CN118240776B

CN118240776B - 一种提高aav病毒产量的方法

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Publication number: CN118240776B
Application number: CN202410687541.XA
Authority: CN
Inventors: 林卿; 陈意雄; 蒋天祺
Original assignee: Shanghai Lingyi Biotechnology Co ltd
Current assignee: Shanghai Lingyi Biotechnology Co ltd
Priority date: 2024-05-29
Filing date: 2024-05-29
Publication date: 2024-08-23
Anticipated expiration: 2044-05-29
Also published as: CN118240776A

Abstract

本公开涉及细胞工程领域，尤其涉及一种提高AAV病毒产量方法。该方法包括：在具体化合物或化合物组合的存在下培养细胞的步骤。本公开的方法能够显著提高AAV病毒的产量和包装效率。

Description

一种提高AAV病毒产量的方法

技术领域

本公开属于细胞工程领域，尤其涉及提高病毒产量的化合物。更具体地说，本发明涉及提高AAV病毒产量的化合物和使用所述化合物的方法。

背景技术

AAV载体是目前应用最为广泛的基因治疗载体。AAV基因治疗载体目前生产通常使用转染的方式，通过转染试剂将含有目的基因片段、AAV Rep-Cap基因及辅助病毒腺病毒基因的各质粒转染进入真核细胞内。

PKR信号通路是细胞免疫的重要通路之一，质粒瞬转病毒包装过程中转录生成的dsRNA片段会激活PKR的磷酸化，p-PKR进而激活下游转录因子EIF2A的磷酸化，降低蛋白水平的表达，影响病毒载体的产量。有文献报道，在慢病毒包装过程中添加PKR磷酸化抑制剂2-氨基嘌呤（2-AP）可提升慢病毒包装滴度（Pernod G, Fish R, Liu JW, Kruithof EK.Biotechniques. 2004 Apr;36(4):576-580.）。此外，在AAV病毒包装中使用的辅助质粒通常含有腺病毒VA RNA片段，VA RNA可以结合PKR的RNA结合域，竞争性抑制PKR信号通路的磷酸化（Nayak R, Pintel DJ. J Virol. 2007 Nov;81(21):11908-16.）。然而由于上游工艺的差别，不同转染体系中引入的辅助质粒转染量不尽相同，导致难以完全达到PKR磷酸化的抑制效果，从而影响了AAV的产量。

因此，仍需要研究对于以高产率制备AAV的方法。

发明内容

本公开提供了式（I）化合物、其盐、其立体化学异构体形式、或包含以上任一种的组合物在提高细胞中病毒产量的用途，

式（I）。

在一些实施方式中，式（I）化合物在细胞培养基中的浓度为50 nM-5000 nM，优选为500 nM-2000 nM。

在一些实施方式中，所述组合物中进一步含有组蛋白去乙酰化酶抑制剂。优选地，所述组蛋白去乙酰化酶抑制剂为丙酸盐、丁酸盐、丙戊酸盐中的一种或多种，更优选为丙酸钠。优选地，所述组蛋白去乙酰化酶抑制剂在细胞培养基中的浓度为0.1-20 mM，优选为0.5-10 mM，更优选为0.5-5 mM。

在一些实施方式中，所述病毒选自AAV病毒。AAV病毒包括重组腺相关病毒（rAAV）。

在一些实施方式中，所述细胞为贴壁或悬浮培养的HEK293或由HEK293进行基因编辑、改造、驯化、筛选得到的细胞株。

在一些实施方式中，前述一种或多种上述化合物在转染前24小时内或转染后24小时内添加至细胞中。

在一些实施方式中，所述病毒通过将相关质粒转染到细胞中包装制备得到，相关质粒系统可以是一个或多个包含AAV Rep蛋白编码区序列、AAV衣壳蛋白VP1、VP2、VP3的编码区序列、目的基因的编码序列和ITR序列的质粒组成的一质粒、二质粒、三质粒或多质粒腺相关病毒包装系统。

作为非限制性实例，本文中的rAAV的血清型选自由野生型AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、AAV13、AAVrh.8、AAVrh.10、AAVrh.39、AAVHSC15、AAVHSC17以及基于AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、AAV13、AAVrh.8、AAVrh.10、AAVrh.39、AAVHSC15、AAVHSC17改造的新型AAV血清型组成的组。

