CN118284428A

CN118284428A - 内脏疼痛的治疗

Info

Publication number: CN118284428A
Application number: CN202280077304.0A
Authority: CN
Inventors: J·C·梅盖尔; S·莱兹米; V·马丁
Original assignee: Ipsen Biopharm Ltd
Current assignee: Ipsen Biopharm Ltd
Priority date: 2021-11-22
Filing date: 2022-11-21
Publication date: 2024-07-02

Abstract

本发明提供梭菌神经毒素用于抑制患者的内脏疼痛的方法中。该方法包括：(a)确定患者中造成所述内脏疼痛的器官；(b)根据以下说明映射所述器官至特定的皮区神经，因而匹配所述器官至一个或多个具体指定的皮区神经：膀胱映射至T11、T12、L1、S1、S2、S3和/或S4皮区神经；输卵管映射至T11皮区神经；子宫映射至T12和/或L1皮区神经；子宫颈映射至S2、S3和/或S4皮区神经；胃映射至T8、T9和/或T10皮区神经；肝脏映射至T8、T9、T10和/或T11皮区神经；胆囊映射至T8、T9、T10和/或T11皮区神经；胰腺映射至T7、T8、T9、T10、T11和/或T12皮区神经；小肠映射至T10、T11和/或T12皮区神经；结肠映射至T11、S1、S2、S3和/或S4皮区神经；肾脏映射至T10、T11、T12和/或L1皮区神经；输尿管映射至T11、T12和/或L1皮区神经；卵巢映射至T11皮区神经；睾丸映射至T10、T11、L1、L2、S1、S2、S3和/或S4皮区神经；附睾映射至T10、T11、L1、L2、S1、S2、S3和/或S4皮区神经；和(c)在临近于所述一个或多个具体指定的皮区神经的部位施用治疗有效量的梭菌神经毒素，其中在施用所述梭菌神经毒素至患者后，梭菌神经毒素经由逆向轴突运输而被运输至脊髓，在此处它结合感觉性传入神经细胞，通过受体介导的内吞作用进入所述细胞并且阻抑神经递质从所述细胞释放，因而抑制所述内脏疼痛。

Description

内脏疼痛的治疗

技术领域

本发明涉及治疗患者的内脏疼痛的方法，更具体地涉及通过施用梭菌神经毒素治疗患者的内脏疼痛的方法。

发明背景

内脏疼痛是浮现自某人内部器官如胃、膀胱、子宫或直肠的疼痛，通常是因为存在损伤或基础性疾病引起器官损伤。例如，内脏疼痛(一个类型的伤害感受性疼痛(nociceptive pain))可以由产生炎症、压力或其他类型器官损伤的医学病状引起。膀胱感染引起的盆腔疼痛和肠易激综合征(irritable bowel syndrome)引起的腹痛是内脏疼痛的类型。它代表广泛的医学问题，并且实际上已经报道超过20％的全球人群在其一生中某种程度上患有内脏疼痛。

内脏疼痛常见的一个原因是因为多种类型的不同病状/疾病可以造成这种疼痛，这类病状包括克罗恩病(Crohn’s disease)、溃疡性结肠炎、肠易激综合征、乳糜泻(Coeliac disease)、子宫内膜异位症、胃溃疡，肾与膀胱结石、胆囊结石、胰腺炎和腹膜炎。极少数治疗是专门治疗从内脏产生/浮现的疼痛，并且作为备选，经常需要针对疼痛基础性病因的疗法。例如，在腹膜炎(因感染所致的腹膜炎症)造成腹部器官疼痛情况下，可以出于消除炎症原因的目的治疗患者，例如通过施用抗生素来治疗。

自然地，可能要求显著量的时间消除这类基础性损伤，从而仍需要抑制内脏疼痛，否则这可能导致显著降低患者生活质量。这造成难题，因为内脏按其确切本质对于受试者属于‘内部’，从而靶向内脏(器官)一般要求侵入性和显著不适的施用途径。在基础性病状‘长期’存在(遭受的内脏疼痛也为‘长期’)情况下，抑制实际疼痛(内脏疼痛)的需求特别重要，并且在该病状不可治愈情况下，甚至更重要。这类病状(不可治愈性)的实例是子宫内膜异位症，其反而依赖于有助于缓解相关症状的治疗。在这个方面，先前已经测试梭菌神经毒素治疗(BoNT/A)缓解与子宫源急性痛经(经期痉挛)和盆腔疼痛综合征相关的疼痛，并且引起施用了BoNT/A的大部分患者中生活质量评分改善。然而，这类治疗要求将肉毒毒素在宫腔镜控制下直接注入子宫肌层壁。这具有高度侵入性且不便，尤其因为在这类不可治愈性疾病场景下可能要求长期重复施用。

因此，对于缓解内脏疼痛的疼痛缓解策略，存在未满足的需求，需要侵入性最小的疗法代表特别未满足的需求。

本发明解决了上文提到的一个或多个问题。

发明内容

更详细地，本发明基于以下令人惊讶的结果：向映射到胸廓、盆腔或腹部器官/内脏的助长内脏疼痛的皮区神经(dermatome nerve)施用(例如皮内施用(intradermaladministration))梭菌神经毒素提供内脏疼痛抑制作用。

发明人已经提供数据证明，一旦施用梭菌神经毒素至患者的皮区/皮区神经，则该神经毒素的逆向轴突运输(retrograde axonal transport)(更具体地，经由脊神经(spinal nerve)，本文中也称作皮区神经(dermatome nerve)，的逆向轴突运输)允许递送该神经毒素至脊髓，以在脊髓背侧角中统合内脏疼痛的相同区域起作用(例如引起SNARE蛋白剪切)或靶向该区域。使用内脏(膀胱)疼痛的啮齿动物模型，进行疼痛抑制实验。为了补足这种啮齿动物模型数据，发明人在施用梭菌神经毒素至皮区后还分析了猪脊髓中的SNAP-25剪切情况。猪有利地与人皮肤在结构、厚度和神经支配(以及其他特性如色素沉着、胶原蛋白和脂质组成、伤口愈合和免疫应答)方面共有相似性。

值得注意地，在皮内施用梭菌神经毒素至皮区后，两种受测动物模型(啮齿动物和猪)的脊髓中均检出SNAP-25切割作用(用作梭菌神经毒素运输和活性的读出)，同时，具有已切割SNAP-25的脊髓区域与注射过梭菌神经毒素的皮区一致，尤其同侧背侧角中是这样。一旦梭菌神经毒素因此已经抵达脊髓的适宜区域，则涉及内脏疼痛统合的机制受神经毒素的活性抑制。以这种方式，降低患者感知到的疼痛的强度(换言之，内脏疼痛受抑制或减弱)。

通过选择其中注射梭菌神经毒素的适宜皮区，可以抑制或减弱出现自任何给定内脏/器官的内脏疼痛。这是因为来自特定皮区的感觉神经纤维(例如脊神经)汇集在跟来自特定内脏/器官的一般内脏传入纤维相同的脊髓平面处。例如，连接脊髓至分别命名的皮区(即分别是T8、T9和T10皮区)的脊神经T8、T9和T10与来自胃的内脏传入纤维在同一脊髓平面汇集。因此，通过施用梭菌神经毒素至T8、T9和/或T10皮区，可以递送该神经毒素(借助皮区/脊神经逆向运输)至可以存在来自胃的内脏传入纤维的相同脊髓平面。一旦在那儿，梭菌神经毒素就可以抑制这种内脏传入纤维在脊髓中的活动，并且因此抑制胃痛统合(theintegration of stomach pain)。因此随之而来，抑制感知的疼痛。

先前已经映射出多种特定的皮区-内脏相互作用(例如，除了上述T8/T9/T10-胃相互作用之外还有的)，例如从研究牵涉痛现象中映射出。实际上，临床上使用皮区图展示疑似有脊神经损害的患者的病变部位。临床上使用的常见皮区图是作为国际脊髓损伤神经系统分类标准(ISNCSCI)产生的美国脊髓损伤协会(ASIA)工作表。在撰写时，2019版所述工作表在此可获得：https://asia-spinalinjury.org/wp-content/uploads/2019/10/ASIA-ISCOS-Worksheet_10.2019_PRINT-Page-1-2.pdf。图1左下部提供多种皮区-内脏相互作用的演示。

现在提供梭菌神经毒素的简述(下文叙述详细信息)。梭菌属(Clostridia)细菌产生高度强效和特异性的蛋白质毒素，这些毒素可以(暂时)损伤被送达的神经元和其他细胞。这类梭菌毒素的实例包括由破伤风梭菌(C.tetani)(TeNT)和肉毒梭菌(C.botulinum)(BoNT)血清型A-G和X产生的神经毒素(参见WO 2018/009903 A2)以及由巴拉迪梭菌(C.baratii)和丁酸梭菌(C.butyricum)产生的那些神经毒素。破伤风毒素和肉毒毒素均通过抑制受累神经元的功能、尤其抑制神经递质释放发挥作用。

在自然界，梭菌神经毒素作为单链多肽合成，所述单链多肽通过蛋白酶剪切事件受翻译后修饰，以形成由二硫键连接在一起的两条多肽链。切割发生在位于提供链间二硫键的半胱氨酸残基之间的特异性切割位点(通常称作活化位点)处。正是这种双链形式才是该毒素的活性形式。两条链称作重链(H链)，其具有大约100kDa的分子量，和轻链(L链)，其具有大约50kDa的分子量。H链包含N末端转运组分(H_N结构域)和C末端靶向组分(H_C结构域)。切割位点位于L链和转运结构域组分之间。在H_C结构域与其靶神经元结合并且结合的毒素借助内体内化进入细胞后，H_N结构域转运L链跨过内体膜并进入胞质溶胶，并且L链提供蛋白酶功能(也称作非细胞毒性蛋白酶)。

梭菌神经毒素提供非细胞毒性蛋白酶活性。非细胞毒性蛋白酶通过蛋白酶解切割称作SNARE蛋白的胞内转运蛋白(例如SNAP-25、VAMP或突触融合蛋白)发挥作用。首字母缩略词SNARE衍生自术语可溶性NSF接合受体(Soluble NSF Attachment Receptor)，其中NSF意指N-乙基马来酰亚胺敏感因子(N-ethylmaleimide-Sensitive Factor)。SNARE蛋白对胞内小泡融合不可或缺，并且因此对分子借助小泡运输从细胞中分泌不可或缺。蛋白酶功能是锌依赖性内肽酶活性并且对SNARE蛋白显示高度的底物专一性。因此，一旦递送至目的靶细胞，非细胞毒性蛋白酶就能够抑制自靶细胞的细胞性分泌。梭菌神经毒素的L链蛋白酶是切割SNARE蛋白的非细胞毒性蛋白酶。

考虑到SNARE蛋白的普遍存在性质，梭菌神经毒素如肉毒毒素已经成功地用于广泛类型的疗法中。发明人已经展示梭菌神经毒素(例如通过抑制脊髓处内脏疼痛统合(visceral pain integration))抑制内脏疼痛的出人意料的实用性。

发明详述

本发明的宽泛方面提供以下任一者：

-梭菌神经毒素，用于抑制内脏疼痛的方法中；

-一种抑制患者的内脏疼痛的方法，所述方法包括施用梭菌神经毒素至患者；

-梭菌神经毒素在制造抑制患者中内脏疼痛的药物中的用途。

内脏疼痛是因激活胸部、盆腔或腹腔内脏(器官)和腺体的伤害感受器产生的疼痛。因此，如遍及本公开使用的术语“内脏疼痛”可以意指由胸部、盆腔或腹腔内脏和/或腺体促成的疼痛。这类内脏(器官)的实例包括：膀胱、子宫、胃、肝脏、胆囊、胰腺、小肠、结肠、肾、输尿管、卵巢、输卵管、子宫颈、睾丸和/或附睾。

本发明的方法可以包括确定患者中造成所述内脏疼痛的器官，优选地其中所述器官选自膀胱、子宫、胃、肝脏、胆囊、胰腺、小肠、结肠、肾、输尿管、卵巢、输卵管、子宫颈、睾丸和附睾。本发明的方法可以包括例如根据以下说明映射所述器官至特定的皮区神经，因而匹配所述器官至一个或多个具体指定的皮区神经：

i.膀胱映射至T11、T12、L1、S1、S2、S3和/或S4皮区神经；

ii.子宫映射至T12和/或L1皮区神经；

iii.胃映射至T8、T9和/或T10皮区神经；

iv.肝脏映射至T8、T9、T10和/或T11皮区神经；

v.胆囊映射至T8、T9、T10和/或T11皮区神经；

vi.胰腺映射至T7、T8、T9、T10、T11和/或T12皮区神经；

vii.小肠映射至T10、T11和/或T12皮区神经；

viii.结肠映射至T11、S1、S2、S3和/或S4皮区神经；

ix.肾脏映射至T10、T11、T12和/或L1皮区神经；

x.输尿管映射至T11、T12和/或L1皮区神经；

xi.卵巢映射至T11皮区神经；

xii.输卵管映射至T11皮区神经；

xiii.子宫颈映射至S2、S3和/或S4皮区神经；

xiv.睾丸映射至T10、T11、L1、L2、S1、S2、S3和/或S4皮区神经；

xv.附睾映射至T10、T11、L1、L2、S1、S2、S3和/或S4皮区神经。

可以向(或临近于)朝着施用神经毒素至“皮区神经”的“皮区”施用梭菌神经毒素；在此情况下，该方法可以包括根据以上段落概述的说明映射所述器官至特定皮区，因而匹配所述器官至一个或多个具体指定的皮区。

本发明的方法可以包括在临近于所述一个或多个具体指定的皮区神经的部位施用治疗有效量的梭菌神经毒素。本发明的方法可以包括施用治疗有效量的梭菌神经毒素至所述一个或多个具体指定的皮区神经。本发明的方法可以包括在临近于所述一个或多个具体指定的皮区的部位施用治疗有效量的梭菌神经毒素。本发明的方法可以包括施用治疗有效量的梭菌神经毒素至所述一个或多个具体指定的皮区。

梭菌神经毒素可以在施用后抑制内脏疼痛。适当地，在施用所述梭菌神经毒素至患者后，梭菌神经毒素经由逆向轴突运输而被运输至脊髓(例如背侧角)，在此处它结合感觉性传入神经细胞，(例如通过受体介导的内吞作用)进入所述细胞并且阻抑神经递质从所述细胞释放，因而抑制所述内脏疼痛。

更具体的方面提供一种用于抑制患者的内脏疼痛的方法中的梭菌神经毒素，所述方法包括：

a.确定患者中造成所述内脏疼痛的器官；

b.根据以下说明映射所述器官至特定的皮区神经，因而匹配所述器官至一个或多个具体指定的皮区神经：

i.膀胱映射至T11、T12、L1、S1、S2、S3和/或S4皮区神经；

ii.子宫映射至T12和/或L1皮区神经；

iii.胃映射至T8、T9和/或T10皮区神经；

iv.肝脏映射至T8、T9、T10和/或T11皮区神经；

v.胆囊映射至T8、T9、T10和/或T11皮区神经；

vi.胰腺映射至T7、T8、T9、T10、T11和/或T12皮区神经；

vii.小肠映射至T10、T11和/或T12皮区神经；

viii.结肠映射至T11、S1、S2、S3和/或S4皮区神经；

ix.肾脏映射至T10、T11、T12和/或L1皮区神经；

x.输尿管映射至T11、T12和/或L1皮区神经；

xi.卵巢映射至T11皮区神经；

xii.输卵管映射至T11皮区神经；

xiii.子宫颈映射至S2、S3和/或S4皮区神经；

xiv.睾丸映射至T10、T11、L1、L2、S1、S2、S3和/或S4皮区神经；

xv.附睾映射至T10、T11、L1、L2、S1、S2、S3和/或S4皮区神经；并且

c.在临近于所述一个或多个具体指定的皮区神经的部位施用治疗有效量的梭菌神经毒素，其中在施用所述梭菌神经毒素至患者后，梭菌神经毒素经由逆向轴突运输而被运输至脊髓(例如背侧角)，在此处它(梭菌神经毒素)结合感觉性传入神经细胞，(例如通过受体介导的内吞作用)进入所述细胞并且阻抑神经递质从所述细胞释放，因而抑制所述内脏疼痛。

一个方面提供一种抑制患者的内脏疼痛的方法，所述方法包括：

a.确定患者中造成所述内脏疼痛的器官；

i.膀胱映射至T11、T12、L1、S1、S2、S3和/或S4皮区神经；

ii.子宫映射至T12和/或L1皮区神经；

iii.胃映射至T8、T9和/或T10皮区神经；

iv.肝脏映射至T8、T9、T10和/或T11皮区神经；

v.胆囊映射至T8、T9、T10和/或T11皮区神经；

vi.胰腺映射至T7、T8、T9、T10、T11和/或T12皮区神经；

vii.小肠映射至T10、T11和/或T12皮区神经；

viii.结肠映射至T11、S1、S2、S3和/或S4皮区神经；

ix.肾脏映射至T10、T11、T12和/或L1皮区神经；

x.输尿管映射至T11、T12和/或L1皮区神经；

xi.卵巢映射至T11皮区神经；

xii.输卵管映射至T11皮区神经；

xiii.子宫颈映射至S2、S3和/或S4皮区神经；

xiv.睾丸映射至T10、T11、L1、L2、S1、S2、S3和/或S4皮区神经；

还提供梭菌神经毒素的用途，用于制造抑制患者的内脏疼痛的药物，其中抑制内脏疼痛包括：

a.确定患者中造成所述内脏疼痛的器官；

i.膀胱映射至T11、T12、L1、S1、S2、S3和/或S4皮区神经；

ii.输卵管映射至T11皮区神经；

iii.子宫映射至T12和/或L1皮区神经；

iv.子宫颈映射至S2、S3和/或S4皮区神经；

v.胃映射至T8、T9和/或T10皮区神经；

vi.肝脏映射至T8、T9、T10和/或T11皮区神经；

vii.胆囊映射至T8、T9、T10和/或T11皮区神经；

viii.胰腺映射至T7、T8、T9、T10、T11和/或T12皮区神经；

ix.小肠映射至T10、T11和/或T12皮区神经；

x.结肠映射至T11、S1、S2、S3和/或S4皮区神经；

xi.肾脏映射至T10、T11、T12和/或L1皮区神经；

xii.输尿管映射至T11、T12和/或L1皮区神经；

xiii.卵巢映射至T11皮区神经；

xiv.睾丸映射至T10、T11、L1、L2、S1、S2、S3和/或S4皮区神经；

c.在临近于所述一个或多个具体指定的皮区神经的部位施用治疗有效量的梭菌神经毒素，其中在施用所述梭菌神经毒素至患者后，梭菌神经毒素经由逆向轴突运输而被运输至脊髓，在此处它结合感觉性传入神经细胞，通过受体介导的内吞作用进入所述细胞并且阻抑神经递质从所述细胞释放，因而抑制所述内脏疼痛。

在整个这份说明书范围内，术语“感觉传入神经细胞”可以与术语“内脏传入神经细胞”同义使用。内脏传入神经细胞(也称作内脏传入纤维，或一般内脏传入(generalvisceral afferent，GVA)纤维)将感觉冲动(通常为疼痛感觉或反射性感觉)从内脏(例如内部器、腺体)传导至中枢神经系统。

一个方面提供一种用于抑制患者的内脏疼痛的方法中的梭菌神经毒素，所述方法包括：

a.确定患者中造成所述内脏疼痛的器官；

i.膀胱映射至T11、T12、L1、S1、S2、S3和/或S4皮区神经；

ii.子宫映射至T12和/或L1皮区神经；

iii.胃映射至T8、T9和/或T10皮区神经；

iv.肝脏映射至T8、T9、T10和/或T11皮区神经；

v.胆囊映射至T8、T9、T10和/或T11皮区神经；

vi.胰腺映射至T7、T8、T9、T10、T11和/或T12皮区神经；

vii.小肠映射至T10、T11和/或T12皮区神经；

viii.结肠映射至T11、S1、S2、S3和/或S4皮区神经；

ix.肾脏映射至T10、T11、T12和/或L1皮区神经；

x.输尿管映射至T11、T12和/或L1皮区神经；

xi.卵巢映射至T11皮区神经；

xii.输卵管映射至T11皮区神经；

xiii.子宫颈映射至S2、S3和/或S4皮区神经；

xiv.睾丸映射至T10、T11、L1、L2、S1、S2、S3和/或S4皮区神经；

c.在临近于所述一个或多个具体指定的皮区神经的部位施用治疗有效量的梭菌神经毒素，其中在施用所述梭菌神经毒素至患者后，梭菌神经毒素经由逆向轴突运输而被运输至脊髓(例如背侧角)，在此处它(梭菌神经毒素)结合内脏传入神经细胞，(例如通过受体介导的内吞作用)进入所述细胞并且阻抑神经递质从所述细胞释放，因而抑制所述内脏疼痛。

a.确定患者中造成所述内脏疼痛的器官；

i.膀胱映射至T11、T12、L1、S1、S2、S3和/或S4皮区神经；

ii.子宫映射至T12和/或L1皮区神经；

iii.胃映射至T8、T9和/或T10皮区神经；

iv.肝脏映射至T8、T9、T10和/或T11皮区神经；

v.胆囊映射至T8、T9、T10和/或T11皮区神经；

vi.胰腺映射至T7、T8、T9、T10、T11和/或T12皮区神经；

vii.小肠映射至T10、T11和/或T12皮区神经；

viii.结肠映射至T11、S1、S2、S3和/或S4皮区神经；

ix.肾脏映射至T10、T11、T12和/或L1皮区神经；

x.输尿管映射至T11、T12和/或L1皮区神经；

xi.卵巢映射至T11皮区神经；

xii.输卵管映射至T11皮区神经；

xiii.子宫颈映射至S2、S3和/或S4皮区神经；

xiv.睾丸映射至T10、T11、L1、L2、S1、S2、S3和/或S4皮区神经；

一个方面提供梭菌神经毒素的用途，用于制造抑制患者的内脏疼痛的药物，其中抑制内脏疼痛包括：

a.确定患者中造成所述内脏疼痛的器官；

i.膀胱映射至T11、T12、L1、S1、S2、S3和/或S4皮区神经；

ii.输卵管映射至T11皮区神经；

iii.子宫映射至T12和/或L1皮区神经；

iv.子宫颈映射至S2、S3和/或S4皮区神经；

v.胃映射至T8、T9和/或T10皮区神经；

vi.肝脏映射至T8、T9、T10和/或T11皮区神经；

vii.胆囊映射至T8、T9、T10和/或T11皮区神经；

viii.胰腺映射至T7、T8、T9、T10、T11和/或T12皮区神经；

ix.小肠映射至T10、T11和/或T12皮区神经；

x.结肠映射至T11、S1、S2、S3和/或S4皮区神经；

xi.肾脏映射至T10、T11、T12和/或L1皮区神经；

xii.输尿管映射至T11、T12和/或L1皮区神经；

xiii.卵巢映射至T11皮区神经；

xiv.睾丸映射至T10、T11、L1、L2、S1、S2、S3和/或S4皮区神经；

c.在临近于所述一个或多个具体指定的皮区神经的部位施用治疗有效量的梭菌神经毒素，其中在施用所述梭菌神经毒素至患者后，梭菌神经毒素经由逆向轴突运输而被运输至脊髓，在此处它结合内脏传入神经细胞，通过受体介导的内吞作用进入所述细胞并且阻抑神经递质从所述细胞释放，因而抑制所述内脏疼痛。

a.确定患者中造成所述内脏疼痛的器官；

b.根据以下说明映射所述器官至特定的皮区，因而匹配所述器官至一个或多个具体指定的皮区：

i.膀胱映射至T11、T12、L1、S1、S2、S3和/或S4皮区；

ii.子宫映射至T12和/或L1皮区；

iii.胃映射至T8、T9和/或T10皮区；

iv.肝脏映射至T8、T9、T10和/或T11皮区；

v.胆囊映射至T8、T9、T10和/或T11皮区；

vi.胰腺映射至T7、T8、T9、T10、T11和/或T12皮区；

vii.小肠映射至T10、T11和/或T12皮区；

viii.结肠映射至T11、S1、S2、S3和/或S4皮区；

ix.肾脏映射至T10、T11、T12和/或L1皮区；

x.输尿管映射至T11、T12和/或L1皮区；

xi.卵巢映射至T11皮区；

xii.输卵管映射至T11皮区；

xiii.子宫颈映射至S2、S3和/或S4皮区；

xiv.睾丸映射至T10、T11、L1、L2、S1、S2、S3和/或S4皮区；

xv.附睾映射至T10、T11、L1、L2、S1、S2、S3和/或S4皮区；并且

c.在临近于所述一个或多个具体指定的皮区的部位施用治疗有效量的梭菌神经毒素，其中在施用所述梭菌神经毒素至患者后，梭菌神经毒素经由逆向轴突运输而被运输至脊髓(例如背侧角)，在此处它(梭菌神经毒素)结合感觉性传入神经细胞，(例如通过受体介导的内吞作用)进入所述细胞并且阻抑神经递质从所述细胞释放，因而抑制所述内脏疼痛。

a.确定患者中造成所述内脏疼痛的器官；

i.膀胱映射至T11、T12、L1、S1、S2、S3和/或S4皮区；

ii.子宫映射至T12和/或L1皮区；

iii.胃映射至T8、T9和/或T10皮区；

iv.肝脏映射至T8、T9、T10和/或T11皮区；

v.胆囊映射至T8、T9、T10和/或T11皮区；

vi.胰腺映射至T7、T8、T9、T10、T11和/或T12皮区；

vii.小肠映射至T10、T11和/或T12皮区；

viii.结肠映射至T11、S1、S2、S3和/或S4皮区；

ix.肾脏映射至T10、T11、T12和/或L1皮区；

x.输尿管映射至T11、T12和/或L1皮区；

xi.卵巢映射至T11皮区；

xii.输卵管映射至T11皮区；

xiii.子宫颈映射至S2、S3和/或S4皮区；

xiv.睾丸映射至T10、T11、L1、L2、S1、S2、S3和/或S4皮区；

xv.附睾映射至T10、T11、L1、L2、S1、S2、S3和/或S4皮区；并且

a.确定患者中造成所述内脏疼痛的器官；

i.膀胱映射至T11、T12、L1、S1、S2、S3和/或S4皮区；

ii.子宫映射至T12和/或L1皮区；

iii.胃映射至T8、T9和/或T10皮区；

iv.肝脏映射至T8、T9、T10和/或T11皮区；

v.胆囊映射至T8、T9、T10和/或T11皮区；

vi.胰腺映射至T7、T8、T9、T10、T11和/或T12皮区；

vii.小肠映射至T10、T11和/或T12皮区；

viii.结肠映射至T11、S1、S2、S3和/或S4皮区；

ix.肾脏映射至T10、T11、T12和/或L1皮区；

x.输尿管映射至T11、T12和/或L1皮区；

xi.卵巢映射至T11皮区；

xii.输卵管映射至T11皮区；

xiii.子宫颈映射至S2、S3和/或S4皮区；

xiv.睾丸映射至T10、T11、L1、L2、S1、S2、S3和/或S4皮区；

xv.附睾映射至T10、T11、L1、L2、S1、S2、S3和/或S4皮区；并且

a.确定患者中造成所述内脏疼痛的器官；

i.膀胱映射至T11、T12、L1、S1、S2、S3和/或S4皮区；

ii.子宫映射至T12和/或L1皮区；

iii.胃映射至T8、T9和/或T10皮区；

iv.肝脏映射至T8、T9、T10和/或T11皮区；

v.胆囊映射至T8、T9、T10和/或T11皮区；

vi.胰腺映射至T7、T8、T9、T10、T11和/或T12皮区；

vii.小肠映射至T10、T11和/或T12皮区；

viii.结肠映射至T11、S1、S2、S3和/或S4皮区；

ix.肾脏映射至T10、T11、T12和/或L1皮区；

x.输尿管映射至T11、T12和/或L1皮区；

xi.卵巢映射至T11皮区；

xii.输卵管映射至T11皮区；

xiii.子宫颈映射至S2、S3和/或S4皮区；

xiv.睾丸映射至T10、T11、L1、L2、S1、S2、S3和/或S4皮区；

xv.附睾映射至T10、T11、L1、L2、S1、S2、S3和/或S4皮区；并且

c.在临近于所述一个或多个具体指定的皮区的部位施用治疗有效量的梭菌神经毒素，其中在施用所述梭菌神经毒素至患者后，梭菌神经毒素经由逆向轴突运输而被运输至脊髓(例如背侧角)，在此处它(梭菌神经毒素)结合内脏传入神经细胞，(例如通过受体介导的内吞作用)进入所述细胞并且阻抑神经递质从所述细胞释放，因而抑制所述内脏疼痛。

a.确定患者中造成所述内脏疼痛的器官；

i.膀胱映射至T11、T12、L1、S1、S2、S3和/或S4皮区；

ii.子宫映射至T12和/或L1皮区；

iii.胃映射至T8、T9和/或T10皮区；

iv.肝脏映射至T8、T9、T10和/或T11皮区；

v.胆囊映射至T8、T9、T10和/或T11皮区；

vi.胰腺映射至T7、T8、T9、T10、T11和/或T12皮区；

vii.小肠映射至T10、T11和/或T12皮区；

viii.结肠映射至T11、S1、S2、S3和/或S4皮区；

ix.肾脏映射至T10、T11、T12和/或L1皮区；

x.输尿管映射至T11、T12和/或L1皮区；

xi.卵巢映射至T11皮区；

xii.输卵管映射至T11皮区；

xiii.子宫颈映射至S2、S3和/或S4皮区；

xiv.睾丸映射至T10、T11、L1、L2、S1、S2、S3和/或S4皮区；

xv.附睾映射至T10、T11、L1、L2、S1、S2、S3和/或S4皮区；并且

a.确定患者中造成所述内脏疼痛的器官；

i.膀胱映射至T11、T12、L1、S1、S2、S3和/或S4皮区；

ii.子宫映射至T12和/或L1皮区；

iii.胃映射至T8、T9和/或T10皮区；

iv.肝脏映射至T8、T9、T10和/或T11皮区；

v.胆囊映射至T8、T9、T10和/或T11皮区；

vi.胰腺映射至T7、T8、T9、T10、T11和/或T12皮区；

vii.小肠映射至T10、T11和/或T12皮区；

viii.结肠映射至T11、S1、S2、S3和/或S4皮区；

ix.肾脏映射至T10、T11、T12和/或L1皮区；

x.输尿管映射至T11、T12和/或L1皮区；

xi.卵巢映射至T11皮区；

xii.输卵管映射至T11皮区；

xiii.子宫颈映射至S2、S3和/或S4皮区；

xiv.睾丸映射至T10、T11、L1、L2、S1、S2、S3和/或S4皮区；

xv.附睾映射至T10、T11、L1、L2、S1、S2、S3和/或S4皮区；并且

如上文提到，本发明的宽泛方面提供以下任一者：

-梭菌神经毒素，用于抑制内脏疼痛的方法中；

-梭菌神经毒素在制造抑制患者中内脏疼痛的药物中的用途。

例如，本发明的方法可以包括确定患者中“促成”(又称作“造成”)所述内脏疼痛的器官。本发明的方法可以包括映射所述器官至例如选自以下组合的特定皮区神经：

i.胃映射至T8、T9和/或T10皮区；

ii.肝脏映射至T8、T9、T10和/或T11皮区(优选地T8、T9和/或T10皮区)；

iii.胆囊映射至T8、T9、T10和/或T11皮区(优选地T8、T9和/或T10皮区)；

iv.胰腺映射至T7、T8、T9、T10、T11和/或T12皮区；

v.小肠映射至T10、T11和/或T12皮区；

vi.结肠映射至T11、S1、S2、S3和/或S4皮区(优选地S1、S2、S3和/或S4皮区)；

vii.肾脏映射至T10、T11、T12和/或L1皮区(优选地T11、T12和/或L1皮区)；

viii.输尿管映射至T11、T12和/或L1皮区；

ix.膀胱映射至T12、L1、S2、S3和/或S4皮区；

x.卵巢映射至T11皮区；

xi.输卵管映射至T11皮区；

xii.子宫映射至T12和/或L1皮区；

xiii.子宫颈映射至S2、S3和/或S4皮区；

xiv.睾丸映射至T10、T11、L1、L2、S1、S2、S3和/或S4皮区(优选地T11、L1、L2、S1、

S2、S3和/或S4皮区)；

xv.附睾映射至T10、T11、L1、L2、S1、S2、S3和/或S4皮区(优选地T11、L1、L2、S1、

S2、S3和/或S4皮区)；

xvi.心脏映射至T3和/或T4皮区；

xvii.食道映射至T4和/或T5皮区。

本发明的方法可以包括在临近于一个或多个相同皮区神经的部位(其映射至经确定为促成内脏疼痛的器官)施用梭菌神经毒素。梭菌神经毒素可以在施用后抑制内脏疼痛。适当地，在施用所述梭菌神经毒素至患者后，该神经毒素经由逆向轴突运输而被运输至脊髓(例如背侧角)并且抑制基础性内脏疼痛统合。

a.确定患者中促成所述内脏疼痛的器官；

b.映射所述器官至选自以下组合的特定皮区神经：

i.胃映射至T8、T9和/或T10皮区；

iv.胰腺映射至T7、T8、T9、T10、T11和/或T12皮区；

v.小肠映射至T10、T11和/或T12皮区；

viii.输尿管映射至T11、T12和/或L1皮区；

ix.膀胱映射至T12、L1、S2、S3和/或S4皮区；

x.卵巢映射至T11皮区；

xi.输卵管映射至T11皮区；

xii.子宫映射至T12和/或L1皮区；

xiii.子宫颈映射至S2、S3和/或S4皮区；

xiv.睾丸映射至T10、T11、L1、L2、S1、S2、S3和/或S4皮区(优选地T11、

L1、L2、S1、S2、S3和/或S4皮区)；

xv.附睾映射至T10、T11、L1、L2、S1、S2、S3和/或S4皮区(优选地T11、

L1、L2、S1、S2、S3和/或S4皮区)；并且

c.在临近于一个或多个相同皮区神经的部位(其映射至经确定为促成内脏疼痛的器官)施用梭菌神经毒素，并且其中在施用所述梭菌神经毒素至患者后，梭菌神经毒素经由逆向轴突运输而被运输至脊髓(例如背侧角)并且抑制基础性内脏疼痛统合。

换言之，一个方面提供一种抑制有需要的患者的内脏疼痛的方法，所述方法包括：

a.确定患者中促成所述内脏疼痛的器官；

b.映射所述器官至选自以下组合的特定皮区神经：

i.胃映射至T8、T9和/或T10皮区；

iv.胰腺映射至T7、T8、T9、T10、T11和/或T12皮区；

v.小肠映射至T10、T11和/或T12皮区；

viii.输尿管映射至T11、T12和/或L1皮区；

ix.膀胱映射至T12、L1、S2、S3和/或S4皮区；

x.卵巢映射至T11皮区；

xi.输卵管映射至T11皮区；

xii.子宫映射至T12和/或L1皮区；

xiii.子宫颈映射至S2、S3和/或S4皮区；

L1、L2、S1、S2、S3和/或S4皮区)；

L1、L2、S1、S2、S3和/或S4皮区)；并且

c.在临近于一个或多个相同皮区神经的部位(其映射至经确定为促成内脏疼痛的器官)

施用梭菌神经毒素，并且其中在施用所述梭菌神经毒素至患者后，梭菌神经毒素经由逆向轴突运输而被运输至脊髓(例如背侧角)并且抑制基础性内脏疼痛统合。

a.确定患者中促成所述内脏疼痛的器官；

b.映射所述器官至选自以下组合的特定皮区神经：

i.胃映射至T8、T9和/或T10皮区；

iv.胰腺映射至T7、T8、T9、T10、T11和/或T12皮区；

v.小肠映射至T10、T11和/或T12皮区；

viii.输尿管映射至T11、T12和/或L1皮区；

ix.膀胱映射至T12、L1、S2、S3和/或S4皮区；

x.卵巢映射至T11皮区；

xi.输卵管映射至T11皮区；

xii.子宫映射至T12和/或L1皮区；

xiii.子宫颈映射至S2、S3和/或S4皮区；

L1、L2、S1、S2、S3和/或S4皮区)；

L1、L2、S1、S2、S3和/或S4皮区)；并且

如上文提到，认为一旦施用梭菌神经毒素至患者的皮区神经(例如至皮区)，则该神经毒素(更具体地，借助传入性脊神经)的逆向轴突运输允许递送该神经毒素在脊髓中统合内脏疼痛的相同区域处起作用或靶向该区域。例如，如实施例中佐证，递送梭菌神经毒素至脊髓(在施用至皮区后)可以引起SNARE蛋白(例如SNAP-25)剪切。这是因为施用所述梭菌神经毒素至患者(其中梭菌神经毒素借助逆向轴突运输过程被运输至脊髓)后，梭菌神经毒素可以结合感觉传入神经细胞，(例如通过受体介导的内吞作用)进入所述细胞并且例如通过剪切SNARE蛋白阻抑神经递质从所述细胞释放，因而抑制所述内脏疼痛。

例如，通过在梭菌神经毒素的L链中的蛋白酶结构，梭菌神经毒素可以切割SNARE蛋白(因此抑制神经递质释放，因而抑制所述内脏疼痛)。SNARE蛋白的实例包括小突触小泡蛋白(否则称作囊泡相关膜蛋白(VAMP))、SNAP-25和突触融合蛋白。例如，BoNT/B、BoNT/D、BoNT/F、BoNT/G和TeNT切割小突触小泡蛋白，另外称作囊泡相关膜蛋白(VAMP)；BoNT/A、BoNT/C和BoNT/E切割突触小体相关蛋白25kDa(“SNAP-25”)；BoNT/C切割突触融合蛋白。

SNARE蛋白与膜分泌小泡或与细胞膜缔合并且通过介导分泌小泡与细胞膜融合促进分子的胞吐作用，因此引起小泡的内容物排放于细胞外部。切割这类SNARE蛋白抑制了这种胞吐作用并且因此抑制神经递质从这类神经元释放。作为其结果，可以抑制内脏疼痛统合入中枢神经系统；换言之，可以抑制内脏疼痛。

“逆向轴突运输”是一种形式的轴突运输(又称作，轴质运输或轴质流动)，在正常情况下负责将线粒体、脂质、突触小泡、蛋白质和其他细胞器通过神经元轴突的细胞质(称作轴质)移动至神经元的细胞体并且从其中移走的细胞过程。轴突长度为米级别，从而神经元不能依赖于扩散过程携带胞核和细胞器的产物至神经元轴突的末端，因此不能利用轴突运输。轴突运输还负责将指定降解的分子从轴突移动返回细胞体，在那里它们为溶酶体所分解。向细胞体移动称作“逆向运输”并且向突触移动称作“顺向运输”。本发明利用了囊泡逆向运输移动梭菌神经毒素至脊髓以发挥出中枢效应。

因此，术语“逆向轴突运输至脊髓”可以定义为将梭菌神经毒素轴突运输朝向位于脊髓附近的神经细胞体。

术语“皮区神经”可以与术语“脊神经”和/或“传入性脊神经”同义使用。脊神经支配特定皮区(例如以提供皮区神经)，并且下文提供关于脊神经更多细节。如下文将更详细地解释，“皮区”可以定义为任何给定脊神经供应的皮肤区域。为方便，本发明靶向的神经可以称作“皮区神经”，以显示所靶向神经与皮区之间的联系。也就是说，应当指出遍及本公开，“皮区神经”还可以(例如备选)称作“脊神经”和/或“传入性脊神经”。例如，“T10皮区神经”可以称作“T10脊神经”，并且对于本文所述的任何皮区神经均如此。

梭菌神经毒素可以通过任何允许施用梭菌神经毒素至皮区神经(例如脊神经)及逆向轴突运输梭菌神经毒素至脊髓的途径施用。合适施用途径的实例包括皮内施用和鞘内施用。

在优选的实施方案中，通过皮内施用(例如至皮区)来施用梭菌神经毒素。以这种方式，可以将梭菌神经毒素按侵入最小方式施用，同时靶向内部器官处损害引起的疼痛，否则这将需要通达患者躯体内部区域。除皮内施用法提供的便利之外，进一步认为与备选施用途径(例如肌内或皮下施用)比较时，皮内施用提供增强的效果。在一个特别优选的实施方案中，梭菌神经毒素通过皮内施用至皮区来施用。也就是说，优选通过皮内施用至具有向促成内脏疼痛的内脏映射的皮区神经的皮区来施用梭菌神经毒素。

可以每个治疗疗程在多达20个或15个注射部位施用梭菌神经毒素。优选地，可以每个治疗疗程在多达10个注射部位(例如多达9、8、7、6、5、4、3或2个部位)施用梭菌神经毒素。在一个实施方案中，可以每个治疗疗程在1-10个、3-10个、5-10或7-10个注射部位施用梭菌神经毒素。

“皮区”(又称作“外周神经域”)可以定义为主要由来自任何给定脊神经的背根中的传入神经纤维供应的皮肤区域。皮区服从皮肤的脊神经支配模式。例如，胸腔和腹部的皮区作为形成个体的一叠椎间盘(disc)存在。沿着臂和腿，皮区纵向分布。皮区一般模式共有于全部个体之间。因为脊髓的每节段(神经)支配身体的不同区域，故皮区可以精确地映射到身体表面上。临床上使用的人类受试者典型皮区图概述于作为国际脊髓损伤神经系统分类标准(ISNCSCI)产生的美国脊髓损伤协会(ASIA)工作表中。在撰写时，2019版所述工作表在此可获得：https://asia-spinalinjury.org/wp-content/uploads/2019/10/ASIA-ISCOS-Worksheet_10.2019_PRINT-Page-1-2.pdf。皮区图还描述于诸教材中，如Wall和Melzack的“Textbook of Pain(疼痛教材)”(McMahon等人编辑.；第6版)-参见第53章和图53-1(本文中如图1B改编)。本图显示内脏支配作用的节段平面和多种内脏的相应皮区，例如‘映射’至内脏的皮区。

每个皮区一般由单个脊神经供应。因此，“皮区”可以定义为任何给定脊神经供应的皮肤区域，如上文提到，所述脊神经在本文中也称作皮区神经。更具体地，如上文提到，“皮区”可以指由来自任何给定脊神经的背根中的传入神经纤维供应的皮肤区域。在人类中，存在30个皮区(比脊神数目少一个，因为C1脊神经一般没有感觉根；因此，皮区始于脊神经C2)。

遍及本公开，给予某皮区的名称便利地对应于支配所述皮区的特定脊神经(本文中也称作皮区神经)的名称。例如，C3脊神经(也称作C3皮区神经)支配的皮区便利地称作“C3皮区”。类似地，T1脊神经(也称作T1皮区神经)支配的皮区便利地称作“T1皮区”。

内脏一般在刺激内脏中的伤害感受性受体后借助内脏传入纤维传输内脏伤害感受性信息至中枢神经系统(例如脊髓)。脊髓的内脏传入神经支配作用从颈部分布至骶脊髓节段。二级脊髓神经元接受内脏传入性输入以统合内脏疼痛。脊髓中接受内脏传入性输入(又称作“内脏感受性神经元”)的所述二级神经元主要位于脊髓浅层，更深地位于板层V(包括TL脊髓中的中间外侧细胞柱和骶副交感核)中及位于中央管背部的内侧LS脊髓(板层X)。

每种内脏包含可能涉及内脏疼痛(受所述内脏促成)的相应皮区。这是因为抵达脊髓的内脏传入性输入(例如感觉性输入)还以汇聚为特征。即，接受内脏输入(传入性/感觉性输入)的二级脊髓神经元还从皮肤/皮区接受汇聚性躯体(或皮肤)输入，这提供内脏感觉性体转送至躯体部位的解释(例如，放射至颈部、肩部或下颏/颌部伴心绞痛的胸骨后深部疼痛)。的确，可以依据在跟内脏传入纤维相同的平面处进入脊髓的躯体传入纤维的皮区分布预测来自内脏的牵涉痛的分布。躯体神经(例如皮区神经)和内脏神经在脊髓处汇聚可以称作“躯体内脏汇聚(somatovisceral convergence)”。

不希望受理论约束，认为通过使用皮区神经(例如脊神经/传入纤维)递送梭菌神经毒素(通过逆向运输)至其中所述皮区神经与内脏传入汇聚的脊髓区域，发明人实现的内脏疼痛抑制利用了这种到二级脊髓神经元上的躯体内脏汇聚。因此，认为梭菌神经毒素可以在脊髓中引起作用(如背侧角中鉴定到的SNAP-25切割佐证)以抑制从内脏传入纤维至二级脊髓神经元的信号传输(例如借助神经递质分泌)，因此抑制内脏疼痛统合入中枢神经系统。

可以理解，内脏传入纤维在背根神经节(DRG)中有细胞体并且止于脊髓背侧角，从所述背侧角中内脏感觉信息在脊髓丘脑对侧束(STT)或同侧背柱(DC)中向上传输至脊柱上部位(脑)。换言之，存在‘上升传输’。因为这种向上(或‘上升’)传输，故认为在脊髓的任何给定节段处抑制内脏疼痛还可以在更向上的节段抑制内脏疼痛统合。例如，通过施用梭菌神经毒素至L1皮区旨在皮区的L1节段处提供内脏疼痛统合抑制作用，也可以在T12段(其相对于L1为上部)提供内脏疼痛统合抑制作用。

接受内脏传入性输入的神经元可以称作“内脏感受性脊髓神经元”。

因此，术语“一个或多个具体指定的皮区神经”可以指一个皮区神经(例如传入性脊神经)，其与来自经确定为促成(例如造成)内脏疼痛的器官/内脏中的内脏传入纤维在脊髓中汇聚。可以向朝着施用神经毒素至“皮区神经”的“皮区”施用梭菌神经毒素；在此情况下，该方法可以包括根据以上权利要求中概述的说明映射所述器官至特定皮区，因而匹配所述器官至一个或多个具体指定的皮区。术语“一个或多个具体指定的皮区”可以指脊神经支配的皮区，所述脊神经与来自经确定为促成内脏疼痛的器官/内脏中的内脏传入纤维在脊髓中汇聚。

如上文所示，汇聚传入性输入是内脏感受性脊髓神经元的特征。认为全部内脏感受性脊髓神经元一般均接受汇聚性躯体输入。已经例如通过研究“牵涉痛(referredpain)”现象，映射出对应于(例如映射至)任何给定内脏的皮区/皮区神经。的确，可以依据在跟内脏传入纤维相同的平面处进入脊髓的躯体传入纤维的皮区分布预测来自内脏的牵涉痛的分布。发明人因此已经利用这类皮区性映射来借助施用梭菌神经毒素至适当的皮区/皮区神经，靶向并抑制内脏疼痛统合。

因此，术语“一个或多个映射至经确定为促成内脏疼痛的器官的皮区神经”可以指一个皮区神经(例如传入性脊神经)，其与来自经确定为促成(例如造成)内脏疼痛的器官/内脏中的内脏传入纤维在脊髓中汇聚。换句话说，术语“一个或多个映射至经确定为促成内脏疼痛的器官的皮区”可以指脊神经支配的皮区，所述脊神经与来自经确定为促成内脏疼痛的器官/内脏中的内脏传入纤维在脊髓中汇聚。如上文所示，汇聚传入性输入是内脏感受性脊髓神经元的特征。认为全部内脏感受性脊髓神经元一般均接受汇聚性躯体输入。已经通过研究“牵涉痛”现象，映射出对应于任何给定内脏的皮区。的确，可以依据在跟内脏传入纤维相同的平面处进入脊髓的躯体传入纤维的皮区分布预测来自内脏的牵涉痛的分布。发明人因此已经利用这类皮区性映射来借助施用梭菌神经毒素至适当的皮区，靶向并抑制内脏疼痛统合。

术语“基础性内脏疼痛统合”可以指激活接受内脏传入性输入的二级脊髓神经元(又称作内脏感受性神经元)。借助伤害感受性受体在内脏处探测到伤害感受性刺激物，并且伤害感受性信息传输至中枢神经系统，后者将信息加工成感知作疼痛的不适感觉。如上文概述，二级脊髓神经元(又称作内脏感受性神经元)受内脏传入性输入激活以统合内脏疼痛。认为通过以下方式实现发明人展示的疼痛抑制作用(参见实施例)：抑制信号从内脏传入纤维传递至脊髓中的内脏感受性神经元，例如抑制神经递质从内脏传入纤维分泌，所述神经递质否则将穿过所述内脏传入纤维与内脏感受性神经元之间的突触以结合内脏感受性神经元上的相应受体。实际上，已经在施用梭菌神经毒素至皮区后在脊髓中检测到SNARE蛋白(更具体地，SNAP-25)切割作用，所述切割作用与内脏疼痛抑制相关。

因为它们涉及定义任何给定的皮区，现在讨论脊神经(遍及本公开也称作皮区神经)。

脊神经是周围神经系统(PNS)中将CNS与身体其余部分连接的部分。在人类中，存在31对脊神经。它们从分支自脊髓的神经根形成。诸脊神经依据与它们接合的脊髓区域命名和分组。存在五组脊神经，即：

-颈神经。存在八对颈神经，编号C1-C8。它们源自颈部(例如颈处脊柱)；

-胸神经。存在12对胸神经，编号T1-T12。它们起源于构成躯干的脊柱部分中；

-腰神经。存在五对腰脊神经，编号L1-L5。它们来自构成您腰部的脊柱部分；

-骶神经。存在五成骶脊神经，编号S1-S5。它们与存在于骨盆中骨之一骶骨接合；

-尾神经。存在单对尾脊神经。这对神经源自尾骨(coccyx或tailbone)区域。

这些神经各自将感觉(包括疼痛)从皮肤特定区域(即皮区)转发至脑。沿着胸部和腹部，众皮区像一叠形成人的圆盘，各自由不同脊神经供应。沿着臂和腿，样式不同：皮区沿肢体纵向分布。总体样式在所有人中相似。

术语“在临近于所述一个或多个具体指定的皮区神经的部位”可以意指位于所述具体指定的皮区神经的5mm、4mm、3mm、2mm或1mm范围内(且包括)的部位。优选地，“在临近于所述一个或多个具体指定的皮区神经的部位”意指将梭菌神经毒素施用至所述具体指定的皮区神经。

术语“在临近于所述一个或多个具体指定的皮区神经的部位”可以意指位于所述一个或多个具体指定的皮区神经的皮区的5mm、4mm、3mm、2mm或1mm范围内(且包括)的部位。优选地，“在临近于所述一个或多个具体指定的皮区神经的部位”意指将梭菌神经毒素施用至所述具体指定的皮区神经的皮区。

术语“在临近于所述一个或多个具体指定的皮区的部位”可以意指位于所述一个或多个具体指定的皮区神经的5mm、4mm、3mm、2mm或1mm范围内(且包括)的部位。优选地，“在临近于所述一个或多个具体指定的皮区神经的部位”意指将梭菌神经毒素施用至所述一个或多个具体指定的皮区神经。

以下是脊神经(本文中也称作皮区神经)清单，连同身体上属于任何给定神经的皮区的位置：

C2-颅骨基部处枕骨隆凸横向至少一厘米。备选地，耳后至少3cm的一个点。

C3-在锁骨上窝中，锁骨中线处。

C4-肩锁关节上方。

C5-在肘前窝水平(径向)侧上，刚好接近于肘部

C6-在拇指近节指骨背面上。

C7-在中指近节指骨背面上。

C8-在小指近节指骨背面上。

T1-在肘前窝内侧(尺侧)上，刚好接近于肱骨内上髁。

T2-在腋窝顶端。

T3-锁骨中线与第三肋间隙交叉。

T4-锁骨中线与位于乳头位置处的第四肋间隙交叉。

T5-锁骨中线与水平居中位于乳头位置和剑突位置之间的第五肋间隙交叉。

T6-锁骨中线与剑突水平位置交叉。

T7-锁骨中线与剑突位置和脐部位置之间四分之一距离处的水平位置交叉。

T8-锁骨中线与剑突位置和脐部位置之间一半距离处的水平位置交叉。

T9-锁骨中线与剑突位置和脐部位置之间四分之三距离处的水平位置交叉。

T10-锁骨中线交叉，脐部水平位置处。

T11-锁骨中线交叉，在脐部位置和腹股沟韧带之间居中水平位置处。

T12-锁骨中线与腹股沟韧带中点交叉。

L1-在关键感觉点T12和L2之间居中。

L2-在前内侧大腿上，连接腹股沟韧带中点和股骨内上髁的线的中点处。

L3-股骨内上髁处。

L4-内踝上方。

L5-在足背上第三跖趾关节处。

S1-在跟骨侧面上

S2-腘窝中点处。

S3-坐骨结节或臀下皱襞上方。

S4和S5-肛周区内、粘膜皮肤区横向不足一厘米。

因此，为了施用梭菌神经毒素至：

i.C2皮区，可以靠近颅骨基部处枕骨隆凸横向至少一厘米(额外地或备选，靠近耳后至少3cm的一个点)施用梭菌神经毒素；

ii.C3皮区，可以靠近锁骨上窝、在锁骨中线处施用梭菌神经毒素；

iii.C4皮区，可以靠近肩锁关节上方施用梭菌神经毒素；

iv.C5皮区，可以靠近肘前窝水平(径向)侧、刚好接近于肘部施用梭菌神经毒素；

v.C6皮区，可以靠近拇指近节指骨背面施用梭菌神经毒素；

vi.C7皮区，可以靠近中指近节指骨背面施用梭菌神经毒素；

vii.C8皮区，可以靠近小指近节指骨背面施用梭菌神经毒素；

viii.T1皮区，可以靠近肘前窝内侧(尺侧)、刚好接近于肱骨内上髁施用梭菌神经毒素；

ix.T2皮区，可以靠近腋窝顶端施用梭菌神经毒素；

x.T3皮区，可以靠近锁骨中线与第三肋间隙交叉施用梭菌神经毒素；

xi.T4皮区，可以靠近锁骨中线与位于乳头位置处的第四肋间隙交叉施用梭菌神经毒素；xii.T5皮区，可以靠近水平居中位于乳头位置和剑突位置之间的锁骨中线与第五肋间隙交叉施用梭菌神经毒素；

xiii.T6皮区，可以靠近锁骨中线和剑突水平位置交叉施用梭菌神经毒素；

xiv.T7皮区，可以靠近剑突位置和脐部位置之间四分之一距离处的锁骨中线与水平位置交叉施用梭菌神经毒素；

xv.T8皮区，可以靠近锁骨中线与剑突位置和脐部位置之间一半距离处的水平位置交叉施用梭菌神经毒素；

xvi.T9皮区，可以靠近锁骨中线与剑突位置和脐部位置之间四分之三距离处的水平位置交叉施用梭菌神经毒素；

xvii.T10皮区，可以靠近交叉锁骨中线、在脐部水平位置处施用梭菌神经毒素；xviii.T11皮区，可以靠近锁骨中线交叉、在脐部位置与腹股沟韧带之间居中水平位置处施用梭菌神经毒素；

xix.T12皮区，可以靠近锁骨中线与腹股沟韧带中点交叉施用梭菌神经毒素；

xx.L1皮区，可以靠近关键感觉点T12和L2之间居中施用梭菌神经毒素；

xxi.L2皮区，可以靠近前内侧大腿上、连接腹股沟韧带中点和股骨内上髁的线的中点处施用梭菌神经毒素；

xxii.L3皮区，可以靠近股骨内上髁施用梭菌神经毒素；

xxiii.L4皮区，可以靠近内踝上方施用梭菌神经毒素；

xxiv.L5皮区，可以靠近足背在第三跖趾关节处施用梭菌神经毒素；

xxv.S1皮区，可以靠近跟骨侧面施用梭菌神经毒素；

xxvi.S2皮区，可以靠近腘窝中点施用梭菌神经毒素；

xxvii.S3皮区，可以靠近坐骨结节或臀下皱襞上方施用梭菌神经毒素；

xxviii.S4和/或S5皮区，可以靠近肛周区、粘膜皮肤区横向不足一厘米施用梭菌神经毒素。

为了施用梭菌神经毒素至：

i.C2皮区神经，可以靠近颅骨基部处枕骨隆凸横向至少一厘米(额外地或备选，靠近耳后至少3cm的一个点)施用梭菌神经毒素；

ii.C3皮区神经，可以靠近锁骨上窝、在锁骨中线处施用梭菌神经毒素；

iii.C4皮区神经，可以靠近肩锁关节上方施用梭菌神经毒素；

iv.C5皮区神经，可以靠近肘前窝水平(径向)侧、刚好接近于肘部施用梭菌神经毒素；

v.C6皮区神经，可以靠近拇指近节指骨背面施用梭菌神经毒素；

vi.C7皮区神经，可以靠近中指近节指骨背面施用梭菌神经毒素；

vii.C8皮区神经，可以靠近小指近节指骨背面施用梭菌神经毒素；

viii.T1皮区神经，可以靠近肘前窝内侧(尺侧)，刚好接近于肱骨内上髁施用梭菌神经毒素；

ix.T2皮区神经，可以靠近腋窝顶端施用梭菌神经毒素；

x.T3皮区神经，可以靠近锁骨中线与第三肋间隙交叉施用梭菌神经毒素；

xi.T4皮区神经，可以靠近锁骨中线与位于乳头位置处的第四肋间隙交叉施用梭菌神经毒素；

xii.T5皮区神经，可以靠近锁骨中线与水平居中位于乳头位置和剑突位置之间的第五肋间隙交叉施用梭菌神经毒素；

xiii.T6皮区神经，可以靠近锁骨中线和剑突水平位置交叉施用梭菌神经毒素；

xiv.T7皮区神经，可以靠近锁骨中线与剑突位置和脐部位置之间四分之一距离处的水平位置交叉施用梭菌神经毒素；

xv.T8皮区神经，可以靠近锁骨中线与剑突位置和脐部位置之间一半距离处的水平位置交叉施用梭菌神经毒素；

xvi.T9皮区神经，可以靠近剑突位置和脐部位置之间四分之三距离处的锁骨中线与水平位置交叉施用梭菌神经毒素；

xvii.T10皮区神经，可以靠近交叉锁骨中线、在脐部水平位置处施用梭菌神经毒素；

xviii.T11皮区神经，可以靠近锁骨中线交叉、在脐部位置与腹股沟韧带之间居中水平位置处施用梭菌神经毒素；

xix.T12皮区神经，可以靠近锁骨中线与腹股沟韧带中点交叉施用梭菌神经毒素；

xx.L1皮区神经，可以靠近关键感觉点T12和L2之间居中施用梭菌神经毒素；

xxi.L2皮区神经，可以靠近前内侧大腿上、连接腹股沟韧带中点和股骨内上髁的线的中点处施用梭菌神经毒素；

xxii.L3皮区神经，可以靠近股骨内上髁施用梭菌神经毒素；

xxiii.L4皮区神经，可以靠近内踝上方施用梭菌神经毒素；

xxiv.L5皮区神经，可以靠近足背在第三跖趾关节处施用梭菌神经毒素；

xxv.S1皮区神经，可以靠近跟骨侧面施用梭菌神经毒素；

xxvi.S2皮区神经，可以靠近腘窝中点施用梭菌神经毒素；

xxvii.S3皮区神经，可以靠近坐骨结节或臀下皱襞上方施用梭菌神经毒素；

xxviii.S4和/或S5皮区神经，可以靠近肛周区、粘膜皮肤区横向不足一厘米施用梭菌神经毒素。

术语“在临近于所述一个或多个具体指定的皮区神经的部位”可以意指位于身体上所述位置的5mm、4mm、3mm、2mm或1mm范围内(且包括)的部位，其中所述位置属于所述一个或多个具体指定的皮区神经的皮区。

