CN118272516A - 尿液迁移体miRNA标志物及其应用、诊断原发性肾小球疾病的试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及分子诊断技术领域，公开了一种尿液迁移体miRNA标志物及其应用、诊断原发性肾小球疾病的试剂盒。所述原发性肾小球疾病选自膜性肾病、微小病变型肾病、IgA肾病中的至少一种。本发明提供的尿液迁移体miRNA标志物可以长期稳定存在尿液中，耐RNA酶降解，能够用于肾脏疾病的早期诊断、个体化治疗和预后判断，为个体化治疗的新型药物研发提供可能的靶点。
Description
技术领域
本发明涉及分子诊断技术领域，具体涉及一种尿液迁移体miRNA标志物及其应用、诊断原发性肾小球疾病的试剂盒。
背景技术
膜性肾病、微小病变型肾病和IgA肾病都是成人原发性肾小球疾病最常见的病理类型。其中，微小病变型肾病的临床表现是肾病综合征，由多种病因和发病机制引起的一种原发性肾小球疾病，IgA肾病是最常见的肾小球疾病，是导致终末肾病的主要原因之一，而膜性肾病本质是一种自身免疫性肾小球疾病，病理特征是免疫复合物在肾小球上皮细胞下弥漫性的广泛沉积。
针对前述3中原发性肾小球疾病，采用尿蛋白定量分析是目前比较重要的实验室手段。24小时尿蛋白定量是检测尿蛋白的金标准，但是留取24小时尿的过程繁琐，标本收集的不准确会影响检验结果。尿白蛋白检测比24小时尿总蛋白更特异和敏感地反应肾小球通透性的变化，但是仍然存在一定变异性，特别是尿蛋白浓度较低时。
目前，肾活检是诊断原发性肾小球疾病的金标准，但此项有创操作可能导致出血、肾周血肿和动静脉瘘，部分患者因存在肾活检禁忌。因此，寻找具有原发性肾小球疾病早期诊断、疗效监测及预后判断的特异性生物标志物，显得尤为迫切和重要。
因此，寻找早期无创性诊断原发性肾小球疾病的特异性生物标志物具有重要意义。
microRNA(miRNA)是一类内生的、长度约18-24个核苷酸的小RNA，具有多种重要的生物调节作用。迁移体是细胞在进行迁移时在运动后端留下的收缩纤维，在收缩纤维的末端或分叉处，会长出直径在0.5-3μm的小囊泡。迁移体内含有数量不一的直径为100nm左右的小囊泡，细胞内的蛋白及其它成分可通过迁移体释放到细胞外环境中。研究报道尿液中迁移体的水平可以作为早期足细胞损伤特异的无创性生物标志物。足细胞损伤在肾小球疾病的病理生理学中具有重要作用，并且足细胞释放的迁移体具有独特的miRNA表达谱。因此，我们推测尿液中迁移体来源的miRNA对原发性肾小球疾病的诊断、疗效监测或预后判断具有重要临床价值。
然而，对于膜性肾病、微小病变型肾病和IgA肾病等原发性肾小球疾病，利用尿液迁移体miRNA标志物来辅助诊断尚未有研究。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种对原发性肾小球疾病进行诊断、疗效检测或预后判断更加准确的尿液迁移体miRNA标志物及其应用。
为了实现上述目的，本发明第一方面提供一种尿液迁移体miRNA标志物，该尿液迁移体miRNA标志物选自hsa-miR-139-5p、hsa-miR-143-3p、hsa-miR-1180-3p、hsa-miR-320a-3p、hsa-miR-449a、hsa-miR-155-5p、hsa-miR-574-5p、hsa-miR-128-3p、hsa-miR-532-5p、hsa-miR-429、hsa-miR-378a-3p、hsa-miR-12136、hsa-miR-363-3p、hsa-miR-125b-5p、hsa-miR-15b-5p、hsa-miR-125a-5p、hsa-miR-664a-3p、hsa-miR-374c-3p、hsa-miR-150-5p、hsa-miR-486-5p中的至少一种。
本发明第二方面提供第一方面所述的尿液迁移体miRNA标志物在制备用于诊断原发性肾小球疾病的试剂盒中的应用。
本发明第三方面提供一种诊断原发性肾小球疾病的试剂盒，该试剂盒包括鉴定第一方面所述的尿液迁移体miRNA标志物的试剂。
本发明提供的尿液迁移体miRNA标志物可以长期稳定存在尿液中，耐RNA酶降解，能够用于肾脏疾病的早期诊断、个体化治疗和预后判断，为个体化治疗的新型药物研发提供可能的靶点。
本发明的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。
附图说明
图1是本发明实施例1中膜性肾病和健康受试者的尿液迁移体miRNA测序热图；
