CN1240402C - 山蜡梅油作为制备消化系统疾病药的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及的是将山蜡梅油作为制备消化系统疾病药的应用，研究人员发现，将本发明所述的山蜡梅油在大于等于0.001ml/kg水平上给药，具有显著抑制胃酸排出，溃疡的形成及止泻作用，小鼠灌胃给药的LD50为0.224ml/kg(0.192-0.250)95%的可信区间，从而证明所述的山蜡梅油作为一种中药成份制成药剂，对各类消化系统疾病具有良好的治疗作用，且安全可靠。
Description
技术领域
本发明涉及中成药制备领域，尤其涉及到山蜡梅油作为制备消化系统疾病药的应用。
背景技术
消化系统疾病为我国常见病、多发病，而且随着老龄社会的到来和环境污染加重，近年来发病有增加趋势。目前国内外治疗方法虽多，但主要均以提高抗生素、进口药治疗为主，尤其进口化学药品，其价格昂贵、毒副反应多，易产生耐药性。国内消化系统疾病的中药治疗药物主要以方剂为主，目前还没有单味药治疗且疗效好的药物。
早在70年代，已有人对山蜡梅叶主要挥发油成份具有体外抑制金葡菌、绿脓杆菌作用的研究。77年版《中国药典》一部收载的“山蜡梅叶”及其制剂“山蜡梅茶”有祛风解表、清热解毒之功效，用于防治感冒，流行性感冒。中国中医药科技1996年第3卷第1期曾刊登了李萍等人的研究，表明通过体内抗菌试验，发现山蜡梅叶对抗金葡菌感染，体外抗菌试验，发现对多种细菌均有抑制作用，同时还证明有抗炎、解热、免疫增强作用，民间亦有一些偏方认为山蜡梅叶在消食化疾方面有一定作用，但至今尚无具体的动物实验或临床结果加以证明。
本发明所述的山蜡梅油，是指以蜡梅科植物山蜡梅叶油为蜡梅科植物山蜡梅Chimonanthus nites Oliv的干燥叶，经水蒸汽蒸馏得到的挥发油。
发明内容
本发明的目的在于将山蜡梅油作为制备消化系统疾病药的应用。
本发明是通过下述方式实现的：将山蜡梅油用于抑制腹泻、提高肠推进率、抑制肠蠕动亢进、降低胃液分泌量、总酸排出量、抑制应激性溃疡药物的制备。
本发明的药理学实验采用的山蜡梅油为蜡梅科植物山蜡梅叶油为蜡梅科植物山蜡梅Chimonanthus nites Oliv的干燥叶，经水蒸汽蒸馏得到的挥发油。
实验材料按下述方法获得：
取处方量山蜡梅干燥叶，加6倍量水，水蒸气蒸馏提取4h.，收集挥发油和芳香水，将β-CD加入60℃蒸馏水和芳香水中，制成饱和溶液，在600r/min条件下，按β-CD与挥发油8∶1(g∶ml)比例，缓慢滴加预先以适量乙醇溶解的山蜡梅挥发油，搅拌2h，静置过夜，滤过，得山蜡梅挥发油包合物，置于冷冻干燥机内，冷冻干燥24h.，取出，粉碎，过80目筛，套胶囊，即得成品。
根据药效学研究结果表明，山蜡梅油胶囊具有显著抑制胃酸排出，溃疡的形成及止泻作用，为临床应用提供了科学依据。
为了确认本发明所述的山蜡梅油在治疗消化系统疾病方面的疗效，进行了以下的动物实验和临床试验，目的是了解山蜡梅油在治疗治疗消化系统疾病方面的药理作用和效果，具体的方法与结果如下：
一、试验动物：
ICR小鼠，雌雄皆用，体重18-22g，SD大鼠雌雄皆用，体重150-210g。
由浙江中医药研究院动物中心供给，合格证：[医动字第220010017号]。
二、药品及试剂：
山蜡梅油胶囊：每粒内容物重0.35g，含山蜡梅挥发油包合物0.036ml：
广州羊城药业股份有限公司批号：010514
元和正胃片：中国吉林通化正和药业有限公司批号：010403
三、仪器：
紫外分光光度计：型号：UV-265，日本岛津公司。
恒温水浴箱—北京长源电器厂。
四、受试物：
山蜡梅油溶剂：山蜡梅油胶囊提取物配成12.5％乳液，用底比稀释法稀释
浓度分别为：0.4ml/g 0.2ml/g 0.01ml/g
对照试剂：蒸馏水、保济丸、元和正胃片
方法和结果
一、山蜡梅油胶囊对蓖麻油所致小鼠泄泻的影响
将小鼠50只禁食16小时后，随机分为5组，每组10只，雌雄各半，即空白对照组、阳性药组、山蜡梅油胶囊大、中、小三个剂量组。按组别分别灌胃0.5ml/20g不同受试物受试药，空白组灌等量溶剂，给药30分钟后每只小鼠灌胃蓖麻油0.2ml。单只入已铺滤纸铁丝笼中，记录各鼠在灌胃蓖麻油后1、2、3、4、5小时的湿粪数，检验各组湿粪数的差异，结果表明山蜡梅油胶囊大、中剂量在不同的腹泻时段均有显著抑制作用，小剂量则在2小时有显著性差异。(见表1)
表1山蜡梅油胶囊对蓖麻油所致小鼠泄泻的影响
