后对条中的样品混合物进行第一维分离，此时条和板由基本与水互不溶合并且不能萃取出水的不导电液体分离。在进行第一分离之后倾斜支撑机构，使得第一条和水平面形成一角度，从条和板之间的间隙冲洗出石蜡。然后将包含缓冲剂的琼脂糖胶流入间隙，以在电场的影响下允许样品分子从条转移到板。

Description

电泳系统
技术领域
本发明涉及将第一和第二维凝胶包含在单一盒中进行二维电泳的方法。
背景技术
在最近25年，人们已经选择2-D PAGE(二维聚丙烯酰胺凝胶电泳)技术通过配合各种细胞功能的数千蛋白质的定量和定性分析，来分析给定细胞类型的蛋白质组成和监测基因活性变化。尽管2-D PAGE具有特别的分辨能力，但是尚未将其应用于高产量筛分研究。这是由于第一和第二维凝胶独立地运行，因此需要两个不同的运行设备，并且难以形成自动化。此外，要成功地完成2-D凝胶，需要操作者具有高水平的技巧和知识。
为达到2-D凝胶的真实高产量和再现性，必须尽可能地排除操作者的干扰。这可以通过在单一盒中结合第一和第二维凝胶来实现，因此不需要操作者人工干扰凝胶。这一人工干扰步骤既缓慢又麻烦，并且将形成操作者之间的差异，从而导致缺乏再现性。在单一盒中结合两种凝胶的另一个优点是将运行硬件减少为一个单一设备，因此增加了自动化的可能性。在单一盒中将凝胶放置在一起要求能将凝胶放置在彼此相隔的几微米内，同时直到要求蛋白质从第一向第二维转移时保持凝胶之间的分离。将第一和第二维凝胶结合在单一盒中具有很大的技术难度。首先，由于存在溶液，因此在两种凝胶中的离子条件相当不同。第一维等电子聚焦凝胶具有非常低的离子强度，不与高电平的盐或缓冲剂相容。等电子聚焦是在高达10,000伏的高电压和典型地每个凝胶小于1mA的非常低的电流下进行的。与此相反，第二维凝胶具有通常为100-500mM范围的高缓冲剂盐浓度，电泳是在每个凝胶5-100mA的高电流下进行的。因此，当将这两种凝胶紧密放置时必须仔细，以保证来自第二维凝胶的缓冲剂不污染第一维凝胶，这种污染会导致非常高的电流和第一维凝胶的随后燃烧。
人们面对的第二个问题是如何将样品加载到第一维凝胶上而不允许任何样品过早地转移到第二维凝胶中。进行等电子聚焦的最好方式是使用固定pH梯度(IPG)，该梯度典型地作为干燥条提供并且和样品溶液再水合，从而将样品分布在整个凝胶上，这样允许高蛋白质的负荷。当在单一盒中结合两种凝胶时，难以用样品润湿IPG的整个表面而不允许一些样品转移到第二维凝胶中。
为了提供用于进行二维电泳的结合的条凝胶和板凝胶，人们已经进行了很多尝试。US4874490公开了这样的一种设备。然而其中提出的方法不易操作，而且不实用，并且没有给出正在执行和实际工作的方法的例子。随着人们对蛋白质领域越来越感兴趣，必须进行比以前更多的分离。分离，特别是二维分离，需要大量的劳动力，在这个领域中增加工人生产率的唯一可行方式是提供易于自动化的方法和系统。美国专利No.4874490中所示方法如果能在任何情况下工作，那么将会很困难，如果不能在任何情况下工作，那么将很难形成机械化。
美国专利No.5773645公开了在普通载体上进行二维分离的另外一种设备。这份说明书依然没有公开使用这种设备的任何一个示例或结果。所公开的这种系统要形成自动化依然很困难，并且会很昂贵。
本发明的一个目的是提供一种新方法，该方法以允许方法和系统自动化的方式克服了与在单一盒中结合和运行第一和第二维凝胶相关的技术难题。
已经包括在本说明书中的文献、行为、材料、设备、制品等的任何讨论仅用于提供本发明的环境。尽管在本申请每个权利要求的优先权日期之前它们在澳大利亚已经存在，但是我们并不认为这些内容形成了现有技术基础，或者是和本发明相关的领域内的公知常识。