图2是本发明实施例1中膜性肾病患者显著差异表达的尿液迁移体miRNAs靶基因KEGG生物学功能聚类图；
图3是本发明实施例2中微小病变型肾病和健康受试者的尿液迁移体miRNA测序热图；
图4是本发明实施例2中微小病变型肾病患者显著差异表达的尿液迁移体miRNAs靶基因KEGG生物学功能聚类图；
图5是本发明实施例3中IgA肾病和健康受试者的尿液迁移体miRNA测序热图；
图6是本发明实施例3中IgA肾病患者显著差异表达的尿液迁移体miRNAs靶基因KEGG生物学功能聚类图；
图7qPCR检测尿液迁移体hsa-miR-449a、hsa-miR-486-5p及hsa-miR-150-5p的表达水平。
具体实施方式
在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
如前所述，本发明的第一方面提供了一种尿液迁移体miRNA标志物，该尿液迁移体miRNA标志物选自hsa-miR-139-5p、hsa-miR-143-3p、hsa-miR-1180-3p、hsa-miR-320a-3p、hsa-miR-449a、hsa-miR-155-5p、hsa-miR-574-5p、hsa-miR-128-3p、hsa-miR-532-5p、hsa-miR-429、hsa-miR-378a-3p、hsa-miR-12136、hsa-miR-363-3p、hsa-miR-125b-5p、hsa-miR-15b-5p、hsa-miR-125a-5p、hsa-miR-664a-3p、hsa-miR-374c-3p、hsa-miR-150-5p、hsa-miR-486-5p中的至少一种。
需要说明的是，特定细胞产生的特定miRNA可以通过微囊泡被分泌至细胞外，微囊泡运输特定miRNA进入靶细胞后，分泌miRNA直接作用于靶分子mRNA，通过抑制受体细胞中其相应的靶基因的翻译最终调节靶细胞的活性和功能。
发明人在研究过程中发现，本发明提供的尿液迁移体miRNA标志物能够作为一类特异性反映足细胞损伤的微囊泡，从而能够作为膜性肾病、微小病变型肾病和IgA肾病等肾脏疾病的新型分子标志物，实现对肾脏疾病的早期诊断、个体化治疗和预后判断，对于疾病的无创性诊断具有重要意义。
其中，前述第一方面涉及的尿液迁移体miRNA标志物的核苷酸序列为本领域技术人员所熟知，例如，所述hsa-miR-139-5p的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述hsa-miR-143-3p的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；所述hsa-miR-1180-3p的核苷酸序列如SEQ IDNO:3所示；所述hsa-miR-320a-3p的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；所述hsa-miR-449a的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示；所述hsa-miR-155-5p的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示；所述hsa-miR-574-5p的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示；所述hsa-miR-128-3p的核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示；所述hsa-miR-532-5p的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示；所述hsa-miR-429的核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示；所述hsa-miR-378a-3p的核苷酸序列如SEQ IDNO:11所示；所述hsa-miR-12136的核苷酸序列如SEQ ID NO:12所示；所述hsa-miR-363-3p的核苷酸序列如SEQ ID NO:13所示；所述hsa-miR-125b-5p的核苷酸序列如SEQ ID NO:14所示；所述hsa-miR-15b-5p的核苷酸序列如SEQ ID NO:15所示；所述hsa-miR-125a-5p的核苷酸序列如SEQ ID NO:16所示；所述hsa-miR-664a-3p的核苷酸序列如SEQ ID NO:17所示；所述hsa-miR-374c-3p的核苷酸序列如SEQ ID NO:18所示；所述hsa-miR-150-5p的核苷酸序列如SEQ ID NO:19所示；所述hsa-miR-486-5p的核苷酸序列如SEQ ID NO:20所示。
