CN118206642A - 一株痘病毒人源中和抗体或其抗原结合片段及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一株痘病毒人源中和抗体或其抗原结合片段及其应用,其包含重链可变区和轻链可变区,其中,所述重链可变区的氨基酸序列包括分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的CDR1H、CDR2H和CDR3H;所述轻链可变区的氨基酸序列包括分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的CDR1L、CDR2L和CDR3L。本发明的中和抗体MV92能够结合MPXV的A35和VACV的A33R抗原,对MPXV真病毒也具有较好的中和活性。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药领域,具体涉及一株痘病毒人源中和抗体或其抗原结合片段及其应用,更具体地,涉及一种与猴痘病毒的A35蛋白和/或牛痘病毒的A33R蛋白结合的人源中和抗体或其抗原结合片段、多核苷酸、核酸构建体、表达载体、转化的细胞、药物组合物,以及它们在制备预防或治疗或检测或诊断痘病毒感染或因感染痘病毒引起的并发症的药物中的应用。
背景技术
猴痘是一种病毒性人畜共患病,目前全球超过100个国家报告了超十万例猴痘确诊病例。猴痘病毒(Monkeypox virus,MPXV)首次发现在非洲中部和西部地区的热带雨林,可通过受感染的皮肤、体液或呼吸道飞沫传播。MPXV由两个不同的谱系组成,即西非株和刚果株,其中刚果株可引起更严重的疾病。MPXV感染会直接损害免疫器官,如脾脏、扁桃体、淋巴结和胸腺,导致淋巴细胞减少。感染后症状包括发烧、头痛、肌肉酸痛、疲劳等。免疫功能低下的个体,包括儿童、老年人和免疫缺陷患者(如HIV患者和使用免疫抑制药物的个体),更容易出现这些严重的表现。此外,免疫功能低下的个体更有可能促进MPXV的进化,使其越来越适应人类宿主并导致广泛传播。
在MPXV感染的早期阶段,存在两种不同的传染性病毒颗粒:细胞外包膜病毒粒子(EEV)和细胞内成熟病毒粒子(IMV)。这些病毒颗粒的表面糖蛋白和包膜组成各不相同,IMV是单膜结构,EEV是双膜结构。IMV仅在细胞裂解时释放,并通过直接融合和内吞作用进入宿主细胞,而EEV则通过膜融合进入。IMV是数量最丰富的病毒颗粒,由于没有脂质膜,这使它们具有更简单、更坚固的结构延长了它们在宿主外的生存时间。然而,IMV暴露的表面蛋白会触发更高的中和抗体产生,并激活补体反应。此外,这些暴露的表面蛋白增强了免疫细胞对MPXV的识别。
使用有效的治疗药物可以大大降低病毒感染引起的疾病严重程度和死亡率,缩短病程,缓解患者疼痛。研究表明,既往接种天花疫苗可能对MPXV感染猴痘病毒具有保护作用,并可能减轻感染时的临床症状。然而,迄今为止,针对MPXV感染的治疗药物很少被开发出来。在病原体感染过程中,特异性中和抗体可以阻止病原体与宿主细胞表面受体相互结合,从而阻止使病原体感染靶细胞。两种MPXV表面分别至少有25和6种表面蛋白。其中,位于IMV表面的H3L和位于EEV表面的A35R蛋白,在以往基于痘苗病毒同源物的研究中,被认为是中和抗体的主要靶标。因此,筛选一种可以用于预防和治疗MPXV感染的人源化中和抗体迫在眉睫。
发明内容
发明目的
本发明的目的在于提供一株痘病毒人源中和抗体或其抗原结合片段及其应用,更具体地,涉及一种与猴痘病毒的A35蛋白和/或牛痘病毒的A33R蛋白结合的人源中和抗体或其抗原结合片段、多核苷酸、核酸构建体、表达载体、转化的细胞、药物组合物,以及它们在制备预防或治疗或检测或诊断痘病毒感染或因感染痘病毒引起的并发症的药物中的应用。本发明的人源中和抗体能有效中和包括猴痘病毒和牛痘病毒,可以满足我国猴痘感染治疗的药品需求,为科学应对猴痘提供重要工具。
解决方案
为实现上述目的,本发明提供了如下技术方案:
第一方面,本发明提供了一种与猴痘病毒的A35蛋白和/或牛痘病毒的A33R蛋白结合的人源中和抗体或其抗原结合片段,其包含重链可变区和轻链可变区,其中,