术语“在临近于所述一个或多个具体指定的皮区的部位”可以意指位于身体上所述位置的5mm、4mm、3mm、2mm或1mm范围内(且包括)的部位，其中所述位置属于所述一个或多个具体指定的皮区。

如上文提到，已经例如从研究“牵涉痛”现象中，映射出内脏和皮区之间的关联。在牵涉痛中，来自皮区的感觉神经纤维可以汇集在跟一般内脏传入纤维相同的脊髓平面处，如来自心脏的感觉神经纤维。当一般内脏感觉纤维受刺激时，中枢神经系统并未明确地辨别疼痛是否正来自体壁或正来自内脏，从而它将疼痛感知为来自体壁上某处，例如左臂/手疼痛、下颏疼痛。从而疼痛“”转送”至相同脊髓节段的相关皮区。

因此，可以确定接受梭菌神经毒素施用以抑制给定内脏/器官中疼痛的合适皮区/皮区神经。图1中提供皮区与多种内脏之间相互作用的插图。

例如，施用(梭菌神经毒素)至：

-T8、T9、或T10皮区中一者或多者可以抑制内脏疼痛，其中胃脏促成内脏疼痛；

-T8、T9、T10和/或T11皮区(优选地T8、T9、和/或T10皮区)中一者或多者可以抑制内脏疼痛，其中肝脏促成内脏疼痛；

-T8、T9、T10和/或T11皮区(优选地T8、T9、和/或T10皮区)中一者或多者可以抑制内脏疼痛，其中胆囊促成内脏疼痛；

-T7、T8、T9、T10、T11和/或T12皮区中一者或多者可以抑制内脏疼痛，其中胰腺促成内脏疼痛；

-T10、T11和/或T12皮区中一者或多者可以抑制内脏疼痛，其中小肠促成内脏疼痛；

-T11、S1、S2、S3和/或S4皮区(优选地S1、S2、S3和/或S4皮区)中一者或多者可以抑

制内脏疼痛，其中结肠促成内脏疼痛；

制内脏疼痛，其中直肠促成内脏疼痛；

-T10、T11、T12和/或L1皮区(优选地T11、T12和/或L1皮区)中一者或多者可以抑制

内脏疼痛，其中肾促成内脏疼痛；

-T11、T12和/或L1皮区中一者或多者可以抑制内脏疼痛，其中输尿管促成内脏疼痛；

-T11、T12、L1、S1、S2、S3和/或S4皮区(优选地T12、L1、S1、S2、S3和/或S4皮区)

中一者或多者可以抑制内脏疼痛，其中膀胱(膀胱)促成内脏疼痛；

-T11皮区可以抑制内脏疼痛，其中卵巢促成内脏疼痛；

-T11皮区可以抑制内脏疼痛，其中输卵管促成内脏疼痛；

-T12和/或L1皮区中一者或多者可以抑制内脏疼痛，其中子宫促成内脏疼痛；

-S2、S3和/或S4皮区中一者或多者可以抑制内脏疼痛，其中子宫颈促成内脏疼痛；

-T10、T11、L1、L2、S1、S2、S3和/或S4皮区(优选地T11、L1、L2、S1、S2、S3和/

或S4皮区)中一者或多者可以抑制内脏疼痛，其中睾丸促成内脏疼痛；

或S4皮区)中一者或多者可以抑制内脏疼痛，其中附睾促成内脏疼痛；

-T3和/或T4皮区中一者或多者可以抑制内脏疼痛，其中心脏促成内脏疼痛；

-T4和/或T5皮区中一者或多者可以抑制内脏疼痛，其中食道促成内脏疼痛。

例如，施用(梭菌神经毒素)至：

-T8、T9、或T10皮区神经中一者或多者可以抑制内脏疼痛，其中胃促成内脏疼痛；

-T8、T9、T10和/或T11皮区神经(优选地T8、T9、和/或T10皮区神经)中一者或多者可

以抑制内脏疼痛，其中肝脏促成内脏疼痛；

以抑制内脏疼痛，其中胆囊促成内脏疼痛；

-T7、T8、T9、T10、T11和/或T12皮区神经中一者或多者可以抑制内脏疼痛，其中胰

腺促成内脏疼痛；

-T10、T11和/或T12皮区神经中一者或多者可以抑制内脏疼痛，其中小肠促成内脏疼痛；-T11、S1、S2、S3和/或S4皮区神经(优选地S1、S2、S3和/或S4皮区神经)中一者或多

者可以抑制内脏疼痛，其中结肠促成内脏疼痛；

-T11、S1、S2、S3和/或S4皮区神经(优选地S1、S2、S3和/或S4皮区)中一者或多者可

以抑制内脏疼痛，其中直肠促成内脏疼痛；

-T10、T11、T12和/或L1皮区神经(优选地T11、T12和/或L1皮区神经)中一者或多者可以抑制内脏疼痛，其中肾促成内脏疼痛；

-T11、T12和/或L1皮区神经中一者或多者可以抑制内脏疼痛，其中输尿管促成内脏疼痛；

-T11、T12、L1、S1、S2、S3和/或S4皮区神经(优选地T12、L1、S1、S2、S3和/或S4皮区神经)中一者或多者可以抑制内脏疼痛，其中膀胱(膀胱)促成内脏疼痛；

-T11皮区神经可以抑制内脏疼痛，其中卵巢促成内脏疼痛；

-T11皮区神经可以抑制内脏疼痛，其中输卵管促成内脏疼痛；

-T12和/或L1皮区神经中一者或多者可以抑制内脏疼痛，其中子宫促成内脏疼痛；

-S2、S3和/或S4皮区神经中一者或多者可以抑制内脏疼痛，其中子宫颈促成内脏疼痛；

-T10、T11、L1、L2、S1、S2、S3和/或S4皮区神经(优选地T11、L1、L2、S1、S2、

S3和/或S4皮区神经)中一者或多者可以抑制内脏疼痛，其中睾丸促成内脏疼痛；

S3和/或S4皮区神经)中一者或多者可以抑制内脏疼痛，其中附睾促成内脏疼痛；

-T3和/或T4皮区神经中一者或多者可以抑制内脏疼痛，其中心脏促成内脏疼痛；

-T4和/或T5皮区神经中一者或多者可以抑制内脏疼痛，其中食道促成内脏疼痛。

值得指出的是，许多皮区/皮区神经可以映射至任何给定内脏，并且映射至不同内脏的皮区中可能存在重叠。这是因为内脏(例如内脏传入纤维)的脊髓支配从颈部脊髓段至骶部脊髓段分布遍及整个脊髓。实际上，已经记录到脊髓内脏传入性输入从脊髓进入节段传播至几种前节段和尾节段。例如，来自胃部的内脏传入纤维(其将伤害感受性信号从胃部转发至脊髓)可以支配脊髓的T8、T9和T10段中每一者。因此，映射(借助神经纤维、更具体地传入性脊神经)至T8、T9和T10段中任一者的皮区可以在本发明中用于施用梭菌神经毒素以抑制来自胃部的内脏传入纤维的疼痛统合入中枢神经系统(更具体地是脊髓)。来自肝脏的内脏传入纤维还支配T8、T9和T10段，因此，映射至一个内脏的皮区还可以映射至另一个内脏。

在一个实施方案中，向(或临近于)T8、T9和/或T10皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。例如，可以向(或临近于)T8皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。额外地或备选地，可以向(或临近于)T9皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。额外地或备选地，可以向(或临近于)T10皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。可以向(或临近于)选自T8、T9和T10皮区的至少两个皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。例如，可以向(或临近于)T8、T9和T10皮区(或皮区神经)中每者施用梭菌神经毒素。所述皮区映射至胃脏。

在一个实施方案中，向(或临近于)T8、T9、T10和/或T11(例如T8、T9、和/或T10)皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。例如，可以向(或临近于)T8皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。额外地或备选地，可以向(或临近于)T9皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。额外地或备选地，可以向(或临近于)T10皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。额外地或备选地，可以向(或临近于)T11皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。可以向(或临近于)选自T8、T9、T10和T11(例如T8、T9、和/或T10)皮区(或皮区神经)的至少两个或三个皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。例如，可以向(或临近于)T8、T9、T10和T11(例如T8、T9和/或T10)皮区(或皮区神经)中每者施用梭菌神经毒素。所述皮区(或皮区神经)映射至肝脏。额外地或备选地，所述皮区映射至胆囊。

在一个实施方案中，向(或临近于)T7、T8、T9、T10、T11和/或T12皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。例如，可以向(或临近于)T7皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。额外地或备选地，可以向(或临近于)T8皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。额外地或备选地，可以向(或临近于)T9皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。额外地或备选地，可以向(或临近于)T10皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。额外地或备选地，可以向(或临近于)T11皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。额外地或备选地，可以向(或临近于)T12皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。可以向(或临近于)选自T7、T8、T9、T10、T11和T12皮区(或皮区神经)的至少两个皮区施用梭菌神经毒素。例如，可以向(或临近于)T7、T8、T9、T10、T11和T12皮区(或皮区神经中每者)施用梭菌神经毒素。所述皮区(或皮区神经)映射至胰腺。

在一个实施方案中，向(或临近于)T10、T11和/或T12皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。例如，可以向(或临近于)T10皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。额外地或备选地，可以向(或临近于)T11皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。额外地或备选地，可以向(或临近于)T12皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。可以向(或临近于)选自T10、T11和T12皮区(或皮区神经)的至少两个皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。例如，可以向(或临近于)中每者T10、T11和T12皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。所述皮区(或皮区神经)映射至小肠。

在一个实施方案中，向(或临近于)T11、S1、S2、S3和/或S4皮区(优选地S1、S2、S3和/或S4皮区(或皮区神经))施用梭菌神经毒素。例如，可以向(或临近于)T11皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。额外地或备选地，可以向(或临近于)S1皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。额外地或备选地，可以向(或临近于)S2皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。额外地或备选地，可以向(或临近于)S3皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。额外地或备选地，可以向(或临近于)S4皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。可以向(或临近于)选自T11、S1、S2、S3和S4(例如S1、S2、S3和S4)皮区(或皮区神经)的至少两个、三个或四个皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。例如，可以向(或临近于)中每者T11、S1、S2、S3和S4(例如S1、S2、S3和S4)皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。所述皮区(或皮区神经)映射至结肠。

在一个实施方案中，向(或临近于)T10、T11、T12和/或L1(例如T11、T12和/或L1)皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。例如，可以向(或临近于)T10皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。额外地或备选地，可以向(或临近于)T11皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。额外地或备选地，可以向(或临近于)T12皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。额外地或备选地，可以向(或临近于)L1皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。可以向(或临近于)选自T10、T11、T12和L1(例如T11、T12和/或L1)皮区(或皮区神经)的至少两个或三个皮区施用梭菌神经毒素。例如，可以向(或临近于)T10、T11、T12和L1(例如T11、T12和L1)皮区(或皮区神经)中每者施用梭菌神经毒素。所述皮区(或皮区神经)映射至肾。

在一个实施方案中，向(或临近于)T11、T12、L1、S1、S2、S3和/或S4(例如T12、L1、S1、S2、S3和/或S4)皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。例如，可以向(或临近于)T11皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。额外地或备选地，可以向(或临近于)T12皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。额外地或备选地，可以向(或临近于)L1皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。额外地或备选地，可以向(或临近于)S1皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。额外地或备选地，可以向(或临近于)S2皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。额外地或备选地，可以向(或临近于)S3皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。额外地或备选地，可以向(或临近于)S4皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。可以向(或临近于)选自T11、T12、L1、S1、S2、S3和S4(例如T12、L1、S1、S2、S3和/或S4)皮区(或皮区神经)的至少两个、三个或四个或五个皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。例如，可以向(或临近于)T11、T12、L1、S1、S2、S3和S4(例如T12、L1、S1、S2、S3和S4)皮区(或皮区神经)中每者施用梭菌神经毒素。所述皮区(或皮区神经)映射至膀胱(膀胱)。

在一个实施方案中，向(或临近于)T11皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。所述皮区(或皮区神经)映射至卵巢/双侧卵巢。额外地或可选地，所述皮区(或皮区神经)映射至输卵管。

在一个实施方案中，向(或临近于)T12、和/或L1皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。例如，可以向(或临近于)T12皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。额外地或备选地，可以向(或临近于)L1皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。可以向(或临近于)T12、和L1皮区(或皮区神经)中每者施用梭菌神经毒素。所述皮区(或皮区神经)映射至子宫。

在一个实施方案中，向(或临近于)S2、S3和/或S4皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。例如，可以向(或临近于)S2皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。额外地或备选地，可以向(或临近于)S3皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。额外地或备选地，可以向(或临近于)S4皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。可以向(或临近于)选自S2、S3和S4皮区(或皮区神经)的至少两个皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。例如，可以向(或临近于)S2、S3和S4皮区(或皮区神经)中每者施用梭菌神经毒素。所述皮区(或皮区神经)映射至子宫颈。

在一个实施方案中，向(或临近于)T10、T11、L1、L2、S1、S2、S3和/或S4(例如T11、L1、L2、S1、S2、S3和/或S4)皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。例如，可以向(或临近于)T10皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。额外地或备选地，可以向(或临近于)T11皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。额外地或备选地，可以向(或临近于)L1皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。额外地或备选地，可以向(或临近于)L2皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。额外地或备选地，可以向(或临近于)S1皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。额外地或备选地，可以向(或临近于)S2皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。额外地或备选地，可以向(或临近于)S3皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。额外地或备选地，可以向(或临近于)S4皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。可以向(或临近于)选自T10、T11、L1、L2、S1、S2、S3和S4(例如T11、L1、L2、S1、S2、S3和/或S4)皮区(或皮区神经)的至少两个、三个、四个、五个、六个或七个皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。例如、可以向(或临近于)T10、T11、L1、L2、S1、S2、S3和S4(例如T11、L1、L2、S1、S2、S3和S4)皮区(或皮区神经)中每者施用梭菌神经毒素。所述皮区(或皮区神经)映射至睾丸。额外地或备选地，所述皮区(或皮区神经)映射至附睾。

因此，可以在经确定为促成内脏疼痛的众多器官中抑制内脏疼痛。

众多疾病/病状引起内部器官损伤或损害，导致可能往往长期且对管理重要的内脏疼痛不适感(例如因为疾病本身可能耗时痊愈)。例如，在克罗恩病中，消化系统诸部分如胃和肠发炎，导致疼痛从所述器官中浮现。因此，随之而来的是本发明找到在抑制多种不同疾病/病状所致内脏疼痛症状方面的有利实用性。

在一个实施方案中，内脏疼痛可以是膀胱疼痛综合征(间质性膀胱炎)、慢性功能性腹痛(CFAP)、功能性便秘、功能性消化不良、非心源性胸痛(NCCP)、慢性腹痛、胃炎、炎性肠病等，例如，克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、显微镜下结肠炎、憩室炎和胃肠炎；间质性膀胱炎；肠道局部缺血；胆囊炎；阑尾炎；胃食管回流；溃疡、肾石病、尿路感染、胰腺炎、疝、自身免疫性疼痛，例如包括类肉状瘤病和血管炎；器官内脏疼痛，例如包括，因消化道创伤性、炎性或退行性损害产生或因肿瘤侵犯感觉神经支配产生的疼痛；治疗诱导的内脏疼痛，例如包括参与化疗治疗时的疼痛或参与放射治疗时的疼痛；克罗恩病、溃疡性结肠炎、肝硬化、肠易激综合征、乳糜泻、子宫内膜异位症、胃溃疡、肾结石、膀胱结石、胆囊结石和/或腹膜炎。

在一个优选的实施方案中、内脏疼痛由选自膀胱疼痛综合征(间质性膀胱炎)、肝硬化、克罗恩病、溃疡性结肠炎、肠易激综合征、乳糜泻、子宫内膜异位症、胃溃疡、肾结石、膀胱结石、胆囊结石、胰腺炎和腹膜炎的疾病引起。

换言之，内脏疼痛可以是间质性膀胱炎疼痛、肝硬化疼痛、克罗恩病疼痛、溃疡性结肠炎疼痛、肠易激综合征疼痛、乳糜泻疼痛、子宫内膜异位症疼痛、胃溃疡疼痛、肾结石疼痛、膀胱结石疼痛、胆囊结石疼痛、胰腺炎疼痛和/或腹膜炎疼痛。

内脏疼痛可以由血管疾病引起或与之相关。

内脏疼痛的实例包括以下

A.功能性内脏疼痛

功能性内脏疼痛例如包括肠易激综合征和慢性功能性腹痛(CFAP)、功能性便秘和功能性消化不良、非心源性胸痛(NCCP)和慢性腹痛。

B.慢性胃肠道炎症

慢性胃肠道炎症例如包括胃炎、炎性肠病等例如克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、显微镜下结肠炎、憩室炎和胃肠炎；间质性膀胱炎；肠道局部缺血；胆囊炎；阑尾炎；胃食管反流；溃疡、肾结石、尿路感染、胰腺炎和疝。

C.自身免疫性疼痛

自身免疫性疼痛例如包括类肉状瘤病和血管炎。

D.器官性内脏疼痛

器官性内脏疼痛例如包括因消化道创伤性、炎性或退行性病灶产生或因肿瘤侵入感觉神经支配产生的疼痛。

E.治疗诱导的内脏疼痛

治疗诱导的内脏疼痛例如包括参与化疗疗法的疼痛或参与放射疗法的疼痛。

内脏疼痛可以选自：子宫内膜异位症疼痛、胰腺炎疼痛、胃肠道疼痛和由血管疾病引起或与之相关的内脏疼痛(更优选地子宫内膜异位症疼痛)。

例如，内脏疼痛可以由膀胱疼痛综合征(间质性膀胱炎)引起。在这种情况下，可以向T12、L1、S2、S3和/或S4皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。换言之，为了抑制膀胱疼痛综合征(间质性膀胱炎)引起的内脏疼痛，本发明的方法可以包括(a)确定膀胱作为患者中促成所述内脏疼痛的器官；(b)根据以下说明映射所述器官至特定的皮区神经，因而匹配所述器官至一个或多个具体指定的皮区神经：膀胱映射至T11、T12、L1、S1、S2、S3和/或S4皮区神经；和(c)在临近于所述一个或多个具体指定的皮区神经的部位施用治疗有效量的梭菌神经毒素，其中在施用所述梭菌神经毒素至患者后，梭菌神经毒素经由逆向轴突运输而被运输至脊髓，在此处它结合感觉性传入神经细胞，通过受体介导的内吞作用进入所述细胞并且阻抑神经递质从所述细胞释放，因而抑制所述内脏疼痛。

在一个实施方案中，内脏疼痛可以由肝硬化(肝硬变)引起。在这种情况下，可以向T8、T9、T10和/或T11皮区施用神经梭菌神经毒素。换言之，为了抑制肝硬化引起的内脏疼痛，本发明的方法可以包括(a)确定肝脏作为患者中促成所述内脏疼痛的器官；(b)根据以下说明映射所述器官至特定的皮区神经，因而匹配所述器官至一个或多个具体指定的皮区神经：胃映射至T8、T9、T10和/或T11皮区神经；和(c)在临近于所述一个或多个具体指定的皮区神经的部位施用治疗有效量的梭菌神经毒素，其中在施用所述梭菌神经毒素至患者后，梭菌神经毒素经由逆向轴突运输而被运输至脊髓，在此处它结合感觉性传入神经细胞，通过受体介导的内吞作用进入所述细胞并且阻抑神经递质从所述细胞释放，因而抑制所述内脏疼痛。

在一个实施方案中，内脏疼痛可以由胆囊结石引起。在这种情况下，可以向T8、T9、T10和/或T11皮区施用神经梭菌神经毒素。换言之，为了抑制肝硬化引起的内脏疼痛，本发明的方法可以包括(a)确定肝脏作为患者中促成所述内脏疼痛的器官；(b)根据以下说明映射所述器官至特定的皮区神经，因而匹配所述器官至一个或多个具体指定的皮区神经：胆囊映射至T8、T9、T10和/或T11皮区神经；和(c)在临近于所述一个或多个具体指定的皮区神经的部位施用治疗有效量的梭菌神经毒素，其中在施用所述梭菌神经毒素至患者后，梭菌神经毒素经由逆向轴突运输而被运输至脊髓，在此处它结合感觉性传入神经细胞，通过受体介导的内吞作用进入所述细胞并且阻抑神经递质从所述细胞释放，因而抑制所述内脏疼痛。

在一个实施方案中，内脏疼痛可以由克罗恩病引起。在这种情况下，可以向T8、T9、T10、T11、T12、S1、S2、S3和/或S4皮区施用梭菌神经毒素。换言之，为了抑制克罗恩病引起的内脏疼痛，本发明的方法可以包括(a)确定胃脏作为患者中促成所述内脏疼痛的器官；(b)根据以下说明映射所述器官至特定的皮区神经，因而匹配所述器官至一个或多个具体指定的皮区神经：胃映射至T8、T9和/或T10皮区神经，小肠映射至T10、T11和/或T12皮区神经，结肠映射至T11、S1、S2、S3和/或S4皮区神经；和(c)在临近于所述一个或多个具体指定的皮区神经的部位施用治疗有效量的梭菌神经毒素，其中在施用所述梭菌神经毒素至患者后，梭菌神经毒素经由逆向轴突运输而被运输至脊髓，在此处它结合感觉性传入神经细胞，通过受体介导的内吞作用进入所述细胞并且阻抑神经递质从所述细胞释放，因而抑制所述内脏疼痛。

应当指出，存在五个主要的克罗恩病类型，一般各自依据炎症在胃肠道中的位置定义。克罗恩病类型包括回肠结肠炎(例如小肠/回肠末端和一部分大肠/结肠发炎)、回肠炎(例如小肠/回肠的最末段发炎)；胃十二指肠克罗恩病(例如胃部及小肠/十二指肠始端发炎)、空肠回肠炎(例如小肠/空肠中间部分发炎)和克罗恩(肉芽肿性)结肠炎(例如结肠发炎)。

因此，为了抑制回肠结肠炎引起的内脏疼痛，本发明的方法可以包括(a)确定小肠和/或结肠作为患者中促成所述内脏疼痛的器官；(b)根据以下说明映射所述器官至特定的皮区神经，因而匹配所述器官至一个或多个具体指定的皮区神经：小肠映射至T10、T11和/或T12皮区神经，结肠映射至T11、S1、S2、S3和/或S4皮区神经；和(c)在临近于所述一个或多个具体指定的皮区神经的部位施用治疗有效量的梭菌神经毒素，其中在施用所述梭菌神经毒素至患者后，梭菌神经毒素经由逆向轴突运输而被运输至脊髓，在此处它结合感觉性传入神经细胞，通过受体介导的内吞作用进入所述细胞并且阻抑神经递质从所述细胞释放，因而抑制所述内脏疼痛。

为了抑制回肠炎引起的内脏疼痛，本发明的方法可以包括(a)确定小肠作为患者中促成所述内脏疼痛的器官；(b)根据以下说明映射所述器官至特定的皮区神经，因而匹配所述器官至一个或多个具体指定的皮区神经：小肠映射至T10、T11和/或T12皮区神经；和(c)在临近于所述一个或多个具体指定的皮区神经的部位施用治疗有效量的梭菌神经毒素，其中在施用所述梭菌神经毒素至患者后，梭菌神经毒素经由逆向轴突运输而被运输至脊髓，在此处它结合感觉性传入神经细胞，通过受体介导的内吞作用进入所述细胞并且阻抑神经递质从所述细胞释放，因而抑制所述内脏疼痛。

为了抑制胃十二指肠克罗恩病引起的内脏疼痛，本发明的方法可以包括(a)确定胃脏和/或小肠作为患者中促成所述内脏疼痛的器官；(b)根据以下说明映射所述器官至特定的皮区神经，因而匹配所述器官至一个或多个具体指定的皮区神经：胃映射至T8、T9和/或T10皮区神经，小肠映射至T10、T11和/或T12皮区神经；和(c)在临近于所述一个或多个具体指定的皮区神经的部位施用治疗有效量的梭菌神经毒素，其中在施用所述梭菌神经毒素至患者后，梭菌神经毒素经由逆向轴突运输而被运输至脊髓，在此处它结合感觉性传入神经细胞，通过受体介导的内吞作用进入所述细胞并且阻抑神经递质从所述细胞释放，因而抑制所述内脏疼痛。

为了抑制空肠回肠炎引起的内脏疼痛，本发明的方法可以包括(a)确定小肠作为患者中促成所述内脏疼痛的器官；(b)根据以下说明映射所述器官至特定的皮区神经，因而匹配所述器官至一个或多个具体指定的皮区神经：小肠映射至T10、T11和/或T12皮区神经；和(c)在临近于所述一个或多个具体指定的皮区神经的部位施用治疗有效量的梭菌神经毒素，其中在施用所述梭菌神经毒素至患者后，梭菌神经毒素经由逆向轴突运输而被运输至脊髓，在此处它结合感觉性传入神经细胞，通过受体介导的内吞作用进入所述细胞并且阻抑神经递质从所述细胞释放，因而抑制所述内脏疼痛。

为了抑制克罗恩(肉芽肿性)结肠炎引起的内脏疼痛，本发明的方法可以包括(a)确定结肠作为患者中促成所述内脏疼痛的器官；(b)根据以下说明映射所述器官至特定的皮区神经，因而匹配所述器官至一个或多个具体指定的皮区神经：结肠映射至T11、S1、S2、S3和/或S4皮区神经；和(c)在临近于所述一个或多个具体指定的皮区神经的部位施用治疗有效量的梭菌神经毒素，其中在施用所述梭菌神经毒素至患者后，梭菌神经毒素经由逆向轴突运输而被运输至脊髓，在此处它结合感觉性传入神经细胞，通过受体介导的内吞作用进入所述细胞并且阻抑神经递质从所述细胞释放，因而抑制所述内脏疼痛。

在一个实施方案中，内脏疼痛可以由溃疡性结肠炎引起。在这种情况下，可以向S1、S2、S3和/或S4皮区(或皮区神经)施用梭菌神经毒素。换言之，为了抑制溃疡性结肠炎引起的内脏疼痛，本发明的方法可以包括(a)确定结肠和/或直肠作为患者中促成所述内脏疼痛的器官；(b)根据以下说明映射所述器官至特定的皮区神经，因而匹配所述器官至一个或多个具体指定的皮区神经：结肠映射至T11、S1、S2、S3和/或S4皮区神经，直肠映射至T11、S1、S2、S3和/或S4皮区神经；和(c)在临近于所述一个或多个具体指定的皮区神经的部位施用治疗有效量的梭菌神经毒素，其中在施用所述梭菌神经毒素至患者后，梭菌神经毒素经由逆向轴突运输而被运输至脊髓，在此处它结合感觉性传入神经细胞，通过受体介导的内吞作用进入所述细胞并且阻抑神经递质从所述细胞释放，因而抑制所述内脏疼痛。

在一个实施方案中，内脏疼痛可以由肠易激综合征引起。在这种情况下，可以向S1、S2、S3和/或S4皮区施用神经梭菌神经毒素。换言之，本发明的方法可以包括(a)确定大肠作为患者中促成所述内脏疼痛的器官；(b)根据以下说明映射所述器官至特定的皮区神经，因而匹配所述器官至一个或多个具体指定的皮区神经：大肠映射至T11、S1、S2、S3和/或S4皮区神经；和(c)在临近于所述一个或多个具体指定的皮区神经的部位施用治疗有效量的梭菌神经毒素，其中在施用所述梭菌神经毒素至患者后，梭菌神经毒素经由逆向轴突运输而被运输至脊髓，在此处它结合感觉性传入神经细胞，通过受体介导的内吞作用进入所述细胞并且阻抑神经递质从所述细胞释放，因而抑制所述内脏疼痛。

在一个实施方案中，内脏疼痛可以由乳糜泻引起。在这种情况下，可以向T10、T11和/或T12皮区施用梭菌神经毒素。换言之，为了抑制乳糜泻引起的内脏疼痛，本发明的方法可以包括(a)确定小肠作为患者中促成所述内脏疼痛的器官；(b)根据以下说明映射所述器官至特定的皮区神经，因而匹配所述器官至一个或多个具体指定的皮区神经：小肠映射至T10、T11和/或T12皮区神经；和(c)在临近于所述一个或多个具体指定的皮区神经的部位施用治疗有效量的梭菌神经毒素，其中在施用所述梭菌神经毒素至患者后，梭菌神经毒素经由逆向轴突运输而被运输至脊髓，在此处它结合感觉性传入神经细胞，通过受体介导的内吞作用进入所述细胞并且阻抑神经递质从所述细胞释放，因而抑制所述内脏疼痛。

在一个实施方案中，内脏疼痛可以由胃溃疡引起。在这种情况下，可以向T8、T9和/或T10皮区施用梭菌神经毒素。换言之，为了抑制胃溃疡引起的内脏疼痛，本发明的方法可以包括(a)确定胃脏作为患者中促成所述内脏疼痛的器官；(b)根据以下说明映射所述器官至特定的皮区神经，因而匹配所述器官至一个或多个具体指定的皮区神经：胃映射至T8、T9和/或T10皮区神经；和(c)在临近于所述一个或多个具体指定的皮区神经的部位施用治疗有效量的梭菌神经毒素，其中在施用所述梭菌神经毒素至患者后，梭菌神经毒素经由逆向轴突运输而被运输至脊髓，在此处它结合感觉性传入神经细胞，通过受体介导的内吞作用进入所述细胞并且阻抑神经递质从所述细胞释放，因而抑制所述内脏疼痛。

在一个实施方案中，内脏疼痛可以由胰腺炎引起。在这种情况下，可以向T7、T8、T9、T10、T11和/或T12皮区施用梭菌神经毒素。换言之，为了抑制胰腺炎引起的内脏疼痛，本发明的方法可以包括(a)确定胰腺作为患者中促成所述内脏疼痛的器官；(b)根据以下说明映射所述器官至特定的皮区神经，因而匹配所述器官至一个或多个具体指定的皮区神经：胰腺映射至T7、T8、T9、T10、T11和/或T12皮区神经；和(c)在临近于所述一个或多个具体指定的皮区神经的部位施用治疗有效量的梭菌神经毒素，其中在施用所述梭菌神经毒素至患者后，梭菌神经毒素经由逆向轴突运输而被运输至脊髓，在此处它结合感觉性传入神经细胞，通过受体介导的内吞作用进入所述细胞并且阻抑神经递质从所述细胞释放，因而抑制所述内脏疼痛。

在一个实施方案中，内脏疼痛可以由腹膜炎(例如内脏腹膜的腹膜炎)引起。

腹膜炎是腹膜(内衬内腹壁和腹部器官(内脏)的膜)发炎。腹膜和它内衬的器官(内脏)分享相同的感觉神经节和脊髓节段。因此，作为抑制腹膜炎所致内脏疼痛的目标的适当皮区取决于(发炎)腹膜内衬的器官。例如，在(发炎的)腹膜内衬胃脏情况下，本发明的方法可以包括(a)确定胃脏作为患者中促成所述内脏疼痛的器官(例如归因于腹膜发炎)；(b)根据以下说明映射所述器官至特定的皮区神经，因而匹配所述器官至一个或多个具体指定的皮区神经：胃映射至T8、T9和/或T10皮区神经；和(c)在临近于所述一个或多个具体指定的皮区神经的部位施用治疗有效量的梭菌神经毒素，其中在施用所述梭菌神经毒素至患者后，梭菌神经毒素经由逆向轴突运输而被运输至脊髓，在此处它结合感觉性传入神经细胞，通过受体介导的内吞作用进入所述细胞并且阻抑神经递质从所述细胞释放，因而抑制所述内脏疼痛。

在一个优选的实施方案中，内脏疼痛由子宫内膜异位症引起。例如，子宫内膜异位症与选自痛经、慢性盆腔疼痛(CPP)、性交疼痛、便秘、大便困难和慢性背痛的症状相关。

子宫内膜异位症是以慢性盆腔疼痛和不育为特征的慢性和衰竭性疾病。子宫内膜异位症具有庞大的临床负担，影响全球十分之一(1/10)女性。子宫内膜异位症与造成美国经济在生产力损失和直接医疗成本方面每年损失220亿美元的明显社会和经济负担相关。子宫内膜异位症可以定义为子宫内膜腺体和间质存在于子宫腔外部的异常或异位位置，例如异位位置如卵巢和输卵管。子宫内膜异位症出现在20-50％的不育女性中和71-87％的慢性盆腔疼痛女性中。

子宫内膜异位症是其中与子宫内膜(正常情况下覆盖子宫内侧的组织层)中那些细胞类似的细胞生长在子宫外部的女性生殖系统疾病。最经常地，这种病症在卵巢、输卵管和包围子宫与卵巢的组织上；然而，它还可以出现在身体的其他部分。例如，异位‘子宫内膜’可能生长在非常不同的内脏腔区域，包括膀胱、盆腔韧带直至横膈膜；并且相关的疼痛可以在月经期意外感觉到。子宫内膜异位症因此是一种其中取决于子宫内膜异位性生长的部位，各种皮区可能有意义的病变。

子宫内膜异位症的最常见症状是痛经、慢性盆腔疼痛(CPP)、性交疼痛、便秘、大便困难和慢性背痛。在这个方面，先前已经测试梭菌神经毒素治疗法(BoNT/A)缓解与子宫源急性痛经(痛经)和盆腔疼痛综合征相关的(例如子宫内膜异位症所致)疼痛，在大部分患者中引起生活质量评分改善。然而，这类治疗法要求将肉毒毒素在宫腔镜控制下直接注入子宫肌层壁。这具有高度侵入性且不便，尤其因为在这类不可治愈性疾病场景下可能要求长期重复施用。因此，本发明代表一种特别有利于缓解内脏疼痛的疼痛缓解策略，所述内脏疼痛否则将需要侵入性施用药物(例如，如子宫内膜异位症所致的内脏疼痛情况下)。

如上文提到，子宫内膜异位症疼痛可以影响众多不同的器官，并且因此代表一种其中取决于子宫内膜异位性生长部位，因此取决于促成内脏疼痛的器官，可以有利地利用各种皮区作为施用途径的病变。例如，在患者罹患子宫内膜异位症情况下，可以确定膀胱为促成内脏疼痛的器官，并且可以因此施用梭菌神经毒素至映射至膀胱的特定皮区神经。

在涉及抑制子宫内膜异位症所致内脏疼痛的实施方案中，可以向T11、T12、L1、S2、S3和/或S4皮区施用梭菌神经毒素。换言之，为了抑制子宫内膜异位症引起的内脏疼痛，本发明的方法可以包括(a)确定卵巢、输卵管、子宫和/或子宫颈作为患者中促成所述内脏疼痛的器官；(b)根据以下说明映射所述器官至特定的皮区神经，因而匹配所述器官至一个或多个具体指定的皮区神经：卵巢映射至T11皮区神经，输卵管映射至T11皮区神经，子宫映射至T12和/或L1皮区神经，子宫颈映射至S2、S3和/或S4皮区神经；和(c)在临近于所述一个或多个具体指定的皮区神经的部位施用治疗有效量的梭菌神经毒素，其中在施用所述梭菌神经毒素至患者后，梭菌神经毒素经由逆向轴突运输而被运输至脊髓，在此处它结合感觉性传入神经细胞，通过受体介导的内吞作用进入所述细胞并且阻抑神经递质从所述细胞释放，因而抑制所述内脏疼痛。

应当指出，在子宫内膜异位症中，内脏疼痛可以由女性生殖系统的特定器官(例如卵巢、输卵管、子宫和/或子宫颈中一者或多者)促成。

为了抑制卵巢中子宫内膜异位症引起的内脏疼痛，本发明的方法可以包括(a)确定卵巢作为患者中促成所述内脏疼痛的器官；(b)根据以下说明映射所述器官至特定的皮区神经，因而匹配所述器官至一个或多个具体指定的皮区神经：卵巢映射至T11皮区神经；和(c)在临近于所述一个或多个具体指定的皮区神经的部位施用治疗有效量的梭菌神经毒素，其中在施用所述梭菌神经毒素至患者后，梭菌神经毒素经由逆向轴突运输而被运输至脊髓，在此处它结合感觉性传入神经细胞，通过受体介导的内吞作用进入所述细胞并且阻抑神经递质从所述细胞释放，因而抑制所述内脏疼痛。

为了抑制输卵管中子宫内膜异位症引起的内脏疼痛，本发明的方法可以包括(a)确定输卵管作为患者中促成所述内脏疼痛的器官；(b)根据以下说明映射所述器官至特定的皮区神经，因而匹配所述器官至一个或多个具体指定的皮区神经：输卵管映射至T11皮区神经；和(c)在临近于所述一个或多个具体指定的皮区神经的部位施用治疗有效量的梭菌神经毒素，其中在施用所述梭菌神经毒素至患者后，梭菌神经毒素经由逆向轴突运输而被运输至脊髓，在此处它结合感觉性传入神经细胞，通过受体介导的内吞作用进入所述细胞并且阻抑神经递质从所述细胞释放，因而抑制所述内脏疼痛。

为了抑制子宫中子宫内膜异位症引起的内脏疼痛，本发明的方法可以包括(a)确定子宫作为患者中促成所述内脏疼痛的器官；(b)根据以下说明映射所述器官至特定的皮区神经，因而匹配所述器官至一个或多个具体指定的皮区神经：子宫映射至T12和/或L1皮区神经；和(c)在临近于所述一个或多个具体指定的皮区神经的部位施用治疗有效量的梭菌神经毒素，其中在施用所述梭菌神经毒素至患者后，梭菌神经毒素经由逆向轴突运输而被运输至脊髓，在此处它结合感觉性传入神经细胞，通过受体介导的内吞作用进入所述细胞并且阻抑神经递质从所述细胞释放，因而抑制所述内脏疼痛。

为了抑制子宫颈中子宫内膜异位症引起的内脏疼痛，本发明的方法可以包括(a)确定子宫颈作为患者中促成所述内脏疼痛的器官；(b)根据以下说明映射所述器官至特定的皮区神经，因而匹配所述器官至一个或多个具体指定的皮区神经：子宫颈映射至S2、S3和/或S4皮区神经；和(c)在临近于所述一个或多个具体指定的皮区神经的部位施用治疗有效量的梭菌神经毒素，其中在施用所述梭菌神经毒素至患者后，梭菌神经毒素经由逆向轴突运输而被运输至脊髓，在此处它结合感觉性传入神经细胞，通过受体介导的内吞作用进入所述细胞并且阻抑神经递质从所述细胞释放，因而抑制所述内脏疼痛。

在一个实施方案中，内脏疼痛可以包包括痛觉超敏或由其组成。换言之，内脏疼痛可以是痛觉超敏(allodynia)。

痛觉超敏意指“其他疼痛”。它是因正常情况下并非痛性的刺激物产生的疼痛。例如，遭受严重晒伤的受试者可能甚至对轻触体验到强烈疼痛。更详细地，阳光暴晒可以如此过度敏化皮肤，从而穿着衬衫或洗个淋浴可能非常痛苦。因此，触觉性痛觉超敏患病者(又称作静态触觉性痛觉超敏或机械性痛觉超敏)可能体验到触碰疼痛，如头搁枕头上或戴帽子、耳饰或项链时。类似地，动态性痛觉超敏患病者可能从轻拂头发或从剃须中体验到疼痛。痛觉超敏是区别于痛觉过敏(hyperalgesia)的病状，痛觉过敏是较寻常更痛苦的疼痛刺激物。实际上，如上文提到，与痛觉过敏(来自通常激发疼痛的刺激物的疼痛增加)相反，痛觉超敏本身正是定义“因通常不激发疼痛的刺激物所致的疼痛”。痛觉超敏也可以在本文称作“超敏反应”。

就内脏疼痛而言，痛觉超敏尤其经常作为肠胃紊乱如食道炎、-胃食管反流病、-非溃疡消化不良、胃肌轻瘫和肠易激综合征(IBS)的结果出现。内脏痛觉超敏/超敏反应还可以在-非胃肠道障碍如间质性膀胱炎和输尿管绞痛(例如泌尿系统结石)出现。内脏痛觉超敏/超敏反应可以定义为感觉能力的强度升高和患者内脏疼痛的阈值降低。

发明人已经展示本发明可以用来以迥异于抑制痛觉过敏的方式抑制痛觉超敏。这在后续实施例中展示，其中设计实验以测试皮区注射梭菌神经毒素缓解痛觉超敏型内脏疼痛和痛觉过敏型内脏疼痛的效果。更详细地，在内脏疼痛啮齿动物模型中(膀胱中)，通过向下腹部(接近于膀胱)以刺激间间隔时间5秒施加力量渐增的一组8根校准的von Frey细丝(1、2、4、6、8、10、15和26g)以设盲方式评价内脏疼痛。认定1-6g力为低(例如因为正常情况下它们将不在健康的啮齿动物中引起疼痛)并且因此模仿在痛觉超敏中导致疼痛知觉的无害性刺激。高于6g的力用来激起与痛觉过敏一致的疼痛。如图5中展示，梭菌神经毒素(例如Dysport)施用在‘力的痛觉超敏范围’(例如1-6g)内导致伤害感受评分明显降低(提示疼痛知觉减低)，而疼痛抑制作用在力的‘痛觉过敏范围’(例如9-32g)内不太明显。

特别地，靶向痛觉超敏的一个特别优点是能够治疗慢性疼痛，同时姑息(‘急性’)伤害感受。这是因为感觉急性疼痛的能力是涉及向个体警示某些危险并且保护自己免受损伤的生理过程，因此可能可优选是保留(至少某种水平)一般急性疼痛知觉甚至作为镇痛治疗策略的部分。

因此，在一个实施方案中，抑制痛觉超敏，并且未抑制痛觉过敏。在一个实施方案中，相比急性疼痛，更大程度地抑制慢性疼痛。

另外，发明人已经展示，利用可通过施用梭菌神经毒素如肉毒杆菌神经毒素实现的长期作用，施用梭菌神经毒素可以历经延长的时间段抑制内脏疼痛。这种作用特别有利于缓解慢性疼痛。可以在施用梭菌神经毒素后抑制内脏疼痛至少4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52、56或60天。例如，可以在施用梭菌神经毒素后抑制所述内脏疼痛至少60、64、68、72、76、80、84或88天。

可以在施用梭菌神经毒素后抑制内脏疼痛至少1、2、3、4、5、7、8或9个月。例如，可以在施用梭菌神经毒素后抑制所述内脏疼痛长达包括9个月。

可以在施用梭菌神经毒素后减少所述内脏疼痛至少10天。优选地，可以在施用梭菌神经毒素后减少内脏疼痛至少30天。更优选地，可以在施用梭菌神经毒素后减少所述内脏疼痛至少50天。

可以在施用梭菌神经毒素后至少1天以内，例如施用梭菌神经毒素后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12天以内抑制内脏疼痛。优选地，可以在施用梭菌神经毒素后至少7天以内抑制内脏疼痛。更优选地，可以在施用梭菌神经毒素后至少10天以内抑制内脏疼痛。

将现在更详细地讨论上文描述的某些术语。

如本文所用的“患者”(其可以与术语“受试者”同义使用)可以是哺乳动物，如人或其他哺乳动物。优选地，“患者”意指人类受试者。患者可以是具有低于平均(基础水平)神经免疫应答的患者，例如接受可能抑制免疫系统的替代治疗(如化疗)的患者。

如本文所用的术语“病症”还涵盖“疾病”。在一个实施方案中，病症是疾病。

术语“抑制”可以在本文中与术语“治疗”同义使用。因此，本发明包括一种用于治疗患者的内脏疼痛的方法，所述方法包括向患有内脏疼痛的患者施用治疗有效量的梭菌神经毒素。本发明还包括相应的治疗性用途，即梭菌神经毒素用于治疗患者中的内脏疼痛。

如本文所用的术语“抑制”或“阻抑”或者“治疗”或“治疗着”涵盖预防性抑制和治疗(例如防止内脏疼痛发作)以及矫正性抑制和治疗(抑制和治疗已经遭受内脏疼痛的受试者)。在可优选的实施方案中，如本文所用的术语“抑制”或“阻抑”意指矫正性治疗。在可优选的实施方案中，如本文所用的术语“治疗”或“治疗着”意指矫正性治疗。术语“抑制”或“阻抑”或者“治疗”或“治疗着”涵盖抑制和治疗内脏疼痛及其症状。在一些实施方案中，术语“抑制”或“阻抑”或者“治疗”或“治疗着”涉及内脏疼痛的症状。

在一个实施方案中，本发明的梭菌神经毒素比否则缺少梭菌神经毒素的相同施用(例如仅施用溶媒)更多地抑制内脏疼痛至少10％、或至少20％、或至少30％、或至少40％、或至少50％、或至少60％、或至少70％、或至少80％、或至少90％或100％。

在一个实施方案中，与施用梭菌神经毒素前患者感知到的内脏疼痛相比，本发明的梭菌神经毒素抑制内脏疼痛至少10％、或至少20％、或至少30％、或至少40％、或至少50％、或至少60％、或至少70％、或至少80％、或至少90％或100％。

抑制(或治疗)疼痛可以与“减少疼痛”同义使用。换言之，施用本发明的梭菌神经毒素可以在受试者中减少内脏疼痛。

更详细地，谈及“减少”或“降低”(就内脏疼痛而言)优选地意指与施用之前(施用前)受试者感知到的内脏疼痛水平比较时，施用本发明的梭菌神经毒素后(施用后)受试者感知到较低水平的内脏疼痛。例如，相对于施用前，感知到的内脏疼痛水平可以在施用后降低至少15％、25％、35％、45％、55％、65％、75％、85％或95％。例如，感知到的内脏疼痛水平可以在施用后降低至少75％；优选地至少85％；更优选地至少95％。

本领域技术人员已知多种用于评估疼痛知觉的手段。例如，机械性痛觉超敏(静态或动态)评估常规地如Pogatzki-Zahn等人(Pain Rep.2017年3月；2(2):e588)中所述用于人类疼痛研究中，所说文献通过引用方式并入本文作为参考。

用于评估受试者中疼痛知觉的合适(但非限制性)方法包括以下：数值评定量表(NRS)评分；不过本领域普通技术人员知晓可以额外或备选使用的其他方法，如感觉阈值法、疼痛知觉阈值法、静态机械性痛觉超敏法、动态机械性痛觉超敏法、时间性总和法、压力疼痛阈值法、条件化疼痛调节法和温度阈值法。

疼痛知觉测量的其他非限制性实例包括：每个预定时间点处SF-36评分距基线变化；研究期间所用急救药物的量和至首次摄入急救药物的时间。这些实例可以视为“探索性”终点或疼痛知觉评估量值。

因此，在一个优选的实施方案中，在施用本发明的梭菌神经毒素后，疼痛知觉可以借助以下一者或多者评估：(a)数值评定量表(NRS)；(b)刺激物激发的NRS；(c)疼痛区域温度；(d)疼痛区域大小；(e)至镇痛效果发生的时间；(f)最大镇痛效果；(g)至最大镇痛效果时间；(h)镇痛效果持续时间；和(i)SF-36生活质量评估。

本领域普通技术人员知晓这类用于评估疼痛知觉的方法。为了方便，下文提供对数值评定分值和生活质量调查表问卷简表-36的进一步描述。

数值评定量表(NRS)：本发明的疼痛知觉一般使用数值评定量表(NRS)。NRS是评估受试者疼痛知觉的11分量表。要求受试者给出0与10之间最契合其疼痛强度的数字。零表示根本‘无疼痛’，而上限10表示‘可能的最严峻疼痛’。

NRS可以用来评估疼痛的众多方面，包括自发性平均疼痛、自发性最严峻疼痛和自发性当前疼痛。通过要求受试者选择一个最佳描述受试者历经一段时间例如至少6小时、12小时、24小时或至少48小时的平均疼痛(例如感知的疼痛)的数字，评估自发性平均疼痛。通过要求受试者选择一个最佳描述受试者在指定时间例如至少先前6小时、12小时、24小时或先前48小时期间处于最严峻情况的疼痛，评估自发性最严峻疼痛。通过要求受试者选择一个最佳描述受试者在评估时有多疼痛的数字，评估自发性当前疼痛。

NRS也可以用来评估受试者响应于多种不同刺激物的疼痛知觉。为了评估响应于刺激物的疼痛知觉，将使受试者经历施加至疼痛区域的性质各异的刺激物。将向受试者询问他们在施用前和施用后的当前NRS评分。

所用刺激物的实例包括：(i)轻触(其可以通过施加如本文所述的von Frey细丝后，测量径向辐上疼痛区域表面上的疼痛来评估)；(ii)压力(压力疼痛阈值)，其可以通过使用使用压力痛觉计施加增加的压力时，要求受试者给出NRS评分来评估；和(iii)温度(其可以通过使用施加至疼痛区域的热压头，要求受试者对温暖、冷和热刺激的NRS评分来评估)。

优选地，与受试者的施用前NRS评分比较时，施用本发明的梭菌神经毒素降低受试者的施用后NRS评分(例如从评定≥7至评定≤6)。

生活质量调查问卷简表-36(SF-36)：SF-36生活质量调查问卷可以用来评估受试者的疼痛知觉。SF-36是一种36项受试者报告的受试者健康调查。SF-36由八个折合评分(活力、躯体运作、身躯疼痛、总体健康状况感知、身体角色运作、情绪角色运作、社交角色运作和心理卫生)组成。基于每项提问具备相等权重的假设，每个量值直接转化成0-100量值。记录于SF-36中的评分越高，失能越少。

疼痛治疗临床试验中常测试的相关参数为本领域已知且可以由普通技术人员本领域轻易选择。这类参数的实例包括但不限于NRS；刺激物激发的NRS；疼痛区域温度；疼痛区域大小；至镇痛效果发生的时间；最大镇痛效果；至最大镇痛效果时间；镇痛效果持续时间；和/或如本文所述的SF-36生活质量。用于评估这些参数的方法也为本领域已知并且可以由普通技术人员使用例行方法和程序实施。

优选地，与受试者的施用前SF-36评分比较时，施用本发明的梭菌神经毒素增加受试者的施用后SF-36评分(例如从评分≤50至评分≥50)。

梭菌神经毒素可以按治疗有效量或预防有效量施用至受试者。

“治疗有效量”是梭菌神经毒素的任何量，所述量单独施用或联合施用至患者用于抑制/治疗内脏疼痛(或其症状)时足以实现对内脏疼痛或其症状的这种抑制/治疗。

“预防有效量”是梭菌神经毒素的任何量，所述量单独施用或联合施用至受试者时抑制或推迟内脏疼痛(或其症状)发作或复发。在一些实施方案中，预防有效量完全防止内脏疼痛发作或复发。“抑制”发作意指削减内脏疼痛发作(或其症状)发作的可能性或完全防止发作。

梭菌神经毒素

现在将以更多细节，连同可以将它们怎样例如配制成药物组合物的细节描述本发明的梭菌神经毒素。

本发明的梭菌神经毒素可以按施用受试者的任何适合方式配制，例如作为药物组合物的部分配制。因此，在一个方面，本发明提供用于本文所述任何治疗方法的药物组合物，所述药物组合物包含本发明的梭菌神经毒素和可药用载体、赋形剂、佐剂、推进剂和/或盐。

在一些实施方案中，本发明的梭菌神经毒素可以处于单链形式，而在其他实施方案中，梭菌神经毒素可以处于双链形式，例如其中两条链由二硫桥连接。优选地，梭菌神经毒素处于双链形式。

可以优选地配制本发明的梭菌神经毒素供注射至受试者，例如通过真皮内注射。适于注射的组合物可以处于使用前溶解或悬浮于合适溶媒中的溶液剂、混悬剂或乳剂或干粉剂形式。

施用本发明梭菌神经毒素的剂量范围是旨在产生预期治疗作用和/或预防作用的那些。将可以理解，所要求的剂量范围取决于梭菌神经毒素或组合物的精确性质、施用途径、制剂的性质、受试者年龄、受试者病状的性质、范围或严重程度、禁忌症(若有的话)和主治医生的判断。可以使用优化用标准经验例行程序调节这些剂量水平的变动。

在一个实施方案中，梭菌神经毒素的剂量是平剂量。平剂量可以为50pg至250μg，优选地100pg至100μg。在一个实施方案中，平剂量可以是至少50pg、100pg、500pg、1ng、50ng、100ng、500ng、1μg或50μg。所述剂量可以是单个平剂量。

为了方便医生，梭菌神经毒素可以通过单位剂量方式施用。可以在单个部位施用所述单位剂量或，备选地，可以在施用部位施用小于一个单位剂量(例如其中存在两个或更多个施用部位并且剂量在所述部位之间(等或不等)分配)。在一个实施方案中，实施本发明时，可以每个注射的皮区施用单个单位剂量。

合适的单位剂量可以是5pg至17,000pg梭菌神经毒素。单位剂量范围的上限可以是16,500、15,500、14,500、13,500、12,500、11,500、10,500、9,500、8,500、7,500、6,500、5,500、4,500、3,500、2,500、1,500或500pg梭菌神经毒素，该上限优选地是16,000pg。单位剂量范围的下限可以是10、20、30、50、100、200、250、350、450、550、650、750、850、950、1,000、1,500、2,000、2,500、3,000、3,500、4,000、4,500或5,000pg梭菌神经毒素，该下限优选地是1,000pg。优选地，单位剂量是750pg至17,000pg梭菌神经毒素。更优选地，梭菌神经毒素的单位剂量是1,000pg至16,000pg(例如修饰的)BoNT/A，例如4,000pg至6,000pg。

每个治疗疗程施用的总剂量可以是多达255,000pg梭菌神经毒素。这可以对应于15x单位剂量。换言之，在给定治疗疗程施用的梭菌神经毒素总量可以多达255,000pg。总剂量可以是至多240,000、220,000、200,000、180,000、160,000、140,000,110,000、100,000、90,000、80,000、70,000、60,000、50,000、40,000、30,000、20,000、10,000或5,000pg。优选地，总剂量可以是多达240,000pg梭菌神经毒素。总剂量可以是至少900、1,000、2,000、3,000、4,000、5,000、7,500、10,000、12,500、15,000、20,000、30,000、40,000、50,000、60,000、70,000、80,000、90,000、100,000、120,000、150,000、175,000、200,000或220,000pg。优选地，总剂量可以是至少1,500pg，更优选地至少2,000pg梭菌神经毒素，例如至少12,000pg。总剂量可以是2,000-240,000pg，优选地128,000-240,000pg。更优选地，施用的总剂量是15,000-240,000pg。

给定治疗中施用的单位剂量总数可以是多达15x单位剂量。例如，施用的单位剂量总数可以是多达14x、13x、12x、11x、10x、9x、8x或7x。施用的单位剂量总数可以是至少2x、3x、4x、5x、6x、7x单位剂量，优选地至少2x。施用的单位剂量总数可以是2x至15x、7x至15x或10x至14x。优选地，施用的单位剂量次数是15x。

术语“多达”在提到某值使用时(例如多达255,000pg)意指多达且包括所述值。因此，作为实例，谈及施用“多达255,000pg”梭菌神经毒素涵盖施用255,000pg(例如修饰的)BoNT/A以及施用小于255,000pg梭菌神经毒素。

可以反复地施用(例如多达5、10、15或20次)本发明的梭菌神经毒素作为治疗方案的部分(如在不同日，例如在连续治疗之间有至少1天)。反复施用意指施用至少两次，例如至少5、10、15或20次。因此，在一个实施方案中，可以将本发明的梭菌神经毒素施用两次或更多次以抑制/治疗受试者的内脏疼痛。这对治疗慢性病状如慢性疼痛特别适宜，其中一般必需持续存在的治疗。在一个实施方案中，可以将本发明的梭菌神经毒素每周一次、每月两次、每月一次、每两个月一次、每六个月一次或每年一次施用，优选地每年至少两次或每年一次施用。在一个实施方案中，将本发明的梭菌神经毒素在10年、5年、2年或1年的时间施用两次或更多次。优选地，将本发明的梭菌神经毒素在1年的时间施用两次或更多次。治疗可以持续至少6个月、1年、2年、3年、5年、10年、15年、20年、25年或30年。

优选的是梭菌神经毒素不与其轻链和重链之外的其他治疗药或诊断药(例如核酸、蛋白质、肽或小分子治疗药或诊断药)一起施用。例如，在一个实施方案中，梭菌神经毒素不连同其他镇痛药一起施用。在一个实施方案中，本发明的梭菌神经毒素并不连同共价接合的治疗药一起施用。在一个实施方案中，本发明的梭菌神经毒素并不连同非共价接合的治疗药一起施用。

流体剂型一般使用梭菌神经毒素和无热原无菌溶媒制备。取决于所用的溶媒和浓度，梭菌神经毒素可以溶解或悬浮于溶媒中。在制备溶液剂时，梭菌神经毒素可以溶解于溶媒中，如果需要，通过添加氯化钠，使该溶液剂等渗，并且使用无菌技术用无菌滤器过滤进行除菌，之后灌装到合适的无菌小瓶或安瓿中并密封。备选地，如果溶液剂足够稳定，通过高压灭菌在溶液剂的密封容器中对溶液剂灭菌。有利地添加剂如缓冲剂、增溶剂、稳定剂、防腐剂或杀菌剂，悬浮剂或乳化剂和或局部麻醉剂可以溶解溶媒于中。

可以通过使用无菌技术在无菌区域，将预灭菌的成分灌装入无菌容器中，制备使用前溶解或悬浮于合适溶媒中的干粉剂。备选地，可以使用无菌技术在无菌区域，在合适的容器中溶解诸成分随后将产品冷冻干燥并且无菌密封容器。

适于本文所述施用途径的肠胃外混悬剂按基本上相同的方式制备，例外是无菌组分悬浮于、而非溶解于无菌溶媒中，且不能通过过滤实现灭菌。组分可以按无菌状态分离或备选地，它可以在分离后灭菌，例如通过γ照射灭菌。

