CN1193773C - 蝉花菌丝体胶囊剂及制备方法 - Google Patents

蝉花菌丝体胶囊剂及制备方法 Download PDF

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Abstract

中药技术领域。本发明提供了一种蝉花菌丝体胶囊剂。该菌丝体对慢性肾功能衰竭的大鼠能显著降低肌酐和尿素氮，无明显毒副作用。本发明提供了制备方法。

Description

蝉花菌丝体胶囊剂及制备方法
技术领域
本发明属中药技术领域。具体涉及一种蝉花菌丝体及制备方法。
背景技术
肾功能衰竭是一个常见的慢性疾病。目前常用激素、免疫抑制剂并辅以饮食控制等治疗，病程迁延，医疗费用昂贵，病人从丧失劳动力，目前疗效很不理想，许多病人最终因肾功能衰竭及其副作用而死亡，部分病人需通过透析、换肾等维持生命。
目前中医常用冬虫夏草或者虫草的菌丝体制剂治疗慢性肾功能衰竭。由于其几明显的副作用，又能取得一定的疗效，故引起广泛的注意。尽管对虫草及其菌丝体的化学组成和药理研究很多，但是，究竟是何组份可以有效地治疗肾功能衰竭及其药理作用机制的研究尚不多见。
蝉花是我国传统中药材，本草认为其“性寒、味甘、无毒”，“主小儿天吊，惊癫、瘛疭、夜啼、心悸”，现代有人用蝉花治疗慢性肾功能衰竭，取得了一定的疗效。
国内蝉花的一重要产地是浙江，目前认为从浙江蝉花中分离出来的优势菌种是蝉拟青霉素(paccilamyces cicadae)，故目前似应认为在江浙市售蝉花是蝉的若虫受到蝉拟青霉等真菌寄生的产物，该菌和虫草菌丝体是同属真菌。
尽管在中医的许多经典著作中，虫草和蝉花的功能主治均不完全相同，目前临床上蝉花和虫草的应用也有很大的区别，但是近代临床却报道该二药均治疗慢性肾功能衰竭，而该二药的菌丝体的生物学特征又有许多相似之处，而对该二种治疗慢性肾功能衰竭的有效组分并不了解，其治疗慢性肾功能衰竭的机制不明确。
另一方面蝉花作为名贵中药材，其来源也日益减少，而其用途却扩大了，而蝉拟青霉的菌丝体培育方便，价廉，作为新药材是有竞争力的，而且对其组分的研究，并将深化肾功能衰竭的研究，
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于对蝉花进一步研究开发，获得有效菌丝体，并开发在临床的应用。
因此，按照中药现代化的要求，蝉花菌丝体作为中药材的人工制品应按一类中药进行研究，并进而分离蝉花的化学成分，对其主要组分进行生物测试，并通过动物模型证实其为有效成分，并与虫划菌丝体的工作结合起来，这样可揭示蝉花治疗肾功能衰竭的机制，并进而为发展蝉花菌丝体作为治疗肾功能衰竭的新药奠定基础。
本发明提供了一种蝉花菌丝体胶囊剂，该胶囊剂包括按重量百分比计算为70％-100％的蝉花菌丝体粉和30％-0％的药用常规辅料组成。
本发明提供了一种蝉花菌丝体胶囊剂的制备方法，该方法包括下列步骤：一、蝉花菌种分离、纯化及菌种复状、保藏：
(一)菌种分离培养基(％)
(1)马铃薯浸出液              50
   葡萄糖                    2
   MgSO47SO4               0.02
   CaCO3                    0.02
   琼脂                      2
   PH                        自然
(2)玉米淀粉                  2
   黄豆粉                    1
   葡萄糖                  2
   MgSO4.7SO4           0.02
   CaCO3                 0.02
   琼脂                    2
   PH                      自然
(3)玉米淀粉                2
   酵母粉                  1
   葡萄糖                  2
   MgSO4.7SO4           0.02
   CaCO3                  0.02
   琼脂                    2
   PH                      自然
(4)玉米淀粉                2
   酵母提取物              1
   葡萄糖                  2
   MgSO4.7SO4            0.02
   CaCO3                  0.02
   琼脂                    2
   PH                      自然
(5)糊精                    2
   黄豆粉                  1
   葡萄糖                  2
   MgSO4.7SO4           0.02
   CaCO3                 0.02
   琼脂                    2
   PH                      自然
(6)玉米淀粉                  2
   聚胨                      1
   葡萄糖                    2
   MgSO4.7SO4              0.02
   CaCO3                    0.02
   琼脂                      2
   PH                        自然
(二)菌种分离方法
蝉花菌种是从中药材“蝉花”(产地浙江)中分离出来的，将中药材“蝉花”无菌处理后，研成粉末状，加适量无菌水，倒入装有玻璃珠摇瓶中，摇床振荡1-2hr(230转/分)。然后用快速滤纸过滤，取滤液。滤液经稀释后，涂布于分离培养基平板上。在15-35℃中培养2-7天，挑取单菌落。接种到斜面上继续培养，直到斜面长出青绿色孢子。往斜面中注入少量无菌水，将孢子轻轻刮下，倒入装有玻璃珠摇瓶，摇床振荡0.5-2hr(230转/分)，过滤取滤液。滤液经稀释后涂布于分离培养基平板上。在15-35℃中培养2-7，挑取单菌落，制成蝉花菌种斜面；