另一方面，本公开提供了一种用于提高细胞中病毒产量的试剂盒，所述试剂盒包含式（I）化合物、其盐或其立体化学异构体形式；

式（I）

以及组蛋白去乙酰化酶抑制剂。

在一些实施方式中，所述组蛋白去乙酰化酶抑制剂为丙酸盐、丁酸盐、丙戊酸盐中的一种或多种，更优选为丙酸钠。

另一方面，本公开提供了一种生产病毒的方法，其包括在式（I）化合物、其盐或其立体化学异构体形式的存在下，培养含有用于生产病毒的质粒系统的细胞的步骤，

式（I）。

在一些实施方式中，式（I）化合物、其盐或其立体化学异构体形式在细胞培养基中的浓度为50 nM-5000 nM，优选为500 nM-2000 nM。

在一些实施方式中，所述细胞培养基进一步含有组蛋白去乙酰化酶抑制剂。优选地，所述组蛋白去乙酰化酶抑制剂为丙酸盐、丁酸盐、丙戊酸盐中的一种或多种，更优选为丙酸钠。更优选地，所述组蛋白去乙酰化酶抑制剂在细胞培养基中的浓度为0.1-20 mM，优选为0.5-10 mM，更优选为0.5-5 mM。

根据本公开，通过使AAV包装过程中在含有式（I）化合物的细胞培养基中进行，可以提高抑制转染后PKR磷酸化的效果，从而显著提升AAV病毒的产量。

进而，通过使AAV包装过程在同时含有式（I）化合物和组蛋白去乙酰化酶抑制剂的细胞培养基中进行，可以进一步提高AAV病毒的产量。

附图说明

参考下述附图，本公开可以被更完全地理解。

图1示出了在C16或2-AP作用下表达的衣壳蛋白的Western blot结果。

图2示出了在不同浓度的C16或2-AP作用下的AAV病毒产量。

图3示出了在不同浓度的C16或2-AP作用下的AAV裂解液生物活性。

图4示出了在C16和/或丙酸钠作用下的AAV病毒产量。

图5示出了在C16和/或丙酸钠作用下的AAV裂解液生物活性。

具体实施方式

下面关于本公开的描述仅仅旨在说明本公开的各种不同的实施方式。因此，所讨论的特定修改不应被解释为对本公开范围的限制。对本领域技术人员来说，显然可以在不脱离本公开范围的情况下做出各种不同的等效、改变和修改方案，并且应当理解这些等效实施方式将被包含在本文中。本文引用的包含出版物、专利和专利申请在内的所有参考文献均通过引用整体并入本文。

式（I）。

本公开还提供了一种生产病毒的方法，其包括在式（I）化合物、其盐或其立体化学异构体形式的存在下，培养含有用于生产病毒的质粒系统的细胞的步骤。

在本公开中，上述式（I）化合物为PKR抑制剂C16（Imidazolo-oxindole PKRinhibitor C16；咪唑氧吲哚PKR抑制剂），本文中也简称为C16。

术语“盐”是指化合物中的酸性官能团与适当的无机或有机阳离子形成的盐，以及化合物中的碱性官能团与适当的无机或有机阴离子形成的盐。本公开对于式（I）化合物的盐没有特别的限定，只要其阳离子或者阴离子不影响气功能。作为盐，包括但不限于：无机酸盐，如硝酸盐、盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐等；低级烷磺酸盐，如甲磺酸盐、三氟甲磺酸盐、乙磺酸盐等；芳基磺酸盐，如苯磺酸盐、对苯磺酸盐等；有机酸盐，如醋酸盐、苹果酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、草酸盐、马来酸盐等；氨基酸盐，如甘氨酸盐、三甲基甘氨酸盐、精氨酸盐、鸟氨酸盐、谷氨酸盐、天冬氨酸盐等。

术语“立体异构体”包括构象异构体和构型异构体，其中所述构型异构体主要包括顺反异构体和旋光异构体。

在一些优选的实施方式中，所述病毒为AAV病毒。如本文所用，AAV病毒包括重组腺相关病毒（rAAV）。

发明人意外地发现，通过利用含有上述式（I）化合物的细胞培养基进行AAV包装，可以大幅提高AAV病毒的产量。

从提高AAV病毒的包装效率以及所得AAV病毒的生物活性的角度考虑，在细胞培养基中，式（I）化合物的浓度可以为50 nM-5000 nM，优选为500 nM-2000 nM。式（I）化合物的浓度的具体实例可以包括50 nM、100 nM、300 nM、500 nM、800 nM、1000 nM、1200 nM、1500nM、2000 nM、2500 nM、3000 nM、3500 nM、4000 nM、4500 nM、5000 nM等。

