CN118206654A - 用于疾病治疗的新型抗体及其产品和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于抗体领域,具体涉及用于疾病治疗的新型抗体及其产品和应用。本发明的抗体包括HCDR1、HCDR2和HCDR3,所述的HCDR1、HCDR2和HCDR3具有:(i)如SEQ ID NO.1‑3所示的氨基酸序列;和/或;(ii)与SEQ ID NO.1‑3所示的氨基酸序列具有80%以上一致性的氨基酸序列。本发明的抗体,具有纳米抗体的自身特性,能特异性结合IL‑17A,适用于检测IL‑17A或治疗IL‑17A升高导致的疾病,本发明的抗体与现有技术中公开的抗体活性相当,具备基础应用条件,能够扩大临床用药选择范围,并进一步研发新类型药物。
Description
技术领域
本发明属于抗体领域,具体涉及一种用于疾病治疗的新型抗体及其产品和应用。
背景技术
白介素-17A(IL-17A)是由Th17辅助细胞产生的一类致炎细胞因子,通过与细胞表面的IL-17受体结合可以促进T细胞的激活和刺激上皮细胞、内皮细胞、成纤维细胞产生多种细胞因子如IL-6、IL-8、GM-CSF和CAM-1等多种炎症因子和趋化因子从而介导炎症反应,与银屑病、强直性脊柱炎(AS)和银屑病关节炎(PsA)等多种自身免疫性疾病的发生发展密切相关。研究发现,特异性的阻断IL-17A与其受体的结合,可以阻断炎症因子信号传递从而实现治疗银屑病等疾病的目的。目前全球范围内已上市多款阻断IL-17的抗体药物,其中包括中和IL-17A(Secukinumab和Ixekizumab)或IL-17RA(Brodalumab)的单抗药物,而国内在研的围绕IL-17靶点并用于自免疫疾病治疗的抗体药物或小分子已经超过50个。尽管与化疗药物相比抗体药通常在人体具有良好的疗效和耐受性,然而在临床使用中仍然存在很多治疗相关副作用,例如:鼻咽炎、头痛、恶心和腹泻或者更严重的如感染、心脏毒性和严重的免疫反应等;另外单抗药物结构复杂、稳定性相对较差也导致其需要反复大剂量注射从而达到最佳效果。
羊驼外周血液中存在一种天然缺失轻链的抗体,只包含一个重链可变区(VHH)和两个常规的CH2与CH3区,形成一个重链抗体。其单独克隆并表达出来的VHH结构具有与原重链抗体相当的结构稳定性以及与抗原的结合活性,是已知的可结合目标抗原的最小单位。VHH晶体为2.5nm,长4nm,分子量只有15KDa,此也被称作纳米抗体(Nanobody,Nb),纳米抗体一般也被称为单域抗体。纳米抗体能像正常抗体一样与抗原等靶标紧紧结合,但不像单链抗体那样相互黏连聚集成块。纳米抗体不仅分子量只是普通抗体的1/10,临床使用更加安全,而且化学性质也更加灵活、稳定性好、可溶性高、表达容易且容易偶联其他分子,因此研发IL-17A纳米抗体可能克服传统抗体的缺点,具有广阔的前景。
纳米抗体的CDR3长度比一般抗体的CDR3长,在一定的程度上弥补了因轻链缺失而造成的结合力下降,从而使其具有较强的抗原结合能力[1]。纳米抗体由互补决定区和骨架区组成。互补决定区包括CDR1、CDR2和CDR3。骆驼类动物体内B细胞分化,VDJ重排产生的重组基因参与CDR3区编码。因此,CDR3区与纳米抗体的特异性相关。纳米抗体CDR3区3-28个氨基酸的长度范围保障了纳米抗体库的库容。骨架区包括FR1、FR2、FR3和FR4,FR2上存在4个亲水性氨基酸突变,提高了水溶性。CDR1与CDR3间的特殊二硫键,增强了抗体在高压、高温、变性剂等条件下的稳定性,有利于纳米抗体的生产保存,也为新的给药方式创造了可能。
制备用于肿瘤治疗的单域抗体(纳米抗体)在实际应用中具有很高的价值,也存在较大的开发空间。
本发明系自主开发的抗IL-17A抗体所提出的专利申请。
除本发明请求保护的抗体外,同时开发出另外8个抗体,基于专利法单一性的相关规定,对9个不同抗体分别请求保护。
进一步还根据这9个抗体开发了12个串联抗体,基于专利法单一性的相关规定,对12个不同的串联抗体分别请求保护。
更进一步还根据这12个串联抗体,开发了基因修饰干细胞技术,基于专利法单一性的相关规定,对3个不同的基因修饰干细胞以及3项不同的应用分别请求保护。
为便于理解本发明,可选地参阅本项目其他系列申请文本。
[1]Cai H,Yao H,Li T,et al.An improved fluorescent tag and itsnanobodies for membrane protein expression,stability assay,andpurification.Commun Biol,2020,3(1):753.
发明内容
为了解决上述问题,本发明提供了一种抗IL-17A纳米抗体及其制备方法和应用。
本文所用的术语“包括(comprises)”或“包含(comprising)”是指“包括但不限于”。该术语旨在是开放式的,以指定任何所述特征、要素、整数、步骤或组件的存在,但不排除一个或多个其他特征、要素,整数、步骤、组件或其组的存在或添加。因此,术语“包含”包括更具限制性的术语“由……组成”和“基本上由……组成”。在一个实施方式中,在整个申请中特别是在权利要求书中使用的术语“包含”可以被术语“由……组成”代替。本文所用氨基酸三字母代码和单字母代码如本领域技术人员知晓,或J Biol.Chem,243,p3558(1968)中所述。
本文所用的术语“任选”、“任一”、“任意”或“任一项”意味着随后所描述地事件或环境可以但不必发生,该说明包括该事件或环境发生或不发生地场合。例如,“任选包含1个抗体重链可变区”意味着特定序列的抗体重链可变区可以但不必须存在。
本文所用的术语“和/或”应理解为意指可选项中的任一项或可选项中的任意两项或更多项的组合。
术语“单域抗体”(sdAb)或“纳米抗体”,具有其在本领域中的一般含义,且是指具有仅12 15kDa分子量的抗体片段,其由来源于重链的单个单体可变抗体结构域组成。这种单域抗体(命名为VHH)可以在骆驼科哺乳动物中发现,且天然缺失轻链。对于(单)域抗体的一般描述,还参考上述现有技术以及EP 0368684,Ward等(Nature 1989Oct 12;341(6242):544-6),Holt et al,Trends Biotechnol,2003,21(11):484-490;和WO 06/030220,WO 06/003388。单域抗体的氨基酸序列和结构可以被认为由四个框架区或“FRW”组成,其在本领域中被分别称为“框架区1”或“FRW1”;“框架区2”或“FRW2”;为“框架区3”或“FRW3”;以及“框架区4”或“FRW4”;框架区被三个互补决定区或“CDR”间隔,在本领域中分别称为“互补决定区1”或“CDR1”;“互补决定区2”或“CDR2”,以及“互补决定区3”或“CDR3”。因此,单域抗体可定义为具有以下一般结构的氨基酸序列:FRW1-CDR1-FRW2-CDR2-FRW3-CDR3-FRW4,其中FRW1FRW4分别指框架区1-4,且其中CDR1-CDR3指互补决定区1-3。在本公开的上下文中,单域抗体的氨基酸残基根据International ImMunoGeneTics information system氨基酸编号(http://imgt.cmes.fr/)给出的VH结构域的通用编号方式进行编号。
本文所用的术语“表达载体”是指能够在转化、转染或转导至宿主细胞中时复制及表达目的基因的核酸分子。表达载体包含一或多个表型选择标记及复制起点,以确保维护载体及以在需要的情况下于宿主内提供扩增。
本文所用的术语“细胞”、“细胞系”可互换使用,并且所有这类名称都包括其后代。术语“宿主细胞”是指,可用于导入载体的细胞,其包括但不限于,如大肠杆菌等原核细胞,如酵母细胞等的真菌细胞,或者如纤维原细胞、CHO细胞、COS细胞、NSO细胞、HeLa细胞、BHK细胞、HEK293细胞或人细胞等的动物细胞。
本文所用的术语“药物组合物”通常是指这样的制剂,其以允许活性成分的生物学活性有效的形式存在,并且不包含对将施用所述组合物的对象具有不可接受的毒性的另外的成分。所述组合物是无菌的。
术语“药学上可接受的”是指在合理的医学判断的范围内适合用于与人和动物的组织接触而没有过度毒性、刺激性、变应性应答或其它问题或并发症,与合理的益处/风险比相称的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。如本文中所用,术语“药学上可接受的载体、赋形剂和/或稀释剂”是指在药理学和/或生理学上与受试者和活性成分相容的载体,是本领域公知的(参见例如Remington's Pharmaceutical Sciences.Edited by Gennaro AR,19th ed.Pennsylvania:Mack Publishing Company,1995)。药学上可接受的材料、组合物或媒介物,如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂、介质、包封材料、制造助剂或溶剂包封材料,其涉及维持本公开的抗体或其抗原结合片段的稳定性、溶解度或活性,并且包括但不限于:pH调节剂,表面活性剂,佐剂,离子强度增强剂,稀释剂,维持渗透压的试剂,延迟吸收的试剂,防腐剂。例如,pH调节剂包括但不限于磷酸盐缓冲液。表面活性剂包括但不限于阳离子,阴离子或者非离子型表面活性剂,例如Tween-80。离子强度增强剂包括但不限于氯化钠。防腐剂包括但不限于各种抗细菌试剂和抗真菌试剂,例如对羟苯甲酸酯,三氯叔丁醇,苯酚,山梨酸等。维持渗透压的试剂包括但不限于糖、NaCl及其类似物。延迟吸收的试剂包括但不限于单硬脂酸盐和明胶。稀释剂包括但不限于水,水性缓冲液(如缓冲盐水),醇和多元醇(如甘油)等。防腐剂包括但不限于各种抗细菌试剂和抗真菌试剂,例如硫柳汞,2-苯氧乙醇,对羟苯甲酸酯,三氯叔丁醇,苯酚,山梨酸等。稳定剂具有本领域技术人员通常理解的含义,其能够稳定药物中的活性成分的期望活性,包括但不限于谷氨酸钠,明胶,SPGA,糖类(如山梨醇,甘露醇,淀粉,蔗糖,乳糖,葡聚糖,或葡萄糖),氨基酸(如谷氨酸,甘氨酸),蛋白质(如干燥乳清,白蛋白或酪蛋白)或其降解产物(如乳白蛋白水解物)等。
本文所用的术语“受试者”包括任何人或非人动物。术语“非人动物”包括所有脊椎动物,例如哺乳动物和非哺乳动物,诸如非人灵长类动物、绵羊、狗、猫、马、牛、鸡、两栖动物、爬行动物等。
本文所用的术语“治疗有效量”、“治疗有效剂量”和“有效量”,是指本发明的抗IL-17A抗体或其抗原结合片段当单独或与其它治疗药物组合给予细胞、组织或受试者时,有效预防或改善一种或多种疾病或病况的症状或该疾病或病况的发展的量。治疗有效剂量还指足以导致症状改善的抗体或其抗原结合片段的量,例如治疗、治愈、预防或改善相关医学病况或者提高这类病况的治疗、治愈、预防或改善的速度的量。当对个体施用单独给予的活性成分时,治疗有效剂量仅是指该成分。当组合施用时,治疗有效剂量是指引起治疗效果的活性成分的综合量,不论是组合、依次给予还是同时给予。治疗剂的有效量将导致诊断标准或参数提高至少10%;通常至少20%;优选至少约30%;更优选至少40%,最优选至少50%。
本发明提供了包括但不限于以下方面的技术方案:
第一方面,本发明提供了一种抗体。
所述的抗体包括重链可变区,所述的重链可变区上包括3个HCDR区域。