发明内容
在第一主要方面，本发明的基本思想是提出允许第一维等电聚焦凝胶和第二维电泳凝胶在单一盒中结合、贮存、运输和运行的新方法，该方法易于自动化。
在第二方面，本发明提供采用样品蛋白质或多肽的溶液再水合第一维凝胶的方法。所述再水合在盒中进行，而样品溶液没有向第二维凝胶转移。
在第三方面，本发明提供在进行等电聚焦时在第一和第二维凝胶之间放置电流绝缘屏蔽物的方法。屏蔽物防止两种凝胶在盒中的脱水，另外防止样品从第一维凝胶向第二维凝胶的任何过早转移或缓冲剂盐从第二维凝胶向第一维凝胶的转移。
本发明的另一方面是除去电流绝缘屏蔽物和提供优选一个凝胶的缓冲剂浸渍的导电桥接材料，以连接第一维凝胶与第二维凝胶的方法。桥接材料允许蛋白质从第一维凝胶转移到第二维凝胶。
本发明的又一个方面是提供电连接到第一维凝胶末端以允许进行电泳的装置。
在一个具体方面，提供一种由二维电泳将样品分离成组分的方法，该方法包括：
a.提供包括典型地是IPG条的伸长条的第一电泳分离介质，和典型地为板的形式的第二电泳分离介质，该介质被隔离并在单一的支撑机构上处理，并且其中所述的第一电泳分离介质至少被一种可除去的覆盖物所部分包围；
b.当支撑机构处于通常垂直的定位时，使用包含要分离的样品的液体使所述的伸长条水合，同时所述的液体被所述的可除去的覆盖物所保留，然后除去该可除去的覆盖物；
c.支撑机构定位在通常垂直的平面中，第一电泳分离介质定位在从上方或下方和第二电泳分离介质间隔一个间隙的水平平面中，在第一电泳分离介质中进行样品混合物的第一维分离，同时第一和第二介质由不导电液体分离，不导电液体具有低粘度和低挥发性，基本不可燃，基本与水不互溶，并且不能萃取出水；
d.在进行步骤c的第一维分离之后倾斜支撑机构，使得第一电泳分离介质和水平面形成一角度，并在第一电泳分离介质和第二电泳分离介质之间的间隙中冲洗出液体；和
e.使包含桥接材料的液体缓冲剂，典型地是包含缓冲剂的琼脂糖胶，流入间隙，以在电场的影响下允许样品分子从第一电泳分离介质转移到第二电泳分离介质。
在此使用的术语“不能萃取出水”覆盖了完全不与水互溶和因此并不吸收或吸附任何水的液体。有许多溶剂通常描述为不与水互溶，但事实上在变饱和及形成两层之前它们可吸收一定数量的水。这样的溶剂一般不适用于本发明，这是由于它们在尚未水饱和之前将从凝胶或IPG条抽出水和因此脱水成凝胶或IPG条，而如果它们饱和了，将在IPG条上进行第一维分离的12-48小时的相对长时间内不能充分电绝缘。
第一电泳分离介质较佳地至少部分由可除去的覆盖物包围，这样允许支撑机构为垂直方向时，典型地使用包含要分离样品的液体使介质再水合。
可除去的覆盖物最优选由金属箔等制成。IPG条的存放期取决于它们保持的条件。如果保持完全干燥，IPG条可保存很多年。然而，空气可引起条的氧化，大气中存在的水蒸汽也会增加条的降解速率，因此优选是气密性密封。2D凝胶板的存放期典型地是一年，因此IPG上的密封需要在至少如此长的时间内保持IPG条处于良好状态。由于它们气密性不如金属箔并且不可能保持IPG到要求的一年时间，因此塑料膜相反并不能提供良好的密封。
与其中支撑机构可以水平或水平和垂直定向的现有技术比较，支撑机构同样垂直定向时可以进行全部的二维电泳分离，因此系统可以实现机械化。
非导电性液体最优选是石蜡油，它和水互不溶合，不能萃取出水，具有较高的疏水性和相对低的粘度。由于它允许石蜡油填充在IPS条和凝胶板之间相对窄(典型地为1-4mm)和回旋的间隙内，低粘度是有利的。根据间隙尺寸，优选是粘度至多为30mm2/S的油，典型地使用10-25mm2/S。由于用于桥接间隙的琼脂糖具有比IPG条和2d凝胶板两者大的孔径大小，这会是不利的。因此扩散倾向于在琼脂糖胶中发生，由于运行时间更短和发生较小的扩散，间隙越窄越好。