用上述方法分离出一株蝉花菌种CH99015，此菌为霉菌，在固体培养基上生长形式为：孢子发芽→基质菌丝→气生军菌丝→孢子。其基质菌丝色素为褐红色，气生菌丝为白色绒毛状，孢子为绿青色，鉴定为拟青霉；
蝉花菌种CH99015复壮，每半年进行一次自然分离，该菌种采用冷冻干燥保藏菌种：将无菌脱脂牛奶(20％)直接用无菌长滴管加到待保藏的菌种斜面内，轻轻搅动，使孢子均匀地悬浮在牛奶中成为菌悬液。然后将菌悬液滴入冷冻管底部。将分装好的冷冻管置于-20℃以下的条件中进行预冻，以菌悬浮液全部冻结为准。预冻以后，将冷冻管放入真空冷冻干燥机中进行干燥，直至样品成酥丸状(已完全冻干)。封管前将真空抽到100Pa以下(麦氏真空表显示)，再用火焰熔封。封后的冷冻管应在低温避光处保藏，可保存5-10年。
二、蝉花菌丝体培养、发酵工艺及成品获得提取：
(一)固体斜面培养基(％)
(1)马铃薯浸出液       50
   葡萄糖             2
   MgSO4·7SO4      0.02
   CaCO3             0.02
   琼脂               2
   PH                 自然
(2)玉米淀粉           2
   黄豆粉             1
   葡萄糖             2
   MgSO4·7SO4      0.02
   CaCO3             0.02
   琼脂               2
   PH                 自然
(3)玉米淀粉           2
   酵母粉             1
   葡萄糖             2
   MgSO4·7SO4      0.02
   CaCO3             0.02
   琼脂               2
   PH                 自然
(4)玉米淀粉           2
   酵母提取物         1
   葡萄糖             2
   MgSO4·7SO4      0.02
   CaCO3               0.02
   琼脂                 2
   PH                   自然
(5)糊精                 2
   黄豆粉               1
   葡萄糖               2
   MgSO4·7SO4        0.02
   CaCO3               0.02
   琼脂                 2
   PH                   自然
(6)玉米淀粉             2
   聚胨                 1
   葡萄糖               2
   MgSO4·7SO4        0.02
   CaCO3               0.02
   琼脂                 2
   PH                   自然
(二)种子培养基(％)
(1)马铃薯浸出液         50
   葡萄糖               2
   MgSO4·7SO4        0.02
   CaCO3               0.02
   PH                   自然
(2)玉米淀粉             2
   黄豆粉               1
   葡萄糖             2
   MgSO4·7SO4      0.02
   CaCO3             0.02
   PH                 自然
(3)玉米淀粉           2
   酵母粉             1
   葡萄糖             2
   MgSO4·7SO4      0.02
   CaCO3             0.02
   PH                 自然
(4)玉米淀粉           2
   酵母提取物         1
   葡萄糖             2
   MgSO4·7SO4      0.02
   CaCO3             0.02
   PH                 自然
(5)糊精               2
   黄豆粉             1
   葡萄糖             2
   MgSO4·7SO4      0.02
   CaCO3             0.02
   PH                 自然
(6)玉米淀粉           2
   聚胨               1
   葡萄糖             2
   MgSO4·7SO4       0.02
   CaCO3              0.02
   PH                  自然
(三)发酵培养基(％)
(1)马铃薯浸出液        50
   葡萄糖              2
   MgSO4·7SO4       0.02
   CaCO3              0.02
   (NH4)2SO4         0.05
   PH                  自然
(2)玉米淀粉            2
   黄豆粉              1
   葡萄糖              2
   MgSO4·7SO4       0.02
   CaCO3              0.02
   (NH4)2SO4         0.05
   PH                  自然
(3)玉米淀粉            2
   酵母粉              1
   葡萄糖              2
   MgSO4·7SO4       0.02
   CaCO3              0.02
   (NH4)2SO4         0.05
   PH                  自然
