CN1182359A

CN1182359A - 口腔护理组合物

Info

Publication number: CN1182359A
Application number: CN96193501A
Authority: CN
Inventors: F·M·克里斯藤森
Original assignee: Novo Nordisk AS
Current assignee: Novo Nordisk AS
Priority date: 1995-03-28
Filing date: 1996-03-28
Publication date: 1998-05-20
Also published as: KR19980703322A; WO1996029978A1; BR9607778A; MX9707377A; EP0817606A1; JPH11502527A; AU5142896A; CA2216928A1

Abstract

本发明涉及如洁牙剂的口腔护理组合物和制品。本发明的口腔护理组合物和制品可有利地含蛋白酶,该蛋白酶在没有口腔护理组合物或制品时在口腔常态环境中实际上无活性。本发明进一步涉及蛋白酶在例如口腔护理组合物或制品中的应用,其中的蛋白酶在口腔的常态环境中实际上无活性。本发明的最终目的是提供应用所述口腔护理制品的方法。

Description

口腔护理组合物

本发明涉及包含某些蛋白酶的口腔护理组合物和制品。

还涉及所述蛋白酶在例如口腔护理方面的应用，并涉及本发明的口腔护理制品的使用方法。

新生儿父母面临的主要事情之一就是其婴儿口中第一颗牙齿的出现。从那天开始，做父母的自然地将护理牙齿作为抚育其婴儿的一部分。

为了充分保证咀嚼如食物的能力，在整个一生中有必要将牙齿保持在良好的状态并达到良好的口腔卫生。

为达到并维持良好的牙齿和口腔卫生，必须每天用牙膏等至少刷一次牙。此外，还应当通常用漱口剂漱洗口腔。

刷牙主要是为了除去牙中的食物颗粒，它是预防有可能引起牙齿穿孔的龋齿的重要的第一步，刷牙也可预防牙科疾病。

也应保持良好的牙齿卫生以防止牙斑和牙垢的形成，防止发生口腔疾病，并防止茶渍、咖啡渍和抽烟后的斑迹等等的粘附，在例如微笑时，牙齿上的这类斑渍会影响外表。此外，通过应用口腔护理品以获得和/或保持例如清新的呼吸，可避免产生一些使人不愉快的影响，因为大多数人不喜欢大体上难闻的气息，或者如偶尔大蒜味的气息。

龋齿，牙斑和牙垢

一般认为，口腔中生长生龋的微生物如变异链球菌(Streptococcusmutans)或血链球菌(Streptococcus sanguis)时，就会出现龋齿。得自食物的蔗糖可由例如上述生龋的微生物所产生的葡糖基转移酶(GTF)转化为水溶性或不溶性多糖。这些多糖附着在生龋的微生物和其它细菌表面，且最后粘附在牙齿表面而形成牙斑。含于牙斑中的细菌会将多糖降解为如乳酸的酸，乳酸可溶解牙釉质，于是会形成牙孔。由于牙斑继续积聚，就会形成硬如石的白色或黄色沉积物。这些沉积物被称为钙化斑、牙石或牙垢，沉积物是从牙斑和尤其如钙的矿物质而形成于唾液中。牙垢在龈线以下积聚会引起牙周的疾病。

为预防龋齿、牙斑和牙垢的形成，有人提议采用含包括蛋白酶、葡糖氧化酶、淀粉酶、脂肪酶、过氧化物酶在内的酶的口腔护理组合物和制品。

现在已成功地将蛋白酶用于清洁牙卤，也有人提议将蛋白酶用作口腔护理制品如用于除去含蛋白质的食物残余物，和用于溶解粘附在牙质和牙釉质上牙垢的蛋白质基质。但是，在口腔护理制品中的应用尚未成功，因为该应用还存在严重的缺点。首先，蛋白酶在口中滞留一段时间后会毁坏牙龈(和牙齿)。

再者，多数蛋白酶受如H₂O₂的化合物的抑制，而H₂O₂可有益地用于口腔护理制品。

提议用于口腔护理组合物和制品的蛋白酶实例包括：羧肽酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、组织蛋白酶、木瓜蛋白酶和某些得自真菌的蛋白酶(例如参见德国专利734,765和英国专利1,033,229)。

