CN118340676A - 一种用于化妆品透皮促渗的多层阳离子脂质体的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于化妆品透皮促渗的多层阳离子脂质体的制备方法，属于生物技术领域，包括以下步骤：S1：加热1，2‑丙二醇；S2：加入卵磷脂、胆固醇和月桂酰精氨酸乙酯盐酸盐，持续加热并搅拌，直至制得A透明混合溶液；S3：加入去离子水，搅拌，直至制得B透明混合溶液；S4：继续搅拌B透明混合溶液，直至冷却至室温；S5：将B透明混合溶液放入储存箱中，低温保存，24h取出，制得多层阳离子脂质体；本发明不仅制备成本低，而且具有无毒、更小粒径、更高Zeta电位、更好包封效率、更好光稳定性、更好热稳定性和更好的透皮释放率的特点，能够应用于化妆品体系，同时可以显著延长包载活性物的半衰期以及24h内拥有更高的累积透过量且具有缓释能力。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于化妆品透皮促渗的多层阳离子脂质体的制备方法。
背景技术
阳离子脂质体是指基于脂质体而具有阳离子特性的纳米粒子，因其表面带有正电荷，易于被细胞吸收，在药物递送系统中显示出良好的应用前景。
目前的阳离子脂质体的构建多依赖于使用有机溶剂，不仅制备成本高，而且存在潜在的毒性问题，而且目前的阳离子脂质体由于其结构特点，往往在稳定性和包封效率方面表现不佳，导致其在透皮释放活性成分时效率低下，无法达到理想的治疗或美容效果，很难应用于化妆品体系。
鉴于此，设计一种用于化妆品透皮促渗的多层阳离子脂质体的制备方法，以解决上述问题。
发明内容
为解决上述背景技术中提出的问题。本发明提供了一种用于化妆品透皮促渗的多层阳离子脂质体的制备方法，具有不仅制备成本低，而且具有无毒、更小粒径、更高Zeta电位、更好包封效率、更好光稳定性、更好热稳定性和更好的透皮释放率的特点，能够应用于化妆品体系，同时可以显著延长包载活性物的半衰期以及24h内拥有更高的累积透过量且具有缓释能力的特点。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种用于化妆品透皮促渗的多层阳离子脂质体的制备方法，包括以下步骤：
S1：将1，2-丙二醇加入烧杯中，加热至特定温度；
S2：将卵磷脂、胆固醇和月桂酰精氨酸乙酯盐酸盐分别加入烧杯中，持续加热至特定温度，搅拌，直至卵磷脂、胆固醇和月桂酰精氨酸乙酯盐酸盐均匀溶于1，2-丙二醇中，制得A透明混合溶液；
S3：将去离子水加入烧杯中，搅拌，直至去离子水完全分散在透明混合溶液中，制得B透明混合溶液；
S4：继续搅拌B透明混合溶液，直至冷却至室温；
S5：将B透明混合溶液放入储存箱中，低温保存，24h取出，制得多层阳离子脂质体。
进一步的，所述步骤S1和S2中，特定温度为70℃。
进一步的，所述步骤S2中，卵磷脂、胆固醇和月桂酰精氨酸乙酯盐酸盐的添加量比值为10：1：10-10：1：30。
进一步的，所述步骤S2中，搅拌速度为700rpm/min。
进一步的，所述步骤S3中，搅拌速度为1600rpm/min，搅拌时间为10min。
进一步的，所述步骤S4中，搅拌速度为700rpm/min。
进一步的，所述步骤S4中，低温为4℃。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明通过引入月桂酰精氨酸乙酯盐酸盐作为阳离子表面活性剂，成功构建出带有正电荷的多层阳离子脂质体，不仅制备成本低，而且具有无毒、更小粒径、更高Zeta电位、更好包封效率、更好光稳定性、更好热稳定性和更好的透皮释放率的特点，能够应用于化妆品体系，同时可以显著延长包载活性物的半衰期以及24h内拥有更高的累积透过量且具有缓释能力。