具体地,所述抗体包括HCDR1、HCDR2和HCDR3,其特征在于,所述的HCDR1、HCDR2和HCDR3具有:
(i)如SEQ ID NO.1-3所示的氨基酸序列;和/或;
(ii)与SEQ ID NO.1-3所示的氨基酸序列具有80%以上一致性的氨基酸序列。
SEQ ID NO.1:GEFSIHYA;
SEQ ID NO.2:ITRGGVA;
SEQ ID NO.3:NAGTNGPGY。
具体地,所述抗体的氨基酸序列包含:通过在SEQ ID NO.1-3所示的氨基酸序列上进行添加、缺失、修饰和/或取代中的至少一种方式所得到的氨基酸序列。
作为优选,所述的添加、缺失、修饰和/或取代包括1、2、3、4、5、6、7、8或9个氨基酸差异。在一些表述中,其含义为与与SEQ ID NO.1-3所示的氨基酸序列具有1、2、3、4、5、6、7、8或9个氨基酸差异。
优选地,一个或多个氨基酸的取代可以是一个或多个氨基酸的保守性取代。这种保守性取代优选地是以下组(a)到(e)中的一个氨基酸被同组中的另一个氨基酸残基取代的取代:(a)小的脂肪族、非极性或弱极性残基:Ala、Ser、Thr、Pro和Gly;(b)极性、带负电的残基及其(不带电的)酰胺:Asp、Asn、Glu和Gln;(c)极性、带正电的残基:His、Arg和Lys;(d)大的脂肪族、非极性残基:Met、Leu、He、Val和Cys;以及(e)芳香族残基:Phe、Tyr和Trp。
特别优选地,保守性取代如下:Ala到Gly或到Ser;Arg到Lys;Asn到Gln或到His;Asp到Glu;Cys到Ser;Gln到Asn;Glu到Asp;Gly到Ala或到Pro;His到Asn或到Gln;Ile到Leu或到Val;Leu到Ile或到Val;Lys到Arg、到Gln或到Glu;Met到Leu、到Tyr或到Ile;Phe到Met、到Leu或到Tyr;Ser到Thr;Thr到Ser;Trp到Tyr;Tyr到Trp;和/或Phe到Val、到Ile或到Leu。
所述的抗体包括重链可变区,所述的重链可变区上4个FR区域。
所述的抗体的氨基酸序列包括:
(ⅰ)氨基酸序列如SEQ ID NO.4-7所示的FR1、FR2、FR3、FR4;和/或;
(ⅱ)与SEQ ID NO.4-7所示的氨基酸序列具有至少80%序列一致性的氨基酸序列。
SEQ ID NO.4:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS;
SEQ ID NO.5:MGWYRQAPGKQRELVAT;
SEQ ID NO.6:NYADSVKGRFTISRDNAKNTAYLQMNSLKPEDTAVYYC;
SEQ ID NO.7:WGQGTQVTVAS;
具体地,所述抗体的氨基酸序列包含:通过在SEQ ID NO.4-7所示的氨基酸序列上进行添加、缺失、修饰和/或取代中的至少一种方式所得到的氨基酸序列。
优选地,所述抗体的氨基酸序列包含:与SEQ ID NO.4-7所示的氨基酸序列相比具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38个氨基酸差异的氨基酸序列。
基于前述,本发明提供的抗体的氨基酸序列可以包含:
(i)前述的包含SEQ ID NO.1-3所示氨基酸序列的抗体的氨基酸序列;和
(ii)前述的包含SEQ ID NO.4-7所示氨基酸序列的抗体的氨基酸序列。
基于前述,本发明提供的抗体的氨基酸序列可以包含:
FR1-HCDR1-FR2-HCDR2-FR3-HCDR3-FR4;
其中HCDR1、HCDR2、HCDR3选自以下:
(1)如SEQ ID NO.1-3所示的氨基酸序列;或
(2)与(1)相比具有1、2、3、4、5个的氨基酸差异的氨基酸序列的功能活性变体;
FR1、FR2、FR3、FR4选自以下:
1)如SEQ ID NO.4-7所示的氨基酸序列;或
2)与1)具有80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的氨基酸序列的功能活性变体。
作为优选,所述HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示,所述HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示,所述HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
作为优选,所述FR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示,所述FR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示,所述FR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示,所述FR4的氨基酸序列如SEQID NO.7所示。
在一些具体实施例中,所述的抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。
SEQ ID NO.8:
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGEFSIHYAMGWYRQAPGKQRELVATITRGGVANYADSVKGRFTISRDNAKNTAYLQMNSLKPEDTAVYYCNAGTNGPGYWGQGTQVTVAS。
作为优选,所述的抗体为单域抗体。
作为优选,所述的抗体为抗IL-17A抗体。
在实际应用中,所述的抗体可以包含部分或全部选自人源、鼠源、灵长目动物源或骆驼科动物源的抗体重链框架区或其变体;
优选地,包含部分或全部选自骆驼科动物源的抗体重链框架区或其变体;
更优选地,包含部分或全部选自羊驼源的抗体重链框架区或其变体。
第二方面,本发明提供了前述抗体相关的基因工程或蛋白工程或细胞工程产物,包括但不限于:
包含前述的抗体的多克隆抗体;
包含前述的抗体或多克隆抗体的重组蛋白;
编码前述抗体、多克隆抗体或重组蛋白的分离的核酸分子;
包含前述核酸分子的表达载体;
基因组整合有前述的核酸分子或包含前述的表达载体的宿主细胞。
如本领域技术人员所晓,所述的重组蛋白还可以包括协助其表达和/或分泌和/或延长其在体内半衰期的生物活性蛋白或功能片段;
优选地,所述生物活性蛋白或功能片段选自免疫球蛋白Fc结构域、血清白蛋白(例如,人血清白蛋白(HSA))、白蛋白结合多肽(例如HAS结合多肽)、前白蛋白(也称为转甲状腺素)、羧基末端肽(例如,人绒毛膜促性腺激素β亚基(CTP))、弹性蛋白样多肽(ELP)、His标签(优选6×His)、GST(谷胱甘肽巯基转移酶)标签、MBP(麦芽糖结合蛋白)标签、FLAG标签、SUMO(泛素样修饰蛋白)标签等中的至少一种。
所述生物活性蛋白或功能片段为人免疫球蛋白Fc结构域,优选为人IgG的Fc结构域,包括人IgG1、IgG2、IgG3、IgG4的Fc结构域,更优选为人IgG1的Fc结构域。
在一些实施方案中,所述人IgG1的Fc结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示。
SEQ ID NO.9:
DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK。
编码SEQ ID NO.9的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示:
GACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCACGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA。
在一些实施方案中,可在本文中所提供抗体的Fc区中引入一个或多个氨基酸修饰,以此产生Fc区变体。Fc区变体可包含在一或多个氨基酸位置处包含氨基酸修饰(例如置换、缺失和插入)的人Fc区序列(例如人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc区)。
在一些实施方案中,所述重组蛋白可以为单聚体、二聚体或多聚体。
所述的核酸分子,如本领域技术人员所公知,由于密码子简并性问题,在明确氨基酸序列的情况下,其对应的核酸序列是有无数可能性的,作为具体实施例展示的核酸序列仅作为一个较优的示例,而非唯一可能性。除非另有所指,否则特定核酸序列还隐含地包括其保守修饰的变体(例如,简并密码子取代)、等位基因、直系同源物、SNP和互补序列以及明确指出的序列。具体地,简并密码子取代可通过生成其中一个或多个选择的(或全部)密码子的第三位被混合碱基和/或脱氧肌苷残基取代的序列来实现(Batzer,Nucleic AcidRes.19:5081(1991);Ohtsuka,J.Biol.Chem.260:2605-2608(1985);Rossolini,Mol.Cell.Probes 8:91 98(1994))。
在一些实施方案中,所述的核酸分子可以包括如SEQ ID NO.11所示的核苷酸序列:
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTGCAGCCGGGGGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGAGAGTTTAGTATCCACTATGCCATGGGCTGGTACCGCCAGGCTCCAGGGAAGCAGCGCGAGCTGGTCGCAACTATTACTAGAGGTGGTGTAGCTAATTATGCAGACTCCGTGAAGGGGCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACACGGCGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACGGCCGTCTATTACTGTAATGCAGGGACGAACGGGCCGGGCTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCGCCTCA;
在一些实施方案中,所述表达载体可以为真核表达载体或原核表达载体,优选真核表达载体。
优选地,所述真核表达载体选自酵母表达载体、昆虫表达载体或哺乳动物表达载体;
更优选地,所述哺乳动物表达载体选自逆转录病毒表达载体、慢病毒表达载体、腺病毒表达载体、腺相关病毒表达载体。
所述的宿主细胞可以由本领域技术人员根据实际需要进行选择,作为具体实施例展示的细胞类型仅为较优示例。
第三方面,本发明提供了基于前述抗体或产物的下游产品,包括但不限于:抗体制剂、试剂盒、抗体药物偶联物、药物组合物。
所述的抗体制剂可以包括:
(Ⅰ)前述的抗体;和;
(Ⅱ)药学上可接受的载剂。
所述的试剂盒可以包括:
(Ⅰ)前述的抗体、多克隆抗体、重组蛋白或抗体制剂;和;
(Ⅱ)任选地,还包括装载容器。
所述的抗体药物偶联物可以包括:
1)前述的抗体、多克隆抗体或重组蛋白;和
2)与1)结合的偶联部分。
在一些实施方案中,所述偶联部分包括可检测标记物、药物、毒素、细胞因子、放射性核素和/或酶。
所述的药物组合物可以包含:
前述的抗体、多克隆抗体、重组蛋白、抗体制剂、抗体药物偶联物、核酸分子、表达载体或宿主细胞;和;
