CN118681001B - 一种含人白蛋白和葡萄糖的透析液及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及生物医药领域，尤其涉及一种含人白蛋白和葡萄糖的透析液及其制备方法。本发明的透析液包括人白蛋白、葡萄糖、渗透压调节剂、缓冲剂、稳定剂。其中，人白蛋白含量为4.4%~12.5%（w/w），葡萄糖的含量为1%~2.5%。本发明提供了一种低成本、品质高的透析液处方和制备工艺，具有良好的生物相容，可以避免患者在治疗过程中引起的副作用的危险下，对肾衰患者胆红素及肌酐等代谢产物的清除起关键作用。

Description

一种含人白蛋白和葡萄糖的透析液及其制备方法

技术领域

本发明涉及生物医药领域，尤其涉及一种含人白蛋白和葡萄糖的透析液及其制备方法。

背景技术

肾功能衰竭尿毒症常采用的治疗方式是透析，透析是从体内排出废物毒素和多余的水。采用透析技术患者能够维持生命，在发达国家透析龄长达20年以上。透析技术有两种：一种是血液透析，另一种是腹膜透析。腹膜透析是我们国家正在推广的一种新技术，适合我国国情。这个技术在我国才处于发展阶段，但它相比于血液透析具有能够居家治疗的特点，所以能够大大改善患者的生活质量，病人能够同正常人一样上班，工作和学习。由于不需要频繁往返医院，也适合广大农村偏远地区的肾病患者，所以我国正在不遗余力的推广这种治疗技术。

腹膜透析技术的原理是通过腹膜把体内的代谢物交换到腹膜透析液中，然后把透析液再排出体外。腹膜透析液是一种高渗透压的溶液，通过渗透压的原理发挥作用。

我国目前上市的腹膜透析液为以糖类为主要原材料的透析液。采用单糖或多糖作为透析液原材料，生物相容性较差，且生产工艺较为复杂。同时，现有的以糖类为主要原材料的腹膜透析液往往分为A液和B液，需要分别存放，使用时按比例混合使用，使用过程操作复杂。

尤其是现阶段的以葡萄糖为主的透析液，葡萄糖浓度越高，透析效果越好，但含糖的腹透液会使患者身体的糖负荷加重，或多或少的干扰血糖的水平，高糖透析液还会增加腹膜受损的机会。

随着医疗水平的快速发展，人白蛋白在医疗临床中的重要地位日益被生物医学领域普遍认可，源于其具有清除自由基，增加长链脂肪酸的溶解性；还可以作为抗肿瘤药物的递送系统。为研发一种新型的相容性好，制备简单、使用方便的透析液提供了新的研究方向。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种含人白蛋白和葡萄糖的透析液及其制备方法。提高透析液的生物相容性以及有效性，降低高糖对身体的糖负荷，降低对腹膜的损伤，对于毒素清除、改善健康有重要意义。

一方面，本发明提供了一种含有人白蛋白的透析液，包括：人白蛋白、抗氧化剂、渗透压调节剂、缓冲剂、稳定剂以及抗菌剂，其中人白蛋白的含量为4.4％～12.5％(w/w)；葡萄糖的含量为1％～2.5％(w/w)；渗透压调节剂的含量为0.2％～0.8％(w/w)；缓冲剂的含量为0.01％～0.1％(w/w)；稳定剂的含量为0.2％～1％(w/w)。

在本发明的实施例中，所述人白蛋白包括血源性人血白蛋白和重组人白蛋白中的一种或多种。优选地，所述人白蛋白为重组人白蛋白。其中，血源性人血白蛋白是指从健康人血液、血浆或特异免疫血浆中分离、提纯的白蛋白；重组人白蛋白是指利用重组DNA技术制备，用于治疗和预防疾病的白蛋白。

在本发明的实施例中，所述渗透压调节剂包括氯化钠，所述渗透压调节剂的含量为

0.2％～0.8％(w/w)。优选地，所述渗透压调节剂还可以包括微量的氯化钙或氯化镁，其中，氯化钙的含量为0.01～0.03％(w/w)，氯化镁的含量为0.002～0.006％(w/w)。

在本发明实施例中，所述缓冲剂包括乙酸盐和乳酸盐、碳酸氢盐、丙酮酸盐、柠檬酸盐中的一种或多种，所述缓冲剂的含量为0.01％～0.1％(w/w)。优选地，所述缓冲剂为乳酸盐，更优选的，所述缓冲剂为乳酸钠。