本发明的相关方面提供了使用二维电泳将样品分离成组分的装置，该装置包括：
在使用时，在垂直方向上可支撑的一种通常为平面的支撑机构；
包括一个确定纵轴的伸长条的第一电泳分离介质；
第二电泳分离介质，所述两种介质被隔离并在一个通常为平面的支撑机构上处理；和
包括一个可导电的薄膜的柔性覆盖物机构，该薄膜从平面支撑机构延伸出来围绕所述伸长条，并与该平面支撑机构共同包围所述的伸长条，并确定一个不透水的包围物用于接受并保留使第一电泳分离介质再水合的液体样品，和其中该柔性覆盖物机构进一步确定至少一个延通常垂直于该伸长条的纵轴方向延伸的管，当该平面支撑机构在垂直方向上支撑时，该管延所述装置通常向上的方向延伸。
本发明在还有一个方面提供了一种二维电泳凝胶盒，包括：
含有平面支撑机构的盒壳并确定一个底缘，在使用时，当盒子以其底缘支撑时所述平面支撑机构被垂直定位；
包括支撑在平面支撑机构上的伸长条的第一电泳分离介质；
包括支撑在平面机构上的板的第二电泳分离介质；和
包括可除去的薄膜覆盖物机构，所述薄膜从平面支撑机构延伸出来围绕所述伸长条以将其包围，并与盒壳的平面支撑机构共同包围第一介质，并确定一个不透水的包围物用于接受并保留使第一电泳分离介质再水合的液体样品，其中该可除去的薄膜覆盖物进一步确定至少一个末端封闭的管，该管延通常垂直于该伸长条的纵轴方向延伸，并且当平面支撑机构以其底缘支撑时，该管延所述盒子通常向上的方向延伸；和
所述盒壳确定在第一和第二介质之间的液体保持空间。
本发明在又一个方面提供了一种二维电泳凝胶盒，包括：
含有平面支撑机构的盒壳；
包括支撑在平面支撑机构上的伸长条的第一电泳分离介质；
包括支撑在平面机构上的板的第二电泳分离介质；和
包括一个薄膜的可除去的柔性覆盖物机构，所述薄膜从平面支撑机构延伸出来围绕所述伸长条，并与平面支撑机构共同包围所述伸长条，并确定一个不透水的包围物用于接受并保持使第一电泳分离介质再水合的液体样品，其中所述柔性覆盖机构进一步确定至少一个延通常垂直于伸长条的纵轴方向延伸的管，和其中所述盒壳确定在第一和第二介质之间的液体保持间隙，和所述间隙为1-4mm。
附图说明
下面通过示例并参考附图描述本发明的具体实施方案，在这些附图中：
图1是显示IPG和第二维凝胶共同位于单一盒中的结合2-D凝胶的示意侧视图；
图2是显示IPG和第二维凝胶共同位于单一盒中的结合2-D凝胶的示意顶视图；
图3是显示在第二维凝胶的组装和铸造之前单一盒板的两个示意侧视图，其中IPG连接到盒板上并由薄塑料层覆盖；
图4示出了图1中完全组装之后的盒子，其中IPG由图3中的塑料覆盖片覆盖；
图5示出了图4所示的盒子，其中已经向盒壁和塑料覆盖片之间的间隙中引入包含IPG的再水合液体；
图6是结合2-D凝胶的示意侧视图，示出了电极桥材料和在IPG凝胶每一端的电极的定位；
图7是结合2-D凝胶的示意顶视图，示出了在IPG凝胶每一端的电极桥材料的定位；
图8是图3中结合2-D凝胶的示意顶视图，其中盒子已经倾斜以方便石蜡油屏蔽材料的加载；
图9是使用图1至图4所示盒子结构的银染色二维凝胶运行；
图10是根据本发明原理构造的盒子背板的前正视图；
图11是沿图10中线11-11剖切的背板的横向截面图；
图12是盒子前板的前正视图；
图13是沿图12中线13-13剖切的前板的横向截面图；
图14是组装盒子的前正视图；
图14A是组装盒子另外结构的前正视图；和