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SEQ ID NO:20：UCCUGUACUGAGCUGCCCCGAG
需要说明的是，能够转录成本发明提供的miRNA的DNA序列也应视为在本发明的保护范围之内。
还需要说明的是，本领域技术人员在了解了本发明的miRNA和如上的DNA后，出于对该miRNA或DNA进行扩增、酶切、载体构建、表达等常规目的而对该miRNA或DNA进行的序列添加、替换、敲除和修饰均应视为在本发明的保护范围之内。
优选情况下，该尿液迁移体miRNA标志物选自hsa-miR-139-5p、hsa-miR-143-3p、hsa-miR-155-5p、hsa-miR-429、hsa-miR-12136、hsa-miR-363-3p、hsa-miR-15b-5p、hsa-miR-150-5p、hsa-miR-486-5p中的至少一种。发明人在研究过程中发现，采用该特别优选的具体实施方式，能够更有效地无创性诊断膜性肾病、微小病变型肾病和IgA肾病等肾脏疾病。
如前所述，本发明的第二方面提供了第一方面所述的尿液迁移体miRNA标志物在制备用于诊断原发性肾小球疾病的试剂盒中的应用。
优选地，所述原发性肾小球疾病选自膜性肾病、微小病变型肾病、IgA肾病中的至少一种。
如前所述，本发明的第三方面提供了一种诊断原发性肾小球疾病的试剂盒，该试剂盒包括鉴定第一方面所述的尿液迁移体miRNA标志物的试剂。
本发明的试剂盒可以有效定量检测hsa-miR-139-5p、hsa-miR-143-3p、hsa-miR-1180-3p、hsa-miR-320a-3p、hsa-miR-449a、hsa-miR-155-5p、hsa-miR-574-5p、hsa-miR-128-3p、hsa-miR-532-5p、hsa-miR-429、hsa-miR-378a-3p、hsa-miR-12136、hsa-miR-363-3p、hsa-miR-125b-5p、hsa-miR-15b-5p、hsa-miR-125a-5p、hsa-miR-664a-3p、hsa-miR-374c-3p、hsa-miR-150-5p、hsa-miR-486-5p，从而辅助诊断原发性肾小球疾病，敏感性和特异性较高。
根据本发明，所述试剂盒还含有从尿液迁移体中提取RNA的试剂。从尿液迁移体中提取RNA的试剂可以包括：Trizol，氯仿，异丙醇，无水乙醇，DEPC水，miRNA检测探针(hsa-miR-139-5p、hsa-miR-143-3p、hsa-miR-1180-3p、hsa-miR-320a-3p、hsa-miR-449a、hsa-miR-155-5p、hsa-miR-574-5p、hsa-miR-128-3p、hsa-miR-532-5p、hsa-miR-429、hsa-miR-378a-3p、hsa-miR-12136、hsa-miR-363-3p、hsa-miR-125b-5p、hsa-miR-15b-5p、hsa-miR-125a-5p、hsa-miR-664a-3p、hsa-miR-374c-3p、hsa-miR-150-5p、hsa-miR-486-5p)，逆转录试剂，RT-qPCR试剂。
在本发明的一种实施方式中，涉及一种诊断膜性肾病的方法，其包括：从待测试样(可以为尿液)中获得尿液迁移体；从尿液迁移体中提取RNA；定量检测hsa-miR-139-5p、hsa-miR-143-3p、hsa-miR-1180-3p、hsa-miR-320a-3p、hsa-miR-449a、hsa-miR-155-5p、hsa-miR-574-5p、hsa-miR-128-3p。如果检测的hsa-miR-139-5p、hsa-miR-143-3p、hsa-miR-1180-3p、hsa-miR-320a-3p、hsa-miR-449a、hsa-miR-155-5p、hsa-miR-574-5p、hsa-miR-128-3p中的至少一种与对照试样具有显著差异，则待测试样对应的个体患有膜性肾病。
