CN118290581A

CN118290581A - 抗cd138抗体及其制备方法以及应用和产品

Info

Publication number: CN118290581A
Application number: CN202410392161.3A
Authority: CN
Inventors: 张洋; 范建宏; 褚冰儿; 赵鑫萍; 徐飞; 张娅
Original assignee: Zhejiang Zhengxi Biotechnology Co ltd
Current assignee: Zhejiang Zhengxi Biotechnology Co ltd
Filing date: 2024-04-02
Publication date: 2024-07-05

Abstract

本发明属于抗体领域，具体涉及抗CD138抗体及其制备方法以及应用和产品。本发明提供一种抗CD138抗体，其重链CDR区氨基酸序列选自SEQ ID NO.1‑2和PHY，轻链CDR区氨基酸序列选自SEQ ID NO.3‑5。本发明提供的抗CD138抗体与CD138抗原具有较好的结合能力和特异性，能够用于制备表达抗CD138抗体的基因工程细胞，从而实现大量制备，在肿瘤诊断、病情进展、转移潜能和预后的评价等方面具有很大的潜在价值。

Description

抗CD138抗体及其制备方法以及应用和产品

技术领域

本发明属于抗体领域，具体涉及抗CD138抗体及其制备方法以及应用和产品。

背景技术

CD138也被命名为syndecan-1，是四种跨膜蛋白syndecan家族的成员，能够结合硫酸肝素和硫酸软骨素分子。其主要功能是控制细胞的生长和分化，维持细胞的粘附和迁移。CD138抗体在人造血细胞中的表达仅限于正常骨髓中的浆细胞，人骨髓中早期B细胞前体CD138阴性。CD138可能有助于区分活的骨髓瘤细胞和凋亡细胞，也在内皮细胞、成纤维细胞、角质形成细胞和正常肝细胞中表达。CD138可表达在各种来源的肿瘤细胞表面，包括骨髓瘤、卵巢癌、乳腺癌、肝癌、何杰金氏病及与某些HIV有关的淋巴瘤。当正常细胞恶变后，细胞膜表面CD138分子的表达常发生改变，并且与肿瘤的恶性程度、预后有一定相关性。CD138是一种粘附分子，它在肿瘤细胞膜表面表达减少或者缺失，使细胞的生长、分化等行为发生紊乱，导致了瘤细胞大量繁殖，表现出极强的侵袭活性和转移特性。

CD138与肿瘤的发生、发展有一定的相关性，并与肿瘤的分型、分化、分期有一定关系。因此可根据癌组织中CD138表达程度来判断肿瘤分型，并采取相应治疗手段。CD138可促进细胞与细胞，细胞与基质之间的粘附作用，其具有抑制肿瘤细胞生长、侵袭和转移的特性，可用于肿瘤的免疫或基因治疗。随着分子生物学的不断发展，癌基因研究的不断深入，CD138在肿瘤诊断、病情进展、转移潜能和预后的评价等方面具有很大的潜在价值。

当前，针对CD138的鼠源抗体或者嵌合抗体(如BB4)被用于临床研究，但是这些抗体由于免疫原性的问题，很容易被人体免疫系统识别而被清楚。同时，处于对非临床研究的需要，能与猴CD138结合也是抗体选择考量的因素。之前已知的发明中的抗体(BT062)无法与猴CD138结合，同时该抗体需要与毒素偶联来达到杀伤肿瘤细胞的作用。

专利CN 115960231 A提出了一种抗CD138的抗体及其应用，该抗体包括选自下列至少之一的CDR序列或与其具有至少95％同一性的氨基酸序列：重链可变区CDR序列：SEQID NO:1-3，轻链可变区CDR序列：SEQIN NO:4-6。该发明实施例的抗体能够与CD138进行结合，能够有效治疗和/或预防CD138介导的相关疾病。