图15A-15E是盒子另外结构的横向截面图。
具体实施方式
参考附图，图1和图2分别显示了结合2-D凝胶盒10的侧视图和顶视图，该凝胶盒含有典型地是干燥固定pH梯度(IPG)类型凝胶的第一维凝胶12，以及第二维凝胶14。盒子可由玻璃或塑料或任何其它合适的材料制成。
IPG12在第二维凝胶顶面上距离该顶面大约2mm的间隙16，并和第二维凝胶的顶表面充分平行。在IPG12的末端和盒子10的侧面之间保持大约5mm的间隙18，以允许用于第二分离的电极桥材料插入。尽管图中显示的装置使单个IPG12平行于第二维凝胶的顶部，并距离第二维凝胶大约2mm，本领域技术人员很清楚地知道，这种设计的结合2-D凝胶可以以线性阵列包含一个或多个IPG，这些IPG与第二维凝胶顶部的间隔可以大于或小于2mm。
如图3所示，在较佳实施例中，IPG固定到盒子的单一板20上。同样如图3所示，干燥IPG由薄金属箔覆盖片22覆盖，该覆盖片也固定到盒板上以提供可渗透液体的屏蔽物。IPG条的存放期典型地取决于保持它们的条件。如果保持完全干燥和冷冻或凝固，IPG条可保存多年。然而空气可引起条的氧化，并且大气中存在的水蒸汽也会增加条的降解速率，因此优选是例如可以由金属箔提供的气密性密封。2D凝胶板的存放期典型地为一年，因此要求IPG的密封至少需要在如此长的时间内使IPG条保持为良好状态。片可以由不是金属箔的材料组成，然而它们应当是不透气的。随后连接盒子10的前板，并在盒子中铸塑第二维凝胶14，从而形成完成的盒子。
为加载样品，在覆盖片116中的一个耳状件158中制造一个小孔，并向由覆盖物形成的围绕IPG12的空间中引入液体样品。由于不被吸收的任何液体会包含蛋白质并因此减少负载，重要的是仅引入足够的液体来再水合IPG12。允许干燥IPG12再水合，直到已经吸收所有的液体。在再水合处理之后，通过使用一个或两个耳状件158作为把手将覆盖物156从盒子剥离，从而取下该覆盖物。
或者可以如图1中那样在不含有IPG覆盖物的盒中加载样品，但这并不有利。在此实施例中，如图1所示的盒子如图2所示水平放置，IPG凝胶朝上或朝下，并使用注射器将再水合液体仔细放置到IPG表面上。毛细作用将再水合液体保持在IPG表面上，空气作为IPG和第二维凝胶之间间隙中的屏蔽物，从而防止再水合液体接触第二维凝胶。尽管图1中所示的盒子的实施例显示了使用空气作为再水合处理期间凝胶之间的屏蔽物，本领域技术人员很清楚地知道，这种设计的结合2-D凝胶可以使用不是空气的其他气体，或液体、固体作为再水合期间的屏蔽物。
如图6和7所示，在已经再水合IPG凝胶之后，必须放置一个电极桥与IPG的每一端接触。如图7所示，电极桥材料32在每一端保持在盒子的变宽部分30内。电极桥材料通常是切割到一定尺寸和由净化水润湿的厚滤纸。具有变宽部分30的优点在于可以使用更大更厚的滤纸片作为桥接材料。由于凝胶上施加电场期间，桥接材料用于吸收IPG中不希望的杂散离子材料，因此更大更厚的滤纸片是有利的。然而，电极材料可以由任何固体、惰性、非离子、吸水性材料组成。此外，在一些情况下需要在缓冲剂或例如用于IEF的样品增溶溶液中浸泡电极材料。例如，当在电极桥材料中要求高度增溶条件以促进在IPG pH范围内不是等电的蛋白质的脱除，可以使用IEF增溶溶液。电极材料用作凝胶和电极之间的容器，其中离子污染物和来自样品的非等电蛋白质可收集而不干扰分离。具有变宽部分30的优点在于可以用更大更厚的滤纸片作为桥接材料，它可吸收更多的杂散离子材料。如图6所示，电极34通常是销形，以允许在电极桥接材料中的渗透和良好接触。