任选地,所述药物组合物还包括至少一种药学上可接受的辅料。
所述的药学上可接受的辅料有时也被称为药学上可接受的载体,包括但不限于溶剂、稀释剂、崩解剂、沉淀抑制剂、表面活性剂、助流剂、粘合剂、润滑剂、分散剂、助悬剂、等渗剂、增稠剂、乳化剂、防腐剂、稳定剂、水合剂、乳化加速剂、缓冲剂、吸收剂、着色剂、香味剂、甜味剂、离子交换剂、脱模剂、涂布剂、矫味剂或抗氧化剂。
所述的试剂盒可以是ELISA检测试剂盒,包括但不限于竞争法或双抗体夹心法ELISA试剂盒。
第四方面,本发明提供了前述的抗体、产物或下游产品相关的应用,包括但不限于:
前述的抗体、多克隆抗体、重组蛋白、抗体制剂、试剂盒、抗体药物偶联物、核酸分子、表达载体、宿主细胞的用途,所述用途选自以下至少一种:
ⅰ)制备检测试剂或试剂盒;
ⅱ)制备预防和/或治疗自身免疫性疾病的药物;
ⅲ)制备预防和/或治疗癌症的药物。
所述的药物可以通过特异性结合抑制IL-17A发挥作用。
理论上,与IL-17A升高相关的疾病,所述的药物均适用。
所述自身免疫性疾病包括但不限于白塞氏病、系统性红斑狼疮、慢性盘状红斑狼疮、多发性硬化症、系统性硬皮病、进行性系统性硬化症、硬皮病、多发性肌炎、皮肌炎、结节性动脉周围炎、主动脉炎综合征、恶性类风湿关节炎、类风湿关节炎、幼年特发性关节炎、脊椎关节炎、混合性结缔组织病、卡斯尔曼病、干燥综合征、成人斯蒂尔病、血管炎、过敏性肉芽肿性血管炎、过敏性血管炎、类风湿性血管炎、大血管血管炎、ANCA相关性血管炎、Cogan综合征、RS3PE综合征、颞动脉炎、风湿性多肌痛、纤维肌痛、抗磷脂抗体综合征、嗜酸性筋膜炎、IgG4相关疾病、格林巴利综合征、重症肌无力、慢性萎缩性胃炎、自身免疫性肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、Good-pasture综合征、急进性肾小球肾炎、狼疮性肾炎、巨幼红细胞性贫血、自身免疫性溶血性贫血、恶性贫血、自身免疫性中性粒细胞减少症、特发性血小板减少性紫癜、巴塞杜病、桥本病、自身免疫性肾上腺皮质功能减退症、原发性甲状腺功能减退症、艾迪生病、特发性艾迪生病、I型糖尿病、缓慢进展型I型糖尿病、局灶性硬皮病、银屑病、银屑病关节炎、大疱性类天疱疮、天疱疮、类天疱疮、妊娠疱疹、线性IgA大疱性皮肤病、获得性大疱性表皮松解症、斑秃、白斑病、寻常型白斑病、视神经脊髓炎、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病、多灶性运动神经病、结节病、巨细胞动脉炎、肌萎缩侧索硬化、原田病、自身免疫性视神经病、特发性无精子症、习惯性流产、炎症性肠病、乳糜泻、强直性脊柱炎、严重哮喘、慢性荨麻疹移植免疫、家族性地中海热、嗜酸性粒细胞慢性鼻窦炎、扩张型心肌病、系统性肥大细胞增多症或包涵体肌炎。
所述癌症包括但不限于基底细胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、乳腺癌、腹膜癌、宫颈癌、胆管癌、绒毛膜癌、结直肠癌、结缔组织癌、消化系统癌症、子宫内膜癌、食道癌、眼癌、头颈癌、胃癌、胶质母细胞瘤、肝癌、肾癌、喉癌、白血病、肝癌、肺癌、淋巴瘤、黑色素瘤、骨髓瘤、神经母细胞瘤、口腔癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、直肠癌、呼吸系统癌、唾液腺癌、肉瘤、皮肤癌、鳞状细胞癌、睾丸癌、甲状腺癌、子宫癌、泌尿系统癌症、B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、毛细胞白血病或慢性成髓细胞性白血病。
第五方面,本发明提供了与前述的抗体、产物或下游产品相关的方法,包括但不限于:检测IL-17A的方法和预防/治疗IL-17A相关疾病的方法。
所述的检测IL-17A的方法包括用于非诊断目的的体外检测样品中的IL-17A的方法,包括以下步骤:
Ⅰ)将前述的抗体、多克隆抗体、重组蛋白、抗体制剂或抗体药物偶联物与待测样品相接触;
Ⅱ)检测抗原-抗体复合物;
Ⅲ)判读结果。
所述的IL-17A相关疾病可以是自身免疫性疾病或癌症。
具体地,本发明提供了一种预防和/或治疗自身免疫性疾病的方法,包括:
向有需要的受试者施用治疗有效量的所述的抗体、多克隆抗体、重组蛋白、抗体制剂、抗体药物偶联物、核酸分子、表达载体、宿主细胞或药物组合物。
具体地,本发明提供了一种预防和/或治疗癌症的方法,包括:
向有需要的受试者施用治疗有效量的所述的抗体、多克隆抗体、重组蛋白、抗体制剂、抗体药物偶联物、核酸分子、表达载体、宿主细胞或药物组合物。
本发明中,所述的抗体有时被称为单域抗体或纳米抗体,在本领域常规认知中有时也可以称为重链可变区、VHH区、VHH抗体等。
本发明还提供了前述的抗体的制备方法。
所述的制备方法中包括构建表达载体转染细胞后进行表达。
所述的表达载体即为前述表达载体,所述的细胞即为前述的宿主细胞。
但以上制备方法并非唯一方法,本领域技术人员在已知氨基酸序列的情况下,通过已经公开或未公开的任何氨基酸序列合成方法来制备本发明的纳米抗体或衍生抗体(衍生产物)或相关的基因工程产物,其具体的方法均在本发明保护的范围内。
本文所用的术语“高变区”、“超变区”、“互补决定区”、“HVR”或“CDR”,是指在抗体可变结构域区域中序列上高变和/或形成结构上限定的环(“高变环”)的区域。通常,天然四链抗体包含六个HVR或CDR:三个存在于VH中(H1、H2、H3),三个存在于VL中(L1、L2、L3)。基于Chothia定义规则,示例性CDR(LCDR1、LCDR2、LCDR3、HCDR1、HCDR2和HCDR3)位于氨基酸残基L26-L32(L1)、L50-L52(L2)、L91-L96(L3)、H26-H32(H1)、H52-H56(H2)和H96-H101(H3)处(Chothia等人,J.Mol.Biol.196:901-917(1987))。基于Kabat定义规则,示例性CDR(LCDR1、LCDR2、LCDR3、HCDR1、HCDR2和HCDR3)位于氨基酸残基L24-L34(L1)、L50-L56(L2)、L89-L97(L3)、H31-H35(H1)、H50-H65(H2)和H95-H102(H3)处(Kabat等人,Sequences of ProteinsofImmunological Interest,the fifth edtion,Public Health Service,NationalInstitutes of Health,Bethesda,MD(1991))。基于IMGT定义规则,示例性CDR(LCDR1、LCDR2、LCDR3、HCDR1、HCDR2和HCDR3)位于氨基酸残基L27-L32(L1)、L50-L51(L2)、L89-L97(L3)、H26-H33(H1)、H51-H56(H2)和H93-H102(H3)处(Honjo,T.和Alt,F.W.(1995)Immunoglobulin genes.Academic Press pp.3-443)。本领域人员公知,在本领域中可以通过多种方法来定义抗体的CDR,例如基于序列可变性的Kabat定义规则、基于结构环区域位置的Chothia定义规则和基于CDR移植的抗体人源化设计的参考工具(参见J MolBiol.273:927-48,1997)。本领域技术人员应当理解的是,除非另有规定,否则术语给定抗体或其区(例如可变区)的“CDR”及“互补决定区”应理解为涵盖如通过本发明描述的上述已知方案中的任何一种界定的互补决定区。虽然本发明公开的CDR是基于IMGT定义规则所示出的序列,但是根据其他CDR定义规则所对应的氨基酸序列也应当落在本发明的保护范围中。
在一些实施方案中,本发明所述功能活性变体为所述的抗体具有相同或相近的亲和力或功能的单域抗体变体(突变体),例如可以特异性结合IL-17A并阻断IL-17A与其受体结合的变体(突变体)。
本发明的有益效果:
本发明提供了一种抗IL-17A纳米抗体,首先其具有纳米抗体的自身特性,适用于临床检测IL-17A或治疗IL-17A升高导致的疾病,其次,本发明的纳米抗体与现有技术中公开的抗体活性相当,具备基础应用条件,能够扩大临床用药选择范围,并进一步研发新类型药物。
附图说明
图1为IL17A重组蛋白还原性SDS-PAGE检测结果。
图2为IL-17A蛋白激活NIH-3T3细胞实验结果。
图3为IL17A与报告基因细胞株的结合实验结果。
图4为IL17A重组蛋白激活293F-IL-17RA-IL-17Rc-ACT1-NFκB-Luc结果。
图5为阳性对照抗体Ixekizumab阻断功能实验结果。
图6为单域抗体3-H11凝胶电泳结果。
图7为单域抗体3-H11与靶蛋白的结合实验结果。
图8为阳性对照抗体Ixekizumab与靶蛋白的结合实验结果。
图9为单域抗体3-H11阻断功能实验结果。
图10为阳性对照抗体Ixekizumab稳定性实验结果。
图11为单域抗体3-H11稳定性实验结果。
具体实施方式
下面结合具体实施例,对本发明作进一步详细的阐述,下述实施例不用于限制本发明,仅用于说明本发明。以下实施例中所使用的实验方法如无特殊说明,实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件,下述实施例中所使用的材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。此处所描述的具体实施例仅用于解释本发明,并不用于构成对本发明的任何限制。此外,在以下说明中,省略了对公知结构和技术的描述,以避免不必要地混淆本发明的概念。这样的结构和技术在许多出版物,例如《分子克隆实验指南(第四版)》(冷泉港实验室科学出版社)、Ausubel,F.M等人,Current Protocols in MolecularBiology,Greene Publishing Assoc.和Wiley-lnterscience的出版中也进行了描述。
本发明中的筛选、克隆VHH片段、构建纳米抗体所使用的引物均参照以下文献设计:
Maass DR,Sepulveda J,Pernthaner A,Shoemaker CB.Alpaca(Lama pacos)as aconvenient source of recombinant camelid heavy chain antibodies(VHHs).JImmunol Methods.2007;324(1-2):13-25.
Lin,J,Gu,Y,Xu,Y et al.Characterization and applications of nanobodiesagainst Pseudomonas aeruginosa exotoxin a selected from single alpaca Bcells.Biotechnol Biotechnol Equip 2020;34:1028-37.
Studies on design of singledomain antibodies by AlpacaVHH phagelibrary and high throughput sequencing toconstruct Fab antibody purificationsystem(http://hdl.handle.net/10232/00030916).
