CN118252865A - 一种棒状腐败乳杆菌在制备缓解支气管哮喘药物上的应用 - Google Patents
一种棒状腐败乳杆菌在制备缓解支气管哮喘药物上的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明适用于生物技术领域，提供了一种棒状腐败乳杆菌在制备缓解支气管哮喘药物上的应用，所述棒状腐败乳杆菌为棒状腐败乳杆菌KCTC 3167。本发明还提供了一种缓解支气管哮喘的药物，所述药物中含有棒状腐败乳杆菌KCTC 3167。本发明通过造模哮喘小鼠，发现棒状腐败乳杆菌KCTC 3167对哮喘小鼠气道炎症、气道高反应性有显著的抑制效应，益生菌是定植在人体内，改变宿主某一部位菌群组成的一类对宿主有益的活性微生物，棒状腐败乳杆菌作为益生菌，对哮喘的治疗天然安全无副作用，其“药食同源”的特点将提高哮喘患者治疗的依从性，可作为哮喘患者的长期治疗用药中的有效成分。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种棒状腐败乳杆菌在制备缓解支气管哮喘药物上的应用。
背景技术
支气管哮喘(简称哮喘)是一种以气道高反应性、黏液高分泌、气道重塑为特征的慢性气道炎症性疾病，临床症状常表现为反复发作的喘息、气急、胸闷或咳嗽，哮喘发病受遗传及环境因素共同影响。尽管目前哮喘的治疗取得了重大的进步，但其主要治疗药物为糖皮质激素、β2受体激动剂、茶碱和白三烯调节剂等，可能引发不良反应如声音嘶哑、头痛、心悸、恶心呕吐等。
肠道微生物的改变会对肺部的免疫功能产生影响，而肺部免疫系统同时也会通过血液循环影响肠道中的微生物群落，它们之间的相互作用称为“肠-肺”轴，通过宏基因组学研究发现，哮喘患者的肠道菌群出现了失衡，且动物实验证实通过干预肠道菌群可以有效治疗哮喘小鼠。
发明内容
本发明实施例的目的在于提供一种棒状腐败乳杆菌在制备缓解支气管哮喘药物上的应用，旨在解决上述背景技术中提出的问题。
本发明实施例是这样实现的，一种棒状腐败乳杆菌在制备缓解支气管哮喘药物上的应用，所述棒状腐败乳杆菌为棒状腐败乳杆菌KCTC 3167。
本发明实施例的另一目的在于提供一种缓解支气管哮喘的药物，所述药物中含有棒状腐败乳杆菌KCTC 3167。
优选地，所述药物对气道炎症、气道高反应性有抑制效果。
本发明实施例提供的一种棒状腐败乳杆菌在制备缓解支气管哮喘药物上的应用，通过造模哮喘小鼠，发现棒状腐败乳杆菌KCTC 3167对哮喘小鼠气道炎症、气道高反应性有显著的抑制效应，益生菌是定植在人体内，改变宿主某一部位菌群组成的一类对宿主有益的活性微生物，棒状腐败乳杆菌作为益生菌，对哮喘的治疗天然安全无副作用，其“药食同源”的特点将提高哮喘患者治疗的依从性，可作为哮喘患者的长期治疗用药中的有效成分。
附图说明
图1A、图1B、图1C为本发明实施例2提供的各组小鼠肺组织切片HE染色结果；
图2A、图2B、图2C为本发明实施例2提供的各组小鼠肺组织切片PAS染色结果；
图3A、图3B、图3C为本发明实施例2提供的各组小鼠肺泡灌洗液甩片后姬姆萨染色结果；
图4为本发明实施例2提供的各组小鼠增强呼吸间歇(PenH)检测结果；
图5为本发明实施例2提供的各组小鼠血清IgE的ELISA结果。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
以下结合具体实施例对本发明的具体实现进行详细描述。
实施例1
棒状腐败乳杆菌的分离与鉴定：
从东北居民家庭中取酸菜汁原液盛于50mL离心管中，置于4℃中暂时保存，静置10min使其中酸菜固体物沉淀，在超净台内用无菌生理盐水在15mL离心管中倍比稀释酸菜汁原液(倍数：10-1，10-2，10-3，10-4，10-5，10-6)，分别分区划线涂布于MRS平板上，置于37℃培养箱培养约48h后可见菌落长出，挑取其上的单克隆菌落进一步在平板上划线，纯化2次后送吉林省库美测序公司进行16s rDNA测序，测序结果经NCBI网站BLAST比对后确认为棒状腐败乳杆菌KCTC 3167，其中引物的核苷酸序列为27F：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG(如SEQ NO:1所示)；1492R：TACGGTTACCTTGTTACGACTT(如SEQ NO:2所示)，测序结果如SEQ NO:3所示。