在本发明的实施例中，所述稳定剂包括聚山梨酯20、聚山梨酯40、聚山梨酯60、聚山梨酯80、泊洛沙姆407的一种或多种，所述稳定剂的含量为0.2％～1％(w/w)。优选地，所述稳定剂为聚山梨酯系列，更优选的地，所述稳定剂为聚山梨酯80。

在本发明的实施例中，所述透析液还包括抗氧化剂，其中所述抗氧化剂的含量为0.01～0.1％(w/w)。所述抗氧化剂包括亚硫酸钠、亚硫酸氢钠中的一种或多种。优选地，所述抗氧化剂为亚硫酸钠。

在本发明的一个优选实施例中，所述渗透液所述包括：人白蛋4.4％～12.5％(w/w)；葡萄糖的为1％～2.5％(w/w)；乳酸钠0.01％～0.1％(w/w)；氯化钠0.2％～0.8％(w/w)；聚山梨酯80为0.2％～1％(w/w)；亚硫酸钠0.01％～0.1％(w/w)；余量为注射用水。

在本发明的实施例中，本发明的透析液pH值为6.4～7.4，渗透压为300～380mOsm/Kg。

本发明第二方面提供了一种制备所述透析液的方法，包括如下步骤：

灭菌：将各组分中属于盐类的组分进行高温灭菌，温度：115℃～121℃，灭菌时间：15～60min；在本发明的实施例中，所述盐类组分包括亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、氯化盐、乙酸盐和乳酸盐、碳酸氢盐、丙酮酸盐、柠檬酸盐中的一种或多种，优选地，所述盐类组分包括乳酸钠、氯化钠、亚硫酸钠。在本发明优选地实施例中，所述灭菌温度为121℃，灭菌时间为30min。

配制：将各组分按含量比例添加入灭菌后的注射用水中，溶解并搅拌均匀，用特定孔径的过滤器进行除菌过滤；在本发明实施例中，按每1000ml加入各组分，各组分质量为：人白蛋白：44～125g、葡萄糖：10～25g、乳酸钠：0.1～1.0mg、氯化钠：2～8mg、聚山梨酯80：2～10mg、亚硫酸钠：0.1～1.0mg，其余为注射用水。在本发明实施例中，所述滤器的孔径为分别通过0.45μm、0.22μm过滤。

灌装：在超净工作台下，将步骤2)得到的滤液灌装到医用透析袋中，将灌装好的透析袋装入具有高阻隔的外包袋中，抽真空0.5～2min及充氮1～10min，封装，即得所述透析液。在本发明实施例中，步骤(3)所述医用透析袋为非PVC材质。

本发明的有益效果包括但不限于：

1.本发明提供了一种含人白蛋白和葡萄糖的透析液，以人白蛋白和葡萄糖为主要原材料，与现有的单独以糖类为主要原材料的透析液相比，组成成分简单，生物相容性更好，超滤功能增加，透析作用增强，达到治疗效果。

2.本发明提供的含人白蛋白和葡萄糖的透析液由人白蛋白和葡萄糖共同提供渗透压，能大幅度降低高浓度葡萄糖透析液的使用，对人体血糖的干扰降低，也减小了高糖透析液对腹膜的损伤。

3.本发明的透析液存储简单，不需要按照pH值或者为防止各组分间发生反应而分别存在储，使用时不需要按照配比混合使用，操作方便。

4.本发明还提供了含人白蛋白和葡萄糖的透析液的制备方法，制作工艺简单，具有很高的应用前景。

5.本发明提供的含人白蛋白和葡萄糖的透析液相较于以葡萄糖为准的透析液降解产物较低，稳定性高。

具体实施方式

下面通过具体实施方式对本发明作进一步详细说明，但只是用于帮助理解本发明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明，不对本发明构成任何限制。