本发明中,部分试剂来源信息如下:
基础实验例1IL-17纳米抗体筛选方法
人IL-17A抗原序列数据库编号:Accession#Q16552-1;
鼠IL-17A抗原序列数据库编号Accession#Q62386-1;
纳米抗体筛选方法:
(1)抗原的制备
在上述IL-17抗原C端添加6×His标签,按照原核密码子优化后进行基因合成并亚克隆至pET28a载体中;经Sanger测序验证无误后,进行质粒抽提;将重组质粒转化BL21感受态,使用0.5mM IPTG诱导过夜,收集菌液裂解;使用镍柱纯化重组蛋白;通过SDS-PAGE检测目标蛋白的纯度。
采用BL21表达IL-17A重组蛋白并使用镍柱纯化,SDS-PAGE检测目标蛋白的纯度,结果如图1所示,IL-17A抗原蛋白经精纯后,纯度大于90%。
本发明中IL-17A重组蛋白有时也被称为IL-17A抗原蛋白、重组IL-17A,其具有相同的含义。一些简称如重组抗原蛋白、重组抗原如无特别说明也应理解为同样的含义。
(2)阳性对照抗体Ixekizumab制备
1.合成Ixekizumab重链可变区(SEQ ID NO.12)及轻链可变区(SEQ ID NO.13)的基因,将重链可变区基因亚克隆至pcDNA3.4-hIgG4载体(hIgG4序列为SEQ ID NO.14)中,轻链可变区亚克隆至pcDNA3.4-hIgKc载体(hIgKc序列为SEQ ID NO.15)中;经Sanger测序验证无误后使用质粒大抽试剂盒制备去内毒素质粒备用。
SEQ ID NO.12:
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYSFTDYHIHWVRQAPGQGLEW MGVINPMYGTTDYNQRFKGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARY DYFTGTGVYWGQGTLVTVSS;
SEQ ID NO.13:
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSRSLVHSRGNTYLHWYLQKPGQSPQ LLIYKVSNRFIGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHLPFTFG QGTKLEIK;
SEQ ID NO.14:
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK;
SEQ ID NO.15:
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQS GNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC。
2.从冰箱中取出LVTransm转染试剂及重链与轻链表达载体,室温解冻后,用移液枪上下吹打完全混匀。取出PBS缓冲液,温热至室温。取2mL PBS至6孔板的一个孔,分别加入50μg重链和轻链表达载体,移液枪上下吹打充分混匀后,加入300μL LVTransm,立即用移液器上下吹打混匀,室温下静置10分钟。
3.将上述DNA/LVTransm复合物加入到100mL 293F细胞中,轻轻晃动充分混匀,将细胞置于37℃、5% CO2培养箱,130RPM继续培养。
4.连续培养5-7天后,离心收集培养基上清,用0.45μm的滤膜过滤,滤液转至无菌离心管中,使用Protein A柱子纯化抗体。
SDS-PAGE检测目标抗体蛋白的纯度,纯度>95%;
(3)Human IL-17A重组蛋白(抗原)与对照抗体ELISA结合活性检测
1.使用无菌CBS稀释IL-17A重组蛋白(步骤(1)制备的IL-17A抗原蛋白)至终浓度为2μg/mL。取一块新的96孔酶标板,加入100μL/孔重组蛋白稀释液4℃包被过夜。
2.去掉抗原包被液,使用PBST(含0.5%的吐温20)洗涤3次。
3.加入200μL/孔的3%MPBS 37℃封闭2小时;
4.去掉封闭缓冲液后,使用PBST洗涤孔板3次;
5.阳性对照抗体Ixekizumab使用PBS稀释至10μg/mL,5倍梯度稀释7个点,按100μL/孔加入酶标板中,室温孵育1小时,对照孔为PBS;
6.去掉孔内的液体,并使用PBST洗涤3次;
7.加入二抗HRP-ProteinA 1:10000稀释,按100μL/孔加入酶标板中,室温孵育1小时;
8.去掉孔内的液体后,使用PBST洗涤孔板3次;
9.加入100μL/孔TMB显色液;
10.室温避光孵育15分钟;
11.加入50μL/孔终止液(2M HCl);
使用酶标仪读取孔内的OD450值。
以上方法中,采用2μg/mL IL-17A重组蛋白包被酶标板,0.156-10μg/mL倍比稀释的阳性对照抗体Ixekizumab、HRP-ProteinA二抗及TMB显色液相继加入酶标板中孵育,检测IL-17A重组蛋白与阳性抗体结合能力,OD450值的检测结果如表1所示:阳性抗体与IL-17A抗原蛋白结合良好,可以用于后续免疫。
表1
(4)Human IL-17A重组蛋白活性检测
采用IL-17A蛋白激活NIH-3T3细胞实验进行检测。
1.从液氮中复苏NIH-3T3细胞,连续传代培养使细胞处于对数生长期,细胞计数后,按照2×105/孔细胞量接种至96孔板;
2.每孔加入100μL不同浓度的IL-17A(对照,ACRO,Cat#ILA-H5118)以及制备的IL-17A重组蛋白,终浓度分别为0,0.00001,0.0001,0.001,0.01,0.1,1,10μg/mL;
3.37℃,5% CO2培养48小时,培养结束后,轻轻取出96孔板,离心收集培养基上清,使用mouse IL6 ELISA试剂盒检测IL6的分泌;
采用PRISM GraphPad对数据进行处理,绘制曲线图,并计算EC50值。
分别使用制备的重组IL-17A(TEST)和采购的IL-17A(Acro)处理NIH-3T3细胞,72h后收集上清检测mIL-6的分泌,结果如图2所示;根据检测结果,IL-17A抗原蛋白具有激活NIH-3T3细胞表达mIL-6的活性,且IL-17A(TEST,下称IL-17A重组蛋白)活性与其浓度正相关,可以用于免疫。
(5)IL-17A报告基因细胞株构建及验证
根据IL-17RA(UniProtKB:Q96F46)及IL-17RC(UniProtKB:Q8NAC3)的氨基酸序列信息,构建慢病毒表达载体并包装慢病毒,共同感染293细胞,筛选同时过表达这两个受体的重组293细胞,进一步稳转NFKB-Luciferase(SEQ ID NO.16)和ACT1(SEQ ID NO.17)基因,构建IL-17A报告基因细胞株293F-IL-17RA-IL-17Rc-ACT1-NFκB-Luc。
SEQ ID NO.16:
ATGGAAGATGCCAAAAACATTAAGAAGGGCCCAGCGCCATTCTACCCACTCGAAGACGGGACCGCCGGCGAGCAGCTGCACAAAGCCATGAAGCGCTACGCCCTGGTGCCCGGCACCATCGCCTTTACCGACGCACATATCGAGGTGGACATTACCTACGCCGAGTACTTCGAGATGAGCGTTCGGCTGGCAGAAGCTATGAAGCGCTATGGGCTGAATACAAACCATCGGATCGTGGTGTGCAGCGAGAATAGCTTGCAGTTCTTCATGCCCGTGTTGGGTGCCCTGTTCATCGGTGTGGCTGTGGCCCCAGCTAACGACATCTACAACGAGCGCGAGCTGCTGAA CAGCATGGGCATCAGCCAGCCCACCGTCGTATTCGTGAGCAAGAAAGGGCTGCAAAAGATCCTCAACGTGCAAAAGAAGCTACCGATCATACAAAAGATCATCATCATGGATAGCAAGACCGACTACCAGGGCTTCCAAAGCATGTACACCTTCGTGACTTCCCATTTGCCACCCGGCTTCAACGAGTACGACTTCGTGCCCGAGAGCTTCGACCGGGACAAAACCATCGCCCTGATCATGAACAGTAGTGGCAGTACCGGATTGCCCAAGGGCGTAGCCCTACCGCACCGCACCGCTTGTGTCCGATTCAGTCATGCCCGCGACCCCATCTTCGGCAACCAGATCATCCCCGACACCGCTATCCTCAGCGTGGTGCCATTTCACCACGGCTTCGGCATGTTCACCACGCTGGGCTACTTGATCTGCGGCTTTCGGGTCGTGCTCATGTACCGCTTCGAGGAGGAGCTATTCTTGCGCAGCTTGCAAGACTATAAGATTCAATCTGCCCTGCTGGTGCCCACACTATTTAGCTTCTTCGCTAAGAGCACTCTCATCGACAAGTACGACCTAAGCAACTTGCACGAGATCGCCAGCGGCGGGGCGCCGCTCAGCAAGGAGGTAGGTGAGGCCGTGGCCAAACGCTTCCACCTACCAGGCATCCGCCAGGGCTACGGCCTGACAGAAACAACCAGCGCCATTCTGATCACCCCCGAAGGGGACGACAAGCCTGGCGCAGTAGGCAAGGTGGTGCCCTTCTTCGAGGCTAAGGTGGTGGACTTGGACACCGGTAAGACACTGGGTGTGAACCAGCGCGGCGAGCTGTGCGTCCGTGGCCCCATGATCATGAGCGGCTACGTTAACAACCCCGAGGCTACAAACGCTCTCATCGACAAGGACGGCTGGCTGCACAGCGGCGACATCGCCTACTGGGACGAGGACGAGCACTTCTTCATCGTGGACCGGCTGAAGAGCCTGATCAAATACAAGGGCTACCAGGTAGCCCCAGCCGAACTGGAGAGCATCCTGCTGCAACACCCCAACATCTTCGACGCCGGGGTCGCCGGCCTGCCCGACGACGATGCCGGCGAGCTGCCCGCCGCAGTCGTCGTGCTGGAACACGGTAAAACCATGACCGAGAAGGAGATCGTGGACTATGTGGCCAGCCAGGTTACAACCGCCAAGAAGCTGCGCGGTGGTGTTGTGTTCGTGGACGAGGTGCCTAAAGGACTGACCGGCAAGTTGGACGCCCGCAAGATCCGCGAGATTCTCATTAAGGCCAAGAAGGGCGGCAAGATCGCCGTG;
SEQ ID NO.17:
ATGCCACCTCAGTTGCAGGAAACTCGGATGAATAGAAGCATCCCCGTGGAAGTGGACGAGAGCGAGCCGTACCCTAGTCAGCTGCTGAAGCCGATCC
CTGAGTACTCCCCGGAAGAGGAATCCGAACCACCAGCCCCCAACATTCGC
AATATGGCCCCCAATAGCTTGTCCGCACCAACAATGCTGCACAACTCTTCT
GGCGACTTCTCTCAGGCCCACTCCACCCTGAAACTGGCGAATCACCAGCG
GCCTGTATCCCGGCAGGTGACCTGTCTGAGAACTCAGGTGCTTGAAGACT
CCGAGGACTCTTTCTGTAGGCGGCATCCAGGTTTGGGCAAGGCGTTTCCGT
CCGGCTGTTCCGCGGTTTCAGAGCCCGCTTCCGAAAGTGTCGTGGGCGCC
CTGCCAGCCGAGCACCAGTTCTCCTTCATGGAAAAGCGGAACCAGTGGCT