实施例2
棒状腐败乳杆菌KCTC 3167在缓解支气管哮喘上的作用：
(1)选取18只6-8周龄C57BL/6小鼠于SPF级动物房适应性饲养一周并随机分为空白对照组、OVA哮喘模型组、乳杆菌灌胃组，每组6只；
(2)OVA哮喘模型组和乳杆菌灌胃组小鼠在哮喘造模开始后第1至第8天连续每天进行腹腔注射OVA致敏液溶液(0.5mg/ml OVA+20mg/ml Al(OH)3)
150μL，空白对照组注射等量无菌生理盐水，并且乳杆菌灌胃组小鼠在哮喘造模开始7天前每天灌胃乳杆菌200mL(浓度5×108CFU/mL，用无菌生理盐水稀释)，直至哮喘造模的最后一天即哮喘造模第21天(即连续灌胃28天)，其他组在同时间灌胃等体积无菌生理盐水；
(3)哮喘造模第18-21天每天对OVA哮喘模型组和乳杆菌灌胃组小鼠以30mg/mLOVA雾化0.5h进行激发，空白对照组以无菌生理盐水代替；
(4)第22天收集各项数据及组织标本：通过小鼠全身体积描记系统测试小鼠增强呼气间歇(PenH)；随后眼球取血用于血清IgE检测；收集肺泡灌洗液并离心、甩片，进行瑞氏-吉姆萨染色以观察嗜酸性粒细胞占比；多聚甲醛固定肺组织，石蜡包埋后进行HE染色和PAS染色，观察病理改变。
试验结果：
图1A、图1B、图1C为各组小鼠肺组织切片HE染色结果，其中，图1A为空白对照组小鼠，图1B为OVA哮喘模型组小鼠，图1C为乳杆菌灌胃组小鼠，根据图1可以看出，经过乳杆菌干预后哮喘小鼠小气道周围炎性细胞浸润明显减轻，且气道壁变薄；
图2A、图2B、图2C为各组小鼠肺组织切片PAS染色结果，其中，图2A为空白对照组小鼠，图2B为OVA哮喘模型组小鼠，图2C为乳杆菌灌胃组小鼠，根据图2可以看出，经过乳杆菌干预后哮喘小鼠气道杯状细胞化生显著减轻；
图3A、图3B、图3C为各组小鼠肺泡灌洗液甩片后姬姆萨染色结果，其中，图3A为空白对照组小鼠，图3B为OVA哮喘模型组小鼠，图3C为乳杆菌灌胃组小鼠，根据图3可以看出，经过乳杆菌干预后哮喘小鼠肺部嗜酸性粒细胞占比显著减少；
图4为各组小鼠增强呼吸间歇(PenH)检测结果，其中正常小鼠即空白对照组，哮喘模型小鼠即OVA哮喘模型组，灌胃棒状腐败乳杆菌的哮喘模型小鼠为乳杆菌灌胃组，根据图4可以看出，经过乳杆菌干预后哮喘小鼠气道高反应性显著缓解，呼吸气流受限得到减轻(采用one-way ANOVA统计学方法分析，****：P＜0.0001)；
图5为各组小鼠血清IgE的ELISA结果，其中正常小鼠即空白对照组，哮喘模型小鼠即OVA哮喘模型组，灌胃棒状腐败乳杆菌的哮喘模型小鼠为乳杆菌灌胃组，根据图5可以看出，经过乳杆菌干预后哮喘小鼠机体的Ⅰ型超敏反应得到显著抑制(采用one-way ANOVA统计学方法分析，****：P＜0.0001)；
综上所述，本发明实施例采用的KCTC 3167具有缓解支气管哮喘的作用，可用于制备缓解支气管哮喘的药物。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (3)
1.一种棒状腐败乳杆菌在制备缓解支气管哮喘药物上的应用，其特征在于，所述棒状腐败乳杆菌为棒状腐败乳杆菌KCTC 3167。
2.一种缓解支气管哮喘的药物，其特征在于，所述药物中含有棒状腐败乳杆菌KCTC3167。
3.根据权利要求2所述的缓解支气管哮喘的药物，其特征在于，所述药物对气道炎症、气道高反应性有抑制效果。
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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