进而，发明人还意外地发现，通过使用同时含有式（I）化合物和组蛋白去乙酰化酶抑制剂的细胞培养基进行AAV包装，可以进一步提高AAV病毒的产量。由此，在一些优选的实施方式中，所述细胞培养基或所述组合物进一步含有组蛋白去乙酰化酶抑制剂。

在本公开中，所述组蛋白去乙酰化酶抑制剂（histone deacetylase inhibitor，HDACI）是指有抑制组蛋白去乙酰化酶的功能的一类化合物，包括脂肪酸或脂肪酸盐类、氧肟酸盐列（如TSA、SAHA）、环肽类（如天然产物缩酚酸肽FK-228、apicidin和环氧肟酸）或者苯酰胺类（如MS-275、MGCD0103）等。组蛋白去乙酰化酶抑制剂的具体实例可以包括丙酸盐、丁酸盐、丙戊酸盐等，例如丙酸钠、丁酸钠、丙戊酸钠，其中优选为丙酸钠。

在一些实施方式中，所述组蛋白去乙酰化酶抑制剂在细胞培养基中的浓度为0.1-20 mM，优选为0.5-10 mM，更优选为0.5-5 mM。通过在上述浓度下添加组蛋白去乙酰化酶抑制剂，可以进一步提高AAV的产量。所述组蛋白去乙酰化酶抑制剂的浓度的具体实例可以包括0.1 mM、0.5 mM、1 mM、2 mM、3 mM、4 mM、5 mM、6 mM、7 mM、8 mM、9 mM、10 mM、13 mM、15mM或20 mM等。

作为包装AAV病毒所需的基因，通常可以包括：（a）包含至少一个AAV ITR序列的核酸模板，以及（b）足以复制核酸模板和包入AAV衣壳内的AAV序列（例如，编码AAV衣壳的AAVrep序列和AAV cap序列）。任选地，核酸模板还可以包含至少一种异源核酸序列。在一些实施方式中，核酸模板包含分别位于异源核酸序列的5’和3’端的两个AAV ITR序列。

根据本公开，所述病毒由生产AAV病毒的质粒系统制备得到。“质粒系统”包括AAV生产相关基因的质粒，并且无需额外的质粒即可用于生产AAV。相关质粒系统可以是一个或多个包含AAV Rep蛋白编码区序列、AAV衣壳蛋白VP1、VP2、VP3的编码区序列、目的基因的编码序列和ITR序列的质粒组成的一质粒、二质粒、三质粒或多质粒腺相关病毒包装系统。

在一些具体实施方式中，所述质粒系统包含第一辅助质粒、第二辅助质粒和第三辅助质粒，所述第一辅助质粒包含Rep蛋白的编码区，所述第二辅助质粒包含衣壳蛋白VP1、VP2和VP3的编码区，所述第三辅助质粒包含目的基因的编码区。

在一些具体实施方式中，所述质粒系统包含第一辅助质粒和第二辅助质粒，所述第一辅助质粒包含Rep蛋白、以及衣壳蛋白VP1、VP2和VP3的编码区，所述第二辅助质粒包含目的基因的编码区。

在一些具体实施方式中，所述质粒系统包含第一辅助质粒，所述第一辅助质粒包含Rep蛋白、衣壳蛋白VP1、VP2和VP3的编码区，以及包含目的基因的编码区。

为了利用生产AAV病毒的质粒系统生产病毒，可以通过用质粒系统转染细胞，或将质粒系统引入细胞内得到。上述式（I）化合物和/或组蛋白去乙酰化酶抑制剂可以在制得包含AAV质粒系统的细胞（即转染或者引入完成）之后以所需的浓度加入细胞培养基中。

在本公开中，在制备包含AAV质粒系统的细胞时使用的细胞可以是允许AAV病毒复制的任意细胞。在一些实施方式中，细胞是哺乳动物细胞。在一些实施方式中，细胞可以是反式互补包装细胞系，其提供从复制缺陷型辅助病毒中缺失的功能，例如293细胞或其它Ela反式互补细胞。在一些实施方式中，细胞是HEK293细胞。