GGTCAGTCAGCTGAGCGCCGCGTCACCTGATACAGGTCACGATTCCGACA
AGTCTGACCAGTCTCTGCCCAATGCGTCAGCCGATAGTCTCGGGGGCTCC
CAGGAGATGGTGCAGAGACCACAGCCGCACAGAAACCGGGCCGGGCTTG
ATCTGCCCACCATTGATACAGGCTACGATTCCCAGCCCCAGGACGTCCTTG
GCATTCGCCAGCTGGAAAGGCCTCTGCCCTTGACCTCCGTGTGTTACCCCC
AGGACCTGCCCCGCCCTTTGAGAAGCCGGGAGTTTCCCCAGTTTGAGCCC
CAACGATACCCTGCCTGTGCTCAGATGCTGCCTCCGAACCTGAGCCCACA
CGCTCCCTGGAACTACCACTATCACTGTCCCGGCAGCCCCGATCACCAGG
TGCCTTATGGACACGACTACCCGCGGGCTGCATACCAGCAGGTCATACAG
CCTGCCTTGCCGGGTCAGCCGCTGCCCGGAGCTTCTGTGCGCGGCCTGCAC
CCCGTTCAGAAAGTGATCCTGAACTATCCAAGCCCATGGGACCATGAAGA
GAGACCAGCCCAAAGAGATTGCTCTTTTCCTGGGTTGCCTAGACACCAAG
ACCAGCCTCACCACCAGCCTCCCAATCGGGCAGGCGCCCCAGGCGAAAGT
CTCGAGTGCCCCGCCGAACTCAGACCACAGGTCCCTCAGCCCCCTTCCCCC
GCGGCAGTACCCAGACCCCCCTCTAACCCACCCGCCCGGGGAACGCTCAA
GACTTCAAATCTCCCAGAAGAGCTGCGCAAAGTGTTCATAACCTACAGCA
TGGACACCGCTATGGAGGTGGTTAAGTTCGTCAACTTCCTGCTGGTCAATG
GGTTCCAGACTGCAATCGACATTTTTGAGGATAGAATTCGGGGAATCGAC
ATCATCAAGTGGATGGAGAGATACCTGCGGGATAAGACAGTGATGATTAT
CGTGGCCATTAGTCCCAAGTACAAGCAAGATGTGGAGGGCGCAGAATCAC
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加入IL-17A蛋白进行激活,同时加入阳性对照抗体Ixekizumab进行阻断实验的检测,并计算其EC50值,建立靶向IL-17A的候选抗体体外药效学评价细胞株。FACS结果发现:构建的IL-17A受体过表达细胞株可以和IL-17A结合,阳性率大于90%。见图3。
采用IL-17A重组蛋白激活293F-IL-17RA-IL-17Rc-ACT1-NFκB-Luc,结果如图4所示:IL17A重组蛋白可有效激活293F-IL-17RA-IL-17Rc-ACT1-NFκB-Luc报告基因细胞株中荧光素酶表达。
将阳性对照抗体Ixekizumab与IL-17A重组蛋白一起加入293F-IL-17RA-IL-17Rc-ACT1-NFκB-Luc细胞,结果如图5所示:阳性对照抗体Ixekizumab可抑制IL17A蛋白与其膜受体结合,并抑制胞内NFκB的信号,呈现剂量效应。
(6)羊驼免疫
使用上述制备的重组抗原蛋白对羊驼(Alpaca)进行免疫,免疫间隔时间21天,最后一次免疫10天后,采集部分外周血,分离血清采用ELISA检测免疫效果。
(7)免疫效价的检测
1.采集5mL外周血,将收集有血液样本的离心管置于37℃培养箱内放置1小时;然后将血液样本转移至4℃过夜;
2.将收集有血液样本的离心管置于离心机中,5000rpm离心20min;分离上层血清,将血清转移至一个新的无菌离心管中,收集免疫血清。
3.使用无菌CBS(碳酸盐缓冲液)稀释IL-17A重组蛋白至终浓度为1μg/mL。取一块新的96孔酶标板,加入100μL/孔4℃包被过夜。
4.去掉抗原包被液,使用PBST(含0.05%的吐温20)洗涤5次。
5.加入200μL/孔的3% MPBS 37℃封闭2小时;
6.去掉封闭缓冲液后,使用PBST洗涤孔板5次;
7.加入100μL梯度稀释的血清(100μL/孔),室温孵育1小时,对照孔为PBS;
8.去掉孔内的液体,并使用PBST洗涤5次;
9.加入100μL HRP anti-Llama IgG(H+L)抗体(1:50000稀释),室温孵育1小时;
10.去掉孔内的液体后,使用PBST洗涤孔板5次;
11.加入100μL/孔TMB显色液;
12.室温避光孵育10-15分钟;
13.加入50μL/孔终止液;
14.使用酶标仪读取孔内的OD450值。
经6轮免疫,羊驼的免疫效价均达到要求(见下表2-表3)。
表2免疫效价检测结果
表3免疫效价检测结果
(8)PBMC分离及VHH抗体片段克隆
1.采集100mL外周血抗凝样品,使用淋巴细胞分离液分离PBMC细胞。
2.提取RNA,使用PrimeScriptTMII 1st Strand cDNA Synthesis Kit进行反转录,制备cDNA。
1)用于200μL PCR体系的反应混合液Mix1如下:
2)65℃保温5min后,冰上迅速冷却得变性后的反应液。
3)在上述PCR管中配制下列反应液
4)吹打混匀后,分装80μL/管,置于PCR仪中42℃、1小时,70℃热失活15分钟,最后将cDNA样品置于冰上或-20℃长期保存。
3.VHH片段的扩增
1)配置第一轮PCR反应体系(50μL/管)
配置好PCR反应体系后,按照如下程序设置PCR仪:
2)PCR产物的琼脂糖电泳
使用1%的琼脂糖进行电泳分析PCR产物,分离分子量大小为750bp左右的片段。使用胶回收试剂盒回收PCR产物,并用NanoDrop测定浓度。
3)配置二轮PCR反应体系(50μL/管)
配置好PCR反应体系后,按照如下程序设置PCR仪:
4)二轮PCR产物的琼脂糖电泳分析
使用1%的琼脂糖进行电泳分析PCR产物,分离分子量大小为400bp左右的VHH片段。使用胶回收试剂盒回收VHH PCR产物,并用NanoDrop测定浓度。
(9)单域抗体酵母展示库的构建
1.酵母展示载体pDisplay线性化,酶切体系如下:
1)使用SfiI酶切pDisplay载体,100μL/管分装,50℃酶切过夜;
2)使用1%的琼脂糖凝胶分离pDisplay载体片段,切取5000bp的载体片段进行胶回收,并用NanoDrop测定浓度。
3)将回收的pDisplay酶切产物每个1.5mL离心管分装200μL,加入1/10体积(20μL)3M醋酸钠,1μg/μL糖原(Glycogen),吹吸混匀,加入880μL无水乙醇,颠倒混匀,-80℃。
2.电转化构建酵母展示库
1)将-80℃冻存的酵母感受态菌株划线到YPD固体培养基平皿上,30℃活化3-5天;
2)接种单菌落酵母感受态到50mL YPD培养基,250rpm、30℃摇培1-2天;
3)制备酵母感受态菌株。将线性化载体片段和PCR产物混合后,加到电击杯中,电击;电击后的酵母感受态转染培养瓶中,220rpm,30℃摇培1h;
4)取20μL重悬液,用SDCAA稀释5000倍,吸取100μL,涂SDCAA平板,培养2-3天,计算库容,其余菌液继续培养24h;
5)保菌:将剩余菌液收集到50mL离心管中,3000g,离心5min,弃去上清,加入10mLSDCAA重悬,用50%甘油:重悬液=1:1混合,-80℃冻存。
(10)酵母展示库淘选
1)取SDCAA中培养的酵母加入含50mL SGCAA培养基的250mL摇瓶中,30℃,240rpm,摇床培养16h。
2)离心后,弃上清,用1mL 0.5%PBSA重悬,加到1.5mL离心管中,3000g,离心5min,弃上清。用0.5%PBSA再洗一次。
3)将与抗原孵育好的链霉亲和素磁珠,用0.5% PBSA洗两次(每次4℃旋转孵育5分钟),置于磁力架上,5min,弃去上清。
4)将酵母菌液加到结合了抗原的磁珠中,4℃旋转孵育60分钟,置于磁力架上,15min。
5)弃去酵母菌液留磁珠,用0.5% PBSA洗三次(每次4℃旋转孵育5分钟)。
6)将磁珠用1mL SDCAA培养基重悬,吸取0.5-5μL重悬液到100μL SDCAA培养基中涂板,将重悬液均分成两份,一份加500μL 50%甘油(-80℃保存);一份加到摇菌管中,补2mL SDCAA培养基,30℃,240rpm,培养16h。
7)将摇菌管中的菌液转到50mL SDCAA培养基中(250mL摇瓶),30℃,240rpm培养过夜。
测量菌液OD600值,根据OD600取一部分菌液离心,用SGCAA重悬,转到50mL SGCAA培养基中,使最终OD600值为1,30℃,240rpm培养过夜,剩余菌液用SDCAA:50%甘油=1:1重悬,-80℃冻存。
(11)酵母单克隆流式检测
分选后酵母菌液涂SDCAA平板,挑取单克隆培养,诱导表达48h后,与Biotin-抗原孵育,二抗使用PE-Streptavidin,孵育完成后进行流式检测。将与目标抗原结合的酵母克隆使用0.2% SDS(95℃孵育10min)裂解,离心,取菌液上清0.5μL作为模板用于PCR扩增送测(剩余菌液-20℃保存)。
(12)Overlap PCR产物的扩增,瞬时转染和检测
第一轮PCR:扩增CMV、VHH及FC:
1)配置PCR反应体系(50μL):
PCR反应程序如下:
2)取50μL PCR产物,加入1/10体积10×loading buffer,使用1%的琼脂糖进行电泳分析,CMV的条带大小为750bp左右,Fc的条带大小为1400bp左右,VHH的条带大小为500bp左右。
3)从胶上切除目的条带,并纯化PCR产物,并用NanoDrop测定浓度(如浓度过高,可稀释进行后续反应)。
第二轮PCR:Overlap Extension PCR连接CMV、VHH及FC
1)配置PCR反应体系:
PCR反应程序如下:
加入引物CMV-F及PGK-R各2uL,PCR反应程序如下:
4)使用TakaRa的DNA片段回收试剂盒纯化overlap PCR产物,并用NanoDrop测定浓度,至少需要10μgPCR产物。用于后续细胞转染验证。
5)转染步骤同真核表达载体的转染。
(13)候选单域抗体表达纯化
1)根据候选抗体的ELISA检测结果,挑选阳性克隆,将获得的VHH抗体序列分别进行基因合成,与human IgG1 Fc(氨基酸序列SEQ ID NO.9,基因序列SEQ ID NO.10)串联亚克隆至表达载体pcDNA3.4-hIgG1-Fc中。载体经测序验证无误后,使用Qiagen质粒大抽试剂盒制备去内毒素质粒备用。
2)从冰箱中取出LVTransm转染试剂及单链抗体表达载体,室温解冻后,用移液枪上下吹打完全混匀。取出PBS缓冲液,温热至室温。取2mL PBS至6孔板的一个孔,分别加入130μg抗体表达载体,移液枪上下吹打充分混匀后,加入400μL LVTransm,立即用移液器上下吹打混匀,室温下静置10分钟。
3)将上述DNA/LVTransm复合物加入到30mL 293F细胞中,轻轻晃动充分混匀。将细胞置于37℃、5% CO2培养箱,130rpm培养6-8小时后,加入50mL新鲜的293细胞培养基,将细胞重新放回培养箱中继续培养。
连续培养7天后,离心收集培养基上清,用0.45μm的滤膜过滤,滤液转至无菌离心管中,使用Protein A柱子纯化抗体。
(14)ELISA检测重组抗体与靶蛋白的结合
1)使用无菌CBS稀释重组蛋白至终浓度为2μg/mL。取一块新的96孔酶标板,加入100μL/孔4℃包被过夜。
2)去掉抗原包被液,使用PBST(含0.05%的吐温20)洗涤5次。