在使用中，在插入电极桥材料之后，采用屏蔽材料填充IPG和第二维凝胶之间的间隙，以防止在IEF步骤期间IPG的再水合，并防止经过间隙的传导。此外，屏蔽物防止在IEF期间液体在第一和第二维凝胶之间的任何转移。屏蔽材料必须与水互不溶合，并且不能萃取出水，也就是必须不吸收或吸附任何水。有许多溶剂描述为不与水互溶，但事实上它们在变饱和及形成两层之前可吸收一定数量的水。由于如果它们还没有水饱和，以及饱和但在IPG条上进行第一维分离的相对长时间12-48小时内没有足够电绝缘，它们将从凝胶或IPG条抽出水，因此这样的溶剂一般不适用于本发明。
在较佳实施例中，屏蔽材料是轻石蜡油，例如由位于澳大利亚墨尔本春天大街1号的澳大利亚壳牌有限公司(the Shell Company of Australia Limitedof 1 Spring Street，Melbourne，VIC，3000，Australian)提供的“Shell Ondina Oil15”，它是严格精炼以除去任何具有任何程度化学活性的物质的精制透明医疗石蜡油，因此是非常温和的具有化学惰性的水透明产物。该产物在ISO粘度等级32和68中获得，然而，在40℃下粘度典型地是15.6mm2/S的ISO 15是优选粘度等级。但是，本领域技术人员清楚地知道，满足上述特性的具有更高或更低密度的石蜡油，或其它油都可以是合适的屏蔽材料。在盒子处于图8所示的垂直位置的情况下，使用移液管注入石蜡油。将电极放入电极桥接材料中，并在盒子处于垂直位置的情况下进行IEF。
为在IEF之后促进蛋白质从IPG向第二维凝胶的转移，IPG要求与合适的缓冲剂保持平衡。在典型的2-D凝胶中，平衡缓冲剂包含例如二硫苏糖醇或三丁基膦的还原剂，以及结合到蛋白质上和比较首要负电荷的表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)。负电荷允许蛋白质根据分子量在第二维中分离。在本发明的较佳实施例中，通过用包含SDS的熔融0.5％琼脂糖溶液和适当缓冲剂替换石蜡油屏蔽物而进行IPG平衡和SDS结合。在较佳实施例中，在第一维分离之前还原和烷基化蛋白质。然而，如果已经在第一维中以它们的还原形式分离了蛋白质，将例如二硫苏糖醇或三丁基膦的还原剂加入到琼脂糖中。熔融琼脂糖(典型地为1-5mL)溶液冲洗过第一和第二维凝胶之间的间隙，因此完全除去石蜡油。最后允许包含SDS、甘油和缓冲剂的熔融琼脂糖在第一和第二维凝胶之间的间隙中凝固，从而桥接该间隙，并允许蛋白质转移。为促进热琼脂糖的加入，必须使盒子处于如图8所示的倾斜的垂直位置。当已经将空气泡冲洗出间隙时，将盒子返回到图6所示的正常的垂直位置并在室温下静置20分钟，以允许琼脂糖凝固，并允许TBP和SDS扩散到IPG中。根据样品和蛋白质负载，静置时间可以从零到大于20分钟。由于这种系统简单并易于形成自动化，因而这种系统得到特别推荐。
在本发明第二次佳实施例中，可以使用包含脲、SDS、还原剂、缓冲剂和甘油的普通平衡溶液代替石蜡屏蔽物冲洗间隙。允许将此平衡溶液保持在盒子中5分钟至30分钟和通常改变10次，然而本领域技术人员清楚地知道，在不背离本发明的精神或损害获得的凝胶的情况下，可以改变平衡时间和变化次数。
根据普通程序进行第二维凝胶的运行和随后染色。图9示出了图1所示的盒子中运行的鼠肝的银染色2-D凝胶。很清楚，再水合和IEF步骤执行得很好，并且使用的屏蔽材料防止了样品向第二维的任何过早转移。