有利地，组合物中包含助悬剂例如聚乙烯吡咯烷酮以促进组分均匀分布。

梭菌神经毒素可以在内脏疼痛发作之前、与之同时或继其之后施用。梭菌神经毒素可以在造成内脏疼痛的病状/疾病发作之前、与之同时或继其之后施用。例如，其中内脏疼痛由引起感染，梭菌神经毒素可以继检出感染之后施用，以抑制内脏疼痛。

如本公开中他处更详细解释，术语“梭菌神经毒素”包括其梭菌神经毒素片段。

现在下文提供关于梭菌神经毒素和合适用于本发明中的神经毒素的其他信息。

术语“梭菌神经毒素”包括由肉毒梭菌(肉毒杆菌神经毒素血清型A、B、C1、D、E、F、G和X)、破伤风梭菌(C.tetani)(破伤风神经毒素)、丁酸梭菌(C.butyricum)(肉毒杆菌神经毒素血清型E)和巴拉迪梭菌(肉毒杆菌神经毒素血清型F)产生的毒素以及从前述任一者衍生的修饰的梭菌神经毒素或衍生物。

肉毒杆菌神经毒素(BoNT)由肉毒梭菌以大蛋白质复合体形式产生，所述的大蛋白质复合体由本身与众多辅助蛋白复合的BoNT组成。目前存在八个不同类别的肉毒杆菌神经毒素，即：肉毒杆菌神经毒素血清型A、B、C1、D、E、F、G和X，这些血清型均共有相似的结构和作用模式。不同的BoNT血清型可以基于被特定的中性抗血清失活而区分，而借助血清型的这种分类与氨基酸层面的序列同一性百分数相关。基于氨基酸序列同一性百分数，将给定血清型的BoNT蛋白进一步划分成不同亚型。

BoNT在胃肠道中吸收，并且在进入体循环后，与胆碱能神经末梢的突触前膜结合并阻止其释放神经递质乙酰胆碱。BoNT/B、BoNT/D、BoNT/F和BoNT/G切割小突触小泡蛋白/囊泡相关膜蛋白(VAMP)；BoNT/C1、BoNT/A和BoNT/E切割25kDa突触小体相关蛋白(SNAP-25)；并且BoNT/C1切割突触融合蛋白。已经发现BoNT/X切割SNAP-25、VAMP1、VAMP2、VAMP3、VAMP4、VAMP5、Ykt6和突触融合蛋白1。

破伤风毒素以单一血清型由破伤风梭菌产生。丁酸梭菌产生BoNT/E，而巴拉迪梭菌产生BoNT/F。

梭菌神经毒素可以选自BoNT/A、BoNT/B、BoNT/C、BoNT/D、BoNT/E、BoNT/F、BoNT/G、BoNT/X和TeNT(破伤风神经毒素)。优选地，梭菌神经毒素是肉毒杆菌神经毒素，如选自BoNT/A、BoNT/B、BoNT/C、BoNT/D、BoNT/E、BoNT/F、BoNT/G和BoNT/X的肉毒杆菌神经毒素。

在一个实施方案中，梭菌神经毒素可以是BoNT/A。参考BoNT/A序列显示为SEQ IDNO:51(额外地或备选地，参考BoNT/A序列可以是显示为SEQ ID NO:62)。在另一个实施方案中，梭菌神经毒素可以是BoNT/B。参考BoNT/B序列显示为SEQ ID NO:52。在另一个实施方案中，梭菌神经毒素可以是BoNT/C。参考BoNT/C序列显示为SEQ ID NO:53。在另一个实施方案中，梭菌神经毒素可以是BoNT/D。参考BoNT/D序列显示为SEQ ID NO:54。在另一个实施方案中，梭菌神经毒素可以是BoNT/E。参考BoNT/E序列显示为SEQ ID NO:55。在另一个实施方案中，梭菌神经毒素可以是BoNT/F。参考BoNT/F序列显示为SEQ ID NO:56。在另一个实施方案中，梭菌神经毒素可以是BoNT/G。参考BoNT/G序列显示为SEQ ID NO:57。在另一个实施方案中，梭菌神经毒素可以是TeNT。参考TeNT序列显示为SEQ ID NO:58。在另一个实施方案中，梭菌神经毒素可以是BoNT/X。参考BoNT/X序列显示为SEQ ID NO:59。

术语“梭菌神经毒素”意在涵盖全长神经毒素(包含梭菌神经毒素L链和梭菌神经毒素H链)以及其片段。例如，“梭菌神经毒素”可以指包含梭菌神经毒素L链、梭菌神经毒素转运结构域(H_N)和/或梭菌神经毒素受体结合结构域(H_C)结构域或由其组成的多肽。“梭菌神经毒素”可以指包含梭菌神经毒素L链、梭菌神经毒素转运结构域(H_N)和/或梭菌神经毒素受体结合结构域(H_C)结构域或由其组成的多肽，其中当多肽包含梭菌神经毒素L链时，L链无催化活性。换言之，本发明可以涵盖包含梭菌神经毒素L链和梭菌神经毒素H链的全长梭菌神经毒素的用途，任选地条件是所述梭菌神经毒素L链无催化活性。

有利地，梭菌神经毒素片段的使用允许使用无毒(或基本上无毒)的梭菌神经毒素片段，其中鉴于(与全长H链或全长梭菌神经毒素相比)尺寸较小，所述片段不太可能在施用所述片段的受试者中激发(针对所述片段)不良免疫应答。另外，无毒(或基本上无毒)的片段不太昂贵和/或制造上相比全长梭菌神经毒素不太复杂。另外，无毒(或基本上无毒)的片段构成比全长梭菌的毒素更充分确定的治疗药，并且鉴于多肽长度较短，例如结构域之间半胱氨酸改组的概率降低。

在涉及梭菌神经毒素特定结构域的实施方案中，该分子可以便利地称作“多肽”。即，术语“梭菌神经毒素”可以用术语“多肽”替代。

因此，本文提及的梭菌神经毒素可以是包含梭菌神经毒素轻链(L链)、梭菌神经毒素转运结构域(H_N结构域)和/或梭菌神经毒素受体结合结构域(H_C结构域)或由其组成的多肽。本文提及的梭菌神经毒素可以是包含梭菌神经毒素轻链(L链)、梭菌神经毒素转运结构域(H_N结构域)和/或梭菌神经毒素受体结合结构域(H_C结构域)或由其组成的多肽，其中当多肽包含梭菌神经毒素L链时，L链无催化活性。

因此随之而来的是，本发明诸方面提供以下任一者：

-一种用于抑制内脏疼痛的方法中的多肽；

-一种抑制患者的内脏疼痛的方法，所述方法包括施用多肽至患者；

-多肽在制造抑制患者中内脏疼痛的药物中的用途；

其中所述肽包含梭菌神经毒素轻链(L链)、梭菌神经毒素转运结构域(H_N结构域)和/或梭菌神经毒素受体结合结构域(H_C结构域)或由其组成的多肽，任选地其中多肽包含梭菌神经毒素L链时，L链无催化活性。

在一个实施方案中，本发明的梭菌神经毒素可以由核苷酸序列编码，所述核苷酸序列与SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49或60中任一者具有至少70％序列同一性。在一个实施方案中，本发明的梭菌神经毒素可以由核苷酸序列编码，所述核苷酸序列与SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49或60中任一者具有至少80％、90％、95％或98％序列同一性。优选地，本发明的梭菌神经毒素可以由包含SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49或60中任一者的核苷酸序列编码。

在一个实施方案中，本发明的梭菌神经毒素可以包含与SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、61、62、63、64或65中任一者具有至少70％序列同一性的梭菌神经毒素序列。在一个实施方案中，本发明的梭菌神经毒素可以包含与SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、61、62、63、64或65中任一者具有至少80％、90％、95％或98％序列同一性的梭菌神经毒素序列。优选地，本发明的梭菌神经毒素可以包含SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、61、62、63、64或65中任一者的梭菌神经毒素序列。

在一个实施方案中，本发明的梭菌神经毒素可以包含与SEQ ID NO:51、52、53、54、55、56、57、58或59(优选地SEQ ID NO:51、52、53、54、55、56、57或59)中任一者具有至少70％序列同一性的梭菌神经毒素序列。在一个实施方案中，本发明的梭菌神经毒素可以包含与SEQ ID NO:51、52、53、54、55、56、57、58或59(优选地SEQ ID NO:51、52、53、54、55、56、57或59)中任一者具有至少80％、90％、95％或98％序列同一性的梭菌神经毒素序列。优选地，本发明的梭菌神经毒素可以包含SEQ ID NO:51、52、53、54、55、56、57、58或59(优选地SEQ IDNO:51、52、53、54、55、56、57或59)中任一者的梭菌神经毒素序列。在一个实施方案中，本发明的梭菌神经毒素可以包含与SEQ ID NO:51具有至少70％序列同一性的梭菌神经毒素序列。在一个实施方案中，本发明的梭菌神经毒素可以包含与SEQ ID NO:51具有至少80％、90％、95％或98％序列同一性的梭菌神经毒素序列。优选地，本发明的梭菌神经毒素可以包含SEQ ID NO:51的梭菌神经毒素序列。

术语“梭菌神经毒素”还意在包含经修饰的梭菌神经毒素及其衍生物，包括但不限于下文描述的那些。经修饰的梭菌神经毒素或衍生物可以含有如相比天然(未修饰)形式的梭菌神经毒素已经过修饰的一个或多个氨基酸，或可以含有在天然(未修饰)形式的梭菌神经毒素中不存在的一个或多个插入的氨基酸。例如，经修饰的梭菌神经毒素可以在一个或多个结构域中相对于天然(未修饰)的梭菌神经毒素序列具有修饰的氨基酸序列。这类修饰可以调节该毒素的功能方面，例如生物学活性或持久性。因此，在一个实施方案中，本发明的梭菌神经毒素是经修饰的梭菌神经毒素，或经修饰的梭菌神经毒素衍生物，或梭菌神经毒素衍生物。

修饰的梭菌神经毒素可以在重链的氨基酸序列中具有一个或多个修饰(如修饰的H_C结构域)，其中所述修饰的重链以高于或低于天然(未修饰)梭菌神经毒素的亲和力与靶神经细胞结合。这类在H_C结构域中的修饰可以包括修饰在H_C结构域的神经节苷脂结合位点中或蛋白质(SV2或突触结合蛋白)结合位点中的残基，所述修饰改变与靶神经细胞的神经节苷脂受体和/或蛋白质受体的结合。WO 2006/027207和WO 2006/114308中描述了这类修饰的梭菌神经毒素的实例，所述文献因而通过引用方式完整并入本文作为参考。

修饰的梭菌神经毒素可以在轻链的氨基酸序列中具有一个或多个修饰，例如在底物结合或催化结构域中的修饰，所述修饰可以改变或调节已修饰L链的SNARE蛋白特异性。WO 2010/120766和US2011/0318385中描述了这类修饰的梭菌神经毒素的实例，所述文献因而通过引用方式完整并入本文作为参考。

修饰的梭菌神经毒素可以包含一个或多个增加或减少已修饰梭菌神经毒素的生物学活性和/或生物学持久性的修饰。例如，修饰的梭菌神经毒素可以包含基于亮氨酸或基于酪氨酸的基序，其中所述基序增加或减少修饰的梭菌神经毒素的生物学活性和/或生物学持久性。合适的基于亮氨酸的基序包括xDxxxLL、xExxxLL、xExxxIL和xExxxLM(其中x是任何氨基酸)-例如SEQ ID No:66-69。合适的基于亮氨酸的基序包含Y-x-x-Hy(其中Hy是疏水性氨基酸)-例如SEQ ID NO:70。WO 2002/08268中描述了包含基于亮氨酸的基序或基于酪氨酸的基序的修饰梭菌神经毒素的实例，所述文献因而通过引用方式完整地并入。

如上文所述的，修饰的梭菌神经毒素(或梭菌神经毒素片段)可以是一种梭菌神经毒素，其包含与缺少所述一个或多个修饰的等同未修饰梭菌神经毒素相比时增加梭菌神经毒素等电点的一个或多个修饰。上文及WO 2015/004461 A1和WO 2016/110662 A1中描述了合适的修饰梭菌神经毒素，所述文献通过引用的方式并入本文。实例性序列包括本文所述的SEQ ID NO:61和42。

修饰的梭菌神经毒素可以优选地包含SEQ ID No:61的序列或由其组成。

术语“梭菌神经毒素”意在包括杂合和嵌合梭菌神经毒素。杂合梭菌神经毒素包含来自一种梭菌神经毒素或其亚型的轻链的至少一部分和来自另一梭菌神经毒素或梭菌神经毒素亚型的重链的至少一部分。在一个实施方案中，杂合梭菌神经毒素可以含有来自一个梭菌神经毒素亚型的轻链的完整轻链和来自另一个梭菌神经毒素亚型的重链。在另一个实施方案中，嵌合梭菌神经毒素可以含有一个梭菌神经毒素亚型重链的部分(例如结合结构域)，连同来自另一个梭菌神经毒素亚型的重链的另一个部分。类似或备选地，治疗性元件可以包含来自不同梭菌神经毒素的轻链部分。这类杂合或嵌合梭菌神经毒素例如可用作向以下受试者递送这类梭菌神经毒素的治疗益处的手段：对给定梭菌神经毒素亚型免疫抵抗的受试者、可能对给定的梭菌神经毒素重链结合结构域具有较低平均浓度受体的受试者或可能具有膜底物或小泡毒素底物(例如，SNAP-25、VAMP和突触融合蛋白)的抗蛋白酶变体的受试者。US 8,071,110中描述了杂合和嵌合梭菌神经毒素，所述公开因而通过引用方式完整地并入。因此，在一个实施方案中，本发明的梭菌神经毒素(或其片段)是杂合梭菌神经毒素或嵌合梭菌神经毒素。

在一个特别优选的实施方案中，本发明的多肽可以是包含BoNT/A轻链与转运结构域和BoNT/b受体结合结构域(H_C结构域)或其部分(优选地由其组成)的嵌合梭菌神经毒素(例如BoNT/A LH_N-BoNT/B H_C)。合适的嵌合和/或杂合梭菌神经毒素可以在WO 2017/191315A1中教授的一种梭菌神经毒素，所述文献通过引用方式并入本文作为参考。这类优选的序列包括SEQ ID NO:44、63和64。

例如，嵌合梭菌神经毒素可以包含SEQ ID NO:64的序列(其可以称为包含无催化活性L链)(优选地由其组成)。

在优选的实施方案中，嵌合梭菌神经毒素可以包含SEQ ID NO:63的序列(优选地由其组成)。

BoNT/A LH_N结构域可以与BoNT/B H_C结构域共价连接。所述嵌合BoNT/A在本文中也称作“BoNT/AB”或“BoNT/AB嵌合体”。

LH_N结构域C末端氨基酸残基可以对应于分隔BoNT/A的LH_N结构域和H_C结构域的3₁₀螺旋的第一氨基酸残基，并且H_C结构域的N末端氨基酸残基可以对应于分隔BoNT/B的LH_N结构域和H_C结构域的3₁₀螺旋的第二氨基酸残基。

本文中谈及的“分隔BoNT/A的LH_N结构域和H_C结构域的3₁₀螺旋的第一氨基酸残基”意指分隔LH_N结构域和H_C结构域的3₁₀螺旋的N末端残基。

本文中谈及的“分隔BoNT/B的LH_N结构域和H_C结构域的3₁₀螺旋的第二氨基酸残基”意指在分隔LH_N结构域和H_C结构域的3₁₀螺旋的N末端残基之后的氨基酸残基。

“3₁₀螺旋”是在蛋白质和多肽中存在的一种二级结构类型，二级结构类型还有α-螺旋、β-折叠和转角(reverse turns)。3₁₀螺旋中的氨基酸按右手3螺旋结构排列，其中每个完整转角由三个残基和分隔这些残基之间分子内氢键的十个原子完成。每个氨基酸对应于螺旋中的120°转角(即，该螺旋具有每个转角三个残基)和沿螺旋轴平移并且在通过产生氢键所形成的环中具有10个原子。最重要的，氨基酸的N-H基团与更靠前三个残基的氨基酸的C＝O基团形成氢键；这种重复的i+3→i氢键合定义了3₁₀螺旋。3₁₀螺旋是结构生物学中本领域普通技术人员熟悉的标准概念。

这种3₁₀螺旋对应于形成实际螺旋的四个残基和二个帽(或过渡)残基，在这四个残基的每个末端处有一个。如本文所用的术语“分隔LH_N结构域和H_C结构域的3₁₀螺旋”由这6个残基组成。

通过实施结构分析和序列比对，鉴定到一个分隔LH_N结构域和H_C结构域的3₁₀螺旋。这个3₁₀螺旋在其N末端(即在LH_N结构域的C末端部分)被α-螺旋包围并且在其C末端(即在H_C结构域的N末端部分)被β链包围。这个3₁₀螺旋的第一(N末端)残基(帽或过渡残基)还对应于这种α-螺旋的C末端残基。

分隔LH_N结构域和H_C结构域的3₁₀螺旋可以例如从可公开获得的肉毒杆菌神经毒素晶体结构确定，例如分别地从肉毒杆菌神经毒素A1和B1的3BTA(http://www.rcsb.org/pdb/explore/explore.do？structureId＝3BTA)和1EPW(http://www.rcsb.org/pdb/explore/explore.do？structureId＝1EPW)确定。

可公开获得的计算机建模工具和比对工具也可以用来确定其他神经毒素中分隔LH_N结构域和H_C结构域的3₁₀螺旋的位置，例如同源性建模服务器LOOPP(Learning,Observing and Outputting Protein Patterns(学习、观察和输出蛋白质模式)，http://loopp.org)、PHYRE(Protein Homology/analogY Recognition Engine(蛋白质同源性/类比Y识别引擎)，http://www.sbg.bio.ic.ac.uk/phyre2/)和Rosetta(https://www.rosettacommons.org/)、蛋白质叠加服务器SuperPose(http://wishart.biology.ualberta.ca/superpose/)、比对程序Clustal Omega(http://www.clustal.org/omega/)和在Internet Resources for Molecular and CellBiologists(分子生物学家和细胞生物学家互联网资源)(http://molbiol-tools.ca/)列示的众多其他工具/服务。特别地，“H_N/H_CN”交接处周围的区域在结构上高度保守，这使得其成为叠加不同血清型的理想区域。

例如，以下方法可以用来确定其他神经毒素中这种3₁₀螺旋的序列：

1.结构同源性建模工具LOOP(http://loopp.org)用来基于BoNT/A1晶体结构(3BTA.pdb)获得其他BoNT血清型的预测结构；

2.编辑如此获得的结构(pdb)文件以仅包含H_CN结构域的N末端及其之前的约80个残基(它们是是H_N结构域的部分)，因而保留结构上高度保守的“H_N/H_CN”区；

3.蛋白质叠加服务器SuperPose(http://wishart.biology.ualberta.ca/superpose/)用来将每种血清型叠加到3BTA.pdb结构上；

4.检查叠加的pdb文件以映射BoNT/A1的H_C结构域起始处的3₁₀螺旋，并且随后鉴定其他血清型中的相应残基；

5.其他BoNT血清型序列用Clustal Omega比对旨在核实相应残基是正确的。

下文呈献通过这种方法确定的LH_N结构域、H_C结构域和3₁₀螺旋结构域的实例：

使用结构的分析和序列比对，发现在分隔LH_N结构域和H_C结构域的3₁₀螺旋后的β链是全部肉毒杆菌神经毒素和破伤风神经毒素中的保守结构并且当自分隔LH_N结构域和H_C结构域的3₁₀螺旋的第一残基起始时，3₁₀螺旋后的β链始于第8个残基(例如，在BoNT/A1的残基879处)。

BoNT/AB嵌合体可以包含来自BoNT/A的LH_N结构域，后者与来自BoNT/B的H_C结构域共价连接，

-其中LH_N结构域的C末端氨基酸残基对应于相对β链而言N末端位于BoNT/A的H_C结构域起点(N末端)处的第八个氨基酸残基，并且

-其中H_C结构域的N末端氨基酸残基对应于相对β链而言N末端位于BoNT/B的H_C结构域起点(N末端)处的第七个氨基酸残基。

·其中LH_N结构域的C末端氨基酸残基对应于位于BoNT/A的LH_N结构域的末端(C末端)处α-螺旋的C末端氨基酸残基，并且

·其中H_C结构域的N末端氨基酸残基对应于与位于BoNT/A的LH_N结构域的末端(C末端)处α-螺旋C末端氨基酸残基C末端紧邻的氨基酸残基。

BoNT/AB嵌合体设计流程的原理是尽量确保二级结构不受损害并且因而对三级结构及对每个结构域之功能的任何更改最小化。不希望受理论约束，假设通过不破坏BoNT/AB嵌合体中3₁₀螺旋的四个中央氨基酸残基，确保嵌合神经毒素的构象最佳，因而允许嵌合神经毒素尽最大能力发挥其功能。

来自BoNT/A的LH_N结构域可以对应于SEQ ID NO:62的氨基酸残基1至872或与之具有至少70％序列同一性的多肽序列。来自BoNT/A的LH_N结构域可以对应于SEQ ID NO:62的氨基酸残基1至872或与之具有至少80％、90％或95％序列同一性的多肽序列。优选地，来自BoNT/A的LH_N结构域对应于SEQ ID NO:62的氨基酸残基1至872。

来自BoNT/B的H_C结构域可以对应于SEQ ID NO:52的氨基酸残基860至1291或与之具有至少70％序列同一性的多肽序列。来自BoNT/B的H_C结构域可以对应于SEQ ID NO:52的氨基酸残基860至1291或与之具有至少80％、90％或95％序列同一性的多肽序列。优选地，来自BoNT/B的H_C结构域对应于SEQ ID NO:52的氨基酸残基860至1291。

优选地，BoNT/AB嵌合体包含BoNT/A LH_N结构域和BoNT/B H_C结构域。更优选地，LH_N结构域对应于BoNT/A(SEQ ID NO:62)的氨基酸残基1至872并且H_C结构域对应于BoNT/B(SEQ ID NO:52)的氨基酸残基860至1291。

优选地，BoNT/B H_C结构域还包含H_CC亚结构域中的至少一个氨基酸残基置换、添加或缺失，如与天然BoNT/B序列相比，所述置换、添加或缺失具有增加BoNT/B神经毒素对人Syt II的结合亲和力的作用。BoNT/B H_CC亚结构域中的合适氨基酸残基置换、添加或缺失已经在WO 2013/180799中和WO 2016/154534中公开(二者均通过引用方式并入本文作为参考)。

BoNT/B H_CC亚结构域中的合适氨基酸残基置换、添加或缺失包括选自V1118M；Y1183M；E1191M；E1191I；E1191Q；E1191T；S1199Y；S1199F；S1199L；S1201V；E1191C、E1191V、E1191L、E1191Y、S1199W、S1199E、S1199H、W1178Y、W1178Q、W1178A、W1178S、Y1183C、Y1183P的置换突变及其组合。

BoNT/B H_CC亚结构域中的合适氨基酸残基置换、添加或缺失还包括选自以下的二个置换突变的组合：E1191M和S1199L、E1191M和S1199Y、E1191M和S1199F、E1191Q和S1199L、E1191Q和S1199Y、E1191Q和S1199F、E1191M和S1199W、E1191M和W1178Q、E1191C和S1199W、E1191C和S1199Y、E1191C和W1178Q、E1191Q和S1199W、E1191V和S1199W、E1191V和S1199Y或E1191V和W1178Q。

BoNT/B H_CC亚结构域中的合适氨基酸残基置换、添加或缺失还包括三个置换突变E1191M、S1199W和W1178Q的组合。

优选地，BoNT/B H_CC亚结构域中的合适氨基酸残基置换、添加或缺失包括二个置换突变E1191M和S1199Y的组合。

修饰可以是与显示为SEQ ID NO:52的未修饰的BoNT/B相比时的修饰，其中通过与SEQ ID NO:52比对确定氨基酸残基编号。由于SEQ ID NO:52的位置1处甲硫氨酸残基的存在为任选，故在确定氨基酸残基编号时，本领域普通技术人员将考虑甲硫氨酸残基的存在/不存在。例如，在SEQ ID NO:52包括甲硫氨酸情况下，位置编号将如上文定义(例如E1191将是SEQ ID NO:52的E1191)。备选地，在甲硫氨酸从SEQ ID NO:52中缺少情况下，氨基酸残基编号应当按-1修改(例如E1191将是SEQ ID NO:52的E1190)。当本文所述其他多肽序列的位置1处的甲硫氨酸存在/不存在时，相似的注意事项适用，并且本领域普通技术人员将使用本领域常规的技术轻易地确定正确的氨基酸残基编号。

因此，在一个方面，本发明提供用于通过促进神经免疫应答治疗受试者脑病的梭菌神经毒素，其中梭菌神经毒素包含与SEQ ID NO:63或64具有至少70％序列同一性的多肽序列(优选地其中梭菌神经毒素包含与SEQ ID NO:63具有至少70％序列同一性的多肽序列)。

在一个相关方面，提供一种在受试者中抑制内脏疼痛的方法，所述方法包括向受试者施用梭菌神经毒素，其中梭菌神经毒素包含与SEQ ID NO:63或64具有至少70％序列同一性的多肽序列(优选地，其中梭菌神经毒素包含与SEQ ID NO:63具有至少70％序列同一性的多肽序列)。

在一个实施方案中，根据本发明使用的梭菌神经毒素包含与SEQ ID NO:63或64具有至少80％、90％、95％或98％序列同一性的多肽序列。优选地，根据本发明使用的梭菌神经毒素包含显示为SEQ ID NO:63或64的多肽序列(更优选地由其组成)。

例如，根据本发明使用的梭菌神经毒素可以包含与SEQ ID NO:64具有至少80％、90％、95％或98％序列同一性的多肽序列。梭菌神经毒素可以包含显示为SEQ ID NO:64的多肽序列(更优选地由其组成)。

在一个优选的实施方案中，根据本发明使用的梭菌神经毒素可以包含与SEQ IDNO:64具有至少80％、90％、95％或98％序列同一性的多肽序列。例如，一种特别合适的梭菌神经毒素可以包含显示为SEQ ID NO:63的多肽序列(更优选地由其组成)。

优选地，包含与SEQ ID NO:63具有至少70％序列同一性的多肽序列的梭菌神经毒素包含无催化活性L链，如SEQ ID NO:64。

用于本发明中的嵌合和/或杂合梭菌神经毒素可以包含BoNT/A多肽的一部分和BoNT/B多肽的一部分，其实例包括本文被描述为SEQ ID NO:44的多肽。

合适的嵌合梭菌神经毒素可以包括BoNT/FA。实际上，在特别优选的实施方案中，本发明的梭菌神经毒素(例如嵌合梭菌神经毒素)可以包含BoNT/FA或其片段。无催化活性形式的BoNT/FA在本文中被描述为SEQ ID NO:26和34。BoNT/FA的合适片段也在本文中被描述为SEQ ID NO:28、30和32。

术语“梭菌神经毒素”还可以包含由非梭菌微生物表达的新发现的肉毒杆菌神经毒素蛋白家族成员，如肠球菌属(Enterococcus)编码的与BoNT/X具有最密切序列同一性的毒素；稻魏斯氏菌(Weissella oryzae)编码的称作BoNT/Wo的毒素(NCBI Ref Seq：WP_027699549.1)，其在W89-W90切割VAMP2；屎肠球菌(Enterococcus faecium)编码的毒素(GenBank：OTO22244.1)，其切割VAMP2和SNAP25；和胡椒金黄杆菌(Chryseobacteriumpipero)编码的毒素(NCBI Ref.Seq：WP_034687872.1)。

本发明的梭菌神经毒素可以缺少梭菌神经毒素有功能的H_C结构域；并且还缺少任何功能上等同的外源配体靶向部分(TM)。

本发明的梭菌神经毒素可以是再靶向的梭菌神经毒素。在一个备选实施方案中，本发明的梭菌神经毒素不是再靶向的梭菌神经毒素。在再靶向的梭菌神经毒素中，修饰梭菌神经毒素以包括称作靶向部分(TM)的外源配体。选择TM以提供针对目的靶细胞的结合特异性，并且作为再靶向过程的部分，可以移除梭菌神经毒素的天然结合部分(例如H_C结构域或H_CC结构域)。再靶向技术例如在EP-B-0689459；WO 1994/021300；EP-B-0939818；US 6,461,617；US 7,192,596；WO 1998/007864；EP-B-0826051；US 5,989,545；US 6,395,513；US6,962,703；WO 1996/033273；EP-B-0996468；US 7,052,702；WO 1999/017806；EP-B-1107794；US 6,632,440；WO 2000/010598；WO 2001/21213；WO 2006/059093；WO 2000/62814；WO 2000/04926；WO 1993/15766；WO 2000/61192和WO 1999/58571中描述；所述全部文献因而均通过引用方式完整并入本文作为参考。

如上文讨论，(全长)梭菌神经毒素由以下两条多肽链形成：重链(H链)，其具有大约100kDa的分子量，和轻链(L链)，其具有大约50kDa的分子量。H链包含C末端靶向组分(受体结合结构域或H_C结构域)和N末端转运组分(H_N结构域)。

在一个实施方案中，本发明的梭菌神经毒素包含BoNT/A的片段或BoNT/F的片段。在另一个实施方案中，本发明的梭菌神经毒素包含BoNT/A或BoNT/F的无催化活性L链。例如，本发明的梭菌神经毒素可以包含BoNT/A的无催化活性L链。

在本文所述梭菌神经毒素具有纯化用标签(例如His标签)和/或接头的实施方案中，所述标签和/或接头是任选的。

本文中描述了合适的全长梭菌神经毒素。

在一个实施方案中，本发明的梭菌神经毒素可以包含与SEQ ID NO:2、10、12、14、16、18、26、34、51、52、53、54、55、56、57、58、59、61、62、63、64或65中任一者具有至少70％序列同一性的多肽序列，优选地条件是所述梭菌神经毒素的梭菌神经毒素L链无催化活性。在一个实施方案中，本发明的梭菌神经毒素可以包含与SEQ ID NO:2、10、12、14、16、18、26、34、51、52、53、54、55、56、57、58、59、61、62、63、64或65中任一者具有至少80％、90％、95％或98％序列同一性的多肽序列，优选地条件是所述梭菌神经毒素的梭菌神经毒素L链无催化活性。优选地，本发明的梭菌神经毒素可以包含含有SEQ ID NO:2、10、12、14、16、18、26、34、51、52、53、54、55、56、57、58、59、61、62、63、64或65中任一者的多肽序列，优选地条件是所述梭菌神经毒素的梭菌神经毒素L链无催化活性。

在一个实施方案中，本发明的梭菌神经毒素可以是与SEQ ID NO:1、9、11、13、15、17、25、33或60中任一者具有至少70％序列同一性的核苷酸序列所编码的梭菌神经毒素，优选地条件是所述梭菌神经毒素的梭菌神经毒素L链无催化活性。在一个实施方案中，本发明的梭菌神经毒素是与SEQ ID NO:1、9、11、13、15、17、25、33或60中任一者具有至少80％、90％、95％或98％序列同一性的核苷酸序列所编码的梭菌神经毒素，优选地条件是所述梭菌神经毒素的梭菌神经毒素L链无催化活性。优选地，本发明的梭菌神经毒素是包含SEQ IDNO:1、9、11、13、15、17、25、33或60中任一者的核苷酸序列所编码的梭菌神经毒素，优选地条件是所述梭菌神经毒素的梭菌神经毒素L链无催化活性。

在一个实施方案中，本发明的梭菌神经毒素可以包含与SEQ ID NO:2、10、12、14、16、18、26、34、64或65中任一者具有至少70％序列同一性的多肽序列，优选地条件是所述梭菌神经毒素的梭菌神经毒素L链无催化活性。在一个实施方案中，本发明的梭菌神经毒素包含与SEQ ID NO:2、10、12、14、16、18、26、34、64或65中任一者具有至少80％、90％、95％或98％序列同一性的多肽序列，优选地条件是所述梭菌神经毒素的梭菌神经毒素L链无催化活性。优选地，本发明的梭菌神经毒素包含SEQ ID NO:2、10、12、14、16、18、26、34、64或65中任一者，优选地条件是所述梭菌神经毒素的梭菌神经毒素L链无催化活性。

在一个实施方案中，本发明的梭菌神经毒素是选自BoNT/A、BoNT/B、BoNT/C、BoNT/D、BoNT/E、BoNT/F、BoNT/G、BoNT/X和TeNT的全长梭菌神经毒素。

在一个实施方案中，本发明的梭菌神经毒素是选自BoNT/B、BoNT/C、BoNT/D、BoNT/E、BoNT/F、BoNT/G、BoNT/X和TeNT的全长梭菌神经毒素。

在一个实施方案中，本发明的梭菌神经毒素可以包含与SEQ ID NO:51-59、61或63中任一者具有至少70％序列同一性的多肽序列。在一个实施方案中，本发明的梭菌神经毒素可以包含与SEQ ID NO:51-59、61或63中任一者具有至少80％、90％、95％或98％序列同一性的多肽序列。在一个实施方案中，本发明的梭菌神经毒素可以包含与SEQ ID NO:51-59、61或63中任一者具有至少99％或99.9％序列同一性的多肽序列。优选地，本发明的梭菌神经毒素可以包含多肽序列(更优选地由其组成)，所述多肽序列包含SEQ ID NO:51-59、61或63中任一者。

在一个实施方案中，本发明的梭菌神经毒素可以包含与SEQ ID NO:52-59、61或63中任一者具有至少70％序列同一性的多肽序列。在一个实施方案中，本发明的梭菌神经毒素可以包含与SEQ ID NO:52-59、61或63中任一者具有至少80％、90％、95％或98％序列同一性的多肽序列。在一个实施方案中，本发明的梭菌神经毒素可以包含与SEQ ID NO:52-59、61或63中任一者具有至少99％或99.9％序列同一性的多肽序列。优选地，本发明的梭菌神经毒素可以包含多肽序列(更优选地由其组成)，所述多肽序列包含SEQ ID NO:52-59、61或63中任一者。

在一个实施方案中，本发明的梭菌神经毒素不是全长有催化活性的梭菌神经毒素，例如不是全长有催化活性的BoNT/A。

本发明的梭菌神经毒素可以包含梭菌神经毒素的片段(或由其组成)，例如本文所述的任何全长梭菌神经毒素的片段。

在一个实施方案中，本发明的梭菌神经毒素可以包含与SEQ ID NO:2、10、12、14、16、18、26、34、51、52、53、54、55、56、57、58、59、61、62、63、64或65中任一者具有至少70％序列同一性的多肽序列的片段。在一个实施方案中，本发明的梭菌神经毒素可以包含与SEQID NO:2、10、12、14、16、18、26、34、51、52、53、54、55、56、57、58、59、61、62、63、64或65中任一者具有至少80％、90％、95％或98％序列同一性的多肽序列的片段。优选地，本发明的梭菌神经毒素可以包含多肽序列的片段，所述多肽序列包含SEQ ID NO:2、10、12、14、16、18、26、34、51、52、53、54、55、56、57、58、59、61、62、63、64或65中任一者。

在一个实施方案中，本发明的梭菌神经毒素包含梭菌神经毒素L链或其片段(或由其组成)。梭菌神经毒素L链的片段可以具有梭菌神经毒素L链的≤400、≤350、≤300、≤250、≤200、≤150、≤100或≤50个氨基酸残基。在一个实施方案中，梭菌神经毒素L链的片段具有梭菌神经毒素L链的至少20、30、40、50、60、70、80、90、100、120、150或200个氨基酸残基。例如，梭菌神经毒素L链的片段可以具有梭菌神经毒素L链的20-400、50-300或100-200个氨基酸残基。

L链参考序列的实例包括：

肉毒A型神经毒素：氨基酸残基1-448

肉毒B型神经毒素：氨基酸残基1-440

肉毒C1型神经毒素：氨基酸残基1-441

肉毒D型神经毒素：氨基酸残基1-445

肉毒E型神经毒素：氨基酸残基1-422

肉毒F型神经毒素：氨基酸残基1-439

肉毒G型神经毒素：氨基酸残基1-441

破伤风神经毒素：氨基酸残基1-457

对于最近鉴定的BoNT/X，已经将L链报道为对应于其氨基酸1-439，其中L链边界可能变动大约25个氨基酸(例如1-414或1-464)。

以上鉴定的参考序列应当视为向导，因为轻微变型可以根据亚血清型发生。例如，US 2007/0166332(因而通过引用方式完整并入)援引略微不同的梭菌序列：

肉毒A型神经毒素：氨基酸残基M1-K448

肉毒B型神经毒素：氨基酸残基M1-K441

肉毒C1型神经毒素：氨基酸残基M1-K449

肉毒D型神经毒素：氨基酸残基M1-R445

肉毒E型神经毒素：氨基酸残基M1-R422

肉毒F型神经毒素：氨基酸残基M1-K439

肉毒G型神经毒素：氨基酸残基M1-K446

破伤风神经毒素：氨基酸残基M1-A457

本文中描述了合适的梭菌神经毒素L链。

梭菌神经毒素L链可以包含与SEQ ID NO:6、24、32或40中任一者具有至少70％序列同一性的多肽序列或其片段。在一个实施方案中，梭菌神经毒素L链包含与SEQ ID NO:6、24、32或40中任一者具有至少80％、90％、95％或98％序列同一性的多肽序列或其片段。优选地，梭菌神经毒素L链包含了含有SEQ ID NO:6、24、32或40中任一者的多肽序列或其片段(更优选地由其组成)。

梭菌神经毒素L链可以是与SEQ ID NO:5、23、31或39中任一者具有至少70％序列同一性的核苷酸序列或其片段所编码的梭菌神经毒素L链。在一个实施方案中，梭菌神经毒素L链是与SEQ ID NO:5、23、31或39中任一者具有至少80％、90％、95％或98％序列同一性的核苷酸序列或其片段所编码的梭菌神经毒素L链。优选地，梭菌神经毒素L链是包含SEQID NO:5、23、31或39中任一者的核苷酸序列或其片段所编码的梭菌神经毒素L链。

在一个实施方案中，本发明的梭菌神经毒素包含梭菌神经毒素H链的片段或(由其组成)。梭菌神经毒素H链的片段可以具有梭菌神经毒素H链的≤800、≤700、≤600、≤500、≤400、≤350、≤300、≤250、≤200、≤150、≤100或≤50个氨基酸残基。在一个实施方案中，梭菌神经毒素H链的片段具有梭菌神经毒素H链的至少20、30、40、50、60、70、80、90、100、120、150或200个氨基酸残基。例如，梭菌神经毒素H链的片段可以具有梭菌神经毒素H链的20-800、30-600、40-400、50-300或100-200个氨基酸残基。

梭菌神经毒素H链包含两个结构/功能域：转运结构域(H_N)和受体结合结构域(H_C)。

在一个实施方案中，本发明的梭菌神经毒素包含梭菌神经毒素转运结构域或其片段(或由其组成)。梭菌神经毒素转运结构域的片段可以具有梭菌神经毒素转运结构域的≤400、≤350、≤300、≤250、≤200、≤150、≤100或≤50个氨基酸残基。在一个实施方案中，梭菌神经毒素转运结构域的片段具有梭菌神经毒素转运结构域的至少20、30、40、50、60、70、80、90、100、120、150或200个氨基酸残基。例如，梭菌神经毒素转运结构域的片段可以具有梭菌神经毒素转运结构域的20-400、50-300或100-200个氨基酸残基。

转运结构域是梭菌神经毒素H链的片段，其大致等同于H链的氨基端半侧，或与完好H链中该片对应的结构域。在一个实施方案中，可以通过缺失H_C氨基酸序列(在DNA合成层面或在柱合成层面通过核酸酶或蛋白酶处理缺失)消除H链的H_C功能。备选地，H_C功能可以通过化学处理或生物处理失活。因此，在一些实施方案中，H链可以不能与靶细胞上结合于天然梭菌神经毒素(即完整毒素)的结合位点结合。

合适(参考)转运结构域的实例包括：

肉毒A型神经毒素-氨基酸残基(449-871)

肉毒B型神经毒素-氨基酸残基(441-858)

肉毒C型神经毒素-氨基酸残基(442-866)

肉毒D型神经毒素-氨基酸残基(446-862)

肉毒E型神经毒素-氨基酸残基(423-845)

肉毒F型神经毒素-氨基酸残基(440-864)

肉毒G型神经毒素-氨基酸残基(442-863)

破伤风神经毒素-氨基酸残基(458-879)

以上鉴定的参考序列应当视为向导，因为轻微变型可以根据亚血清型发生。例如，US 2007/0166332(因而通过引用方式并入)援引略微不同的梭菌序列：

肉毒A型神经毒素-氨基酸残基(A449-K871)

肉毒B型神经毒素-氨基酸残基(A442-S858)

肉毒C型神经毒素-氨基酸残基(T450-N866)

肉毒D型神经毒素-氨基酸残基(D446-N862)

肉毒E型神经毒素-氨基酸残基(K423-K845)

肉毒F型神经毒素-氨基酸残基(A440-K864)

肉毒G型神经毒素-氨基酸残基(S447-S863)

破伤风神经毒素-氨基酸残基(S458-V879)

在本发明的上下文中，多种包含转运结构域的梭菌神经毒素H_N区可以用于本发明的多个方面。在一个实施方案中，这些活性片段可以促进非细胞毒性蛋白酶(例如梭菌的L链)从胞内小泡释放进入靶细胞的细胞质并且因此参与执行梭菌神经毒素蛋白酶解切割底物的总体细胞机机制。来自梭菌神经毒素重链的H_N区为大约410-430个氨基酸长度并且包含转运结构域。研究已经显示，来自梭菌神经毒素重链的H_N区的整个长度不是转运结构域转运活性必需的。因此，这个实施方案的诸方面可以包括这些梭菌神经毒素H_N区，它们包含具有例如，至少350个氨基酸、至少375个氨基酸、至少400个氨基酸和至少425个氨基酸长度的转运结构域。这个实施方案的其他方面可以包括这些梭菌神经毒素H_N区，它们包含具有例如，至多350个氨基酸、至多375个氨基酸、至多400个氨基酸和至多425个氨基酸长度的转运结构域。

关于肉毒梭菌(Clostridium botulinum)和破伤风梭菌中产生毒素的更多遗传基础细节，参见Henderson等人(1997)Clostridia:Molecular Biology and Pathogenesis(梭菌纲：分子生物学和发病机制),Academic press。

术语H_N包含天然存在的神经毒素H_N部分和具有自然界中不存在和/或合成性氨基酸残基的氨基酸序列的修饰的H_N部分。在一个实施方案中，所述修饰的H_N部分仍然展示出上文提到的转运功能。

在一个优选的实施方案中，本发明的梭菌神经毒素包含梭菌神经毒素受体结合结构域(H_C)或其片段(或由其组成)。梭菌神经毒素受体结合结构域(H_C)的片段可以具有梭菌神经毒素受体结合结构域(H_C)的≤350、≤300、≤250、≤200、≤150、≤100或≤50个氨基酸残基。在一个实施方案中，梭菌神经毒素受体结合结构域(H_C)的片段具有梭菌神经毒素受体结合结构域(H_C)的至少20、30、40、50、60、70、80、90、100、120、150或200个氨基酸残基。例如，梭菌神经毒素受体结合结构域(H_C)的片段可以具有梭菌神经毒素受体结合结构域(H_C)的20-350、50-300或100-200个氨基酸残基。

梭菌神经毒素受体结合结构域(H_C)参考序列的实例包括：

BoNT/A-N872-L1296

BoNT/B-E859-E1291

BoNT/C1-N867-E1291

BoNT/D-S863-E1276

BoNT/E-R846-K1252

BoNT/F-K865-E1274

BoNT/G-N864-E1297

TeNT-I880-D1315

对于最近鉴定的BoNT/X，已经将H_C结构域报道为对应于其氨基酸893-1306，其中结构域边界可能变动大约25个氨基酸(例如868-1306或918-1306)。

梭菌神经毒素H链可以进一步包含转运促进结构域。所述结构域促进L链递送入靶细胞的胞质溶胶并且例如在WO 08/008803和WO 08/008805中描述，所述文献的每篇通过引用方式并入本文作为参考。

例如，转运促进结构域可以包含梭菌神经毒素H_CN结构域或其片段或变体。更详细地，梭菌神经毒素H_CN转运促进结构域可以具有至少200个氨基酸、至少225个氨基酸、至少250个氨基酸、至少275个氨基酸长度。在这个方面，梭菌神经毒素H_CN转运促进结构域优选地具有最多200个氨基酸、最多225个氨基酸、最多250个氨基酸或最多275氨基酸长度。具体(参考)实例包括：

肉毒A型神经毒素-氨基酸残基(872-1110)

肉毒B型神经毒素-氨基酸残基(859-1097)

肉毒C型神经毒素-氨基酸残基(867-1111)

肉毒D型神经毒素-氨基酸残基(863-1098)

肉毒E型神经毒素-氨基酸残基(846-1085)

肉毒F型神经毒素-氨基酸残基(865-1105)

肉毒G型神经毒素-氨基酸残基(864-1105)

破伤风神经毒素-氨基酸残基(880-1127)

以上的序列位置可以根据血清型/亚型略微变动，并且合适(参考)梭菌神经毒素H_CN结构域的其他实例包括：

肉毒A型神经毒素-氨基酸残基(874-1110)

肉毒B型神经毒素-氨基酸残基(861-1097)

肉毒C型神经毒素-氨基酸残基(869-1111)

肉毒D型神经毒素-氨基酸残基(865-1098)

肉毒E型神经毒素-氨基酸残基(848-1085)

肉毒F型神经毒素-氨基酸残基(867-1105)

肉毒G型神经毒素-氨基酸残基(866-1105)

破伤风神经毒素-氨基酸残基(882-1127)

本文中描述了合适的梭菌神经毒素H_C结构域。

梭菌神经毒素H_C结构域可以包含与SEQ ID NO:8、22、30、38、42、44、46、48或50中任一者具有至少70％序列同一性的多肽序列或其片段。在一个实施方案中，梭菌神经毒素H_C结构域包含与SEQ ID NO:8、22、30、38、42、44、46、48或50中任一者具有至少80％、90％、95％或98％序列同一性的多肽序列或其片段。优选地，梭菌神经毒素H_C结构域包含多肽序列(更优选地由其组成)，所述多肽序列包含SEQ ID NO:8、22、30、38、42、44、46、48或50中任一者或其片段。

梭菌神经毒素H_C结构域可以是与SEQ ID NO:7、21、29、37、41、43、45、47或49中任一者具有至少70％序列同一性的核苷酸序列或其片段所编码的梭菌神经毒素H_C结构域。在一个实施方案中，梭菌神经毒素H_C结构域是与SEQ ID NO:7、21、29、37、41、43、45、47或49中任一者具有至少80％、90％、95％或98％序列同一性的核苷酸序列或其片段所编码的梭菌神经毒素H_C结构域。优选地，梭菌神经毒素H_C结构域是包含SEQ ID NO:7、21、29、37、41、43、45、47或49中任一者的核苷酸序列或其片段所编码的梭菌神经毒素H_C结构域。

在一个实施方案中，用于本发明中的梭菌神经毒素H_C结构域是变异BoNT/A H_C结构域。所述变异BoNT/A H_C结构域可以包含对选自以下的一个或多个氨基酸残基的修饰：Y1117、F1252、H1253和L1278。例如，变异BoNT/A H_C结构域可以包含以下一个或多个(优选地两个或更多个)修饰：Y1117V、F1252Y、H1253K和L1278F或L1278H。

在一个实施方案中，变异BoNT/A H_C结构域包含以下修饰：Y1117V和H1253K；或Y1117V、F1252Y、H1253K和L1278F；或Y1117V、F1252Y、H1253K和L1278H。

优选地，变异BoNT/A H_C结构域包含以下修饰：Y1117V和H1253K；或Y1117V、F1252Y、H1253K和L1278H。

修饰可以是与显示为SEQ ID NO:62的未修饰的BoNT/A相比时的修饰，其中通过与SEQ ID NO:62比对确定氨基酸残基编号。由于SEQ ID NO:62的位置1处甲硫氨酸残基的存在为任选，故在确定氨基酸残基编号时，本领域普通技术人员将考虑甲硫氨酸残基的存在/不存在。例如，在SEQ ID NO:62包括甲硫氨酸情况下，位置编号将如上文定义(例如Y1117将对齐SEQ ID NO:62的Y1117)。在甲硫氨酸从SEQ ID NO:62中缺少情况下，氨基酸残基编号应当按-1修改(例如Y1117将对齐SEQ ID NO:52的Y1116)。当本文所述其他多肽序列的位置1处的甲硫氨酸存在/不存在时，相似的注意事项适用，并且本领域普通技术人员将使用本领域常规的技术轻易地确定正确的氨基酸残基编号。

变异BoNT/A H_C结构域可以包含与SEQ ID NO:46、48或50中任一者具有至少70％序列同一性的多肽序列或其片段，条件是变异BoNT/A H_C结构域包含如上文所述的修饰。在一个实施方案中，变异BoNT/A H_C结构域包含与SEQ ID NO:46、48或50中任一者具有至少80％、90％、95％或98％序列同一性的多肽序列或其片段，条件是变异BoNT/A H_C结构域包含如上文所述的修饰。在一个实施方案中，变异BoNT/A H_C结构域包含与SEQ ID NO:46、48或50中任一者具有至少99％或99.9％序列同一性的多肽序列或其片段，条件是变异BoNT/AH_C结构域包含如上文所述的修饰。优选地，变异BoNT/A H_C结构域包含了包含SEQ ID NO:46、48或50中任一者的多肽序列或其片段(更优选地由其组成)。

变异BoNT/A H_C结构域可以包含与SEQ ID NO:46或50中任一者具有至少70％序列同一性的多肽序列或其片段，条件是变异BoNT/A H_C结构域包含如上文所述的修饰。在一个实施方案中，变异BoNT/A H_C结构域包含与SEQ ID NO:46或50中任一者具有至少80％、90％、95％或98％序列同一性的多肽序列或其片段，条件是变异BoNT/A H_C结构域包含如上文所述的修饰。在一个实施方案中，变异BoNT/A H_C结构域包含与SEQ ID NO:46或50中任一者具有至少99％或99.9％序列同一性的多肽序列或其片段，条件是变异BoNT/A H_C结构域包含如上文所述的修饰。优选地，变异BoNT/A H_C结构域包含了包含SEQ ID NO:46或50中任一者的多肽序列或其片段(更优选地由其组成)。

变异BoNT/A H_C结构域可以是与SEQ ID NO:45、47或49中任一者具有至少70％序列同一性的核苷酸序列或其片段所编码的结构域，条件是变异BoNT/A H_C结构域包含如上文所述的修饰。在一个实施方案中，变异BoNT/A H_C结构域可以是与SEQ ID NO:45、47或49中任一者具有至少80％、90％、95％或98％序列同一性的核苷酸序列或其片段所编码的结构域，条件是变异BoNT/A H_C结构域包含如上文所述的修饰。在一个实施方案中，变异BoNT/A H_C结构域可以是与SEQ ID NO:45、47或49中任一者具有至少99％或99.9％序列同一性的核苷酸序列或其片段所编码的结构域，条件是变异BoNT/A H_C结构域包含如上文所述的修饰。优选地，变异BoNT/A H_C结构域可以是SEQ ID NO:45、47或49中任一者编码的变异BoNT/A H_C结构域或其片段。

变异BoNT/A H_C结构域可以是与SEQ ID NO:45或49中任一者具有至少70％序列同一性的核苷酸序列或其片段所编码的结构域，条件是变异BoNT/A H_C结构域包含如上文所述的修饰。在一个实施方案中，变异BoNT/A H_C结构域可以是与SEQ ID NO:45或49中任一者具有至少80％、90％、95％或98％序列同一性的核苷酸序列或其片段所编码的结构域，条件是变异BoNT/A H_C结构域包含如上文所述的修饰。在一个实施方案中，变异BoNT/A H_C结构域可以是与SEQ ID NO:45或49中任一者具有至少99％或99.9％序列同一性的核苷酸序列或其片段所编码的结构域，条件是变异BoNT/A H_C结构域包含如上文所述的修饰。优选地，变异BoNT/A H_C结构域可以是SEQ ID NO:45或49中任一者编码的变异BoNT/A H_C结构域或其片段。

前述促进结构域的任一者可以与适用于本发明中的前述转运结构域肽任一者组合。因此，例如，非梭菌促进结构域可以与非梭菌转运结构域肽或与梭菌转运结构域肽组合。备选地，梭菌神经毒素H_CN转运促进结构域可以与非梭菌转运结构域肽组合。备选地，梭菌神经毒素H_CN促进结构域可以与梭菌转运结构域肽组合，其实例包括：

肉毒A型神经毒素-氨基酸残基(449-1110)

肉毒B型神经毒素-氨基酸残基(442-1097)

肉毒C型神经毒素-氨基酸残基(450-1111)

肉毒D型神经毒素-氨基酸残基(446-1098)

肉毒E型神经毒素-氨基酸残基(423-1085)

肉毒F型神经毒素-氨基酸残基(440-1105)

肉毒G型神经毒素-氨基酸残基(447-1105)

破伤风神经毒素-氨基酸残基(458-1127)

在一些实施方案中，本发明的梭菌神经毒素可以缺少梭菌神经毒素有功能的H_C结构域。在一个实施方案中，梭菌神经毒素优选地缺少梭菌神经毒素完整毒素的最后50个C末端氨基酸。在另一个实施方案中，梭菌神经毒素优选地缺少梭菌神经毒素完整毒素的最后100个、优选地最后150个、更优选地最后200个、特别优选地最后250个并且最优选地最后300个C末端氨基酸残基。备选地，可以通过诱变取消/降低H_C结合活性-例如，出于方便提到BoNT/A，修饰神经节苷脂结合袋中的一个或两个氨基酸残基突变(W1266突变成L和Y1267突变成F)造成H_C区域丧失其受体结合功能。可以对非血清型A梭菌肽组分进行类似突变，例如基于携突变(W1262突变成L和Y1263突变成F)的肉毒B或肉毒E(W1224突变成L和Y1225突变成F)的构建体。其他对活性部位的突变实现相同的H_C受体结合活性消除，例如肉毒A型毒素中Y1267S和其他梭菌神经毒素中相应的高度保守残基。Rummel等人(2004)中(MolecularMicrobiol.51:631-634)描述了这种突变和其他突变的详情，所述文献因而通过引用方式并入。

天然梭菌神经毒素的H_C肽包含大约400-440个氨基酸残基，并且由功能上不同、各自大约25kDa的两个结构域组成，即N末端区(常称作H_CN肽或结构域)和C末端区(常称作H_CC肽或结构域)。这个事实由以下出版物确认，所述每份出版物在本文中通过引用方式完整并入：Umland TC(1997)Nat.Struct.Biol.4:788-792；Herreros J(2000)Biochem.J.347:199-204；Halpern J(1993)J.Biol.Chem.268:15,第11188-11192页；Rummel A(2007)PNAS104:359-364；Lacey DB(1998)Nat.Struct.Biol.5:898-902；Knapp(1998)Am.Cryst.Assoc.Abstract Papers 25:90；Swaminathan和Eswaramoorthy(2000)Nat.Struct.Biol.7:1751-1759；和Rummel A(2004)Mol.Microbiol.51(3),631-643。另外，已经充分记录，构成C末端160-200个氨基酸残基的C末端区(H_CC)负责梭菌神经毒素结合于其天然细胞受体，即神经肌肉接头处神经末梢——这个事实也由以上出版物确认。因此，遍及本说明书提及一种梭菌重链，其缺少有功能的重链H_C肽(或结构域)，从而该重链不能够与天然梭菌神经毒素的细胞表面受体发生结合，这意指梭菌重链仅缺少有功能的H_CC肽。也就是说，可以部分或完全缺失或另行修饰(例如通过常规的化学处理或蛋白酶解处理)H_CC肽区，以减少其对神经肌肉接头处神经末梢的天然结合能力。

因此，在一个实施方案中，本发明的梭菌神经毒素H_N肽缺少梭菌神经毒素的C末端肽部分(H_CC)的一部分；并且因此缺少天然梭菌神经毒素的H_C结合功能。例如，在一个实施方案中，C末端延长的梭菌H_N肽缺少梭菌神经毒素重链的C末端40个氨基酸残基、或C末端60个氨基酸残基、或C末端80个氨基酸残基、或C末端100个氨基酸残基、或C末端120个氨基酸残基、或C末端140个氨基酸残基、或C末端150个氨基酸残基、或C末端160个氨基酸残基。在另一个实施方案中，本发明的梭菌H_N肽缺少梭菌神经毒素的整个C末端肽部分(H_CC)；并且因此缺少天然梭菌神经毒素的H_C结合功能。例如，在一个实施方案中，梭菌H_N肽缺少梭菌神经毒素重链的C末端165个氨基酸残基、或C末端170个氨基酸残基、或C末端175个氨基酸残基、或C末端180个氨基酸残基、或C末端185个氨基酸残基、或C末端190个氨基酸残基、或C末端195个氨基酸残基。以进一步举例方式，本发明的梭菌H_N肽缺少选自以下的梭菌H_CC参考序列：

肉毒A型神经毒素-氨基酸残基(Y1111-L1296)

肉毒B型神经毒素-氨基酸残基(Y1098-E1291)

肉毒C型神经毒素-氨基酸残基(Y1112-E1291)

肉毒D型神经毒素-氨基酸残基(Y1099-E1276)

肉毒E型神经毒素-氨基酸残基(Y1086-K1252)

肉毒F型神经毒素-氨基酸残基(Y1106-E1274)

肉毒G型神经毒素-氨基酸残基(Y1106-E1297)

破伤风神经毒素-氨基酸残基(Y1128-D1315)。

以上鉴定的参考序列应当视为向导，因为轻微变型可以根据亚血清型发生。

在一个优选的实施方案中，本发明的梭菌神经毒素包含梭菌神经毒素L链或其片段和梭菌神经毒素H链的片段(或由其组成)。例如，梭菌神经毒素可以包含梭菌神经毒素L链或其片段和梭菌神经毒素转运结构域(H_N)(或由其组成)。优选地，梭菌神经毒素进一步不包含梭菌神经毒素受体结合结构域(H_C)或不包含至少梭菌神经毒素受体结合结构域的C末端部分(H_CC)。因此，在一个实施方案中，本发明的梭菌神经毒素缺少梭菌神经毒素受体结合结构域的C末端部分(H_CC)。有利地，这类梭菌神经毒素缺少内源梭菌神经毒素受体结合能力并且因此在施用所述梭菌神经毒素的受试者中显示较少的脱靶效应。