3)加入200μL/孔的3% MPBS 37℃封闭2小时;
4)去掉封闭缓冲液后,使用PBST洗涤孔板5次;
5)加入纯化后的单域抗体,起始浓度为10μg/mL,5倍梯度稀释7个点(100μL/孔),室温孵育1小时,对照孔为PBS;
6)去掉孔内的液体,并使用PBST洗涤5次;
7)加入100μL/孔HRP-Protein A抗体(1:50000稀释),室温孵育1小时;
8)去掉孔内的液体后,使用PBST洗涤孔板5次;
9)加入100μL/孔TMB显色液;
10)室温避光孵育10-15分钟;
11)加入50μL/孔终止液;
使用酶标仪读取孔内的OD450值。
(15)FACS检测IL17A与报告基因细胞株的结合
1)从液氮中复苏293F-IL-17RA-IL-17Rc-ACT1-NFκB-Luc细胞株,调整细胞状态至对数生长期;
2)将细胞分别分为若干份,每份细胞的数量为2×105个;
3)将IL17A-His蛋白与靶细胞孵育,充分混匀后,室温孵育1小时;
4)800×g室温离心3分钟,去掉含有抗体的上清,使用PBS洗涤细胞3次;
5)加入二抗APC-His(1:500稀释),充分混匀后,室温避光孵育30分钟;
6)800×g室温离心3分钟,去掉含有二抗的上清,使用PBS洗涤细胞3次;
使用500μL PBS重悬细胞,进行流式分析。
(16)单域抗体阻断功能实验
在96孔板中加入梯度稀释的检测抗体(阳性抗体:Ixekizumab;待检测抗体),按照10倍梯度稀释抗体,连续稀释10个梯度,终浓度依次为100μg/mL,10μg/mL,1μg/mL,0.1μg/mL,0.01μg/mL,0.001μg/mL,0.0001μg/mL,0.00001μg/mL,0.000001μg/mL,0.0000001μg/mL,0μg/mL,将稀释好的梯度浓度抗体取50μL加入96孔板中,每个梯度2个复孔。然后再向对应孔中,每孔加入50μL 0.4μg/mL的IL-17A蛋白(终浓度为0.1μg/mL)。混匀后,放置37℃培养箱中,孵育1小时。吸取培养至对数生长期的293F-IL-17RA-IL-17Rc-ACT1-NFκB-Luc细胞于96孔板中,每孔接种2×104个细胞。共培养18h后,每孔加入20μL Bright-GloTM检测试剂,使用Tecan M1000pro酶标仪检测孔内的荧光素酶活性数值。
(17)单域抗体表位检测(NTA)
1)使用ForteBio OCTET R2仪器测定抗体表位,NTA传感器(Sartorius,Cat#18-5101)固化IL-17A-His,固化高度为0.3nM左右。
2)缓冲液为PBST(PBS+0.02%tween20),先结合AB1抗体,平衡后结合AB2抗体。
3)亲和力检测:平衡60s,结合180s,解离180s,检测温度25℃。
使用ForteBio OCTET R2系统进行动力学表征分析。
(18)单域抗体表位检测(HIS1K)
1)使用ForteBio OCTET R2仪器测定抗体亲和力,HIS1K传感器(ProABiosensors)固化IL7A-His,固化浓度为5μg/mL。
2)缓冲液为PBST(PBS+0.02%tween20),候选抗体样品稀释至50,25,12.5,6.25,3.13,0nM。
3)亲和力检测:平衡60s,结合180s,解离180s,检测温度25℃。
4)使用ForteBio OCTET R2系统进行动力学表征分析。
(19)酵母展示库淘选和筛选过程
使用制备的重组IL-17A抗原,与链霉亲和素磁珠孵育,将酵母菌液加到结合了抗原的磁珠中,4℃旋转孵育60分钟对构建的酵母展示库使用链霉亲和素磁珠进行2轮磁分选。分选后酵母菌液涂SDCAA平板,挑取单克隆培养,诱导表达48h后进行流式分析。与Biotin-IL-17A-His孵育1h,二抗使用PE Streptavidin,孵育完成后进行流式检测。
根据流式检测结果,第二次磁分选后,酵母阳性率为37.9%,阳性克隆显著富集,将分选产物直接涂SDCAA平板,挑选单克隆进行流式检测。
(20)FACS筛选过程
分选后酵母菌液涂SDCAA平板,挑取单克隆培养,诱导表达48h后,与Biotin-抗原孵育,二抗使用PE-Streptavidin,孵育完成后进行流式检测。FACS检测IL17A靶点单克隆与靶点结合情况,对测序获得的候选单域抗体氨基酸序列进行比对,挑选CDR区域氨基酸序列不同的候选抗体构建真核表达载体。
(21)抗体序列鉴定过程
富集阳性克隆;挑选富集后的单克隆,进行Phage ELISA鉴定,并对克隆进行测序分析,获取候选单域抗体的核酸及氨基酸序列信息。随机挑取20个单克隆,进行测序分析,序列差异大,库多样性较好。针对候选的单域抗体CDR区域氨基酸序列信息,采用In silico方法对可能的翻译后修饰位点进行分析。
根据酵母单克隆流式检测结果,选择与IL-17A-His结合的阳性克隆提取基因组DNA,PCR获得抗体序列。根据PCR产物测序结果,挑选差异克隆进行overlap PCR扩增,在VHH的N端加上信号肽,C端加上IgG1-Fc,PCR产物瞬时转染HEK293细胞;取表达的抗体上清进行ELISA检测:100μL转染上清加入IL-17A重组抗体预包被的96孔板中孵育,采用HRP-ProteinA作为二抗进行ELISA检测,结果如表3所示:3-H11与IL-17A-His抗原结合,安排该差异克隆进行构建真核表达载体,见表4。
表4.候选克隆转染上清ELISA Binding实验结果
将构建的单域抗体表达载体瞬时转染293F细胞,采用Protein A亲和纯化重组抗体,并进行SDS-PAGE实验检测候选抗体的纯度。结果表明,候选抗体分子量大小和纯度均符合预期,可以进行下一步的实验。
筛选到抗IL-17纳米抗体3-H11在本发明中进行保护。
实施例1抗IL-17纳米抗体
参照现有技术的方法制备本发明的抗体。
1、纳米抗体的表达及纯化
本实施例针对的纳米抗体为表4中的3-H11,其氨基酸序列为SEQ ID NO.8。
1)根据候选抗体的ELISA检测结果,挑选阳性克隆,将获得的VHH抗体序列分别进行基因合成(SEQ ID NO.11),与人IgG1 Fc段基因序列(SEQ ID NO.10)串联亚克隆至表达载体中。载体经测序验证无误后,使用Qiagen质粒大抽试剂盒(CAT#:DP117)制备去内毒素质粒(单链抗体表达载体)备用。
2)从冰箱中取出LVTransm转染试剂及单链抗体表达载体,室温解冻后,用移液枪上下吹打完全混匀。取出PBS缓冲液,温热至室温。取2mL PBS至6孔板的一个孔,分别加入130μg抗体表达载体,移液枪上下吹打充分混匀后,加入400μL LVTransm,立即用移液器上下吹打混匀,室温下静置10分钟得DNA/LVTransm复合物。
3)将上述DNA/LVTransm复合物加入到30mL 293F细胞中,轻轻晃动充分混匀。将细胞置于37℃、5% CO2培养箱,130rpm培养6-8小时后,加入50mL新鲜的293细胞培养基,将细胞重新放回培养箱中继续培养。
连续培养7天后,离心收集培养基上清,用0.45μm的滤膜过滤,滤液转至无菌离心管中,使用Protein A柱子纯化抗体得纯化后的单域抗体3-H11,凝胶电泳结果见图6。
Protein A纯化抗体的步骤如下所示:
1)将含有目标抗体的样品加入EP管中,轻轻倒置试管混合。
2)将EP管在室温下混合或在旋转器上孵育,(1-4小时或过夜),可添加100mM PMSF以防止蛋白质降解。
3)使用磁分离架收集磁珠并弃去上清液。如有必要,保留上清液进行分析。
4)向EP管中加入1mL结合/洗涤缓冲液并充分混匀,使用磁力架收集磁珠并弃去上清液,重复洗涤步骤三遍。
5)向EP管中加入500μL洗脱缓冲液,用移液器吹打或者涡旋震荡下迅速重悬,然后在室温下(约25℃)置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转EP管孵育5分钟。
6)使用磁分离架收集磁珠,将含有洗脱抗体的上清液转移到干净的EP管中。
7)重复步骤1)和2)两次。
8)向每500μL洗脱液中加入1/10的中和缓冲液以中和pH,以利于维持抗体的生物活性,避免抗体失活。如果需要,可以通过透析或脱盐进行缓冲液交换。
9)结合/洗涤缓冲液:1×PBS,pH 7.0。
洗脱缓冲液:(1)0.1M甘氨酸,pH 2-3;(2)0.1M NaAc-HAc,pH 3.6。
中和缓冲液:1M Tris,pH 8.5。
磁珠再生缓冲液:0.1M NaOH。
2、ELISA检测重组抗体与靶蛋白的结合
(1)实验过程
采用纯化后的单域抗体(2ug/mL)包被酶标板,加入Biotin-IL-17A-His,起始浓度为10ug/mL,5倍梯度稀释7个点,采用HRP-Streptavdin进行ELISA检测,各浓度测得的OD450值绘制曲线读取EC50值。结果表明,3-H11与人IL-17A蛋白有较好的结合活性,EC50为1.224μg/mL(图7),对照抗体Ixekizumab的EC50值为10.06μg/mL(图8)。
3、单域抗体阻断功能实验
使用293F-IL-17RA-IL-17Rc-ACT1-NFκB-Luc报告基因细胞株进行IL-17A候选抗体阻断活性检测。单域抗体3-H11结果如图9所示:Ixekizumab阳性对照可以阻断Human IL-17A蛋白激活293F-IL-17RA-IL-17Rc-ACT1-NFκB-Luc。待检测抗体中IL-17A单域抗体3-H11能够阻断Human IL-17A蛋白激活293F-IL-17RA-IL-17Rc-ACT1-NFκB-Luc但阻断效果均弱于阳性抗体(图5)。分析可能是单域抗体分子量较小导致阻断效果偏弱,根据前期项目经验,将单域抗体构建为二价抗体可以增强阻断活性。
4、稳定性实验过程及结果分析:
(1)实验过程
通过微量差示扫描荧光技术(nanoDSF)技术检测荧光变化,可在天然条件下检测蛋白热变性和化学变性,精确地确定蛋白50%处于去折叠状态时的温度(Tm)以及开始出现聚集时的温度(Tagg);热变性Tm值和Tagg越高说明抗体蛋白越稳定。
取100μL待测抗体以及Ixekizumab(样本浓度大于200μg/mL),4℃,12000×g,离心10min后,用毛细管吸取样品,每个样品准备两根毛细管,作为平行对照,按顺序放入对应的卡槽中,确保毛细管吸满样品,无气泡,进行检测分析。
Ixekizumab结果见图10,3-H11结果见图11。结果表明,相对于对照抗体,3-H11的稳定性更好。
Ixekizumab结果:Tm1值为56.10±0.02℃;Tm2值为79.84±0.13℃;Tonset值为47.50±0.08℃;Tagg值为61.86±0.23℃;串联抗体的结果:Tm1值为62.51±0.01℃;Tm2值为81.56±0.10℃;Tonset值为56.13±0.04℃;Tagg值为80.16±0.16℃。
实施例2一种抗体制剂
本实施例提供包括实施例1制备的单域抗体3-H11的抗体制剂。
所述的制剂的辅料中包括:
缓冲液选自:醋酸缓冲液、组氨酸缓冲液磷酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、碳酸缓冲液或Tris;缓冲液的浓度为3-60mM。
稳定剂选自:精氨酸盐、氯化钠、甘露醇、山梨醇、蔗糖、甘氨酸和海藻糖;稳定剂的浓度为50-400mM。如选择蔗糖和精氨酸盐酸盐的组合,其中,蔗糖的浓度为50-200mM,精氨酸盐酸盐的浓度为10-100mM。
表面活性剂选自:聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20和泊洛沙姆188。
实施例3一种试剂盒
本实施例提供一种用于体外检测IL-17A的试剂盒。