定义：血源性人血白蛋白是指从健康人血液、血浆或特异免疫血浆中分离、提纯的白蛋白；

重组人白蛋白是指利用重组DNA技术制备用于治疗和预防的白蛋白。

材料来源：重组人白蛋白：通化安睿特生物制药股份有限公司自制，货号：ART101S；

血源性人血白蛋白：购自广东卫伦生物制药有限公司；

SD大鼠：购自江苏集萃药康生物科技有限公司；

葡萄糖腹膜透析液：购自华仁药业股份有限公司和石家庄四药股份有限公司；

使用的其他试剂和仪器，除特殊说明外，均为普通市售。

实施例1制备透析液

每1000ml透析液按重量计的成分组成，有效成份由表1所示，其余为灭菌后注射用水。

表1多种的含人白蛋白和葡萄糖的透析液的成分表

表1续表

每1000ml的透析液制备具体步骤如下：

1)采用灭菌后A级量筒量取灭菌后注射用水1000ml；

2)按照各个配方的组分构成，称取相应质量的各种盐类组分进行高温灭菌，于121℃灭菌30min；

3)按照配方称取：人白蛋白干粉，葡萄糖，聚山梨酯80等非盐类组分，和2)中获得的灭菌后的盐类组分至灭菌后烧杯中，加灭菌后注射用水1000ml，溶解，搅拌均匀，并通过孔径为0.45μm滤膜过滤滤去微粒，再采用0.22μm滤膜除菌过滤得到滤液，在超净工作台内将滤液灌装在医用透析袋中，将灌装好的医用透析袋装入具有高阻隔的外包袋中，抽真空0.5～2min及充氮1～10min，封装，即得对应序号的含人白蛋白和葡萄糖的透析液。

实施例2腹膜影响试验

实验动物：SD大鼠，雄性，体重200±10g，共260只，随机分为52组，每组5只，其中1～45组注射表1中序号1～45配方的含人白蛋白的透析液。46～52组为对照组，具体透析液信息如表2所示。

表2对照组透析液信息表

组别	透析液
		46	生理盐水
47	华仁药业股份有限公司1.5％G腹膜透析液(乳酸盐)
		48	华仁药业股份有限公司2.5％G腹膜透析液(乳酸盐)
49	华仁药业股份有限公司4.25％G腹膜透析液(乳酸盐)
		50	石家庄四药股份有限公司1.5％G腹膜透析液(乳酸盐)
51	石家庄四药股份有限公司2.5％G腹膜透析液(乳酸盐)
		52	石家庄四药股份有限公司4.25％G腹膜透析液(乳酸盐)

重组人白蛋白及血源性人血白蛋白透析液药效学实验

将各组的SD大鼠腹腔注射对应的透析液(100ml/kg)，每日一次，连续注射6周，透析结束。

滤量的测定

超透析结束后24h内，将1～52组中，每只SD大鼠均麻醉，并在腹腔注射0.9％生理盐水(100ml/kg)，4h后沿腹部白线剪开腹壁，量取腹腔液体，并测量透析总流出液的体积(ml)。实验结果如表3所示。

超滤量：超滤量＝最后出水量-25mL。

胆红素、肌酐浓度以及尿素氮含量的测定

取每只SD大鼠透析结束0h及4h血液标本和腹腔液体，血液标本以4000rpm/min，离心15min，腹透液标本以2000rpm/min，离心5min，测定流出液以及血浆中胆红素、肌酐浓度以及尿素氮含量，实验结果如表3所示。

胆红素清除率＝[透析液流出总体积ml x(透析液流出液中胆红素的浓度与血浆中胆红素的浓度比值)]；

肌酐清除率＝[透析液流出总体积ml x(透析液流出液中肌酐的浓度与血浆中肌酐的浓度比值)]；

尿素氮清除率＝[透析液流出总体积ml x(透析液流出液中尿素氮的浓度与血浆中尿素氮的浓度比值)]。

表3各组透析液的超滤实验和胆红素、肌酐浓度以及尿素氮含量实验结果

由表3可知，本发明的含重组人白蛋白的透析液的实验结果和含血源性人血白蛋白的透析液的实验组(1～45组)SD大鼠的超滤量，均明显高于采用0.9％的生理盐水透析液进行透析的46组和用市面上的含糖的腹膜透析液的对照组(47～52组)，本发明所述的重组人白蛋白透析液与血源性人血白蛋白透析液相比，超滤量结果接近，表明重组人白蛋白透析液具有与血源性人血白蛋白透析液相同的功效，且更接近于正常生理状况。

采用了本发明所述一种含人白蛋白和葡萄糖的透析液进行透析的1～45组SD大鼠的清除能力，均高于采用0.9％的生理盐水透析液进行透析的46组以及采用糖类透析液的47～52组；且采用本公司的重组人白蛋白制作的透析液，结果相对血源性人血白蛋白透析液，清除毒素方面表现更优异。