附图说明
图1为本发明表征图；
图2为本发明NMR图；
图3为本发明NOESY 2D核磁实验图；
图4为本发明释药平衡时间曲线图；
图5为本发明对视黄醇的增溶实验图；
图6为本发明90℃热稳定性实验图；
图7为本发明紫外光光稳定性实验图；
图8为本发明单位面积累积透过量随时间的变化图；
图9为本发明荧光切片图；
图10为本发明荧光切片分析图。
图11为本发明细胞毒性分析图
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例一
本发明提供以下技术方案：一种用于化妆品透皮促渗的多层阳离子脂质体的制备方法，包括以下步骤：
S1：将1，2-丙二醇加入烧杯中，加热至70℃；
S2：将添加量比值为30：1：10的卵磷脂、胆固醇和月桂酰精氨酸乙酯盐酸盐分别加入烧杯中，持续加热至70℃，以700rpm/min的搅拌速度进行搅拌，直至卵磷脂、胆固醇和月桂酰精氨酸乙酯盐酸盐均匀溶于1，2-丙二醇中，制得A透明混合溶液；
S3：将去离子水加入烧杯中，以1600rpm/min的搅拌速度搅拌10min，直至去离子水完全分散在透明混合溶液中，制得B透明混合溶液；
S4：以700rpm/min的搅拌速度继续搅拌B透明混合溶液，直至冷却至室温；
S5：将B透明混合溶液放入储存箱中，4℃低温保存，24h取出，制得多层阳离子脂质体，命名为LAE-Ls-1。
实施例二
本发明提供以下技术方案：一种用于化妆品透皮促渗的多层阳离子脂质体的制备方法，包括以下步骤：
S1：将1，2-丙二醇加入烧杯中，加热至70℃；
S2：将添加量比值为10：1：10的卵磷脂、胆固醇和月桂酰精氨酸乙酯盐酸盐分别加入烧杯中，持续加热至70℃，以700rpm/min的搅拌速度进行搅拌，直至卵磷脂、胆固醇和月桂酰精氨酸乙酯盐酸盐均匀溶于1，2-丙二醇中，制得A透明混合溶液；
S3：将去离子水加入烧杯中，以1600rpm/min的搅拌速度搅拌10min，直至去离子水完全分散在透明混合溶液中，制得B透明混合溶液；
S4：以700rpm/min的搅拌速度继续搅拌B透明混合溶液，直至冷却至室温；
S5：将B透明混合溶液放入储存箱中，4℃低温保存，24h取出，制得多层阳离子脂质体，命名为LAE-Ls-2。
对比例一
常规脂质体的制备方法，包括以下步骤：
S1：将1，2-丙二醇加入烧杯中，加热至70℃；
S2：将添加量比值为10：1卵磷脂和胆固醇分别加入烧杯中，持续加热至70℃，以700rpm/min的搅拌速度进行搅拌，直至卵磷脂和胆固醇均匀溶于1，2-丙二醇中，制得A透明混合溶液；
S3：将去离子水加入烧杯中，以1600rpm/min的搅拌速度搅拌10min，直至去离子水完全分散在透明混合溶液中，制得B透明混合溶液；
S4：以700rpm/min的搅拌速度继续搅拌B透明混合溶液，直至冷却至室温；
S5：将B透明混合溶液放入储存箱中，4℃低温保存，24h取出，制得常规脂质体，命名为Ls。
对比例二
包载视黄醇脂质体的制备方法，包括以下步骤：
S1：将1，2-丙二醇加入烧杯中，加热至70℃；
S2：将添加量比值为30：1：10的卵磷脂、胆固醇、月桂酰精氨酸乙酯盐酸盐和视黄醇分别加入烧杯中，持续加热至70℃，以700rpm/min的搅拌速度进行搅拌，直至卵磷脂、胆固醇、月桂酰精氨酸乙酯盐酸盐和视黄醇均匀溶于1，2-丙二醇中，制得A透明混合溶液；
S3：将去离子水加入烧杯中，以1600rpm/min的搅拌速度搅拌10min，直至去离子水完全分散在透明混合溶液中，制得B透明混合溶液；
S4：以700rpm/min的搅拌速度继续搅拌B透明混合溶液，直至冷却至室温；