为了满足抗CD138的抗体的应用需求，仍需开发其他的更加有效且安全性高的靶向CD138的抗体药物。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种抗CD138抗体的具体氨基酸序列，通过该序列可以利用现有技术获得表达抗CD138抗体的基因工程细胞，提高了CD138抗体的产率和生产稳定性，并且该抗体亲和力高，特异性强，可用于对疾病进行明确的病因诊断，并为鉴别诊断提供依据。

术语：

本发明中，CDR(complementarity-determining regions，CDR)叫做互补决定区或互补决定簇。它位于免疫球蛋白的超变区，超变区是抗体的抗原结合位，与抗原决定簇的结构互补。一般包括CDR1、CDR2、CDR3。

本发明中，可变区指免疫球蛋白轻链和重链靠近N端氨基酸序列变化较大的区域称为可变区。

本发明中，重链指抗体中2条较长、相对分子量较大的相同的重链(H链)；轻链指抗体中2条较短、相对分子量较小的相同的轻链(L链)。

本发明中，相似性指同源蛋白质的氨基酸序列中一致性和可取代氨基酸所占的比例。

本发明中，单克隆抗体指由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。

本发明中，鼠源化抗体指将来源于免疫接种过的小鼠的B细胞与骨髓瘤细胞融合，得到的鼠杂交融合细胞分泌的抗体。

一方面，本发明提供了一种抗CD138抗体，所述的抗CD138抗体包括重链和轻链，所述的重链包括重链链可变区，所述的轻链包括轻链可变区；所述的重链可变区包括HCDR1、HCDR2、HCDR3，所述的轻链可变区包括LCDR1、LCDR2、LCDR3，其中：

(1)HCDR1为SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；

(2)HCDR2为SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列；

(3)HCDR3为SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列；

(4)LCDR1为SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列；

(5)LCDR2为SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列；

(6)LCDR3为SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列。

具体地，所述的抗CD138抗体重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.6或与SEQ IDNO.6具有80％以上序列相似性的序列；

所述的抗CD138抗体轻链可变区的氨基酸为SEQ ID NO.7或与SEQ ID NO.7具有80％以上序列相似性的序列；

优选地，所述的抗CD138抗体重链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO.6；轻链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO.7。