在一个实施方案中，本发明的梭菌神经毒素基本上由梭菌神经毒素L链或其片段和/或梭菌神经毒素H链的片段组成。如本上下文中所用的术语“基本上由……组成”意指例如施用至受试者时，梭菌神经毒素进一步不包含赋予梭菌神经毒素额外功能的一个或多个氨基酸残基。也就是说，“基本上由梭菌神经毒素L链或其片段和/或梭菌神经毒素H链的片段组成”的梭菌神经毒素可以(对那些梭菌神经毒素L链或其片段和/或梭菌神经毒素H链的片段)进一步包含一个或多个氨基酸残基，但是例如施用至受试者时，所述一个或多个进一步的氨基酸残基不赋予梭菌神经毒素额外功能。额外的功能可以包括酶活性、结合活性和/或任何生理活性，无论其是什么。

在一个实施方案中，梭菌神经毒素可以除了包含任何梭菌神经毒素序列之外，还包含非梭菌神经毒素序列。非梭菌神经毒素序列优选地不破坏本发明梭菌神经毒素促进神经免疫应答的能力。优选地，非梭菌神经毒素序列不是具有催化活性(例如酶活性)的一个序列。优选地，非梭菌序列不是一个与细胞受体结合的序列。换言之，非梭菌序列最优选不是细胞受体的配体。细胞受体可以是蛋白质性细胞受体，如整合型膜蛋白。细胞受体实例可见于https://www.guidetopharmacology.org/download.jsp#db_reports可获得的2019.4版IUPHAR药理学数据库指南。非梭菌神经毒素序列可以包括辅助纯化的标签，如His标签。优选包含于所述梭菌神经毒素中的任何梭菌神经毒素序列由梭菌神经毒素L链或其片段和/或梭菌神经毒素H链的片段组成。在一个实施方案中，包含于所述梭菌神经毒素中的梭菌神经毒素序列可以由梭菌神经毒素L链组成。在一个实施方案中，包含于所述梭菌神经毒素中的梭菌神经毒素序列可以由梭菌神经毒素转运结构域组成。在一个实施方案中，包含于所述梭菌神经毒素中的梭菌神经毒素序列可以由梭菌神经毒素受体结合结构域组成。在一个实施方案中，包含于所述梭菌神经毒素中的梭菌神经毒素序列可以由梭菌神经毒素L链和梭菌神经毒素转运结构域组成。

本文中描述了包含梭菌神经毒素L链和转运结构域(或由梭菌神经毒素L链和转运结构域组成)的合适梭菌神经毒素。

包含梭菌神经毒素L链和转运结构域(或由二者组成)的梭菌神经毒素可以包含与SEQ ID NO:4、20、28或36中任一者具有至少70％序列同一性的多肽序列或其片段。在一个实施方案中，包含梭菌神经毒素L链和转运结构域(或由二者组成)的梭菌神经毒素包含与SEQ ID NO:4、20、28或36中任一者具有至少80％、90％、95％或98％序列同一性的多肽序列或其片段。优选地，包含梭菌神经毒素L链和转运结构域(或由二者组成)的梭菌神经毒素包含了包含SEQ ID NO:4、20、28或36中任一者的多肽序列或其片段(更优选地由其组成)。

包含梭菌神经毒素L链和转运结构域(或由二者组成)的梭菌神经毒素可以是与SEQ ID NO:3、19、27或35中任一者具有至少70％序列同一性的核苷酸序列或其片段所编码的梭菌神经毒素。在一个实施方案中，包含梭菌神经毒素L链和转运结构域(或由二者组成)的梭菌神经毒素是与SEQ ID NO:3、19、27或35中任一者具有至少80％、90％、95％或98％序列同一性的核苷酸序列或其片段所编码的梭菌神经毒素。优选地，包含梭菌神经毒素L链和转运结构域(或由二者组成)的梭菌神经毒素是包含SEQ ID NO:3、19、27或35中任一者的核苷酸序列或其片段所编码的梭菌神经毒素。

本发明的梭菌神经毒素可以不含天然存在的梭菌神经毒素复合体中存在的复合性蛋白质。

可以使用重组核酸技术产生本发明的梭菌神经毒素。因此，在一个实施方案中，梭菌神经毒素(如上文所述)是重组梭菌神经毒素。

在一个实施方案中，本发明的梭菌神经毒素包含梭菌神经毒素L链。优选L链无催化活性。

活性梭菌神经毒素L链具有非细胞毒性蛋白酶活性。具体而言，活性梭菌神经毒素L链具有内肽酶活性并且能够切割靶细胞中的胞外融合器(exocytic fusion apparatus)蛋白。胞外融合器蛋白优选地是SNARE蛋白，如SNAP-25、小突触小泡蛋白/VAMP或突触融合蛋白。

如本文就梭菌神经毒素L链而言所用的术语“无催化活性”意指所述L链基本上显示出非细胞毒性蛋白酶活性，优选地，如本文就梭菌神经毒素L链而言所用的术语“无催化活性”意指所述L链显示没有非细胞毒性蛋白酶活性。在一个实施方案中，无催化活性的梭菌神经毒素L链是不切割靶细胞中胞外融合器蛋白的梭菌神经毒素L链。术语“基本上没有非细胞毒性蛋白酶活性”意指梭菌神经毒素L链具备有催化活性梭菌神经毒素L链(优选地，显示为SEQ ID NO:6的天然BoNT/A的L链)的小于5％的非细胞毒性蛋白酶活性，例如有催化活性梭菌神经毒素L链的小于2％、1％或优选地小于0.1％的非细胞毒性蛋白酶活性。可以在体外测定非细胞毒性蛋白酶活性，其通过温育供试梭菌神经毒素L链与SNARE蛋白并且在相同条件下，与由有催化活性梭菌神经毒素L链切割的SNARE蛋白的量相比时，比较由供试梭菌神经毒素L链切割的SNARE蛋白的量。常规技术如SDS-PAGE和蛋白质印迹法可以用来定量已切割的SNARE蛋白的量。WO 2019/145577 A1中描述了合适的体外测定法，所述文献通过引用方式并入本文作为参考。

基于细胞的测定法及体内测定法也可以用来确定包含L链和有功能细胞结合与转运结构域的梭菌神经毒素是否具有非细胞毒性蛋白酶活性。测定法如肢体外展评分(DigitAbduction Score，DAS)、背根神经节(DRG)测定法、脊髓神经元(SCN)测定法和小鼠膈神经偏侧膈(phrenic nerve hemidiaphragm，PNHD)测定法在本领域是常规的。测定非细胞毒性蛋白酶活性的适合测定法可以是Donald等人(2018),Pharmacol Res Perspect,e00446,1-14中所述的测定法，所述文献通过引用方式并入本文作为参考。

无催化活性的L链可以具有使所述催化活性失活的一个或多个突变。例如，无催化活性的BoNT/A L链可以包含活性部位残基的突变，所述活性部位残基是如His223、Glu224、His227、Glu262和/或Tyr366。位置编号对应于SEQ ID NO:62的氨基酸位置；并且可以通过将多肽与SEQ ID NO:62比对来确定。由于SEQ ID NO:62的位置1处甲硫氨酸残基的存在为任选，故在确定氨基酸残基编号时，本领域普通技术人员将考虑甲硫氨酸残基的存在/不存在。例如，在SEQ ID NO:62包括甲硫氨酸情况下，位置编号将如上文定义(例如His223将是SEQ ID NO:62的His223)。备选地，在甲硫氨酸从SEQ ID NO:62中缺少情况下，氨基酸残基编号应当按-1修改(例如His223将是SEQ ID NO:62的His222)。当本文所述其他多肽序列的位置1处的甲硫氨酸存在/不存在时，相似的注意事项适用，并且本领域普通技术人员将使用本领域常规的技术轻易地确定正确的氨基酸残基编号。

在一个特别优选的实施方案中，本发明的梭菌神经毒素可以包含修饰的BoNT/A或其片段(优选地BoNT/A H_C结构域或其片段)。修饰的BoNT/A或其片段可以是在一个或多个选自以下的氨基酸残基处包含修饰的BoNT/A或其片段：ASN 886、ASN 905、GLN 915、ASN918、GLU 920、ASN 930、ASN 954、SER 955、GLN 991、GLU 992、GLN 995、ASN 1006、ASN1025、ASN 1026、ASN 1032、ASN 1043、ASN 1046、ASN 1052、ASP 1058、HIS1064、ASN 1080、GLU 1081、GLU 1083、ASP 1086、ASN 1188、ASP 1213、GLY 1215、ASN 1216、GLN 1229、ASN1242、ASN 1243、SER 1274和THR 1277。这种修饰的BoNT/A或其片段可以表现出与已知BoNT/A的用途相比，副作用减少或不存在。本发明的修饰的BoNT/A的组织滞留增加特性还可以提供增加的功效或作用持续时间并且与已知的梭菌毒素治疗药相比，可以允许待用的剂量降低(或无任何额外不良作用下剂量增加)，因此提供进一步的优点。

修饰可以是与显示为SEQ ID NO:62的未修饰的BoNT/A相比时的修饰，其中通过与SEQ ID NO:62比对确定氨基酸残基编号。由于SEQ ID NO:62(以及与本文所述的修饰的BoNT/A多肽或其片段对应的SEQ ID NO)的位置1处甲硫氨酸残基的存在为任选，故在确定氨基酸残基编号时，本领域普通技术人员将考虑甲硫氨酸残基的存在/不存在。例如，在SEQID NO:62包括甲硫氨酸情况下，位置编号将如上文定义(例如ASN 886将是SEQ ID NO:62的ASN 886)。备选地，在甲硫氨酸从SEQ ID NO:62中缺少情况下，氨基酸残基编号应当按-1修改(例如ASN 886将是SEQ ID NO:62的ASN 885)。当本文所述其他多肽序列的位置1处的甲硫氨酸存在/不存在时，相似的注意事项适用，并且本领域普通技术人员将使用本领域常规的技术轻易地确定正确的氨基酸残基编号。

对上述修饰指示的氨基酸残基为表面暴露的氨基酸残基。

修饰的BoNT/A或其片段可以在一个或多个选自以下的氨基酸残基处包含修饰：ASN 886、ASN 930、ASN 954、SER 955、GLN 991、ASN 1025、ASN 1026、ASN 1052、ASN 1188、ASP 1213、GLY 1215、ASN 1216、GLN 1229、ASN 1242、ASN 1243、SER 1274和THR 1277。

在修饰的BoNT/A或其片段的上下文中使用时，术语“一个或多个氨基酸残基”优选地意指至少2、3、4、5、6或7个所示的氨基酸残基。因此，修饰的BoNT/A可以在所示的氨基酸残基处包含至少2、3、4、5、6或7个(优选地7个)修饰。修饰的BoNT/A或其片段可以包含1-30、3-20或5-10个氨基酸修饰。更优选地，在修饰的BoNT/A或其片段的上下文中使用时，术语“一个或多个氨基酸残基”意指全部所示的氨基酸残基。

优选地，与SEQ ID NO:62相比时，除了指示的氨基酸残基处一个或多个氨基酸修饰之外，修饰的BoNT/A或其片段不含有任何其他氨基酸修饰。

该修饰可以选自：

i.用碱性氨基酸残基置换表面暴露的酸性氨基酸残基；

ii.用不带电荷的氨基酸残基置换表面暴露的酸性氨基酸残基；

iii.用碱性氨基酸残基置换表面暴露的不带电荷氨基酸残基；

iv.插入碱性氨基酸残基；和

v.缺失表面暴露的酸性氨基酸残基。

如上文所示的修饰产生与相应未修饰的BoNT/A或其片段相比时具有增加的表面正电荷和升高的等电点的修饰的BoNT/A或其片段。

等电点(pI)是给定蛋白质的专有特性。如本领域熟知，蛋白质由特定序列的氨基酸(在蛋白质中时也称作氨基酸残基)组成。二十种氨基酸的标准集合的每种氨基酸具有不同的侧链(或R基团)，这意指蛋白质中的每个氨基酸残基展示不同的化学特性如电荷和疏水性。这些特性可能受周围化学环境如温度和pH影响。蛋白质的总体化学特征将取决于这些各异因素的总和。

某些氨基酸残基(下文详细描述)拥有可电离侧链，所述侧链可以展示取决于周围pH的电荷。在给定pH时这种侧链是否带电荷取决于相关可电离部分的pKa，其中pKa是来自共轭碱的指定质子的酸解离常数(Ka)的负对数。

例如，酸性残基如天冬氨酸和谷氨酸具有侧链羧酸基，pKa值大约4.1(精确pKa值可以取决于温度、离子强度和可电离基团的微环境)。因此，这些侧链在pH 7.4(经常称作“生理pH”)展示负电荷。在低pH值，这些侧链将质子化并丢失其电荷。

反过来，碱性残基如赖氨酸和精氨酸具有含氮侧链基团，pKa值大约10-12。这些侧链因此在pH 7.4展示正电荷。这些侧链将在高pH值去质子化并丢失其电荷。

蛋白质分子的总(净)电荷因此取决于蛋白质中存在的酸性残基和碱性残基的数目(及它们的表面暴露程度)及周围pH。改变周围pH改变蛋白质上的总体电荷。因此，对于每种蛋白质，存在一个给定pH，在所述给定pH，正电荷数目和负电荷数目相等且蛋白质展示无总体净电荷。这个点称作等电点(pI)。等电点是生物化学中本领域普通技术人员熟悉的标准概念。

等电点(pI)是因此定义为蛋白质展示零净电荷的pH值。pI升高意味着蛋白质展示零净电荷要求更高的pH值。因此，pI升高代表蛋白质的净正电荷在给定的pH增加。反过来，pI降低意味着蛋白质展示零净电荷要求更低的pH值。因此，pI降低代表蛋白质的净正电荷在给定的pH减少。

测定蛋白质的pI的方法为本领域已知且是技术人员熟悉的。例如，可以从存在于蛋白质中的每种氨基酸的平均pKa值算出蛋白质的pI(“计算的pI”)。这种计算可以使用本领域已知的计算机程序进行，如来自ExPASy的Compute pI/MW工具(https://web.expasy.org/compute_pi/)，其是用于计算本发明pI的优选方法。应当使用相同计算技术/程序进行不同分子之间pI值的比较。

根据需要，可以使用等电聚焦技术实验地确认计算的蛋白质pI(“观测的pI”)。这项技术使用电泳根据蛋白质的pI分离蛋白质。等电聚焦一般是使用具有固定pH梯度的凝胶进行。当施加电场时，蛋白质穿过pH梯度迁移直至蛋白质达到它具有零净电荷的pH，这个点是蛋白质的pI。等电聚焦提供的结果一般在性质上为分辨率相对低，并且因此发明人认为由计算的pI提供的结果(如上文所述)更适合使用。

除非另外规定，否则遍及说明书，“pI”意指“计算的pI”。

可以通过改变蛋白质表面展示的碱性基团和/或酸性基团的数目升高或降低蛋白质的pI。这可以通过修饰蛋白质的一个或多个氨基酸实现。例如，可以通过减少酸性残基数目或通过增加碱性残基数目引起pI升高。

本发明的修饰的BoNT/A或其片段可以具有高于未修饰的BoNT/A(例如SEQ ID NO:62)或其片段至少0.2、0.4、0.5或1个pI单位的pI值。优选地，修饰的BoNT/A或其片段可以具有至少6.6、例如至少6.8的pI。

下表中示出20种标准氨基酸的特性：

以下氨基酸视为带电荷氨基酸：天冬氨酸(负)、谷氨酸(负)、精氨酸(正)和赖氨酸(正)。

在pH 7.4，天冬氨酸(pKa 3.1)和谷氨酸(pKa 4.1)的侧链具有负电荷，而精氨酸(pKa 12.5)和赖氨酸(pKa 10.8)的侧链具有正电荷。天冬氨酸和谷氨酸称作酸性氨基酸残基。精氨酸和赖氨酸称作碱性氨基酸残基。

以下氨基酸视为不带电荷极性(意味着它们可能参与氢键形成)氨基酸：天冬酰胺、谷氨酰胺、组氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸和色氨酸。

以下氨基酸视为不带电荷、疏水性氨基酸：丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸和甘氨酸。

在氨基酸插入情况下，将额外的氨基酸残基(正常情况下不存在的残基)并入BoNT/A多肽序列或其片段中，因此增加所述序列中的氨基酸残基总数。在氨基酸缺失情况下，将氨基酸残基从梭菌毒素氨基酸序列移除，因此减少所述序列中的氨基酸残基总数。

优选地，修饰是在修饰的BoNT/A或其片段中有利地维持相同氨基酸残基数目的置换。在氨基酸置换情况下，将一个形成BoNT/A多肽序列或其片段的部分的氨基酸残基替换为不同的氨基酸残基。替换性氨基酸残基可以是如上文所述的20种标准氨基酸之一。备选地，氨基酸置换中的替换性氨基酸可以是非标准氨基酸(不是上述标准20种氨基酸集合之部分的氨基酸)。例如，替换性氨基酸可以是碱性非标准氨基酸，例如L-鸟氨酸、L-2-氨基-3-胍基丙酸、或赖氨酸、精氨酸和鸟氨酸的D-异构体)。用于向蛋白质引入非标准氨基酸的方法为本领域已知并且包括使用大肠杆菌(E.coli)营养缺陷型表达宿主的重组蛋白合成。

在一个实施方案中，置换选自用碱性氨基酸残基置换酸性氨基酸残基、用不带电荷氨基酸残基置换酸性氨基酸残基和用碱性氨基酸残基置换不带电荷氨基酸残基。在一个实施方案中，在置换是用不带电荷氨基酸残基置换酸性氨基酸残基的情况下，酸性氨基酸残基由其相应的不带电荷酰胺氨基酸残基替换(即天冬氨酸由天冬酰胺替换，并且谷氨酸由谷氨酰胺替换)。

优选地，碱性氨基酸残基是赖氨酸残基或精氨酸残基。也就是说，置换是用赖氨酸或精氨酸置换。最优选地，修饰是用赖氨酸置换。

优选地，用于本发明中的修饰的BoNT/A或其片段包含位于梭菌毒素H_CN结构域介于4与40个之间的氨基酸修饰。所述修饰的BoNT/A或其片段优选地还具有至少6.6的pI。所述修饰的BoNT/A优选地包含至少4个氨基酸的修饰，所述氨基酸选自：ASN 886、ASN 930、ASN954、SER 955、GLN 991、ASN 1025、ASN 1026和ASN 1052，其中所述修饰包括用赖氨酸残基或精氨酸残基置换氨基酸。例如，所述修饰的BoNT/A或其片段可以包含至少5个氨基酸的修饰，所述氨基酸选自：ASN 886、ASN 930、ASN 954、SER 955、GLN 991、ASN 1025、ASN 1026、ASN 1052和GLN 1229，其中所述修饰包括用赖氨酸残基或精氨酸残基置换氨基酸。

通过置换、插入或缺失氨基酸残基修饰蛋白质的方法为本领域已知。例如，可以通过修饰编码多肽(例如编码未修饰的BoNT/A或其片段)的DNA序列引入氨基酸修饰。这可以使用标准分子克隆技术实现，例如通过使用聚合酶进行其中使用编码目的氨基酸的短链DNA(寡核苷酸)替换原始编码序列的定点诱变，通过用各种酶(例如，连接酶和限制性核酸内切酶)插入/缺失基因诸部分。备选地，可以化学合成修饰的基因序列。

在一个实施方案中，根据本发明使用的梭菌神经毒素包含与SEQ ID NO:42具有至少80％、90％、95％或98％序列同一性的多肽序列。优选地，根据本发明使用的梭菌神经毒素包含显示为SEQ ID NO:42的多肽序列。

在一个实施方案中，根据本发明使用的梭菌神经毒素包含多肽序列，所述多肽序列由与SEQ ID NO:41具有至少80％、90％、95％或98％序列同一性的核苷酸序列编码。优选地，根据本发明使用的梭菌神经毒素包含多肽序列，所述多肽序列由显示为SEQ ID NO:41的核苷酸序列编码。

在一个实施方案中，根据本发明使用的梭菌神经毒素(例如包含SEQ ID NO:42或由SEQ ID NO:41编码)可以是与SEQ ID NO:61或65具有至少70％序列同一性的多肽的一部分。因此，在一个实施方案中，根据本发明使用的梭菌神经毒素可以包含与SEQ ID NO:61或65具有至少80％、90％、95％或98％序列同一性的多肽序列。优选地，根据本发明使用的梭菌神经毒素可以包含SEQ ID NO:61或65(更优选地由其组成)。在一个实施方案中，梭菌神经毒素包含(例如根据SEQ ID NO:65的)无催化活性的L链。

在一个实施方案中，根据本发明使用的梭菌神经毒素(例如包含SEQ ID NO:42或由SEQ ID NO:41编码)可以由与SEQ ID NO:60具有至少70％序列同一性的核苷酸序列编码。因此，在一个实施方案中，根据本发明使用的梭菌神经毒素可以由与SEQ ID NO:60具有至少80％、90％、95％或98％序列同一性的核苷酸序列编码。优选地，根据本发明使用的梭菌神经毒素可以由包含SEQ ID NO:60(更优选地由其组成)的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，梭菌神经毒素包含无催化活性的L链。

SEQ ID NO:42是修饰的BoNT/A片段的实例并且SEQ ID NO:61和65分别是有催化活性和无活性的修饰的BoNT/A多肽的实例。这类修饰的BoNT/A多肽和片段特别地优选用于本发明中。与野生型BoNT/A相比时，显示为SEQ ID NO:42、61和65的多肽具有众多增加多肽等电点的氨基酸修饰(例如置换)。不希望受理论约束，认为升高的净正电荷促进多肽与阴离子性胞外组分之间的静电相互作用，因而促进多肽与细胞表面之间的结合，因此增加施用部位处滞留和/或作用持续时间。因此，构思与缺少所述修饰的等同多肽相比，SEQ IDNO:42、61和65的神经免疫应答促进特性将改进。

对于上述有催化活性的修饰的BoNT/A多肽(例如SEQ ID NO:61)，其中可以定义这些有利特性(其代表治疗指数升高)的一个方式可以是就修饰的BoNT/A的安全比率而言。在这个方面，可以在相关动物模型中通过测量体重丢失百分数实验地评估梭菌神经毒素的不利影响(由毒素弥漫离开施用部位造成)(例如小鼠，其中在施用七天以内检测体重丢失)。反过来，可以依据肢体外展评分(DAS)测定法(肌肉麻痹测量)实验地评估梭菌神经毒素的目的中靶效应。可以通过以下方式进行DAS测定法：将20μl配制在明胶磷酸盐缓冲液中的梭菌神经毒素注射入小鼠腓肠肌/比目鱼肌肌群中，随后使用Aoki法评定肢体外展评分(AokiKR,Toxicon 39:1815-1820；2001)。在DAS测定法中，通过尾部使小鼠短暂悬空，以激发其中小鼠伸展开其后肢并且外展其后脚趾的特征性惊跳反应。在注射梭菌神经毒素后，按五分量表(0＝肢端外展和腿伸展正常至4＝肢端外展和腿伸展最大减少)评定不同程度的肢端外展。

梭菌神经毒素的安全比率随后可以表述为体重降低10％(小鼠中施用后头七天以内峰效应时测量)所需的毒素量与DAS评分为2所需的毒素量之间的比率。高度安全比率评分因此为所希望的并且指示能够在少许不利脱靶效应下有效麻痹靶肌肉的毒素。本发明有催化活性的修饰的BoNT/A可以具有比等同未修饰(天然)的肉毒毒素(例如SEQ ID NO:62)的安全比率更高的安全比率。

因此，在一个实施方案中，本发明有催化活性的修饰的BoNT/A具有至少8(例如，至少8、9、10、15、20、25、30、35、40、45或50)的安全比率，其中安全比率计算为：体重变化-10％所需的毒素剂量(pg/小鼠)除以DAS ED₅₀(pg/小鼠)[ED₅₀＝产生DAS评分2所需的剂量]。

在一个实施方案中，本发明有催化活性的修饰的BoNT/A具有至少10的安全比率。在一个实施方案中，本发明的修饰的BoNT/A或其片段具有至少15的安全比率。

WO 2015/004461 A1中描述了包含与SEQ ID NO:61至少70％序列同一性的梭菌神经毒素，所述文献通过引用方式完整并入本文作为参考。

在一个实施方案中，包含与SEQ ID NO:42、61或65具有至少70％序列同一性和/或包含由与SEQ ID NO:41或60具有70％序列同一性的核苷酸序列所编码的多肽序列的梭菌神经毒素在以下一个或多个(优选地两个或更多个、三个或更多个、四个或更多个、五个或更多个或六个或更多个，更优选地在全部)位置处包含置换：930、955、991、1026、1052、1229和886。位置编号对应于SEQ ID NO:62的位置；并且可以通过将多肽序列与SEQ ID NO:62(未修饰/野生型BoNT/A)比对来确定。由于SEQ ID NO:62的位置1处甲硫氨酸残基的存在为任选，故在确定氨基酸残基编号时，本领域普通技术人员将考虑甲硫氨酸残基的存在/不存在。例如，在SEQ ID NO:62包括甲硫氨酸情况下，位置编号将如上文定义(例如位置886将是SEQ ID NO:62的ASN 886)。备选地，在甲硫氨酸在SEQ ID NO:62中不存在的情况下，氨基酸残基编号应当按-1修改(例如为止886将是SEQ ID NO:62的ASN 885)。当本文所述其他多肽序列的位置1处的甲硫氨酸存在/不存在时，相似的注意事项适用，并且本领域普通技术人员将使用本领域常规的技术轻易地确定正确的氨基酸残基编号。

优选地，包含与SEQ ID NO:42、61或65具有至少70％序列同一性和/或包含由与SEQ ID NO:41或60具有至少70％序列同一性的核苷酸序列所编码的多肽序列的梭菌神经毒素在以下一个或多个位置处包含赖氨酸或精氨酸(更优选地赖氨酸)：930、955、991、1026、1052、1229和886。在一个实施方案中，梭菌神经毒素在以下至少两个、三个、四个、五个、六个或全部位置包含赖氨酸或精氨酸(更优选地赖氨酸)：930、955、991、1026、1052、1229和886。最优选地，梭菌神经毒素在以下全部位置包含赖氨酸或精氨酸(更优选地赖氨酸)：930、955、991、1026、1052、1229和886。

与本发明各种治疗性用途有关的实施方案意在同等适用于本发明的治疗方法、多肽，并且反之亦然。

序列同源性

多种序列比对方法的任一种方法可以用来确定同一性百分数，包括而不限于全局法、局部法和杂交法，如，例如，区段逼近法。确定同一性百分数的方案是本领域技术人员范围内的常规方法。全局法从分子的开端至结尾对齐序列并且通过加总独立残基对的评分并且通过赋予空位罚分确定最佳比对。非限制性方法例如包括CLUSTAL W，参见例如JulieD.Thompson等人,CLUSTAL W:Improving the Sensitivity of Progressive MultipleSequence Alignment Through Sequence Weighting,Position-Specific Gap Penaltiesand Weight Matrix Choice(CLUSTAL W：通过序列权重、位置专用空位罚分和权重矩阵选择改进递进多重序列比对的灵敏度),22(22)Nucleic Acids Research 4673-4680(1994)；和迭代细化法，参见例如Osamu Gotoh,Significant Improvement in Accuracy ofMultiple Protein.Sequence Alignments by Iterative Refinement as Assessed byReference to Structural Alignments(通过如依据参考结构比对所评估的迭代细化显著改进多个蛋白质序列比对的准确度),264(4)J.MoI.Biol.823-838(1996)。局部法通过鉴定全部输入序列共有的一个或多个保守基序对齐序列。非限制方法例如包括匹配盒法，参见例如Eric Depiereux和Ernest Feytmans，Match-Box:A Fundamentally New Algorithmfor the Simultaneous Alignment of Several Protein Sequences(匹配盒法：同时比对几个蛋白质序列的全新算法),8(5)CABIOS 501 -509(1992)；Gibbs采样法，参见例如C.E.Lawrence等人,Detecting Subtle Sequence Signals:A Gibbs Sampling Strategyfor Multiple Alignment(检测微弱序列信号：多重比对的Gibbs采样策略),262(5131)Science 208-214(1993)；Align-M法，参见例如Ivo Van WaIIe等人,A New Algorithm forMultiple Alignment of Highly Divergent Sequences(Align-M法-多重比对高度趋异序列的新算法),20(9)Bioinformatics:1428-1435(2004)。

因此，通过常规方法确定序列同一性百分数。参见例如Altschul等人,Bull.Math.Bio.48:603-16,1986以及Henikoff与Henikoff,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:10915-19,1992。简而言之，对齐两个氨基酸序列以使用如下文显示的Henikoff和Henikoff(出处同上)的空位开口罚分10、空位延伸罚分1和“blosum 62”评分矩阵(由标准单字母代码指示氨基酸)，优化比对评分。

两个或更多个核酸序列或氨基酸序列之间的“序列同一性百分数”随序列共有的相同位置的数目变化而变化。因此，同一性％可以计算为相同核苷酸/氨基酸的数目除以核苷酸/氨基酸的总数，乘以100。计算序列同一性％还可以考虑空位数和需要引入以优化两个或更多个序列比对的每个空位的长度。可以使用技术人员将熟悉的专用数学算法如BLAST，实施序列比较和确定两个或更多个序列之间的同一性百分数。

用于确定序列同一性的比对评分

同一性百分数随后计算为：

基本上同源的多肽表征作为具有一个或多个氨基酸置换、缺失或添加。这些变化优选地为细微性质，即，保守性氨基酸置换(参见下文)和未显著影响多肽折叠或活性的其他置换；小缺失(一般一个至约30个氨基酸)；和氨基端或羧基端的小延长，如氨基端甲硫氨酸残基、至多约20-25个残基的小接头肽或亲和标签。

保守性氨基酸置换

碱性：精氨酸

赖氨酸

组氨酸

酸性：谷氨酸

天冬氨酸

极性：谷氨酰胺

天冬酰胺

疏水性：亮氨酸

异亮氨酸

缬氨酸

芳族：苯丙氨酸

色氨酸

酪氨酸小体积：甘氨酸

丙氨酸

丝氨酸

苏氨酸

甲硫氨酸

除20个标准氨基酸之外，可以用非标准氨基酸(如4-羟脯氨酸、6-N-甲基赖氨酸、2-氨基异丁酸、异缬氨酸和α-甲基丝氨酸)置换本发明多肽的氨基酸残基。有限数目的非保守氨基酸、遗传密码不编码的氨基酸和非天然氨基酸可以置换多肽氨基酸残基。本发明的多肽还可以包含非天然存在的氨基酸残基。

非天然存在的氨基酸包括但不限于反-3-甲基脯氨酸、2,4-亚甲基-脯氨酸、顺-4-羟脯氨酸、反-4-羟脯氨酸、N-甲基甘氨酸、别苏氨酸、甲基-苏氨酸、羟-乙基半胱氨酸、羟乙基同型半胱氨酸、硝基-谷氨酰胺、高谷氨酰胺、正缬氨酸、叔-亮氨酸、正缬氨酸、2-氮杂苯丙氨酸、3-氮杂苯丙氨酸、4-氮杂苯丙氨酸和4-氟苯丙氨酸。本领域已知几种向蛋白质并入非天然存在氨基酸残基的方法。例如，可以使用其中用化学氨酰化的阻抑tRNA抑制无义突变的体外系统。本领域已知合成氨基酸和使tRNA氨酰化的方法。在包含大肠杆菌S30提取物和市售酶及其他试剂的无细胞体系中转录并翻译含有无义突变的质粒。通过色谱法纯化蛋白质。参见例如Robertson等人,J.Am.Chem.Soc.113:2722,1991；Ellman等人,MethodsEnzymol.202:301,1991；Chung等人,Science 259:806-9,1993；和Chung等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:10145-9,1993)。在第二方法中，通过在非洲爪蟾卵母细胞中微量注射突变的mRNA和化学氨酰化的阻抑tRNA实施翻译(Turcatti等人,J.Biol.Chem.271:19991-8,1996)。在第三方法范围内，在待置换的天然氨基酸(例如，苯丙氨酸)不存在下和在所需非天然存在的氨基酸(例如，2-氮杂苯丙氨酸、3-氮杂苯丙氨酸、4-氮杂苯丙氨酸或4-氟苯丙氨酸)存在下培养大肠杆菌细胞。将非天然存在的氨基酸并入多肽中替代其天然副本。参见，Koide等人,Biochem.33:7470-6,1994。天然存在的氨基酸残基可以通过体外化学修饰转化成非天然存在的种类。化学修饰可以与定点诱变组合，以进一步拓展置换范围(Wynn和Richards,Protein Sci.2:395-403,1993)。

有限数目的非保守氨基酸、遗传密码不编码的氨基酸、非天然存在的氨基酸和非天然氨基酸可以置换本发明多肽的氨基酸残基。

可以根据本领域已知的方法如定点诱变或丙氨酸-扫描诱变(Cunningham和Wells,Science244:1081-5,1989)，鉴定本发明多肽中的必需氨基酸。也可以通过结构的物理分析确定生物学相互作用部位，如通过这类技术如核磁共振、结晶学、电子衍射或光亲和标记法，结合对推定性接触位点氨基酸突变来确定。参见例如de Vos等人,Science 255:306-12,1992；Smith等人,J.Mol.Biol.224:899-904,1992；Wlodaver等人,FEBS Lett.309:59-64,1992。也可以从分析与本发明多肽的相关组分的同一性推断出必需氨基酸的身份(例如转运组分或蛋白酶组分)。

可以使用已知的诱变和筛选方法，如Reidhaar-Olson和Sauer(Science 241:53-7,1988)或Bowie和Sauer(Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86:2152-6,1989)公开的那些方法，产生并测试多个氨基酸置换。简而言之，这些作者公开了以下方法：使多肽中的两个或更多个位置同时随机化，选择有功能的多肽并且随后对诱变的多肽测序以确定每个位置处容许性置换的光谱。可以使用的其他方法包括噬菌体展示法(例如，Lowman等人,Biochem.30:10832-7,1991；Ladner等人,美国专利号5,223,409；Huse,WIPO公开WO 92/06204)和区域定向诱变法(Derbyshire等人,Gene 46:145,1986；Ner等人,DNA 7:127,1988)。

除非另外定义，本文中所用的全部技术术语和科学术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常所理解的相同意义。Singleton等人,DICTIONARY OF MICROBIOLOGY ANDMOLECULAR BIOLOGY(微生物学和分子生物学字典),第20版,John Wiley and Sons,NewYork(1994)；以及Hale和Marham,THE HARPER COLLINSDICTIONARY OF BIOLOGY(哈珀柯林斯生物学词典),Harper Perennial,NY(1991)为普通技术人员提供本公开中所用诸多术语的通用词典。

本公开不受本文公开的实例性方法和材料限制，并且与本文所述的那些方法和材料相似或等同的任何方法和材料可以用于实施或检验本公开的实施方案。数值范围包括定义该范围的数值。除非另外说明，否则任何核酸序列从左至右以5'至3'方向书写；氨基酸序列从左至由以氨基至羧基方向书写。

本公开中提供的标题不限制所公开的多个方面或实施方案。

本文使用氨基酸名称、三字母缩写或单字母缩写提及氨基酸。如本文所用，术语“蛋白质”包括蛋白质、多肽和肽。如本文所用，术语“氨基酸序列”同义于术语“多肽”和/或术语“蛋白质”。在一些情况下，术语“氨基酸序列”同义于术语“肽”。在一些情况下，术语“氨基酸序列”同义于术语“酶”。术语“蛋白质”和“多肽”在本文中可互换使用。在本公开和权利要求中，可以使用氨基酸残基的常规单字母或三字母代码。氨基酸的3字母代码如遵循IUPACIUB生物化学命名联合委员会(JCBN)那样定义。也可以理解多肽可以由多于一个核苷酸序列编码，原因在于遗传密码子的简并性。

其他术语定义可以在本说明书通篇范围内显而易见。在更详细地描述实例性实施方案之前，应当理解本公开不限于所述的具体实施方案，因为这类实施方案当然可以变动。还应当理解，本文所用的术语的目的仅在于描述具体实施方案，并且不意图是限制性的，因为本公开的范围将仅受所附的权利要求书限定。

在提供一个值范围的情况下，应当理解除非上下文明确说明，否则还具体地披露了这个范围的上限与下限之间的每个中间值至该下限的十分之一单位。本公开范围内涵盖在所述范围内任一所述值或居间值与这个所述范围内任一其他所述值或居间值之间的每个较小范围。这些更小范围的上限和下限可以独立地纳入该范围内或排除在外，并且在两个界限之任一者、二者均不纳入或二者均纳入这些更小范围内时，每个范围也纳入本公开范围内，受所述范围中的任何具体排除的界限约束。在所述的范围包含所述限值中一者或两者情况下，排除这些已纳入限值中任一者或两者的范围也纳入公开。

必须指出，除非上下文另外明确指出，否则如本文中和所附权利要求中所用，单数形式“一个(a)”、“一种(an)”和“该(an)”包括复数称谓。因此，例如，谈及“一种梭菌神经毒素”包括多种这种神经毒素，并且对“该梭菌神经毒素”的提及包括对本领域技术人员已知的一种或多种梭菌神经毒素及其等同物的提及等。

本文讨论的出版物仅因其披露先于本申请的提交日而提供。本文中这些出版物均不得解释为承认这类出版物相对于所附权利要求构成现有技术。

附图简述

现在将参考以下附图和实施例，仅以举例方式描述本发明的实施方案。

图1.A，皮区图解(改编自Beilin,Daniel.“The Physiology of DynamicThermometric Analysis of the Skin in Visceral Health&Disease(内脏健康与疾病中皮肤动态测温分析的生理学).”(2014)-参见其图3)-这里显示映射至不同器官的某些皮区实例，例如，按照B，许多其他映射为已知；及(B)与这些皮区相关的内脏(改编自Wall和McMahon；“Textbook of Pain(疼痛教科书)”(McMahon等人编著；第6版)-参见第53章及其图53-1)。C，皮区和肠区(和肌节)之间关系的图解；本发明通过施用梭菌神经毒素至皮区，从皮区利用逆向运输靶向内脏疼痛统合区域(改编自Beilin,Daniel.“The Physiology ofDynamic Thermometric Analysis of the Skin in Visceral Health&Disease(内脏健康与疾病中皮肤动态测温分析的生理学).”(2014)-参见其图1)。

图2.研究方案设计。

图3.雌性大鼠尾部腹侧视图，显示注射梭菌神经毒素的区域(圆圈)。

图4.在第0天和第6天之间重复的CYP注射(40mg/kg，腹膜内)诱导了内脏疼痛，后者在第7天和第10天受到评估。溶媒组中，CYP注射之前(第0天，“基础”)和之后(第7天和第10天)以g计的伤害感受阈值(Nociceptive threshold)(A)、以％计的伤害感受评分(B)和经计算的在1与6g(C)或6与26g(D)之间的AUC。结果表述为均数±SEM。Friedman检验，依据两个因素的两因素RM ANOVA，或者采用Dunn事后检验、Dunnett事后检验或Holm-Sidak事后检验对比基础的单因素RM ANOVA，^##P<0.01并且^####P<0.0001。溶媒＝盐水，20μL，皮内，n＝10，在第-10天一次。

图5.Dysport(25U/kg，皮内)削弱CYP诱导的慢性痛觉超敏。Dysport组和溶媒组中CYP注射之前(第0天，“基础”)和之后(第7天和第10天)以g计的伤害感受阈值。结果表述为均数±SEM。ns P>0.05和*P<0.05，Mann Whitney检验或非配对t检验。溶媒＝盐水，20μL，皮内，n＝10，在第-10天一次。Dysport＝25U/kg，皮内，n＝10，在第-10天一次。

图6.Dysport(25U/kg，皮内)降低CYP诱导的慢性内脏疼痛(伤害感受评分)。Dysport组和溶媒组中CYP注射之前(第0天，“基础”)(A)和之后；第7天(B)与第10天(C)以％计的伤害感受评分。结果表述为均数±SEM。ns P>0.05和*P<0.05，两因素RM ANOVA。溶媒＝盐水，20μL，皮内，n＝10，在第-10天一次。Dysport＝25U/kg，皮内，n＝10，在第-10天一次。

图7.Dysport(25U/kg，皮内)减少CYP诱导的痛觉超敏(AUC 1-6g)和痛觉过敏(AUC6-26g)。Dysport组和溶媒组中CYP注射之前(第0天，“基础”)和之后(第7天和第10天)，经计算的在1与6g(C)或6与26g(D)之间的AUC。结果表述为均数±SEM。ns P>0.05和*P<0.05，Mann Whitney检验或非配对t检验。溶媒＝盐水，20μL，皮内，n＝10，在第-10天一次。Dysport＝25U/kg，皮内，n＝10，在第-10天一次。

图8.胸脊髓中c-SNAP25 IHC结果。从0-20的IHC评分(5个最强烈染色的切片各自从0-4评分)。盐水处理的动物中未观察到c-SNAP25染色。

图9.腰骶脊髓中c-SNAP25 IHC结果。从0-20的IHC评分(5个最强烈染色的切片各自从0-4评分)。盐水处理的动物中未观察到c-SNAP25染色。

图10.定量整个腰段脊髓(L1至L6)中免疫染色的已切割(a)SNAP-25和(b)酸性蛋白(GFAP)。在腰段脊髓的L3-L4和L5-L6段中，GFAP染色显著减少是明显的，这与背侧角中C-SNAP25水平更高相关。

序列表

在以下任一SEQ ID NO中指示初始Met氨基酸残基或指示相应的初始密码子，所述残基/密码子是任选的。

SEQ ID NO:1-重组无催化活性BoNT/A(rBoNT/A(0))的核苷酸序列

SEQ ID NO:2-rBoNT/A(0)的多肽序列

SEQ ID NO:3-rLH_N/A的核苷酸序列(仅轻链加转运结构域)。

SEQ ID NO:4-rLH_N/A的多肽序列

SEQ ID NO:5-rL/A的核苷酸序列(仅轻链)

SEQ ID NO:6-rL/A的多肽序列

SEQ ID NO:7-rH_C/A的核苷酸序列

SEQ ID NO:8-rH_C/A的多肽序列

SEQ ID NO:9-rBoNT/B(0)的核苷酸序列

SEQ ID NO:10-rBoNT/B(0)的多肽序列

SEQ ID NO:11-rBoNT/C(0)的核苷酸序列

SEQ ID NO:12-rBoNT/C(0)的多肽序列

SEQ ID NO:13-rBoNT/E(0)的核苷酸序列

SEQ ID NO:14-rBoNT/E(0)的多肽序列

SEQ ID NO:15-rBoNT/F(0)的核苷酸序列

SEQ ID NO:16-rBoNT/F(0)的多肽序列

SEQ ID NO:17-rBoNT/A(0)(加His标签)的核苷酸序列

SEQ ID NO:18-rBoNT/A(0)(加His标签)的多肽序列

SEQ ID NO:19-rLH_N/A(加His标签)的核苷酸序列

SEQ ID NO:20-rLH_N/A(加His标签)的多肽序列

SEQ ID NO:21-rH_C/A(加His标签)的核苷酸序列

SEQ ID NO:22-rH_C/A(加His标签)的多肽序列

SEQ ID NO:23-rLC/A(加His标签)的核苷酸序列

SEQ ID NO:24-rLC/A(加His标签)的多肽序列

SEQ ID NO:25-rBoNT/FA(0)(加His标签)的核苷酸序列

SEQ ID NO:26-rBoNT/FA(0)(加His标签)的多肽序列

SEQ ID NO:27-rLH_N/FA(加His标签)的核苷酸序列

SEQ ID NO:28-rLH_N/FA(加His标签)的多肽序列

SEQ ID NO:29-rH_C/FA(加His标签)的核苷酸序列

SEQ ID NO:30-rH_C/FA(加His标签)的多肽序列

SEQ ID NO:31-rLC/FA(加His标签)的核苷酸序列

SEQ ID NO:32-的多肽序列rLC/FA(加His标签)

SEQ ID NO:33-rBoNT/F(0)(加His标签)的核苷酸序列

SEQ ID NO:34-rBoNT/F(0)(加His标签)的多肽序列

SEQ ID NO:35-rL_HN/F(加His标签)的核苷酸序列

SEQ ID NO:36-rL_HN/F(加His标签)的多肽序列

SEQ ID NO:37-rH_C/F(加His标签)的核苷酸序列

SEQ ID NO:38-rH_C/F(加His标签)的多肽序列

SEQ ID NO:39-rLC/F(加His标签)的核苷酸序列

SEQ ID NO:40-rLC/F(加His标签)的多肽序列

SEQ ID NO:41-阳离子性rH_C/A(加His标签)的核苷酸序列

SEQ ID NO:42-阳离子性rH_C/A(加His标签)的多肽序列

SEQ ID NO:43-rH_C/AB(加His标签)的核苷酸序列

SEQ ID NO:44-rH_C/AB(加His标签)的多肽序列

SEQ ID NO:45-rH_C/A变体Y1117V H1253K(加His标签)的核苷酸序列

SEQ ID NO:46-rH_C/A变体Y1117V H1253K(加His标签)的多肽序列

SEQ ID NO:47-rH_C/A变体Y1117V F1252Y H1253K L1278F(加His标签)的核苷酸序列SEQ ID NO:48-rH_C/A变体Y1117V F1252Y H1253K L1278F(加His标签)的多肽序列SEQID NO:49-rH_C/A变体Y1117V F1252Y H1253K L1278H(加His标签)的核苷酸序列SEQ IDNO:50-rH_C/A变体Y1117V F1252Y H1253K L1278H(加His标签)的多肽序列SEQ ID NO:51-BoNT/A的多肽序列-UniProt P10845

SEQ ID NO:52-BoNT/B的多肽序列-UniProt P10844

SEQ ID NO:53-BoNT/C的多肽序列-UniProt P18640

SEQ ID NO:54-BoNT/D的多肽序列-UniProt P19321

SEQ ID NO:55-BoNT/E的多肽序列-UniProt Q00496

SEQ ID NO:56-BoNT/F的多肽序列-UniProt A7GBG3

SEQ ID NO:57-BoNT/G的多肽序列-UniProt Q60393

SEQ ID NO:58-TeNT的多肽序列-UniProt P04958

SEQ ID NO:59-BoNT/X的多肽序列

SEQ ID NO:60-mrBoNT/A的核苷酸序列

SEQ ID NO:61-mrBoNT/A的多肽序列

SEQ ID NO:62-未修饰的BoNT/A1的多肽序列

SEQ ID NO:63-mrBoNT/AB的多肽序列

SEQ ID NO:64-mrBoNT/AB(0)的多肽序列

SEQ ID NO:65-mrBoNT/A(0)的多肽序列

SEQ ID NO:1 -rBoNT/A(0)的核苷酸序列

ATGCCATTCGTCAACAAGCAATTCAACTACAAAGACCCAGTCAACGGCGTCGACATCGCATACATC

AAGATTCCGAACGCCGGTCAAATGCAGCCGGTTAAGGCTTTTAAGATCCACAACAAGATTTGGGTT

ATCCCGGAGCGTGACACCTTCACGAACCCGGAAGAAGGCGATCTGAACCCGCCACCGGAAGCGAA

GCAAGTCCCTGTCAGCTACTACGATTCGACGTACCTGAGCACGGATAACGAAAAAGATAACTACCT

GAAAGGTGTGACCAAGCTGTTCGAACGTATCTACAGCACGGATCTGGGTCGCATGCTGCTGACTAG

CATTGTTCGCGGTATCCCGTTCTGGGGTGGTAGCACGATTGACACCGAACTGAAGGTTATCGACAC

TAACTGCATTAACGTTATTCAACCGGATGGTAGCTATCGTAGCGAAGAGCTGAATCTGGTCATCAT

TGGCCCGAGCGCAGACATTATCCAATTCGAGTGCAAGAGCTTTGGTCACGAGGTTCTGAATCTGAC

CCGCAATGGCTATGGTAGCACCCAGTACATTCGTTTTTCGCCGGATTTTACCTTCGGCTTTGAAGAG

AGCCTGGAGGTTGATACCAATCCGTTGCTGGGTGCGGGCAAATTCGCTACCGATCCGGCTGTCACG

CTGGCCCATcAACTGATCtACGCAGGCCACCGCCTGTACGGCATTGCCATCAACCCAAACCGTGTGT

TCAAGGTTAATACGAATGCATACTACGAGATGAGCGGCCTGGAAGTCAGCTTCGAAGAACTGCGC

ACCTTCGGTGGCCATGACGCTAAATTCATTGACAGCTTGCAAGAGAATGAGTTCCGTCTGTACTAC

TATAACAAATTCAAAGACATTGCAAGCACGTTGAACAAGGCCAAAAGCATCGTTGGTACTACCGC

GTCGTTGCAGTATATGAAGAATGTGTTTAAAGAGAAGTACCTGCTGTCCGAGGATACCTCCGGCAA

GTTTAGCGTTGATAAGCTGAAGTTTGACAAACTGTACAAGATGCTGACCGAGATTTACACCGAGGA

CAACTTTGTGAAATTCTTCAAAGTGTTGAATCGTAAAACCTATCTGAATTTTGACAAAGCGGTTTTC

AAGATTAACATCGTGCCGAAGGTGAACTACACCATCTATGACGGTTTTAACCTGCGTAACACCAAC

CTGGCGGCGAACTTTAACGGTCAGAATACGGAAATCAACAACATGAATTTCACGAAGTTGAAGAA

CTTCACGGGTCTGTTCGAGTTCTATAAGCTGCTGTGCGTGCGCGGTATCATCACCAGCAAAACCAA

AAGCCTGGACAAAGGCTACAACAAGGCGCTGAATGACCTGTGCATTAAGGTAAACAATTGGGATC

TGTTCTTTTCGCCATCCGAAGATAATTTTACCAACGACCTGAACAAGGGTGAAGAAATCACCAGCG

ATACGAATATTGAAGCAGCGGAAGAGAATATCAGCCTGGATCTGATCCAGCAGTACTATCTGACCT

TTAACTTCGACAATGAACCGGAGAACATTAGCATTGAGAATCTGAGCAGCGACATTATCGGTCAGC

TGGAACTGATGCCGAATATCGAACGTTTCCCGAACGGCAAAAAGTACGAGCTGGACAAGTACACT

ATGTTCCATTACCTGCGTGCACAGGAGTTTGAACACGGTAAAAGCCGTATCGCGCTGACCAACAGC

GTTAACGAGGCCCTGCTGAACCCGAGCCGTGTCTATACCTTCTTCAGCAGCGACTATGTTAAGAAA

GTGAACAAAGCCACTGAGGCCGCGATGTTCCTGGGCTGGGTGGAACAGCTGGTATATGACTTCACG

GACGAGACGAGCGAAGTGAGCACTACCGACAAAATTGCTGATATTACCATCATTATCCCGTATATT

GGTCCGGCACTGAACATTGGCAACATGCTGTACAAAGACGATTTTGTGGGTGCCCTGATCTTCTCC

GGTGCCGTGATTCTGCTGGAGTTCATTCCGGAGATTGCGATCCCGGTGTTGGGTACCTTCGCGCTGG

TGTCCTACATCGCGAATAAGGTTCTGACGGTTCAGACCATCGATAACGCGCTGTCGAAACGTAATG

AAAAATGGGACGAGGTTTACAAATACATTGTTACGAATTGGCTGGCGAAAGTCAATACCCAGATC

GACCTGATCCGTAAGAAAATGAAAGAGGCGCTGGAGAATCAGGCGGAGGCCACCAAAGCAATTAT

CAACTACCAATACAACCAGTACACGGAAGAAGAGAAGAATAACATTAACTTCAATATCGATGATT

TGAGCAGCAAGCTGAATGAATCTATCAACAAAGCGATGATCAATATCAACAAGTTTTTGAATCAGT

GTAGCGTTTCGTACCTGATGAATAGCATGATTCCGTATGGCGTCAAACGTCTGGAGGACTTCGACG

CCAGCCTGAAAGATGCGTTGCTGAAATACATTTACGACAATCGTGGTACGCTGATTGGCCAAGTTG

ACCGCTTGAAAGACAAAGTTAACAATACCCTGAGCACCGACATCCCATTTCAACTGAGCAAGTATG

TTGATAATCAACGTCTGTTGAGCACTTTCACCGAGTATATCAAAAACATCATCAATACTAGCATTCT

GAACCTGCGTTACGAGAGCAATCATCTGATTGATCTGAGCCGTTATGCAAGCAAGATCAACATCGG

TAGCAAGGTCAATTTTGACCCGATCGATAAGAACCAGATCCAGCTGTTTAATCTGGAATCGAGCAA

AATTGAGGTTATCCTGAAAAACGCCATTGTCTACAACTCCATGTACGAGAATTTCTCCACCAGCTTC

TGGATTCGCATCCCGAAATACTTCAACAGCATTAGCCTGAACAACGAGTATACTATCATCAACTGT

ATGGAGAACAACAGCGGTTGGAAGGTGTCTCTGAACTATGGTGAGATCATTTGGACCTTGCAGGAC

ACCCAAGAGATCAAGCAGCGCGTCGTGTTCAAGTACTCTCAAATGATCAACATTTCCGATTACATT

AATCGTTGGATCTTCGTGACCATTACGAATAACCGTCTGAATAACAGCAAGATTTACATCAATGGT

CGCTTGATCGATCAGAAACCGATTAGCAACCTGGGTAATATCCACGCAAGCAACAACATTATGTTC

AAATTGGACGGTTGCCGCGATACCCATCGTTATATCTGGATCAAGTATTTCAACCTGTTTGATAAAG

AACTGAATGAGAAGGAGATCAAAGATTTGTATGACAACCAATCTAACAGCGGCATTTTGAAGGAC

TTCTGGGGCGATTATCTGCAATACGATAAGCCGTACTATATGCTGAACCTGTATGATCCGAACAAA

TATGTGGATGTCAATAATGTGGGTATTCGTGGTTACATGTATTTGAAGGGTCCGCGTGGCAGCGTT

ATGACGACCAACATTTACCTGAACTCTAGCCTGTACCGTGGTACGAAATTCATCATTAAGAAATAT

GCCAGCGGCAACAAAGATAACATTGTGCGTAATAACGATCGTGTCTACATCAACGTGGTCGTGAAG

AATAAAGAGTACCGTCTGGCGACCAACGCTTCGCAGGCGGGTGTTGAGAAAATTCTGAGCGCGTTG

GAGATCCCTGATGTCGGTAATCTGAGCCAAGTCGTGGTTATGAAGAGCAAGAACGACCAGGGTAT

CACTAACAAGTGCAAGATGAACCTGCAAGACAACAATGGTAACGACATCGGCTTTATTGGTTTCCA

CCAGTTCAACAATATTGCTAAACTGGTAGCGAGCAATTGGTACAATCGTCAGATTGAGCGCAGCAG

CCGTACTTTGGGCTGTAGCTGGGAGTTTATCCCGGTCGATGATGGTTGGGGCGAACGTCCGCTG

SEQ ID NO:2 - rBoNT/A(0)的多肽序列

MPFVNKQFNYKDPVNGVDIAYIKIPNAGQMQPVKAFKIHNKIWVIPERDTFTNPEEGDLNPPPEAKQVP

VSYYDSTYLSTDNEKDNYLKGVTKLFERIYSTDLGRMLLTSIVRGIPFWGGSTIDTELKVIDTNCINVIQP

DGSYRSEELNLVIIGPSADIIQFECKSFGHEVLNLTRNGYGSTQYIRFSPDFTFGFEESLEVDTNPLLGAGK

FATDPAVTLAHQLIYAGHRLYGIAINPNRVFKVNTNAYYEMSGLEVSFEELRTFGGHDAKFIDSLQENE

FRLYYYNKFKDIASTLNKAKSIVGTTASLQYMKNVFKEKYLLSEDTSGKFSVDKLKFDKLYKMLTEIYT

EDNFVKFFKVLNRKTYLNFDKAVFKINIVPKVNYTIYDGFNLRNTNLAANFNGQNTEINNMNFTKLKNF

TGLFEFYKLLCVRGIITSKTKSLDKGYNKALNDLCIKVNNWDLFFSPSEDNFTNDLNKGEEITSDTNIEA

AEENISLDLIQQYYLTFNFDNEPENISIENLSSDIIGQLELMPNIERFPNGKKYELDKYTMFHYLRAQEFEH

GKSRIALTNSVNEALLNPSRVYTFFSSDYVKKVNKATEAAMFLGWVEQLVYDFTDETSEVSTTDKIADI

TIIIPYIGPALNIGNMLYKDDFVGALIFSGAVILLEFIPEIAIPVLGTFALVSYIANKVLTVQTIDNALSKRNE

KWDEVYKYIVTNWLAKVNTQIDLIRKKMKEALENQAEATKAIINYQYNQYTEEEKNNINFNIDDLSSK

LNESINKAMININKFLNQCSVSYLMNSMIPYGVKRLEDFDASLKDALLKYIYDNRGTLIGQVDRLKDKV

NNTLSTDIPFQLSKYVDNQRLLSTFTEYIKNIINTSILNLRYESNHLIDLSRYASKINIGSKVNFDPIDKNQI

QLFNLESSKIEVILKNAIVYNSMYENFSTSFWIRIPKYFNSISLNNEYTIINCMENNSGWKVSLNYGEIIWT

LQDTQEIKQRVVFKYSQMINISDYINRWIFVTITNNRLNNSKIYINGRLIDQKPISNLGNIHASNNIMFKLD

GCRDTHRYIWIKYFNLFDKELNEKEIKDLYDNQSNSGILKDFWGDYLQYDKPYYMLNLYDPNKYVDV

NNVGIRGYMYLKGPRGSVMTTNIYLNSSLYRGTKFIIKKYASGNKDNIVRNNDRVYINVVVKNKEYRL

ATNASQAGVEKILSALEIPDVGNLSQVVVMKSKNDQGITNKCKMNLQDNNGNDIGFIGFHQFNNIAKL

VASNWYNRQIERSSRTLGCSWEFIPVDDGWGERPL

SEQ IDNO:3 -rLH_N/A的核苷酸序列

atggagttcgttaacaaacagttcaactataaagacccagttaacggtgttgacattgcttacatcaaaatcccgaacgctggccagatgcagccggtaaaggcattc

aaaatccacaacaaaatctgggttatcccggaacgtgatacctttactaacccggaagaaggtgacctgaacccgccaccggaagcgaaacaggtgccggtatctt

actatgactccacctacctgtctaccgataacgaaaaggacaactacctgaaaggtgttactaaactgttcgagcgtatttactccaccgacctgggccgtatgctgct

gactagcatcgttcgcggtatcccgttctggggcggttctaccatcgataccgaactgaaagtaatcgacactaactgcatcaacgttattcagccggacggttcctat

cgttccgaagaactgaacctggtgatcatcggcccgtctgctgatatcatccagttcgagtgtaagagctttggtcacgaagttctgaacctcacccgtaacggctac

ggttccactcagtacatccgtttctctccggacttcaccttcggttttgaagaatccctggaagtagacacgaacccactgctgggcgctggtaaattcgcaactgatc

ctgcggttaccctggctcacgaactgattcatgcaggccaccgcctgtacggtatcgccatcaatccgaaccgtgtcttcaaagttaacaccaacgcgtattacgaga

tgtccggtctggaagttagcttcgaagaactgcgtacttttggcggtcacgacgctaaattcatcgactctctgcaagaaaacgagttccgtctgtactactataacaag

ttcaaagatatcgcatccaccctgaacaaagcgaaatccatcgtgggtaccactgcttctctccagtacatgaagaacgtttttaaagaaaaatacctgctcagcgaag

acacctccggcaaattctctgtagacaagttgaaattcgataaactttacaaaatgctgactgaaatttacaccgaagacaacttcgttaagttctttaaagttctgaaccg

caaaacctatctgaacttcgacaaggcagtattcaaaatcaacatcgtgccgaaagttaactacactatctacgatggtttcaacctgcgtaacaccaacctggctgct

aattttaacggccagaacacggaaatcaacaacatgaacttcacaaaactgaaaaacttcactggtctgttcgagttttacaagctgctgtgcGTCGACGGCA