S5：将B透明混合溶液放入储存箱中，4℃低温保存，24h取出，制得多层阳离子脂质体，命名为VA-LAE-Ls-1。
对比例三
包载视黄醇脂质体的制备方法，包括以下步骤：
S1：将1，2-丙二醇加入烧杯中，加热至70℃；
S2：将添加量比值为10：1：10的卵磷脂、胆固醇、月桂酰精氨酸乙酯盐酸盐和视黄醇分别加入烧杯中，持续加热至70℃，以700rpm/min的搅拌速度进行搅拌，直至卵磷脂、胆固醇、月桂酰精氨酸乙酯盐酸盐和视黄醇均匀溶于1，2-丙二醇中，制得A透明混合溶液；
S3：将去离子水加入烧杯中，以1600rpm/min的搅拌速度搅拌10min，直至去离子水完全分散在透明混合溶液中，制得B透明混合溶液；
S4：以700rpm/min的搅拌速度继续搅拌B透明混合溶液，直至冷却至室温；
S5：将B透明混合溶液放入储存箱中，4℃低温保存，24h取出，制得多层阳离子脂质体，命名为VA-LAE-Ls-2。
对比例四
包载视黄醇脂质体的制备方法，包括以下步骤：
S1：将1，2-丙二醇加入烧杯中，加热至70℃；
S2：将添加量比值为10：1的卵磷脂、胆固醇和视黄醇分别加入烧杯中，持续加热至70℃，以700rpm/min的搅拌速度进行搅拌，直至卵磷脂、胆固醇和视黄醇均匀溶于1，2-丙二醇中，制得A透明混合溶液；
S3：将去离子水加入烧杯中，以1600rpm/min的搅拌速度搅拌10min，直至去离子水完全分散在透明混合溶液中，制得B透明混合溶液；
S4：以700rpm/min的搅拌速度继续搅拌B透明混合溶液，直至冷却至室温；
S5：将B透明混合溶液放入储存箱中，4℃低温保存，24h取出，制得多层阳离子脂质体，命名为VA-Ls。
表征验证：
将LAE-Ls-1、LAE-Ls-2、Ls、VA-LAE-Ls-1、VA-LAE-Ls-2和VA-Ls分别通过NanoBrook 90Plus PALS(Brookhaven，美国)Zeta电位及激光粒度分析仪测量脂质体的大小分布，对胶体体系中的纳米颗粒的布朗运动建立相关函数模型，计算出其运动的扩散系数DI，再通过Stokes-Einstein方程计算出颗粒的等效粒径(流体力学粒径或水合粒径)Dh，从而得到LAE-Ls-1、LAE-Ls-2、Ls、VA-LAE-Ls-1、VA-LAE-Ls-2和VA-Ls的粒径大小和多分散系数，结果如表1和说明书附图1所示；
在没有掺杂LAE的情况下，Ls和VA-Ls脂质体的直径约为700nm，而掺杂了LAE之后的LAE-Ls-1和VA-LAE-Ls-1的直径降低为400nm以下，增加LAE的加入量，LAE-Ls-2和VA-LAE-Ls-2的直径下降到200nm以下，即LAE的掺入导致粒径显著降低，而包覆了视黄醇后直径略有增加；
将LAE-Ls-1、LAE-Ls-2、Ls、VA-LAE-Ls-1、VA-LAE-Ls-2和VA-Ls分别通过NanoBrook 90Plus PALS(Brookhaven，美国)Zeta电位及激光粒度分析仪测量脂质体的Zeta电位，Zeta电位测量采用电泳光散射原理，带电颗粒在外加电场作用下进行运动，电荷运动使散射光产生频率漂移(多普勒频移)，采用频谱漂移分析技术，从而可计算出颗粒的电泳迁移率和Zeta电位，结果如表1所示；
未掺杂LAE的情况下，Ls和VA-Ls带轻微的负电荷，分别为-1.24±2.5mV和-0.83±2.3mVF；当加入了LAE后，LAE-Ls-1和VA-LAE-Ls-1的Zeta电位分别为+61.78mV和+61.66±3.21mV，LAE-Ls-2和VA-LAE-Ls-2的Zeta电位分别为+40.22±4.62mV和+42.35±5.13mV，即LAE的掺入对Zeta电位影响显著；