(4)玉米淀粉            2
   酵母提取物          1
   葡萄糖                   2
   MgSO4·7SO4           0.02
   CaCO3                  002
   (NH4)2SO4             0.05
   PH                      自然
(5)糊精                    2
   黄豆粉                  1
   葡萄糖                  2
   MgSO4·7SO4           0.02
   CaCO3                  0.02
   (NH4)2SO4             0.05
   PH                      自然
(6)玉米淀粉                2
   聚胨                    1
   葡萄糖                  2
   MgSO4·7SO4           0.02
   CaCO3                  0.02
   (NH4)2SO4             0.05
   PH                      自然
(四)斜面种子培养
将固体培养基制成空白斜面，在25-37℃培养3天，检查无菌后，供接种用。接种后斜面于20-35℃恒温培养3-10天，经肉眼观察生长良好者(气生菌丝为白色绒毛状，孢子为绿青色)，可作为生产斜面备用；
(五)种子培养
种子培养工艺要求：培养温度        20-35℃
                  装量            50-80％(v/v)
              空气流量        1∶1-1∶3(v/v/min)
              搅拌            100-300转/分
              培养时间        48-120小时
              外观            菌液较稠，菌球颗粒细、均匀，
                              色泽较白。
              镜检            无杂菌，菌丝体染色深，充满
                              原生质，菌丝体粗壮有分枝；
(六)发酵
发酵工艺要求：培养温度        20-35℃
              装量            50-80％
              接种量          5-15％
              周期            48-120hr
              空气流量        1∶1-1∶3(v/v/min)
              搅拌            100-300转/分
              外观            培养液稠厚，湿菌体含量＞60％
                              (v/v)色泽为米色，有清香味
              镜检            无杂菌，菌丝体染色深，充满
                              原生质，菌丝体粗壮有分枝；
(七)成品获得提取工艺
放罐发酵液经过滤得到湿菌体，将湿菌体用冷冻干燥方法或低温真空干燥法得到干燥菌体，然后粉碎成粉末(80目)即得到成品。
结果
发酵实例：(2002-4-15罐批)
种子斜面批号：2002-4-4
种子培养情况：种子摇瓶25℃ 200转/分培养4天
子培养液较稠：菌球颗粒均匀φ0.5-1mm PH6.0±
2002-4-15罐批批报：
表1
  培养时数(小时)   温度(℃)   搅拌(转/分)     空气流量(v/v/min) PH   NH2-N(mg/100ml)   C(g/100ml)
  0   25   200     1∶1   6.0   50.2   2.71
  18   25   200     1∶1   6.0   44.0   2.59
  42   25   250     1∶1.5   5.5   28.0   2.03
  66   25   350     1∶2   5.5   22.4   1.07
  90   25   350     1∶2   5.5   16.8   0.35
90小时放罐，放罐发酵液稠、厚，菌浓＞60％(v/v)，色泽为米色，有清香味，镜检：无杂菌，菌丝染色深，菌丝体粗壮，有分枝。
(八)制备胶囊剂
将上述制得的蝉花菌丝体成品与药用辅料混合按常规方法装入胶囊。
用上述方法制得的发酵蝉花菌丝体质量鉴定结果如下：
三批发酵蝉花菌丝体样品
批号为011024，011116，011214。
1.性状：所送样品均为灰白色粉末，有腥味。
2.鉴别反应：
2.1.甾醇类化合物的鉴别反应：
取样品约1g，加无水乙醇5ml，振摇20分钟，滤过。取滤液1ml，置试管中，蒸干，残渣加冰醋酸0.5ml，溶解后加醋酐0.5ml，再加浓硫酸1滴，摇匀，溶液即显黄色、红色，最后成绿色，实验结果显示，本品含有甾醇类成分。
2.2.氨基酸的鉴别反应：取上述滤液1ml，加茚三酮试液3滴，置水浴加热3分钟即显蓝紫色，实验结果显示，本品含有氨基酸成分。
3.干燥失重
取样品约1g，按照2000年版中国药典附录IXG干燥失重测定法检测，(105℃干燥失重至恒重)样品干燥失重范围在4.37-8.40％，实验结果见表2。
4.炽灼残渣
取样品约1g，按照2000年版中国药典附录IX J炽灼残渣检查法检测，炽灼残渣范围在2.43-3.60％，实验结果见表2。
5.重金属
取样品约1g，按照2000年版中国药典附录IX F重金属检查法检测，样品重金属含量均＜30ppm，实验结果见表2。
6.砷盐
取样品约1g，按照2000年版中国药典附录IX F砷盐检查法检测，样品砷盐含量均＜5ppm，实验结果见表2。
7.含氮量
取本品约50mg，按照2000年版中国药典附录IX L氮测定法(第二法)检测，样品的含氮量在5.94-7.58％，实验结果见表2。
表2  实验结果
8.样品中腺苷成分的检测