在本发明的另一种实施方式中，涉及一种诊断微小病变型肾病的方法，其包括：从待测试样(可以为尿液)中获得尿液迁移体；从尿液迁移体中提取RNA；定量检测hsa-miR-532-5p、hsa-miR-429、hsa-miR-378a-3p、hsa-miR-12136、hsa-miR-363-3p。如果检测的hsa-miR-532-5p、hsa-miR-429、hsa-miR-378a-3p、hsa-miR-12136、hsa-miR-363-3p中的至少一种与对照试样具有显著差异，则待测试样对应的个体患有微小病变型肾病。
在本发明的还一种实施方式中，涉及一种诊断IgA肾病的方法，其包括：从待测试样(可以为尿液)中获得尿液迁移体；从尿液迁移体中提取RNA；定量检测hsa-miR-125b-5p、hsa-miR-15b-5p、hsa-miR-125a-5p、hsa-miR-664a-3p、hsa-miR-374c-3p、hsa-miR-150-5p、hsa-miR-486-5p。如果检测的hsa-miR-125b-5p、hsa-miR-15b-5p、hsa-miR-125a-5p、hsa-miR-664a-3p、hsa-miR-374c-3p、hsa-miR-150-5p、hsa-miR-486-5p中的至少一种与对照试样具有显著差异，则待测试样对应的个体患有IgA肾病。
以下将通过实例对本发明进行详细描述。以下实例中，未作相反说明的情况下，涉及的原料和仪器均为市售品。
实施例1
随机选取膜性肾病患者共6例。其中，男3例，女3例，平均年龄为44岁。另选取性别年龄匹配的健康受试者为健康对照。
(1)收取患者晨尿至50mL的离心管中，立即使用4℃预冷好的高速离心机(型号thermo-50ml，购自Thermo LYNX4000*公司)1000g离心10min，弃沉淀回收上清，后4000g离心20min，弃沉淀回收上清，之后20000g离心30min，沉淀即为迁移体；用100μL的PBS溶解沉淀，收集于干净除酶的1.5ml的Eppendorf管(以下简称“EP管”)中，用于提取RNA。
(2)尿液迁移体的提取
向尿液分离的迁移体加入1ml的(货号为15596018，购自InvitrogenTM公司)涡旋20s，在室温下静置10min；加入200μL的氯仿，涡旋20sec，室温放置10min；在4℃下，16000g离心20min；吸取上清至一个新的除酶EP管中，加入等体积的异丙醇，颠倒混匀，室温静止10min；在4℃下，16000g离心20min，弃上清；然后，加入1mL浓度为75％的DEPC处理水(购自ThermoFisher Scientific公司)配置的乙醇，涡旋混匀；在4℃下，16000g离心20min，弃上清后室温晾干；加入20μL的DEPC水溶解。将6例膜性肾病尿液迁移体提取的RNA混合成1管用于测序，6例健康对照尿液迁移体提取的RNA混合成1管用于测序。
(3)RNA的提取和测序
将前述得到的尿液迁移体RNA通过Agilent 2100生物分析仪进行质检，结果显示膜性肾病患者尿液迁移体提取的RNA总量为240ng/μL，健康对照尿液迁移体提取的RNA总量为143.3ng/μL。然后将提取的RNA置于测序仪(MGISEQ-200测序仪，购自华大智造公司)中进行miRNA测序，具体测序结果见图1和表1。
本发明示例性地提供了膜性肾病和健康受试者的尿液迁移体miRNA测序热图，见图1，其中，MN为膜性肾病的尿液迁移体miRNA测序热图，Control为健康受试者的尿液迁移体miRNA测序热图。
从图1中可以看出，与健康受试者的尿液迁移体miRNA的表达模型相比，膜性肾病有8种的尿液迁移体miRNA表达水平显著升高。
表1
通过上表可以看出，与健康对照人群相比，膜性肾病患者的尿液迁移体中有8种miRNAs的表达均显著上调。
利用TargetScan(https://www.targetscan.org/vert_72/)软件对膜性肾病患者与对照人群(健康受试者)显著差异表达的尿液迁移体miRNAs进行靶基因预测，结果见表2。
表2
从上表可以看出，本发明提供的前述8种尿液迁移体miRNA的靶基因均较多，其中，hsa-miR-574-5p的靶基因高达3600多种，可见，前述8种尿液迁移体miRNA具有功能丰富的特点。
通过KEGG数据库(https://www.kegg.jp/)对膜性肾病患者与对照人群(健康受试者)显著差异表达的尿液迁移体miRNAs的靶基因进行了信号通路富集分析，具体分析结果见图2，其中，Control表示正常对照人群，MN表示膜性肾病患者。
从图2中可以看出，尿液迁移体miRNAs的靶基因在多条代谢相关通路有显著富集，其中，膜性肾病患者尿液迁移体显著差异表达的8种miRNAs在膜性肾病的发生发展中可能发挥重要的作用。