TCATTACCTCCAAAACTAAATCTGACGATGACGATAAAAACAAAGCGCTGAACCTGCAGtgtatcaaggtt

aacaactgggatttattcttcagcccgagtgaagacaacttcaccaacgacctgaacaaaggtgaagaaatcacctcagatactaacatcgaagcagccgaagaaa

acatctcgctggacctgatccagcagtactacctgacctttaatttcgacaacgagccggaaaacatttctatcgaaaacctgagctctgatatcatcggccagctgga

actgatgccgaacatcgaacgtttcccaaacggtaaaaagtacgagctggacaaatataccatgttccactacctgcgcgcgcaggaatttgaacacggcaaatcc

cgtatcgcactgactaactccgttaacgaagctctgctcaacccgtcccgtgtatacaccttcttctctagcgactacgtgaaaaaggtcaacaaagcgactgaagct

gcaatgttcttgggttgggttgaacagcttgtttatgattttaccgacgagacgtccgaagtatctactaccgacaaaattgcggatatcactatcatcatcccgtacatc

ggtccggctctgaacattggcaacatgctgtacaaagacgacttcgttggcgcactgatcttctccggtgcggtgatcctgctggagttcatcccggaaatcgccatc

ccggtactgggcacctttgctctggtttcttacattgcaaacaaggttctgactgtacaaaccatcgacaacgcgctgagcaaacgtaacgaaaaatgggatgaagttt

acaaatatatcgtgaccaactggctggctaaggttaatactcagatcgacctcatccgcaaaaaaatgaaagaagcactggaaaaccaggcggaagctaccaagg

caatcattaactaccagtacaaccagtacaccgaggaagaaaaaaacaacatcaacttcaacatcgacgatctgtcctctaaactgaacgaatccatcaacaaagct

atgatcaacatcaacaagttcctgaaccagtgctctgtaagctatctgatgaactccatgatcccgtacggtgttaaacgtctggaggacttcgatgcgtctctgaaag

acgccctgctgaaatacatttacgacaaccgtggcactctgatcggtcaggttgatcgtctgaaggacaaagtgaacaataccttatcgaccgacatcccttttcagct

cagtaaatatgtcgataaccaacgccttttgtccactctagaagcaCACCATCATCACcaccatcaccatcaccat

SEQ ID NO:4 -rLH_N/A的多肽序列

MEFVNKQFNYKDPVNGVDIAYIKIPNAGQMQPVKAFKIHNKIWVIPERDTFTNPEEGDLNPPPEAKQVP

VSYYDSTYLSTDNEKDNYLKGVTKLFERIYSTDLGRMLLTSIVRGIPFWGGSTIDTELKVIDTNCINVIQP

DGSYRSEELNLVIIGPSADIIQFECKSFGHEVLNLTRNGYGSTQYIRFSPDFTFGFEESLEVDTNPLLGAGK

FATDPAVTLAHELIHAGHRLYGIAINPNRVFKVNTNAYYEMSGLEVSFEELRTFGGHDAKFIDSLQENEF

RLYYYNKFKDIASTLNKAKSIVGTTASLQYMKNVFKEKYLLSEDTSGKFSVDKLKFDKLYKMLTEIYTE

DNFVKFFKVLNRKTYLNFDKAVFKINIVPKVNYTIYDGFNLRNTNLAANFNGQNTEINNMNFTKLKNFT

GLFEFYKLLCVDGIITSKTKSDDDDKNKALNLQCIKVNNWDLFFSPSEDNFTNDLNKGEEITSDTNIEAA

EENISLDLIQQYYLTFNFDNEPENISIENLSSDIIGQLELMPNIERFPNGKKYELDKYTMFHYLRAQEFEHG

KSRIALTNSVNEALLNPSRVYTFFSSDYVKKVNKATEAAMFLGWVEQLVYDFTDETSEVSTTDKIADITI

IIPYIGPALNIGNMLYKDDFVGALIFSGAVILLEFIPEIAIPVLGTFALVSYIANKVLTVQTIDNALSKRNEK

WDEVYKYIVTNWLAKVNTQIDLIRKKMKEALENQAEATKAIINYQYNQYTEEEKNNINFNIDDLSSKL

NESINKAMININKFLNQCSVSYLMNSMIPYGVKRLEDFDASLKDALLKYIYDNRGTLIGQVDRLKDKVN

NTLSTDIPFQLSKYVDNQRLLSTLEAHHHHHHHHHH

SEQID NO:5-rL/A的核苷酸序列

ATGCCATTCGTCAACAAGCAATTCAACTACAAAGACCCAGTCAACGGCGTCGACATCGCATACATC

AAGATTCCGAACGCCGGTCAAATGCAGCCGGTTAAGGCTTTTAAGATCCACAACAAGATTTGGGTT

ATCCCGGAGCGTGACACCTTCACGAACCCGGAAGAAGGCGATCTGAACCCGCCACCGGAAGCGAA

GCAAGTCCCTGTCAGCTACTACGATTCGACGTACCTGAGCACGGATAACGAAAAAGATAACTACCT

GAAAGGTGTGACCAAGCTGTTCGAACGTATCTACAGCACGGATCTGGGTCGCATGCTGCTGACTAG

CATTGTTCGCGGTATCCCGTTCTGGGGTGGTAGCACGATTGACACCGAACTGAAGGTTATCGACAC

TAACTGCATTAACGTTATTCAACCGGATGGTAGCTATCGTAGCGAAGAGCTGAATCTGGTCATCAT

TGGCCCGAGCGCAGACATTATCCAATTCGAGTGCAAGAGCTTTGGTCACGAGGTTCTGAATCTGAC

CCGCAATGGCTATGGTAGCACCCAGTACATTCGTTTTTCGCCGGATTTTACCTTCGGCTTTGAAGAG

AGCCTGGAGGTTGATACCAATCCGTTGCTGGGTGCGGGCAAATTCGCTACCGATCCGGCTGTCACG

CTGGCCCATGAACTGATCCACGCAGGCCACCGCCTGTACGGCATTGCCATCAACCCAAACCGTGTG

TTCAAGGTTAATACGAATGCATACTACGAGATGAGCGGCCTGGAAGTCAGCTTCGAAGAACTGCGC

ACCTTCGGTGGCCATGACGCTAAATTCATTGACAGCTTGCAAGAGAATGAGTTCCGTCTGTACTAC

TATAACAAATTCAAAGACATTGCAAGCACGTTGAACAAGGCCAAAAGCATCGTTGGTACTACCGC

GTCGTTGCAGTATATGAAGAATGTGTTTAAAGAGAAGTACCTGCTGTCCGAGGATACCTCCGGCAA

GTTTAGCGTTGATAAGCTGAAGTTTGACAAACTGTACAAGATGCTGACCGAGATTTACACCGAGGA

CAACTTTGTGAAATTCTTCAAAGTGTTGAATCGTAAAACCTATCTGAATTTTGACAAAGCGGTTTTC

AAGATTAACATCGTGCCGAAGGTGAACTACACCATCTATGACGGTTTTAACCTGCGTAACACCAAC

CTGGCGGCGAACTTTAACGGTCAGAATACGGAAATCAACAACATGAATTTCACGAAGTTGAAGAA

CTTCACGGGTCTGTTCGAGTTCTATAAGCTGCTGggtctagaagcaCACCATCATCACcaccatcaccatcaccat

SEQ ID NO: 6 - rL/A的多肽序列

MPFVNKQFNYKDPVNGVDIAYIKIPNAGQMQPVKAFKIHNKIWVIPERDTFTNPEEGDLNPPPEAKQVP

VSYYDSTYLSTDNEKDNYLKGVTKLFERIYSTDLGRMLLTSIVRGIPFWGGSTIDTELKVIDTNCINVIQP

DGSYRSEELNLVIIGPSADIIQFECKSFGHEVLNLTRNGYGSTQYIRFSPDFTFGFEESLEVDTNPLLGAGK

FATDPAVTLAHELIHAGHRLYGIAINPNRVFKVNTNAYYEMSGLEVSFEELRTFGGHDAKFIDSLQENEF

RLYYYNKFKDIASTLNKAKSIVGTTASLQYMKNVFKEKYLLSEDTSGKFSVDKLKFDKLYKMLTEIYTE

DNFVKFFKVLNRKTYLNFDKAVFKINIVPKVNYTIYDGFNLRNTNLAANFNGQNTEINNMNFTKLKNFT

GLFEFYKLLGLEAHHHHHHHHHH

SEQ ID NO: 7 - rH_C/A的核苷酸序列

ATGCATCATCACCATCACCACAAAAACATCATCAATACTAGCATTCTGAACCTGCGTTACGAGAGC

AATCATCTGATTGATCTGAGCCGTTATGCAAGCAAGATCAACATCGGTAGCAAGGTCAATTTTGAC

CCGATCGATAAGAACCAGATCCAGCTGTTTAATCTGGAATCGAGCAAAATTGAGGTTATCCTGAAA

AACGCCATTGTCTACAACTCCATGTACGAGAATTTCTCCACCAGCTTCTGGATTCGCATCCCGAAAT

ACTTCAACAGCATTAGCCTGAACAACGAGTATACTATCATCAACTGTATGGAGAACAACAGCGGTT

GGAAGGTGTCTCTGAACTATGGTGAGATCATTTGGACCTTGCAGGACACCCAAGAGATCAAGCAGC

GCGTCGTGTTCAAGTACTCTCAAATGATCAACATTTCCGATTACATTAATCGTTGGATCTTCGTGAC

CATTACGAATAACCGTCTGAATAACAGCAAGATTTACATCAATGGTCGCTTGATCGATCAGAAACC

GATTAGCAACCTGGGTAATATCCACGCAAGCAACAACATTATGTTCAAATTGGACGGTTGCCGCGA

TACCCATCGTTATATCTGGATCAAGTATTTCAACCTGTTTGATAAAGAACTGAATGAGAAGGAGAT

CAAAGATTTGTATGACAACCAATCTAACAGCGGCATTTTGAAGGACTTCTGGGGCGATTATCTGCA

ATACGATAAGCCGTACTATATGCTGAACCTGTATGATCCGAACAAATATGTGGATGTCAATAATGT

GGGTATTCGTGGTTACATGTATTTGAAGGGTCCGCGTGGCAGCGTTATGACGACCAACATTTACCT

GAACTCTAGCCTGTACCGTGGTACGAAATTCATCATTAAGAAATATGCCAGCGGCAACAAAGATAA

CATTGTGCGTAATAACGATCGTGTCTACATCAACGTGGTCGTGAAGAATAAAGAGTACCGTCTGGC

GACCAACGCTTCGCAGGCGGGTGTTGAGAAAATTCTGAGCGCGTTGGAGATCCCTGATGTCGGTAA

TCTGAGCCAAGTCGTGGTTATGAAGAGCAAGAACGACCAGGGTATCACTAACAAGTGCAAGATGA

ACCTGCAAGACAACAATGGTAACGACATCGGCTTTATTGGTTTCCACCAGTTCAACAATATTGCTA

AACTGGTAGCGAGCAATTGGTACAATCGTCAGATTGAGCGCAGCAGCCGTACTTTGGGCTGTAGCT

GGGAGTTTATCCCGGTCGATGATGGTTGGGGCGAACGTCCGCTG

SEQ ID NO: 8 -rH_C/A的多肽序列

MHHHHHHKNIINTSILNLRYESNHLIDLSRYASKINIGSKVNFDPIDKNQIQLFNLESSKIEVILKNAIVYN

SMYENFSTSFWIRIPKYFNSISLNNEYTIINCMENNSGWKVSLNYGEIIWTLQDTQEIKQRVVFKYSQMIN

ISDYINRWIFVTITNNRLNNSKIYINGRLIDQKPISNLGNIHASNNIMFKLDGCRDTHRYIWIKYFNLFDKE

LNEKEIKDLYDNQSNSGILKDFWGDYLQYDKPYYMLNLYDPNKYVDVNNVGIRGYMYLKGPRGSVM

TTNIYLNSSLYRGTKFIIKKYASGNKDNIVRNNDRVYINVVVKNKEYRLATNASQAGVEKILSALEIPDV

GNLSQVVVMKSKNDQGITNKCKMNLQDNNGNDIGFIGFHQFNNIAKLVASNWYNRQIERSSRTLGCS

WEFIPVDDGWGERPL

SEQ ID NO: 9 -rBoNT/B(0)的核苷酸序列

ATGCCGGTGACGATTAACAACTTCAACTACAACGACCCGATTGACAACAACAACATTATCATGATG

GAACCGCCGTTTGCACGCGGCACGGGCCGTTATTACAAAGCGTTTAAAATCACCGATCGTATTTGG

ATTATCCCGGAACGCTACACGTTTGGTTATAAACCGGAAGACTTCAACAAAAGCTCTGGCATCTTC

AACCGTGATGTTTGCGAATACTACGATCCGGACTACCTGAACACCAACGATAAGAAAAACATTTTT

CTGCAAACGATGATCAAACTGTTCAATCGCATTAAAAGCAAACCGCTGGGTGAAAAACTGCTGGA

AATGATTATCAATGGCATTCCGTATCTGGGTGATCGTCGCGTGCCGCTGGAAGAATTTAACACCAA

TATCGCGAGTGTTACGGTCAACAAACTGATTTCCAATCCGGGTGAAGTCGAACGTAAAAAAGGCAT

CTTCGCCAACCTGATCATCTTCGGCCCGGGTCCGGTGCTGAACGAAAATGAAACCATTGATATCGG

TATTCAGAACCATTTTGCCTCACGCGAAGGCTTCGGCGGTATTATGCAAATGAAATTTTGCCCGGA

ATATGTGTCGGTTTTCAACAATGTTCAGGAAAACAAAGGTGCAAGCATCTTTAATCGTCGCGGCTA

TTTCTCTGATCCGGCTCTGATCCTGATGCACcAACTGATTtATGTGCTGCACGGCCTGTATGGTATCA

AAGTGGATGACCTGCCGATCGTTCCGAACGAGAAAAAATTTTTCATGCAGAGCACCGACGCAATTC

AAGCTGAAGAACTGTATACGTTTGGCGGTCAGGACCCGTCTATTATCACCCCGAGCACCGACAAAA

GCATCTACGATAAAGTGCTGCAAAACTTTCGTGGCATTGTTGACCGCCTGAATAAAGTCCTGGTGT

GTATCTCTGATCCGAACATCAACATCAACATCTACAAAAACAAATTCAAAGACAAATACAAATTCG

TTGAAGATTCTGAAGGCAAATATAGTATTGACGTCGAATCCTTTGATAAACTGTACAAAAGTCTGA

TGTTCGGTTTCACCGAAACGAACATCGCGGAAAACTACAAAATCAAAACCCGCGCCTCCTATTTCA

GCGACTCTCTGCCGCCGGTTAAAATCAAAAATCTGCTGGATAACGAAATTTATACGATCGAAGAAG

GTTTCAACATCAGCGATAAAGACATGGAAAAAGAATACCGTGGCCAGAATAAAGCAATCAACAAA

CAGGCGTATGAAGAAATTAGTAAAGAACATCTGGCGGTCTACAAAATTCAGATGTGCAAATCCGT

GAAAGCCCCGGGTATTTGTATCGATGTTGACAATGAAGACCTGTTTTTCATCGCCGATAAAAACAG

TTTTTCCGATGACCTGTCAAAAAATGAACGCATCGAATACAACACCCAATCGAACTACATCGAAAA

CGATTTCCCGATCAACGAACTGATTCTGGATACGGACCTGATTAGTAAAATCGAACTGCCGTCAGA

AAACACCGAATCGCTGACGGACTTTAATGTTGATGTCCCGGTGTATGAAAAACAGCCGGCAATTAA

GAAAATTTTTACCGATGAAAACACGATCTTCCAGTACCTGTACAGCCAAACCTTTCCGCTGGACAT

TCGCGATATCTCTCTGACGAGTTCCTTTGATGACGCACTGCTGTTCAGCAACAAAGTGTACTCCTTT

TTCTCAATGGATTACATCAAAACCGCTAACAAAGTGGTTGAAGCGGGCCTGTTTGCCGGTTGGGTG

AAACAGATCGTTAACGATTTCGTCATCGAAGCCAACAAAAGTAACACGATGGATAAAATTGCTGAT

ATCTCCCTGATTGTCCCGTATATTGGCCTGGCACTGAATGTGGGTAACGAAACGGCGAAAGGCAAT

TTTGAAAACGCCTTCGAAATTGCAGGCGCTTCAATCCTGCTGGAATTTATTCCGGAACTGCTGATCC

CGGTCGTGGGTGCGTTCCTGCTGGAATCTTACATCGACAACAAAAACAAAATCATCAAAACCATTG

ATAACGCGCTGACGAAACGTAACGAAAAATGGTCAGATATGTACGGCCTGATTGTTGCCCAGTGGC

TGAGCACCGTCAACACGCAATTTTACACCATCAAAGAAGGTATGTACAAAGCGCTGAATTATCAGG

CGCAAGCCCTGGAAGAAATCATCAAATACCGCTACAACATCTACAGCGAAAAAGAAAAATCTAAC

ATCAACATCGACTTTAATGATATCAACAGCAAACTGAACGAAGGTATCAACCAGGCAATCGATAA

CATCAACAACTTCATCAACGGCTGCTCAGTGTCGTATCTGATGAAGAAAATGATCCCGCTGGCTGT

TGAAAAACTGCTGGATTTTGACAACACCCTGAAGAAAAACCTGCTGAACTACATCGATGAAAACA

AACTGTACCTGATCGGCTCAGCCGAATACGAAAAATCGAAAGTGAACAAATACCTGAAAACCATC

ATGCCGTTTGACCTGAGTATTTACACCAACGATACGATCCTGATCGAAATGTTCAACAAATACAAC

TCCGAAATTCTGAACAATATTATCCTGAACCTGCGTTACAAAGACAACAATCTGATCGATCTGAGC

GGCTATGGTGCAAAAGTTGAAGTCTACGACGGTGTCGAACTGAACGATAAAAACCAGTTCAAACT

GACCTCATCGGCTAACTCAAAAATTCGTGTGACGCAGAACCAAAACATCATCTTCAACTCGGTCTT

TCTGGACTTCAGCGTGTCTTTCTGGATTCGCATCCCGAAATATAAAAATGATGGCATCCAGAACTA

CATCCATAACGAATACACCATCATCAACTGTATGAAAAACAACAGTGGTTGGAAAATTTCCATCCG

TGGCAACCGCATTATCTGGACCCTGATTGATATCAATGGTAAAACGAAAAGCGTGTTTTTCGAATA

CAACATCCGTGAAGATATCTCTGAATACATCAATCGCTGGTTTTTCGTGACCATTACGAACAATCTG

AACAATGCGAAAATCTATATCAACGGCAAACTGGAAAGTAATACCGACATCAAAGATATTCGTGA

AGTTATCGCCAACGGTGAAATCATCTTCAAACTGGATGGCGACATCGATCGCACCCAGTTCATTTG

GATGAAATACTTCTCCATCTTCAACACGGAACTGAGTCAGTCCAATATCGAAGAACGCTACAAAAT

CCAATCATACTCGGAATACCTGAAAGATTTCTGGGGTAACCCGCTGATGTACAACAAAGAATACTA

CATGTTCAACGCGGGCAACAAAAACTCATACATCAAACTGAAAAAAGATTCGCCGGTGGGTGAAA

TCCTGACCCGTAGCAAATACAACCAGAACTCTAAATACATCAACTATCGCGATCTGTACATTGGCG

AAAAATTTATTATCCGTCGCAAAAGCAACTCTCAGAGTATTAATGATGACATCGTGCGTAAAGAAG

ACTACATCTATCTGGATTTCTTTAATCTGAACCAAGAATGGCGCGTTTATACCTACAAATACTTCAA

AAAAGAAGAAGAGAAACTGTTCCTGGCCCCGATTAGCGACAGCGATGAATTTTACAACACCATCC

AGATCAAAGAATACGATGAACAGCCGACGTATAGTTGCCAACTGCTGTTCAAAAAAGACGAAGAA

TCCACCGATGAAATTGGCCTGATTGGTATCCACCGTTTCTATGAAAGCGGTATCGTTTTCGAAGAAT

ACAAAGATTACTTCTGTATCTCTAAATGGTATCTGAAAGAAGTCAAACGCAAACCGTACAACCTGA

AACTGGGCTGCAACTGGCAATTTATCCCGAAAGACGAAGGCTGGACCGAA

SEQ ID NO:10 -rBoNT/B(0)的多肽序列

MPVTINNFNYNDPIDNNNIIMMEPPFARGTGRYYKAFKITDRIWIIPERYTFGYKPEDFNKSSGIFNRDVC

EYYDPDYLNTNDKKNIFLQTMIKLFNRIKSKPLGEKLLEMIINGIPYLGDRRVPLEEFNTNIASVTVNKLI

SNPGEVERKKGIFANLIIFGPGPVLNENETIDIGIQNHFASREGFGGIMQMKFCPEYVSVFNNVQENKGAS

IFNRRGYFSDPALILMHQLIYVLHGLYGIKVDDLPIVPNEKKFFMQSTDAIQAEELYTFGGQDPSIITPSTD

KSIYDKVLQNFRGIVDRLNKVLVCISDPNININIYKNKFKDKYKFVEDSEGKYSIDVESFDKLYKSLMFG

FTETNIAENYKIKTRASYFSDSLPPVKIKNLLDNEIYTIEEGFNISDKDMEKEYRGQNKAINKQAYEEISK

EHLAVYKIQMCKSVKAPGICIDVDNEDLFFIADKNSFSDDLSKNERIEYNTQSNYIENDFPINELILDTDLI

SKIELPSENTESLTDFNVDVPVYEKQPAIKKIFTDENTIFQYLYSQTFPLDIRDISLTSSFDDALLFSNKVYS

FFSMDYIKTANKVVEAGLFAGWVKQIVNDFVIEANKSNTMDKIADISLIVPYIGLALNVGNETAKGNFE

NAFEIAGASILLEFIPELLIPVVGAFLLESYIDNKNKIIKTIDNALTKRNEKWSDMYGLIVAQWLSTVNTQ

FYTIKEGMYKALNYQAQALEEIIKYRYNIYSEKEKSNINIDFNDINSKLNEGINQAIDNINNFINGCSVSYL

MKKMIPLAVEKLLDFDNTLKKNLLNYIDENKLYLIGSAEYEKSKVNKYLKTIMPFDLSIYTNDTILIEMF

NKYNSEILNNIILNLRYKDNNLIDLSGYGAKVEVYDGVELNDKNQFKLTSSANSKIRVTQNQNIIFNSVF

LDFSVSFWIRIPKYKNDGIQNYIHNEYTIINCMKNNSGWKISIRGNRIIWTLIDINGKTKSVFFEYNIREDIS

EYINRWFFVTITNNLNNAKIYINGKLESNTDIKDIREVIANGEIIFKLDGDIDRTQFIWMKYFSIFNTELSQS

NIEERYKIQSYSEYLKDFWGNPLMYNKEYYMFNAGNKNSYIKLKKDSPVGEILTRSKYNQNSKYINYR

DLYIGEKFIIRRKSNSQSINDDIVRKEDYIYLDFFNLNQEWRVYTYKYFKKEEEKLFLAPISDSDEFYNTIQ

IKEYDEQPTYSCQLLFKKDEESTDEIGLIGIHRFYESGIVFEEYKDYFCISKWYLKEVKRKPYNLKLGCN

WQFIPKDEGWTE

SEQ ID NO:11 -rBoNT/C(0)的核苷酸序列

ATGCCGATCACGATTAATAATTTCAACTATAGCGATCCGGTGGACAATAAGAATATTCTGTATCTG

GATACTCATCTGAATACGCTGGCTAACGAACCGGAGAAAGCGTTCCGCATCACAGGCAACATCTGG

GTTATTCCCGATCGCTTTTCACGCAACAGCAACCCTAATCTGAACAAACCTCCTCGTGTCACCAGTC

CTAAATCCGGTTATTACGACCCAAACTATCTGAGTACGGATAGCGATAAAGATCCCTTTCTGAAAG

AGATCATTAAGCTGTTCAAACGCATTAACTCTCGCGAAATTGGGGAAGAGCTGATCTATCGGCTTT

CGACAGATATCCCGTTCCCAGGTAACAATAATACCCCGATTAATACTTTCGACTTTGATGTTGATTT

CAATTCTGTGGATGTGAAAACGCGTCAAGGCAATAATTGGGTGAAAACTGGTAGCATTAACCCGA

GTGTAATTATCACAGGTCCCCGTGAGAACATCATCGACCCGGAAACCTCTACCTTCAAGCTGACGA

ACAACACGTTTGCTGCACAGGAAGGGTTTGGTGCCCTGTCAATCATTTCCATCTCACCGCGTTTCAT

GTTAACCTACTCCAATGCCACAAATGATGTTGGCGAAGGACGTTTTAGCAAATCAGAATTTTGCAT

GGACCCAATTCTCATTCTGATGggCacGCTGAACaATGCGATGCACAACTTGTATGGCATTGCTATTC

CAAACGATCAAACCATTAGCTCCGTTACCAGTAATATCTTCTATAGCCAGTATAATGTCAAATTGG

AGTATGCCGAAATTTACGCCTTTGGAGGCCCGACCATTGACCTGATTCCGAAATCTGCACGCAAAT

ACTTCGAAGAAAAGGCGTTAGATTACTATCGCAGCATCGCGAAACGCCTGAACTCGATTACCACGG

CCAATCCGTCGTCGTTCAACAAATACATTGGTGAATATAAACAGAAACTGATTCGCAAATATCGGT

TTGTCGTAGAAAGCTCTGGTGAAGTGACTGTAAACCGCAACAAATTTGTCGAACTCTACAACGAGT

TGACCCAAATCTTTACCGAGTTTAACTACGCAAAGATCTATAACGTACAGAACCGCAAGATTTATC

TTAGCAATGTATACACACCGGTTACTGCGAACATCTTAGACGACAATGTGTATGATATTCAGAATG

GCTTTAACATCCCGAAATCAAATCTGAACGTTCTGTTTATGGGCCAGAACCTGAGTCGTAATCCAG

CACTGCGTAAAGTGAACCCGGAAAATATGCTCTACTTGTTTACCAAATTTTGCCACAAAGCGATTG

ATGGCCGCTCTCTCTATAACAAAACGCTGGATTGTCGTGAGTTACTTGTGAAGAACACTGATTTACC

GTTCATTGGGGATATCTCCGACGTGAAAACCGATATCTTCCTGCGCAAAGACATTAATGAAGAAAC

GGAAGTCATCTATTACCCCGACAATGTGAGCGTTGATCAGGTCATTTTATCGAAGAACACCTCCGA

ACATGGTCAGTTGGATTTGCTGTACCCTAGCATTGACTCGGAGAGTGAAATCCTTCCGGGCGAAAA

TCAAGTGTTTTACGACAACCGTACCCAAAATGTTGATTATTTGAATTCTTATTACTACCTGGAATCT

CAGAAATTGAGCGACAATGTGGAAGATTTCACGTTCACACGCTCCATTGAGGAAGCGCTGGATAAT

AGCGCGAAAGTGTATACGTATTTCCCTACCTTGGCGAATAAAGTAAATGCTGGTGTCCAGGGAGGC

TTATTTCTGATGTGGGCGAATGATGTGGTAGAAGATTTTACGACCAATATTTTGCGTAAGGACACCT

TAGATAAAATTAGCGATGTTAGCGCCATCATCCCCTATATTGGCCCAGCACTGAATATCTCGAACT

CTGTGCGTCGCGGAAACTTCACCGAAGCATTTGCGGTGACCGGGGTTACTATTCTGTTGGAAGCCT

TTCCGGAGTTTACTATTCCGGCGCTGGGTGCGTTTGTGATTTATTCGAAAGTACAAGAACGCAATG

AAATTATCAAAACCATCGATAATTGCCTGGAACAACGCATTAAACGCTGGAAGGATTCTTATGAAT

GGATGATGGGCACCTGGTTATCCCGTATTATCACACAGTTTAACAACATCTCGTATCAGATGTACG

ATTCACTGAACTACCAAGCAGGGGCGATCAAAGCCAAGATCGACTTAGAATACAAGAAATATTCA

GGTAGCGATAAAGAGAATATTAAAAGCCAGGTTGAAAACCTGAAGAACTCTCTGGATGTCAAAAT

TTCAGAGGCTATGAACAACATTAACAAATTTATCCGCGAATGTAGCGTCACGTATCTGTTTAAAAA

CATGCTCCCGAAAGTGATTGATGAGCTCAACGAGTTTGATCGCAACACAAAGGCCAAACTGATTAA

CCTGATTGATAGTCACAATATTATTTTAGTCGGTGAAGTTGACAAGCTGAAGGCTAAGGTCAATAA

CAGCTTTCAGAACACTATTCCGTTTAATATTTTCTCCTATACGAACAATAGTCTGCTGAAAGACATT

ATCAACGAATACTTCAACAATATTAATGACAGCAAAATTCTGAGCCTGCAGAATCGTAAGAATACG

CTGGTAGATACCAGTGGATATAATGCGGAAGTCTCAGAAGAGGGTGATGTACAGCTGAACCCGAT

CTTTCCGTTCGACTTTAAACTGGGGTCTAGTGGTGAAGATCGCGGTAAAGTGATCGTTACCCAAAA

CGAGAACATTGTGTATAACAGCATGTACGAGAGTTTCTCAATTTCTTTCTGGATTCGCATCAATAAA

TGGGTTTCTAATTTGCCTGGCTATACCATCATTGATAGCGTCAAAAACAACTCGGGCTGGTCGATTG

GCATTATTAGCAACTTTCTGGTGTTTACCCTGAAACAGAATGAGGATTCGGAACAGAGCATTAACT

TCTCCTACGACATCAGCAACAATGCACCAGGGTATAACAAATGGTTCTTCGTAACGGTGACGAACA

ATATGATGGGCAATATGAAAATCTACATTAACGGGAAACTTATCGACACCATTAAAGTGAAAGAG

CTTACTGGGATCAATTTTAGTAAAACCATTACCTTTGAGATCAACAAAATTCCGGACACGGGTCTG

ATTACCTCCGATTCGGATAATATCAATATGTGGATTCGCGACTTTTATATCTTCGCCAAAGAACTTG

ATGGCAAAGATATCAACATTTTGTTTAATTCCCTGCAGTATACCAATGTCGTTAAGGACTATTGGGG

CAATGATCTCCGCTACAATAAAGAATACTACATGGTTAACATCGACTATCTCAATCGCTACATGTA

TGCTAACTCGCGTCAAATTGTGTTTAACACACGTCGTAACAACAACGATTTTAACGAAGGTTATAA

AATCATTATCAAACGGATCCGCGGCAATACGAACGATACTCGTGTTCGTGGCGGTGACATTCTGTA

TTTCGACATGACGATTAATAATAAAGCGTACAATCTGTTCATGAAGAACGAAACCATGTACGCCGA

TAACCATTCCACTGAAGATATCTACGCAATCGGACTTCGCGAACAGACCAAAGACATTAACGACAA

CATCATCTTTCAGATTCAACCGATGAATAATACCTACTACTATGCCTCCCAGATCTTCAAAAGTAAT

TTCAACGGCGAAAACATTTCAGGCATTTGCTCAATCGGCACTTATCGGTTCCGGTTAGGTGGTGATT

GGTATCGTCACAACTACCTTGTTCCCACAGTGAAACAAGGCAACTATGCATCGCTCTTAGAAAGCA

CATCTACGCATTGGGGTTTTGTGCCAGTCAGTGAA

SEQ ID NO: 12 - rBoNT/C(0)的多肽序列

MPITINNFNYSDPVDNKNILYLDTHLNTLANEPEKAFRITGNIWVIPDRFSRNSNPNLNKPPRVTSPKSGY

YDPNYLSTDSDKDPFLKEIIKLFKRINSREIGEELIYRLSTDIPFPGNNNTPINTFDFDVDFNSVDVKTRQG

NNWVKTGSINPSVIITGPRENIIDPETSTFKLTNNTFAAQEGFGALSIISISPRFMLTYSNATNDVGEGRFSK

SEFCMDPILILMGTLNNAMHNLYGIAIPNDQTISSVTSNIFYSQYNVKLEYAEIYAFGGPTIDLIPKSARKY

FEEKALDYYRSIAKRLNSITTANPSSFNKYIGEYKQKLIRKYRFVVESSGEVTVNRNKFVELYNELTQIFT

EFNYAKIYNVQNRKIYLSNVYTPVTANILDDNVYDIQNGFNIPKSNLNVLFMGQNLSRNPALRKVNPEN

MLYLFTKFCHKAIDGRSLYNKTLDCRELLVKNTDLPFIGDISDVKTDIFLRKDINEETEVIYYPDNVSVD

QVILSKNTSEHGQLDLLYPSIDSESEILPGENQVFYDNRTQNVDYLNSYYYLESQKLSDNVEDFTFTRSIE

EALDNSAKVYTYFPTLANKVNAGVQGGLFLMWANDVVEDFTTNILRKDTLDKISDVSAIIPYIGPALNIS

NSVRRGNFTEAFAVTGVTILLEAFPEFTIPALGAFVIYSKVQERNEIIKTIDNCLEQRIKRWKDSYEWMM

GTWLSRIITQFNNISYQMYDSLNYQAGAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNI

NKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNEFDRNTKAKLINLIDSHNIILVGEVDKLKAKVNNSFQNTIPFNIFSY

TNNSLLKDIINEYFNNINDSKILSLQNRKNTLVDTSGYNAEVSEEGDVQLNPIFPFDFKLGSSGEDRGKVI

VTQNENIVYNSMYESFSISFWIRINKWVSNLPGYTIIDSVKNNSGWSIGIISNFLVFTLKQNEDSEQSINFS

YDISNNAPGYNKWFFVTVTNNMMGNMKIYINGKLIDTIKVKELTGINFSKTITFEINKIPDTGLITSDSDNI

NMWIRDFYIFAKELDGKDINILFNSLQYTNVVKDYWGNDLRYNKEYYMVNIDYLNRYMYANSRQIVF

NTRRNNNDFNEGYKIIIKRIRGNTNDTRVRGGDILYFDMTINNKAYNLFMKNETMYADNHSTEDIYAIG

LREQTKDINDNIIFQIQPMNNTYYYASQIFKSNFNGENISGICSIGTYRFRLGGDWYRHNYLVPTVKQGN

YASLLESTSTHWGFVPVSE

SEQIDNO:13-rBoNT/E(0)的核苷酸序列

atgccgaaaatcaactctttcaactacaacgacccggttaacgaccgtaccatcctgtatatcaaaccgggtggttgccaggagttctacaaatctttcaacatcatgaa

aaacatctggatcatcccggaacgtaacgttatcggtaccaccccgcaggacttccacccgccgacctctctgaaaaacggtgactcttcttactacgacccgaacta

cctccagtctgacgaagaaaaagaccgtttcctgaaaatcgttaccaaaatcttcaaccgtatcaacaacaacctgtctggtggtatcctgctggaagaactgtctaaa

gctaacccgtacctgggtaacgacaacaccccggacaaccagttccacatcggtgacgcttctgctgttgaaatcaaattctctaacggttctcaggacatcctgctg

ccgaacgttatcatcatgggtgctgaaccggacctgttcgaaaccaactcttctaacatctctctgcgtaacaactacatgccgtctaaccacggtttcggttctatcgct

atcgttaccttctctccggaatactctttccgtttcaacgacaacagcatgaacgagttcatccaggacccggctctgaccctgatgcaccaactgatctactctctgca

cggtctgtacggtgctaaaggtatcaccaccaaatacaccatcacccagaaacagaacccgctgatcaccaacatccgtggtaccaacatcgaagagttcctgacc

ttcggtggtaccgacctgaacatcatcacctctgctcagtctaacgacatctacaccaacctgctggctgactacaaaaaaatcgcttctaaactgtctaaagttcaggt

ttctaacccgctgctgaacccgtacaaagacgttttcgaagctaaatacggtctggacaaagacgcttctggtatctactctgttaacatcaacaaattcaacgacatctt

caaaaaactgtactctttcaccgagttcgacctggcgaccaaattccaggttaaatgccgtcagacctacatcggtcagtacaaatacttcaaactgtctaacctgctga

acgactctatctacaacatctctgaaggttacaacatcaacaacctgaaagttaacttccgtggtcagaacgctaacctgaacccgcgtatcatcaccccgatcaccg

gtcgtggtctggttaaaaaaatcatccgtttctgcAAGAATATTGTAAGCGTTAAAGGAATAAGAAAAAGTATCtgcatcgaaa

tcaacaacggtgaactgttcttcgttgcttctgaaaactcttacaacgacgacaacatcaacaccccgaaagaaatcgacgacaccgttacctctaacaacaactacg

aaaacgacctggaccaggttatcctgaacttcaactctgaatctgctccgggtctgtctgacgaaaaactgaacctgaccatccagaacgacgcttacatcccgaaat

acgactctaacggtacctctgacatcgaacagcacgacgttaacgaactgaacgttttcttctacctggacgctcagaaagttccggaaggtgaaaacaacgttaacc

tgacctcttctatcgacaccgctctgctggaacagccgaaaatctacaccttcttctcttctgagttcatcaacaacgttaacaaaccggttcaggctgctctgttcgtttct

tggattcagcaggttctggttgacttcaccaccgaagctaaccagaaatctaccgttgacaaaatcgctgacatctctatcgttgttccgtacatcggtctggctctgaa

catcggtaacgaagctcagaaaggtaacttcaaagacgctctggaactgctgggtgctggtatcctgctggagttcgaaccggaactgctgatcccgaccatcctg

gttttcaccatcaaatctttcctgggttcttctgacaacaaaaacaaagttatcaaagctatcaacaacgctctgaaagaacgtgacgaaaaatggaaagaagtttactc

tttcatcgtttctaactggatgaccaaaatcaacacccagttcaacaaacgtaaagaacagatgtaccaggctctccagaaccaggttaacgctatcaaaaccatcatc

gaatctaaatacaactcttacaccctggaagaaaaaaacgaactgaccaacaaatacgacatcaaacagatcgaaaacgaactgaaccagaaagtttctatcgctat

gaacaacatcgaccgtttcctgaccgaatcttctatctcttacctgatgaaactcatcaacgaagttaaaatcaacaaactgcgtgaatacgacgaaaacgttaaaacct

acctgctgaactacatcatccagcacggttctatcctgggtgaatctcagcaggaactgaactctatggttaccgacaccctgaacaactctatcccgttcaaactgtct