英国专利1,197,164涉及作为治疗剂用于牙齿护理和/或口腔护理的制剂，该制剂含有得自枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的蛋白酶。所述蛋白酶被用于改善贮存稳定性。

美国专利3,194,738和法国专利1,377,415提议将得自米曲霉(Aspergillus oryzae)具有蛋白酶解活性和淀粉分解活性的酶用于牙膏、口香糖和漱口剂。

法国专利1,448,385涉及的口腔护理制品含蛋白酶如：得自动物的羧肽酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、组织蛋白酶，和得自植物的木瓜蛋白酶，以及其它酶如脂肪酶。

美国专利4,364,926(Yokogawa et al.)公开了在预防龋齿方面有用的碱性蛋白酶M3。该蛋白酶具有强碱性，最适pH在9～12.5之间，它不被一些化合物抑制，且具有葡糖基转移酶(GTF)抑制活性。

美国专利4,986,981(Glace et al.)涉及磨损性小的pH中性牙膏。该牙膏含有木瓜蛋白酶，其含量据称可有效地清除牙斑、粘蛋白和牙垢。

含有蛋白酶的口腔护理制品有可能引起口腔出血，且有可能损伤或刺激口腔粘膜。即使用水漱口之后，少量蛋白酶也会构成这种危害。

因此，要求提供含蛋白酶这样的口腔护理组合物和制品，它不会在口腔内引起任何损伤。

本发明的目的是为解决上述问题而提供口腔护理组合物和制品如洁牙剂组合物，它含有作为活性口腔护理组分的蛋白酶，一点也不损伤或刺激口腔。

本发明的第一个方面涉及含蛋白酶的口腔护理组合物，该蛋白酶在口腔的常态环境中实际上无活性。

本发明进一步涉及如牙膏和漱口剂的口腔护理制品，它含本发明的口腔护理组合物，或者含基本上纯化了的蛋白酶，该蛋白酶在没有口腔护理组合物或制品时在口腔常态环境中实际上无活性。

本发明的另一个目的在于，在口腔的常态环境中实际上无活性的蛋白酶在如口腔护理组合物和制品中的应用。

本发明的最后目的是提供应用所述口腔护理制品的方法。

对图的简要描述

图1示出WO95/02044中所述的蛋白酶I和蛋白酶II的pH活性分布。

图2示出在25℃下pH为3.5的3％H₂O₂溶液中4小时之后WO95/02044中所述的蛋白酶I和蛋白酶II除蛋白质的能力与SubtilisinCarlsberg的该能力的对比。

本发明解决了与含蛋白酶的口腔护理组合物和制品有关的上述问题。

本发明人发现，某些蛋白酶可有效地用于口腔护理组合物和制品中。在使用口腔护理组合物和制品时，于口腔中限定并造成合适的环境以便于口腔清洁和/或净化。

与在口腔护理组合物和制品中应用蛋白酶的现有技术相关的问题之一是使用后蛋白酶的作用，在口腔的常态环境下实际上无活性的蛋白酶会是有效的。

根据本发明，引起蛋白酶失活的参数可以是任意的物理参数如pH、温度、湿度、离子强度等等。但尤为合意的是pH，因为它是比较容易控制的参数。

要记住，在常态口腔中pH处于约6～8的范围内，特别是pH约为6.4～7.0(唾液的pH)，在该pH范围内无活性的蛋白酶一点也不会损伤或刺激口腔。

已知蛋白酶有益的口腔护理作用可通过调节口腔中的pH至适当的pH来激活，此时的蛋白酶具有适当的活性。

因此，如果蛋白酶在酸性环境中有活性，则应降低口腔中的pH。这可通过在口腔护理组合物或制品中加入适当的pH降低剂而达到。然而，如果口腔护理组合物或制品本身的pH呈酸性，则不必调节pH。

如果蛋白酶在碱性环境中有活性，则应升高pH(如果需要的话)，例如可加入pH增高剂。

如果在使用含蛋白酶的口腔护理制品后用水漱口，就可以除去口腔中的大部分蛋白酶。但是，即使残留少量的活性蛋白酶也会损伤口腔。使用含本发明的组合物的口腔护理制品可避免这种损伤作用，因为所述组合物包含的蛋白酶只在该口腔护理组合物或制品引起的pH下有活性，而在口腔的常态环境中实际上无活性。用水漱口后，片刻后pH会变回到约6.4～7.0(唾液的pH)，这就会使蛋白酶失活。于是，任意量的残余蛋白酶将不会对口腔有害。