实施例2
本实施例按照实施例1相似的方法提取微小病变型肾病患者的尿液迁移体RNA，将前述得到的尿液迁移体RNA通过Agilent 2100生物分析仪进行质检，结果显示微小病变型肾病患者尿液迁移体提取的RNA总量为290ng/μL，健康对照尿液迁移体提取的RNA总量为240ng/μL。
将提取得到的RNA进行miRNA测序，具体测序结果见图3和表3。其中，随机选取微小病变型肾病共6例，男3例，女3例，平均年龄为46岁。另选取性别年龄匹配的健康受试者为健康对照。
本发明示例性地提供了微小病变型肾病和健康受试者的尿液迁移体miRNA测序热图，见图3，其中，MCD为微小病变型肾病的尿液迁移体miRNA测序热图，Control为健康受试者的尿液迁移体miRNA测序热图。
从图3中可以看出，与健康受试者的尿液迁移体miRNA的表达模型相比，微小病变型肾病患者有5种尿液迁移体miRNA表达均显著上调。
表3
通过上表可以看出，与健康对照人群相比，微小病变型肾病患者的尿液迁移体中有5种miRNAs(reads≥10000)的表达均显著上调。
利用TargetScan(https://www.targetscan.org/vert_72/)软件对微小病变型肾病患者与对照人群(健康受试者)显著差异表达的尿液迁移体miRNAs进行了靶基因预测，结果见表4。
表4
| miRNA | TargetScan软件预测的靶基因数目 |
| hsa-miR-532-5p | 247 |
| hsa-miR-429 | 371 |
| hsa-miR-378a-3p | 223 |
| hsa-miR-12136 | 2631 |
| hsa-miR-363-3p | 278 |
从上表可以看出，本发明提供的前述5种尿液迁移体miRNA的靶基因均在200种以上；可见，前述5种尿液迁移体miRNA具有功能丰富的特点。
通过KEGG数据库(https://www.kegg.jp/)对微小病变型肾病患者与对照人群(健康受试者)显著差异表达的尿液迁移体miRNAs的靶基因进行了信号通路富集分析，具体分析结果见图4，其中，Control表示正常对照人群，MCD表示微小病变型肾病患者。
从图4中可以看出，尿液迁移体miRNAs的靶基因在多条代谢相关通路有显著富集，其中，微小病变型肾病患者尿液迁移体显著差异表达的5种miRNAs在微小病变型肾病的发生发展中可能发挥重要的作用。
实施例3
本实施例按照实施例1相似的方法提取IgA肾病患者的尿液迁移体RNA，将前述得到的尿液迁移体RNA通过Agilent 2100生物分析仪进行质检，结果显示IgA肾病患者尿液迁移体提取的RNA总量为286ng/μL，健康对照尿液迁移体提取的RNA总量为240ng/μL。
并将提取得到的RNA进行miRNA测序，具体测序结果见图5和表5。其中，随机选取IgA肾病共6例，男3例，女3例，平均年龄为38岁。另选取性别年龄匹配的健康受试者为健康对照。
本发明示例性地提供了IgA肾病和健康受试者的尿液迁移体miRNA测序热图，见图5，其中，IgAN为IgA肾病的尿液迁移体miRNA测序热图，Control为健康受试者的尿液迁移体miRNA测序热图。
从图5中可以看出，与健康受试者的尿液迁移体miRNA的表达模型相比，IgA肾病患者有7种尿液迁移体miRNA表达均显著上调。
表5
通过上表可以看出，与健康对照人群相比，IgA肾病患者的尿液迁移体中有7种miRNAs的表达均显著上调。
本实施例利用TargetScan(https://www.targetscan.org/vert_72/)对IgA肾病患者与对照人群(健康受试者)显著差异表达的尿液迁移体miRNAs进行了靶基因预测，结果见表6。
表6
| miRNA | TargetScan软件预测的靶基因数目 |
| hsa-miR-125b-5p | 931 |
| hsa-miR-15b-5p | 195 |
| hsa-miR-125a-5p | 512 |
| hsa-miR-664a-3p | 5379 |
| hsa-miR-374c-3p | 2479 |
| hsa-miR-150-5p | 356 |
| hsa-miR-486-5p | 174 |
从上表可以看出，本发明提供的前述7种尿液迁移体miRNA的靶基因数目多，其中，hsa-miR-664a-3p的靶基因高达5000多种；可见，前述7种尿液迁移体miRNA均具有功能丰富的特点。
