CN118416180A - 一种水溶性姜黄粉及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种水溶性姜黄粉及其制备方法，所用原料为姜黄粉，β‑环状糊精、γ‑环状糊精、决明子提取物、食用盐，以95wt%食用酒精、纯净水为加工助剂，所用原辅料的质量比为：姜黄粉：β‑环状糊精：γ‑环状糊精：决明子提取物：食用盐=(1‑6)：(20‑30)：(45‑55)：(1‑5)：(0.05‑0.15)。本发明以姜黄为原料，常用食品原料为辅料，用物理加工技术进行生产，所生产的产品具有水溶性好，生物利用度高，安全性好，可作为食品、内服药品、外用药品、化妆品、消毒产品、医疗器械等的原料广泛使用。

Description

一种水溶性姜黄粉及其制备方法

技术领域

本发明涉及中药领域，具体涉及一种水溶性姜黄粉及其制备方法。

背景技术

姜黄，为姜科植物姜黄Curcuma longa L.的干燥根茎。冬季茎叶枯萎时采挖，洗净，煮或蒸至透心，晒干，除去须根。

姜黄素(curcumin)是姜黄中的多酚物质，是中药姜黄的主要成份，约含3％～6％，是植物界很稀少的具有二酮的色素，为二酮类化合物。临床上多用于活血、行气、止痛等；是国内外允许使用的天然食用色素之一，近年来研究发现它对抗氧化、抗肿瘤、预防老年痴呆、抗炎、免疫调节、抗动脉粥样硬化、降血糖、降血脂等生理和药理作用，且毒副作用小疗效确切的优势。姜黄素(curcumin)是一种天然化合物，具清除自由基的功效，现已报道姜黄素在体内外可以直接清除自由基(ROS和RNS),与其他多酚类化合物(白藜芦醇等)相比较，姜黄素对ROS的清除效果更佳。姜黄素与转录因子(Nrf2)有关且能增加细胞内还原型谷胱甘肽水平。姜黄素的抗氧化活性与其抑制脂过氧化反应,维持各种抗氧化酶的活性,如超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH)有关。

脂质过氧化反应是指在氧自由基诱发下在生物膜不饱和脂肪酸中的一系列自由基反应,是氧自由基诱导的有害变化之一；姜黄素抑制脂质过氧化反应是由于能清除参与过氧化反应的活性自由基。姜黄素对部分疾病的预防和治疗也被认为与其抗氧化功效有关。

大量研究表明，姜黄素有巨大的抗癌潜力，姜黄素可抑制多种癌细胞的增值，美国国立癌症研究所(NCI)将其列为第3代癌化学预防药物；随着研究的深入，发现其抗肿瘤的重要机制之一是诱导肿瘤细胞凋亡，耐药肿瘤细胞的研究中发现，姜黄素通过诱导肿瘤细胞凋亡参与逆转肿瘤细胞耐药。姜黄素通过调控caspase蛋白家族、细胞凋亡抑制蛋白Bcl-2家族、重要的肿瘤抑制通路P53参与调控细胞增值、DNA损伤及细胞凋亡，并且调控核转录因子NF-КB等多种因素诱导肿瘤细胞凋亡抑制增值。近年来,随着对其生理及药理活性的不断深入了解,姜黄素在疾病的预防和控制方面的功效引起了人们的重视,特别是发现姜黄对癌症、HIV、新冠病毒的疗效,不仅提高了姜黄在疾病预防和治疗方面的独特功效,而且对传统中草药的发展有很大促进作用。外用方面，姜黄素可以清除各种形式的自由基，调节过氧化物酶等的活性，抑制产生活性氧的酶活性，可以很容易的转移电子或提供氢原子来清除参与过氧化反应的活性自由基，激活细胞保护信号，逆转表皮细胞的氧化损伤；姜黄素可以通过减少炎症反应，让受损的皮肤更容易进入后期愈合阶段，如增生和重塑，从而优化伤口修复过程。