因此，本发明的第一个方面是提供含蛋白酶的口腔护理组合物，当不存在口腔护理组合物时，其中的蛋白酶在口腔的常态环境中实际上无活性。

应理解，依本发明的蛋白酶在口腔护理组合物的应用期间如刷牙或漱口时有活性。用后残留的任何活性蛋白酶将在口腔中失活，因为口腔中的环境会变回到常态即由唾液造成的初始环境。可选择用水漱口以加速该转变过程。

在一个优选的实施方案中，所述蛋白酶在没有口腔护理组合物时在口腔常态pH环境中实际上无活性。

如上所述，唾液的pH在约6.4～7.0的范围内变动。不过口腔中的pH可能在例如吃食物或饮水时向上或向下变动少许。因此，在pH约为7附近、更好是约6.4～7.0的pH范围内、最好是约pH6～8的pH范围内实际上无活性的蛋白酶，可用作本发明的口腔护理组合物或制品中的蛋白酶组分。在所述范围外具有合适的相对活性(高于70％)的蛋白酶是优选的。

口腔中的温度通常在20℃～最多37℃的范围内。因此，依本发明，在此温度间隔内具有高相对活性(高于70％)的蛋白酶是优选的。然而，在该温度间隔内在口腔中有活性的所有蛋白酶均合乎本发明的需要。

前面用到的术语“实际上无活性”是指蛋白酶的活性如此低以至当pH在7附近、优选是在唾液的pH范围内(约pH6.4～7.0)、更优选是在约6～8的pH范围内，该蛋白酶一点也不损伤或刺激口腔。

更确切地说，这意味着在上述pH范围内，基于最适pH下的蛋白酶解活性而测定的相对蛋白酶活性(依“方法和原料”部分中所述测定的蛋白酶活性)不能高于70％，且优选应低于约50％，更优选低于约30％，特别是低于约10％，更佳是低于约5％如低于约2％。

在本发明的一个实施方案中，用于本发明的组合物中的蛋白酶得自微生物如细菌类或真菌类微生物。

合乎本发明的要求的蛋白酶主要得自：芽孢杆菌属(Bacillus sp.)菌株，特别是枯草芽孢杆菌的菌株；或根霉菌属(Rhizopus sp.)真菌菌株，特别是雪白根霉(R.niveus)的菌株；或是Schytalidium sp.的菌株；或是硫化叶菌属(Sulpholobus sp.)菌株；或是热原体属(Thermoplasmasp.)菌株；或者曲霉属(Aspergillus sp.)菌株，尤其是A.aculeatus或黑曲霉(A.niger)或泡盛曲霉(A.awamori)或米曲霉(A.oryzae)的菌株；或是木霉菌属(Trichoderma sp.)菌株，特别是T.harzianum或T.reesie的菌株；或是镰孢菌属(Fusarium sp.)菌株，特别是尖镰孢(F.oxysporum)的菌株；或是腐质霉属(Humicola sp.)菌株。

依本发明的蛋白酶可以是蛋白酶组(即依国际生物化学和分子生物学联合会(IUBMB)的推荐(1992)按酶分类号E.C.3.4分类的酶)内的酸性蛋白酶或碱性蛋白酶，当不存在口腔护理组合物或制品时，该蛋白酶在口腔中的常态环境中实际上无活性。

此外，为本发明的目的而设计的基因修饰蛋白酶也合乎需要。所述修饰蛋白酶可筛选自具有合适的pH分布的蛋白酶变体。该变体可通过例如EP 130.756(Genencor)或EP 479.870(Novo Nordisk A/S)中所述的定点诱变或盒式诱变来提供；或者利用本技术中公认的方法通过随机诱变而提供。