在一个较佳实施例中，盒子10包括前板116和背板118。如图12和13所示，前板118含有前部面120、背部面122以及顶部、底部、左和右侧边缘124、126、128和130。在前板116的背部面122上，邻近左和右侧128和130提供了间隔条132和134。如图10和11所示，背板118含有前部面136、背部面138以及顶部、底部、左和右侧边缘140、142、144和146。在背板118的前部面136上，邻近左和右侧142和144提供了间隔条148和150。前板可由塑料、玻璃或其它合适材料组成。优选使用塑料，这是由于它是透明的、相对便宜并且容易制造。
将前板和背板116和118结合在一起，使背板118的前部面136朝向前板116的背部面122，间隔条132和134与间隔条148和150成一直线。可以采用粘合剂、超声焊接或任何其它合适措施将前板和背板116和118结合在一起。可以采用中间安装和/或互锁部分配置前板116上的间隔条132和134与背板118上的间隔条148和150，以有助于排列板和将板保持在一起。在另外的构造中，可以仅在前板116上(参见图15B)，或仅在背板118上(参见图15C)提供间隔片，或者可以在前板上提供在盒子一侧的间隔片，在背板上提供盒子另一侧的间隔片(参见图15D)。此外，可以在背板上提供单独的间隔片(参见图15E)。在还有一种构造中，可以在前板和后板之间沿它们各自的底部边缘提供间隔片。此间隔片可以由在前板和背板上，或仅在前板或背板上的间隔条形成，或由一个单独的片形成。然而，通常较佳的是盒子10在底部打开，以方便形成第二维凝胶14。
背板118的前部面136优选含有用于接收和保持IPG12的压痕或凹口152。可以采用粘合剂在压痕或凹口152中固定IPG12，或可以提供夹子或固定器以固定IPG。在此较佳实施例中，提供与后板整体形成的弹性夹子154以在凹口152中固定IPG。在IPG12上提供可除去的覆盖物156。覆盖物156优选由背板118密封，但可以容易地从背板118除去。覆盖物156保护IPG12，并能方便地再水合IPG。覆盖物156优选由柔性片材料制成，并且具有至少一个——优选地是两个——超过盒子10顶部向上延伸的“耳状件”158，使得耳状件可以方便地打开覆盖物，以再水合IPG12，并因此抓紧覆盖物，以将它从背板118拆去。这些耳状件158优选为闭端管的形式。覆盖物156优选由金属箔制成，这样它坚固且柔软，并仍然可以提供液体和气体紧密密封。金属箔的导电性也有助于对抗将降解覆盖物和/或IPG12的局部腐蚀。金属箔可以与例如膜或油漆的导电塑料层结合，这样改进了覆盖物的耐腐蚀性和强度，从而能抵抗脱除期间的断裂。覆盖物156可以采用粘合剂或由超声焊接固定。由于IPG12再水合以促进覆盖物156的脱除，由水分软化的粘合剂具有弱化的优点。
在图14A所示的另外构造中，覆盖物156由拉环160和弱衬里162和164构成，这样当拉动拉环时，仅除去覆盖物的中心部分，留下末端部分，这是因为它们的导电性可以用作第一分离的电极。覆盖物的其它另外构造包括刚性覆盖物，而不是柔性覆盖物。
可以在背板118的前部面136中形成凹槽或槽道，以促进插入纸电极从而接触IPG12。
前板116含有切断器166，这样当盒子10面对面结合时，在它们之间形成连接容器，用于在第一阶段期间固定绝缘材料。
本领域技术人员应当理解，在不背离概括介绍的本发明的精神或范围的情况下，可以对具体实施例所示的本发明进行大量的修改或修正。因此本实施例在各个方面都是对发明的展示，而不是限制。

Claims (21)

1.一种通过二维电泳将样品分离成组分的方法，该方法包括：
a.提供包括伸长条的第一电泳分离介质(12)以及第二电泳分离介质(14)，所述介质被隔离并在单一支撑机构(20、118)上处理，并且其中所述的第一电泳分离介质(12)至少被一种可除去的覆盖物(22、156)所部分包围；