姜黄使用的瓶颈：姜黄中的姜黄素的水溶性很低(11ng/mL、25℃)，只有亿分之十几，导致其在体内的吸收率差、生物利用率低，在食品和药品等相关领域的应用也因此受到极大限制。因此，提高姜黄中姜黄素的水溶性和生物利用率是开发其潜在应用价值的关键所在。

目前使用的改进方法：(1)姜黄素脂质体、胶束、纳米乳液等技术，产品为乳状液体，姜黄素的相对生物利用度有所提升，缺点：使用大量表面活性剂，表面活性剂的溶血副作用，不易适用于食品药品中长期使用。(2)姜黄素无定形固体分散体，产品为水不溶分散体，提高了姜黄素的相对生物利用度，合成的高分子分散材料对胃肠道有刺激作用及受到食品药品法规的限制，实际应用受到限制。(3)对姜黄素进行化学修饰、化学方式形成复合物等方法来提高姜黄素的溶解度和相对生物利用度，缺点制备过程复杂、成本较高，杂质残留及有机溶剂残留，在食品药品中的广泛使用受到限制。

发明内容

为增加姜黄中姜黄素的溶解度和生物利用率，充分发挥其功效作用，本发明提供一种水溶性姜黄粉及其制备方法，以姜黄为原料，常用食品原料为辅料，用物理加工技术进行生产，所生产的产品具有水溶性好，生物利用度高，安全性好，可作为食品、内服药品、外用药品、化妆品、消毒产品、医疗器械等的原料广泛使用。

一种水溶性姜黄粉及其制备方法，其使用的姜黄为食品安全国家标准-食品添加剂-姜黄(GB 1886.60)，为过80目筛的粉末，为脂溶性成分；β-环状糊精、γ-环状糊精，独特的笼状结构可以包合姜黄素分子形成包合物,此时药物分子被包含于β-环状糊精、γ-环状糊精分子空腔中,具有很高的分散度,同时由于β-环状糊精、γ-环状糊精外部多羟基的亲水性,使包合物具有良好的可润湿性,从而达到对难溶性姜黄素的增溶效果。

由于β-环状糊精、γ-环状糊精的空腔大小不同，可对姜黄素分子不同大小的基团进行分别包合，起到协同效果。决明子提取物中的决明子胶作为稳定剂，对产品起到稳定作用。食用盐所含成分包括了铁、钙、锌、钾、钠、碘、氯等多种极性离子，通过离子化效应增强溶解度。

一种水溶性姜黄粉及其制备方法，产品溶解度好，其1g在水浴温度(98～100℃)时溶解于100mL水中，人体生物利用率优异，为普通姜黄的120倍左右。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种水溶性姜黄粉及其制备方法，所用原料为姜黄粉，β-环状糊精、γ-环状糊精、决明子提取物、食用盐为食品级辅料，以95wt％食用酒精、纯净水为加工助剂，所用原辅料的质量比为：姜黄粉(1-6)：β-环状糊精(20-30)：γ-环状糊精(45-55)：决明子提取物(1-5)：食用盐(0.05-0.15)。

优先地，所用原辅料姜黄粉：β-环状糊精：γ-环状糊精：决明子提取物：食用盐的质量比为：姜黄粉(2-5)：β-环状糊精(22-28)：γ-环状糊精(48-53)：决明子提取物(2-4)：食用盐(0.08-0.12)。

优先地，所用原辅料姜黄粉：β-环状糊精：γ-环状糊精：决明子提取物：食用盐的质量比为：姜黄粉(3)：β-环状糊精(25)：γ-环状糊精(50)：决明子提取物(3.5)：食用盐(0.10)。

所述的姜黄为：食品安全国家标准食品添加剂姜黄(GB 1886.60)，过80目筛的粉末。

所述的β-环状糊精为：食品安全国家标准食品添加剂β-环状糊精(GB 1886.180)所述的γ-环状糊精为：食品安全国家标准食品添加剂γ-环状糊精(GB 1886.353)所述的食用盐为：食品安全国家标准食用盐(GB 2721)

所述的决明子提取物为：植物提取物决明子提取物(T/CCCMHPIE 1.84)(中国医药保健品进出口商会标准)