在本发明的一个具体的实施方案中，蛋白酶在pH约为5时具有最适pH的蛋白酶活性。

这类蛋白酶的具体实例有酸性蛋白酶如WO95/02044(NovoNordisk A/S)中所述的蛋白酶I和蛋白酶II。

这些酸性蛋白酶在口腔的常态环境(包括口腔的常态pH环境中)实际上无活性。

蛋白酶I和蛋白酶II惊人地比预期的好，因为它们在口腔的常态环境中实际上无活性。蛋白酶I和蛋白酶II在约pH6～8的pH范围内实际上无活性，且在约6.4～7.0的pH范围内其相对蛋白酶活性小于50％。在约为pH7附近，蛋白酶I的相对蛋白酶活性很小，而蛋白酶II的相对蛋白酶活性大为降低了(参见图1和实施例1)。此外，在高达3％的H₂O₂存在下，蛋白酶I和蛋白酶II具有良好的除蛋白质活性(参见图2和实施例2)。这就很好，因为H₂O₂在口腔护理制品如洁牙剂中用作增白剂/漂白剂。

在3％H₂O₂中在相同条件下，如果某蛋白酶除去表面的蛋白质明显多于Subtilisin Carlsberg(得自Novo Nordisk A/S，名为Alcalase^)所除去的，则在本发明的上下文中，认为该蛋白酶具有“良好的除蛋白质活性”。

本发明的口腔护理组合物或制品中所需的蛋白酶的量依采用的具体化合物而定，但基于最终制品的重量，其用量范围一般是0.0001％～20％，优选为约0.001％～约10％，且最优选为约0.01％～约5％。

在制备口腔护理组合物或制品时，蛋白酶可以基本上纯化了的单组分酶制剂形式加入，如含WO95/02044(Novo NordiskA/S)中所述的蛋白酶之一的酶制剂；但也可以至少表现一种其它活性的酶制剂形式加入。期望的活性包括还原酶如过氧化物酶的活性，和进一步的变位酶(mutanase)、葡聚糖酶、脂肪酶、淀粉酶、葡糖氧化酶活性，以及抗微生物的多肽，它富含的蛋白酶在人和动物如狗和猫的口腔的常态环境中实际上无活性。

在本发明的一个优选的实施方案中，口腔护理组合物含有蛋白酶、葡聚糖酶和/或变位酶活性。

本发明的口腔护理组合物可有效地用于生产具有任何合适的具体形式(即粉状、膏、凝胶、液态、软膏、片状等等)的口腔护理制品。所述的“口腔护理制品”是指这种制品：它可有效地用于维持和/或改善人和动物的口腔卫生，和/或预防或治疗牙科疾病。

这类口腔护理制品的实例包括：牙膏、牙乳脂、凝胶体或牙粉、牙的漱口剂、刷牙前或刷牙后用的漱口调和物、口香糖、糖锭和糖果。

牙膏和牙凝胶体一般包括：磨蚀擦光材料、发泡剂、增味剂、湿润剂、粘结剂、增稠剂、增甜剂、增白/漂白/除斑剂和水。

包括除斑液在内的漱口剂一般含有：水/醇溶液、增味剂、湿润剂、增甜剂、发泡剂和着色剂。

依本发明，所述的磨蚀擦光材料包括：氧化铝及其水合物如α-氧化铝三水合物；三硅酸镁，碳酸镁，高岭土，硅铝酸盐如煅烧硅酸铝和硅酸铝，碳酸钙、硅酸锆，以及粉状塑料如聚氯乙烯，聚酰胺，聚甲基丙烯酸甲酯，聚苯乙烯，酚醛树脂，蜜胺甲醛树脂，脲甲醛树脂，环氧树脂，粉状聚乙烯，氧化硅干凝胶，水凝胶和气凝胶等等。合适的磨蚀剂还有焦磷酸钙，水不溶性碱化偏磷酸盐，磷酸二钙和/或其二水合物，正磷酸二钙，磷酸三钙，柱状羟磷灰石等等。还可以采用这些物质的混合物。

依口腔护理制品而定，磨蚀制品的存在量可以是0～70wt％，优选是1％～70％。对于牙膏来说，磨蚀材料含量一般占最终牙膏制品重量的10％～70％。

湿润剂被用于防止例如从牙膏中失去水。用于本发明口腔护理制品的合适的湿润剂包括下列化合物及其混合物：甘油、多元醇、山梨醇、聚乙二醇(PEG)、丙二醇、1，3-丙二醇、1，4-丁二醇、氢化并部分水解的多糖等等。湿润剂一般占牙膏重量的0％～80％，优选是5～70wt％。