仪器：waters 515泵  77251进样阀
      waters2487紫外双波长检测器
      Millennium32色谱工作站
色谱条件：色谱柱  inertsil ODS(4.6-250mm，5μ)
          流动相  磷酸二氢钾缓冲液(pH：6.5)∶CH3OH 85∶15
          检测波长  260nm
          流速  1.0ml/min
实验结果显示，发酵蝉花菌丝体中含有腺苷成分，蜂值为15.049。
本发明的另一目的是提供上述发酵蝉花菌丝体在用于制备治疗慢性肾功能衰竭药物中的应用。
蝉花菌丝体对大鼠慢性肾功能衰竭药效试验
1.试验目的：
用大鼠部分肾功能切除造成慢性肾功能衰竭模型评价蝉花菌丝体对大鼠慢性肾功能衰竭的药效。
2.受试药物：
2.1.蝉花菌丝体：
灰白色粉末，由上海医药工业研究院生物部提供，将蝉花菌丝体悬浮于0.5％CMC中配制成1.2g/10ml、0.6g/10ml两种浓度的混悬液。
2.2.蝉花：
蝉幼虫形个体，长约7-8cm，市场购入，产地浙江，粉碎成棕褐色粉末使用，将蝉花粉悬浮于0.5％CMC中配制成1.2g/10ml的混悬液。
2.3.金水宝胶囊：
江西金水宝制药有限公司生产，批号011111，每粒胶囊含虫草菌粉0.33g。将虫草菌粉悬浮于0.5％CMC中配制成2g/10ml的混悬液。
3.动物：
品名：SD大鼠
来源：中科院上海试验动物中心提供
动物合格证号：中科动管会第005号
体重：180-200g
性别：雄性
各组动物数：每组15只
4.试验方法：
(1)建立大鼠肾部分切除致慢性肾衰实验模型：用体重180-200g的雄性SD大鼠切除右肾和左肾的上下极，饲养5周测定血中BUN、CRE指标，与正常大鼠对照，初步形成肾衰大鼠进行实验。
(2)实验分正常大鼠组、阴性对照组、阳性药物(金水宝)对照组、蝉花对照组、蝉花菌丝体低、中、高三个剂量，共7组动物进行实验。
(3)在手术前、给药前(手术后6周)、给药后8周三次测定BUN、CRE指标。
(4)手术后第6周开始给药，给药后8周，测定指标后处死大鼠进行大体解剖观察。
5.剂量设置：
(1)正常大鼠对照。
(2)阴性对照：肾衰大鼠作阴性对照，口服0.5％CMC，1.5ml/100g体重，2次/天。
(3)阳性药对照：金水宝胶囊，2g/kg。
(4)蝉花：剂量：1.2g/kg。
(5)蝉花菌丝体低、中、高剂量：0.6g/kg、1.29/kg、2.4g/kg。
6.给药方法：
将药物混悬后灌胃给药，除蝉花菌丝体高剂量组为每天2次给药外，其他各组均为每天1次给药，连续给药8周。
7.试验结果：
全部数据经统计学处理以平均值±标准差(X±SD)表示，用t检验比较各组间各指标的显著性。见附表。结果表明：阳性药金水宝明显改善肾衰大鼠的BUN、CRE，蝉花菌丝体三级剂量都明显改善肾衰大鼠BUN、CRE，原蝉花亦明显改善肾衰大鼠的BUN、CRE。
停药后处死动物，肾衰组的大鼠肾脏有显著的代偿性增大，表面有手术后痕迹，和周围组织(大网膜、肠、脾等)有粘连，其他脏器肉眼观察无明显变化。
8.试验结论：
蝉花菌丝体及蝉花原药材对部分肾切除慢性肾衰大鼠的肾功能BUN、CRE均有明显的改善作用，蝉花菌丝体与阳性药金水宝的改善肾功能作用基本相同。试验结果表明，蝉花菌丝体对大鼠慢性肾功能衰竭有明显的治疗作用。
表3  蝉花菌丝体对慢性肾功能衰竭的治疗作用
              剂量        动物数                        BUN                                                 CRE
组别
              (g/kg)      (n)         给药前         给药后          给药前后差值       给药前           给药后            给药前后差值
正常                      13          9.8±1.0**    9.2±0.8**     -0.5±1.4**       34.8±5.7**      32.7±7.9**     -2.1±12.3
阴性对照                  13          19.7±2.2      25.2±2.5       5.4±2.1           69.4±9.0        118.8±28.8       49.5±23.0
                                                                                        67.8±9.0        74.9±14.5**     7.1±14.2**
金水宝        2           9           19.2±2.9      20.1±2.4**    1.0±3.9**
                                                                                        n＝8             n＝8              n＝8
蝉花          1.2         11          18.4±3.0      22.5±2.4*     4.1±3.1           69.1±13.5       86.9±12.2**     17.8±20.9**
          H   2.4         9           19.3±2.7      20.9±4.7*     1.6±3.3**        67.8±10.9       78.6±15.2**     10.8±11.8**
蝉花菌
          M   1.2         9           19.0±2.9      19.3±3.0**    0.2±1.6**        65.7±8.1        79.0±14.9**     13.3±14.1**
丝体