具体地，所述的抗CD138抗体重链氨基酸序列为SEQ ID NO.8，或与SEQ ID NO.8具有65％以上序列相似性的序列；

所述的抗CD138抗体轻链氨基酸序列为SEQ ID NO.9，或与SEQ ID NO.9具有65％以上序列相似性的序列。

优选地，所述的抗CD138抗体重链氨基酸序列为SEQ ID NO.8，轻链氨基酸序列为SEQ ID NO.9。

具体地，所述的抗CD138抗体为单克隆抗体；优选为鼠源化抗体或兔源抗体。

另一方面，本发明提供了表达前述的抗CD138抗体的核酸。

所述的核酸序列可以是通过密码子简并性优化后的序列，用于编码前述的抗CD138抗体均可。

优选地，重链SEQ ID NO.8对应的核酸序列为SEQ ID NO.10，轻链SEQ ID NO.9对应的核酸序列为SEQ ID NO.11。

再一方面，本发明提供了包括前述的核酸的表达载体。

所述的表达载体可以是质粒、噬菌体、病毒。

又一方面，本发明提供了表达前述的抗CD138抗体或核酸或表达载体的细胞。

所述的细胞的作用在于可以高效表达抗CD138抗体。

具体地，所述的细胞可以是HEK293或CHO。

又一方面，本发明提供了制备前述的抗CD138抗体的方法，所述的方法中包括培养前述的细胞。

所述的方法中还可能包括抗体纯化步骤。

所述的抗体纯化步骤可以是沉淀法、广谱亲和纯化、抗原特异性纯化、离子交换法。

又一方面，本发明提供了对前述的抗CD138抗体进行荧光标记的方法，所述的方法中包括使用大分子染料或小分子染料对抗CD138抗体进行标记。

优选地，所述的大分子染料为APC，所述的小分子染料为FITC。

又一方面，本发明提供了前述的抗CD138抗体或核酸或表达载体或细胞在CD138检测中的应用，所述的应用为非疾病诊断或治疗的应用。

所述的应用为通过抗体抗原结合实现。

所述的应用可以是检测浆细胞中的CD138。

又一方面，本发明提供了前述的抗CD138抗体或核酸或表达载体或细胞在制备CD138检测试剂盒中的应用。

具体地，所述的试剂盒中还包括其他用于CD138检测的试剂，如：缓冲液、样品处理剂。

具体地，所述的试剂盒中还可以包括用于荧光标记抗体的分子。

进一步具体地，所述的分子可以是大分子染料或小分子染料。

优选地，所述的大分子染料为APC，所述的小分子染料为FITC。

又一方面，本发明提供了一种CD138检测方法，所述的检测方法通过前述的抗CD138抗体进行检测。

具体地，所述的检测方法中还可以包括样品前处理步骤。

所述的前处理步骤为样本的采集及处理。

优选地，所述的检测方法非疾病诊断或治疗方法。

又一方面，本发明提供了一种CD138检测试剂盒，所述的试剂盒中包括前述的抗CD138抗体或核酸或表达载体或细胞。

优选地，所述的大分子染料为APC，所述的小分子染料为FITC。

本发明的有益效果：

本发明提供了一种抗CD138抗体蛋白序列，能够用于制备表达抗CD138抗体的细胞，从而实现大量制备，该抗体与CD138具有较好的结合能力和特异性，为CD138的检测提供了更便利的条件。

附图说明

图1为鼠抗人CD138外购和自制纯抗SDS凝胶电泳图。

图2为不加CD138抗体的空白对照流式检测图。

图3为外购Biolegend鼠抗人CD138[MI15]-APC流式检测图。

图4为自制鼠抗人CD138[ZXCloneHCD138-02]-APC流式检测图。

图5为对照组的特异性检测结果。

图6为自制鼠抗人CD138[ZXCloneHCD138-02]特异性检测图。

图7为Biolegend鼠抗人CD138[W20051E]效价检测图。

图8为自制鼠抗人CD138[ZXCloneHCD138-02]效价检测图。

具体实施方式

下面结合具体实施例，对本发明作进一步详细的阐述，下述实施例不用于限制本发明，仅用于说明本发明。以下实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1抗体的制备及检测

制备了一种抗CD138抗体，为CD138鼠抗，命名为为鼠抗人CD138[ZXCloneHCD138-02]抗体。

CD138[ZXCloneHCD138-02]重链CDR区氨基酸序列选自SEQ ID NO.1-2和PHY，轻链CDR区氨基酸序列选自SEQ ID NO.3-5，重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.6，轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.7，重链氨基酸序列为SEQ ID NO.8，轻链氨基酸序列为SEQID NO.9。常规方法设计表达相应抗体的核苷酸序列，重链SEQ ID NO.8对应的核酸序列为SEQ ID NO.10，轻链SEQ IDNO.9对应的核酸序列为SEQ ID NO.11。将核苷酸序列克隆至CHO稳转株后进行抗体稳转表达，进一步将构建载体导入CHO细胞。

SEQ ID NO.1：SSWMH；

SEQ ID NO.2：EIHPNGGNTYYNEKFKG；

SEQ ID NO.3：RCRQSLVHSNGNTYLQ；

SEQ ID NO.4：RVSNRFS；

SEQ ID NO.5：SQSTHVPHT；

SEQ ID NO.6：

QVQLQQPGSVLVRPGASVKLSCKTSGYTFTSSWMHWAKQRPGQGLEWI GEIHPNGGNTYYNEKFKGKATLSVDTSSSTAYVDLSSLTSEDSAVYFCATPHY WGQGTTLTVSS；

SEQ ID NO.7：

DVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRCRQSLVHSNGNTYLQWYLQKPGQSPI LLIYRVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHVPHTFG AGTKLELKRA；