在进行AAV病毒生产时，可以使用不同血清型AAV（例如：AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、AAV13、AAVrh.8、AAVrh.10、AAVrh.39、AAVHSC15、AAVHSC17以及基于AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、AAV13、AAVrh.8、AAVrh.10、AAVrh.39、AAVHSC15、AAVHSC17改造的新型AAV血清型）提供编码各种主要rep蛋白/cap蛋白的序列。

在一些实施方式中，来自一种AAV血清型或另一种细小病毒的完全或部分结构域、功能区、表位等可以以任何组合替换不同AAV血清型的相应野生型结构域、功能区、表位等，以产生嵌合衣壳蛋白。

进一步地，AAV衣壳或基因组元件可以含有其它修饰，包括插入、缺失和/或取代。在一些实施方式中，相对于野生型，在衣壳蛋白的氨基酸序列可以包含一个或多个（例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10等）氨基酸残基中的取代，一个或多个（例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10等）氨基酸残基中的插入和/或缺失。

在一些优选的实施方式中，所述质粒系统中还包含腺病毒VA RNA片段。通过上述腺病毒VA RNA片段，可以进一步抑制PKR磷酸化，从而进一步提高AAV蛋白的表达水平和包装产量。

本文所使用的术语“载体”是指包含完整复制子、基本上由其组成或由其组成的核酸，使得当所述载体通过例如转染、感染或转化过程置于细胞内时可以被复制。在本领域中应该理解，一旦进入细胞内，载体可以作为染色体外（游离体）元件复制，或者可以整合到宿主细胞染色体中。载体可以包括源自反转录病毒、腺病毒、疱疹病毒、杆状病毒、修饰的杆状病毒、乳头状病毒、AAV病毒载体、慢病毒载体、腺病毒载体、甲病毒载体等的核酸，优选地，本文所述的载体选自AAV载体、腺病毒载体、或慢病毒载体。

本文所使用的术语“腺相关病毒”或“AAV”是指与该名称相关并属于细小病毒科依赖性细小病毒属的病毒类别的成员。腺相关病毒是一种单链DNA病毒，仅在细胞中生长，其中某些功能由共同感染的辅助病毒提供。所有AAV血清型均明显表现出由同源rep基因介导的非常相似的复制特性；并且都带有三种相关的衣壳蛋白。在本领域中已知至少13种顺序编号的天然存在的AAV血清型。用于本文公开的方法中的非限制性示例性血清型包括这13种血清型中的任一者，例如AAV2、AAV8、AAV9，或变体血清型例如AAV-DJ和AAV PHP.B。AAV颗粒包含三种主要病毒蛋白VP1、VP2和VP3，基本上由所述蛋白组成或由所述蛋白组成。在实施方式中，所述AAV包含选自由AAVPHP.B、AAVrh74、AAV 110、AAV 204、AAV 214、AAV 214A、AAV 214e、AAV 214e8、AAV 214e9、AAV 214el 0、AAV ITB102_45和AAV 214AB组成的组的AAV衣壳蛋白。在实施方式中，AAV是指血清型AAV1、AAV2、AAV3、AAV3B、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12或AAV13、AAVrh10、AAVhu37或从人类和非人哺乳动物分离的AAV血清型中的任一者或其变体。

另一方面，本公开提供了一种用于提高细胞中病毒产量的试剂盒，所述试剂盒包含如上式（I）化合物、其盐或其立体化学异构体形式；以及组蛋白去乙酰化酶抑制剂。

在所述试剂盒中，所述含式（I）化合物、其盐或其立体化学异构体形式与所述组蛋白去乙酰化酶抑制剂的重量比没有特别的限定，例如可以为1：100-5000、1：500-4000、1：1000-3500或1：2000-3000，更优选为例如1：2500。

优选的情况下，以细胞培养基中的终浓度计，式（I）化合物的浓度可以为50 nM-5000 nM，优选为500 nM-2000 nM；所述组蛋白去乙酰化酶抑制剂的浓度为0.1-20 mM，优选为0.5-10 mM，更优选为0.5-5 mM。

式（I）化合物的浓度的具体实例可以包括50 nM、100 nM、300 nM、500 nM、800 nM、1000 nM、1200 nM、1500 nM、2000 nM、2500 nM、3000 nM、3500 nM、4000 nM、4500 nM、5000nM等。所述组蛋白去乙酰化酶抑制剂的浓度的具体实例可以包括0.1 mM、0.5 mM、1 mM、2mM、3 mM、4 mM、5 mM、6 mM、7 mM、8 mM、9 mM、10 mM、13 mM、15 mM或20 mM等。