二氧化硅，淀粉，黄耆胶，呫吨胶，角叉菜提取物、藻酸盐，果胶，纤维素衍生物如羟乙基纤维素、羧甲基纤维素钠和羟丙基纤维素，聚丙烯酸及其盐，聚乙烯基吡咯烷酮，可作为合适的增稠剂和粘结剂的实例，它们有助于稳定洁牙剂制品。牙膏乳脂和凝胶中增稠剂的含量占0.1～20wt％，而粘结剂占最终制品的0.01～10wt％。

作为发泡剂，可以用肥皂，阴离子型、阳离子型、非离子型、两性的和/或两性离子表面活性剂。这些物质含量占最终制品重量的0％～15％，优选是0.1～13wt％，更优选是0.25～10wt％。

表面活性剂以不至于对本蛋白酶产生灭活效果为限度。表面活性剂包括：脂肪醇硫酸酯、磺化单甘油酯的盐或含10～20个碳原子的脂肪酸、脂肪酸-白蛋白缩合产物、脂肪酸酰胺的盐和牛磺酸和/或羟乙磺酸脂肪酸酯的盐。

合适的增甜剂包括糖精。

增味剂如留兰香的含量一般较低，如0.01wt％～约5wt％，特别是0.1wt％～5wt％。

增白剂/漂白剂包括H₂O₂，其加入量基于最终制品的重量应小于5％，优选为0.25～4wt％。

一般地，水的加入量以使例如牙膏可流动为宜。

进一步的水溶性抗菌剂还可包括：如二葡萄糖酸洗必太(chlorhexidinedigluconate)、海克替啶、阿来西定、季铵抗菌化合物，以及源自某些金属离子如锌、铜、银和亚锡的水溶性盐(例如氯化锌、氯化铜和氯化亚锡，以及硝酸银)。

依本发明还可加入防牙垢剂、防牙斑剂，可用作氟化物来源的化合物，染料/着色剂、防腐剂、维生素、pH调节剂、防龋剂、脱敏剂等等。

用本发明的口腔护理组合物制备的牙膏(以最终牙膏组合物的wt％表示)例如可包含如下组分：磨蚀材料 10～70％湿润剂 0～80％增稠剂 0.1～20％粘结剂 0.01％～10％增甜剂 0.1～5％发泡剂 0～15％增白剂 0～5％蛋白酶(依本发明) 0.0001％～20％其它的酶 0～20％

本发明的另一个目的涉及蛋白酶在例如口腔护理组合物和制品中的应用，该蛋白酶在口腔的常态环境中实际上无活性。

在一个优选的实施方案中，在大约为pH7附近范围内，优选的pH范围为约6.4～7.0、更佳的pH范围为约6～8时，蛋白酶在口腔的常态pH环境中实际上无活性。

最后，本发明涉及应用本发明的口腔护理制品的方法，其中

a)将口腔护理制品放入口中，

b)与牙齿和/或牙龈接触一段时间，

c)从口中除去；和

d)可任选用液体漱洗。

如果待用的口腔护理制品处于固态到可流动的形式，则可有利地采用牙刷等物使口腔护理制品与牙齿和/或牙龈接触。如果口腔护理制品呈液态，则可采取漱洗口腔来进行该接触作用。