SEQ ID NO.8：

QVQLQQPGSVLVRPGASVKLSCKTSGYTFTSSWMHWAKQRPGQGLEWIGEIHPNGGNTYYNEKFKGKATLSVDTSSSTAYVDLSSLTSEDSAVYFCATPHYWGQGTTLTVSSAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMDTDGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGK；

SEQ ID NO.9：

DVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRCRQSLVHSNGNTYLQWYLQKPGQSPILLIYRVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHVPHTFGAGTKLELKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC；

SEQ ID NO.10：

CAAGTGCAGCTGCAGCAGCCTGGCAGCGTGCTGGTGAGACCTGGCGCTAGCGTGAAGCTGAGCTGCAAGACAAGCGGCTACACCTTCACAAGCAGCTGGATGCACTGGGCCAAGCAGAGACCTGGCCAAGGCCTGGAGTGGATCGGCGAGATCCACCCTAACGGCGGCAACACCTACTACAACGAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACCCTGAGCGTGGACACAAGCAGCAGCACCGCCTACGTGGACCTGAGCAGCCTGACAAGCGAGGACAGCGCCGTGTACTTCTGCGCCACCCCTCACTACTGGGGCCAAGGCACCACCCTGACCGTGAGCAGCGCCAAGACCACCCCTCCTAGCGTGTACCCCCTGGCCCCTGGAAGCGCCGCTCAGACCAACAGCATGGTGACCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGGCTACTTCCCTGAGCCTGTGACCGTGACATGGAACAGCGGCAGCCTGAGCAGCGGCGTGCACACCTTCCCTGCCGTGCTGCAGAGCGACCTGTACACCCTGAGCAGCAGCGTGACCGTGCCTAGCAGCACCTGGCCTAGCGAGACCGTGACCTGCAACGTGGCCCACCCTGCTAGCAGCACCAAGGTGGACAAGAAGATCGTGCCTAGAGACTGCGGCTGCAAGCCTTGCATCTGCACCGTGCCTGAGGTGAGCAGCGTGTTCATCTTCCCTCCTAAGCCTAAGGACGTGCTGACCATCACCCTGACCCCTAAGGTGACCTGCGTGGTCGTGGACATCAGCAAGGACGACCCTGAGGTGCAGTTCAGCTGGTTCGTGGACGACGTGGAGGTGCACACCGCTCAGACACAGCCTAGAGAGGAGCAGTTCAACAGCACCTTCAGAAGCGTGAGCGAGCTGCCTATCATGCACCAAGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTTCAAGTGCAGAGTGAACAGCGCCGCCTTCCCTGCCCCTATCGAGAAGACCATCAGCAAGACCAAGGGCAGACCTAAGGCCCCTCAAGTGTACACCATCCCTCCCCCTAAGGAGCAGATGGCCAAGGACAAGGTGAGCCTGACCTGCATGATCACCGACTTCTTCCCTGAGGACATCACCGTGGAGTGGCAGTGGAACGGACAGCCTGCCGAGAACTACAAGAACACACAGCCTATCATGGACACCGACGGCAGCTACTTCGTGTACAGCAAGCTGAACGTGCAGAAGAGCAACTGGGAGGCCGGCAACACCTTCACCTGCAGCGTGCTGCACGAGGGCCTGCACAACCACCACACCGAGAAGAGCCTGAGCCACAGCCCTGGCAAGTAA；