所述重链可变区的氨基酸序列包括分别如SEQ ID NO:1(即,GYTFTNY)、SEQ IDNO:2(即,NAYNGN)和SEQ ID NO:3(即,CARDTNHAIFGVVTPVDYW)所示的CDR1H、CDR2H和CDR3H;或与SEQ ID NO:1(即,GYTFTNY)、SEQ ID NO:2(即,NAYNGN)和SEQ ID NO:3(即,CARDTNHAIFGVVTPVDYW)所示氨基酸序列分别具有1、2或3个氨基酸差异的CDR1H、CDR2H和CDR3H;
所述轻链可变区的氨基酸序列包括分别如SEQ ID NO:4(即,RASQSVSSSYLA)、SEQID NO:5(即,GASSRAT)和SEQ ID NO:6(即,CQQYGRSPMYTF)所示的CDR1L、CDR2L和CDR3L;或与SEQ ID NO:4(即,RASQSVSSSYLA)、SEQ ID NO:5(即,GASSRAT)和SEQ ID NO:6(即,CQQYGRSPMYTF)所示氨基酸序列分别具有1、2或3个氨基酸差异的CDR1L、CDR2L和CDR3L。
本发明的人源中和抗体或其抗原结合片段主要针对猴痘病毒,对其它的正痘病毒(例如牛痘病毒)可能也具有中和活性。
在一些实施方式中,所述重链可变区还包括4个框架区HFR1~4,所述HFR1~4与所述CDR1H、CDR2H和CDR3H按顺序交错排列;
和/或,所述轻链可变区还包括4个框架区LFR1~4,所述LFR1~4与所述CDR1L、CDR2L和CDR3L按顺序交错排列。
在一些实施方式中,所述重链可变区包含如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列,或与SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列具有至少95%,96%,97%,98%或99%序列同一性且与其具有相同或基本相同的免疫原性的氨基酸序列;SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列如下:
其中,下划线部分分别为框架区HFR1~4,标黑部分分别为重链可变区的CDR1H、CDR2H和CDR3H。
在一些实施方式中,所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列,或与SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列具有至少95%,96%,97%,98%或99%序列同一性且与其具有相同或基本相同的免疫原性的氨基酸序列,SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列如下:
其中,下划线部分分别为框架区LFR1~4,标黑部分分别为重链可变区的CDR1L、CDR2L和CDR3L。
在一些实施方式中,所述的人源中和抗体或其抗原结合片段,其中所述抗原结合片段选自Fab、Fab'、Fab'-SH、Fv、scFv、F(ab')2、双抗体。
第二方面,提供一种多核苷酸,其编码所述的与猴痘病毒的A35蛋白和/或牛痘病毒的A33R蛋白结合的人源中和抗体或其抗原结合片段。
进一步地,所述多核苷酸为DNA或mRNA。
进一步地,所述多核苷酸具有如SEQ ID NO:9和/或SEQ ID NO:10的核苷酸序列。
SEQ ID NO:9所示的核苷酸序列对应编码SEQ ID NO:7的氨基酸序列,SEQ ID NO:9所示的核苷酸序列如下:
CAGGTTCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTACACCTTTACCAACTATGGTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAACGCTTACAATGGTAACACAAACTATGCACAGAAGCTCCAGGGCAGAGTCACCATGACCACAGACACATCCACGAGTACAGCCTACATGGAGCTGAGGAGCCTGAGATCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATACCAATCATGCGATTTTTGGAGTGGTTACTCCCGTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