b.当支撑机构(20、118)处于通常垂直的定位时，使用包含要分离的样品的液体使所述的伸长条(12)水合，同时所述的液体被所述的可除去的覆盖物(22、156)所保留，然后除去该可除去的覆盖物(22、156)；
c.将支撑机构(20、118)定位在通常垂直的平面，第一电泳分离介质(12)定位在位于第二电泳分离介质上方或下方并相隔一定间隙(16)的水平平面，在第一电泳分离介质(12)中进行样品混合物的第一维分离，此时第一和第二介质由和水充分互不相溶并且不能萃取出水的不导电液体分离；
d.在进行步骤c的第一维分离之后倾斜支撑机构(20、118)，使第一电泳分离介质(12)和水平面形成一角度，并从第一电泳分离介质(12)和第二电泳分离介质(14)之间的间隙(16)冲洗出液体；和
e.将包含桥接材料的液体缓冲剂流入间隙(16)，以在电场的影响下允许样品分子从第一电泳分离介质(12)转移到第二电泳分离介质(14)。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述的可除去的覆盖物(22、156)包括一种金属箔覆盖物，和其中该可除去的覆盖物在样品混合物进行第一维分离之前被除去。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中不导电液体是石蜡油。
4.根据权利要求3所述的方法，其中第一电泳分离介质(12)包括一个IPG条。
5.根据权利要求1所述的方法，其中第二电泳分离介质(14)包括一个凝胶板。
6.根据权利要求1所述的方法，其中支撑机构(20、118)包括通常为平面的支撑体。
7.根据权利要求1所述的方法，其中包含桥接材料的液体缓冲剂包括含缓冲剂的琼脂糖凝胶。
8.一种通过二维电泳将样品分离成组分的装置，该装置包括：
在使用时，在垂直方向上可支撑的一种通常为平面的支撑机构(20、118)；
包括一个伸长条的第一电泳分离介质(12)；
第二电泳分离介质(14)，所述两种介质被隔离并在该通常为平面的支撑机构(20、118)上处理；和
包括一个可导电薄膜的柔性覆盖物机构(22、156)，该薄膜从平面支撑机构延伸出来围绕所述伸长条，并与该平面支撑机构共同包围所述的伸长条(12)，并确定一个不透水的包围物用于接受并保留使第一电泳分离介质(12)再水合的液体样品，和其中该柔性覆盖物机构(22、156)进一步确定至少一个延通常垂直于该伸长条的纵轴方向延伸的管(28、158)，当该平面支撑机构在垂直方向上支撑时，该管延所述装置通常向上的方向延伸。
9.根据权利要求8所述的装置，其中形成覆盖物机构的薄膜包括一个金属箔。
10.根据权利要求8或9所述的装置，其中介质由1-4mm的间隙(16)隔离。
11.根据权利要求8所述的装置，其中固体支撑机构(20、118)形成含有前壁(116)、后壁(118)和相对的侧壁(144、146)的盒子的一部分，并且其中条(12)的末端与盒子相邻侧壁间隔约5mm的间隙。
12.根据权利要求11所述的装置，其中盒子(10)确定了邻近条(12)末端的电极桥部分(30)，所述电极桥部分(30)的宽度相对于条(12)的宽度要宽。
13.一种二维电泳凝胶盒，包括：
含有平面支撑机构(20、118)的盒壳并确定一个底缘(142)，在使用时，当盒子以其底缘(142)支撑时所述平面支撑机构被垂直定位；
包括支撑在平面支撑机构(20、118)上的伸长条的第一电泳分离介质(12)；
包括支撑在平面机构(20、118)上的板的第二电泳分离介质(14)；和