实施例3葡萄糖降解产物的测定

5-羟甲基糠醛：

供试品溶液制备：精密量取以上实施例1制得的一种含人白蛋白和葡萄糖的透析液适量以及市售葡萄糖透析液(约相当于葡萄糖0.1g)，置于10ml容量瓶中，加纯化水稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

对照品溶液制备：精密量取5-羟甲基糠醛对照品0.1g，置于10ml容量瓶中，加纯化水稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。

色谱条件：Thermo Vanquish Core，色谱柱：Waters Peptide BEH C18：1.7μm，4.6mm×300mm，流动相A为0.1％甲酸-水，流动相B为0.1％甲酸-乙腈，柱温：40℃，进样量：10μl。洗脱梯度见表4。

表4洗脱梯度

测定法精密量取供试品溶液与对照品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算，实验结果见表5。

表5葡萄糖降解产物的测定实验结果

由表5数据可以看出，本发明所述的一种含人白蛋白和葡萄糖的透析液(1-45组)中5-羟甲基糠醛含量均低于市售的葡萄糖透析液(47-52组)。表明本发明制备的含人白蛋白和葡萄糖的透析液中葡萄糖降解产物较低，稳定性高。

发明的制作方法工艺简单，操作方便，易于商业化生产，所制备的产品为一种含人白蛋白和葡萄糖的透析液，适用于肾功能衰竭患者使用，与以糖类为主的透析液相比，具有更优异的清除能力，且具有良好的生物相容性和药效性，开发前景广阔。

以上所述，仅为本发明的实施例而已，本发明的保护范围并不受这些具体实施例的限制，而是由本发明的权利要求书来确定。对于本领域技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的技术思想和原理之内所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种含有人白蛋白和葡萄糖的腹膜透析液，其特征在于，所述腹膜透析液包括：人白蛋白、葡萄糖、渗透压调节剂、缓冲剂和稳定剂，其中：

人白蛋白的含量为4.4%~12.5%（w/w）；

葡萄糖的含量为1%~2.5%（w/w）；

渗透压调节剂的含量为0.0002%~0.0008%（w/w），所述渗透压调节剂包括氯化钠；

缓冲剂的含量为0.00001%~0.0001%（w/w），所述缓冲剂为乙酸钠和乳酸钠、碳酸氢钠、丙酮酸钠、柠檬酸钠中的一种；

稳定剂的含量为0.0002%~0.001%（w/w），所述稳定剂为聚山梨酯80、聚山梨酯20、聚山梨酯40、聚山梨酯60、泊洛沙姆407中的一种。

2.根据权利要求1所述的腹膜透析液，其特征在于，所述人白蛋白为血源性人血白蛋白或重组人白蛋白。

3.根据权利要求1所述的腹膜透析液，其特征在于，所述渗透压调节剂还包括氯化钙或氯化镁。

4.根据权利要求1所述的腹膜透析液，其特征在于，所述腹膜透析液还包括抗氧化剂，所述抗氧化剂为亚硫酸钠或亚硫酸氢钠，抗氧化剂的质量分数为0.00001%~0.0001%（w/w）。

5.根据权利要求1所述的腹膜透析液，其特征在于，所述腹膜透析液包括：人白蛋白4.4%~12.5%（w/w）；葡萄糖1%~2.5%（w/w）；乳酸钠0.00001%~0.0001%（w/w）；氯化钠0.0002%~0.0008%（w/w）；聚山梨酯80为0.0002%~0.001%（w/w）；亚硫酸钠0.00001%~0.0001%（w/w），余量为注射用水。

6.一种制备权利要求1~5任一所述腹膜透析液的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）灭菌：将各组分中属于盐类的组分进行高温灭菌，温度：115℃~121℃，灭菌时间：15~60min；

2）配制：将各组分按含量比例添加入灭菌后的注射用水中，溶解并搅拌均匀，用0.45µm、0.22µm孔径的过滤器进行除菌过滤；

3）灌装：在超净工作台下，将步骤2)得到的滤液灌装到医用透析袋中，将灌装好的透析袋装入具有高阻隔的外包袋中，抽真空0.5~2min及充氮1~10min，封装，即得所述透析液。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤3）所述的医用透析袋为非PVC材质的透析袋。