步骤b)中的接触时间可以任选。不过，将口腔护理制品与牙齿和/或牙龈接触约1～5分钟一般可足以达到所需效果。

用后，可用任意合适的方法例如吐出以除去口中的口腔护理制品。可任选用液体如自来水漱洗口腔。这就可促使口腔中的环境如pH环境在短期内恢复常态。

原料和方法

原料

蛋白酶I如WO95/02044中所述

蛋白酶II如WO95/02044中所述

Subtilisin Carlsberg以Alcalase^形式得自Novo Nordisk A/S。

方法

蛋白酶解活性

1个血红蛋白蛋白酶单位(hpu)定义为：在下述标准条件下，每分钟释出1毫摩尔伯氨基的酶量(通过与丝氨酸标准物对比而测定)：

用Britton和Robinson(J.Chem.Soc.，1931，p.1451)描述的广域缓冲剂来配制2％(w/v)的血红蛋白(牛血红蛋白，由Sigma提供)溶液，调节pH至5.5。将2ml底物溶液置于25℃的水浴中预保温10min。加入1ml含bg/ml酶制剂、相当于约0.2-0.3hpu/ml广域缓冲剂(pH5.5)的酶溶液。在25℃下保温30min后，加入猝灭剂(含17.9g三氯乙酸、29.9g乙酸钠和19.8g乙酸的5ml溶液，用去离子水稀释至500ml)终止反应。用与试液同样的方法配制空白样，不同的是应先于酶溶液加入猝灭剂。将反应混合物在水浴中放置20min，然后用Whatman 42纸滤器过滤。

依如下方法通过与邻苯二醛(OPA)的显色反应而测定伯氨基：将7.62g四硼酸二钠十水合物和2.0g十二烷基硫酸钠溶于150ml水，然后加入溶有160mg OPA的4ml甲醇，并加入400μlβ-巯基乙醇，此后用水稀释该溶液至200ml。向3ml OPA试剂中加入400μl上述所得的滤液并混合。约5min后测定340nm处的光密度(O.D.)。也对100ml广域缓冲剂(pH5.5)中含10mg丝氨酸的丝氨酸标准物进行该OPA试验。单独将缓冲剂用作空白。利用下式从OD测试结果计算蛋白酶活性：

酶制剂的hpu/g＝hpu/ml：b

其中OD_t、OD_b、OD_ser和OD_B分别表示试液、空白、丝氨酸标准物和缓冲剂的光密度，Cser表示标准物中丝氨酸的浓度(mg/ml)(此处为0.1mg/ml)，MW_ser则表示丝氨酸的分子量(105.09)。Q表示酶溶液的稀释因子(此处为8)，而t_i是指以分钟表示的保温时间(此处为30分钟)。

实施例

实施例1

活性分布图

为了阐述本发明的口腔护理组合物和制品中存在的合适的蛋白酶，测定了以WO 95/02044中所述的蛋白酶I和蛋白酶II的相对百分数表示的pH活性分布。

如图1中所示，在pH7时，蛋白酶I的相对蛋白酶活性消失了，而蛋白酶II的相对蛋白酶活性也大为降低了。

实施例2

在3％H₂O₂中的蛋白酶活性

为了阐述合适的蛋白酶在口腔护理制品中的实用效果，测试了在25℃下pH为3.5的3％H₂O₂溶液中，4小时后从表面除去蛋白质的能力。将描述于WO95/02044中的蛋白酶I和蛋白酶II除蛋白质的能力与SubtilisinCarlsberg的进行了比较。

如图2中所示，蛋白酶I和蛋白酶II二者除蛋白质远比SubtilisinCarlsberg有效。这使此两种蛋白酶用于含H₂O₂的口腔护理组合物和制品时高度有效。

本领域技术人员从前述公开说明显而易见的是：在实施本发明时可以做很多改动和修改而不背离其实质或范围。因此，应认为本发明的范围由下述权利要求的内容所限定。

Claims

1.含蛋白酶的口腔护理组合物，特征在于，当没有口腔护理组合物时，该蛋白酶在口腔常态环境中实际上无活性。

2.权利要求1的口腔护理组合物，其中的蛋白酶当没有口腔护理组合物时在口腔常态pH环境中实际上无活性。

3.权利要求1和2任一项的口腔护理组合物，其中的蛋白酶在pH约为7附近、优选是约pH6.4～7.0的范围内、更优选是约pH6～8之间实际上无活性。

4.权利要求3的口腔护理组合物，其中的蛋白酶在温度为20℃～37℃之间有活性。

5.权利要求3和4的口腔护理组合物，其中的蛋白酶解活性与最适pH时的蛋白酶解活性相比低于70％，优选低于50％，更优选低于30％，较佳是低于10％，更佳是低于5％如低于2％。