SEQ ID NO.11：

GACGTGGTGATGACACAGACCCCTCTGAGCCTGCCTGTGAGCCTGGGCGACCAAGCTAGCATCAGCTGCAGATGCAGACAGAGCCTGGTGCACAGCAACGGCAACACCTACCTGCAGTGGTACCTGCAGAAGCCTGGACAGAGCCCTATCCTGCTGATCTACAGAGTGAGCAACAGATTTAGCGGCGTGCCTGACAGATTCAGCGGCTCCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGAAGATCAGCAGAGTGGAGGCCGAGGACCTGGGCGTGTACTTCTGCAGCCAAAGCACCCACGTGCCTCACACCTTCGGCGCCGGCACCAAGCTGGAGCTGAAGAGAGCCGACGCCGCCCCTACCGTGAGCATCTTCCCTCCTAGCAGCGAGCAGCTGACAAGCGGCGGCGCTAGCGTGGTGTGCTTCCTGAACAACTTCTACCCTAAGGACATCAACGTGAAGTGGAAGATCGACGGCAGCGAGAGACAGAACGGCGTGCTGAACAGCTGGACCGACCAAGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTGACCCTGACCAAGGACGAGTACGAGAGACACAACAGCTACACCTGCGAGGCCACCCACAAGACAAGCACAAGCCCTATCGTGAAGAGCTTCAACAGAAACGAGTGC。

转染和筛选：

(1)CHO细胞使用CHO CD培养基培养，2×10⁵cells/mL接种，加4mM谷氨酰胺。细胞密度达到4×10⁶cells/mL，活力大于95％，离心收集细胞，使用电转缓冲液重悬细胞，调整密度到1×10⁷cells/mL。

(2)取无菌的EP管，加入0.8mL细胞悬液，加入5μg质粒，轻轻混匀，孵育15min，冰浴5min。电转仪设置参数为电压280V，脉冲次数3次，脉冲时间5ms，脉冲间隙0.784s，电转杯内径4mm。在每个电转杯中加入0.5mL细胞和质粒的混合液，放入电转仪启动电击程序，完成后迅速将电转杯中的细胞吸出，转移到装有20mL CHO CD培养基的125mL锥形瓶中，重复上述步骤电击第二个电转杯。轻轻混合摇瓶中的细胞，然后盖紧盖子置于37℃摇床中培养。

(3)48h后，将细胞转移到离心管中1000rpm离心5min。去掉上清，用20mL的含有2、5、20μM MSX的CHO CD培养基重悬细胞，计算细胞密度和活性。细胞密度在1.2×10⁶cells/mL左右。

(4)将细胞转移到新的摇瓶中。从第七天开始，每两天观测细胞密度和活性。细胞密度从开始的1.2×10⁶cells/mL往下降低，在第5-7天到达密度最低值，在第10-15天开始，细胞密度升高。当细胞密度升高到1×10⁶cells/mL后，使用含有50μM MSX的CD OPM培养基将细胞传代到细胞密度3×10⁵cells/mL，继续培养。

(5)当细胞密度增长到4×10⁶cells/mL后，使用含有50μM MSX的CD OPM培养基将细胞扩增或传代，最低接种密度仍是3×10⁵cells/mL，可以开始准备冻存或扩大培养。

(6)抗体收集方法：使用protein A亲和层析进行抗体纯化。

纯度检测：

(1)样本处理：取商品化的抗体CD138[W20051E](厂家：Biolegend，货号：112502)10μg，实施例1制备得到的CD138[ZXCloneHCD138-02]10μg与上样缓冲液混合(抗体与上样缓冲液的体积比为4：1)，100℃水浴30min，10000rpm室温离心1min后得到待测样品。其中，所述的上样缓冲液购自上海天能生物科技有限公司(货号：180-8210D)。

(2)上样：取出预制胶安装于电泳槽内，注入电泳缓冲液，拨梳子，上样。其中，蛋白Marker上样10μL，待测样品上样5μg。其中，所述的预制胶和电泳缓冲液均购自上海雅酶生物科技有限公司生产(货号：025C2010)；蛋白Marker购自上海天能生物科技有限公司(货号：180-60016)