通过KEGG数据库(https://www.kegg.jp/)对IgA肾病患者与对照人群(健康受试者)显著差异表达的尿液迁移体miRNAs的靶基因进行了信号通路富集分析，具体分析结果见图6，其中，Control表示正常对照人群，IgAN表示IgA肾病患者。
从图6中可以看出，尿液迁移体miRNAs的靶基因在多条代谢相关通路有显著富集，其中，IgA肾病患者尿液迁移体显著差异表达的7种miRNAs在IgA肾病的发生发展中可能发挥重要的作用。
在本发明的图2、图4、图6中图例以及左侧纵坐标的英文按照从上至下的顺序依次如表7所示：
表7
实施例4
(1)实验方法
1)miRNA的逆转
使用ABI的茎环引物(购自thermo fisher公司)将尿液提取的微米囊泡中的RNA进行逆转。
miRNA检测的探针货号，miRNA的逆转体系(10μL)如表8所示：
表8
| Assay Name | Assay ID | 厂商 |
| hsa-miR-449a | 001030 | thermo fisher |
| hsa-miR-486-5p | 001278 | thermo fisher |
| hsa-miR-150-5p | 000473 | thermo fisher |
miRNA的逆转体系(10μL)如表9所示：
表9
| 试剂 | 体积(μL) |
| AMV逆转录酶 | 0.5 |
| dNTP Mixture | 1 |
| 5×AMV buffer | 2 |
| miRNA RT primers | 1 |
| DEPC水 | 3.5 |
| RNA | 2 |
| Total | 10.0 |
体系加好后，混匀，放入PCR仪进行反应，miRNA的逆转录程序如表10所示：
表10
| 温度 | 时间 |
| 16℃ | 30min |
| 42℃ | 30min |
| 85℃ | 5min |
| 4℃ | ∞ |
2)qPCR检测miRNA表达水平
逆转录完成后，再利用配套的qPCR探针进行定量检测。Taqman探针的qPCR体系(20μL)如表11所示：
表11
| 试剂 | 体积(μL) |
| rTaq | 0.3 |
| dNTP mixture | 0.4 |
| MgCl2 | 1.2 |
| 10×PCR buffer | 2.0 |
| miRNA Tm primers | 0.33 |
| ddH2O | 14.77 |
| cDNA | 1.0 |
| Total | 20.0μL |
Taqman探针的qPCR程序如表12所示：
表12
(2)实验结果
为了验证hsa-miR-449a、hsa-miR-486-5p及hsa-miR-150-5p是否可能成为原发性肾小球疾病的标志物，通过qPCR检测50例正常对照人群和原发性肾小球疾病患者(包括52例IgA肾病患者和56例膜性肾病患者)的尿液迁移体中hsa-miR-449a、hsa-miR-486-5p及hsa-miR-150的表达水平。实验结果见图7，其中，A为尿液迁移体中hsa-miR-449a的表达水平；B为尿液迁移体中hsa-miR-150-5p的表达水平；C为尿液迁移体中hsa-miR-486-5p的表达水平；Control表示正常对照人群；LN表示IgA肾病患者；MN表示膜性肾病患者；与正常对照相比，***P<0.001。
从图7中可以看出，与正常对照人群相比，IgA肾病患者和膜性肾病患者尿液迁移体中hsa-miR-449a、hsa-miR-486-5p及hsa-miR-150-5p的表达水平均显著高于正常对照人群。该结果提示，尿液迁移体中hsa-miR-449a、hsa-miR-486-5p及hsa-miR-150-5p为原发性肾小球疾病潜在的标志物。
通过上述结果可以看出，本发明提供的尿液迁移体miRNA标志物具有成为膜性肾病、微小病变型肾病和IgA肾病等原发性肾小球疾病的新型分子标志物的潜力，对原发性肾小球疾病的无创性诊断具有重要意义。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是本发明并不限于此。在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，包括各个技术特征以任何其它的合适方式进行组合，这些简单变型和组合同样应当视为本发明所公开的内容，均属于本发明的保护范围。
Claims (6)