tcttacaccgacgacaaaatcctGATCTCTTACTTCAACAAATTCTTTAAAcgcATTAAGAGTTCATCGGTTctgaatA

TGCGGTACAAAAATGATAAAtatGTCGATACTTCTGGATATgatAGCAATATCAACATTAACGGCGAC

GTGTATAAATATccgACAAATAAAAACCAGTTTGGGATATATAACGACAAGctgTCGGAGGTCAATatt

TCTCAAAACGACtatATCattTACGATAATaaaTATAAAAACTTTAGCATTAGTtttTGGGTTcgtATACCTAA

TtatGACAATaaaattGTAAATGTGAATAACGAGTATACCATTATAAACTGTATGcgcGACAATAACAGTG

GTTGGAAGGTATCGctgAACCATAATGAGATTATCTGGACCctgcagGATAATgcaGGTATAAACCAGAA

ACTGGCTTTTAACTATGGAAACGCAAATGGGATCTCAGATTACATTaataaaTGGatttttGTTaccATTACG

AACGATcgcTTAGGCGACTCAAAACTTTATATTAATggcAATctgATAGATCAGAAATCAATCTTAAAT

TTGGGCAATATTCATGTCTCTgatAACATCTTGTTCAAGATCGTTAATTGCAGTTACACTcgtTATATTG

GCATTCGTTACTTTAATATCTTCgataaaGAActgGACGAGACGGAAATCcagACTCTGTATTCAAACGAG

CCCAATACTAATATATTGAAAGATTTTTGGGGTAACTATCTTTTATATGATAAAGAATACTATCTCC

TGaatGTATTGAAGCCAAACAATTTCATAGATAGACGCAAGGATAGCACATTAAGTATCAACAATAT

CAGATCTACTATActgttaGCAAATCGCCTcTACTCCggtATTAAAGTGAAGATTcagCGGGTTAATAACTC

CAGTACCAATGATAATCTGGTCCGTAAGAACGATCAGGTATACATCaatTTCGTCGCGAGCAAAACTc

atCTCTTCCCGCTTTACGCCgatACAGCTACGACAAACAAGGAAAAAACCATAAAAATTTCCAGCTCC

GGAAACAGATTCAATCAAGTAGTTGTAATGAACTCTGTGGGTaatAATTGTACGATGAACTTTaagAA

TAACAATGGGAACAATattGGACTTTTGGGCTTcAAAGCCGACACAGTGGTGGCGTCCACCTGGTATT

ACACGcacATGcggGACCATACGAATTCGAACGGTTGCTTCTGGAACTTTATCTCGGAAgaaCACGGGT

GGCAAGAAAAA

SEQ ID NO:14 -rBoNT/E(0)的多肽序列

MPKINSFNYNDPVNDRTILYIKPGGCQEFYKSFNIMKNIWIIPERNVIGTTPQDFHPPTSLKNGDSSYYDP

NYLQSDEEKDRFLKIVTKIFNRINNNLSGGILLEELSKANPYLGNDNTPDNQFHIGDASAVEIKFSNGSQD

ILLPNVIIMGAEPDLFETNSSNISLRNNYMPSNHGFGSIAIVTFSPEYSFRFNDNSMNEFIQDPALTLMHQL

IYSLHGLYGAKGITTKYTITQKQNPLITNIRGTNIEEFLTFGGTDLNIITSAQSNDIYTNLLADYKKIASKLS

KVQVSNPLLNPYKDVFEAKYGLDKDASGIYSVNINKFNDIFKKLYSFTEFDLATKFQVKCRQTYIGQYK

YFKLSNLLNDSIYNISEGYNINNLKVNFRGQNANLNPRIITPITGRGLVKKIIRFCKNIVSVKGIRKSICIEIN

NGELFFVASENSYNDDNINTPKEIDDTVTSNNNYENDLDQVILNFNSESAPGLSDEKLNLTIQNDAYIPK

YDSNGTSDIEQHDVNELNVFFYLDAQKVPEGENNVNLTSSIDTALLEQPKIYTFFSSEFINNVNKPVQAA

LFVSWIQQVLVDFTTEANQKSTVDKIADISIVVPYIGLALNIGNEAQKGNFKDALELLGAGILLEFEPELL

IPTILVFTIKSFLGSSDNKNKVIKAINNALKERDEKWKEVYSFIVSNWMTKINTQFNKRKEQMYQALQN

QVNAIKTIIESKYNSYTLEEKNELTNKYDIKQIENELNQKVSIAMNNIDRFLTESSISYLMKLINEVKINKL

REYDENVKTYLLNYIIQHGSILGESQQELNSMVTDTLNNSIPFKLSSYTDDKILISYFNKFFKRIKSSSVLN

MRYKNDKYVDTSGYDSNININGDVYKYPTNKNQFGIYNDKLSEVNISQNDYIIYDNKYKNFSISFWVRI

PNYDNKIVNVNNEYTIINCMRDNNSGWKVSLNHNEIIWTLQDNAGINQKLAFNYGNANGISDYINKWIF

VTITNDRLGDSKLYINGNLIDQKSILNLGNIHVSDNILFKIVNCSYTRYIGIRYFNIFDKELDETEIQTLYSN

EPNTNILKDFWGNYLLYDKEYYLLNVLKPNNFIDRRKDSTLSINNIRSTILLANRLYSGIKVKIQRVNNSS

TNDNLVRKNDQVYINFVASKTHLFPLYADTATTNKEKTIKISSSGNRFNQVVVMNSVGNNCTMNFKNN

NGNNIGLLGFKADTVVASTWYYTHMRDHTNSNGCFWNFISEEHGWQEK

SEQIDNO:15-rBoNT/F(0)的核苷酸序列

ATGCCGGTGGTCATCAACAGCTTCAACTACAACGACCCAGTAAACGACGACACGATCCTGTATATG

CAAATCCCGTATGAAGAGAAGAGCAAGAAGTACTATAAGGCCTTTGAAATCATGCGCAATGTGTG

GATTATTCCGGAGCGTAATACGATTGGTACTGACCCAAGCGACTTCGATCCACCTGCGTCTTTGGA

AAACGGCTCGTCCGCATATTACGACCCGAATTACCTGACCACCGATGCGGAGAAAGATCGTTATTT

GAAAACCACCATCAAGCTGTTCAAACGCATTAACAGCAATCCGGCAGGTGAGGTCCTGCTGCAAG

AGATTAGCTACGCAAAGCCTTATCTGGGTAATGAGCATACGCCTATTAACGAGTTTCACCCGGTTA

CCCGCACTACCAGCGTTAACATCAAGTCCTCGACCAACGTGAAGTCTAGCATTATCCTGAACCTGC

TGGTTCTGGGTGCCGGTCCGGACATCTTCGAAAACTCTAGCTACCCGGTGCGTAAACTGATGGATA

GCGGCGGTGTTTATGACCCGAGCAATGACGGTTTTGGCAGCATCAATATCGTGACGTTTAGCCCGG

AGTACGAGTACACCTTCAATGATATCAGCGGTGGTTACAATTCTTCTACCGAGAGCTTCATCGCCG

ACCCGGCGATCAGCCTGGCACACCAACTGATCTATGCATTGCATGGCTTGTACGGTGCCCGTGGTG

TGACGTATAAAGAGACTATCAAGGTTAAGCAGGCACCTCTGATGATTGCGGAAAAGCCGATTCGCC

TGGAAGAGTTCCTGACCTTCGGCGGTCAAGATTTGAACATCATTACCTCGGCCATGAAAGAGAAAA

TCTATAACAATTTGCTGGCCAACTATGAAAAGATTGCAACGCGCTTGTCTCGTGTTAACTCCGCTCC

GCCGGAATACGACATTAATGAGTACAAAGACTACTTTCAATGGAAATATGGCCTGGACAAAAATG

CGGATGGTTCTTATACCGTGAATGAAAACAAATTCAATGAAATCTACAAGAAACTGTACAGCTTCA

CCGAAATCGATCTGGCGAACAAGTTCAAAGTCAAATGTCGTAATACCTACTTCATCAAATATGGCT

TCCTGAAAGTCCCGAACCTGCTGGACGATGACATCTATACCGTCAGCGAAGGCTTCAACATCGGCA

ATCTGGCCGTGAATAATCGTGGTCAGAACATCAAACTGAATCCGAAAATCATTGACTCCATCCCAG

ACAAGGGCCTGGTTGAGAAAATCGTGAAGTTCTGCAAAAGCGTTATTCCGCGTAAAGGTACGAAA

GCACCGCCTCGCCTGTGCATTCGCGTTAACAACCGTGAGTTGTTCTTTGTGGCATCTGAAAGCAGCT

ACAACGAGAACGACATCAACACCCCTAAAGAAATTGATGATACCACGAACCTGAATAACAATTAT

CGCAACAATCTGGACGAGGTGATCCTGGATTACAATTCGGAAACCATTCCGCAAATTAGCAATCAG

ACGCTGAACACCCTGGTTCAGGACGATAGCTACGTTCCGCGTTACGACTCCAATGGTACTAGCGAG

ATTGAAGAACACAACGTAGTGGACTTGAACGTTTTCTTTTATCTGCACGCCCAGAAGGTTCCGGAG

GGCGAAACCAATATTAGCCTGACCAGCTCGATCGACACCGCGCTGTCTGAGGAGAGCCAAGTCTAC

ACCTTTTTCAGCAGCGAGTTTATCAACACTATTAACAAGCCAGTTCATGCTGCATTGTTTATCTCTT

GGATTAACCAGGTGATTCGCGACTTTACGACGGAGGCGACCCAGAAGTCTACCTTCGACAAAATTG

CAGACATCTCCCTGGTCGTCCCATACGTCGGCCTGGCGTTGAATATTGGCAATGAAGTTCAAAAAG

AGAACTTCAAAGAAGCGTTCGAGCTGCTGGGTGCAGGCATCCTGCTGGAGTTCGTGCCGGAACTGT

TGATCCCGACCATCCTGGTGTTCACCATTAAGAGCTTCATTGGATCCTCCGAGAATAAGAACAAGA

TCATCAAGGCGATCAATAACAGCCTGATGGAGCGTGAAACGAAGTGGAAAGAAATCTATAGCTGG

ATTGTTAGCAATTGGCTGACTCGTATTAACACGCAATTCAACAAGCGTAAAGAGCAAATGTACCAA

GCCCTGCAAAACCAAGTTGACGCCATCAAAACGGTAATTGAATACAAGTACAACAATTACACGAG

CGATGAGCGCAACCGCCTGGAAAGCGAATACAACATCAACAACATTCGCGAAGAATTGAACAAGA

AAGTGAGCCTGGCGATGGAGAACATTGAGCGTTTTATCACCGAAAGCAGCATCTTTTACCTGATGA

AATTGATTAATGAGGCGAAAGTCTCGAAACTGCGTGAGTACGACGAAGGTGTGAAAGAGTATCTG

CTGGATTACATTAGCGAGCACCGTAGCATCTTGGGTAACTCGGTTCAGGAGCTGAACGATCTGGTG

ACCTCTACCCTGAACAATAGCATCCCGTTCGAACTGAGCAGCTATACCAATGACAAGATTCTGATT

CTGTATTTCAATAAACTGTATAAGAAGATCAAGGATAACAGCATTCTGGATATGCGTTACGAAAAC

AATAAGTTTATCGACATTTCTGGTTACGGCAGCAACATTTCCATCAATGGCGATGTCTACATCTACA

GCACCAATCGCAACCAGTTCGGCATCTACTCTAGCAAACCGAGCGAAGTTAACATCGCACAGAAC

AATGATATTATTTATAACGGTCGTTATCAAAACTTCTCTATCAGCTTTTGGGTCCGTATCCCGAAGT

ACTTCAATAAAGTCAATCTGAATAATGAATACACGATCATCGACTGCATTCGCAATAACAACAGCG

GTTGGAAAATCAGCCTGAATTACAACAAAATTATTTGGACCCTGCAAGATACGGCGGGTAACAATC

AGAAACTGGTGTTTAACTACACGCAAATGATCAGCATTTCTGACTATATCAACAAGTGGATCTTTG

TTACCATCACCAATAATCGTCTGGGCAATAGCCGTATTTACATCAACGGTAACCTGATTGATGAGA

AAAGCATCAGCAACCTGGGCGATATTCACGTCAGCGACAACATTCTGTTCAAAATTGTTGGTTGTA

ACGATACCCGTTACGTCGGCATCCGTTATTTCAAGGTTTTCGATACGGAGCTGGGTAAAACGGAAA

TCGAAACGTTGTACTCCGATGAACCAGATCCGAGCATTCTGAAGGACTTTTGGGGTAACTACTTGC

TGTACAATAAACGTTACTATCTGCTGAATCTGTTGCGCACCGACAAGAGCATTACCCAAAACAGCA

ATTTCCTGAACATTAATCAGCAACGCGGCGTATACCAAAAACCGAACATCTTCAGCAATACGCGCC

TGTATACTGGTGTTGAAGTGATCATTCGTAAGAACGGTAGCACCGACATTAGCAACACGGACAATT

TCGTCCGTAAGAATGACCTGGCGTACATTAACGTCGTGGACCGTGATGTCGAGTATCGTCTGTACG

CAGACATCAGCATTGCGAAACCGGAAAAGATTATCAAGCTGATCCGTACCAGCAACAGCAACAAC

AGCCTGGGTCAGATCATTGTGATGGACAGCATTGGTAATAACTGCACGATGAACTTCCAGAACAAC

AATGGTGGTAATATCGGTCTGCTGGGTTTTCACAGCAATAATCTGGTTGCTTCCAGCTGGTACTACA

ATAACATTCGTAAAAACACGTCTAGCAATGGTTGTTTTTGGAGCTTTATCAGCAAAGAGCACGGCT

GGCAAGAAAAT

SEQ IDNO:16 -rBoNT/F(0)的多肽序列

MPVVINSFNYNDPVNDDTILYMQIPYEEKSKKYYKAFEIMRNVWIIPERNTIGTDPSDFDPPASLENGSS

AYYDPNYLTTDAEKDRYLKTTIKLFKRINSNPAGEVLLQEISYAKPYLGNEHTPINEFHPVTRTTSVNIKS

STNVKSSIILNLLVLGAGPDIFENSSYPVRKLMDSGGVYDPSNDGFGSINIVTFSPEYEYTFNDISGGYNSS

TESFIADPAISLAHQLIYALHGLYGARGVTYKETIKVKQAPLMIAEKPIRLEEFLTFGGQDLNIITSAMKE

KIYNNLLANYEKIATRLSRVNSAPPEYDINEYKDYFQWKYGLDKNADGSYTVNENKFNEIYKKLYSFTE

IDLANKFKVKCRNTYFIKYGFLKVPNLLDDDIYTVSEGFNIGNLAVNNRGQNIKLNPKIIDSIPDKGLVEK

IVKFCKSVIPRKGTKAPPRLCIRVNNRELFFVASESSYNENDINTPKEIDDTTNLNNNYRNNLDEVILDYN

SETIPQISNQTLNTLVQDDSYVPRYDSNGTSEIEEHNVVDLNVFFYLHAQKVPEGETNISLTSSIDTALSEE

SQVYTFFSSEFINTINKPVHAALFISWINQVIRDFTTEATQKSTFDKIADISLVVPYVGLALNIGNEVQKEN

FKEAFELLGAGILLEFVPELLIPTILVFTIKSFIGSSENKNKIIKAINNSLMERETKWKEIYSWIVSNWLTRI

NTQFNKRKEQMYQALQNQVDAIKTVIEYKYNNYTSDERNRLESEYNINNIREELNKKVSLAMENIERFI

TESSIFYLMKLINEAKVSKLREYDEGVKEYLLDYISEHRSILGNSVQELNDLVTSTLNNSIPFELSSYTND

KILILYFNKLYKKIKDNSILDMRYENNKFIDISGYGSNISINGDVYIYSTNRNQFGIYSSKPSEVNIAQNNDI

IYNGRYQNFSISFWVRIPKYFNKVNLNNEYTIIDCIRNNNSGWKISLNYNKIIWTLQDTAGNNQKLVFNY

TQMISISDYINKWIFVTITNNRLGNSRIYINGNLIDEKSISNLGDIHVSDNILFKIVGCNDTRYVGIRYFKVF

DTELGKTEIETLYSDEPDPSILKDFWGNYLLYNKRYYLLNLLRTDKSITQNSNFLNINQQRGVYQKPNIF

SNTRLYTGVEVIIRKNGSTDISNTDNFVRKNDLAYINVVDRDVEYRLYADISIAKPEKIIKLIRTSNSNNSL

GQIIVMDSIGNNCTMNFQNNNGGNIGLLGFHSNNLVASSWYYNNIRKNTSSNGCFWSFISKEHGWQEN

SEQIDNO:17-rBoNT/A(0)(加His标签)的核苷酸序列

ATGCCGTTTGTGAACAAGCAGTTCAACTATAAAGATCCGGTTAATGGTGTGGATATCGCCTATATC

AAAATTCCGAATGCAGGTCAGATGCAGCCGGTTAAAGCCTTTAAAATCCATAACAAAATTTGGGTG

ATTCCGGAACGTGATACCTTTACCAATCCGGAAGAAGGTGATCTGAATCCGCCTCCGGAAGCAAAA

CAGGTTCCGGTTAGCTATTATGATAGCACCTATCTGAGCACCGATAACGAGAAAGATAACTATCTG

AAAGGTGTGACCAAACTGTTTGAACGCATTTATAGTACCGATCTGGGTCGTATGCTGCTGACCAGC

ATTGTTCGTGGTATTCCGTTTTGGGGTGGTAGCACCATTGATACCGAACTGAAAGTTATTGACACCA

ACTGCATTAATGTGATTCAGCCGGATGGTAGCTATCGTAGCGAAGAACTGAATCTGGTTATTATTG

GTCCGAGCGCAGATATCATTCAGTTTGAATGTAAAAGCTTTGGCCACGAAGTTCTGAATCTGACCC

GTAATGGTTATGGTAGTACCCAGTATATTCGTTTCAGTCCGGATTTTACCTTTGGCTTTGAAGAAAG

CCTGGAAGTTGATACAAATCCGCTGTTAGGTGCAGGTAAATTTGCAACCGATCCGGCAGTTACCCT

GGCACACCAGCTGATTTATGCCGGTCATCGTCTGTATGGTATTGCCATTAATCCGAATCGTGTGTTC

AAAGTGAATACCAACGCCTATTATGAAATGAGCGGTCTGGAAGTGAGTTTTGAAGAACTGCGTACC

TTTGGTGGTCATGATGCCAAATTTATCGATAGCCTGCAAGAAAATGAATTTCGCCTGTACTACTATA

ACAAATTCAAGGATATTGCGAGCACCCTGAATAAAGCCAAAAGCATTGTTGGCACCACCGCAAGC

CTGCAGTATATGAAAAATGTGTTTAAAGAAAAATATCTGCTGAGCGAAGATACCAGCGGTAAATTT

AGCGTTGACAAACTGAAATTCGATAAACTGTACAAGATGCTGACCGAGATTTATACCGAAGATAAC

TTCGTGAAGTTTTTCAAAGTGCTGAACCGCAAAACCTACCTGAACTTTGATAAAGCCGTGTTCAAA

ATCAACATCGTGCCGAAAGTGAACTATACCATCTATGATGGTTTTAACCTGCGCAATACCAATCTG

GCAGCAAACTTTAATGGTCAGAACACCGAAATCAACAACATGAACTTTACCAAACTGAAGAACTTC

ACCGGTCTGTTCGAATTTTACAAACTGCTGTGTGTTCGTGGCATTATTACCAGCAAAACCAAAAGTC

TGGATAAAGGCTACAATAAAGCCCTGAATGATCTGTGCATTAAGGTGAATAATTGGGACCTGTTTT

TTAGCCCGAGCGAGGATAATTTCACCAACGATCTGAACAAAGGCGAAGAAATTACCAGCGATACC

AATATTGAAGCAGCCGAAGAAAACATTAGCCTGGATCTGATTCAGCAGTATTATCTGACCTTCAAC

TTCGATAATGAGCCGGAAAATATCAGCATTGAAAACCTGAGCAGCGATATTATTGGCCAGCTGGAA

CTGATGCCGAATATTGAACGTTTTCCGAACGGCAAAAAATACGAGCTGGATAAATACACCATGTTC

CATTATCTGCGTGCCCAAGAATTTGAACATGGTAAAAGCCGTATTGCACTGACCAATAGCGTTAAT

GAAGCACTGCTGAACCCGAGCCGTGTTTATACCTTTTTTAGCAGCGATTACGTGAAAAAGGTTAAC

AAAGCAACCGAAGCAGCCATGTTTTTAGGTTGGGTTGAACAGCTGGTTTATGATTTCACCGATGAA

ACCAGCGAAGTTAGCACCACCGATAAAATTGCAGATATTACCATCATCATCCCGTATATCGGTCCG

GCACTGAATATTGGCAATATGCTGTATAAAGACGATTTTGTGGGTGCCCTGATTTTTAGCGGTGCA

GTTATTCTGCTGGAATTTATTCCGGAAATTGCCATTCCGGTTCTGGGCACCTTTGCACTGGTGAGCT

ATATTGCAAATAAAGTTCTGACCGTGCAGACCATCGATAATGCACTGAGCAAACGTAACGAAAAA

TGGGATGAAGTGTACAAGTATATCGTGACCAATTGGCTGGCAAAAGTTAACACCCAGATTGACCTG

ATTCGCAAGAAGATGAAAGAAGCACTGGAAAATCAGGCAGAAGCAACCAAAGCCATTATCAACTA

TCAGTATAACCAGTACACCGAAGAAGAGAAAAATAACATCAACTTCAACATCGACGATCTGTCCA

GCAAACTGAACGAAAGCATCAACAAAGCCATGATTAACATTAACAAATTTCTGAACCAGTGCAGC

GTGAGCTATCTGATGAATAGCATGATTCCGTATGGTGTGAAACGTCTGGAAGATTTTGATGCAAGC

CTGAAAGATGCCCTGCTGAAATATATCTATGATAATCGTGGCACCCTGATTGGTCAGGTTGATCGT

CTGAAAGATAAAGTGAACAACACCCTGAGTACCGATATTCCTTTTCAGCTGAGCAAATATGTGGAT

AATCAGCGTCTGCTGTCAACCTTTACCGAATACATTAAGAACATCATCAACACCAGCATTCTGAAC

CTGCGTTATGAAAGCAATCATCTGATTGATCTGAGCCGTTATGCCAGCAAAATCAATATAGGCAGC

AAGGTTAACTTCGACCCGATTGACAAAAATCAGATACAGCTGTTTAATCTGGAAAGCAGCAAAATT

GAGGTGATCCTGAAAAACGCCATTGTGTATAATAGCATGTACGAGAATTTCTCGACCAGCTTTTGG

ATTCGTATCCCGAAATACTTTAATAGCATCAGCCTGAACAACGAGTACACCATTATTAACTGCATG

GAAAACAATAGCGGCTGGAAAGTTAGCCTGAATTATGGCGAAATTATCTGGACCCTGCAGGATAC

CCAAGAAATCAAACAGCGTGTGGTTTTCAAATACAGCCAGATGATTAATATCAGCGACTATATCAA

CCGCTGGATTTTTGTGACCATTACCAATAATCGCCTGAATAACAGCAAGATCTATATTAACGGTCGT

CTGATTGACCAGAAACCGATTAGTAATCTGGGTAATATTCATGCGAGCAACAACATCATGTTTAAA

CTGGATGGTTGTCGTGATACCCATCGTTATATTTGGATCAAGTACTTCAACCTGTTCGATAAAGAGT

TGAACGAAAAAGAAATTAAAGACCTGTATGATAACCAGAGCAACAGCGGTATTCTGAAGGATTTT

TGGGGAGATTATCTGCAGTATGACAAACCGTATTATATGCTGAATCTGTACGACCCGAATAAATAC

GTGGATGTGAATAATGTTGGCATCCGTGGTTATATGTACCTGAAAGGTCCGCGTGGTAGCGTTATG

ACCACAAACATTTATCTGAATAGCAGCCTGTATCGCGGAACCAAATTCATCATTAAAAAGTATGCC

AGCGGCAACAAGGATAATATTGTGCGTAATAATGATCGCGTGTACATTAACGTTGTGGTGAAGAAT

AAAGAATATCGCCTGGCAACCAATGCAAGCCAGGCAGGCGTTGAAAAAATTCTGAGTGCCCTGGA

AATTCCGGATGTTGGTAATCTGAGCCAGGTTGTTGTGATGAAAAGCAAAAATGATCAGGGCATCAC

CAACAAGTGCAAAATGAATCTGCAGGACAATAACGGCAACGATATTGGTTTTATTGGCTTCCACCA

GTTCAACAATATTGCGAAACTGGTTGCAAGCAATTGGTATAATCGTCAGATTGAACGTAGCAGTCG

TACCCTGGGTTGTAGCTGGGAATTTATCCCTGTGGATGATGGTTGGGGTGAACGTCCGCTGGAAAA

CCTGTATTTTCAAGGTGCAAGTCATCATCACCATCACCACCATCATTAA

SEQIDNO:18-rBoNT/A(0)(加His标签)的多肽序列

MPFVNKQFNYKDPVNGVDIAYIKIPNAGQMQPVKAFKIHNKIWVIPERDTFTNPEEGDLNPPPEAKQVP

VSYYDSTYLSTDNEKDNYLKGVTKLFERIYSTDLGRMLLTSIVRGIPFWGGSTIDTELKVIDTNCINVIQP

DGSYRSEELNLVIIGPSADIIQFECKSFGHEVLNLTRNGYGSTQYIRFSPDFTFGFEESLEVDTNPLLGAGK

FATDPAVTLAHQLIYAGHRLYGIAINPNRVFKVNTNAYYEMSGLEVSFEELRTFGGHDAKFIDSLQENE

FRLYYYNKFKDIASTLNKAKSIVGTTASLQYMKNVFKEKYLLSEDTSGKFSVDKLKFDKLYKMLTEIYT

EDNFVKFFKVLNRKTYLNFDKAVFKINIVPKVNYTIYDGFNLRNTNLAANFNGQNTEINNMNFTKLKNF

TGLFEFYKLLCVRGIITSKTKSLDKGYNKALNDLCIKVNNWDLFFSPSEDNFTNDLNKGEEITSDTNIEA

AEENISLDLIQQYYLTFNFDNEPENISIENLSSDIIGQLELMPNIERFPNGKKYELDKYTMFHYLRAQEFEH

GKSRIALTNSVNEALLNPSRVYTFFSSDYVKKVNKATEAAMFLGWVEQLVYDFTDETSEVSTTDKIADI

TIIIPYIGPALNIGNMLYKDDFVGALIFSGAVILLEFIPEIAIPVLGTFALVSYIANKVLTVQTIDNALSKRNE

KWDEVYKYIVTNWLAKVNTQIDLIRKKMKEALENQAEATKAIINYQYNQYTEEEKNNINFNIDDLSSK

LNESINKAMININKFLNQCSVSYLMNSMIPYGVKRLEDFDASLKDALLKYIYDNRGTLIGQVDRLKDKV

NNTLSTDIPFQLSKYVDNQRLLSTFTEYIKNIINTSILNLRYESNHLIDLSRYASKINIGSKVNFDPIDKNQI

QLFNLESSKIEVILKNAIVYNSMYENFSTSFWIRIPKYFNSISLNNEYTIINCMENNSGWKVSLNYGEIIWT

LQDTQEIKQRVVFKYSQMINISDYINRWIFVTITNNRLNNSKIYINGRLIDQKPISNLGNIHASNNIMFKLD

GCRDTHRYIWIKYFNLFDKELNEKEIKDLYDNQSNSGILKDFWGDYLQYDKPYYMLNLYDPNKYVDV

NNVGIRGYMYLKGPRGSVMTTNIYLNSSLYRGTKFIIKKYASGNKDNIVRNNDRVYINVVVKNKEYRL

ATNASQAGVEKILSALEIPDVGNLSQVVVMKSKNDQGITNKCKMNLQDNNGNDIGFIGFHQFNNIAKL

VASNWYNRQIERSSRTLGCSWEFIPVDDGWGERPLENLYFQGASHHHHHHHH

SEQ ID NO:19-rLH_N/A(加His标签)的核苷酸序列

ATGCCGTTTGTGAACAAGCAGTTCAACTATAAAGATCCGGTTAATGGTGTGGATATCGCCTATATC

AAAATTCCGAATGCAGGTCAGATGCAGCCGGTTAAAGCCTTTAAAATCCATAACAAAATTTGGGTG

ATTCCGGAACGTGATACCTTTACCAATCCGGAAGAAGGTGATCTGAATCCGCCTCCGGAAGCAAAA

CAGGTTCCGGTTAGCTATTATGATAGCACCTATCTGAGCACCGATAACGAGAAAGATAACTATCTG

AAAGGTGTGACCAAACTGTTTGAACGCATTTATAGTACCGATCTGGGTCGTATGCTGCTGACCAGC

ATTGTTCGTGGTATTCCGTTTTGGGGTGGTAGCACCATTGATACCGAACTGAAAGTTATTGACACCA

ACTGCATTAATGTGATTCAGCCGGATGGTAGCTATCGTAGCGAAGAACTGAATCTGGTTATTATTG

GTCCGAGCGCAGATATCATTCAGTTTGAATGTAAATCCTTTGGCCACGAAGTTCTGAATCTGACCC

GTAATGGTTATGGTAGTACCCAGTATATTCGTTTCAGTCCGGATTTTACCTTTGGCTTTGAAGAAAG

CCTGGAAGTTGATACAAATCCGCTGTTAGGTGCAGGTAAATTTGCAACCGATCCGGCAGTTACCCT

GGCACATGAACTGATTCATGCCGGTCATCGTCTGTATGGTATTGCAATTAATCCGAACCGTGTGTTC

AAAGTGAATACCAACGCATATTATGAAATGAGCGGTCTGGAAGTGTCATTTGAAGAACTGCGTACC

TTTGGTGGTCATGATGCCAAATTTATCGATAGCCTGCAAGAAAATGAATTTCGCCTGTACTACTATA

ACAAATTCAAGGATATTGCGAGCACCCTGAATAAAGCCAAAAGCATTGTTGGCACCACCGCAAGC

CTGCAGTATATGAAAAATGTGTTTAAAGAAAAATATCTGCTGAGCGAAGATACCAGCGGTAAATTT

AGCGTTGACAAACTGAAATTCGATAAACTGTACAAGATGCTGACCGAGATTTATACCGAAGATAAC

TTCGTGAAGTTTTTCAAAGTGCTGAACCGCAAAACCTACCTGAACTTTGATAAAGCCGTGTTCAAA

ATCAACATCGTGCCGAAAGTGAACTATACCATCTATGATGGTTTTAACCTGCGCAATACCAATCTG

GCAGCAAACTTTAATGGTCAGAACACCGAAATCAACAACATGAACTTTACCAAACTGAAGAACTTC

ACCGGTCTGTTCGAATTTTACAAACTGCTGTGTGTTCGTGGCATTATTACCAGCAAAACCAAAAGTC

TGGATAAAGGCTACAATAAAGCCCTGAATGATCTGTGCATTAAGGTGAATAATTGGGACCTGTTTT

TTAGCCCGAGCGAGGATAATTTCACCAACGATCTGAACAAAGGCGAAGAAATTACCAGCGATACC

AATATTGAAGCAGCCGAAGAAAACATTAGCCTGGATCTGATTCAGCAGTATTATCTGACCTTCAAC

TTCGATAATGAGCCGGAAAATATCAGCATTGAAAACCTGAGCAGCGATATTATTGGCCAGCTGGAA

CTGATGCCGAATATTGAACGTTTTCCGAACGGCAAAAAATACGAGCTGGATAAATACACCATGTTC

CATTATCTGCGTGCCCAAGAATTTGAACATGGTAAAAGCCGTATTGCACTGACCAATAGCGTTAAT

GAAGCACTGCTGAACCCGAGCCGTGTTTATACCTTTTTTAGCAGCGATTACGTGAAAAAGGTTAAC

AAAGCAACCGAAGCAGCCATGTTTTTAGGTTGGGTTGAACAGCTGGTTTATGATTTCACCGATGAA

ACCAGCGAAGTTAGCACCACCGATAAAATTGCAGATATTACCATCATCATCCCGTATATCGGTCCG

GCACTGAATATTGGCAATATGCTGTATAAAGACGATTTTGTGGGTGCCCTGATTTTTAGCGGTGCA

GTTATTCTGCTGGAATTTATTCCGGAAATTGCCATTCCGGTTCTGGGCACCTTTGCACTGGTGAGCT

ATATTGCAAATAAAGTTCTGACCGTGCAGACCATCGATAATGCACTGAGCAAACGTAACGAAAAA

TGGGATGAAGTGTACAAGTATATCGTGACCAATTGGCTGGCAAAAGTTAACACCCAGATTGACCTG

ATTCGCAAGAAGATGAAAGAAGCACTGGAAAATCAGGCAGAAGCAACCAAAGCCATTATCAACTA

TCAGTATAACCAGTACACCGAAGAAGAGAAAAATAACATCAACTTCAACATCGACGATCTGTCCA

GCAAACTGAACGAAAGCATCAACAAAGCCATGATTAACATTAACAAATTTCTGAACCAGTGCAGC

GTGAGCTATCTGATGAATAGCATGATTCCGTATGGTGTGAAACGTCTGGAAGATTTTGATGCAAGC

CTGAAAGATGCCCTGCTGAAATATATCTATGATAATCGTGGCACCCTGATTGGTCAGGTTGATCGT

CTGAAAGATAAAGTGAACAACACCCTGAGTACCGATATTCCTTTTCAGCTGAGCAAATATGTGGAT

AATCAGCGTCTGCTGTCAACCGAAAATCTGTATTTCCAGGGTGCAAGTCATCATCACCATCACCAC

CATCATTAA

SEQ ID NO: 20-rLH_N/A(加His标签)的多肽序列

MPFVNKQFNYKDPVNGVDIAYIKIPNAGQMQPVKAFKIHNKIWVIPERDTFTNPEEGDLNPPPEAKQVP

VSYYDSTYLSTDNEKDNYLKGVTKLFERIYSTDLGRMLLTSIVRGIPFWGGSTIDTELKVIDTNCINVIQP

DGSYRSEELNLVIIGPSADIIQFECKSFGHEVLNLTRNGYGSTQYIRFSPDFTFGFEESLEVDTNPLLGAGK

FATDPAVTLAHELIHAGHRLYGIAINPNRVFKVNTNAYYEMSGLEVSFEELRTFGGHDAKFIDSLQENEF

RLYYYNKFKDIASTLNKAKSIVGTTASLQYMKNVFKEKYLLSEDTSGKFSVDKLKFDKLYKMLTEIYTE

DNFVKFFKVLNRKTYLNFDKAVFKINIVPKVNYTIYDGFNLRNTNLAANFNGQNTEINNMNFTKLKNFT

GLFEFYKLLCVRGIITSKTKSLDKGYNKALNDLCIKVNNWDLFFSPSEDNFTNDLNKGEEITSDTNIEAA

EENISLDLIQQYYLTFNFDNEPENISIENLSSDIIGQLELMPNIERFPNGKKYELDKYTMFHYLRAQEFEHG

KSRIALTNSVNEALLNPSRVYTFFSSDYVKKVNKATEAAMFLGWVEQLVYDFTDETSEVSTTDKIADITI

IIPYIGPALNIGNMLYKDDFVGALIFSGAVILLEFIPEIAIPVLGTFALVSYIANKVLTVQTIDNALSKRNEK

WDEVYKYIVTNWLAKVNTQIDLIRKKMKEALENQAEATKAIINYQYNQYTEEEKNNINFNIDDLSSKL

NESINKAMININKFLNQCSVSYLMNSMIPYGVKRLEDFDASLKDALLKYIYDNRGTLIGQVDRLKDKVN

NTLSTDIPFQLSKYVDNQRLLSTENLYFQGASHHHHHHHH

SEQ ID NO:21-rH_C/A(加His标签)的核苷酸序列

ATGCATCATCACCATCACCACGAAAATCTATACTTCCAAGGAAAAAACATCATCAATACTAGCATT

CTGAACCTGCGTTACGAGAGCAATCATCTGATTGATCTGAGCCGTTATGCAAGCAAGATCAACATC

GGTAGCAAGGTCAATTTTGACCCGATCGATAAGAACCAGATCCAGCTGTTTAATCTGGAATCGAGC

AAAATTGAGGTTATCCTGAAAAACGCCATTGTCTACAACTCCATGTACGAGAATTTCTCCACCAGC

TTCTGGATTCGCATCCCGAAATACTTCAACAGCATTAGCCTGAACAACGAGTATACTATCATCAAC

TGTATGGAGAACAACAGCGGTTGGAAGGTGTCTCTGAACTATGGTGAGATCATTTGGACCTTGCAG

GACACCCAAGAGATCAAGCAGCGCGTCGTGTTCAAGTACTCTCAAATGATCAACATTTCCGATTAC

ATTAATCGTTGGATCTTCGTGACCATTACGAATAACCGTCTGAATAACAGCAAGATTTACATCAAT

GGTCGCTTGATCGATCAGAAACCGATTAGCAACCTGGGTAATATCCACGCAAGCAACAACATTATG

TTCAAATTGGACGGTTGCCGCGATACCCATCGTTATATCTGGATCAAGTATTTCAACCTGTTTGATA

AAGAACTGAATGAGAAGGAGATCAAAGATTTGTATGACAACCAATCTAACAGCGGCATTTTGAAG

GACTTCTGGGGCGATTATCTGCAATACGATAAGCCGTACTATATGCTGAACCTGTATGATCCGAAC

AAATATGTGGATGTCAATAATGTGGGTATTCGTGGTTACATGTATTTGAAGGGTCCGCGTGGCAGC

GTTATGACGACCAACATTTACCTGAACTCTAGCCTGTACCGTGGTACGAAATTCATCATTAAGAAA

TATGCCAGCGGCAACAAAGATAACATTGTGCGTAATAACGATCGTGTCTACATCAACGTGGTCGTG

AAGAATAAAGAGTACCGTCTGGCGACCAACGCTTCGCAGGCGGGTGTTGAGAAAATTCTGAGCGC

GTTGGAGATCCCTGATGTCGGTAATCTGAGCCAAGTCGTGGTTATGAAGAGCAAGAACGACCAGG

GTATCACTAACAAGTGCAAGATGAACCTGCAAGACAACAATGGTAACGACATCGGCTTTATTGGTT

TCCACCAGTTCAACAATATTGCTAAACTGGTAGCGAGCAATTGGTACAATCGTCAGATTGAGCGCA

GCAGCCGTACTTTGGGCTGTAGCTGGGAGTTTATCCCGGTCGATGATGGTTGGGGCGAACGTCCGC

TGTAA

SEQ ID NO:22-rH_C/A (加His标签)的多肽序列

MHHHHHHENLYFQGKNIINTSILNLRYESNHLIDLSRYASKINIGSKVNFDPIDKNQIQLFNLESSKIEVIL

KNAIVYNSMYENFSTSFWIRIPKYFNSISLNNEYTIINCMENNSGWKVSLNYGEIIWTLQDTQEIKQRVVF

KYSQMINISDYINRWIFVTITNNRLNNSKIYINGRLIDQKPISNLGNIHASNNIMFKLDGCRDTHRYIWIKY

FNLFDKELNEKEIKDLYDNQSNSGILKDFWGDYLQYDKPYYMLNLYDPNKYVDVNNVGIRGYMYLKG

PRGSVMTTNIYLNSSLYRGTKFIIKKYASGNKDNIVRNNDRVYINVVVKNKEYRLATNASQAGVEKILS

ALEIPDVGNLSQVVVMKSKNDQGITNKCKMNLQDNNGNDIGFIGFHQFNNIAKLVASNWYNRQIERSS

RTLGCSWEFIPVDDGWGERPL

SEQ ID NO:23-rLC/A(加His标签)的核苷酸序列

ATGCCGTTTGTGAACAAGCAGTTCAACTATAAAGATCCGGTTAATGGTGTGGATATCGCCTATATC

AAAATTCCGAATGCAGGTCAGATGCAGCCGGTTAAAGCCTTTAAAATCCATAACAAAATTTGGGTG

ATTCCGGAACGTGATACCTTTACCAATCCGGAAGAAGGTGATCTGAATCCGCCTCCGGAAGCAAAA

CAGGTTCCGGTTAGCTATTATGATAGCACCTATCTGAGCACCGATAACGAGAAAGATAACTATCTG

AAAGGTGTGACCAAACTGTTTGAACGCATTTATAGTACCGATCTGGGTCGTATGCTGCTGACCAGC

ATTGTTCGTGGTATTCCGTTTTGGGGTGGTAGCACCATTGATACCGAACTGAAAGTTATTGACACCA

ACTGCATTAATGTGATTCAGCCGGATGGTAGCTATCGTAGCGAAGAACTGAATCTGGTTATTATTG

GTCCGAGCGCAGATATCATTCAGTTTGAATGTAAATCCTTTGGCCACGAAGTTCTGAATCTGACCC

GTAATGGTTATGGTAGTACCCAGTATATTCGTTTCAGTCCGGATTTTACCTTTGGCTTTGAAGAAAG

CCTGGAAGTTGATACAAATCCGCTGTTAGGTGCAGGTAAATTTGCAACCGATCCGGCAGTTACCCT

GGCACATGAACTGATTCATGCCGGTCATCGTCTGTATGGTATTGCAATTAATCCGAACCGTGTGTTC

AAAGTGAATACCAACGCATATTATGAAATGAGCGGTCTGGAAGTGTCATTTGAAGAACTGCGTACC

TTTGGTGGTCATGATGCCAAATTTATCGATAGCCTGCAAGAAAATGAATTTCGCCTGTACTACTATA

ACAAATTCAAGGATATTGCGAGCACCCTGAATAAAGCCAAAAGCATTGTTGGCACCACCGCAAGC

CTGCAGTATATGAAAAATGTGTTTAAAGAAAAATATCTGCTGAGCGAAGATACCAGCGGTAAATTT

AGCGTTGACAAACTGAAATTCGATAAACTGTACAAGATGCTGACCGAGATTTATACCGAAGATAAC

TTCGTGAAGTTTTTCAAAGTGCTGAACCGCAAAACCTACCTGAACTTTGATAAAGCCGTGTTCAAA

ATCAACATCGTGCCGAAAGTGAACTATACCATCTATGATGGTTTTAACCTGCGCAATACCAATCTG

GCAGCAAACTTTAATGGTCAGAACACCGAAATCAACAACATGAACTTTACCAAACTGAAGAACTTC

ACCGGTCTGTTTGAAGAGAATCTGTATTTCCAGGGTGCAAGTCATCATCACCATCACCACCATCATT

AA

SEQID NO:24-rLC/A(加His标签)的多肽序列

MPFVNKQFNYKDPVNGVDIAYIKIPNAGQMQPVKAFKIHNKIWVIPERDTFTNPEEGDLNPPPEAKQVP

VSYYDSTYLSTDNEKDNYLKGVTKLFERIYSTDLGRMLLTSIVRGIPFWGGSTIDTELKVIDTNCINVIQP

DGSYRSEELNLVIIGPSADIIQFECKSFGHEVLNLTRNGYGSTQYIRFSPDFTFGFEESLEVDTNPLLGAGK

FATDPAVTLAHELIHAGHRLYGIAINPNRVFKVNTNAYYEMSGLEVSFEELRTFGGHDAKFIDSLQENEF

RLYYYNKFKDIASTLNKAKSIVGTTASLQYMKNVFKEKYLLSEDTSGKFSVDKLKFDKLYKMLTEIYTE

DNFVKFFKVLNRKTYLNFDKAVFKINIVPKVNYTIYDGFNLRNTNLAANFNGQNTEINNMNFTKLKNFT

GLFEENLYFQGASHHHHHHHH

SEQID NO:25-rBoNT/FA(0)(加His标签)的核苷酸序列

ATGCCGGTTGTGATTAACAGCTTCAATTATGATGATCCGGTGAACGATAACACCATCATTTATATCC

GTCCGCCTTATTATGAAACCAGCAACACCTATTTCAAAGCCTTCCAGATTATGGATAACGTGTGGA

TTATTCCGGAACGTTATCGTCTGGGTATTGATCCGAGCCTGTTTAATCCGCCTGTTAGCCTGAAAGC

AGGTAGTGATGGTTATTTTGATCCGAATTATCTGAGCACCAACACCGAGAAAAACAAATACCTGCA

GATTATGATCAAGCTGTTCAAACGCATTAATAGCAAACCGGCAGGTCAGATTCTGCTGGAAGAAAT

CAAAAATGCAATTCCGTATCTGGGCAACAGCTATACCCAAGAAGAACAGTTTACCACCAATAATCG

TACCGTGAGCTTTAATGTTAAACTGGCCAATGGTAATATCGTTCAGCAGATGGCAAATCTGATTATT

TGGGGTCCGGGTCCTGATCTGACCACAAATAAAACCGGTGGTATCATCTATAGCCCGTATCAGAGC

ATGGAAGCAACCCCGTATAAAGATGGTTTTGGTAGCATTATGACCGTGGAATTTAGTCCGGAATAT

GCAACCGCCTTTAACGATATTTCAATTGCAAGCCATAGTCCGTCGCTGTTTATCAAAGATCCGGCAC

TGATTCTGATGCACCAGCTGATTTATGTTCTGCATGGTCTGTATGGCACCTATATCACCGAATACAA

AATTACCCCGAATGTGGTTCAGAGCTATATGAAAGTTACCAAACCGATTACCAGCGCAGAATTTCT

GACCTTTGGTGGTCGTGATCGCAATATTGTTCCGCAGAGCATTCAGAGCCAGCTGTATAACAAAGT

TCTGAGCGATTATAAACGTATTGCCAGCCGTCTGAATAAAGTTAATACCGCAACCGCACTGATCAA

CATCGATGAATTCAAAAACCTGTACGAGTGGAAATACCAGTTTGCCAAAGATAGCAATGGTGTGTA

TAGCGTGGATCTGAACAAATTTGAGCAGCTGTACAAAAAAATCTATAGCTTCACCGAATTCAACCT

GGCCTATGAGTTTAAAATCAAAACCCGTCTGGGTTATCTGGCCGAAAATTTTGGTCCGTTTTATCTG

CCGAATCTGCTGGATGATAGCATTTATACCGAAGTGGATGGTTTTAACATTGGTGCACTGAGCATT

AACTATCAGGGTCAGAATATTGGCAGCGATATCAACAGCATCAAAAAACTGCAAGGTCAGGGTGT

TGTTAGCCGTGTTGTTCGTCTGTGTAGCAATAGCAATACCAAAAACAGCCTGTGCATTACCGTTAAT

AATCGCGACCTGTTTTTTATCGCAAGCCAAGAAAGCTATGGCGAGAATACCATTAACACCTATAAA

GAGATTGACGATACCACCACACTGGATCCGAGCTTTGAAGATATTCTGGATAAAGTGATCCTGAAC

TTCAACGAACAGGTTATTCCGCAGATGCCGAATCGTAATGTTAGCACCGATATTCAGAAAGACAAC

TACATCCCGAAATACGATTATAACCGCACCGACATTATCGATAGCTATGAAGTTGGTCGCAACTAC

AACACCTTTTTCTATCTGAATGCCCAGAAATTTAGCCCGAACGAAAGCAATATTACCCTGACCAGC

AGCTTTGATACAGGTCTGTTAGAAGGTAGCAAAGTGTATACCTTTTTCAGCAGCGATTTCATTAACA

ACATCAACAAACCGGTTCAGGCCCTGCTGTTTATTGAATGGGTTAAACAGGTGATTCGCGATTTTA

CCACCGAAGCAACCAAAACCTCAACCGTTGATAAACTGAAAGATATTAGCCTGGTGGTGCCGTATA

TTGGTCTGGCACTGAATATTGGTGATGAGATCTACAAACAGCATTTTGCAGAAGCAGTTGAACTGG

TTGGTGCAGGTCTGCTGCTGGAATTTTCACCGGAATTTCTTATTCCGACGCTGCTGATTTTTACCATC

AAAGGTTATCTGACCGGTAGCATTCGCGATAAAGACAAAATCATTAAAACCCTGGATAACGCCCTG

AATGTTCGTGATCAGAAATGGAAAGAACTGTATCGTTGGGTTGTTAGCAAATGGCTGACCACCATT

AATACGCAGTTCAACAAACGCAAAGAACAAATGTACAAAGCCCTGAAAAATCAGGCCACCGCCAT

TAAAAAGATCATCGAGAACAAATATAACAACTATACCACCGATGAAAAAAGCAAGATCGATAGCA

GCTATAACATCAACGAAATTGAACGCACCCTGAACGAAAAAATCAATCTGGCCATGAAAAACATC

GAGCAGTTTATTACCGAAAGCAGCATTGCCTATCTGATCAATATCATCAACAACGAAACGATCCAG

AAACTGAAAAGCTATGATGACCTGGTTCGTCGTTATCTGCTGGGTTATATTCGTAATCATAGCAGC

ATTCTGGGCAATAGCGTTGAAGAACTGAATTCCAAAGTGAACAACCATCTGGATAATGGCATTCCG

TTTGAACTGAGCAGTTATACCAATGATAGCCTGCTGATCCGCTACTTCAATAAAAACTATGGCGAA

CTGAAGTACAACTGCATTCTGAACATCAAATATGAGATGGATCGTGACAAACTGGTTGATAGCAGC

GGTTATCGTAGCCGTATCAATATTGGTACAGGCGTCAAATTTAGCGAGATCGATAAAAATCAAGTG

CAGCTGAGCAATCTGGAATCCAGCAAAATTGAAGTCATTCTGAATAACGGCGTCATCTATAACAGC

ATGTATGAAAACTTTTCGACCAGCTTTTGGATTCGCATTCCGAAATACTTTCGCAACATCAATAACG

AGTACAAGATCATCAGCTGTATGCAGAATAATAGCGGTTGGGAAGTGAGCCTGAATTTTAGCAATA

TGAACTCGAAAATCATCTGGACCCTGCAGGATACCGAAGGTATCAAAAAAACCGTTGTGTTTCAGT

ACACCCAGAACATTAACATTAGCGACTATATCAACCGCTGGATCTTTGTGACCATTACAAATAATC

GTCTGAGCAACAGCAAAATCTACATTAATGGTCGCCTGATCAACGAAGAAAGCATTAGCGATCTGG

GTAATATCCATGCCAGCAACAACATTATGTTTAAACTGGATGGTTGCCGTGATCCGCATCGTTATAT

CTGGATTAAATACTTTAACCTGTTTGACAAAGAGCTGAACAAGAAAGAAATTAAAGATCTGTACGA

CAACCAGAGCAATAGCGGTATTCTGAAAGATTTCTGGGGTGATTATCTGCAGTATGACAAACCGTA

TTATATGCTGAATCTGTATGACCCGAATAAGTATCTGGATGTGAATAATGTTGGCATCCGTGGCTAT

ATGTATCTGAAAGGTCCGCGTGGTCGTATTGTGACCACCAACATTTATCTGAATAGCACCCTGTATA

TGGGCACCAAATTCATCATTAAGAAATATGCCAGCGGCAACAAAGATAACATTGTGCGTAATAATG

ATCGCGTGTATATTAACGTGGTGGTGAAGAATAAAGAATATCGCCTGGCAACCAATGCAAGCCAG

GCAGGCGTTGAAAAAATTCTGAGCGCAGTTGAAATCCCGGATGTTGGTAATCTGAGCCAGGTTGTT

GTGATGAAAAGCGAAAATGATCAGGGCATTCGCAACAAGTGTAAAATGAATCTGCAAGACAATAA

CGGCAACGATATTGGCTTTATCGGCTTTCACCAGTTTAATAACATTGCAAAACTGGTGGCCAGCAA

CTGGTATAACCGTCAGATTGGTAAAGCAAGCCGTACCTTTGGTTGTAGCTGGGAATTTATCCCGGTT

GATGATGGTTGGGGTGAAAGCAGCCTGGAAAATCTGTATTTCCAGGGTGCCAGTCATCATCACCAC

CATCACCATCACTGA

SEQID NO:26-rBoNT/FA(0)(加His标签)的多肽序列

MPVVINSFNYDDPVNDNTIIYIRPPYYETSNTYFKAFQIMDNVWIIPERYRLGIDPSLFNPPVSLKAGSDG

YFDPNYLSTNTEKNKYLQIMIKLFKRINSKPAGQILLEEIKNAIPYLGNSYTQEEQFTTNNRTVSFNVKLA

NGNIVQQMANLIIWGPGPDLTTNKTGGIIYSPYQSMEATPYKDGFGSIMTVEFSPEYATAFNDISIASHSP

SLFIKDPALILMHQLIYVLHGLYGTYITEYKITPNVVQSYMKVTKPITSAEFLTFGGRDRNIVPQSIQSQLY

NKVLSDYKRIASRLNKVNTATALINIDEFKNLYEWKYQFAKDSNGVYSVDLNKFEQLYKKIYSFTEFNL

AYEFKIKTRLGYLAENFGPFYLPNLLDDSIYTEVDGFNIGALSINYQGQNIGSDINSIKKLQGQGVVSRVV

RLCSNSNTKNSLCITVNNRDLFFIASQESYGENTINTYKEIDDTTTLDPSFEDILDKVILNFNEQVIPQMPN

RNVSTDIQKDNYIPKYDYNRTDIIDSYEVGRNYNTFFYLNAQKFSPNESNITLTSSFDTGLLEGSKVYTFF

SSDFINNINKPVQALLFIEWVKQVIRDFTTEATKTSTVDKLKDISLVVPYIGLALNIGDEIYKQHFAEAVE

LVGAGLLLEFSPEFLIPTLLIFTIKGYLTGSIRDKDKIIKTLDNALNVRDQKWKELYRWVVSKWLTTINTQ

FNKRKEQMYKALKNQATAIKKIIENKYNNYTTDEKSKIDSSYNINEIERTLNEKINLAMKNIEQFITESSI

AYLINIINNETIQKLKSYDDLVRRYLLGYIRNHSSILGNSVEELNSKVNNHLDNGIPFELSSYTNDSLLIRY

FNKNYGELKYNCILNIKYEMDRDKLVDSSGYRSRINIGTGVKFSEIDKNQVQLSNLESSKIEVILNNGVIY

NSMYENFSTSFWIRIPKYFRNINNEYKIISCMQNNSGWEVSLNFSNMNSKIIWTLQDTEGIKKTVVFQYT

QNINISDYINRWIFVTITNNRLSNSKIYINGRLINEESISDLGNIHASNNIMFKLDGCRDPHRYIWIKYFNLF

DKELNKKEIKDLYDNQSNSGILKDFWGDYLQYDKPYYMLNLYDPNKYLDVNNVGIRGYMYLKGPRG

RIVTTNIYLNSTLYMGTKFIIKKYASGNKDNIVRNNDRVYINVVVKNKEYRLATNASQAGVEKILSAVEI

PDVGNLSQVVVMKSENDQGIRNKCKMNLQDNNGNDIGFIGFHQFNNIAKLVASNWYNRQIGKASRTF

GCSWEFIPVDDGWGESSLENLYFQGASHHHHHHHH

SEQ IDNO:27-rLH_N/FA(加His标签)的核苷酸序列

ATGCCGGTTGTGATTAACAGCTTCAATTATGATGATCCGGTGAACGATAACACCATCATTTATATCC

GTCCGCCTTATTATGAAACCAGCAACACCTATTTCAAAGCCTTCCAGATTATGGATAACGTGTGGA

TTATTCCGGAACGTTATCGTCTGGGTATTGATCCGAGCCTGTTTAATCCGCCTGTTAGCCTGAAAGC

AGGTAGTGATGGTTATTTTGATCCGAATTATCTGAGCACCAACACCGAGAAAAACAAATACCTGCA

GATTATGATCAAGCTGTTCAAACGCATTAATAGCAAACCGGCAGGTCAGATTCTGCTGGAAGAAAT

CAAAAATGCAATTCCGTATCTGGGCAACAGCTATACCCAAGAAGAACAGTTTACCACCAATAATCG

TACCGTGAGCTTTAATGTTAAACTGGCCAATGGTAATATCGTTCAGCAGATGGCAAATCTGATTATT

TGGGGTCCGGGTCCTGATCTGACCACAAATAAAACCGGTGGTATCATCTATAGCCCGTATCAGAGC

ATGGAAGCAACCCCGTATAAAGATGGTTTTGGTAGCATTATGACCGTGGAATTTAGTCCGGAATAT

GCAACCGCCTTTAACGATATTTCAATTGCAAGCCATAGTCCGTCGCTGTTTATCAAAGATCCGGCAC

TGATTCTGATGCATGAACTGATTCATGTTCTGCATGGTCTGTATGGCACCTATATTACCGAATACAA

AATTACCCCGAATGTGGTGCAGAGCTATATGAAAGTTACCAAACCGATTACCAGCGCAGAATTTCT

GACCTTTGGTGGTCGTGATCGCAATATTGTTCCGCAGAGCATTCAGAGCCAGCTGTATAACAAAGT

TCTGAGCGATTATAAACGTATTGCCAGCCGTCTGAATAAAGTTAATACCGCAACCGCACTGATCAA

CATCGATGAATTCAAAAACCTGTACGAGTGGAAATACCAGTTTGCCAAAGATAGCAATGGTGTGTA

TAGCGTGGATCTGAACAAATTTGAGCAGCTGTACAAAAAAATCTATAGCTTCACCGAATTCAACCT

GGCCTATGAGTTTAAAATCAAAACCCGTCTGGGTTATCTGGCCGAAAATTTTGGTCCGTTTTATCTG

CCGAATCTGCTGGATGATAGCATTTATACCGAAGTGGATGGTTTTAACATTGGTGCACTGAGCATT

AACTATCAGGGTCAGAATATTGGCAGCGATATCAACAGCATCAAAAAACTGCAAGGTCAGGGTGT

TGTTAGCCGTGTTGTTCGTCTGTGTAGCAATAGCAATACCAAAAACAGCCTGTGCATTACCGTTAAT

AATCGCGACCTGTTTTTTATCGCAAGCCAAGAAAGCTATGGCGAGAATACCATTAACACCTATAAA

GAGATTGACGATACCACCACACTGGATCCGAGCTTTGAAGATATTCTGGATAAAGTGATCCTGAAC

TTCAACGAACAGGTTATTCCGCAGATGCCGAATCGTAATGTTAGCACCGATATTCAGAAAGACAAC

TACATCCCGAAATACGATTATAACCGCACCGACATTATCGATAGCTATGAAGTTGGTCGCAACTAC

AACACCTTTTTCTATCTGAATGCCCAGAAATTTAGCCCGAACGAAAGCAATATTACCCTGACCAGC

AGCTTTGATACAGGTCTGTTAGAAGGTAGCAAAGTGTATACCTTTTTCAGCAGCGATTTCATTAACA

ACATCAACAAACCGGTTCAGGCCCTGCTGTTTATTGAATGGGTTAAACAGGTGATTCGCGATTTTA

CCACCGAAGCAACCAAAACCTCAACCGTTGATAAACTGAAAGATATTAGCCTGGTGGTGCCGTATA

TTGGTCTGGCACTGAATATTGGTGATGAGATCTACAAACAGCATTTTGCAGAAGCAGTTGAACTGG

TTGGTGCAGGTCTGCTGCTGGAATTTTCACCGGAATTTCTTATTCCGACGCTGCTGATTTTTACCATC

AAAGGTTATCTGACCGGTAGCATTCGCGATAAAGACAAAATCATTAAAACCCTGGATAACGCCCTG

AATGTTCGTGATCAGAAATGGAAAGAACTGTATCGTTGGGTTGTTAGCAAATGGCTGACCACCATT

AATACGCAGTTCAACAAACGCAAAGAACAAATGTACAAAGCCCTGAAAAATCAGGCCACCGCCAT

TAAAAAGATCATCGAGAACAAATATAACAACTATACCACCGATGAAAAAAGCAAGATCGATAGCA

GCTATAACATCAACGAAATTGAACGCACCCTGAACGAAAAAATCAATCTGGCCATGAAAAACATC

GAGCAGTTTATTACAGAAAGCAGCATTGCCTACCTGATCAATATCATCAACAACGAAACCATTCAG

AAACTGAAAAGCTATGATGACCTGGTTCGTCGTTATCTGCTGGGTTATATTCGTAATCATAGCAGC

ATTCTGGGCAATAGCGTTGAAGAACTGAATTCCAAAGTGAACAACCATCTGGATAATGGCATTCCG

TTTGAACTGAGCAGTTATACCAATGATAGCCTGCTGATCCGCTACTTCAATAAAAACTATGGCGAA

GAGAACCTGTATTTCCAGGGTGCCAGTCATCATCACCACCATCACCATCACTGA

SEQ ID NO:28-rLH_N/FA(加His标签)的多肽序列

MPVVINSFNYDDPVNDNTIIYIRPPYYETSNTYFKAFQIMDNVWIIPERYRLGIDPSLFNPPVSLKAGSDG

YFDPNYLSTNTEKNKYLQIMIKLFKRINSKPAGQILLEEIKNAIPYLGNSYTQEEQFTTNNRTVSFNVKLA

NGNIVQQMANLIIWGPGPDLTTNKTGGIIYSPYQSMEATPYKDGFGSIMTVEFSPEYATAFNDISIASHSP

SLFIKDPALILMHELIHVLHGLYGTYITEYKITPNVVQSYMKVTKPITSAEFLTFGGRDRNIVPQSIQSQLY

NKVLSDYKRIASRLNKVNTATALINIDEFKNLYEWKYQFAKDSNGVYSVDLNKFEQLYKKIYSFTEFNL

AYEFKIKTRLGYLAENFGPFYLPNLLDDSIYTEVDGFNIGALSINYQGQNIGSDINSIKKLQGQGVVSRVV

RLCSNSNTKNSLCITVNNRDLFFIASQESYGENTINTYKEIDDTTTLDPSFEDILDKVILNFNEQVIPQMPN

RNVSTDIQKDNYIPKYDYNRTDIIDSYEVGRNYNTFFYLNAQKFSPNESNITLTSSFDTGLLEGSKVYTFF

SSDFINNINKPVQALLFIEWVKQVIRDFTTEATKTSTVDKLKDISLVVPYIGLALNIGDEIYKQHFAEAVE

LVGAGLLLEFSPEFLIPTLLIFTIKGYLTGSIRDKDKIIKTLDNALNVRDQKWKELYRWVVSKWLTTINTQ

FNKRKEQMYKALKNQATAIKKIIENKYNNYTTDEKSKIDSSYNINEIERTLNEKINLAMKNIEQFITESSI

AYLINIINNETIQKLKSYDDLVRRYLLGYIRNHSSILGNSVEELNSKVNNHLDNGIPFELSSYTNDSLLIRY

FNKNYGEENLYFQGASHHHHHHHH

SEQ IDNO:29-rH_C/FA (加His标签)的核苷酸序列

ATGCTGAAGTATAACTGCATCCTGAACATCAAATATGAGATGGATCGTGATAAACTGGTTGATAGC

AGCGGTTATCGTAGCCGTATCAATATTGGCACCGGTGTGAAATTTAGCGAGATCGATAAAAATCAG

GTGCAGCTGAGCAATCTGGAAAGCAGCAAAATTGAAGTGATTCTGAATAACGGCGTGATCTACAA

TAGCATGTATGAAAACTTTTCGACCAGCTTCTGGATTCGCATTCCGAAATACTTTCGCAACATCAAC

AACGAGTACAAGATTATCAGCTGTATGCAGAATAATAGCGGTTGGGAAGTTAGCCTGAATTTCAGC

AATATGAACAGCAAAATCATTTGGACCCTGCAGGATACCGAAGGTATCAAAAAAACCGTTGTGTTT

CAGTACACCCAGAACATTAACATCAGCGATTACATTAACCGCTGGATCTTTGTGACCATTACCAAT

AATCGTCTGAGCAACAGCAAGATCTATATTAACGGTCGCCTGATTAACGAAGAGAGCATTAGCGAT

CTGGGTAATATTCATGCCAGCAACAACATCATGTTTAAACTGGATGGTTGTCGTGATCCGCATCGTT

ATATTTGGATCAAATACTTCAACCTGTTTGATAAAGAACTGAACAAAAAAGAAATCAAAGACCTGT

ATGATAACCAGAGCAATAGCGGCATTCTGAAAGATTTTTGGGGTGATTATCTGCAGTATGACAAAC

CGTATTACATGCTGAATCTGTACGATCCGAACAAATATCTGGATGTGAATAATGTGGGTATCCGTG

GCTATATGTATCTGAAAGGTCCGCGTGGTCGTATTGTTACCACCAACATTTATCTGAATAGCACCCT

GTATATGGGCACCAAATTCATCATTAAAAAGTATGCCAGCGGCAACAAAGATAACATTGTGCGTAA

TAATGATCGCGTGTATATCAATGTGGTGGTGAAGAATAAAGAATATCGTCTGGCCACCAATGCAAG

CCAGGCAGGCGTTGAAAAAATTCTGAGCGCAGTTGAAATTCCGGATGTTGGTAATCTGAGCCAGGT

TGTTGTTATGAAAAGCGAAAATGATCAGGGCATTCGCAACAAATGCAAAATGAATCTGCAGGACA

ATAACGGCAACGATATTGGTTTTATTGGCTTCCACCAGTTCAACAACATTGCAAAACTGGTGGCGA

GCAATTGGTATAATCGTCAGATTGGTAAAGCAAGCCGTACCTTTGGTTGTAGCTGGGAATTTATTCC

GGTTGATGATGGTTGGGGTGAAAGCAGCCTGGAAAATCTGTATTTTCAGGGTGCAAGTCATCATCA

CCACCATCACCATCATTAA

SEQ ID NO:30-rH_C/FA(加His标签)的多肽序列

MLKYNCILNIKYEMDRDKLVDSSGYRSRINIGTGVKFSEIDKNQVQLSNLESSKIEVILNNGVIYNSMYE

NFSTSFWIRIPKYFRNINNEYKIISCMQNNSGWEVSLNFSNMNSKIIWTLQDTEGIKKTVVFQYTQNINIS

DYINRWIFVTITNNRLSNSKIYINGRLINEESISDLGNIHASNNIMFKLDGCRDPHRYIWIKYFNLFDKELN

KKEIKDLYDNQSNSGILKDFWGDYLQYDKPYYMLNLYDPNKYLDVNNVGIRGYMYLKGPRGRIVTTN

IYLNSTLYMGTKFIIKKYASGNKDNIVRNNDRVYINVVVKNKEYRLATNASQAGVEKILSAVEIPDVGN

LSQVVVMKSENDQGIRNKCKMNLQDNNGNDIGFIGFHQFNNIAKLVASNWYNRQIGKASRTFGCSWEF

IPVDDGWGESSLENLYFQGASHHHHHHHH

SEQ ID NO:31 -rLC/FA(加His标签)的核苷酸序列

ATGCCGGTTGTGATTAACAGCTTCAATTATGATGATCCGGTGAACGATAACACCATCATTTATATCC

GTCCGCCTTATTATGAAACCAGCAACACCTATTTCAAAGCCTTCCAGATTATGGATAACGTGTGGA

TTATTCCGGAACGTTATCGTCTGGGTATTGATCCGAGCCTGTTTAATCCGCCTGTTAGCCTGAAAGC

AGGTAGTGATGGTTATTTTGATCCGAATTATCTGAGCACCAACACCGAGAAAAACAAATACCTGCA