SEQ ID NO:10所示的核苷酸序列对应编码SEQ ID NO:8的氨基酸序列,SEQ IDNO:10所示的核苷酸序列如下:
GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAA
GAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTG
GTACCAACAGAAACCTGGCCAGCCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCA
GGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCAC
TCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGT
ATGGTCGCTCACCCATGTACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA
第三方面,本发明提供一种核酸构建体,其包含第二方面所述的多核苷酸。
进一步优选地,所述多核苷酸还包含与所述多核苷酸可操作地连接的至少一个表达调控元件。例如组氨酸标签、终止密码子等。
第四方面,本发明提供一种表达载体,其包含所述的核酸构建体。
第五方面,本发明提供了一种转化的细胞,其包括如上述第二方面所述的多核苷酸、如上述第三方面所述的核酸构建体或如上述第四方面所述的表达载体。可选地,为真核表达载体。
第六方面,本发明提供了一种药物组合物,其包含如上述第一方面所述的与猴痘病毒的A35蛋白和/或牛痘病毒的A33R蛋白结合的人源中和抗体或其抗原结合片段、如上述第二方面所述的多核苷酸、如上述第三方面所述的核酸构建体、如上述第四方面所述的表达载体或如上述第五方面所述的转化的细胞,以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。
进一步优选地,所述药物组合物为鼻喷剂、口服制剂、栓剂或胃肠外制剂的形式。
进一步优选地,所述鼻喷剂选自气雾剂、喷雾剂和粉雾剂。
进一步优选地,所述口服制剂选自片剂、粉末剂、丸剂、散剂、颗粒剂、细粒剂、软/硬胶囊剂、薄膜包衣剂、小丸剂、舌下片和膏剂。
进一步优选地,所述胃肠外制剂为经皮剂、软膏剂、硬膏剂、外用液剂、可注射或可推注制剂。
第七方面,本发明提供了一种如上述第一方面所述的与猴痘病毒的A35蛋白和/或牛痘病毒的A33R蛋白结合的人源中和抗体或其抗原结合片段、如上述第二方面所述的多核苷酸、如上述第三方面所述的核酸构建体、如上述第四方面所述的表达载体或如上述第五方面所述的转化的细胞或如上述第六方面所述的药物组合物在制备预防或治疗或检测或诊断痘病毒感染或因感染痘病毒引起的并发症的药物中的应用。
优选地,所述痘病毒为正痘病毒,可选地为猴痘病毒MPXV或牛痘病毒,可选地牛痘病毒为牛痘病毒疫苗株VACV。
第八方面,本发明提供了一种预防或治疗痘病毒感染或因感染痘病毒引起的并发症的方法,其包括:向有需要的受试者施用预防或治疗有效量的如上述第一方面所述的与猴痘病毒的A35蛋白和/或牛痘病毒的A33R蛋白结合的人源中和抗体或其抗原结合片段、如上述第二方面所述的多核苷酸、如上述第三方面所述的核酸构建体、如上述第四方面所述的表达载体或如上述第五方面所述的转化的细胞或如上述第六方面所述的药物组合物。
优选地,所述痘病毒为正痘病毒,可选地为猴痘病毒MPXV或牛痘病毒,可选地牛痘病毒为牛痘病毒疫苗株VACV。
本发明的药物组合物的有效成分的给药量,根据给药对象、对象脏器、症状、给药方法等不同而存在差异,可以考虑剂型的种类、给药方法、患者的年龄和体重、患者的症状等,根据医生的判断来确定。