1.一种尿液迁移体miRNA标志物，其特征在于，该尿液迁移体miRNA标志物选自hsa-miR-139-5p、hsa-miR-143-3p、hsa-miR-1180-3p、hsa-miR-320a-3p、hsa-miR-449a、hsa-miR-155-5p、hsa-miR-574-5p、hsa-miR-128-3p、hsa-miR-532-5p、hsa-miR-429、hsa-miR-378a-3p、hsa-miR-12136、hsa-miR-363-3p、hsa-miR-125b-5p、hsa-miR-15b-5p、hsa-miR-125a-5p、hsa-miR-664a-3p、hsa-miR-374c-3p、hsa-miR-150-5p、hsa-miR-486-5p中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的尿液迁移体miRNA标志物，其中，所述hsa-miR-139-5p的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；
所述hsa-miR-143-3p的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；
所述hsa-miR-1180-3p的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；
所述hsa-miR-320a-3p的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；
所述hsa-miR-449a的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示；
所述hsa-miR-155-5p的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示；
所述hsa-miR-574-5p的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示；
所述hsa-miR-128-3p的核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示；
所述hsa-miR-532-5p的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示；
所述hsa-miR-429的核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示；
所述hsa-miR-378a-3p的核苷酸序列如SEQ ID NO:11所示；
所述hsa-miR-12136的核苷酸序列如SEQ ID NO:12所示；
所述hsa-miR-363-3p的核苷酸序列如SEQ ID NO:13所示；
所述hsa-miR-125b-5p的核苷酸序列如SEQ ID NO:14所示；
所述hsa-miR-15b-5p的核苷酸序列如SEQ ID NO:15所示；
所述hsa-miR-125a-5p的核苷酸序列如SEQ ID NO:16所示；
所述hsa-miR-664a-3p的核苷酸序列如SEQ ID NO:17所示；
所述hsa-miR-374c-3p的核苷酸序列如SEQ ID NO:18所示；
所述hsa-miR-150-5p的核苷酸序列如SEQ ID NO:19所示；
所述hsa-miR-486-5p的核苷酸序列如SEQ ID NO:20所示。
3.根据权利要求1或2所述的尿液迁移体miRNA标志物，其中，该尿液迁移体miRNA标志物选自hsa-miR-139-5p、hsa-miR-143-3p、hsa-miR-155-5p、hsa-miR-429、hsa-miR-12136、hsa-miR-363-3p、hsa-miR-15b-5p、hsa-miR-150-5p、hsa-miR-486-5p中的至少一种。
4.权利要求1-3中任意一项所述的尿液迁移体miRNA标志物在制备用于诊断原发性肾小球疾病的试剂盒中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其中，所述原发性肾小球疾病选自膜性肾病、微小病变型肾病、IgA肾病中的至少一种。
6.一种诊断原发性肾小球疾病的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括鉴定权利要求1-3中任意一项所述的尿液迁移体miRNA标志物的试剂。
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