GATTATGATCAAGCTGTTCAAACGCATTAATAGCAAACCGGCAGGTCAGATTCTGCTGGAAGAAAT

CAAAAATGCAATTCCGTATCTGGGCAACAGCTATACCCAAGAAGAACAGTTTACCACCAATAATCG

TACCGTGAGCTTTAATGTTAAACTGGCCAATGGTAATATCGTTCAGCAGATGGCAAATCTGATTATT

TGGGGTCCGGGTCCTGATCTGACCACAAATAAAACCGGTGGTATCATCTATAGCCCGTATCAGAGC

ATGGAAGCAACCCCGTATAAAGATGGTTTTGGTAGCATTATGACCGTGGAATTTAGTCCGGAATAT

GCAACCGCCTTTAACGATATTTCAATTGCAAGCCATAGTCCGTCGCTGTTTATCAAAGATCCGGCAC

TGATTCTGATGCATGAACTGATTCATGTTCTGCATGGTCTGTATGGCACCTATATTACCGAATACAA

AATTACCCCGAATGTGGTGCAGAGCTATATGAAAGTTACCAAACCGATTACCAGCGCAGAATTTCT

GACCTTTGGTGGTCGTGATCGCAATATTGTTCCGCAGAGCATTCAGAGCCAGCTGTATAACAAAGT

TCTGAGCGATTATAAACGTATTGCCAGCCGTCTGAATAAAGTTAATACCGCAACCGCACTGATCAA

CATCGATGAATTCAAAAACCTGTACGAGTGGAAATACCAGTTTGCCAAAGATAGCAATGGTGTGTA

TAGCGTGGATCTGAACAAATTTGAGCAGCTGTACAAAAAAATCTATAGCTTCACCGAATTCAACCT

GGCCTATGAGTTTAAAATCAAAACCCGTCTGGGTTATCTGGCCGAAAATTTTGGTCCGTTTTATCTG

CCGAATCTGCTGGATGATAGCATTTATACCGAAGTGGATGGTTTTAACATTGGTGCACTGAGCATT

AACTATCAGGGTCAGAATATTGGCAGCGATATCAACAGCATCAAAAAACTGCAAGGTCAGGGTGT

TGTTAGCCGTGTTGTTCGTCTGTGTAGCAATAGCGAAAATCTGTATTTTCAGGGTGCCAGTCATCAT

CACCACCATCACCATCACTGA

SEQIDNO:32-rLC/FA(加His标签)的多肽序列

MPVVINSFNYDDPVNDNTIIYIRPPYYETSNTYFKAFQIMDNVWIIPERYRLGIDPSLFNPPVSLKAGSDG

YFDPNYLSTNTEKNKYLQIMIKLFKRINSKPAGQILLEEIKNAIPYLGNSYTQEEQFTTNNRTVSFNVKLA

NGNIVQQMANLIIWGPGPDLTTNKTGGIIYSPYQSMEATPYKDGFGSIMTVEFSPEYATAFNDISIASHSP

SLFIKDPALILMHELIHVLHGLYGTYITEYKITPNVVQSYMKVTKPITSAEFLTFGGRDRNIVPQSIQSQLY

NKVLSDYKRIASRLNKVNTATALINIDEFKNLYEWKYQFAKDSNGVYSVDLNKFEQLYKKIYSFTEFNL

AYEFKIKTRLGYLAENFGPFYLPNLLDDSIYTEVDGFNIGALSINYQGQNIGSDINSIKKLQGQGVVSRVV

RLCSNSENLYFQGASHHHHHHHH

SEQID NO:33-rBoNT/F(0)(加His标签)的核苷酸序列

ATGCCGGTTGTGATTAACAGCTTCAATTATAACGATCCGGTGAACGATGATACCATCCTGTATATG

CAGATTCCGTATGAAGAGAAAAGCAAAAAGTACTACAAAGCCTTTGAGATCATGCGCAACGTTTG

GATTATTCCGGAACGTAATACCATTGGCACCGATCCGAGCGATTTTGATCCGCCTGCAAGCCTGGA

AAATGGTAGCAGCGCATATTATGATCCGAATTATCTGACCACCGATGCCGAAAAAGATCGTTATCT

GAAAACCACCATCAAACTGTTCAAACGCATTAATAGCAATCCGGCAGGCGAAGTTCTGCTGCAAG

AAATTAGCTATGCAAAACCGTATCTGGGCAATGAACATACCCCGATTAATGAATTTCATCCGGTTA

CACGTACCACGAGCGTTAACATTAAAAGCAGCACCAATGTGAAGTCCAGCATTATTCTGAATCTGC

TGGTTTTAGGTGCAGGTCCGGATATTTTTGAAAATTCAAGCTATCCGGTGCGCAAACTGATGGATA

GCGGTGGTGTGTATGATCCGTCAAATGATGGTTTTGGCAGCATTAACATTGTGACCTTTAGTCCGGA

ATATGAATACACCTTCAACGATATTAGCGGTGGCTATAATAGCAGCACCGAAAGTTTTATTGCAGA

TCCGGCAATTAGCCTGGCACACCAGCTGATTTATGCACTGCATGGTCTGTATGGTGCACGTGGTGTT

ACCTATAAAGAAACCATTAAAGTTAAACAGGCACCGCTGATGATTGCGGAAAAACCGATTCGTCTG

GAAGAATTTCTGACCTTTGGTGGTCAGGATCTGAACATTATTACCAGCGCAATGAAAGAGAAAATC

TATAATAACCTGCTGGCCAACTATGAGAAAATTGCAACCCGTCTGAGCCGTGTTAATAGCGCACCT

CCTGAATATGATATCAACGAGTATAAAGACTATTTTCAGTGGAAATACGGCCTGGATAAAAATGCA

GATGGTAGCTATACCGTGAACGAGAACAAATTTAACGAGATCTACAAAAAACTGTATAGCTTCACC

GAAATCGATCTGGCCAACAAATTCAAAGTGAAATGCCGCAACACCTACTTCATCAAATATGGCTTT

CTGAAAGTTCCGAACCTGCTTGATGATGATATCTATACCGTTAGCGAAGGCTTTAACATTGGTAATC

TGGCCGTTAATAATCGCGGTCAGAACATTAAACTGAACCCGAAAATTATCGATAGCATCCCGGATA

AAGGCCTGGTTGAAAAAATTGTGAAATTCTGCAAAAGCGTGATTCCGCGTAAAGGCACCAAAGCA

CCGCCTCGTCTGTGTATTCGTGTGAATAATCGTGAACTGTTTTTTGTTGCAAGCGAGAGCAGCTATA

ACGAGAATGATATTAACACCCCGAAAGAGATTGACGATACCACCAATCTGAATAACAACTATCGC

AACAATCTGGATGAAGTGATCCTGGATTATAACAGCGAAACCATTCCGCAGATTAGCAATCAGACC

CTGAATACCCTGGTTCAGGATGATAGCTATGTTCCGCGTTATGATAGCAATGGCACCAGCGAAATT

GAAGAACATAATGTGGTTGATCTGAACGTGTTCTTTTATCTGCATGCACAGAAAGTGCCGGAAGGT

GAAACCAATATTAGCCTGACCAGCAGCATTGATACCGCACTGAGCGAAGAAAGCCAGGTTTATAC

CTTTTTTAGCAGCGAATTCATCAACACCATTAACAAACCGGTTCATGCAGCACTGTTTATTAGCTGG

ATTAATCAGGTGATTCGCGATTTTACCACCGAAGCAACCCAGAAAAGCACCTTTGATAAAATTGCC

GATATTAGTCTGGTGGTGCCGTATGTTGGTCTGGCACTGAATATTGGTAATGAAGTGCAGAAAGAG

AACTTTAAAGAAGCCTTCGAACTGTTAGGTGCCGGTATTCTGCTGGAATTTGTGCCGGAACTGCTG

ATTCCGACCATTCTGGTTTTTACCATTAAGAGCTTTATTGGCAGCAGCGAGAACAAGAACAAAATC

ATTAAAGCCATCAACAACAGCCTGATGGAACGCGAAACCAAATGGAAAGAAATTTACAGCTGGAT

TGTGAGCAATTGGCTGACCCGTATCAATACCCAGTTTAACAAACGCAAAGAACAAATGTATCAGGC

CCTGCAGAATCAGGTTGATGCAATTAAAACCGTGATCGAATACAAATACAACAACTATACCAGCG

ACGAACGTAATCGCCTGGAAAGCGAATACAACATTAATAACATTCGCGAAGAACTGAACAAAAAA

GTGAGCCTGGCAATGGAAAACATCGAACGTTTTATTACCGAAAGCAGCATCTTCTACCTGATGAAA

CTGATTAACGAAGCCAAAGTTAGCAAACTGCGCGAATATGATGAAGGCGTTAAAGAATATCTGCT

GGACTATATTAGCGAACATCGTAGCATTCTGGGTAATAGCGTTCAAGAGCTGAATGATCTGGTTAC

CAGCACACTGAATAATAGCATTCCGTTTGAACTGAGCAGCTACACCAACGATAAAATCCTGATCCT

GTACTTCAACAAACTGTACAAGAAGATCAAGGACAACAGCATACTGGATATGCGCTATGAAAACA

ACAAGTTCATTGATATCAGCGGCTATGGTAGCAACATTAGCATTAATGGTGATGTGTATATCTACA

GCACCAACCGCAATCAGTTTGGTATTTATAGCAGCAAACCGAGCGAAGTTAATATTGCGCAGAATA

ACGATATCATCTACAACGGTCGCTATCAGAACTTTAGCATTAGCTTTTGGGTTCGCATTCCGAAATA

CTTTAACAAGGTGAACCTGAACAACGAGTACACCATTATTGATTGCATTCGCAATAATAACAGCGG

CTGGAAAATCAGCCTGAACTATAACAAAATTATCTGGACCCTGCAGGATACCGCAGGTAATAATCA

GAAACTGGTGTTTAACTACACCCAGATGATTAGCATCAGCGACTATATCAACAAATGGATCTTTGT

GACCATTACCAACAATCGTCTGGGTAACAGCCGCATTTATATCAATGGCAATCTGATCGACGAAAA

AAGCATTTCAAATCTGGGCGATATTCACGTGAGCGATAACATTCTGTTCAAAATTGTTGGCTGCAA

CGATACCCGTTATGTTGGTATTCGTTACTTCAAAGTGTTTGATACGGAACTGGGCAAAACGGAAAT

TGAAACCCTGTATAGTGATGAACCGGATCCGAGCATTCTGAAAGATTTTTGGGGTAATTATCTGCT

GTACAACAAACGCTACTATCTGCTGAACCTGCTGCGTACCGATAAAAGCATTACACAGAATAGCAA

CTTTCTGAACATCAATCAGCAGCGTGGTGTTTATCAGAAACCGAACATTTTTAGCAACACCCGTCTG

TATACCGGTGTGGAAGTTATTATTCGTAAAAACGGTAGCACCGATATCAGCAACACCGATAACTTT

GTGCGTAAAAATGACCTGGCCTATATTAACGTTGTTGATCGTGATGTTGAGTATCGTCTGTATGCGG

ATATTAGCATTGCCAAACCGGAAAAGATTATCAAACTGATCCGTACCAGCAACAGCAATAATTCAC

TGGGTCAGATTATCGTGATGGACAGCATTGGTAACAATTGCACCATGAATTTCCAGAACAATAACG

GTGGTAATATTGGCCTGCTGGGCTTTCATAGCAATAATCTGGTTGCAAGCAGCTGGTATTACAACA

ACATCCGTAAAAATACCAGCAGTAATGGTTGCTTTTGGAGCTTTATCAGTAAAGAACATGGCTGGC

AAGAAAACGAGAACCTGTATTTTCAGGGTGCAAGTCATCATCACCATCACCACCATCATTAA

SEQID NO:34-rBoNT/F(0)(加His标签)的多肽序列

MPVVINSFNYNDPVNDDTILYMQIPYEEKSKKYYKAFEIMRNVWIIPERNTIGTDPSDFDPPASLENGSS

AYYDPNYLTTDAEKDRYLKTTIKLFKRINSNPAGEVLLQEISYAKPYLGNEHTPINEFHPVTRTTSVNIKS

STNVKSSIILNLLVLGAGPDIFENSSYPVRKLMDSGGVYDPSNDGFGSINIVTFSPEYEYTFNDISGGYNSS

TESFIADPAISLAHQLIYALHGLYGARGVTYKETIKVKQAPLMIAEKPIRLEEFLTFGGQDLNIITSAMKE

KIYNNLLANYEKIATRLSRVNSAPPEYDINEYKDYFQWKYGLDKNADGSYTVNENKFNEIYKKLYSFTE

IDLANKFKVKCRNTYFIKYGFLKVPNLLDDDIYTVSEGFNIGNLAVNNRGQNIKLNPKIIDSIPDKGLVEK

IVKFCKSVIPRKGTKAPPRLCIRVNNRELFFVASESSYNENDINTPKEIDDTTNLNNNYRNNLDEVILDYN

SETIPQISNQTLNTLVQDDSYVPRYDSNGTSEIEEHNVVDLNVFFYLHAQKVPEGETNISLTSSIDTALSEE

SQVYTFFSSEFINTINKPVHAALFISWINQVIRDFTTEATQKSTFDKIADISLVVPYVGLALNIGNEVQKEN

FKEAFELLGAGILLEFVPELLIPTILVFTIKSFIGSSENKNKIIKAINNSLMERETKWKEIYSWIVSNWLTRI

NTQFNKRKEQMYQALQNQVDAIKTVIEYKYNNYTSDERNRLESEYNINNIREELNKKVSLAMENIERFI

TESSIFYLMKLINEAKVSKLREYDEGVKEYLLDYISEHRSILGNSVQELNDLVTSTLNNSIPFELSSYTND

KILILYFNKLYKKIKDNSILDMRYENNKFIDISGYGSNISINGDVYIYSTNRNQFGIYSSKPSEVNIAQNNDI

IYNGRYQNFSISFWVRIPKYFNKVNLNNEYTIIDCIRNNNSGWKISLNYNKIIWTLQDTAGNNQKLVFNY

TQMISISDYINKWIFVTITNNRLGNSRIYINGNLIDEKSISNLGDIHVSDNILFKIVGCNDTRYVGIRYFKVF

DTELGKTEIETLYSDEPDPSILKDFWGNYLLYNKRYYLLNLLRTDKSITQNSNFLNINQQRGVYQKPNIF

SNTRLYTGVEVIIRKNGSTDISNTDNFVRKNDLAYINVVDRDVEYRLYADISIAKPEKIIKLIRTSNSNNSL

GQIIVMDSIGNNCTMNFQNNNGGNIGLLGFHSNNLVASSWYYNNIRKNTSSNGCFWSFISKEHGWQEN

ENLYFQGASHHHHHHHH

SEQ ID NO: 35-rL_HN/F(加His标签)的核苷酸序列

ATGCCGGTTGTGATTAACAGCTTCAATTATAACGATCCGGTGAACGATGATACCATCCTGTATATG

CAGATTCCGTATGAAGAGAAAAGCAAAAAGTACTACAAAGCCTTTGAGATCATGCGCAACGTTTG

GATTATTCCGGAACGTAATACCATTGGCACCGATCCGAGCGATTTTGATCCGCCTGCAAGCCTGGA

AAATGGTAGCAGCGCATATTATGATCCGAATTATCTGACCACCGATGCCGAAAAAGATCGTTATCT

GAAAACCACCATCAAACTGTTCAAACGCATTAATAGCAATCCGGCAGGCGAAGTTCTGCTGCAAG

AAATTAGCTATGCAAAACCGTATCTGGGCAATGAACATACCCCGATTAATGAATTTCATCCGGTTA

CACGTACCACGAGCGTTAACATTAAAAGCAGCACCAATGTGAAGTCCAGCATTATTCTGAATCTGC

TGGTTTTAGGTGCAGGTCCGGATATTTTTGAAAATTCAAGCTATCCGGTGCGCAAACTGATGGATA

GCGGTGGTGTGTATGATCCGTCAAATGATGGTTTTGGCAGCATTAACATTGTGACCTTTAGTCCGGA

ATATGAATACACCTTCAACGATATTAGCGGTGGCTATAATAGCAGCACCGAAAGTTTTATTGCAGA

TCCGGCAATTAGCCTGGCACATGAACTGATTCATGCACTGCATGGTCTGTATGGTGCACGTGGTGTT

ACCTATAAAGAAACCATTAAAGTTAAACAGGCACCGCTGATGATTGCGGAAAAACCGATTCGTCTG

GAAGAATTTCTGACCTTTGGTGGTCAGGATCTGAACATTATTACCAGCGCAATGAAAGAGAAAATC

TATAATAACCTGCTGGCCAACTATGAGAAAATTGCAACCCGTCTGAGCCGTGTTAATAGCGCACCT

CCTGAATATGATATCAACGAGTATAAAGACTATTTTCAGTGGAAATACGGCCTGGATAAAAATGCA

GATGGTAGCTATACCGTGAACGAGAACAAATTTAACGAGATCTACAAAAAACTGTATAGCTTCACC

GAAATCGATCTGGCCAACAAATTCAAAGTGAAATGCCGCAACACCTACTTCATCAAATATGGCTTT

CTGAAAGTTCCGAACCTGCTTGATGATGATATCTATACCGTTAGCGAAGGCTTTAACATTGGTAATC

TGGCCGTTAATAATCGCGGTCAGAACATTAAACTGAACCCGAAAATTATCGATAGCATCCCGGATA

AAGGCCTGGTTGAAAAAATTGTGAAATTCTGCAAAAGCGTGATTCCGCGTAAAGGCACCAAAGCA

CCGCCTCGTCTGTGTATTCGTGTGAATAATCGTGAACTGTTTTTTGTTGCAAGCGAGAGCAGCTATA

ACGAGAATGATATTAACACCCCGAAAGAGATTGACGATACCACCAATCTGAATAACAACTATCGC

AACAATCTGGATGAAGTGATCCTGGATTATAACAGCGAAACCATTCCGCAGATTAGCAATCAGACC

CTGAATACCCTGGTTCAGGATGATAGCTATGTTCCGCGTTATGATAGCAATGGCACCAGCGAAATT

GAAGAACATAATGTGGTTGATCTGAACGTGTTCTTTTATCTGCATGCACAGAAAGTGCCGGAAGGT

GAAACCAATATTAGCCTGACCAGCAGCATTGATACCGCACTGAGCGAAGAAAGCCAGGTTTATAC

CTTTTTTAGCAGCGAATTCATCAACACCATTAACAAACCGGTTCATGCAGCACTGTTTATTAGCTGG

ATTAATCAGGTGATTCGCGATTTTACCACCGAAGCAACCCAGAAAAGCACCTTTGATAAAATTGCC

GATATTAGTCTGGTGGTGCCGTATGTTGGTCTGGCACTGAATATTGGTAATGAAGTGCAGAAAGAG

AACTTTAAAGAAGCCTTCGAACTGTTAGGTGCCGGTATTCTGCTGGAATTTGTGCCGGAACTGCTG

ATTCCGACCATTCTGGTTTTTACCATTAAGAGCTTTATTGGCAGCAGCGAGAACAAGAACAAAATC

ATTAAAGCCATCAACAACAGCCTGATGGAACGCGAAACCAAATGGAAAGAAATTTACAGCTGGAT

TGTGAGCAATTGGCTGACCCGTATCAATACCCAGTTTAACAAACGCAAAGAACAAATGTATCAGGC

CCTGCAGAATCAGGTTGATGCAATTAAAACCGTGATCGAATACAAATACAACAACTATACCAGCG

ACGAACGTAATCGCCTGGAAAGCGAATACAACATTAATAACATTCGCGAAGAACTGAACAAAAAA

GTGAGCCTGGCAATGGAAAACATCGAACGTTTTATTACCGAAAGCAGCATCTTCTACCTGATGAAA

CTGATTAACGAAGCCAAAGTTAGCAAACTGCGCGAATATGATGAAGGCGTTAAAGAATATCTGCT

GGACTATATTAGCGAACATCGTAGCATTCTGGGTAATAGCGTTCAAGAGCTGAATGATCTGGTTAC

CAGCACACTGAATAATAGCATTCCGTTTGAACTGAGCAGCTACACCAACGATAAAATCCTGATCCT

GTACTTCAACAAACTGTACAAGAAAGAAAACCTGTATTTTCAGGGTGCAAGCCATCATCACCACCA

TCACCATCATTAA

SEQ ID NO:36-rL_HN/F (加His标签)的多肽序列

MPVVINSFNYNDPVNDDTILYMQIPYEEKSKKYYKAFEIMRNVWIIPERNTIGTDPSDFDPPASLENGSS

AYYDPNYLTTDAEKDRYLKTTIKLFKRINSNPAGEVLLQEISYAKPYLGNEHTPINEFHPVTRTTSVNIKS

STNVKSSIILNLLVLGAGPDIFENSSYPVRKLMDSGGVYDPSNDGFGSINIVTFSPEYEYTFNDISGGYNSS

TESFIADPAISLAHELIHALHGLYGARGVTYKETIKVKQAPLMIAEKPIRLEEFLTFGGQDLNIITSAMKE

KIYNNLLANYEKIATRLSRVNSAPPEYDINEYKDYFQWKYGLDKNADGSYTVNENKFNEIYKKLYSFTE

IDLANKFKVKCRNTYFIKYGFLKVPNLLDDDIYTVSEGFNIGNLAVNNRGQNIKLNPKIIDSIPDKGLVEK

IVKFCKSVIPRKGTKAPPRLCIRVNNRELFFVASESSYNENDINTPKEIDDTTNLNNNYRNNLDEVILDYN

SETIPQISNQTLNTLVQDDSYVPRYDSNGTSEIEEHNVVDLNVFFYLHAQKVPEGETNISLTSSIDTALSEE

SQVYTFFSSEFINTINKPVHAALFISWINQVIRDFTTEATQKSTFDKIADISLVVPYVGLALNIGNEVQKEN

FKEAFELLGAGILLEFVPELLIPTILVFTIKSFIGSSENKNKIIKAINNSLMERETKWKEIYSWIVSNWLTRI

NTQFNKRKEQMYQALQNQVDAIKTVIEYKYNNYTSDERNRLESEYNINNIREELNKKVSLAMENIERFI

TESSIFYLMKLINEAKVSKLREYDEGVKEYLLDYISEHRSILGNSVQELNDLVTSTLNNSIPFELSSYTND

KILILYFNKLYKKENLYFQGASHHHHHHHH

SEQ ID NO: 37-rH_C/F(加His标签)的核苷酸序列

ATGATCAAGGATAACAGCATTCTGGATATGCGCTATGAGAACAACAAATTCATTGATATTAGCGGC

TATGGCAGCAACATTAGCATTAATGGTGATGTGTATATCTACAGCACCAACCGTAATCAGTTTGGC

ATTTATAGCAGCAAACCGAGCGAAGTTAATATTGCCCAGAACAACGATATCATCTATAACGGTCGC

TATCAGAACTTCAGCATTAGCTTTTGGGTTCGCATTCCGAAATACTTCAATAAGGTGAACCTGAAC

AACGAGTATACCATCATTGATTGCATTCGCAATAATAACAGCGGCTGGAAAATTAGCCTGAACTAC

AACAAAATTATCTGGACCCTGCAGGATACCGCAGGTAATAATCAGAAACTGGTGTTTAACTACACC

CAGATGATTAGCATCAGCGACTATATCAACAAATGGATCTTTGTGACCATTACCAATAATCGCCTG

GGTAATAGCCGCATTTATATCAATGGTAACCTGATCGATGAGAAAAGCATTAGCAATCTGGGTGAT

ATTCATGTGAGCGATAACATCCTGTTTAAAATCGTGGGTTGTAACGATACCCGTTATGTTGGTATTC

GCTACTTCAAAGTGTTTGATACCGAACTGGGTAAAACCGAAATTGAAACCCTGTATAGTGATGAAC

CGGATCCGAGCATTCTGAAAGATTTTTGGGGTAATTATCTGCTGTACAACAAACGCTACTATCTGCT

GAATCTGCTGCGTACCGATAAATCAATTACCCAGAATAGCAACTTCCTGAACATTAATCAGCAGCG

TGGTGTTTATCAGAAACCGAACATTTTTAGCAACACCCGTCTGTATACCGGTGTGGAAGTTATTATT

CGTAAAAATGGCAGCACCGATATCAGCAACACCGATAACTTTGTTCGCAAAAATGATCTGGCGTAT

ATCAACGTTGTTGATCGTGATGTTGAATATCGTCTGTATGCCGATATTAGCATTGCCAAACCGGAA

AAAATCATCAAACTGATCCGTACCAGCAACAGCAATAATTCACTGGGTCAGATTATTGTGATGGAT

AGCATTGGTAATAACTGCACCATGAACTTTCAGAACAATAACGGTGGTAATATTGGTCTGCTGGGC

TTTCATAGTAATAATCTGGTTGCAAGCAGCTGGTATTATAACAACATCCGTAAAAATACCAGCAGC

AATGGTTGCTTTTGGAGCTTTATTAGCAAAGAACATGGCTGGCAAGAAAACGAGAATCTGTATTTT

CAGGGTGCAAGTCATCATCACCACCATCACCATCATTAA

SEQ ID NO: 38-rH_C/F(加His标签)的多肽序列

MIKDNSILDMRYENNKFIDISGYGSNISINGDVYIYSTNRNQFGIYSSKPSEVNIAQNNDIIYNGRYQNFSI

SFWVRIPKYFNKVNLNNEYTIIDCIRNNNSGWKISLNYNKIIWTLQDTAGNNQKLVFNYTQMISISDYIN

KWIFVTITNNRLGNSRIYINGNLIDEKSISNLGDIHVSDNILFKIVGCNDTRYVGIRYFKVFDTELGKTEIE

TLYSDEPDPSILKDFWGNYLLYNKRYYLLNLLRTDKSITQNSNFLNINQQRGVYQKPNIFSNTRLYTGVE

VIIRKNGSTDISNTDNFVRKNDLAYINVVDRDVEYRLYADISIAKPEKIIKLIRTSNSNNSLGQIIVMDSIG

NNCTMNFQNNNGGNIGLLGFHSNNLVASSWYYNNIRKNTSSNGCFWSFISKEHGWQENENLYFQGAS

HHHHHHHH

SEQ ID NO:39 -rLC/F(加His标签)的核苷酸序列

ATGCCGGTTGTGATTAACAGCTTCAATTATAACGATCCGGTGAACGATGATACCATCCTGTATATG

CAGATTCCGTATGAAGAGAAAAGCAAAAAGTACTACAAAGCCTTTGAGATCATGCGCAACGTTTG

GATTATTCCGGAACGTAATACCATTGGCACCGATCCGAGCGATTTTGATCCGCCTGCAAGCCTGGA

AAATGGTAGCAGCGCATATTATGATCCGAATTATCTGACCACCGATGCCGAAAAAGATCGTTATCT

GAAAACCACCATCAAACTGTTCAAACGCATTAATAGCAATCCGGCAGGCGAAGTTCTGCTGCAAG

AAATTAGCTATGCAAAACCGTATCTGGGCAATGAACATACCCCGATTAATGAATTTCATCCGGTTA

CACGTACCACGAGCGTTAACATTAAAAGCAGCACCAATGTGAAGTCCAGCATTATTCTGAATCTGC

TGGTTTTAGGTGCAGGTCCGGATATTTTTGAAAATTCAAGCTATCCGGTGCGCAAACTGATGGATA

GCGGTGGTGTGTATGATCCGTCAAATGATGGTTTTGGCAGCATTAACATTGTGACCTTTAGTCCGGA

ATATGAATACACCTTCAACGATATTAGCGGTGGCTATAATAGCAGCACCGAAAGTTTTATTGCAGA

TCCGGCAATTAGCCTGGCACATGAACTGATTCATGCACTGCATGGTCTGTATGGTGCACGTGGTGTT

ACCTATAAAGAAACCATTAAAGTTAAACAGGCACCGCTGATGATTGCGGAAAAACCGATTCGTCTG

GAAGAATTTCTGACCTTTGGTGGTCAGGATCTGAACATTATTACCAGCGCAATGAAAGAGAAAATC

TATAATAACCTGCTGGCCAACTATGAGAAAATTGCAACCCGTCTGAGCCGTGTTAATAGCGCACCT

CCTGAATATGATATCAACGAGTATAAAGACTATTTTCAGTGGAAATACGGCCTGGATAAAAATGCA

GATGGTAGCTATACCGTGAACGAGAACAAATTTAACGAGATCTACAAAAAACTGTATAGCTTCACC

GAAATCGATCTGGCCAACAAATTCAAAGTGAAATGCCGCAACACCTACTTCATCAAATATGGCTTT

CTGAAAGTTCCGAACCTGCTTGATGATGATATCTATACCGTTAGCGAAGGCTTTAACATTGGTAATC

TGGCCGTTAATAATCGCGGTCAGAACATTAAACTGAACCCGAAAATTATCGATAGCATCCCGGATA

AAGGCCTGGTTGAAAAAATTGTGAAATTCTGCAAAAGCGAGAACCTGTATTTTCAGGGTGCAAGTC

ATCATCACCATCACCACCATCATTAA

SEQID NO:40-rLC/F(加His标签)的多肽序列

MPVVINSFNYNDPVNDDTILYMQIPYEEKSKKYYKAFEIMRNVWIIPERNTIGTDPSDFDPPASLENGSS

AYYDPNYLTTDAEKDRYLKTTIKLFKRINSNPAGEVLLQEISYAKPYLGNEHTPINEFHPVTRTTSVNIKS

STNVKSSIILNLLVLGAGPDIFENSSYPVRKLMDSGGVYDPSNDGFGSINIVTFSPEYEYTFNDISGGYNSS

TESFIADPAISLAHELIHALHGLYGARGVTYKETIKVKQAPLMIAEKPIRLEEFLTFGGQDLNIITSAMKE

KIYNNLLANYEKIATRLSRVNSAPPEYDINEYKDYFQWKYGLDKNADGSYTVNENKFNEIYKKLYSFTE

IDLANKFKVKCRNTYFIKYGFLKVPNLLDDDIYTVSEGFNIGNLAVNNRGQNIKLNPKIIDSIPDKGLVEK

IVKFCKSENLYFQGASHHHHHHHH

SEQ ID NO:41 - 阳离子性rH_C/A的核苷酸序列(加His标签)

ATGATCATCAACACCAGCATTCTGAACCTGCGTTATGAAAGCAAACATCTGATTGATCTGAGCCGT

TATGCCAGCAAAATCAATATAGGCAGCAAGGTTAACTTCGACCCGATTGACAAAAATCAGATACA

GCTGTTTAATCTGGAAAGCAGCAAAATTGAGGTGATCCTGAAAAAAGCGATCGTGTATAATAGCAT

GTACGAGAATTTTTCGACCAGCTTTTGGATTCGCATCCCGAAATACTTTAACAAGATTAGCCTGAAC

AACGAGTATACCATCATTAACTGCATGGAAAACAATAGCGGTTGGAAAGTCAGCCTGAATTATGGC

GAAATTATCTGGACCCTGCAGGATACCAAAGAAATCAAACAGCGTGTGGTGTTCAAATACAGCCA

GATGATTAATATCAGCGACTATATCAACCGCTGGATTTTTGTGACCATTACCAATAATCGGCTGAA

CAAGAGCAAGATCTATATTAACGGTCGTCTGATTGACCAGAAACCGATTAGTAATCTGGGTAATAT

TCATGCGAGCAACAAAATCATGTTTAAACTGGATGGTTGCCGTGATACCCATCGTTATATTTGGATC

AAATACTTCAACCTGTTCGATAAAGAGTTGAACGAAAAAGAAATTAAAGACCTGTACGATAACCA

GAGCAATAGCGGCATACTGAAAGATTTTTGGGGAGATTATCTGCAGTATGACAAACCGTATTATAT

GCTGAATCTGTACGACCCGAATAAATACGTGGATGTTAATAATGTGGGCATCCGTGGTTATATGTA

CCTGAAAGGTCCGCGTGGTAGCGTTATGACCACAAACATTTATCTGAATAGCAGCCTGTATCGCGG

AACCAAATTCATCATTAAAAAGTATGCCAGCGGCAACAAGGATAATATTGTGCGTAATAATGATCG

CGTGTACATTAACGTTGTGGTGAAGAATAAAGAATATCGCCTGGCAACCAATGCAAGCCAGGCAG

GCGTTGAAAAAATTCTGAGTGCCCTGGAAATTCCGGATGTTGGTAATCTGAGCCAGGTTGTTGTGA

TGAAAAGCAAAAACGATAAAGGCATCACCAACAAATGCAAGATGAATCTGCAGGACAATAACGGC

AATGATATTGGCTTCATTGGCTTTCACCAGTTTAACAACATTGCAAAACTGGTTGCGAGCAATTGGT

ATAATCGTCAGATTGAACGTAGCAGTCGTACCCTGGGTTGTAGCTGGGAATTTATCCCTGTGGATG

ATGGTTGGGGTGAACGTCCGCTGAAGCTTGCGGCCGCACTCGAGCACCACCACCACCACCACTGA

SEQIDNO:42-阳离子性rH_C/A(加His标签)的多肽序列

MIINTSILNLRYESKHLIDLSRYASKINIGSKVNFDPIDKNQIQLFNLESSKIEVILKKAIVYNSMYENFSTS

FWIRIPKYFNKISLNNEYTIINCMENNSGWKVSLNYGEIIWTLQDTKEIKQRVVFKYSQMINISDYINRWI

FVTITNNRLNKSKIYINGRLIDQKPISNLGNIHASNKIMFKLDGCRDTHRYIWIKYFNLFDKELNEKEIKD

LYDNQSNSGILKDFWGDYLQYDKPYYMLNLYDPNKYVDVNNVGIRGYMYLKGPRGSVMTTNIYLNSS

LYRGTKFIIKKYASGNKDNIVRNNDRVYINVVVKNKEYRLATNASQAGVEKILSALEIPDVGNLSQVVV

MKSKNDKGITNKCKMNLQDNNGNDIGFIGFHQFNNIAKLVASNWYNRQIERSSRTLGCSWEFIPVDDG

WGERPLKLAAALEHHHHHH

SEQ ID NO:43-rH_C/AB(加His标签)的核苷酸序列

ATGATTCTGAACAATATTATCCTGAACCTGCGTTACAAAGACAACAATCTGATCGATCTGAGCGGC

TATGGTGCAAAAGTTGAAGTCTACGACGGTGTCGAACTGAACGATAAAAACCAGTTCAAACTGAC

CTCATCGGCTAACTCAAAAATTCGTGTGACGCAGAACCAAAACATCATCTTCAACTCGGTCTTTCTG

GACTTCAGCGTGTCTTTCTGGATTCGCATCCCGAAATATAAAAATGATGGCATCCAGAACTACATC

CATAACGAATACACCATCATCAACTGTATGAAAAACAACAGTGGTTGGAAAATTTCCATCCGTGGC

AACCGCATTATCTGGACCCTGATTGATATCAATGGTAAAACGAAAAGCGTGTTTTTCGAATACAAC

ATCCGTGAAGATATCTCTGAATACATCAATCGCTGGTTTTTCGTGACCATTACGAACAATCTGAACA

ATGCGAAAATCTATATCAACGGCAAACTGGAAAGTAATACCGACATCAAAGATATTCGTGAAGTT

ATCGCCAACGGTGAAATCATCTTCAAACTGGATGGCGACATCGATCGCACCCAGTTCATTTGGATG

AAATACTTCTCCATCTTCAACACGGAACTGAGTCAGTCCAATATCGAAGAACGCTACAAAATCCAA

TCATACTCGGAATACCTGAAAGATTTCTGGGGTAACCCGCTGATGTACAACAAAGAATACTACATG

TTCAACGCGGGCAACAAAAACTCATACATCAAACTGAAAAAAGATTCGCCGGTGGGTGAAATCCT

GACCCGTAGCAAATACAACCAGAACTCTAAATACATCAACTATCGCGATCTGTACATTGGCGAAAA

ATTTATTATCCGTCGCAAAAGCAACTCTCAGAGTATTAATGATGACATCGTGCGTAAAGAAGACTA

CATCTATCTGGATTTCTTTAATCTGAACCAAGAATGGCGCGTTTATACCTACAAATACTTCAAAAAA

GAAGAAATGAAACTGTTCCTGGCCCCGATTTACGACAGCGATGAATTTTACAACACCATCCAGATC

AAAGAATACGATGAACAGCCGACGTATAGTTGCCAACTGCTGTTCAAAAAAGACGAAGAATCCAC

CGATGAAATTGGCCTGATTGGTATCCACCGTTTCTATGAAAGCGGTATCGTTTTCGAAGAATACAA

AGATTACTTCTGTATCTCTAAATGGTATCTGAAAGAAGTCAAACGCAAACCGTACAACCTGAAACT

GGGCTGCAACTGGCAATTTATCCCGAAAGACGAAGGCTGGACCGAAAAGCTTGCGGCCGCACTCG

AGCACCACCACCACCACCACTGA

SEQ ID NO: 44-rH_C/AB(加His标签)的多肽序列

MILNNIILNLRYKDNNLIDLSGYGAKVEVYDGVELNDKNQFKLTSSANSKIRVTQNQNIIFNSVFLDFSV

SFWIRIPKYKNDGIQNYIHNEYTIINCMKNNSGWKISIRGNRIIWTLIDINGKTKSVFFEYNIREDISEYINR

WFFVTITNNLNNAKIYINGKLESNTDIKDIREVIANGEIIFKLDGDIDRTQFIWMKYFSIFNTELSQSNIEER

YKIQSYSEYLKDFWGNPLMYNKEYYMFNAGNKNSYIKLKKDSPVGEILTRSKYNQNSKYINYRDLYIG

EKFIIRRKSNSQSINDDIVRKEDYIYLDFFNLNQEWRVYTYKYFKKEEMKLFLAPIYDSDEFYNTIQIKEY

DEQPTYSCQLLFKKDEESTDEIGLIGIHRFYESGIVFEEYKDYFCISKWYLKEVKRKPYNLKLGCNWQFIP

KDEGWTEKLAAALEHHHHHH

SEQID NO:45-rH_C/A变体Y1117VH1253K (加His标签)的核苷酸序列

ATGATCATCAATACTAGCATTCTGAACCTGCGTTACGAGAGCAATCATCTGATTGATCTGAGCCGTT

ATGCAAGCAAGATCAACATCGGTAGCAAGGTCAATTTTGACCCGATCGATAAGAACCAGATCCAG

CTGTTTAATCTGGAATCGAGCAAAATTGAGGTTATCCTGAAAAACGCCATTGTCTACAACTCCATG

TACGAGAATTTCTCCACCAGCTTCTGGATTCGCATCCCGAAATACTTCAACAGCATTAGCCTGAAC

AACGAGTATACTATCATCAACTGTATGGAGAACAACAGCGGTTGGAAGGTGTCTCTGAACTATGGT

GAGATCATTTGGACCTTGCAGGACACCCAAGAGATCAAGCAGCGCGTCGTGTTCAAGTACTCTCAA

ATGATCAACATTTCCGATTACATTAATCGTTGGATCTTCGTGACCATTACGAATAACCGTCTGAATA

ACAGCAAGATTTACATCAATGGTCGCTTGATCGATCAGAAACCGATTAGCAACCTGGGTAATATCC

ACGCAAGCAACAACATTATGTTCAAATTGGACGGTTGCCGCGATACCCATCGTTATATCTGGATCA

AGTATTTCAACCTGTTTGATAAAGAACTGAATGAGAAGGAGATCAAAGATTTGTATGACAACCAAT

CTAACAGCGGCATTTTGAAGGACTTCTGGGGCGATTATCTGCAATACGATAAGCCGTACTATATGC

TGAACCTGgtTGATCCGAACAAATATGTGGATGTCAATAATGTGGGTATTCGTGGTTACATGTATTT

GAAGGGTCCGCGTGGCAGCGTTATGACGACCAACATTTACCTGAACTCTAGCCTGTACCGTGGTAC

GAAATTCATCATTAAGAAATATGCCAGCGGCAACAAAGATAACATTGTGCGTAATAACGATCGTGT

CTACATCAACGTGGTCGTGAAGAATAAAGAGTACCGTCTGGCGACCAACGCTTCGCAGGCGGGTGT

TGAGAAAATTCTGAGCGCGTTGGAGATCCCTGATGTCGGTAATCTGAGCCAAGTCGTGGTTATGAA

GAGCAAGAACGACCAGGGTATCACTAACAAGTGCAAGATGAACCTGCAAGACAACAATGGTAACG

ACATCGGCTTTATTGGTTTCaAaCAGTTCAACAATATTGCTAAACTGGTAGCGAGCAATTGGTACAA

TCGTCAGATTGAGCGCAGCAGCCGTACTTTGGGCTGTAGCTGGGAGTTTATCCCGGTCGATGATGG

TTGGGGCGAACGTCCGCTGCACCATCACCATCACCATCACCATCACCATT

SEQ ID NO: 46- rH_C/A变体Y1117V H1253K(加His标签)的多肽序列

MIINTSILNLRYESNHLIDLSRYASKINIGSKVNFDPIDKNQIQLFNLESSKIEVILKNAIVYNSMYENFSTS

FWIRIPKYFNSISLNNEYTIINCMENNSGWKVSLNYGEIIWTLQDTQEIKQRVVFKYSQMINISDYINRWI

FVTITNNRLNNSKIYINGRLIDQKPISNLGNIHASNNIMFKLDGCRDTHRYIWIKYFNLFDKELNEKEIKD

LYDNQSNSGILKDFWGDYLQYDKPYYMLNLVDPNKYVDVNNVGIRGYMYLKGPRGSVMTTNIYLNSS

LYRGTKFIIKKYASGNKDNIVRNNDRVYINVVVKNKEYRLATNASQAGVEKILSALEIPDVGNLSQVVV

MKSKNDQGITNKCKMNLQDNNGNDIGFIGFKQFNNIAKLVASNWYNRQIERSSRTLGCSWEFIPVDDG

WGERPLHHHHHHHHHH

SEQ ID NO:47-rH_C/A变体Y1117V F1252Y H1253K L1278F (加His标签)的核苷酸序列

ATGATCATCAATACTAGCATTCTGAACCTGCGTTACGAGAGCAATCATCTGATTGATCTGAGCCGTT

ATGCAAGCAAGATCAACATCGGTAGCAAGGTCAATTTTGACCCGATCGATAAGAACCAGATCCAG

CTGTTTAATCTGGAATCGAGCAAAATTGAGGTTATCCTGAAAAACGCCATTGTCTACAACTCCATG

TACGAGAATTTCTCCACCAGCTTCTGGATTCGCATCCCGAAATACTTCAACAGCATTAGCCTGAAC

AACGAGTATACTATCATCAACTGTATGGAGAACAACAGCGGTTGGAAGGTGTCTCTGAACTATGGT

GAGATCATTTGGACCTTGCAGGACACCCAAGAGATCAAGCAGCGCGTCGTGTTCAAGTACTCTCAA

ATGATCAACATTTCCGATTACATTAATCGTTGGATCTTCGTGACCATTACGAATAACCGTCTGAATA

ACAGCAAGATTTACATCAATGGTCGCTTGATCGATCAGAAACCGATTAGCAACCTGGGTAATATCC

ACGCAAGCAACAACATTATGTTCAAATTGGACGGTTGCCGCGATACCCATCGTTATATCTGGATCA

AGTATTTCAACCTGTTTGATAAAGAACTGAATGAGAAGGAGATCAAAGATTTGTATGACAACCAAT

CTAACAGCGGCATTTTGAAGGACTTCTGGGGCGATTATCTGCAATACGATAAGCCGTACTATATGC

TGAACCTGgtTGATCCGAACAAATATGTGGATGTCAATAATGTGGGTATTCGTGGTTACATGTATTT

GAAGGGTCCGCGTGGCAGCGTTATGACGACCAACATTTACCTGAACTCTAGCCTGTACCGTGGTAC

GAAATTCATCATTAAGAAATATGCCAGCGGCAACAAAGATAACATTGTGCGTAATAACGATCGTGT

CTACATCAACGTGGTCGTGAAGAATAAAGAGTACCGTCTGGCGACCAACGCTTCGCAGGCGGGTGT

TGAGAAAATTCTGAGCGCGTTGGAGATCCCTGATGTCGGTAATCTGAGCCAAGTCGTGGTTATGAA

GAGCAAGAACGACCAGGGTATCACTAACAAGTGCAAGATGAACCTGCAAGACAACAATGGTAACG

ACATCGGCTTTATTGGTTaCaAaCAGTTCAACAATATTGCTAAACTGGTAGCGAGCAATTGGTACAA

TCGTCAGATTGAGCGCAGCAGCCGTACTTTtGGCTGTAGCTGGGAGTTTATCCCGGTCGATGATGGT

TGGGGCGAACGTCCGCTGCACCATCACCATCACCATCACCATCACCATTAA

SEQ ID NO: 48 -rH_C/A变体Y1117V F1252Y H1253K L1278F(加His标签)的多肽序列

MIINTSILNLRYESNHLIDLSRYASKINIGSKVNFDPIDKNQIQLFNLESSKIEVILKNAIVYNSMYENFSTS

FWIRIPKYFNSISLNNEYTIINCMENNSGWKVSLNYGEIIWTLQDTQEIKQRVVFKYSQMINISDYINRWI

FVTITNNRLNNSKIYINGRLIDQKPISNLGNIHASNNIMFKLDGCRDTHRYIWIKYFNLFDKELNEKEIKD

LYDNQSNSGILKDFWGDYLQYDKPYYMLNLVDPNKYVDVNNVGIRGYMYLKGPRGSVMTTNIYLNSS

LYRGTKFIIKKYASGNKDNIVRNNDRVYINVVVKNKEYRLATNASQAGVEKILSALEIPDVGNLSQVVV

MKSKNDQGITNKCKMNLQDNNGNDIGFIGYKQFNNIAKLVASNWYNRQIERSSRTFGCSWEFIPVDDG

WGERPLHHHHHHHHHH

SEQID NO:49-rH_CA变体Y1117V F1252Y H1253K L1278H(加His标签)的核苷酸序列

ATGATCATCAATACTAGCATTCTGAACCTGCGTTACGAGAGCAATCATCTGATTGATCTGAGCCGTT

ATGCAAGCAAGATCAACATCGGTAGCAAGGTCAATTTTGACCCGATCGATAAGAACCAGATCCAG

CTGTTTAATCTGGAATCGAGCAAAATTGAGGTTATCCTGAAAAACGCCATTGTCTACAACTCCATG

TACGAGAATTTCTCCACCAGCTTCTGGATTCGCATCCCGAAATACTTCAACAGCATTAGCCTGAAC

AACGAGTATACTATCATCAACTGTATGGAGAACAACAGCGGTTGGAAGGTGTCTCTGAACTATGGT

GAGATCATTTGGACCTTGCAGGACACCCAAGAGATCAAGCAGCGCGTCGTGTTCAAGTACTCTCAA

ATGATCAACATTTCCGATTACATTAATCGTTGGATCTTCGTGACCATTACGAATAACCGTCTGAATA

ACAGCAAGATTTACATCAATGGTCGCTTGATCGATCAGAAACCGATTAGCAACCTGGGTAATATCC

ACGCAAGCAACAACATTATGTTCAAATTGGACGGTTGCCGCGATACCCATCGTTATATCTGGATCA

AGTATTTCAACCTGTTTGATAAAGAACTGAATGAGAAGGAGATCAAAGATTTGTATGACAACCAAT

CTAACAGCGGCATTTTGAAGGACTTCTGGGGCGATTATCTGCAATACGATAAGCCGTACTATATGC

TGAACCTGgtTGATCCGAACAAATATGTGGATGTCAATAATGTGGGTATTCGTGGTTACATGTATTT

GAAGGGTCCGCGTGGCAGCGTTATGACGACCAACATTTACCTGAACTCTAGCCTGTACCGTGGTAC

GAAATTCATCATTAAGAAATATGCCAGCGGCAACAAAGATAACATTGTGCGTAATAACGATCGTGT

CTACATCAACGTGGTCGTGAAGAATAAAGAGTACCGTCTGGCGACCAACGCTTCGCAGGCGGGTGT

TGAGAAAATTCTGAGCGCGTTGGAGATCCCTGATGTCGGTAATCTGAGCCAAGTCGTGGTTATGAA

GAGCAAGAACGACCAGGGTATCACTAACAAGTGCAAGATGAACCTGCAAGACAACAATGGTAACG

ACATCGGCTTTATTGGTTaCaAaCAGTTCAACAATATTGCTAAACTGGTAGCGAGCAATTGGTACAA

TCGTCAGATTGAGCGCAGCAGCCGTACTcatGGCTGTAGCTGGGAGTTTATCCCGGTCGATGATGGTT

GGGGCGAACGTCCGCTGCACCATCACCATCACCATSEQ ID NO: 50- rH_C/A变体Y1117V F1252Y H1253K L1278H(加 His标签)的多肽序列MIINTSILNLRYESNHLIDLSRYASKINIGSKVNFDPIDKNQIQLFNLESSKIEVILKNAIVYNSMYENFSTSFWIRIPKYFNSISLNNEYTIINCMENNSGWKVSLNYGEIIWTLQDTQEIKQRVVFKYSQMINISDYINRWIFVTITNNRLNNSKIYINGRLIDQKPISNLGNIHASNNIMFKLDGCRDTHRYIWIKYFNLFDKELNEKEIKDLYDNQSNSGILKDFWGDYLQYDKPYYMLNLVDPNKYVDVNNVGIRGYMYLKGPRGSVMTTNIYLNSSLYRGTKFIIKKYASGNKDNIVRNNDRVYINVVVKNKEYRLATNASQAGVEKILSALEIPDVGNLSQVVVMKSKNDQGITNKCKMNLQDNNGNDIGFIGYKQFNNIAKLVASNWYNRQIERSSRTHGCSWEFIPVDDGWGERPLHHHHHHSEQ ID NO:51-BoNT/A的多肽序列 -UniProtP10845

MPFVNKQFNYKDPVNGVDIAYIKIPNVGQMQPVKAFKIHNKIWVIPERDTFTNPEEGDLN

PPPEAKQVPVSYYDSTYLSTDNEKDNYLKGVTKLFERIYSTDLGRMLLTSIVRGIPFWGG

STIDTELKVIDTNCINVIQPDGSYRSEELNLVIIGPSADIIQFECKSFGHEVLNLTRNGY

GSTQYIRFSPDFTFGFEESLEVDTNPLLGAGKFATDPAVTLAHELIHAGHRLYGIAINPN

RVFKVNTNAYYEMSGLEVSFEELRTFGGHDAKFIDSLQENEFRLYYYNKFKDIASTLNKA

KSIVGTTASLQYMKNVFKEKYLLSEDTSGKFSVDKLKFDKLYKMLTEIYTEDNFVKFFKV

LNRKTYLNFDKAVFKINIVPKVNYTIYDGFNLRNTNLAANFNGQNTEINNMNFTKLKNFT

GLFEFYKLLCVRGIITSKTKSLDKGYNKALNDLCIKVNNWDLFFSPSEDNFTNDLNKGEE

ITSDTNIEAAEENISLDLIQQYYLTFNFDNEPENISIENLSSDIIGQLELMPNIERFPNG

KKYELDKYTMFHYLRAQEFEHGKSRIALTNSVNEALLNPSRVYTFFSSDYVKKVNKATEA

AMFLGWVEQLVYDFTDETSEVSTTDKIADITIIIPYIGPALNIGNMLYKDDFVGALIFSG

AVILLEFIPEIAIPVLGTFALVSYIANKVLTVQTIDNALSKRNEKWDEVYKYIVTNWLAK

VNTQIDLIRKKMKEALENQAEATKAIINYQYNQYTEEEKNNINFNIDDLSSKLNESINKA

MININKFLNQCSVSYLMNSMIPYGVKRLEDFDASLKDALLKYIYDNRGTLIGQVDRLKDK

VNNTLSTDIPFQLSKYVDNQRLLSTFTEYIKNIINTSILNLRYESNHLIDLSRYASKINI

GSKVNFDPIDKNQIQLFNLESSKIEVILKNAIVYNSMYENFSTSFWIRIPKYFNSISLNN

EYTIINCMENNSGWKVSLNYGEIIWTLQDTQEIKQRVVFKYSQMINISDYINRWIFVTIT

NNRLNNSKIYINGRLIDQKPISNLGNIHASNNIMFKLDGCRDTHRYIWIKYFNLFDKELN

EKEIKDLYDNQSNSGILKDFWGDYLQYDKPYYMLNLYDPNKYVDVNNVGIRGYMYLKGPR

GSVMTTNIYLNSSLYRGTKFIIKKYASGNKDNIVRNNDRVYINVVVKNKEYRLATNASQA

GVEKILSALEIPDVGNLSQVVVMKSKNDQGITNKCKMNLQDNNGNDIGFIGFHQFNNIAK

LVASNWYNRQIERSSRTLGCSWEFIPVDDGWGERPLSEQ IDNO:52-BoNT/B的多肽序列 - UniProtP10844

MPVTINNFNYNDPIDNNNIIMMEPPFARGTGRYYKAFKITDRIWIIPERYTFGYKPEDFN

KSSGIFNRDVCEYYDPDYLNTNDKKNIFLQTMIKLFNRIKSKPLGEKLLEMIINGIPYLG

DRRVPLEEFNTNIASVTVNKLISNPGEVERKKGIFANLIIFGPGPVLNENETIDIGIQNH

FASREGFGGIMQMKFCPEYVSVFNNVQENKGASIFNRRGYFSDPALILMHELIHVLHGLY

GIKVDDLPIVPNEKKFFMQSTDAIQAEELYTFGGQDPSIITPSTDKSIYDKVLQNFRGIV

DRLNKVLVCISDPNININIYKNKFKDKYKFVEDSEGKYSIDVESFDKLYKSLMFGFTETN

IAENYKIKTRASYFSDSLPPVKIKNLLDNEIYTIEEGFNISDKDMEKEYRGQNKAINKQA

YEEISKEHLAVYKIQMCKSVKAPGICIDVDNEDLFFIADKNSFSDDLSKNERIEYNTQSN

YIENDFPINELILDTDLISKIELPSENTESLTDFNVDVPVYEKQPAIKKIFTDENTIFQY

LYSQTFPLDIRDISLTSSFDDALLFSNKVYSFFSMDYIKTANKVVEAGLFAGWVKQIVND

FVIEANKSNTMDKIADISLIVPYIGLALNVGNETAKGNFENAFEIAGASILLEFIPELLI

PVVGAFLLESYIDNKNKIIKTIDNALTKRNEKWSDMYGLIVAQWLSTVNTQFYTIKEGMY

KALNYQAQALEEIIKYRYNIYSEKEKSNINIDFNDINSKLNEGINQAIDNINNFINGCSV

SYLMKKMIPLAVEKLLDFDNTLKKNLLNYIDENKLYLIGSAEYEKSKVNKYLKTIMPFDL

SIYTNDTILIEMFNKYNSEILNNIILNLRYKDNNLIDLSGYGAKVEVYDGVELNDKNQFK

LTSSANSKIRVTQNQNIIFNSVFLDFSVSFWIRIPKYKNDGIQNYIHNEYTIINCMKNNS

GWKISIRGNRIIWTLIDINGKTKSVFFEYNIREDISEYINRWFFVTITNNLNNAKIYING

KLESNTDIKDIREVIANGEIIFKLDGDIDRTQFIWMKYFSIFNTELSQSNIEERYKIQSY

SEYLKDFWGNPLMYNKEYYMFNAGNKNSYIKLKKDSPVGEILTRSKYNQNSKYINYRDLY

IGEKFIIRRKSNSQSINDDIVRKEDYIYLDFFNLNQEWRVYTYKYFKKEEEKLFLAPISD

SDEFYNTIQIKEYDEQPTYSCQLLFKKDEESTDEIGLIGIHRFYESGIVFEEYKDYFCIS

KWYLKEVKRKPYNLKLGCNWQFIPKDEGWTESEQIDNO:53-BoNT/C的多肽序列- UniProtP18640

MPITINNFNYSDPVDNKNILYLDTHLNTLANEPEKAFRITGNIWVIPDRFSRNSNPNLNK

PPRVTSPKSGYYDPNYLSTDSDKDPFLKEIIKLFKRINSREIGEELIYRLSTDIPFPGNN

NTPINTFDFDVDFNSVDVKTRQGNNWVKTGSINPSVIITGPRENIIDPETSTFKLTNNTF

AAQEGFGALSIISISPRFMLTYSNATNDVGEGRFSKSEFCMDPILILMHELNHAMHNLYG

IAIPNDQTISSVTSNIFYSQYNVKLEYAEIYAFGGPTIDLIPKSARKYFEEKALDYYRSI

AKRLNSITTANPSSFNKYIGEYKQKLIRKYRFVVESSGEVTVNRNKFVELYNELTQIFTE

FNYAKIYNVQNRKIYLSNVYTPVTANILDDNVYDIQNGFNIPKSNLNVLFMGQNLSRNPA

LRKVNPENMLYLFTKFCHKAIDGRSLYNKTLDCRELLVKNTDLPFIGDISDVKTDIFLRK

DINEETEVIYYPDNVSVDQVILSKNTSEHGQLDLLYPSIDSESEILPGENQVFYDNRTQN

VDYLNSYYYLESQKLSDNVEDFTFTRSIEEALDNSAKVYTYFPTLANKVNAGVQGGLFLM

WANDVVEDFTTNILRKDTLDKISDVSAIIPYIGPALNISNSVRRGNFTEAFAVTGVTILL

EAFPEFTIPALGAFVIYSKVQERNEIIKTIDNCLEQRIKRWKDSYEWMMGTWLSRIITQF

NNISYQMYDSLNYQAGAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNIN

KFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNEFDRNTKAKLINLIDSHNIILVGEVDKLKAKVNNSF

QNTIPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFNNINDSKILSLQNRKNTLVDTSGYNAEVSEEGDVQ

LNPIFPFDFKLGSSGEDRGKVIVTQNENIVYNSMYESFSISFWIRINKWVSNLPGYTIID

SVKNNSGWSIGIISNFLVFTLKQNEDSEQSINFSYDISNNAPGYNKWFFVTVTNNMMGNM

KIYINGKLIDTIKVKELTGINFSKTITFEINKIPDTGLITSDSDNINMWIRDFYIFAKEL

DGKDINILFNSLQYTNVVKDYWGNDLRYNKEYYMVNIDYLNRYMYANSRQIVFNTRRNNN

DFNEGYKIIIKRIRGNTNDTRVRGGDILYFDMTINNKAYNLFMKNETMYADNHSTEDIYA

IGLREQTKDINDNIIFQIQPMNNTYYYASQIFKSNFNGENISGICSIGTYRFRLGGDWYR

HNYLVPTVKQGNYASLLESTSTHWGFVPVSESEQ IDNO:54- BoNT/D的多肽序列 - UniProt P19321

MTWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSK

PPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDS

STPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSN

PSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYG

INIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDI

AKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSE

VVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPA

LQKLSSESVVDLFTKVCLRLTKNSRDDSTCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDE

TNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYL

NSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANE

VVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFP

EFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHIN

YQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIR

ECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTM

PFNIFSYTNNSLLKDIINEYFNSINDSKILSLQNKKNALVDTSGYNAEVRVGDNVQLNTI

YTNDFKLSSSGDKIIVNLNNNILYSAIYENSSVSFWIKISKDLTNSHNEYTIINSIEQNS

GWKLCIRNGNIEWILQDVNRKYKSLIFDYSESLSHTGYTNKWFFVTITNNIMGYMKLYIN

GELKQSQKIEDLDEVKLDKTIVFGIDENIDENQMLWIRDFNIFSKELSNEDINIVYEGQI

LRNVIKDYWGNPLKFDTEYYIINDNYIDRYIAPESNVLVLVQYPDRSKLYTGNPITIKSV

SDKNPYSRILNGDNIILHMLYNSRKYMIIRDTDTIYATQGGECSQNCVYALKLQSNLGNY

GIGIFSIKNIVSKNKYCSQIFSSFRENTMLLADIYKPWRFSFKNAYTPVAVTNYETKLLS

TSSFWKFISRDPGWVESEQID NO:55-BoNT/E的多肽序列-UniProtQ00496

MPKINSFNYNDPVNDRTILYIKPGGCQEFYKSFNIMKNIWIIPERNVIGTTPQDFHPPTS

LKNGDSSYYDPNYLQSDEEKDRFLKIVTKIFNRINNNLSGGILLEELSKANPYLGNDNTP

DNQFHIGDASAVEIKFSNGSQDILLPNVIIMGAEPDLFETNSSNISLRNNYMPSNHRFGS

IAIVTFSPEYSFRFNDNCMNEFIQDPALTLMHELIHSLHGLYGAKGITTKYTITQKQNPL

ITNIRGTNIEEFLTFGGTDLNIITSAQSNDIYTNLLADYKKIASKLSKVQVSNPLLNPYK

DVFEAKYGLDKDASGIYSVNINKFNDIFKKLYSFTEFDLRTKFQVKCRQTYIGQYKYFKL

SNLLNDSIYNISEGYNINNLKVNFRGQNANLNPRIITPITGRGLVKKIIRFCKNIVSVKG

IRKSICIEINNGELFFVASENSYNDDNINTPKEIDDTVTSNNNYENDLDQVILNFNSESA

PGLSDEKLNLTIQNDAYIPKYDSNGTSDIEQHDVNELNVFFYLDAQKVPEGENNVNLTSS

IDTALLEQPKIYTFFSSEFINNVNKPVQAALFVSWIQQVLVDFTTEANQKSTVDKIADIS

IVVPYIGLALNIGNEAQKGNFKDALELLGAGILLEFEPELLIPTILVFTIKSFLGSSDNK

NKVIKAINNALKERDEKWKEVYSFIVSNWMTKINTQFNKRKEQMYQALQNQVNAIKTIIE

SKYNSYTLEEKNELTNKYDIKQIENELNQKVSIAMNNIDRFLTESSISYLMKIINEVKIN

KLREYDENVKTYLLNYIIQHGSILGESQQELNSMVTDTLNNSIPFKLSSYTDDKILISYF

NKFFKRIKSSSVLNMRYKNDKYVDTSGYDSNININGDVYKYPTNKNQFGIYNDKLSEVNI

SQNDYIIYDNKYKNFSISFWVRIPNYDNKIVNVNNEYTIINCMRDNNSGWKVSLNHNEII

WTFEDNRGINQKLAFNYGNANGISDYINKWIFVTITNDRLGDSKLYINGNLIDQKSILNL

GNIHVSDNILFKIVNCSYTRYIGIRYFNIFDKELDETEIQTLYSNEPNTNILKDFWGNYL

LYDKEYYLLNVLKPNNFIDRRKDSTLSINNIRSTILLANRLYSGIKVKIQRVNNSSTNDN

LVRKNDQVYINFVASKTHLFPLYADTATTNKEKTIKISSSGNRFNQVVVMNSVGNCTMNF

KNNNGNNIGLLGFKADTVVASTWYYTHMRDHTNSNGCFWNFISEEHGWQEKSEQID NO:56-BoNT/F 的多肽序列-UniProtA7GBG3MPVVINSFNYNDPVNDDTILYMQIPYEEKSKKYYKAFEIMRNVWIIPERNTIGTDPSDFDPPASLENGSSAYYDPNYLTTDAEKDRYLKTTIKLFKRINSNPAGEVLLQEISYAKPYLGNEHTPINEFHPVTRTTSVNIKSSTNVKSSIILNLLVLGAGPDIFENSSYPVRKLMDSGGVYDPSNDGFGSINIVTFSPEYEYTFNDISGGYNSSTESFIADPAISLAHELIHALHGLYGARGVTYKETIKVKQAPLMIAEKPIRLEEFLTFGGQDLNIITSAMKEKIYNNLLANYEKIATRLSRVNSAPPEYDINEYKDYFQWKYGLDKNADGSYTVNENKFNEIYKKLYSFTEIDLANKFKVKCRNTYFIKYGFLKVPNLLDDDIYTVSEGFNIGNLAVNNRGQNIKLNPKIIDSIPDKGLVEKIVKFCKSVIPRKGTKAPPRLCIRVNNRELFFVASESSYNENDINTPKEIDDTTNLNNNYRNNLDEVILDYNSETIPQISNQTLNTLVQDDSYVPRYDSNGTSEIEEHNVVDLNVFFYLHAQKVPEGETNISLTSSIDTALSEESQVYTFFSSEFINTINKPVHAALFISWINQVIRDFTTEATQKSTFDKIADISLVVPYVGLALNIGNEVQKENFKEAFELLGAGILLEFVPELLIPTILVFTIKSFIGSSENKNKIIKAINNSLMERETKWKEIYSWIVSNWLTRINTQFNKRKEQMYQALQNQVDAIKTVIEYKYNNYTSDERNRLESEYNINNIREELNKKVSLAMENIERFITESSIFYLMKLINEAKVSKLREYDEGVKEYLLDYISEHRSILGNSVQELNDLVTSTLNNSIPFELSSYTNDKILILYFNKLYKKIKDNSILDMRYENNKFIDISGYGSNISINGDVYIYSTNRNQFGIYSSKPSEVNIAQNNDIIYNGRYQNFSISFWVRIPKYFNKVNLNNEYTIIDCIRNNNSGWKISLNYNKIIWTLQDTAGNNQKLVFNYTQMISISDYINKWIFVTITNNRLGNSRIYINGNLIDEKSISNLGDIHVSDNILFKIVGCNDTRYVGIRYFKVFDTELGKTEIETLYSDEPDPSILKDFWGNYLLYNKRYYLLNLLRTDKSITQNSNFLNINQQRGVYQKPNIFSNTRLYTGVEVIIRKNGSTDISNTDNFVRKNDLAYINVVDRDVEYRLYADISIAKPEKIIKLIRTSNSNNSLGQIIVMDSIGNNCTMNFQNNNGGNIGLLGFHSNNLVASSWYYNNIRKNTSSNGCFWSFISKEHGWQENSEQID NO:57-BoNT/G的多肽序列-UniProtQ60393