优选的，所述决明子提取物购自西安中科达生物科技有限公司，规格：10:1(％)。所述的纯净水为：瓶装饮用纯净(GB 17323)

所述的食用酒精为：食用酒精(GB 31640)

水溶性姜黄粉的制备方法，包括以下步骤：

(1)在避光条件下，取配方量的姜黄粉，加入6-15重量倍95wt％食用乙醇搅拌10分钟成均匀的溶液备用。

(2)在反应釜中加入纯净水，搅拌状态下加入配方量的β-环状糊精，γ-环状糊精，决明子提取物以及食用盐，将食用盐配成30wt％-50wt％的溶液。

(3)设定搅拌转速150r/min-250r/min，在搅拌状态下缓缓从加料口中加入姜黄酒精溶液，20分钟加完。

(4)持续搅拌1.5-2.5小时。

(5)将料液泵入到真空浓缩器中进行浓缩，控制浓缩温度为65±3℃，真空度维持在0.01-0.06Mpa，将料液浓缩至固形物含量为65wt％-70wt％，冷藏备用。

(6)将浓缩后的物料进行常压热风循环干燥，干燥温度为84±3℃，干燥至水分≤5.0wt％块状干燥物。

(7)将干燥后的块状物用粉碎机进行过60目筛粉碎过筛，得到最终的水溶性姜黄粉。

具体实施方式

为了使本发明所述的内容更加便于理解，下面结合具体实施方式对本发明所述的技术方案做进一步的说明，但是本发明不仅限于此。

实施例1

步骤1、称量：按质量比分别称姜黄粉3份、β-环状糊精25份、γ-环状糊精50份、决明子提取物3.5份、食用盐0.10份。

步骤2、在避光条件下，取配方量的姜黄粉，加入10重量倍95wt％食用乙醇搅拌10分钟成均匀的溶液备用。

步骤3、在反应釜中加入纯净水，搅拌状态下加入配方量的β-环状糊精，γ-环状糊精，决明子提取物以及食用盐，将食用盐配成42wt％的溶液。

步骤4、设定搅拌转速190r/min，在搅拌状态下缓缓从加料口中加入姜黄酒精溶液，20分钟加完。

步骤5、持续搅拌2.0小时。

步骤6、将料液泵入到真空浓缩器中进行浓缩，控制浓缩温度为65±3℃，真空度维持在0.02-0.05Mpa，将料液浓缩至固形物含量为68wt％，冷藏备用。

步骤7、将浓缩后的物料置不锈钢盘中进行热风循环干燥，干燥温度为84±3℃，干燥物水分4.7wt％。

步骤8、将干燥后的块状物用粉碎机进行过60目筛粉碎过筛，得到最终的水溶性姜黄粉。

步骤9、送检

及时取样送检，送检产品填写送检单，写明产品名称、批号、规格、数量、生产日期等信息。

实施例2

步骤1、称量：按质量比分别称姜黄粉2份、β-环状糊精28份、γ-环状糊精53份、决明子提取物2份、食用盐0.12份。

步骤2、在避光条件下，取配方量的姜黄粉，加入15重量倍95wt％食用乙醇搅拌10分钟成均匀的溶液备用。

步骤3、在反应釜中加入纯净水，搅拌状态下加入配方量的β-环状糊精，γ-环状糊精，决明子提取物以及食用盐，将食用盐配成50wt％的溶液。

步骤4、设定搅拌转速250r/min，在搅拌状态下缓缓从加料口中加入姜黄酒精溶液，20分钟加完。

步骤5、持续搅拌1.5小时。

步骤6、将料液泵入到真空浓缩器中进行浓缩，控制浓缩温度为65±3℃，真空度维持在0.02-0.06Mpa，将料液浓缩至固形物含量为65wt％，冷藏备用。

步骤7、将浓缩后的物料置不锈钢盘中进行热风循环干燥，干燥温度为84±3℃，干燥物水分4.3wt％。

步骤8、将干燥后的块状物用粉碎机进行过60目筛粉碎过筛，得到最终的水溶性姜黄粉。

步骤9、送检

及时取样送检，送检产品填写送检单，写明产品名称、批号、规格、数量、生产日期等信息。

实施例3

步骤1、称量：按质量比分别称姜黄粉5份、β-环状糊精22份、γ-环状糊精48份、决明子提取物4份、食用盐0.08份