所述的试剂盒为竞争法ELISA试剂盒,包括胶体金试剂条、样品稀释液。
胶体金试剂条中包括:样品垫、金标垫、层析膜、吸水纸。
金标垫上包被有胶体金标记的实施例1制备的单域抗体3-H11;
层析膜上上设置检测线和质控线,检测线上包被胶体金标记的IL-17A抗原;质控线包被3-H11验证抗体。
使用时取样品稀释液对样品进行稀释后,滴在样品垫上,当样品含一定量IL-17A,其与胶体金标记的抗体反应后,检测线不显示颜色,当样品中不含IL-17A,胶体金标记抗体与检测限上的包被抗原反应,显示颜色,从而达到检测目的。
实施例4一种抗体偶联物
本实施例提供实施例1制备的单域抗体3-H11的抗体偶联物。
制备方法如下:
(1)单域抗体3-H11或其抗原结合片段与还原剂在缓冲液中反应;
(2)将接头-有效载荷与步骤(1)中得到的具有巯基的抗体或其抗原结合片段反应;
还原剂与抗体或其抗原结合片段的物质的量比为1:1-5:1;优选为1:1-4:1;进一步优选为1:1-3:1;更进一步优选为2:1-3:1。
所述的还原剂选自三(2-羧基乙基)膦(TCEP)或其盐、二硫苏糖醇或2-巯基乙醇。在一些实施方案中所述还原剂为三(2-羧基乙基)膦或其盐,优选为三(2-羧基乙基)膦盐酸盐(TCEP·HCl)。
所述的缓冲液选自HEPES(4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸)缓冲液、组氨酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液或乙酸盐缓冲液;优选为为组氨酸缓冲液;进一步优选为组氨酸-盐酸缓冲液;所述缓冲液的浓度为1mM-30mM,如5mM、10mM、15mM、20mM、25mM或30mM,优选为20mM。
所述的接头-有效载荷与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为2:1-10:1;优选地,所述的接头-有效载荷与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为3:1-9:1;进一步优选地,所述的接头-有效载荷与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为4:1-7:1;更一步优选地,所述的接头-有效载荷与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为5:1-7:1。
用于溶解接头-有效载荷的溶剂可以选自丙酮水溶液(例如50%丙酮水溶液)、乙醇水溶液(例如80%乙醇水溶液)、甲醇水溶液(例如80%甲醇水溶液)、异丙醇水溶液(例如80%异丙醇水溶液)、二甲亚砜水溶液(例如80%二甲亚砜水溶液)、丙酮、二甲亚砜(DMSO)、二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基乙酰胺(DMA)或N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP);优选为丙酮水溶液或DMSO水溶液,优选为50%丙酮水溶液。
实施例5一种用于治疗肿瘤的药物组合物
本实施例提供包括实施例制备的单域抗体3-H11的药物组合物。
所述的药物组合物中还包括选自以下药物中的任一或多:
氮芥、环磷酰胺、异环磷酰胺、苯丙氨酸氮芥、苯丁酸氮芥、噻替哌、卡莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀、白消安、甲氨蝶呤、硫鸟嘌呤、氟尿嘧啶、卡培他滨、脱氧氟尿苷、优福啶、放线菌素D、丝裂霉素、博来霉素、平阳霉素、阿霉素、表阿霉素、吡喃阿霉素、光辉霉素、米托蒽醌、长春新碱、长春地辛、长春瑞滨、依托泊苷、替尼泊甙、羟基喜树碱、拓扑替康、紫杉醇、达卡巴嗪、顺铂、卡铂、奥沙利铂、奈达铂、厄洛替尼、西妥昔单抗、贝伐珠单抗、安罗替尼、曲妥珠单抗、帕博利珠单抗、卡妥珠单抗、伊马替尼、度伐利尤单抗、信迪利单抗、卡瑞利珠单抗、特瑞普利单抗。
所述的药物组合物可以是抗体组合:如单域抗体3-H11与帕博利珠单抗在一定用量比(如1:1)条件下治疗癌症。
所述的药物组合物也可以是不同类型的药物组合:如单域抗体3-H11与顺铂联合治疗癌症。
需要说明的是,以上实施例仅用于说明本发明的技术方案,而不限制本发明的保护范围,本领域技术人员在本发明提供的技术方案基础上,进行的简单手段的替代和改进都应当属于本发明保护的范围。
Claims (31)
1.一种抗体,包括HCDR1、HCDR2和HCDR3,其特征在于,所述的HCDR1、HCDR2和HCDR3具有:
(i)如SEQ ID NO.1-3所示的氨基酸序列;和/或;
(ii)与SEQ ID NO.1-3所示的氨基酸序列具有80%以上一致性的氨基酸序列;
SEQ ID NO.1为GEFSIHYA;SEQ ID NO.2为ITRGGVA;SEQ ID NO.3为NAGTNGPGY。
2.根据权利要求1所述的抗体,其特征在于,所述抗体的氨基酸序列包含:通过在SEQID NO.1-3所示的氨基酸序列上进行添加、缺失、修饰和/或取代中的至少一种方式所得到的氨基酸序列。
3.根据权利要求2所述的抗体,其特征在于,所述的添加、缺失、修饰和/或取代包括1、2、3、4、5、6、7、8或9个氨基酸差异。
4.一种抗体,其特征在于,氨基酸序列包括:
(ⅰ)氨基酸序列如SEQ ID NO.4-7所示的FR1、FR2、FR3和FR4;和/或;
(ⅱ)与SEQ ID NO.4-7所示的氨基酸序列具有至少80%序列一致性的氨基酸序列;
SEQ ID NO.4:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS;
SEQ ID NO.5:MGWYRQAPGKQRELVAT;
SEQ ID NO.6:NYADSVKGRFTISRDNAKNTAYLQMNSLKPEDTAVYYC;
SEQ ID NO.7:WGQGTQVTVAS。
5.根据权利要求4所述的抗体,其特征在于,所述抗体的氨基酸序列包含:通过在SEQID NO.4-7所示的氨基酸序列上进行添加、缺失、修饰和/或取代中的至少一种方式所得到的氨基酸序列。
6.根据权利5所述的抗体,其特征在于,所述抗体的氨基酸序列包含:与SEQ ID NO.1-3所示的氨基酸序列相比具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37或38个氨基酸差异的氨基酸序列。
7.一种抗体,其特征在于,所述的抗体的氨基酸序列包含:
(i)权利要求1-3任意一项所述的抗体的氨基酸序列;和
(ii)权利要求4-7任意一项所述的抗体的氨基酸序列。
8.一种抗体,其特征在于,氨基酸序列包含:
FR1-HCDR1-FR2-HCDR2-FR3-HCDR3-FR4;
其中HCDR1、HCDR2、HCDR3选自以下:
(1)如SEQ ID NO.1-3所示的氨基酸序列;或
(2)与(1)相比具有1、2、3、4或5个的氨基酸差异的氨基酸序列的功能活性变体;
FR1、FR2、FR3、FR4选自以下:
1)如SEQ ID NO.4-7所示的氨基酸序列;或
2)与1)具有80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的氨基酸序列的功能活性变体。
9.根据权利要求8所述的抗体,其特征在于,所述HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示,所述HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示,所述HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
10.根据权利要求8或9所述的抗体,其特征在于,所述FR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示,所述FR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示,所述FR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示,所述FR4的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。
11.根据权利要求10所述的抗体,其特征在于,所述的抗体的氨基酸序列如SEQ IDNO.8所示。
12.根据权利要求1-11任意一项所述的抗体,其特征在于,所述的抗体为单域抗体。
13.根据权利要求1-12任意一项所述的抗体,其特征在于,所述的抗体为抗IL-17A抗体。
14.根据权利要求1-14任意一项所述的抗体,其特征在于,包含部分或全部选自人源、鼠源、灵长目动物源或骆驼科动物源的抗体重链框架区或其变体;
优选地,包含部分或全部选自骆驼科动物源的抗体重链框架区或其变体;
更优选地,包含部分或全部选自羊驼源的抗体重链框架区或其变体。
15.一种多克隆抗体,其特征在于,包含权利要求1-14所述的抗体。
16.一种重组蛋白,其特征在于,包含权利要求1-14所述的抗体。
17.根据权利要求16所述的重组蛋白,其特征在于,还包括协助其表达和/或分泌和/或延长其在体内半衰期的生物活性蛋白或功能片段;
优选地,所述生物活性蛋白或功能片段选自免疫球蛋白Fc结构域、血清白蛋白、白蛋白结合多肽、前白蛋白、羧基末端肽、弹性蛋白样多肽、His标签、GST标签、MBP标签、FLAG标签和SUMO标签中的至少一种。
18.根据权利要求17所述的重组蛋白,其特征在于,所述生物活性蛋白或功能片段为人免疫球蛋白Fc结构域,优选为人IgG的Fc结构域,包括人IgG1、IgG2、IgG3、IgG4的Fc结构域,更优选为人IgG1的Fc结构域。
19.一种抗体制剂,其特征在于,包括:
(Ⅰ)权利要求1-14任一项所述的抗体;和;
(Ⅱ)药学上可接受的载剂。
20.一种试剂盒,其特征在于,包括:
(Ⅰ)权利要求1-14任一项所述的抗体、权利要求15所述的多克隆抗体、权利要求16-18任一项所述的重组蛋白或权利要求19所述的抗体制剂;和;
(Ⅱ)任选地,还包括装载容器。
21.一种抗体药物偶联物,其特征在于,包括:
1)权利要求1-14任一项所述的抗体、权利要求15所述的多克隆抗体或权利要求16-18任一项所述的重组蛋白;和;
2)与1)结合的偶联部分。
22.一种分离的核酸分子,其特征在于,所述核酸分子编码权利要求1-14任一项所述的抗体、权利要求15所述的多克隆抗体或权利要求16-18任一项所述的重组蛋白。
23.包含权利要求22所述的核酸分子的表达载体。
24.一种宿主细胞,其特征在于,所述的宿主细胞的基因组整合有权利要求22所述的核酸分子;或;包含权利要求23所述的表达载体。
25.一种药物组合物,其特征在于,包含:
权利要求1-14任一项所述的抗体、权利要求15所述的多克隆抗体、权利要求16-18任一项所述的重组蛋白、权利要求19所述的抗体制剂、权利要求21所述的抗体药物偶联物、权利要求22所述的核酸分子、权利要求23所述的表达载体或权利要求24所述的宿主细胞;和;
任选地,所述药物组合物还包括至少一种药学上可接受的辅料。
26.权利要求1-14任一项所述的抗体、权利要求15所述的多克隆抗体、权利要求16-18任一项所述的重组蛋白、权利要求19所述的抗体制剂、权利要求20所述的试剂盒、权利要求21所述的抗体药物偶联物、权利要求22所述的核酸分子、权利要求23所述的表达载体、权利要求24所述的宿主细胞的用途,其特征在于,所述用途选自以下至少一种:
ⅰ)制备检测试剂或试剂盒;
ⅱ)制备预防和/或治疗自身免疫性疾病的药物;
ⅲ)制备预防和/或治疗癌症的药物。