实施例

下面的实施例仅仅是说明性的，并且不旨在以任何方式限制本公开的范围或内容。

AAV粗提液制备

（1）样品收集：直接收集转染培养72h后的细胞悬液到离心管中；

（2）冻融裂解：液氮和37℃水浴冻融裂解病毒细胞样品，反复3次；

（3）核酸酶消化：添加40 IU/mL核酸酶和2 mM MgCl₂到裂解样品中，混匀，37℃水浴至少40min，消化去除病毒以外的核酸(DNA、RNA)；

（4）病毒粗提液收集：离心，收集上清，得到病毒粗提样本。

AAV裂解液ddPCR滴度检测

（1）DNase I消化：病毒粗提样品稀释后加入DNase I消化，37℃孵育30分钟；

（2）裂解：孵育完成后，加入裂解液，98℃裂解10min后短暂离心；

（3）梯度稀释：梯度稀释消化裂解后样品；

（4）反应体系添加：按照样品量计算配制PCR反应体系，与样品混匀，设置阴性对照（NTC）加入纯水；

（5）制备微滴：将上步的PCR反应体系混合物和微滴生成油分别加入到微滴生成板（Bio-Rad，QX200系统）中，生成微滴；

（6）封膜和PCR扩增；

（7）ddPCR检测；

（8）病毒滴度计算。

AAV裂解液生物活性检测

Day1：感染前24h铺板Huh7细胞于96孔板中；

Day2：铺板24h后，按照固定体积将AAV裂解液加入到含有Huh7细胞的96孔板中；

Day3：感染24h后，弃去培养上清，补充新鲜培养基至各孔中；

Day5：感染72h后，收集培养上清上清检测表达产物浓度，以代表AAV裂解液生物活性。

Western blot检测AAV Cap蛋白表达

（1）样本准备：转染72h后取悬浮液离心得约3*10⁶细胞，超声裂解细胞后BCA蛋白定量；

（2）SDS-PAGE凝胶电泳：根据BCA定量浓度，加入等量的各分组裂解样品进行SDS-GAE电泳；

（3）转膜：转膜至PVDF膜；

（4）一抗孵育：使用特异性抗体孵育PVDF膜；

（5）二抗孵育：使用HRP标记的二抗孵育PVDF膜；

（6）显色：将PVDF膜转移至显影设备，在膜上添加显影液后显影拍照。

使用的一抗和二抗如表1所示。

表1

实施例1：转染后添加C16增加病毒包装相关蛋白的表达

在HEK293细胞中转染外源启动子表达的AAV8 Cap蛋白的质粒410，该质粒通过将野生型AAV8 capsid序列（NC_006261.1 1765-4378bp）直接构建至CMV启动子（AF396260.1）后，并通过共转染ADV VA（包含腺病毒VA RNA片段，Promega E1711）和转染后添加2-AP或咪唑氧吲哚（C16）的方式抑制PKR的磷酸化。具体的实验步骤如下。

（1）细胞准备：将悬浮HEK293细胞调整至约3×10⁶cell/mL，10mL / 摇管；

（2）转染体系配制：按照表2中添加各组转染参数所需的质粒，所用质粒均使用质粒抽提试剂盒（MN 740420.50）抽提制备。将质粒与20 μL PEI（聚乙烯亚胺）混匀后室温孵育15~20 min，孵育完成后将混合物转移到细胞中，摇床培养；

（3）转染后，按照表2向各组添加对应的添加剂；

（4）继续摇床培养，至转染72 h后收样，收集细胞裂解检测VP1/2/3的表达。结果如图1所示。

上述步骤（2）和（3）中使用的体系如表2所示。

表2

从图1的结果可知，C16和2-AP均能够增强AAV包装相关蛋白VP1、VP2和VP3的表达，且C16或2-AP可在VA的基础上进一步增加表达。

实施例2：AAV病毒包装时添加C16提高病毒包装的产量

按照如下步骤进行AAV病毒包装。

（1）细胞准备：将悬浮HEK293细胞调整至约3×10⁶cell/mL，10 mL/摇管；

（2）转染体系配制：所用质粒均使用质粒抽提试剂盒（MN 740420.50）抽提制备。使用GOI（6239bp，表达产物Human GBA1， Gene ID:2629）、RC2/8（Addgene 112864）和Helper（Cell biolabs 340202）质粒，按照三质粒GOI:RC2/8:Helper=2:2:1的比例（共30 μg）与60μL PEI转染试剂混匀后室温孵育15~20min，孵育完成后将混合物转移到细胞中，摇床培养；