步骤2、在避光条件下，取配方量的姜黄粉，加入8重量倍95wt％食用乙醇搅拌10分钟成均匀的溶液备用。

步骤3、在反应釜中加入纯净水，搅拌状态下加入配方量的β-环状糊精，γ-环状糊精，决明子提取物以及食用盐，将食用盐配成35wt％的溶液。

步骤4、设定搅拌转速150r/min，在搅拌状态下缓缓从加料口中加入姜黄酒精溶液，20分钟加完。

步骤5、持续搅拌2.5小时。

步骤6、将料液泵入到真空浓缩器中进行浓缩，控制浓缩温度为65±3℃，真空度维持在0.01-0.05Mpa，将料液浓缩至固形物含量为70wt％，冷藏备用。

步骤7、将浓缩后的物料置不锈钢盘中进行热风循环干燥，干燥温度为84±3℃，干燥物水分3.6wt％。

步骤8、将干燥后的块状物用粉碎机进行过60目筛粉碎过筛，得到最终的水溶性姜黄粉。

步骤9、送检

及时取样送检，送检产品填写送检单，写明产品名称、批号、规格、数量、生产日期等信息。

1.产品技术要求

1.1.感官要求

感官要求应符合下表的规定。

1.2.溶解性

本品1g在水浴温度(98～100℃)时溶解于100mL水中。

1.3.鉴别

鉴别指标应符合下表的规定。

操作方法：称取0.1g试样，溶于5mL氢氧化钠溶液(0.05mol/L)中，此时呈玫瑰红色，滴加盐酸(1mol/L)到酸性后，溶液即由玫瑰红变为亮黄色。称取10mg试样，溶于5mL乙醇溶液(95％)中，超声20分钟，颜色为纯黄色微带绿色荧光，再加少量硫酸就变为玫瑰红色。

1.4.理化指标

理化指标应符合下表的规定。

1.5.污染物限量

污染物限量应符合GB 2762的规定；严于食品安全国家标准的指标应符合下表的要求。

项目	指标	试验方法
			铅(以Pb计)，mg/kg＜	1.0	GB5009.12

1.6.微生物指标

微生物指标应符合下表的规定。

项目	指标
		菌落总数，CFU/g≤	30000
大肠菌群，MPN/g≤	0.92
		霉菌和酵母，CFU/g≤	50
金黄色葡萄球菌≤	0/25g
		沙门氏菌≤	0/25g

2.产品溶解度等检测结果

3.产品人体生物利用度检测报告

3.1.检验结论：

本试验采用高效液相色谱-质谱法测定19名健康男性志愿受试者分别口服福建摩凡营养食品有限公司提供的水溶性姜黄150mg(以总姜黄素计)、厦门真誉生物科技有限公司提供的进口水分散性姜黄150mg(以总姜黄素计)及食品添加剂姜黄150mg(以总姜黄素计)后不同时刻血浆中姜黄素及其衍生物的浓度，绘制了血药浓度-时间曲线，并求出药代动力学参数，采用梯形法计算AUC值，以半对数作图法，由消除相末端的浓度计算t_1/2。

用高效液相色谱-质谱法测定血浆中姜黄素及其衍生物的浓度，血浆中内源性物质不干扰样品测定，标准曲线线性范围为2.2～1076ng/ml，定量下限为2.2ng/ml，提取回收率为67.0％～70.8％，批内和批间精密度与准确度均符合相关规定，符合生物样品分析要求。

3.2.采用Winnonlin 5.2.1软件计算得出的19名受试者食用水溶性姜黄、水分散性姜黄与食品添加剂姜黄相比较的生物利用度(F)的结果见表1。

表1 19名受试者食用水溶性姜黄、水分散性姜黄与食品添加剂姜黄相比较的生物利用度

水分散性姜黄与食品添加剂姜黄相比较的姜黄素相对生物利用度F为1260％；水溶性姜黄与食品添加剂姜黄相比较的姜黄素相对生物利用度F为12000％。

4.材料和方法

4.1.样品：进口水分散姜黄(厦门真誉生物科技有限公司，批号:N156051518)；食品添加剂姜黄原料(纯度:≥95％，河北绿川生物科技有限公，批号:

190316)；水溶性姜黄(福建摩凡营养食品有限公司，批号:20190903)，置阴凉干燥处保存。

4.2.受试对象

4.2.1.受试者纳入标准：(1)健康志愿者，男性，年龄18～40岁；(2)体重指数(BMI)在19～24(BMI＝体重(Kg)/身高(m)的平方)之间；(3)无心、肝、肺、肾、消化道、神经系统、精神异常及代谢异常等病史；(4)经体格检查血压、心电图、呼吸状况及肝、肾功能、血象均无异常者；(5)试验前2周内未服过任何其他药物；(6)3个月内无献血史；(7)试验前30天内未服过任何试验药物。

4.2.2.受试者排除标准：(1)年龄在18岁以下或40岁以上者；(2)妊娠或哺乳期妇女，对本样品过敏者；(3)合并有心、肝、肾和造血系统等严重疾病，精神病患者；(4)短期内服用与其他药物，影响到对结果的判断者；(5)

不符合纳入标准，未按规定食用受试样品，资料不全影响判断者。

4.3.试验设计与分组：采用双盲交叉试验中设计，尽可能考虑影响结果的主要因素如年龄、性别、饮食等，进行均衡性检验，以保证组间的可比性受试对象。

4.4.食用剂量及时间：19名试验对象(禁食过夜)先后服用这三种类姜黄粉末，各样品口服150mg(以总姜黄素计)，在食用三各种样品之间各有一周的洗脱期。食用产品后，12小时内1-8小时每小时抽血一次，8-12小时每2小时抽血一次，并进行血样分析(通过针刺采取血样)，从而确定姜黄素及其衍生物的血液浓度和相对吸收率

4.5.主要仪器、试剂及测试环境要求

4.5.1.试剂姜黄素对照品(批号:190112)(纯度:99.9％)，北京中科质检生物技术有限公司；甲醇、甲酸、乙腈、叔丁基甲醚(色谱纯)；蓖麻油(分析纯)；无水乙醇(分析纯)；超纯水(自制)

4.5.2.仪器Agilent高效液相色谱仪；Agilent单重四极杆质谱仪；ChemStationRev.B 03.01色谱工作站；电子天平；分析天平；离心机；微型旋涡混合仪；氮吹浓缩装置；振荡器。

4.5.3.心电图、X线透视机、B超扫描仪、生化分析仪、血球计数仪、血压计等。

5.入选及体检情况

21名健康男性志愿受试者参加筛选，在被告知所有与药物有关的可能不良反应后，签署知情同意书。受试者21(筛选号)筛选期血常规检查异常，不符合入选标准，最终入选的受试者为20名，其中受试者13(筛选号)由于个人原因退组，故最终入选并完成试验的为19名受试者。试验后对19名受试者进行全面体格检查，除受试者20(筛选号)WBC值升高(经医生判断超出正常值范围，但无临床意义)外，其余受试者体格检查值均正常(其中包括肾功能、肝功能、血常规及尿常规等体格检查指标)。结果见表2-1～表2-4

表2-1受试者筛选情况表

表2-2受试者情况

表2-3受试者试验前心电图，肝、肾功能，血、尿常规检测结果

受试者13(筛选号)由于个人原因中途退组；

受试者21(筛选号)由于血常规异常，不符合入选标准，未能入选。

表2-4受试者试验后心电图，肝、肾功能血、尿常规检测结果

*：超出正常值范围，但经医生判断无临床意义

6.试验食品原料

6.1.食品添加剂姜黄：含量:95％，河北绿川生物科技有限公，批号:190316；6.2.水分散姜黄：厦门真誉生物科技有限公司进口，批号:N156051518；

6.3.水溶性姜黄：福建摩凡营养食品有限公司制备，批号:20190903。

7.食用量及时间

参照国外已上市产品及文献资料，姜黄素日食用量为30mg，本试验用量为常用量的5倍，以确保可测性；食用前禁食过夜10小时以上，试验日晨空腹用250ml温开水搅拌食用，并做记录。