包含可除去的薄膜覆盖物(22、156)，它从平面支撑机构延伸出来围绕所述伸长条(12)以将其包围，并与盒壳的平面支撑机构共同包围第一介质，并确定一个不透水的包围物用于接受并保留使第一电泳分离介质再水合的液体样品，其中该可除去的薄膜覆盖物(22、156)进一步确定至少一个末端封闭的管(28、158)，该管延通常垂直于该伸长条的纵轴方向延伸，并且当平面支撑机构以其底缘支撑时，该管延所述盒子(10)通常向上的方向延伸；和其中
所述盒壳确定在第一和第二介质之间的液体保持空间。
14.根据权利要求13所述的盒子，其中第一介质(12)处于脱水状态，并且可除去的薄膜覆盖物(22、156)可开启以形成在第一介质周围的用于再水合第一介质的开放流体保持空间。
15.根据权利要求14所述的盒子，其中当平面支撑体为通常垂直定位时，可除去的薄膜覆盖物(22、156)开启以形成流体保持空间。
16.根据权利要求15所述的盒子，其中可除去的薄膜覆盖物(22、156)是导电的。
17.根据权利要求16所述的盒子，其中可除去的薄膜覆盖物(22、156)包括一个金属箔。
18.根据权利要求16所述的盒子，其中可除去的薄膜覆盖物(22、156)包括一个导电的塑料箔。
19.一种二维电泳凝胶盒(10)，包括：
含有平面支撑机构(20、118)的盒壳；
包括支撑在平面支撑机构上的伸长条的第一电泳分离介质(12)；
包括支撑在平面机构上的板的第二电泳分离介质(14)；和
包括薄膜的可除去的柔性覆盖物机构(22、156)，所述薄膜从平面支撑机构(20、118)延伸出来围绕所述伸长条，并与平面支撑机构共同包围所述伸长条，并确定一个不透水的包围物用于接受并保持使第一电泳分离介质再水合的液体样品，其中所述柔性覆盖机构(22、156)进一步确定至少一个延通常垂直于伸长条的纵轴方向延伸的管(28、158)，和其中所述盒壳确定在第一和第二介质之间的液体保持间隙，和所述间隙为1-4mm。
20.一种二维电泳凝胶盒，包括：
含有平面支撑机构(20、118)的盒壳；
包括支撑在平面支撑机构上的伸长条的第一电泳分离介质(12)；
包括支撑在平面机构上的板的第二电泳分离介质(14)；和
包括一个薄膜的柔性覆盖物机构(22、156)，所述薄膜从平面支撑机构延伸出来围绕所述伸长条以将其包围，并与平面支撑机构共同确定一个不透水的包围物用于接受并保持使第一电泳分离介质再水合的液体样品，
盒壳确定在第一和第二介质之间的流体保持间隙(16)；
所述介质被1-4mm的间隙(16)所隔离。
21.一种使用盒子通过二维电泳将样品分离成组分的方法，该盒子(10)包括含有平面支撑机构(20、118)的盒壳；包括支撑在平面支撑机构上的伸长条的第一电泳分离介质(12)；包括支撑在平面机构上的板的第二电泳分离介质(14)；和包括薄膜的柔性覆盖物机构(22、156)，所述薄膜从平面支撑机构延伸出来围绕所述伸长条(12)，并与平面支撑机构共同确定一个不透水的包围物围绕所述的伸长条，用于接受并保持使第一电泳分离介质(12)再水合的液体样品；
和其中所述第一和第二介质由一个1-4mm的间隙(16)隔离；
该方法包括：
不除去柔性覆盖物机构而通过在所述柔性覆盖物机构上打开一个孔向第一介质(12)中引入样品；然后
除去覆盖机构；
在第一介质(12)和第二介质(14)之间引入不导电流体；
使用第一介质进行第一电泳分离；
用桥接材料替换不导电流体；
在相对于第二介质不移动第一介质的情况下，使用第二介质对在第一电泳分离中分离的材料进行第二电泳分离。
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