将LAE-Ls-1、LAE-Ls-2、Ls、VA-LAE-Ls-1、VA-LAE-Ls-2和VA-Ls分别通过冷冻电子透射显微镜(型号FEI Talos F200C(赛默飞))进行形貌表征，结果如说明书附图1所示；
证明了脂质体结构的存在，当卵磷脂和月桂酰精氨酸乙酯盐酸盐添加量比值相同时，即LAE-Ls-1，呈现多层洋葱型结构，当月桂酰精氨酸乙酯盐酸盐大于卵磷脂添加量比值时，即LAE-Ls-2，表现为更小囊泡；
对不同比例的卵磷脂-月桂酰精氨酸乙酯盐酸盐的混合物溶解在氘代甲醇的澄清溶液进行了1H NMR分析并收集其NMR图，以证明卵磷脂与月桂酰精氨酸乙酯盐酸盐之间的相互作用，结果如说明书附图2所示；
在保持卵磷脂质量不变的情况下不断提升月桂酰精氨酸乙酯盐酸盐的占比(从上到下)，4.59ppm(-CPOH-，H1)处的峰值逐渐消失；
月桂酰精氨酸乙酯盐酸盐可能通过与卵磷脂的磷酸基团相互作用，改变了卵磷脂磷酸基团上质子的弛豫时间，导致NMR信号强度下降；
卵磷脂在4.18ppm(-OCH-，H2)处的峰逐渐上移(化学位移增大)，表明-OCH-处可能存在和月桂酰精氨酸乙酯盐酸盐的相互作用，其他质子也存在相似的峰变化，因此证明了卵磷脂和月桂酰精氨酸乙酯盐酸盐存在相互作用；
但无法确定卵磷脂和月桂酰精氨酸乙酯盐酸盐通过哪些基团相互作用以及相互作用力的类型，因此做了NOESY 2D核磁实验，LAE-Ls-2的二维NOESY NMR光谱如说明书附图3所示，图中的箭头指向月桂酰精氨酸乙酯盐酸盐和卵磷脂疏水链上质子之间的交叉峰，具体来说，可以识别几种交互类型：H2/He代表卵磷脂的H2质子和月桂酰精氨酸乙酯盐酸盐的疏水链质子之间的交叉弛豫，表明月桂酰精氨酸乙酯盐酸盐嵌入到卵磷脂双层或胶束的疏水区域；H5/He代表卵磷脂的H5质子和月桂酰精氨酸乙酯盐酸盐的疏水尾部接近，再次表明脂质结构的疏水区域内存在相互作用；C＝CH/Hd峰代表月桂酰精氨酸乙酯盐酸盐分子中的不饱和键质子与卵磷脂中的Hd质子之间的相互作用，表明月桂酰精氨酸乙酯盐酸盐的不饱和区域与卵磷脂分子上特定位点的排列或相互作用，这里发挥作用的作用力类型主要是疏水相互作用，因为月桂酰精氨酸乙酯盐酸盐和卵磷脂都有疏水尾，它们会在水性环境中对齐，以尽量减少与水的接触，基于这些相互作用，可以推断，月桂酰精氨酸乙酯盐酸盐和卵磷脂可能形成混合胶束或双层结构，它们的疏水链很接近，由于不饱和键的存在而具有特定的排列。
包覆性能验证：
包封率(EE)是指脂质体等载体中包裹的活性分子与配制过程中添加的总量的比率，EE以百分比表示，公式如下：
其中，C1是透析前脂质体制样中视黄醇总的质量浓度(μg/mL)，V1是透析前脂质体制样的总体积(mL)，C2是透析后脂质体制样中视黄醇总的质量浓度(μg/mL)，V2是透析后脂质体制样的总体积(mL)，体积均通过移液管量取，质量浓度通过紫外可见光分光光度计测得吸光度带入标准曲线获得；
LAE-Ls-1、LAE-Ls-2、Ls、VA-LAE-Ls-1、VA-LAE-Ls-2和VA-Ls的包封率结果如表1所示，以30％的1，2-丙二醇的水溶液为释放介质，确保处于视黄醇的槽漏条件下，做出接受液中视黄醇浓度C对时间t的曲线，如说明书附图4所示；
药脂比(DL)是指包载入脂质体的药物与脂质体自身所含脂质(wt/wt)之比10，公式如下：
其中，menc为包载进脂质体药物的质量，mLipids为制备脂质体所需脂质的质量；
LAE-Ls-1、LAE-Ls-2、Ls、VA-LAE-Ls-1、VA-LAE-Ls-2和VA-Ls的药脂比结果如表1所示；
如说明书附图4所示，12h后，VA-LAE-Ls-1、VA-LAE-Ls-2和VA-Ls均处于平衡状态，药物浓度在12-24h内变化不大，稳定性良好，为保证柔性脂质体透析平衡完全，选择以12h为药物的透析平衡时间；