| 组别 | 剂量(g/kg) | 湿粪数 | ||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | ||
| 空白对照组保济丸组脾胃舒组脾胃舒组脾胃舒组 | 100.40.20.01 | 2.30±1.570.90±1.52*0.70±1.57*1.00±0.67*1.20±0.92 | 4.89±1.622.20±2.44**1.20±1.62**2.90±0.99**3.50±1.27* | 7.10±2.423.40±2.87**2.20±1.23**4.30±0.95**5.50±1.51 | 9.30±2.834.80±2.82**3.80±1.62**6.10±2.13**7.10±2.42 | 10.20±3.225.90±2.88*4.50±1.90**7.00±1.76*7.80±2.53 |
与对照组比较：**p＜0.01 *p＜0.05
二、山蜡梅油胶囊对正常小鼠肠推进作用的影响
炭末法：将禁食16小时小鼠50只，随机分为5组，每组10只，雌雄各半。即空白对照组、阳性药保济丸组、山蜡梅油胶囊大、中、小分别灌胃不同浓度受试物0.5ml/20g。空白对照组灌等量溶剂，灌胃给药30分钟后，每组小鼠灌胃10％活性炭0.5ml，20分钟后脱颈处死，打开腹腔，将幽门至回盲部肠管完整取出，不加牵引地将小肠平铺于玻璃板上，量取肠道全长及炭末前沿至幽门的长度，按下公式计算每只小鼠小肠推进率：炭末推进距离/小肠总长度×100％并做t检验结果表明山蜡梅油胶囊对小鼠正常肠推进率无明显影响。(见表2)
表2山蜡梅油胶囊对小鼠小肠推进率的影响(×±S，n＝10)
组别 剂量(g/kg) 小肠总长度(cm) 炭末推进长度(cm) 推进率(％)
空白对照组 39.72±2.37 24.97±3.33 63.06±9.03
保济丸组 10 40.86±3.07 18.87±7.06 46.81±19.05*
山蜡梅油胶囊组 0.4 46.50±3.64 24.25±6.31 52.61±14.00
山蜡梅油胶囊组 0.2 43.92±3.39 24.48±10.26 55.45±23.34
山蜡梅油胶囊组 0.01 46.86±5.27 24.88±4.19 53.29±7.56
三、山蜡梅油胶囊对新斯的明小鼠肠亢进的影响
分组及给药同前，灌胃给药30分钟后每只小鼠下注射新斯的明0.1ml/kg，15分钟后灌胃10％活性炭，20分钟处死小鼠取小肠按前实验计算小肠推进率，并t检验比较各组差异性，结果试验表明山蜡梅油胶囊大剂量对新斯的明引起的小鼠肠蠕动亢进有显著抑制作用。(见表3)
表3山蜡梅油胶囊对小鼠新斯的明所致肠蠕动亢进的影响(×±S，n＝10)
组别 剂量(g/kg) 小肠总长度(cm) 炭末推进长度(cm) 推进率(％)
空白对照组 42.45±2.89 33.40±8.76 78.19±17.37
保济丸组 10 43.04±2.76 25.64±4.53 59.65±10.90**
山蜡梅油胶囊组 0.4 43.90±2.23 25.00±11.65 56.65±26.13*
山蜡梅油胶囊组 0.2 43.67±5.00 27.89±8.26 63.69±15.59
山蜡梅油胶囊组 0.01 44.25±3.01 30.45±4.93 67.89±9.02
与对照组比较 **p＜0.01 *p＜0.05
四、山蜡梅油胶囊对大鼠胃分泌功能的影响
实验用大鼠50只，随机分为5组，每组10只，雌雄各半，山蜡梅油胶囊大、中、小不同浓度分别灌胃，禁食24小时后，用乙醚轻度麻醉，剖腹，结扎幽门。立即经十二指肠分别按组别注入相应受试物和溶剂，缝合伤口后5小时处死动物。拆线打开腹腔，结扎贲门，摘取全胃。收集胃液于刻度离心管，以3000r/min×15min离心，记录胃液量，并进行胃液分析。
a)胃液总酸度及总酸排出量测定
取离心上清胃液1ml置小烧杯中，加入托佛氏及酚酞指示剂各1滴，用定量0.02ml/L氢氧化钠溶液滴定管慢慢滴定，同时不断摇动直至微红色不退为止，即为总酸度溶定终点，记录滴定所消耗的氢氧化钠总毫升数。按下式计算总酸度和总酸排出量。
总酸度(mol/L)＝滴定消耗的氢氧化钠毫升数×10
总酸排出量＝总酸度×每小时的胃液量。
b)蛋白酶活性测定：