(3)电泳：电压80V，电泳时间90min，溴酚蓝指示带至底部时即可结束电泳。

(4)染色：取出凝胶放于考马斯亮蓝染色30min，置于脱色液中脱色1h，重复5次后，拍照。

结果表明实施例1制备得到的抗CD138抗体重轻链完整，条带清晰，纯度达到95％以上，结果见图1。

实施例2抗体标记

本实施例中，外购抗体信息如下：Biolegend鼠抗人CD138[MI15]-APC(厂家：Biolegend，货号：356506)。使用APC标记CD138[ZXCloneHCD138-02]。

1、APC标记

按照“荧光蛋白和/或偶联蛋白单克隆抗体标记方法及其试剂盒(CN202010972671.X)”专利所述方法分别标记实施例1中制备得到的自制鼠抗人CD138[ZXCloneHCD138-02]，标记后的抗体记为自制鼠抗人CD138[ZXCloneHCD138-02]-APC。

2、标记荧光抗体效果检测

(1)于1.5mL离心管中加入100μL培养激活细胞(隆洋正熙研发中心，克隆号：MI15)，4000rpm离心2min，弃上清，加入100μL PBS重悬样本。

(2)取1μL的荧光标记抗体自制鼠抗人CD138[ZXCloneHCD138-02]-APC，Biolegend鼠抗人CD138[MI15]-APC 5μL加入样本中作为实验组，阴性对照组不加荧光抗体。

(3)上述样品均避光反应15分钟。

(4)加入500μL PBS重悬待检测样本。

(5)流式细胞仪(贝克曼DxFlex流式细胞仪)检测样本阳性细胞检测比例、图谱分群情况等指标，进而确定是否能标记上荧光染料APC以及标记的荧光抗体检测靶抗原的是否正确。

APC成功标记自制鼠抗人CD138[ZXCloneHCD138-02]与外购鼠抗人CD138[MI15]-APC比例相近，见图2-图4。

实施例3抗体特异性

本实施例中，所用抗体信息如下：

抗体(1)：实施例1制备得到的抗人CD138抗体CD138[ZXCloneHCD138-02]，记为ZXCloneHCD138-02；

抗体(2)：小鼠同型对照抗体(MOPC-21克隆号)(厂家：Biolegend，货号：400100)；

荧光抗体(1)：鼠抗人CD138[MI15]-APC(厂家：Biolegend，货号：356506)，记为Biolegend CD138[MI15]-APC；

抗体特异性检测方法：

取100μL人培养激活细胞(隆洋正熙研发中心，克隆号：MI15)。4000rpm离心2min，弃上清，加入100μL PBS重悬样本。

实验组：在样本中加入鼠抗人CD138抗体[ZXCloneHCD138-02]3μL，避光反应15分钟后，加入500μL PBS重悬样本，4000rpm离心2min，弃上清，再加入100μLPBS重悬样本得到抗体封闭的封闭样本。在封闭样本中加入Biolegend

CD138[MI15]-APC检测特异性。具体地，在封闭样本中加入5μL Biolegend

CD138[MI15]-APC。

对照组：在样本中加入小鼠同型对照抗体(克隆号：MOPC-21)纯抗3μL，避光反应15分钟后，加入500μL PBS重悬样本，4000rpm离心2min，弃上清，再加入100μL PBS重悬样本。在重悬样本加入5μL Biolegend CD138[MI15]-APC。

实验组和对照组所有样本避光反应15分钟后。加入500μL PBS重悬样本，4000rpm离心2min，弃上清，再加入500μL PBS重悬样本。

流式细胞仪(贝克曼DXFLEX流式细胞仪)检测样本阳性细胞比例、图谱分群情况等指标，进而确定CD138[ZXCloneHCD138-02]是否能特异性识别CD138靶抗原。

由图5-图6可知，实验组中无CD138[MI15]-APC荧光抗体的信号。对照组，同型对照抗体无法封闭有CD138[MI15]-APC的荧光信号。以此说明，由CHO制备所得的CD138抗体，克隆号ZXCloneHCD138-02能特异性识别封闭CD138靶抗原。

实施例4抗体效价

本实施例选用抗体为：

抗体(1)：阳性对照，商品化Biolegend鼠抗人CD138[W20051E](厂家：Biolegend，112502)，记为Biolegend CD138[W20051E]；