如表1所示，VA-LAE-Ls-1具有更高的包封率(EE)，为74.1±5％，同时具有更高的药脂比(DL)，为3.47±0.23％。
表1.脂质体的成分组成，以及它们的粒径、分散系数、Zeta电位、包封率和载药率
保护性能验证：
使用LAE-Ls-1、LAE-Ls-2、Ls、15％的1，2-丙二醇和水对视黄醇进行对比增溶，用紫外-可见分光光度计检测上述增溶的视黄醇浓度，结果如说明书附图5所示，视黄醇在空白组(H2O，pH＝7)中的溶解性非常小，15％的1，2-丙二醇水溶液对于视黄醇有一定的增溶作用，LAE-Ls-1、LAE-Ls-2和Ls对视黄醇的增溶效果明显，其中Ls-LAE-1的增溶效果最佳(由于Ls-LAE-1具有独特的多层结构能够包载更多的脂溶性药物)；
将VA-LAE-Ls-1、VA-LAE-Ls-2、VA-Ls和溶解在15％的1，2-丙二醇溶液中的视黄醇进行90℃热稳定性实验，如说明书附图6所示，溶解在15％1，2-丙二醇中的视黄醇在90℃下的半衰期约为3h，VA-LAE-Ls-1、VA-LAE-Ls-2和VA-Ls分别把视黄醇在90℃下的半衰期延长到了8h、5h和7h，热稳定性强；
将VA-LAE-Ls-1、VA-LAE-Ls-2、VA-Ls和溶解在15％的1，2-丙二醇溶液中的视黄醇进行紫外灯照射的光稳定性实验，如说明书附图7所示，VA-LAE-Ls-1表现出更好的紫外光保护能力，使得视黄醇在紫外光照射下的半衰期延长到0.5h左右，VA-Ls和VA-LAE-Ls-2也展现出不错的紫外光保护能力，使得视黄醇在紫外光照射下的半衰期延长到了20min以上。
透皮性能验证：
在15％的1，2-丙二醇水溶液中添加进视黄醇，制备出的命名为VA-15％PG；
将膜固定于LOGAN干加热透皮扩散仪供给池和接收池连接处，膜亮面朝向供给池，30％丙二醇水溶液作为接收介质，运行仪器排出气泡以保持接受液与接触，分别在供给池添加1m的VA-LAE-Ls-1、VA-LAE-Ls-2、LVA-Ls和VA-15％PG，并在上方覆盖铝箔纸避免光照，在37℃恒温下以600r/min恒速搅拌，分别于试验开始的不同时间段内取样5mL，通过紫外-可见光分光光度计测得取样液中视黄醇的吸光度，得到对应的浓度并计算不同时间段内的单位面积累积透皮吸收量Q，绘制单位面积内的累积透皮吸收量Q相对于时间t的透皮吸收曲线，结果如说明书附图8所示，数据显示，经过24h，VA-LAE-Ls-1、VA-LAE-Ls-2和VA-Ls的视黄醇渗透量显著高于VA-15％PG，VA-Ls的视黄醇渗透量显著低于VA-LAE-Ls-1和VA-LAE-Ls-2，其能够明确指出多层阳离子脂质体增强了视黄醇穿透人造皮肤膜的能力；
VA-LAE-Ls-1和VA-LAE-Ls-2的视黄醇渗透率增加是因为LAE的存在，阳离子表面活性剂嵌插在脂质体膜中使脂质体表面带有正电性，由于其表面的正电荷，可以与人造皮肤表面的负电荷物质如表层的角质层产生电荷吸引，从而提高脂质体对人造皮肤的黏附性，这种增强的黏附性有助于提高脂质体在人造皮肤表面的停留时间，增加药物穿透人造皮肤的机会；同时是因为VA-LAE-Ls-1在形成过程中产生了“洋葱型”的多层结构，具有更高的包载能力，使它们能够包载更多的视黄醇，这可以导致从这些多层脂质体中释放出更多的视黄醇，从而增加累积渗透量，同时具有更缓慢的药物释放速率，这种缓慢的释放可能有助于维持药物浓度的持续时间更长，导致更高的累积渗透量；