27.根据权利要求26所述的用途,其特征在于,所述自身免疫性疾病包括白塞氏病、系统性红斑狼疮、慢性盘状红斑狼疮、多发性硬化症、系统性硬皮病、进行性系统性硬化症、硬皮病、多发性肌炎、皮肌炎、结节性动脉周围炎、主动脉炎综合征、恶性类风湿关节炎、类风湿关节炎、幼年特发性关节炎、脊椎关节炎、混合性结缔组织病、卡斯尔曼病、干燥综合征、成人斯蒂尔病、血管炎、过敏性肉芽肿性血管炎、过敏性血管炎、类风湿性血管炎、大血管血管炎、ANCA相关性血管炎、Cogan综合征、RS3PE综合征、颞动脉炎、风湿性多肌痛、纤维肌痛、抗磷脂抗体综合征、嗜酸性筋膜炎、IgG4相关疾病、格林巴利综合征、重症肌无力、慢性萎缩性胃炎、自身免疫性肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、Good-pasture综合征、急进性肾小球肾炎、狼疮性肾炎、巨幼红细胞性贫血、自身免疫性溶血性贫血、恶性贫血、自身免疫性中性粒细胞减少症、特发性血小板减少性紫癜、巴塞杜病、桥本病、自身免疫性肾上腺皮质功能减退症、原发性甲状腺功能减退症、艾迪生病、特发性艾迪生病、I型糖尿病、缓慢进展型I型糖尿病、局灶性硬皮病、银屑病、银屑病关节炎、大疱性类天疱疮、天疱疮、类天疱疮、妊娠疱疹、线性IgA大疱性皮肤病、获得性大疱性表皮松解症、斑秃、白斑病、寻常型白斑病、视神经脊髓炎、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病、多灶性运动神经病、结节病、巨细胞动脉炎、肌萎缩侧索硬化、原田病、自身免疫性视神经病、特发性无精子症、习惯性流产、炎症性肠病、乳糜泻、强直性脊柱炎、严重哮喘、慢性荨麻疹移植免疫、家族性地中海热、嗜酸性粒细胞慢性鼻窦炎、扩张型心肌病、系统性肥大细胞增多症或包涵体肌炎。
28.根据权利要求26所述的用途,其特征在于,所述癌症包括基底细胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、乳腺癌、腹膜癌、宫颈癌、胆管癌、绒毛膜癌、结直肠癌、结缔组织癌、消化系统癌症、子宫内膜癌、食道癌、眼癌、头颈癌、胃癌、胶质母细胞瘤、肝癌、肾癌、喉癌、白血病、肝癌、肺癌、淋巴瘤、黑色素瘤、骨髓瘤、神经母细胞瘤、口腔癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、直肠癌、呼吸系统癌、唾液腺癌、肉瘤、皮肤癌、鳞状细胞癌、睾丸癌、甲状腺癌、子宫癌、泌尿系统癌症、B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、毛细胞白血病或慢性成髓细胞性白血病。
29.一种用于非诊断目的的体外检测样品中的IL-17A的方法,其特征在于,包括以下步骤:
Ⅰ)将权利要求1-14任一项所述的抗体、权利要求15所述的多克隆抗体、权利要求16-18任一项所述的重组蛋白、权利要求19所述的抗体制剂或权利要求21所述的抗体药物偶联物与待测样品相接触;
Ⅱ)检测抗原-抗体复合物;
Ⅲ)判读结果。
30.一种预防和/或治疗自身免疫性疾病的方法,其特征在于,包括:
向有需要的受试者施用治疗有效量的权利要求1-14任一项所述的抗体、权利要求15所述的多克隆抗体、权利要求16-18任一项所述的重组蛋白、权利要求19所述的抗体制剂、权利要求21所述的抗体药物偶联物、权利要求22所述的核酸分子、权利要求23所述的表达载体、权利要求24所述的宿主细胞或权利要求25所述的药物组合物。
31.一种预防和/或治疗癌症的方法,其特征在于,包括:
向有需要的受试者施用治疗有效量的权利要求1-14任一项所述的抗体、权利要求15所述的多克隆抗体、权利要求16-18任一项所述的重组蛋白、权利要求19所述的抗体制剂、权利要求21所述的抗体药物偶联物、权利要求22所述的核酸分子、权利要求23所述的表达载体、权利要求24所述的宿主细胞或权利要求25所述的药物组合物。
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Citations (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20070249533A1 (en) * | 2005-09-28 | 2007-10-25 | Levin Steven D | Il-17a and il-17f antagonists and methods of using the same |
CN101563098A (zh) * | 2006-11-29 | 2009-10-21 | 健泰科生物技术公司 | Il-17a/f异二聚体多肽及其治疗用途 |
CN103717618A (zh) * | 2011-05-05 | 2014-04-09 | 默克专利股份有限公司 | 抗il-17a,il-17f和/或il17-a/f的氨基酸序列以及包含其的多肽 |
WO2014161570A1 (en) * | 2013-04-03 | 2014-10-09 | Roche Glycart Ag | Antibodies against human il17 and uses thereof |
US20150005534A1 (en) * | 2012-02-06 | 2015-01-01 | The Research Foundation Of The City University Of New York | Cells and methods for producing lutein |
US20170066843A1 (en) * | 2014-09-26 | 2017-03-09 | Closed Joint Stock Company "Biocad" | High affinity and aggregatively stable antibodies on the basis of variable domains vl and a derivative vhh |
US20200199216A1 (en) * | 2017-06-18 | 2020-06-25 | Kindred Biosciences, Inc. | IL17A Antibodies and Antagonists for Veterinary Use |
CN113040133A (zh) * | 2021-03-22 | 2021-06-29 | 北京贝来药业有限公司 | 作为干细胞来源的脐带/胎盘组织采集试剂盒及方法 |
CN114286827A (zh) * | 2019-07-26 | 2022-04-05 | 神州细胞工程有限公司 | 人源化抗il17a抗体及其应用 |
CN117642423A (zh) * | 2021-09-13 | 2024-03-01 | 深圳华普药物研发有限公司 | 一种il17抗体及其制备方法和应用 |
-
2024
- 2024-03-05 CN CN202410247208.7A patent/CN118206654B/zh active Active
Patent Citations (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20070249533A1 (en) * | 2005-09-28 | 2007-10-25 | Levin Steven D | Il-17a and il-17f antagonists and methods of using the same |
CN101563098A (zh) * | 2006-11-29 | 2009-10-21 | 健泰科生物技术公司 | Il-17a/f异二聚体多肽及其治疗用途 |
CN103717618A (zh) * | 2011-05-05 | 2014-04-09 | 默克专利股份有限公司 | 抗il-17a,il-17f和/或il17-a/f的氨基酸序列以及包含其的多肽 |
US20150005534A1 (en) * | 2012-02-06 | 2015-01-01 | The Research Foundation Of The City University Of New York | Cells and methods for producing lutein |
WO2014161570A1 (en) * | 2013-04-03 | 2014-10-09 | Roche Glycart Ag | Antibodies against human il17 and uses thereof |
US20170066843A1 (en) * | 2014-09-26 | 2017-03-09 | Closed Joint Stock Company "Biocad" | High affinity and aggregatively stable antibodies on the basis of variable domains vl and a derivative vhh |
US20200199216A1 (en) * | 2017-06-18 | 2020-06-25 | Kindred Biosciences, Inc. | IL17A Antibodies and Antagonists for Veterinary Use |
CN114286827A (zh) * | 2019-07-26 | 2022-04-05 | 神州细胞工程有限公司 | 人源化抗il17a抗体及其应用 |
CN113040133A (zh) * | 2021-03-22 | 2021-06-29 | 北京贝来药业有限公司 | 作为干细胞来源的脐带/胎盘组织采集试剂盒及方法 |
CN117642423A (zh) * | 2021-09-13 | 2024-03-01 | 深圳华普药物研发有限公司 | 一种il17抗体及其制备方法和应用 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
GENBANK: "MDF7807179.1: hypothetical protein P4E94_07005 [Pontiellaceae bacterium B12219]", 《GENBANK》, 27 March 2023 (2023-03-27) * |
ROBERT MABRY等: "Engineering of stable bispecific antibodies targeting IL-17A and IL-23", 《PROTEIN ENGINEERING, DESIGN & SELECTION》, vol. 23, no. 03, 18 December 2009 (2009-12-18), pages 115 - 127 * |
房世娣、毛晓燕: "双特异性抗体的结构及应用研究进展", 《微生物学免疫学进展》, vol. 46, no. 02, 20 March 2018 (2018-03-20), pages 72 - 78 * |
王旭、黄舒柠、雷玲: "抗IL-17A单克隆抗体对系统性硬化病小鼠纤维化病变的抑制作用及其机制", 《山东医药》, vol. 56, no. 48, 30 December 2016 (2016-12-30), pages 38 - 41 * |
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Publication number | Publication date |
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