8.生物样品采集

受试者食用前禁食10小时以上，试验日晨空腹用250ml温开水搅拌食用，分别于食用前和食用后1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0，8.0，10.0，12.0小时经肘静脉置留针取前臂静脉血5ml，置肝素抗凝试管中，以3000rpm离心10分钟，分离血浆并保存于-20℃以下冰箱中备用

9.姜黄素血药浓度的测定

9.1.仪器与试药、试剂

9.1.1仪器

9.1.2试药与试剂

9.2.血浆样品分析方法

本试验采用高效液相色谱-质谱法测定19名健康男性志愿受试者食用三种不同的规格的样品后不同时刻血浆中姜黄素及其衍生物的浓度

9.2.1.姜黄素储备液及标准系列溶液的配制

精密称取姜黄素对照品10.76mg，置100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，制成浓度为107.6μg/ml姜黄素的储备液，以甲醇-水(1：1)稀释姜黄素储备液，配制姜黄素系列标准溶液。过程如表3所示(以上均遮光操作)。

表3姜黄素系列标准溶液配制过程

9.2.2.姜黄素质控系列标准溶液的配制

以甲醇-水(1：1)稀释姜黄素储备液，配制姜黄素QC系列溶液，过程如表4所示(以上均遮光操作)。

表4姜黄素质控系列标准溶液配制过程

9.2.3.内标溶液的配制

精密称取替硝唑对照品10.51mg(相当于替硝唑10.50mg)，置50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，即得浓度为210.0μg/ml的替硝唑内标储备液Ⅰ。精密量取内标储备液Ⅰ0.5ml，置100ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得浓度为1.050μg/ml的内标储备液Ⅱ。精密量取内标储备液Ⅱ8.0ml，置100ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得浓度为84.0ng/ml的内标溶液。

各储备液、标准系列溶液及内标溶液均以相应体积、经过校正的量瓶配制，并于4℃冰箱内保存备用。

9.2.4.色谱、质谱条件

9.2.4.1.色谱条件

色谱条件色谱柱C₁₈ XTerra MS分析柱(5μm，100×2.1mm.Waters，USA)；流动相为乙腈:水(含10mM醋酸铵)(80：20，v/v),流速为0.3ml/min，柱温为25℃。分析时间为2.0min

9.2.4.2.质谱条件

离子源为电喷雾电离源(ESI+)；电喷雾电压正离子模式为4500V；加热毛细管温度为350℃；雾化器温度为280℃；鞘气(N2)压力为30psi，辅气(N2)压力为25psi，碰撞气(Ar)压力为1.5mTorr；扫描峰宽为0.5Th；扫描时间为0.3s。扫描方式为选择反应监测(SRM)

9.2.4.3.血浆样品处理方法

血浆加入相应内标替硝唑溶液50μl，涡旋10s混匀，加入0.5ml叔丁基甲醚，涡旋120s,15000rpm离心5min，吸取400μl有机层至另一干净1.5ml离心管中，室温下真空挥干，加入100μl复溶液(乙腈:水(含10mM醋酸铵)(80:20，v/v))溶解，15000rpm离心5min，取上清80μl移入进样瓶中，10μl进样进行UPLC-MS/MS分析。

9.2.5.标准曲线及线性范围

精密量取空白血浆1.0ml，分别加入姜黄素系列标准溶液100μl，配制成血浆中姜黄素浓度为2.2、4.3、10.8、21.5、43.0、107.6、215.2ng/ml、1076ng/ml的血浆样品，按“血浆样品处理方法”项下同法试验，每一浓度进行双样本分析，制备姜黄素的标准曲线。以待测物浓度(ng/ml)为横坐标X，待测物与内标物的峰面积比值(AS/Ai)为纵坐标Y，用加权最小二乘法权重系数：1/X2)进行线性回归运算，求得的线性回归方程即为标准曲线方程。结果表明，姜黄素在2.2～1076ng/ml范围内与待测物和内标物峰面积之比线性关系良好，浓度测定结果均达到试验要求的精密度与准确度。三天方法确证的标准曲线结果见表5。