MPVNIKXFNYNDPINNDDIIMMEPFNDPGPGTYYKAFRIIDRIWIVPERFTYGFQPDQFN

ASTGVFSKDVYEYYDPTYLKTDAEKDKFLKTMIKLFNRINSKPSGQRLLDMIVDAIPYLG

NASTPPDKFAANVANVSINKKIIQPGAEDQIKGLMTNLIIFGPGPVLSDNFTDSMIMNGH

SPISEGFGARMMIRFCPSCLNVFNNVQENKDTSIFSRRAYFADPALTLMHELIHVLHGLY

GIKISNLPITPNTKEFFMQHSDPVQAEELYTFGGHDPSVISPSTDMNIYNKALQNFQDIA

NRLNIVSSAQGSGIDISLYKQIYKNKYDFVEDPNGKYSVDKDKFDKLYKALMFGFTETNL

AGEYGIKTRYSYFSEYLPPIKTEKLLDNTIYTQNEGFNIASKNLKTEFNGQNKAVNKEAY

EEISLEHLVIYRIAMCKPVMYKNTGKSEQCIIVNNEDLFFIANKDSFSKDLAKAETIAYN

TQNNTIENNFSIDQLILDNDLSSGIDLPNENTEPFTNFDDIDIPVYIKQSALKKIFVDGD

SLFEYLHAQTFPSNIENLQLTNSLNDALRNNNKVYTFFSTNLVEKANTVVGASLFVNWVK

GVIDDFTSESTQKSTIDKVSDVSIIIPYIGPALNVGNETAKENFKNAFEIGGAAILMEFI

PELIVPIVGFFTLESYVGNKGHIIMTISNALKKRDQKWTDMYGLIVSQWLSTVNTQFYTI

KERMYNALNNQSQAIEKIIEDQYNRYSEEDKMNINIDFNDIDFKLNQSINLAINNIDDFI

NQCSISYLMNRMIPLAVKKLKDFDDNLKRDLLEYIDTNELYLLDEVNILKSKVNRHLKDS

IPFDLSLYTKDTILIQVFNNYISNISSNAILSLSYRGGRLIDSSGYGATMNVGSDVIFND

IGNGQFKLNNSENSNITAHQSKFVVYDSMFDNFSINFWVRTPKYNNNDIQTYLQNEYTII

SCIKNDSGWKVSIKGNRIIWTLIDVNAKSKSIFFEYSIKDNISDYINKWFSITITNDRLG

NANIYINGSLKKSEKILNLDRINSSNDIDFKLINCTDTTKFVWIKDFNIFGRELNATEVS

SLYWIQSSTNTLKDFWGNPLRYDTQYYLFNQGMQNIYIKYFSKASMGETAPRTNFNNAAI

NYQNLYLGLRFIIKKASNSRNINNDNIVREGDYIYLNIDNISDESYRVYVLVNSKEIQTQ

LFLAPINDDPTFYDVLQIKKYYEKTTYNCQILCEKDTKTFGLFGIGKFVKDYGYVWDTYD

NYFCISQWYLRRISENINKLRLGCNWQFIPVDEGWTESEQIDNO:58-TeNT的多肽序列- UniProt P04958

MPITINNFRYSDPVNNDTIIMMEPPYCKGLDIYYKAFKITDRIWIVPERYEFGTKPEDFN

PPSSLIEGASEYYDPNYLRTDSDKDRFLQTMVKLFNRIKNNVAGEALLDKIINAIPYLGN

SYSLLDKFDTNSNSVSFNLLEQDPSGATTKSAMLTNLIIFGPGPVLNKNEVRGIVLRVDN

KNYFPCRDGFGSIMQMAFCPEYVPTFDNVIENITSLTIGKSKYFQDPALLLMHELIHVLH

GLYGMQVSSHEIIPSKQEIYMQHTYPISAEELFTFGGQDANLISIDIKNDLYEKTLNDYK

AIANKLSQVTSCNDPNIDIDSYKQIYQQKYQFDKDSNGQYIVNEDKFQILYNSIMYGFTE

IELGKKFNIKTRLSYFSMNHDPVKIPNLLDDTIYNDTEGFNIESKDLKSEYKGQNMRVNT

NAFRNVDGSGLVSKLIGLCKKIIPPTNIRENLYNRTASLTDLGGELCIKIKNEDLTFIAE

KNSFSEEPFQDEIVSYNTKNKPLNFNYSLDKIIVDYNLQSKITLPNDRTTPVTKGIPYAP

EYKSNAASTIEIHNIDDNTIYQYLYAQKSPTTLQRITMTNSVDDALINSTKIYSYFPSVI

SKVNQGAQGILFLQWVRDIIDDFTNESSQKTTIDKISDVSTIVPYIGPALNIVKQGYEGN

FIGALETTGVVLLLEYIPEITLPVIAALSIAESSTQKEKIIKTIDNFLEKRYEKWIEVYK

LVKAKWLGTVNTQFQKRSYQMYRSLEYQVDAIKKIIDYEYKIYSGPDKEQIADEINNLKN

KLEEKANKAMININIFMRESSRSFLVNQMINEAKKQLLEFDTQSKNILMQYIKANSKFIG

ITELKKLESKINKVFSTPIPFSYSKNLDCWVDNEEDIDVILKKSTILNLDINNDIISDIS

GFNSSVITYPDAQLVPGINGKAIHLVNNESSEVIVHKAMDIEYNDMFNNFTVSFWLRVPK

VSASHLEQYGTNEYSIISSMKKHSLSIGSGWSVSLKGNNLIWTLKDSAGEVRQITFRDLP

DKFNAYLANKWVFITITNDRLSSANLYINGVLMGSAEITGLGAIREDNNITLKLDRCNNN

NQYVSIDKFRIFCKALNPKEIEKLYTSYLSITFLRDFWGNPLRYDTEYYLIPVASSSKDV

QLKNITDYMYLTNAPSYTNGKLNIYYRRLYNGLKFIIKRYTPNNEIDSFVKSGDFIKLYV

SYNNNEHIVGYPKDGNAFNNLDRILRVGYNAPGIPLYKKMEAVKLRDLKTYSVQLKLYDD

KNASLGLVGTHNGQIGNDPNRDILIASNWYFNHLKDKILGCDWYFVPTDEGWTNDSEQ ID NO:59- BoNT/X的多肽序列

MKLEINKFNYNDPIDGINVITMRPPRHSDKINKGKGPFKAFQVIKNIWIVPERYNFTNNT

NDLNIPSEPIMEADAIYNPNYLNTPSEKDEFLQGVIKVLERIKSKPEGEKLLELISSSIP

LPLVSNGALTLSDNETIAYQENNNIVSNLQANLVIYGPGPDIANNATYGLYSTPISNGEG

TLSEVSFSPFYLKPFDESYGNYRSLVNIVNKFVKREFAPDPASTLMHELVHVTHNLYGIS

NRNFYYNFDTGKIETSRQQNSLIFEELLTFGGIDSKAISSLIIKKIIETAKNNYTTLISE

RLNTVTVENDLLKYIKNKIPVQGRLGNFKLDTAEFEKKLNTILFVLNESNLAQRFSILVR

KHYLKERPIDPIYVNILDDNSYSTLEGFNISSQGSNDFQGQLLESSYFEKIESNALRAFI

KICPRNGLLYNAIYRNSKNYLNNIDLEDKKTTSKTNVSYPCSLLNGCIEVENKDLFLISN

KDSLNDINLSEEKIKPETTVFFKDKLPPQDITLSNYDFTEANSIPSISQQNILERNEELY

EPIRNSLFEIKTIYVDKLTTFHFLEAQNIDESIDSSKIRVELTDSVDEALSNPNKVYSPF

KNMSNTINSIETGITSTYIFYQWLRSIVKDFSDETGKIDVIDKSSDTLAIVPYIGPLLNI

GNDIRHGDFVGAIELAGITALLEYVPEFTIPILVGLEVIGGELAREQVEAIVNNALDKRD

QKWAEVYNITKAQWWGTIHLQINTRLAHTYKALSRQANAIKMNMEFQLANYKGNIDDKAK

IKNAISETEILLNKSVEQAMKNTEKFMIKLSNSYLTKEMIPKVQDNLKNFDLETKKTLDK

FIKEKEDILGTNLSSSLRRKVSIRLNKNIAFDINDIPFSEFDDLINQYKNEIEDYEVLNL

GAEDGKIKDLSGTTSDINIGSDIELADGRENKAIKIKGSENSTIKIAMNKYLRFSATDNF

SISFWIKHPKPTNLLNNGIEYTLVENFNQRGWKISIQDSKLIWYLRDHNNSIKIVTPDYI

AFNGWNLITITNNRSKGSIVYVNGSKIEEKDISSIWNTEVDDPIIFRLKNNRDTQAFTLL

DQFSIYRKELNQNEVVKLYNYYFNSNYIRDIWGNPLQYNKKYYLQTQDKPGKGLIREYWS

SFGYDYVILSDSKTITFPNNIRYGALYNGSKVLIKNSKKLDGLVRNKDFIQLEIDGYNMG

ISADRFNEDTNYIGTTYGTTHDLTTDFEIIQRQEKYRNYCQLKTPYNIFHKSGLMSTETS

KPTFHDYRDWVYSSAWYFQNYENLNLRKHTKTNWYFIPKDEGWDEDSEQ ID NO:60 -mrBoNT/A 的核苷酸序列

ATGCCATTCGTCAACAAGCAATTCAACTACAAAGACCCAGTCAACGGCGTCGACATCGCATACATC

AAGATTCCGAACGCCGGTCAAATGCAGCCGGTTAAGGCTTTTAAGATCCACAACAAGATTTGGGTT

ATCCCGGAGCGTGACACCTTCACGAACCCGGAAGAAGGCGATCTGAACCCGCCACCGGAAGCGAA

GCAAGTCCCTGTCAGCTACTACGATTCGACGTACCTGAGCACGGATAACGAAAAAGATAACTACCT

GAAAGGTGTGACCAAGCTGTTCGAACGTATCTACAGCACGGATCTGGGTCGCATGCTGCTGACTAG

CATTGTTCGCGGTATCCCGTTCTGGGGTGGTAGCACGATTGACACCGAACTGAAGGTTATCGACAC

TAACTGCATTAACGTTATTCAACCGGATGGTAGCTATCGTAGCGAAGAGCTGAATCTGGTCATCAT

TGGCCCGAGCGCAGACATTATCCAATTCGAGTGCAAGAGCTTTGGTCACGAGGTTCTGAATCTGAC

CCGCAATGGCTATGGTAGCACCCAGTACATTCGTTTTTCGCCGGATTTTACCTTCGGCTTTGAAGAG

AGCCTGGAGGTTGATACCAATCCGTTGCTGGGTGCGGGCAAATTCGCTACCGATCCGGCTGTCACG

CTGGCCCATGAACTGATCCACGCAGGCCACCGCCTGTACGGCATTGCCATCAACCCAAACCGTGTG

TTCAAGGTTAATACGAATGCATACTACGAGATGAGCGGCCTGGAAGTCAGCTTCGAAGAACTGCGC

ACCTTCGGTGGCCATGACGCTAAATTCATTGACAGCTTGCAAGAGAATGAGTTCCGTCTGTACTAC

TATAACAAATTCAAAGACATTGCAAGCACGTTGAACAAGGCCAAAAGCATCGTTGGTACTACCGC

GTCGTTGCAGTATATGAAGAATGTGTTTAAAGAGAAGTACCTGCTGTCCGAGGATACCTCCGGCAA

GTTTAGCGTTGATAAGCTGAAGTTTGACAAACTGTACAAGATGCTGACCGAGATTTACACCGAGGA

CAACTTTGTGAAATTCTTCAAAGTGTTGAATCGTAAAACCTATCTGAATTTTGACAAAGCGGTTTTC

AAGATTAACATCGTGCCGAAGGTGAACTACACCATCTATGACGGTTTTAACCTGCGTAACACCAAC

CTGGCGGCGAACTTTAACGGTCAGAATACGGAAATCAACAACATGAATTTCACGAAGTTGAAGAA

CTTCACGGGTCTGTTCGAGTTCTATAAGCTGCTGTGCGTGCGCGGTATCATCACCAGCAAAACCAA

AAGCCTGGACAAAGGCTACAACAAGGCGCTGAATGACCTGTGCATTAAGGTAAACAATTGGGATC

TGTTCTTTTCGCCATCCGAAGATAATTTTACCAACGACCTGAACAAGGGTGAAGAAATCACCAGCG

ATACGAATATTGAAGCAGCGGAAGAGAATATCAGCCTGGATCTGATCCAGCAGTACTATCTGACCT

TTAACTTCGACAATGAACCGGAGAACATTAGCATTGAGAATCTGAGCAGCGACATTATCGGTCAGC

TGGAACTGATGCCGAATATCGAACGTTTCCCGAACGGCAAAAAGTACGAGCTGGACAAGTACACT

ATGTTCCATTACCTGCGTGCACAGGAGTTTGAACACGGTAAAAGCCGTATCGCGCTGACCAACAGC

GTTAACGAGGCCCTGCTGAACCCGAGCCGTGTCTATACCTTCTTCAGCAGCGACTATGTTAAGAAA

GTGAACAAAGCCACTGAGGCCGCGATGTTCCTGGGCTGGGTGGAACAGCTGGTATATGACTTCACG

GACGAGACGAGCGAAGTGAGCACTACCGACAAAATTGCTGATATTACCATCATTATCCCGTATATT

GGTCCGGCACTGAACATTGGCAACATGCTGTACAAAGACGATTTTGTGGGTGCCCTGATCTTCTCC

GGTGCCGTGATTCTGCTGGAGTTCATTCCGGAGATTGCGATCCCGGTGTTGGGTACCTTCGCGCTGG

TGTCCTACATCGCGAATAAGGTTCTGACGGTTCAGACCATCGATAACGCGCTGTCGAAACGTAATG

AAAAATGGGACGAGGTTTACAAATACATTGTTACGAATTGGCTGGCGAAAGTCAATACCCAGATC

GACCTGATCCGTAAGAAAATGAAAGAGGCGCTGGAGAATCAGGCGGAGGCCACCAAAGCAATTAT

CAACTACCAATACAACCAGTACACGGAAGAAGAGAAGAATAACATTAACTTCAATATCGATGATT

TGAGCAGCAAGCTGAATGAATCTATCAACAAAGCGATGATCAATATCAACAAGTTTTTGAATCAGT

GTAGCGTTTCGTACCTGATGAATAGCATGATTCCGTATGGCGTCAAACGTCTGGAGGACTTCGACG

CCAGCCTGAAAGATGCGTTGCTGAAATACATTTACGACAATCGTGGTACGCTGATTGGCCAAGTTG

ACCGCTTGAAAGACAAAGTTAACAATACCCTGAGCACCGACATCCCATTTCAACTGAGCAAGTATG

TTGATAATCAACGTCTGTTGAGCACTTTCACCGAGTATATCAAAAACATCATCAATACTAGCATTCT

GAACCTGCGTTACGAGAGCAAGCATCTGATTGATCTGAGCCGTTATGCTAGCAAGATCAACATCGG

TAGCAAGGTCAATTTTGACCCGATCGATAAGAACCAGATCCAGCTGTTTAATCTGGAATCGAGCAA

AATTGAGGTTATCCTGAAAAAGGCCATTGTCTACAACTCCATGTACGAGAATTTCTCCACCAGCTTC

TGGATTCGCATCCCGAAATACTTCAACAAGATTAGCCTGAACAACGAGTATACTATCATCAACTGT

ATGGAGAACAACAGCGGTTGGAAGGTGTCTCTGAACTATGGTGAGATCATTTGGACCTTGCAGGAC

ACCAAAGAGATCAAGCAGCGCGTCGTGTTCAAGTACTCTCAAATGATCAACATTTCCGATTACATT

AATCGTTGGATCTTCGTGACCATTACGAATAACCGTCTGAATAAGAGCAAGATTTACATCAATGGT

CGCTTGATCGATCAGAAACCGATTAGCAACCTGGGTAATATCCACGCAAGCAACAAGATTATGTTC

AAATTGGACGGTTGCCGCGATACCCATCGTTATATCTGGATCAAGTATTTCAACCTGTTTGATAAAG

AACTGAATGAGAAGGAGATCAAAGATTTGTATGACAACCAATCTAACAGCGGCATTTTGAAGGAC

TTCTGGGGCGATTATCTGCAATACGATAAGCCGTACTATATGCTGAACCTGTATGATCCGAACAAA

TATGTGGATGTCAATAATGTGGGTATTCGTGGTTACATGTATTTGAAGGGTCCGCGTGGCAGCGTT

ATGACGACCAACATTTACCTGAACTCTAGCCTGTACCGTGGTACGAAATTCATCATTAAGAAATAT

GCCAGCGGCAACAAAGATAACATTGTGCGTAATAACGATCGTGTCTACATCAACGTGGTCGTGAAG

AATAAAGAGTACCGTCTGGCGACCAACGCTTCGCAGGCGGGTGTTGAGAAAATTCTGAGCGCGTTG

GAGATCCCTGATGTCGGTAATCTGAGCCAAGTCGTGGTTATGAAGAGCAAGAACGACAAGGGTAT

CACTAACAAGTGCAAGATGAACCTGCAAGACAACAATGGTAACGACATCGGCTTTATTGGTTTCCA

CCAGTTCAACAATATTGCTAAACTGGTAGCGAGCAATTGGTACAATCGTCAGATTGAGCGCAGCAG

CcGTACTTTGGGCTGTAGCTGGGAGTTTATCCCGGTCGATGATGGTTGGGGCGAACGTCCGCTG

SEQ ID NO:61 -mrBoNT/A的多肽序列

MPFVNKQFNYKDPVNGVDIAYIKIPNAGQMQPVKAFKIHNKIWVIPERDTFTNPEEGDLNPPPEAKQVP

VSYYDSTYLSTDNEKDNYLKGVTKLFERIYSTDLGRMLLTSIVRGIPFWGGSTIDTELKVIDTNCINVIQP

DGSYRSEELNLVIIGPSADIIQFECKSFGHEVLNLTRNGYGSTQYIRFSPDFTFGFEESLEVDTNPLLGAGK

FATDPAVTLAHELIHAGHRLYGIAINPNRVFKVNTNAYYEMSGLEVSFEELRTFGGHDAKFIDSLQENEF

RLYYYNKFKDIASTLNKAKSIVGTTASLQYMKNVFKEKYLLSEDTSGKFSVDKLKFDKLYKMLTEIYTE

DNFVKFFKVLNRKTYLNFDKAVFKINIVPKVNYTIYDGFNLRNTNLAANFNGQNTEINNMNFTKLKNFT

GLFEFYKLLCVRGIITSKTKSLDKGYNKALNDLCIKVNNWDLFFSPSEDNFTNDLNKGEEITSDTNIEAA

EENISLDLIQQYYLTFNFDNEPENISIENLSSDIIGQLELMPNIERFPNGKKYELDKYTMFHYLRAQEFEHG

KSRIALTNSVNEALLNPSRVYTFFSSDYVKKVNKATEAAMFLGWVEQLVYDFTDETSEVSTTDKIADITI

IIPYIGPALNIGNMLYKDDFVGALIFSGAVILLEFIPEIAIPVLGTFALVSYIANKVLTVQTIDNALSKRNEK

WDEVYKYIVTNWLAKVNTQIDLIRKKMKEALENQAEATKAIINYQYNQYTEEEKNNINFNIDDLSSKL

NESINKAMININKFLNQCSVSYLMNSMIPYGVKRLEDFDASLKDALLKYIYDNRGTLIGQVDRLKDKVN

NTLSTDIPFQLSKYVDNQRLLSTFTEYIKNIINTSILNLRYESKHLIDLSRYASKINIGSKVNFDPIDKNQIQ

LFNLESSKIEVILKKAIVYNSMYENFSTSFWIRIPKYFNKISLNNEYTIINCMENNSGWKVSLNYGEIIWTL

QDTKEIKQRVVFKYSQMINISDYINRWIFVTITNNRLNKSKIYINGRLIDQKPISNLGNIHASNKIMFKLDG

CRDTHRYIWIKYFNLFDKELNEKEIKDLYDNQSNSGILKDFWGDYLQYDKPYYMLNLYDPNKYVDVN

NVGIRGYMYLKGPRGSVMTTNIYLNSSLYRGTKFIIKKYASGNKDNIVRNNDRVYINVVVKNKEYRLA

TNASQAGVEKILSALEIPDVGNLSQVVVMKSKNDKGITNKCKMNLQDNNGNDIGFIGFHQFNNIAKLV

ASNWYNRQIERSSRTLGCSWEFIPVDDGWGERPL

SEQ ID NO: 62-未修饰/天然BoNT/A1的多肽序列

MPFVNKQFNYKDPVNGVDIAYIKIPNAGQMQPVKAFKIHNKIWVIPERDTFTNPEEGDLNPPPEAKQVP

VSYYDSTYLSTDNEKDNYLKGVTKLFERIYSTDLGRMLLTSIVRGIPFWGGSTIDTELKVIDTNCINVIQP

DGSYRSEELNLVIIGPSADIIQFECKSFGHEVLNLTRNGYGSTQYIRFSPDFTFGFEESLEVDTNPLLGAGK

FATDPAVTLAHELIHAGHRLYGIAINPNRVFKVNTNAYYEMSGLEVSFEELRTFGGHDAKFIDSLQENEF

RLYYYNKFKDIASTLNKAKSIVGTTASLQYMKNVFKEKYLLSEDTSGKFSVDKLKFDKLYKMLTEIYTE

DNFVKFFKVLNRKTYLNFDKAVFKINIVPKVNYTIYDGFNLRNTNLAANFNGQNTEINNMNFTKLKNFT

GLFEFYKLLCVRGIITSKTKSLDKGYNKALNDLCIKVNNWDLFFSPSEDNFTNDLNKGEEITSDTNIEAA

EENISLDLIQQYYLTFNFDNEPENISIENLSSDIIGQLELMPNIERFPNGKKYELDKYTMFHYLRAQEFEHG

KSRIALTNSVNEALLNPSRVYTFFSSDYVKKVNKATEAAMFLGWVEQLVYDFTDETSEVSTTDKIADITI

IIPYIGPALNIGNMLYKDDFVGALIFSGAVILLEFIPEIAIPVLGTFALVSYIANKVLTVQTIDNALSKRNEK

WDEVYKYIVTNWLAKVNTQIDLIRKKMKEALENQAEATKAIINYQYNQYTEEEKNNINFNIDDLSSKL

NESINKAMININKFLNQCSVSYLMNSMIPYGVKRLEDFDASLKDALLKYIYDNRGTLIGQVDRLKDKVN

NTLSTDIPFQLSKYVDNQRLLSTFTEYIKNIINTSILNLRYESNHLIDLSRYASKINIGSKVNFDPIDKNQIQ

LFNLESSKIEVILKNAIVYNSMYENFSTSFWIRIPKYFNSISLNNEYTIINCMENNSGWKVSLNYGEIIWTL

QDTQEIKQRVVFKYSQMINISDYINRWIFVTITNNRLNNSKIYINGRLIDQKPISNLGNIHASNNIMFKLDG

CRDTHRYIWIKYFNLFDKELNEKEIKDLYDNQSNSGILKDFWGDYLQYDKPYYMLNLYDPNKYVDVN

NVGIRGYMYLKGPRGSVMTTNIYLNSSLYRGTKFIIKKYASGNKDNIVRNNDRVYINVVVKNKEYRLA

TNASQAGVEKILSALEIPDVGNLSQVVVMKSKNDQGITNKCKMNLQDNNGNDIGFIGFHQFNNIAKLV

ASNWYNRQIERSSRTLGCSWEFIPVDDGWGERPL

SEQ ID NO: 63 -mrBoNT/AB的多肽序列

MPFVNKQFNYKDPVNGVDIAYIKIPNAGQMQPVKAFKIHNKIWVIPERDTFTNPEEGDLNPPPEAKQVP

VSYYDSTYLSTDNEKDNYLKGVTKLFERIYSTDLGRMLLTSIVRGIPFWGGSTIDTELKVIDTNCINVIQP

DGSYRSEELNLVIIGPSADIIQFECKSFGHEVLNLTRNGYGSTQYIRFSPDFTFGFEESLEVDTNPLLGAGK

FATDPAVTLAHELIHAGHRLYGIAINPNRVFKVNTNAYYEMSGLEVSFEELRTFGGHDAKFIDSLQENEF

RLYYYNKFKDIASTLNKAKSIVGTTASLQYMKNVFKEKYLLSEDTSGKFSVDKLKFDKLYKMLTEIYTE

DNFVKFFKVLNRKTYLNFDKAVFKINIVPKVNYTIYDGFNLRNTNLAANFNGQNTEINNMNFTKLKNFT

GLFEFYKLLCVRGIITSKTKSLDKGYNKALNDLCIKVNNWDLFFSPSEDNFTNDLNKGEEITSDTNIEAA

EENISLDLIQQYYLTFNFDNEPENISIENLSSDIIGQLELMPNIERFPNGKKYELDKYTMFHYLRAQEFEHG

KSRIALTNSVNEALLNPSRVYTFFSSDYVKKVNKATEAAMFLGWVEQLVYDFTDETSEVSTTDKIADITI

IIPYIGPALNIGNMLYKDDFVGALIFSGAVILLEFIPEIAIPVLGTFALVSYIANKVLTVQTIDNALSKRNEK

WDEVYKYIVTNWLAKVNTQIDLIRKKMKEALENQAEATKAIINYQYNQYTEEEKNNINFNIDDLSSKL

NESINKAMININKFLNQCSVSYLMNSMIPYGVKRLEDFDASLKDALLKYIYDNRGTLIGQVDRLKDKVN

NTLSTDIPFQLSKYVDNQRLLSTFTEYIKNILNNIILNLRYKDNNLIDLSGYGAKVEVYDGVELNDKNQF

KLTSSANSKIRVTQNQNIIFNSVFLDFSVSFWIRIPKYKNDGIQNYIHNEYTIINCMKNNSGWKISIRGNRII

WTLIDINGKTKSVFFEYNIREDISEYINRWFFVTITNNLNNAKIYINGKLESNTDIKDIREVIANGEIIFKLD

GDIDRTQFIWMKYFSIFNTELSQSNIEERYKIQSYSEYLKDFWGNPLMYNKEYYMFNAGNKNSYIKLKK

DSPVGEILTRSKYNQNSKYINYRDLYIGEKFIIRRKSNSQSINDDIVRKEDYIYLDFFNLNQEWRVYTYKY

FKKEEMKLFLAPIYDSDEFYNTIQIKEYDEQPTYSCQLLFKKDEESTDEIGLIGIHRFYESGIVFEEYKDYF

CISKWYLKEVKRKPYNLKLGCNWQFIPKDEGWTE

SEQIDNO:64-mrBoNT/AB(0)的多肽序列

MPFVNKQFNYKDPVNGVDIAYIKIPNAGQMQPVKAFKIHNKIWVIPERDTFTNPEEGDLNPPPEAKQVP

VSYYDSTYLSTDNEKDNYLKGVTKLFERIYSTDLGRMLLTSIVRGIPFWGGSTIDTELKVIDTNCINVIQP

DGSYRSEELNLVIIGPSADIIQFECKSFGHEVLNLTRNGYGSTQYIRFSPDFTFGFEESLEVDTNPLLGAGK

FATDPAVTLAHQLIYAGHRLYGIAINPNRVFKVNTNAYYEMSGLEVSFEELRTFGGHDAKFIDSLQENE

FRLYYYNKFKDIASTLNKAKSIVGTTASLQYMKNVFKEKYLLSEDTSGKFSVDKLKFDKLYKMLTEIYT

EDNFVKFFKVLNRKTYLNFDKAVFKINIVPKVNYTIYDGFNLRNTNLAANFNGQNTEINNMNFTKLKNF

TGLFEFYKLLCVRGIITSKTKSLDKGYNKALNDLCIKVNNWDLFFSPSEDNFTNDLNKGEEITSDTNIEA

AEENISLDLIQQYYLTFNFDNEPENISIENLSSDIIGQLELMPNIERFPNGKKYELDKYTMFHYLRAQEFEH

GKSRIALTNSVNEALLNPSRVYTFFSSDYVKKVNKATEAAMFLGWVEQLVYDFTDETSEVSTTDKIADI

TIIIPYIGPALNIGNMLYKDDFVGALIFSGAVILLEFIPEIAIPVLGTFALVSYIANKVLTVQTIDNALSKRNE

KWDEVYKYIVTNWLAKVNTQIDLIRKKMKEALENQAEATKAIINYQYNQYTEEEKNNINFNIDDLSSK

LNESINKAMININKFLNQCSVSYLMNSMIPYGVKRLEDFDASLKDALLKYIYDNRGTLIGQVDRLKDKV

NNTLSTDIPFQLSKYVDNQRLLSTFTEYIKNILNNIILNLRYKDNNLIDLSGYGAKVEVYDGVELNDKNQ

FKLTSSANSKIRVTQNQNIIFNSVFLDFSVSFWIRIPKYKNDGIQNYIHNEYTIINCMKNNSGWKISIRGNR

IIWTLIDINGKTKSVFFEYNIREDISEYINRWFFVTITNNLNNAKIYINGKLESNTDIKDIREVIANGEIIFKL

DGDIDRTQFIWMKYFSIFNTELSQSNIEERYKIQSYSEYLKDFWGNPLMYNKEYYMFNAGNKNSYIKLK

KDSPVGEILTRSKYNQNSKYINYRDLYIGEKFIIRRKSNSQSINDDIVRKEDYIYLDFFNLNQEWRVYTYK

YFKKEEMKLFLAPIYDSDEFYNTIQIKEYDEQPTYSCQLLFKKDEESTDEIGLIGIHRFYESGIVFEEYKDY

FCISKWYLKEVKRKPYNLKLGCNWQFIPKDEGWTE

SEQ ID NO:65 -mrBoNT/A(0)的多肽序列

MPFVNKQFNYKDPVNGVDIAYIKIPNAGQMQPVKAFKIHNKIWVIPERDT

FTNPEEGDLNPPPEAKQVPVSYYDSTYLSTDNEKDNYLKGVTKLFERIYS

TDLGRMLLTSIVRGIPFWGGSTIDTELKVIDTNCINVIQPDGSYRSEELN

LVIIGPSADIIQFECKSFGHEVLNLTRNGYGSTQYIRFSPDFTFGFEESL

EVDTNPLLGAGKFATDPAVTLAHQLIYAGHRLYGIAINPNRVFKVNTNAY

YEMSGLEVSFEELRTFGGHDAKFIDSLQENEFRLYYYNKFKDIASTLNKA

KSIVGTTASLQYMKNVFKEKYLLSEDTSGKFSVDKLKFDKLYKMLTEIYT

EDNFVKFFKVLNRKTYLNFDKAVFKINIVPKVNYTIYDGFNLRNTNLAAN

FNGQNTEINNMNFTKLKNFTGLFEFYKLLCVRGIITSKTKSLDKGYNKAL

NDLCIKVNNWDLFFSPSEDNFTNDLNKGEEITSDTNIEAAEENISLDLIQ

QYYLTFNFDNEPENISIENLSSDIIGQLELMPNIERFPNGKKYELDKYTM

FHYLRAQEFEHGKSRIALTNSVNEALLNPSRVYTFFSSDYVKKVNKATEA

AMFLGWVEQLVYDFTDETSEVSTTDKIADITIIIPYIGPALNIGNMLYKD

DFVGALIFSGAVILLEFIPEIAIPVLGTFALVSYIANKVLTVQTIDNALS

KRNEKWDEVYKYIVTNWLAKVNTQIDLIRKKMKEALENQAEATKAIINYQ

YNQYTEEEKNNINFNIDDLSSKLNESINKAMININKFLNQCSVSYLMNSM

IPYGVKRLEDFDASLKDALLKYIYDNRGTLIGQVDRLKDKVNNTLSTDIP

FQLSKYVDNQRLLSTFTEYIKNIINTSILNLRYESKHLIDLSRYASKINI

GSKVNFDPIDKNQIQLFNLESSKIEVILKKAIVYNSMYENFSTSFWIRIP

KYFNKISLNNEYTIINCMENNSGWKVSLNYGEIIWTLQDTKEIKQRVVFK

YSQMINISDYINRWIFVTITNNRLNKSKIYINGRLIDQKPISNLGNIHAS

NKIMFKLDGCRDTHRYIWIKYFNLFDKELNEKEIKDLYDNQSNSGILKDF

WGDYLQYDKPYYMLNLYDPNKYVDVNNVGIRGYMYLKGPRGSVMTTNIYL

NSSLYRGTKFIIKKYASGNKDNIVRNNDRVYINVVVKNKEYRLATNASQA

GVEKILSALEIPDVGNLSQVVVMKSKNDKGITNKCKMNLQDNNGNDIGFI

GFHQFNNIAKLVASNWYNRQIERSSRTLGCSWEFIPVDDGWGERPL

实施例

实施例1-施用梭菌神经毒素至皮区后，抑制内脏疼痛

动物模型介绍

为了显示皮区施用梭菌神经毒素可以抑制内脏疼痛，发明人选择研究间质性膀胱炎/膀胱疼痛综合征(IC/BPS)引起的疼痛作为示例性疾病。数据表明，适当的皮区施用(例如在靶向膀胱中疼痛的情况下，施用至T12、L1、S2、S3或S4皮区)可以提供内脏疼痛抑制作用。

因此，通过施用神经毒素至适宜的皮区，可以抑制给定内脏/器官中的内脏疼痛。例如，施用梭菌神经毒素至T11皮区可以用来抑制卵巢或输卵管的内脏疼痛，因为来自卵巢/输卵管的内脏疼痛在T11脊神经从其显现的相同区域统合。这展示出治疗诸如子宫内膜异位症等病症所致内脏疼痛的实用性。

我们现在更具体地转向目前研究的动物模型和疾病。间质性膀胱炎/膀胱疼痛综合征(IC/BPS)是以内脏疼痛和泌尿系统症状如尿频为特征的慢性炎性疾病。环磷酰胺(CYP)诱导的炎性内脏疼痛常用作啮齿动物中IC/BPS的实验模型。在大鼠中，CYP处理导致其有毒代谢物丙烯醛在膀胱中蓄积，从而介导膀胱炎症和内脏疼痛。

这个模型大部分基于单次腹膜内(i.p.)注射CYP以诱导急性IC/BPS(用于研究急性疾病)。

我们开发了CYP诱导IC/BPS的慢性大鼠模型，其由3次注射(40mg/kg，腹膜内)组成，每3天一次。在我们的研究方案中，未出现严重体重减轻且存活率是100％。这个模型显示以痛觉超敏(对正常情况下无害刺激物的痛性反应)和痛觉过敏(对有害刺激物的反应升高)为特征的长久持续性内脏疼痛。

本研究的目的是评估单次皮内(i.d.)施用Dysport(25U/kg)对CYP诱导的雌性Sprague-Dawley大鼠慢性膀胱炎模型中内脏疼痛的影响。

研究设计

研究方案设计

·在第-10天，如下文描述进行药物处理(在“药物处理”之下)。

·在第-1天，为了降低因新环境所致的应激水平，使大鼠适应于独立Plexiglas箱(von Frey设置)最少30分钟及适应于施加von Frey细丝。适应在下文于“使用von Frey细丝评估内脏疼痛”下对疼痛评估所述相同的实验条件下进行。

·在第0天(基础)，若CYP则在首次注射之前，进行von Frey测试以获得疼痛行为的基础值(参见“使用von Frey细丝评估内脏疼痛”)。

·在第0天(基础后)、第3天和第6天，如下文在“诱导慢性膀胱炎”下所述那样诱导慢性膀胱炎。

·在第7天和第10天，进行von Frey测试以分析Dysport对CYP诱导的慢性内脏疼痛的影响。

·在第10天，紧邻最末von Frey测试之后，处死大鼠并且收集膀胱及称重。还收集腰骶椎、胸椎与颈椎、脑和皮肤。如下文在“组织收集用于组织学处理”下所述那样处理收集的组织供组织学用。

实验组

纳入如下表中所述的二个(2)实验组：

组	处理(皮内)	注射(腹膜内)	n
				1	溶媒(20μL)	CYP	10
2	Dysport(25U/kg)	CYP	10

物质

受试物质是从IPSEN Innovation以白色冻干物供应的Dysport，并且储存在-20℃及避光。

制剂的准备：在施用当天新鲜准备制剂。将一小瓶含有的519U Dysport溶解于1.038mL盐水中，以获得终浓度500U/mL。根据来自Dysport组的大鼠体重均数配制工作制剂(即在第-11天时235.7g，这对应于浓度294.625U/mL)。因此，将295μL母液添加至205μL盐水。

使用盐水作为溶媒。盐水通过Centravet(Lapalisse，法国)购自B-Braun。

异氟烷购自Baxter Laboratories(Maurepas，法国)。通过Centravet(Lapalisse，法国)购自Vetoquinol.

CYP购自Sigma-Aldrich(Saint-Quentin Fallavier，法国；批号MKCG5464).

甲醛4％购自VWR(Fontenay sous bois，法国)。

磷酸盐缓冲盐水(PBS)购自Sigma-Aldrich。

研究方案

药物处理

在实验之前，将动物使用区组法随机分配至处理组，所述区组法由相同区组中每种处理或对照(溶媒)分配至少一只动物组成。如下进行皮内施用：麻醉用5％异氟烷诱导并且随后用3％异氟烷维持延续该程序的持续时间。对每只动物设计用于机械刺激的腹部区域剃毛。通过皮内途径施用Dysport或溶媒(20μL/大鼠)。用胰岛素注射器在腹侧区作为vonFrey试验部位的1个部位进行注射(参见图3)。

使用von Frey细丝评估内脏疼痛

包括单一实验测试全部动物的标准化条件适用，以使得基于行为的疼痛测试的变异性最小化。

通过向下腹部(接近于膀胱)以刺激间间隔时间5秒施加力量渐增的一组8根校准的von Frey细丝(1、2、4、6、8、10、15和26g)以设盲方式评价内脏疼痛。将动物置于升高的金属丝网地板上独立的透明Plexiglas箱下并且适应至少30分钟，之后启动von Frey试验。

随后用足够力量穿过丝网地板施加细丝1-2秒，以造成细丝略微弯曲。测试每根细丝3次。谨慎刺激下腹部区域内部靠近膀胱的不同区域以避免脱敏。

对于每只动物和每根细丝，如下对疼痛行为评分：

诱导慢性膀胱炎

为了诱导慢性膀胱炎，在第0天、第3天和第6天，将大鼠称重并且按剂量40mg/kg以终体积5mL/kg腹膜内(i.p.)注射CYP。在盐水中按终浓度8mg/mL新鲜配制CYP。

组织收集用于组织学处理

通过注射(182.2mg/mL的戊巴比妥溶液，0.25mL/大鼠，腹膜内)，深度麻醉动物。随后通过第二次致死性注射(0.25mL/大鼠)，使镇静的大鼠安乐死。在皮肤收集区之外进行两次腹内注射。

首先收集包含注射部位的皮肤连同下方腹肌。将长约2-3长度的片订在塑料薄板上并且置于含有4％缓冲甲醛的500mL罐中。

随后切下膀胱并且切去包围膀胱的类脂组织。将膀胱称重并且置于组织处理包埋盒中。将该盒浸没入4％缓冲甲醛中。

最后收集脑和腰骶椎、胸椎与颈椎(带脊髓+DRG)。将3个节段和脑连同皮肤一起置于该罐中。为了收集腰骶椎、胸椎与颈椎(带脊髓和DRG)，用剪刀切割脊柱周围的器官，小心仍可能看见肋骨。腹侧部分面朝上。用解剖刀刮划胸-腰区上方的组织。通过用解剖刀在第三与第四最后胸椎间盘/肋之间切割，使颈部分与胸部分分离。第三/第四翼肋仍保持与腰部分接合。

将膀胱和全部其他收集的组织在室温固定分别约24小时和48小时。随后将样品转移入4％缓冲甲醛(1/4)/PBS(3/4)溶液并储存在+4℃。

已切割SNAP25(c-SNAP25_A)的免疫组织化学(IHC)用与样品过夜孵育的稀释度1/6000的抗体EF14007进行-对本文所述的任何相关IHC相同。

实验室设备

-使用力量不同的von Frey细丝进行机械刺激(参比：Bio-VFM；BioSeb ID Tech,Vitrolles，法国)。校准前购买细丝。

-将动物使用LS620C天平(PRECISA,Dietikon,瑞士)称重。

-将膀胱使用Pro天平(OHAUS，瑞士)称重。

结果表述和分析

全部原始数据均录入电子表格。录入的全部数据已经由两个人在数据分析之前与原始数据比较。结果表述为均值±均数标准误(SEM)。

内脏疼痛

*例如，在给定的von Frey力，对于首次施加时评分为1、第二次施加时评分为1和第三次施用时评分为2的动物，其评分总和是4。最大汇总评分为9(3+3+3)，则汇总评分4等于最大反应的44％(100x 4/9)。

膀胱重量

膀胱重量的结果表述如下：以g计的膀胱重量；作为体重比率以g/kg计的膀胱重量。

统计分析

使用GraphPad(GraphPad Software Inc.,La Jolla,CA,USA)进行统计分析和作图。对于统计显著性，接受P值<0.05。例外是当两因素分析应用时，在实施任何统计检验之前，测试数据的正态分布(Shapiro-Wilk正态性检验)及评估其方差(F检验)。因此应用适宜的统计检验。

CYP的影响

由于本研究中不包括非病理学实验组(即盐水)，故通过基础值(即CYP注射前)与溶媒组中CYP注射后值(即第7天和第10天)之间分组比较，统计分析CYP的影响。

-使用Friedman检验作为有重复测量(RM)的方差分析非参数检验(ANOVA)，随后是相对于基础值的Dunn多重比较。

-使用单因素RM ANOVA作为参数检验，连同相对于基础值的Holm-Sidak多重比较。

-使用带两个因素的两因素RM ANOVA，随后相对于基础值的Sidak多重比较用于伤害感受评分。

Dysport的影响

为了分析Dysport的影响，相比溶媒组进行个体配对比较。

-使用非配对t检验作为参数t检验。

-使用Mann-Whitney检验作为非参数t检验。

-两因素RM ANOVA用于伤害感受评分。

注意当进行个体配对比较时，统计显著性用符号“*”指示并且非显著性用符号“ns”指示。对分组比较，统计显著性由符号“#”指示。

结果

重复CYP注射(40 mg/kg，腹膜内)诱导慢性内脏疼痛

为了验证我们的CYP诱导内脏疼痛模型，我们将溶媒组中CYP注射后(即第7天和第10天时)的伤害感受参数与相应的基础值(即第0天时)进行比较。

在两个评估时间点，如与基础值相比，CYP激发伤害感受性阈值显著降低(P<0.01，图4A)。

另外，CYP注射的大鼠显示出伤害感受评分在第7天和第10天时明显升高(P<0.0001，图4B)。

CYP对伤害感受评分的影响与第7天和第10天时相应AUC 1-6和6-26g明显升高平行发生(对于AUC 1-6和6-26g，分别是P<0.01和P<0.001，图4C和图4D)。

对于全部伤害感受参数，对两个时间点均获得相似的显著性水平(图4)。

Dysport (25 U/大鼠，皮内)减轻CYP诱导的慢性内脏疼痛

在CYP注射之前(即基础值)，两个实验组之间未观察到全部伤害感受参数显著差异(P>0.05，图5、图6A和图7；“第0天”)。注意对溶媒处理或Dysport处理的大鼠进行基础评估。

在CYP注射的大鼠中，25U/kg Dysport处理导致在第7天和第10天时伤害感受阈值升高，尤其在第10天时达到统计显著性(对于“第7天”和“第10天”，分别是P>0.05和P<0.05，图5)。

根据这些结果，与溶媒相比，在两个时间点在Dysport处理的大鼠中均观察到伤害感受评分降低(图6B和C)。在第7天，Dysport作用高于统计显著性阈值(P＝0.0532，图6B)，在第10天可见特别的显著性(P<0.05，图6C)。

在两个时间点，Dysport处理激发的伤害感受评分降低与AUC 1-6g降低相关(图7A)。类似于以上结果，Dysport的作用在第7天接近于统计显著水平(P＝0.0812，图7A；“第7天”)，在第10天见到特别的显著性(P<0.05，图7A；“第10天”)。

最后，如与溶媒相比，在Dysport中第7天和第10天时观察到AUC 6-26g降低的倾向性，但是对于这两个时间点(P>0.05，图7B；“第7天”和“第10天”)，尽管Dysport的该作用对于AUC 1-6g更明显。

胸脊髓中c-SNAP 25免疫组织化学(IHC)结果

在皮内(I.D.)注射Dysport至皮区神经后，在胸脊髓中腹角和背侧角处看到c-SNAP25染色。令人感兴趣的是，这种c-SNAP25染色还在逼尿肌内(I.DT)注射(注射入膀胱逼尿肌)后见到，例如，胸脊髓中在I.D施用和I.DT施用后见到相似的c-SNAP25染色位置、分布和严重程度。这表明在腹部平面施用I.D Dysport产生与I.DT施用相同的逆向运输(即，至相同的脊髓区域)，据信后者归因于借助内脏传入纤维的逆向轴突运输。参见图8。

腰骶脊髓中c-SNAP25 IHC结果

在皮内(I.D.)注射Dysport后，在腰骶脊髓中腹角和背侧角处看到c-SNAP25染色。令人感兴趣的是，这种c-SNAP25染色还在逼尿肌内(I.DT)注射(注射入膀胱逼尿肌)后见到，例如，腰骶脊髓中在I.D施用和I.DT施用后见到相似的c-SNAP25染色位置、分布和严重程度。这表明在腹部平面施用I.D Dysport产生与I.DT施用相同的逆向运输(即，至相同的脊髓区域)，据信后者归因于借助内脏传入纤维的逆向轴突运输。参见图9。

猪脊髓中c-SNAP25 IHC结果

为了补足这种啮齿动物模型数据，发明人在Dysport注射后还分析了猪脊髓中的SNAP-25剪切情况。以下研究中使用体重11-13kg的雄性家猪。猪有利地与人皮肤在结构、厚度、神经支配、色素沉着、胶原蛋白和脂质组成、伤口愈合和免疫应答方面共有相似性。

关于猪处置和采用猪模型进行实验的详述材料和方法描述于PCT/GB2021/051838，所述文献通过引用方式并入本文作为参考。简而言之，在含有500U Dysport的小瓶中提供Dysport。为了给药，将500U小瓶用盐水(0.9％ NaCl)复溶。使用接合至1ml注射器的30G针头皮内注射Dysport或盐水(阴性对照)并且注入散布在猪左腿上切口周围的10个部位(20U Dysport注入每个部位)-使用6头动物(8-10周龄)。

对Dysport注射部位(猪左腿)及不同脊髓区域处的组织/皮肤样品进行免疫组织化学(参见图10)。对注射Dysport后5-7天收集的样品在神经皮肤样品中检不出切割的SNAP-25。切割的SNAP-25可见于脊髓的同侧背侧角中，例如在注射Dysport的猪的腰区域L5-L6(参见图10)中(但在注射盐水的猪中则不是如此)。这些腰部区域的脊神经(L5-L6)映射至并支配左腿上的皮区(例如其中注射Dysport)，并且提示脊髓中的BoNT/A活性以及提示在皮内注射至皮区后运输BoNT/A至脊髓的这个区域。与其左肋(真皮内)注射了Dysport的猪中已切割SNAP-25染色相比时，同侧背侧角中已切割SNAP-25染色的局部化不同，这表明注射入不同皮区允许在脊髓的不同部分引起BoNT/A活性。

另外，在猪(相比未处理猪时，经Dysport处理的那些猪)的脊髓中、特别在其背侧角中见到SNAP-25切割作用增加的相同区域内，星形胶质细胞活化的标志物GFAP的表达水平降低。

结论

本研究的目的是评估以25U/kg皮内施用肉毒毒素(Dysport)对CYP诱导的雌性Sprague-Dawley大鼠慢性膀胱炎模型中内脏疼痛的影响。

与先前数据和已发表的数据一致，注射CYP(40mg/kg，腹膜内)3次诱导慢性内脏疼痛(长达10天)。CYP的影响以痛觉超敏(即伤害感受阈值降低和AUC 1-6g增加)和痛觉过敏(即AUC 6-26g增加)为特征。

这项研究显示，向皮区神经、尤其通过皮内注射法单次注射梭菌神经毒素(例如BoNT/A又称作Dysport)对CYP所致内脏疼痛提供抗伤害感受性特性。通过梭菌神经毒素/Dysport(皮内)注射降低CYP诱导的痛觉超敏和痛觉过敏，其中痛觉超敏是抑制的特别靶。Dysport影响长久持持续，因为梭菌神经毒素/Dysport在其施用后20天仍然高效。

实施例2-抑制膀胱疼痛综合征引起的疼痛

患者表现出感知为内脏疼痛的重度盆腔疼痛和异常排尿频率。诊断该患者患有间质性膀胱炎/膀胱疼痛综合征(IC/BPS)，并且确定膀胱为引起内脏疼痛的器官。

为了确定哪个皮区施用梭菌神经毒素以抑制内脏(膀胱)疼痛，查询了皮区及其相应器官/内脏的图，如在作为国际脊髓损伤神经系统分类标准(ISNCSCI)产生的美国脊髓损伤协会(ASIA)工作表中略述的那个图。在撰写本文时，2019版所述工作表可获自：https://asia-spinalinjury.org/wp-content/uploads/2019/10/ASIA-ISCOS-Worksheet_10.2019_PRINT-Page-1-2.pdf。其他信息衍生自Wall和Melzack的“Textbook of Pain(疼痛教材)”(McMahon等人编辑；第6版)-参见第53章和图53-1(本文中部分如图1B改编)。该图显示内脏支配作用的节段平面和多种内脏的相应皮区，例如‘映射’至内脏的皮区。值得注意的是，T12、L1、S2、S3和S4皮区映射至膀胱。

因此，通过皮内施用至靠近锁骨中线与腹股沟韧带中点交叉点的皮肤，施用梭菌神经毒素(5,000pg Dysport)至T12皮区。在10天后，评估内脏(膀胱)疼痛水平，并且发现其显著降低。在施用梭菌神经毒素后30天和在施用后90天也观察到内脏(膀胱)疼痛的抑制。

实施例3-抑制子宫内膜异位症引起的疼痛

一位女性患者表现出感知为内脏疼痛的重度盆腔疼痛，月经期间加重。患者经其全科医生(GP)诊断为患子宫内膜异位症，并且确定卵巢为导致内脏疼痛的器官。

为了确定哪个皮区施用梭菌神经毒素以抑制内脏(卵巢)疼痛，查询了皮区及其相应器官/内脏的图，如在作为国际脊髓损伤神经系统分类标准(ISNCSCI)产生的美国脊髓损伤协会(ASIA)工作表中略述的那个图。在撰写本文时，2019版所述工作表可获自：https://asia-spinalinjury.org/wp-content/uploads/2019/10/ASIA-ISCOS-Worksheet_10.2019_PRINT-Page-1-2.pdf。其他信息衍生自Wall和Melzack的“Textbook of Pain(疼痛教材)”(McMahon等人编辑；第6版)-参见第53章和图53-1(本文中部分如图1B改编)。该图显示内脏支配作用的节段平面和多种内脏的相应皮区，例如‘映射’至内脏的皮区。值得注意的是，T11皮区映射至卵巢。

因此，在脐位置和腹股沟韧带之间居中的水平位置通过皮内施用至靠近锁骨中线交叉点的皮肤，施用梭菌神经毒素(5,000pg Dysport)至T11皮区。在10天后，评估内脏(卵巢)疼痛水平，并且发现其显著降低。在施用梭菌神经毒素后30天和在施用后90天也观察到内脏(卵巢)疼痛的抑制。

实施例4-抑制胰腺炎引起的疼痛

患者表现出感知为内脏疼痛的重度腹痛。注意到胰腺炎症，患者经其全科医生(GP)诊断为患胰腺炎，并且确定胰腺为引起内脏疼痛的器官。

为了确定哪个皮区施用梭菌神经毒素以抑制内脏(胰腺)疼痛，查询了皮区及其相应器官/内脏的图，如在作为国际脊髓损伤神经系统分类标准(ISNCSCI)产生的美国脊髓损伤协会(ASIA)工作表中略述的那个图。在撰写本文时，2019版所述工作表可获自：https://asia-spinalinjury.org/wp-content/uploads/2019/10/ASIA-ISCOS-Worksheet_10.2019_PRINT-Page-1-2.pdf。其他信息衍生自Wall和Melzack的“Textbook of Pain(疼痛教材)”(McMahon等人编辑；第6版)-参见第53章和图53-1(本文中如图1A改编)。该图显示内脏支配作用的节段平面和多种内脏的相应皮区，例如‘映射’至内脏的皮区。值得注意的是，T7-T12皮区映射至胰腺。

因此，在脐部水平位置通过皮内施用至靠近锁骨中线交叉点的皮肤，施用梭菌神经毒素(5,000pg Dysport)至T10皮区。在10天后，评估内脏(胰腺)疼痛水平，并且发现其显著降低。在施用梭菌神经毒素后30天和施用后长达90天也观察到内脏(胰腺)疼痛的抑制。

实施例5-抑制胃溃疡引起的疼痛

患者表现出感知为内脏疼痛的重度腹痛。患者经其全科医生(GP)诊断为胃溃疡，并且确定胃为引起内脏疼痛的器官。

为了确定哪个皮区施用梭菌神经毒素以抑制内脏(胃部)疼痛，查询了皮区及其相应器官/内脏的图，如在作为国际脊髓损伤神经系统分类标准(ISNCSCI)产生的美国脊髓损伤协会(ASIA)工作表中略述的那个图。在撰写本文时，2019版所述工作表可获自：https://asia-spinalinjury.org/wp-content/uploads/2019/10/ASIA-ISCOS-Worksheet_10.2019_PRINT-Page-1-2.pdf。其他信息衍生自Wall和Melzack的“Textbook of Pain(疼痛教材)”(McMahon等人编辑；第6版)-参见第53章和图53-1(本文中部分如图1B改编)。该图显示内脏支配作用的节段平面和多种内脏的相应皮区，例如‘映射’至内脏的皮区。值得注意的是，T8-T10皮区映射至胰腺。

因此，通过皮内施用至锁骨中线与剑突位置和脐部位置之间一半距离处的水平位置交叉点附近，施用梭菌神经毒素(5,000pg Dysport)至T8皮区。在10天后，评估内脏(胃部)疼痛水平，并且发现其显著降低。在施用梭菌神经毒素后30天和在施用后90天也观察到内脏(胃部)疼痛的抑制。

以上说明书中提到的全部出版物均在本文中通过引用的方式并入本文作为参考。本发明的所述方法和系统的多种修改和变型将对本领域技术人员显而易见，而不脱离本发明的范围和精神。虽然已经联系具体的优选实施方案描述本发明，应当理解如要求专利的本发明不应不当地受限于此类具体的实施方案。实际上，用于实施本发明的所述模式的多种修改，其对于生物化学和生物技术或相关领域的技术人员显而易见，意在属于以下权利要求的范围内。

Claims

1.梭菌神经毒素，用于抑制患者的内脏疼痛的方法中，所述方法包括：

a.确定患者中造成所述内脏疼痛的器官；

i.膀胱映射至T11、T12、L1、S1、S2、S3和/或S4皮区神经；

ii.输卵管映射至T11皮区神经；

iii.子宫映射至T12和/或L1皮区神经；

iv.子宫颈映射至S2、S3和/或S4皮区神经；

v.胃映射至T8、T9和/或T10皮区神经；

vi.肝脏映射至T8、T9、T10和/或T11皮区神经；

vii.胆囊映射至T8、T9、T10和/或T11皮区神经；

viii.胰腺映射至T7、T8、T9、T10、T11和/或T12皮区神经；

ix.小肠映射至T10、T11和/或T12皮区神经；

x.结肠映射至T11、S1、S2、S3和/或S4皮区神经；

xi.肾脏映射至T10、T11、T12和/或L1皮区神经；

xii.输尿管映射至T11、T12和/或L1皮区神经；

xiii.卵巢映射至T11皮区神经；

xiv.睾丸映射至T10、T11、L1、L2、S1、S2、S3和/或S4皮区神经；

c.在临近于所述一个或多个具体指定的皮区神经的部位施用治疗有效量的梭菌神经毒素，其中在施用所述梭菌神经毒素至患者后，梭菌神经毒素经由逆向轴突运输而被运输至脊髓，在此处它结合感觉性传入神经细胞，通过受体介导的内吞作用进入所述细胞并且阻抑神经递质从所述细胞释放，因而抑制所述内脏疼痛，

其中通过皮内施用进行梭菌神经毒素的施用。

2.抑制患者的内脏疼痛的方法，所述方法包括：

a.确定患者中造成所述内脏疼痛的器官；

i.膀胱映射至T11、T12、L1、S1、S2、S3和/或S4皮区神经；

ii.输卵管映射至T11皮区神经；

iii.子宫映射至T12和/或L1皮区神经；

iv.子宫颈映射至S2、S3和/或S4皮区神经；

v.胃映射至T8、T9和/或T10皮区神经；

vi.肝脏映射至T8、T9、T10和/或T11皮区神经；

vii.胆囊映射至T8、T9、T10和/或T11皮区神经；

viii.胰腺映射至T7、T8、T9、T10、T11和/或T12皮区神经；

ix.小肠映射至T10、T11和/或T12皮区神经；

x.结肠映射至T11、S1、S2、S3和/或S4皮区神经；

xi.肾脏映射至T10、T11、T12和/或L1皮区神经；

xii.输尿管映射至T11、T12和/或L1皮区神经；

xiii.卵巢映射至T11皮区神经；

xiv.睾丸映射至T10、T11、L1、L2、S1、S2、S3和/或S4皮区神经；

其中通过皮内施用进行梭菌神经毒素的施用。

3.梭菌神经毒素的用途，用于制造抑制患者的内脏疼痛的药物，其中抑制内脏疼痛包括：

a.确定患者中造成所述内脏疼痛的器官；

i.膀胱映射至T11、T12、L1、S1、S2、S3和/或S4皮区神经；

ii.输卵管映射至T11皮区神经；

iii.子宫映射至T12和/或L1皮区神经；

iv.子宫颈映射至S2、S3和/或S4皮区神经；

v.胃映射至T8、T9和/或T10皮区神经；

vi.肝脏映射至T8、T9、T10和/或T11皮区神经；

vii.胆囊映射至T8、T9、T10和/或T11皮区神经；

viii.胰腺映射至T7、T8、T9、T10、T11和/或T12皮区神经；

ix.小肠映射至T10、T11和/或T12皮区神经；

x.结肠映射至T11、S1、S2、S3和/或S4皮区神经；

xi.肾脏映射至T10、T11、T12和/或L1皮区神经；

xii.输尿管映射至T11、T12和/或L1皮区神经；

xiii.卵巢映射至T11皮区神经；

xiv.睾丸映射至T10、T11、L1、L2、S1、S2、S3和/或S4皮区神经；

其中通过皮内施用进行梭菌神经毒素的施用。

4.根据权利要求1所述用途的梭菌神经毒素、根据权利要求2所述的方法或根据权利要求3所述的用途、其中所述内脏疼痛由选自以下的疾病引起：膀胱疼痛综合征(间质性膀胱炎)、膀胱结石、肝硬化、乳糜泻、克罗恩病、子宫内膜异位症、胆囊结石、胃溃疡、肠易激综合征、肾结石、胰腺炎、腹膜炎和溃疡性结肠炎。

5.根据前述权利要求中任一项所述用途的梭菌神经毒素、方法或用途，其中所述内脏疼痛由膀胱疼痛综合征(间质性膀胱炎)引起。

6.根据权利要求5所述用途的梭菌神经毒素、方法或用途，其中所述皮区神经选自T12、L1、S2、S3和S4皮区神经。

7.根据权利要求1-4中任一项所述用途的梭菌神经毒素、方法或用途，其中所述内脏疼痛由子宫内膜异位症引起。

8.根据权利要求7所述用途的梭菌神经毒素、方法或用途，其中所述内脏疼痛作为痛经、慢性盆腔疼痛(CPP)、性交疼痛和/或慢性背痛感知。

9.根据权利要求7或权利要求8所述用途的梭菌神经毒素、方法或用途，其中所述皮区神经选自T11、T12、L1、S2、S3和S4皮区神经。

10.根据前述权利要求中任一项所述用途的梭菌神经毒素、方法或用途，其中所述内脏疼痛包含痛觉超敏或由痛觉超敏组成。

11.根据前述权利要求中任一项所述用途的梭菌神经毒素、方法或用途，其中所述内脏疼痛在施用梭菌神经毒素后至少30天被抑制。

12.根据前述权利要求中任一项所述用途的梭菌神经毒素、方法或用途，其中所述内脏疼痛在施用梭菌神经毒素后至少40天被抑制。

13.根据前述权利要求中任一项所述用途的梭菌神经毒素、方法或用途，其中将梭菌神经毒素施用至多于一个皮区神经，所述皮区神经映射至经确定助长内脏疼痛的器官。

14.根据前述权利要求中任一项所述用途的梭菌神经毒素、方法或用途，其中每个治疗疗程在4个或更多个注射部位施用梭菌神经毒素。

15.根据前述权利要求中任一项所述用途的梭菌神经毒素、方法或用途，其中梭菌神经毒素是肉毒杆菌神经毒素(BoNT)。

16.根据前述权利要求中任一项所述用途的梭菌神经毒素、方法或用途，其中梭菌神经毒素是肉毒杆菌神经毒素血清型A(BoNT/A)。

17.根据前述权利要求中任一项所述用途的梭菌神经毒素、方法或用途，其中梭菌神经毒素是嵌合神经毒素。