采用Mett法，将内径1-2mm粗细均匀的毛细管截成10cm长洗净烘干。取鸡蛋清打匀后纱布过滤，将毛细血管内灌满蛋清在85℃热水中使蛋白凝固备用。实验时取胃液1ml加入50ml三角烧瓶中。加0.05mol/L盐酸15ml混匀后，放入蛋白管二根封好瓶口，在37℃恒温箱中孵育24小时。取出蛋白管，用尺量取蛋白管两端透明部分的长度，以四端之值求平均值，计算胃蛋白酶活性单位及胃蛋白酶排出量，并做组间t检验，结果表明：山蜡梅油胶囊十二指肠给药，对胃液分泌量、总酸排出量，有明显降低作用，而对胃蛋白酶无明显影响。(见表4)
表4山蜡梅油胶囊对大鼠胃分泌功能的影响(×±S，n＝10)
组别 剂量 胃液量 总酸度 总酸排出量 胃蛋白酶活性
(g/kg) (ml) (mmol/L) (umol/h) (u/ml)
空白对照组 4.84±1.13 69.88±21.27 66.63±31.23 1.57±0.78
元和正胃片组 4 2.90±1.11** 30.53±14.24** 16.57±8.43** 1.35±0.90
山蜡梅油胶囊组 0.4 2.92±1.04** 42.58±14.42** 24.00±10.94** 1.34±0.76
山蜡梅油胶囊组 0.2 3.64±0.85* 41.56±33.12* 27.82±23.37** 1.52±0.98
山蜡梅油胶囊组 0.01 3.82±1.47 52.72±19.74 40.16±25.77** 1.77±1.04
与对照组比较： *p＜0.01 *p＜0.05
五、山蜡梅油胶囊对大鼠应激性胃溃疡的影响
将禁食24小时大鼠50只随即分成5组，每组10只，雌雄各半。按组别分别灌胃给于相应受试物，药后30′分钟，用乙醚麻醉，将其仰卧固定在木板上，直立浸在恒温23℃水浴箱中，至水面齐剑突部应激20小时后处死动物，剖腹、结扎幽门和贲门后取出整个胃，由胃腺部注入1％甲醛溶液5ml。并将其在1％甲醛液固定10分钟，沿胃大弯剪开，用生理盐水洗去内容物，擦去凝血，可见深色点状和条索状溃疡，以游标尺测定溃疡指数，计算抑制率并做组间t检验结果见表5，表明山蜡梅油胶囊对大鼠应激性溃疡具有显著抑制作用。
表5山蜡梅油胶囊对大鼠应激性溃疡的影响(×±S，n＝10)
组别 剂量(g/kg) 溃疡指数(mm) 抑制率(％)
空白对照组 40.00±11.89
元和正胃片组 4 24.00±10.12** 40.00
山蜡梅油胶囊组 0.4 24.70±8.69** 38.30
山蜡梅油胶囊组 0.2 28.30±9.81* 29.30
山蜡梅油胶囊组 0.01 33.20±7.6 17.00
与对照组比较 *p＜0.01 *p＜0.05
六、安全性试验
山蜡梅油胶囊对小鼠灌胃，观察动物给药后即时反应，并连续观察14天，结果表明，小鼠灌胃给药的LD50为2.13g/kg(1.869-2.428)95％的可信区间，换算成山蜡梅油含量为0.224ml/kg(0.192-0.250)。
七、临床病例
病例1：临床表现为起病较急，病程短；脘腹胀满疼痛，甚至厌食、呕吐酸食物，腹痛肠鸣，大便臭秽、舌苔厚浊、大便有脂肪滴或不消化物，用山蜡梅油胶囊治疗一个疗程，药量0.001ml/kg，治愈。
病例2：临床表现为持续性或反复发作性粘液大便，经用山蜡梅油胶囊治疗七天后治愈。
可见：山蜡梅油在＞＝0.001ml/kg水平上给药，具有显著抑制胃酸排出，溃疡的形成及止泻作用，在＜＝0.25ml/kg水平上给药是安全的，从而证明所述的山蜡梅油作为一种中药成份制成药剂，对各类消化系统疾病具有良好的治疗作用，且安全可靠。
具体实施方式
下面将描述本发明的几个实施例，但本发明的内容完全不局限于此：
实施例1：
取处方量山蜡梅干燥叶，加6倍量水，水蒸气蒸馏提取4h.，收集挥发油，将β-CD加入60℃蒸馏水中，制成饱和溶液，在600r/min条件下，按β-CD与挥发油8∶1(g∶ml)比例，缓慢滴加预先以适量乙醇溶解的山蜡梅挥发油，搅拌2h，静置过夜，滤过，得山蜡梅挥发油包合物，置于冷冻干燥机内，冷冻干燥24h.，取出，粉碎，过80目筛，套胶囊，即得成品，其优选的应用剂量为山蜡梅油含量为0.001-0.25ml/kg。
实施例2：
按实施例1所得的山蜡梅挥发油包合物药品，最为优选的应用剂量为山蜡梅油含量为0.02-0.06ml/kg。
Claims (1)
1、一种山蜡梅油作为制备消化系统疾病药的应用，其特征在于将山蜡梅油用于抑制腹泻、提高肠推进率、抑制肠蠕动亢进、降低胃液分泌量、总酸排出量或抑制应激性溃疡药物的制备。
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