（3）转染后，按照如下浓度添加PKR抑制剂：2-AP低浓度0.5 mM，中浓度1.5 mM，高浓度5 mM；C16低浓度0.5 μM，中浓度1.5 μM；

（4）转染72 h后，收集并按照实验方法中描述的方式制备病毒粗提液。

收毒后检测AAV病毒裂解液的产量（滴度）及表达产物活性，结果如图2和图3所示。

从图2和图3的结果可知，2-AP在各浓度下对于AAV病毒包装产量提升并无明显效果，而C16在低浓度到中浓度之间均可明显提高病毒的产量，且在中等浓度条件下对于产量提升效果最明显。

实施例3：AAV病毒包装时添加C16及丙酸钠协同提高病毒包装的产量

按照如下步骤进行AAV病毒包装。

（2）转染体系配制：所用质粒均使用质粒抽提试剂盒（MN 740420.50）抽提制备。使用GOI（6239bp，表达产物Human GBA1， Gene ID:2629）、RC2/8（Addgene 112864）和Helper（Cell biolabs 340202），按照三质粒GOI:RC2/8:Helper=2:2:1的比例（共30 μg）与60 μLPEI转染试剂混匀后室温孵育15~20min，孵育完成后将混合物转移到细胞中，摇床培养；

（3）转染后，按照如下表3添加C16及HDAC抑制剂丙酸钠。

表3

收毒后检测AAV病毒裂解液的产量（滴度）及表达产物活性，结果如图4和图5所示。

从图4和图5的结果可知，C16和HDAC抑制剂配合使用可以进一步提高AAV病毒包装产量。

通过引用并入

本文中提到的每个专利和科学文献的全部内容为所有目的通过引用并入本文。

等同性

本公开可以以其他特定方式体现，而不背离其精神或本质特征。因此，上述实施方式在所有情况下应该被当作是说明性的，而不是对本文描述的发明的限制。因此，本公开的范围由随附的权利要求书而不是由上述描述指明，并打算将在权利要求书的等同性意义和范围之内的所有变化涵盖在其中。

Claims

1.式（I）化合物、其盐、或包含以上任一种的组合物在提高细胞中病毒产量的用途，

式（I）

其中，所述细胞为HEK293细胞，所述病毒为AAV病毒。

2.根据权利要求1所述的用途，其中，所述组合物中进一步含有组蛋白去乙酰化酶抑制剂。

3.根据权利要求2所述的用途，其中，所述组蛋白去乙酰化酶抑制剂为丙酸盐、丁酸盐、丙戊酸盐中的一种或多种。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的用途，其中，所述细胞为贴壁或悬浮培养的HEK293细胞。

5.一种用于提高细胞中病毒产量的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含式（I）化合物或其盐；

式（I）

以及组蛋白去乙酰化酶抑制剂；

其中，所述式（I）化合物或其盐与所述组蛋白去乙酰化酶抑制剂的重量比为1：100-5000，所述细胞为HEK293细胞，所述病毒为AAV病毒。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其中，所述式（I）化合物或其盐与所述组蛋白去乙酰化酶抑制剂的重量比为1：2000-3000。

7.根据权利要求5或6所述的试剂盒，其中，所述组蛋白去乙酰化酶抑制剂为丙酸盐、丁酸盐、丙戊酸盐中的一种或多种。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其中，所述丙酸盐为丙酸钠。

9.一种生产病毒的方法，其包括在式（I）化合物或其盐的存在下，培养含有用于生产病毒的质粒系统的细胞的步骤，

式（I）

其中，式（I）化合物或其盐在细胞培养基中的浓度为50 nM-5000 nM，所述细胞为HEK293细胞，所述病毒为AAV病毒。

10.根据权利要求9所述的方法，其中，所述细胞培养基进一步含有组蛋白去乙酰化酶抑制剂。

11.根据权利要求10所述的方法，其中，所述组蛋白去乙酰化酶抑制剂为丙酸盐、丁酸盐、丙戊酸盐中的一种或多种。

12. 根据权利要求10或11所述的方法，其中，所述组蛋白去乙酰化酶抑制剂在细胞培养基中的浓度为0.1-20 mM。