罗丹明B(RhB)作为荧光示踪剂，使用LAE-Ls-1、LAE-Ls-2和Ls分别负载罗丹明RhB局部均匀施用在猪皮上，随着时间的推移(30min、1h、4h和8h)，荧光示踪剂在皮肤层中的定位逐渐增加，并分布滞留在不同的皮层中，局部施用不同制剂1h后，在所有皮肤层中观察到皮肤的荧光，到达皮下脂肪组织，如说明书附图9所示，对说明书附图9进行荧光分析并归纳不同皮肤层对应光强可以得到RhB在所在皮层的覆盖率，由此可知脂质体制剂渗透并滞留的区域，分析结果如说明书附图10所示，RhB-LAE-Ls-2由于更小的粒径在30min后迅速递送到Hypodermis并主要滞留在Hypodermis，1h后观察到三组的渗透深度增加，穿透深度在4和8h后没有显著变化，与其他试剂相比，RhB-LAE-Ls-1具有更高的荧光强度并且在Epidermal具有更多的分布，随着时间的推移荧光强度下降不明显，说明多层结构有利于保护RhB，RhB-LAE-Ls-1在毛囊和角质层中的停留时间明显更长，荧光切片的结果显示，LAE-Ls-1和LAE-Ls-2在施用后8h都表现出最高的渗透，荧光标记的阳离子脂质体制剂通过皮肤层增强的穿透能力进一步证实了这种高穿透能力。
毒性验证：
将1.0×105个/mL HaCat细胞进行96孔板铺板，培养24h；
配制1600μg/mL LAE-Ls-1、LAE-Ls-1和Ls，将LAE-Ls-1、LAE-Ls-1和Ls分别用含10％的胎牛血清，培养基稀释至1000、800、400、200、100和50μg/mL，通过显微镜观察细胞的生长状态，吸出培养瓶中的培养基并弃之，将样品分别加入100μL，每组设置5组平行，并设置阴性对照和空白对照组，培养24h，次日，配制10mLCCK-8溶液，将孔板内溶液弃掉，并用PBS清洗2-3次细胞，每孔加入100μLCCK-8溶液，反应40min后即可取出；
使用酶标仪450nm波长检测，通过公式(1)计算出细胞存活率；
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (7)
1.一种用于化妆品透皮促渗的多层阳离子脂质体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：将1，2-丙二醇加入烧杯中，加热至特定温度；
S2：将卵磷脂、胆固醇和月桂酰精氨酸乙酯盐酸盐分别加入烧杯中，持续加热至特定温度，搅拌，直至卵磷脂、胆固醇和月桂酰精氨酸乙酯盐酸盐均匀溶于1，2-丙二醇中，制得A透明混合溶液；
S3：将去离子水加入烧杯中，搅拌，直至去离子水完全分散在透明混合溶液中，制得B透明混合溶液；
S4：继续搅拌B透明混合溶液，直至冷却至室温；
S5：将B透明混合溶液放入储存箱中，低温保存，24h取出，制得多层阳离子脂质体。
2.根据权利要求1所述的一种用于化妆品透皮促渗的多层阳离子脂质体的制备方法，其特征在于：所述步骤S1和S2中，特定温度为70℃。
3.根据权利要求1所述的一种用于化妆品透皮促渗的多层阳离子脂质体的制备方法，其特征在于：所述步骤S2中，卵磷脂、胆固醇和月桂酰精氨酸乙酯盐酸盐的添加量比值为10：1：10-10：1：30。
4.根据权利要求1所述的一种用于化妆品透皮促渗的多层阳离子脂质体的制备方法，其特征在于：所述步骤S2中，搅拌速度为700rpm/min。
5.根据权利要求1所述的一种用于化妆品透皮促渗的多层阳离子脂质体的制备方法，其特征在于：所述步骤S3中，搅拌速度为1600rpm/min，搅拌时间为10min。
6.根据权利要求1所述的一种用于化妆品透皮促渗的多层阳离子脂质体的制备方法，其特征在于：所述步骤S4中，搅拌速度为700rpm/min。
7.根据权利要求1所述的一种用于化妆品透皮促渗的多层阳离子脂质体的制备方法，其特征在于：所述步骤S4中，低温为4℃。
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