          L   0.6         11          19.0±2.0      21.8±2.8*     2.8±2.8*         66.5±6.6        85.9±17.9**     19.5±16.7**
具体实施方式
实施例1
一、实验目的
蝉花菌的分离，蝉花菌丝体培养、发酵工艺及成品获得提取工艺。
二、材料与方法
(一)固体斜面培养基(％)
(1)马铃薯浸出液             50
   葡萄糖                   2
   MgSO4.7SO4             0.02
   CaCO3                   0.02
   琼脂                     2
   PH                       自然
(2)玉米淀粉                 2
   黄豆粉                   1
   葡萄糖                   2
   MgSO4.7SO4            0.02
   CaCO3                   0.02
   琼脂                     2
   PH                       自然
(3)玉米淀粉                 2
   酵母粉                   1
   葡萄糖                   2
   MgSO4.7SO4             0.02
   CaCO3                   0.02
   琼脂                     2
   PH                       自然
(4)玉米淀粉                 2
   酵母提取物               1
   葡萄糖                 2
   MgSO4.7SO4           0.02
   CaCO3                 0.02
   琼脂                   2
   PH                     自然
(5)糊精                   2
   黄豆粉                 1
   葡萄糖                 2
   MgSO4.7SO4           0.02
   CaCO3                 0.02
   琼脂                   2
   PH                     自然
(6)玉米淀粉               2
   聚胨                   1
   葡萄糖                 2
   MgSO4.7SO4           0.02
   CaCO3                 0.02
   琼脂                   2
   PH                     自然
(二)种子培养基(％)
(1)马铃薯浸出液           50
   葡萄糖                 2
   MgSO4.7SO4           0.02
   CaCO3                 0.02
   PH                     自然
(2)玉米淀粉               2
   黄豆粉                 1
   葡萄糖                 2
   MgSO4.7SO4          0.02
   CaCO3                0.02
   PH                     自然
(3)玉米淀粉               2
   酵母粉                 1
   葡萄糖                 2
   MgSO4.7SO4           0.02
   CaCO3                 0.02
   PH                     自然
(4)玉米淀粉               2
   酵母提取物             1
   葡萄糖                 2
   MgSO4.7SO4           0.02
   CaCO3                 0.02
   PH                     自然
(5)糊精                   2
   黄豆粉                 1
   葡萄糖                 2
   MGSO4.7SO4           0.02
   CaCO3                 0.02
   PH                     自然
(6)玉米淀粉               2
   聚胨                   1
   葡萄糖                 2
   MGSO4.7SO4           0.02
   CaCO3                 0.02
   PH                     自然
(三)发酵培养基(％)
(1)马铃薯浸出液           50
   葡萄糖                 2
   MgSO4.7SO4          0.02
   CaCO3                 0.02
   (NH4)2SO4            0.05
   PH                     自然
(2)玉米淀粉               2
   黄豆粉                 1
   葡萄糖                 2
   MgSO4.7SO4          0.02
   CaCO3                0.02
   (NH4)2SO4           0.05
   PH                    自然
(3)玉米淀粉               2
   酵母粉                 1
   葡萄糖                 2