表5标准曲线(方法确证)

9.2.6.定量下限

精密量取空白血浆1.0ml，加入姜黄素标准溶液100μl，配制成血浆中姜黄素浓度为2.2ng/ml的血浆样品，按“血浆样品处理方法”项下同法试验，进行六样本分析，连续测定三批，并根据当批标准曲线计算每一样本测得浓度。结果表明，本试验所建立的高效液相色谱-质谱法测定血浆中姜黄素的定量下限可达2.2ng/ml。详见表6。

9.2.7.准确度与精密度

精密量取空白血浆1.0ml，分别加入不同浓度的姜黄素标准溶液100μl，配制成血浆中姜黄素浓度为4.8、19.4和193.7ng/ml的血浆样品(每浓度六样本分析)，按“血浆样品处理方法”项下同法试验，连续测定三批(与标准曲线同时进行)，计算血浆样品的浓度，求得方法的准确度与精密度。结果表明，本试验所建立的高效液相色谱-质谱法测定的批内和批间精密度均达到试验要求。详见表6。

表6定量下限及准确度与精密度

9.2.8.提取回收率

精密量取空白血浆1.0ml，分别加入不同浓度的姜黄素标准溶液100μl，配制成血浆中姜黄素浓度为4.8、19.4和193.7ng/ml的血浆样品(每浓度六样本分析)，按“血浆样品处理方法”项下同法试验，获得相应色谱峰面积；另取对应浓度的姜黄素标准溶液各800μl，分别加入替硝唑内标溶液400μl，以流动相400μl稀释成与血浆样品处理后浓度一致的体外样品，取50μl进样分析，获得相应色谱峰面积(六次测定的平均值)。以每一浓度两种处理方法的峰面积比值计算提取回收率。结果表明，姜黄素血浆样品的提取回收率符合有关规定，内标提取回收率稳定。详见表7-1～表7-2。

表7-1姜黄素提取回收率

表7-2内标提取回收率

9.2.9.基质效应

精密量取空白血浆1.0ml，除不加标准系列溶液和内标外，按“血浆样品处理方法”项下同法操作，吹干后向获得的残留物中加入浓度为48.4、193.7和1936.8ng/ml的姜黄素标准溶液100μl和内标溶液50μl及流动相50μl，涡旋1分钟，全部取出置1.5ml离心管中，离心3分钟(15000rpm)，取50μl进样分析获得相应色谱峰面积(每浓度六样本分析)；另取对应浓度的姜黄素标准溶液各800μl，分别加入替硝唑内标溶液400μl，以流动相400μl稀释成与血浆样品处理后浓度一致的体外样品，取50μl进样分析，获得相应色谱峰面积(六次测定的平均值)。以每一浓度两种处理方法的峰面积比值计算基质效应。结果表明，本方法的基质效应可以忽略不计。详见表8～表9。

表8姜黄素基质效应

表9内标基质效应

9.2.10.样品测定过程中的随行标准曲线及质量控制

受试者血浆样品测定按“血浆样品处理方法”项下同法试验，为减少系统误差，每批样品分析时，建立随行标准曲线计算血药浓度，随行标准曲线用加权最小二乘法(W＝1/X²)进行线性回归运算，同时平行测定低、中、高三个浓度(4.8、19.4和193.7ng/ml)姜黄素的质控样品，质控样品测定结果的RE在±15％之内，最多允许1/3不在同一浓度的质控样品结果超限，当批数据方可接受。结果表明，质控样品测定结果均符合有关规定。详见表10

表10姜黄素随行标准曲线及质控样品(QC)

*：溢出值，不参与统计

9.3.方法学小结

本试验建立了高效液相色谱-质谱法测定口服姜黄后不同时刻血浆中姜黄素的浓度，并进行了方法学确证。实验结果表明，本方法具有准确性好、灵敏度高等特点，符合有关要求，可以用于姜黄及姜黄素类产品的人体相对生物利用度研究。