6.权利要求1～5中任一项的口腔护理组合物，其中的蛋白酶得自微生物。

7.权利要求6的口腔护理组合物，其中的蛋白酶得自：芽孢杆菌属菌株，特别是枯草芽孢杆菌的菌株；或者根霉菌属真菌菌株，特别是雪白根霉的菌株；或者Schytalidium sp.的菌株；或者硫化叶菌属菌株；或者热原体属菌株；或者曲霉属菌株，特别是A.aculeatus或黑曲霉或泡盛曲霉或米曲霉的菌株；或者木霉菌属菌株，特别是T.harzianum或T.reesie的菌株；或者镰孢菌属菌株，特别是尖镰孢的菌株；或者腐质霉属菌株。

8.权利要求1～7中任一项的口腔护理组合物，其中的蛋白酶是酸性蛋白酶。

9.权利要求8的口腔护理组合物，其中的酸性蛋白酶是基因修饰蛋白酶。

10.权利要求1～9中任一项的口腔护理组合物，其中的蛋白酶在H₂O₂的存在下具有良好的除蛋白质活性。

11.权利要求1～8和10中任一项的口腔护理组合物，其中的蛋白酶是WO95/02044中所描述的蛋白酶I。

12.权利要求1～8和10中任一项的口腔护理组合物，其中的蛋白酶是WO95/02044中所描述的蛋白酶II。

13.权利要求1～7中任一项的口腔护理组合物，其中的蛋白酶是碱性蛋白酶。

14.权利要求13的口腔护理组合物，其中的碱性蛋白酶是基因修饰蛋白酶。

15.权利要求13和14的口腔护理组合物，其中的蛋白酶在H₂O₂的存在下具有良好的除蛋白质活性。

16.权利要求1～15中任一项的口腔护理组合物，它包括至少一种选自下列组的其它活性：还原酶如过氧化物酶，和淀粉酶、葡聚糖酶、变住酶(mutanase)、脂肪酶、葡糖氧化酶，以及抗微生物的多肽，或其混合物。

17.权利要求16的口腔护理组合物，它包括葡聚糖酶或变位酶(mutanase)，或其混合物。

18.口腔护理制品，它含有权利要求1～17中任一项的口腔护理组合物，或者含有在没有口腔护理制品时在口腔常态环境中实际上无活性的蛋白酶。

19.权利要求18的口腔护理制品，其中的蛋白酶在没有口腔护理制品时在口腔常态pH环境中实际上无活性。

20.权利要求18和19的口腔护理制品，它是洁牙剂。

21.权利要求20的口腔护理制品，其中的洁牙剂是牙膏或牙粉。

22.权利要求20的口腔护理制品，其中的洁牙剂是漱口剂。

23.权利要求18～22中任一项的口腔护理制品，它含有防牙斑化合物或组合物。

24.权利要求18～23中任一项的口腔护理制品，它含有防牙垢化合物或组合物。

25.权利要求18～24中任一项的口腔护理制品，它含有漂白或增白剂。

26.权利要求25的口腔护理制品，它含有H₂O₂。

27.权利要求18～26中任一项的口腔护理制品，它包括至少一种选自下列组的其它活性：还原酶如过氧化物酶、淀粉酶、葡聚糖酶、变位酶(mutanase)、脂肪酶、葡糖氧化酶或抗微生物活性、或其混合物。

28.权利要求27的口腔护理制品，它包括葡聚糖酶或变位酶(mutanase)，或其混合物。

29.蛋白酶的应用，该蛋白酶在口腔的常态环境中实际上无活性。

30.权利要求29的应用，其中的蛋白酶在口腔的常态pH环境中实际上无活性。

31.权利要求29和30的应用，是在口腔护理组合物和/或制品中的应用。

32.应用权利要求18～28中任一项的口腔护理制品的方法，其中

a)将口腔护理制品置于口中，

b)与牙齿和/或牙龈接触一段时间，

c)从口中除去，和

d)可任选用液体漱洗。

29.权利要求29的方法，其中用牙刷使口腔护理制品与牙齿和/或牙龈接触。

30.权利要求29和30的方法，其中通过漱洗使口腔护理制品与牙齿和/或牙龈接触。

31.权利要求29～31中任一项的方法，其中步骤d)中的漱洗液是水。