   MgSO4.7SO4          0.02
   CaCO3                0.02
   (NH4)2SO4           0.05
   PH                    自然
(4)马铃薯淀粉             2
   酵母浸出粉             0.8
   葡萄糖                 1
   蔗糖                   0.5
   MgSO4.7SO4           0.02
   CaCO3                 0.02
   (NH4)2SO4          0.05
   PH                    自然
(5)糊精                   2
   黄豆粉                 1
   葡萄糖                 2
   MgSO4.7SO4          0.02
   CaCO3                0.02
   (NH4)2SO4           0.05
   PH                      自然
(6)玉米淀粉                2
   聚胨                    1
   葡萄糖                  2
   MgSO4.7SO4           0.02
   CaCO3                 0.02
   (NH4)2SO4          0.05
   PH                     自然
(四)斜面种子培养
将固体培养基制成空白斜面，在25-37℃培养3天，检查无菌后，供接种用。接种后斜面于20-35℃恒温培养3-10天，经肉眼观察生长良好者(气生菌丝为白色绒毛状，孢子为绿青色)，可作为生产斜面备用。
(五)种子培养
种子培养工艺要求：培养温度        20-35℃
                  装量            50-80％(v/v)
                  空气流量        1∶1-1∶3(v/v/min)
                  搅拌            100-300转/分
                  培养时间        48-120小时
                  外观            菌液较稠，菌球颗粒细、均匀，
                                  色泽较白。
                  镜检            无杂菌，菌丝体染色深，充满
                                  原生质，菌丝体粗壮有分枝。
(六)发酵
发酵工艺要求：    培养温度        20-35℃
                  装量            50-80％
                  接种量          5-10％
                  周期            48-120hr
                  空气流量        1∶1-1∶3(v/v/min)
               搅拌    100-300转/分
               外观    培养液稠厚，湿菌体含量＞60％
                       (v/v)色泽为米色，有清香味
               镜检    无杂菌，菌丝体染色深，充满
                       原生质，菌丝体粗壮有分枝。
(七)成品获得提取工艺
放罐发酵液经过滤得到湿菌体，将湿菌体用冷冻干燥方法或低温真空干燥法或喷雾干燥法得到干燥菌体，然后粉碎成粉末(80目)。最后将此粉末分装得到胶囊成品。
三、结果
本文蝉花发酵菌种由本院独创。是从天然蝉花中分离出来的，经鉴定为拟青霉。
此菌种已经保藏(冷冻干燥保存)。
实施例2
发酵制备实例：
(1)2002-4-5罐批
斜面培养基：土豆浸出液50％、葡萄糖2％、CaCO30.02％、MgSO40.02％、琼脂2％。
种子培养基：土豆浸出液50％、葡萄糖2％、CaCO30.02％、MgSO40.02％。
发酵培养基：马铃薯淀粉2％、酵母浸出粉0.8％、葡萄糖1％、蔗糖0.5％、MgSO40.02％、CaCO30.02％、(NH4)2SO40.02％。
种子斜面批号：2002-3-24
种子培养情况：培养温度25℃，转速200转/分，装量300ml/1000ml培养4天。
种子培养液较稠：菌球颗粒均匀，φ0.5-1mm，PH6.0±
发酵培养情况：接种量5-10％，培养温度25℃，转速200-350转/分，装量6L/10L，培养90小时，通气量1∶1-1∶2。
2002-4-5罐批批报：
  培养时数(小时)     温度(℃)   搅拌(转/分)   空气流量(v/v/mm)     PH   NH2-N(mg/100ml)   C(g/100ml)
  0     25   200   1∶1     6.0   50.2   2.71
  18     25   200   1∶1     6.0   44.0   2.59
  42     25   250   1∶1.5     5.5   28.0   2.03
  66     25   350   1∶2     5.5   22.4   1.07
  90     25   350   1∶2     5.5   16.8   0.35
90小时放罐，放罐发酵液稠、厚，菌浓＞60％(v/v)，色泽为米色，有清香味，镜检：无杂菌，菌丝染色深，菌丝体粗壮，有分枝。
放罐体积：5.5立升。
经过滤后菌体湿重：564g。
经冷冻干燥后菌体干重：109g。
(2)2002-4-12罐批
斜面培养基：土豆浸出液50％、葡萄糖2％、CaCO30.02％、MgSO40.02％、琼脂2％。
种子培养基：土豆浸出液50％、葡萄糖2％、CACO30.02％、MgSO40.02％。
发酵培养基：马铃薯淀粉2％、酵母浸出粉0.8％、葡萄糖1％、蔗糖0.5％、MgSO40.02％、CaCO30.02％、(NH4)2SO40.02％.