10.数据质量保证

试验过程中现场技术人员按规定进行监察，并及时报告。数据录入时，均由2人以上复核，采用Winnonlin 5.2.1数据统计软件进行数据统计，以保证数据的一致性及准确性。

11.研究结果数据

11.1.食用食品添加剂姜黄的血药浓度数据表

表11-1 19名受试者口服食品姜黄后不同时刻姜黄素的血药浓度(ng/ml)

11.2.食用水分散性姜黄的血药浓度数据表

表11-2 19名受试者口服水分散性姜黄后不同时刻姜黄素的血药浓度(ng/ml)

11.3.食用水溶性姜黄的血药浓度数据表

表11-3 19名受试者口服水溶性姜黄原料后不同时刻姜黄素的血药浓度(ng/ml)

12.药代动力学参数

12.1.食用各类姜黄药代动力学参数

采用Winnonlin 5.2.1数据统计软件，计算19名受试者口服受试制剂或参比制剂后的药代动力学参数，结果见表12-1～表12-3

表12-1 19名受试者食用水溶性姜黄后的药动学参数

表12-2 19名受试者食用姜黄后的药动学参数

表12-3 19名受试者食用水分散性姜黄后的药动学参数

12.2.水溶性姜黄与姜黄相比较的相对生物利用率

生物利用度F应用各个受试者的AUC_0-t和AUC_0-∞分别计算：

F＝(AUC_0-t)_{水溶性姜黄均值}/(AUC_0-t)_姜黄均值×100％，

F＝(AUC_0-∞)_{水溶性姜黄均值}/(AUC_0-∞)_姜黄均值×100％。

19名受试者食用水溶性姜黄、水分散性姜黄与姜黄相比较的生物利用度(F)的结果见表13。

表13 19名受试者食用水溶性姜黄、水分散性姜黄与姜黄相比较的生物利用度

以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

Claims (5)

1.一种水溶性姜黄粉，其特征在于，所用原料为姜黄粉，β-环状糊精、γ-环状糊精、决明子提取物、食用盐，以95wt%食用酒精、纯净水为加工助剂，所用原辅料的质量比为：姜黄粉：β-环状糊精：γ-环状糊精：决明子提取物：食用盐=(1-6)：(20-30)：(45-55)：(1-5)：(0.05-0.15)。

2.根据权利要求1所述的水溶性姜黄粉，其特征在于，所用原辅料姜黄粉：β-环状糊精：γ-环状糊精：决明子提取物：食用盐的质量比为(2-5)：(22-28)：(48-53)：(2-4)：(0.08-0.12)。

3.根据权利要求1所述的水溶性姜黄粉，其特征在于，所用原辅料姜黄粉：β-环状糊精：γ-环状糊精：决明子提取物：食用盐的质量比为3：25：50：3.5：0.10。

4.根据权利要求1所述的水溶性姜黄粉，其特征在于，所述的姜黄粉为过80目筛的粉末。

5.根据权利要求1-4任一项所述的水溶性姜黄粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）在避光条件下，取配方量的姜黄粉，加入6-15重量倍 95wt%食用乙醇搅拌10分钟成均匀的溶液备用；

（2）在反应釜中加入纯净水，搅拌状态下加入配方量的β-环状糊精，γ-环状糊精，决明子提取物以及食用盐，将食用盐配成30wt%-50wt%的溶液；

（3）设定搅拌转速150r/min-250r/min，在搅拌状态下缓缓从加料口中加入姜黄酒精溶液，20分钟加完；

（4）持续搅拌1.5-2.5小时；

（5）将料液泵入到真空浓缩器中进行浓缩，控制浓缩温度为65±3℃，真空度维持在0.01-0.06Mpa，将料液浓缩至固形物含量为65wt%-70wt%，冷藏备用；

（6）将浓缩后的物料进行常压热风循环干燥，干燥温度为84±3℃，干燥至水分≤5.0wt%块状干燥物；

（7）将干燥后的块状物用粉碎机进行过60目筛粉碎过筛，得到最终的水溶性姜黄粉。