抗体(2)：实施例1获得的抗人CD138抗体CD138[ZXCloneHCD138-02]，记为ZXBIo鼠抗人CD138[ZXCloneHCD138-02]；

首先，将已知浓度抗体(1)，抗体(2)先稀释为1mg/mL，然后用PBS按1:100，1:1000，1:3000，1:6000，1:12000，1:24000，1:48000，1:60000，1:96000比例再次对抗体进行稀释。CD138[ZXCloneHCD138-02]抗体作为实验组，商品化CD138[W20051E]抗体作为对照组。

实验分为实验组和对照组，每组取100μL人培养激活细胞(隆洋正熙研发中心，克隆号：MI15)。4000rpm离心2min，弃上清，加入100μL PBS重悬样本。

实验组加入按比例稀释的100μL CD138[ZXCloneHCD138-02]抗体，对照组加入按比例稀释的100μL商品化抗人CD138[W20051E]抗体，涡旋混匀，室温避光孵育15min。加入900μL PBS重悬混匀样本，4000rpm离心2min，弃上清。加入100μLPBS，涡旋混匀。向每组中加入1μL羊抗鼠IgG-PE商品化流式荧光抗体(厂家：Biolgend，货号：980902)，涡旋混匀，室温避光孵育15分钟。加入900μL PBS重悬混匀样本，4000rpm离心2min，弃上清。再加入1000μLPBS重悬混匀样本，4000rpm离心2min，弃上清。加入500μL PBS重悬待检测样本，上流式细胞仪检测。

两种抗体的亲和力分别为：

CD138[W20051E]抗体，其亲和力(kd)为：25.1(1mg/mL)，见图7。

CD138[ZXCloneHCD138-02]抗体，其亲和力(kd)为：25.2(1mg/mL)，见图8。

结果表明，CD138[ZXCloneHCD138-02]和的亲和力与

BiolegendCD138[W20051E]抗体基本一致。

Claims

1.一种抗CD138抗体，其特征在于，包括重链和轻链，所述的重链包括重链可变区，所述的轻链包括轻链可变区；所述的重链可变区包括HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述的轻链可变区包括LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中：

(1)HCDR1为SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；

(2)HCDR2为SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列；

(3)HCDR3所示的氨基酸序列为PHY；

(4)LCDR1为SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列；

(5)LCDR2为SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列；

(6)LCDR3为SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的抗CD138抗体，其特征在于，所述的抗CD138抗体重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.6或与SEQ ID NO.6具有80％以上序列相似性的序列；

所述的抗CD138抗体轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.7或与SEQ ID NO.7具有80％以上序列相似性的序列。

3.根据权利要求1所述的抗CD138抗体，其特征在于，所述的抗CD138抗体重链氨基酸序列为SEQ ID NO.8，或与SEQ ID NO.8具有65％以上序列相似性的序列；

4.根据权利要求1-3任一项所述的抗CD138抗体，其特征在于，为单克隆抗体；优选为鼠源化抗体。

5.表达权利要求1-4任一项所述的抗CD138抗体的核酸。

6.根据权利要求5所述的核酸，其特征在于，重链SEQ ID NO.8对应的核酸序列为SEQID NO.10，轻链SEQ ID NO.9对应的核酸序列为SEQ ID NO.11。

7.包括权利要求5或6所述的核酸的表达载体。

8.包括权利要求1-4任一项所述的抗CD138抗体或权利要求5-6任一项所述的核酸或权利要求7所述的表达载体的细胞。

9.一种CD138检测方法，其特征在于，通过权利要求1-4任一项所述的抗CD138抗体进行检测，所述的方法为非疾病诊断或治疗方法。

10.一种CD138检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-4任一项所述的抗CD138抗体或权利要求5-6任一项所述的核酸或权利要求7所述的表达载体或权利要求8所述的细胞。