种子斜面批号：2002-3-30
种子培养情况；培养温度25℃，转速200转/分，装量300ml/1000ml培养4天。
种子培养液较稠：菌球颗粒均匀，φ0.5-1mm，PH6.0±。
发酵培养情况：接种量5-10％，培养温度25℃，转速200-350转/分，装量6L/10L，培养90小时，通气量1∶1-1∶2。
2002-4-12罐批批报：
  培养时数(小时)   温度(℃)   搅拌(转/分)     空气流量(v/v/mm)     PH   NH2-N(mg/100ml)   C(g/100ml)
  0   25   200     1∶1     6.0   51.0   2.75
  18   25   200     1∶1     5.9   45.0   2.55
    42     25     250     1∶1.5     5.6     28.5     2.03
    66     25     350     1∶2     5.6     22.8     1.17
    90     25     350     1∶2     5.5     16.     0.38
90小时放罐，放罐发酵液稠、厚，菌浓＞60％(v/v)，色泽为米色，有清香味，镜检；无杂菌，菌丝染色深，菌丝体粗壮，有分枝。
放罐体积：5.4立升。
经过滤后菌体湿重；550g。
经冷冻干燥后菌体干重：105g。
(3)2002-4-19罐批
斜面培养基：土豆浸出液50％、葡萄糖2％、CaCO30.02％、MGSO40.02％、琼脂2％。
种子培养基：土豆浸出液50％、葡萄糖2％、CACO30.02％、MgSO40.02％。
发酵培养基：马铃薯淀粉2％、酵母浸出粉0.8％、葡萄糖1％、蔗糖0.5％、MgSO40.02％、
CACO30.02％、(NH4)2SO40.02％.
种子斜面批号：2002-4-6
种子培养情况：培养温度25℃，转速200转/分，装量300ml/1000ml培养4天。
种子培养液较稠：菌球颗粒均匀φ0.5-1mm，PH6.0±。
发酵培养情况：接种量5-10％，培养温度25℃，转速200-350转/分，装量6L/10L，培养90小时，通气量1∶1-1∶2。
2002-4-19罐批批报：
  培养时数(小时)     温度(℃)   搅拌(转/分)     空气流量(v/v/mm)     PH   NH2-N(mg/100ml)   C(g/100ml)
  0     25   200     1∶1     6.0   51.2   2.80
  18     25   200     1∶1     6.0   44.5   2.61
  42     25   250     1∶1.5     5.8   27.6   2.13
  66     25   350     1∶2     5.6   21.9   1.00
  90     25   350     1∶2     5.6   16.3   0.30
90小时放罐，放罐发酵液稠、厚，菌浓＞60％(v/v)，色泽为米色，
有清香味，镜检：无杂菌，菌丝染色深，菌丝体粗壮，有分枝。
放罐体积：5.7立升。
经过滤后菌体湿重：570g。
经冷冻干燥后菌体干重：11g。

Claims (2)

1、一种蝉花菌丝体胶囊剂，其特征在于该胶囊剂包括按重量百分比计算为70％-100％的蝉花菌丝体粉和30％-0％的药用常规辅料组成。
2、一种如权利要求1所述的一种蝉花菌丝体胶囊剂用于制备治疗肾功能衰竭药物。
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