有益效果
(1)本发明的中和抗体MV92对MPXV A35和牛痘疫苗株A33R蛋白有较好的结合活性,EC50分别≤8.8ng/ml和≤6.2ng/ml;本发明的中和抗体MV92能有效抑制猴痘病毒(MPXV)真病毒感染,在400ug/ml和40ug/ml两个浓度均具有较强的中和能力。本发明的中和抗体有着临床治疗和预防MPXV感染的应用价值。
(2)本发明利用猴痘病毒感染后康复的患者PBMC,获得了具有较高广谱性候选抗体;采用流式分选和单细胞高通量测试技术,相比传统方法,从高通量scVDJ测序(scVDJ-seq)获得的大规模数据使我们能够在体外抗体表达之前检测B细胞克隆型的富集,快速高效且通量高。本发明所用的稳定高效表达抗体的真核表达系统(Chinese Hamster Ovary(CHO)cells),使获得的抗体是全人源化的,不需要进一步的人源化处理。
(3)本发明为猴痘病毒的临床预防、治疗和检测提供了潜在的抗体新药。
附图说明
一个或多个实施例通过与之对应的附图中的图片进行示例性说明,这些示例性说明并不构成对实施例的限定。在这里专用的词“示例性”意为“用作例子、实施例或说明性”。这里作为“示例性”所说明的任何实施例不必解释为优于或好于其它实施例。
图1是本发明实施例3的采用ELISA法分析中和抗体MV92分别对猴痘病毒(MPXV)A35抗原和牛痘疫苗株A33R抗原的结合活性。
图2是本发明实施例4的中和抗体MV92分别与猴痘病毒(MPXV)A35抗原和牛痘疫苗株A33R抗原的亲和力常数结果示意图,其中A为猴痘病毒(MPXV)A35抗原,B为牛痘疫苗株A33R抗原。
图3是本发明实施例7的中和抗体MV92中和MPXV真病毒株的中和效果示意图,其中,400ug/ml和40ug/ml分别为中和抗体MV92的两个浓度,阳性对照为加病毒未加抗体的混合液,阴性对照为未加入病毒和抗体。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚,下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。除非另有其它明确表示,否则在整个说明书和权利要求书中,术语“包括”或其变换如“包含”或“包括有”等等将被理解为包括所陈述的元件或组成部分,而并未排除其它元件或其它组成部分。
另外,为了更好的说明本发明,在下文的具体实施方式中给出了众多的具体细节。本领域技术人员应当理解,没有某些具体细节,本发明同样可以实施。在一些实施例中,对于本领域技术人员熟知的原料、元件、方法、手段等未作详细描述,以便于凸显本发明的主旨。
以下,对本发明进行详述。
定义
当提及配体/受体、抗体/抗原或其它结合对时,“特异性”结合是指在蛋白和/或其它生物试剂的异质群体中确定是否存在所述蛋白例如本发明的中和抗体与猴痘病毒A35和/或A33R抗原的结合反应。因此,在所指定的条件下,特定的配体/抗原与特定的受体/抗体结合,并且并不以显著量与样品中存在的其它蛋白结合。
本发明以下实施例中所使用的试剂、酶、培养基、抗生素和脱脂奶粉等化学材料均为市售产品,例如,(Chromium Single Cell V(D)J Reagent Kits,10X Genomics)试剂盒购自10X Genomics公司。
本发明以下实施例中的抗原为市售产品,例如,A35抗原或A33R抗原均购自北京义翘神州科技股份有限公司,其中,
猴痘病毒A35抗原的货号为:40886-V08H,北京义翘神州科技股份有限公司。
牛痘疫苗株A33R抗原的货号为:40896-V07E,北京义翘神州科技股份有限公司。
一些常用的生物材料,如感受态细胞、载体、辅助噬菌体、待转化的细胞等也为市售产品。
本发明的抗体MV92具有如SEQ ID NO:7所示的重链可变区的氨基酸序列和SEQ IDNO:8所示的轻链可变区的氨基酸序列。其主要序列信息如下表1
表1抗体MV92的序列信息
本发明采集了猴痘病毒感染后康复的患者PBMC,首先通过磁珠富集出B细胞,通过流式分选技术分选出与猴痘病毒A35抗原特异性结合的单个记忆B细胞,采用10×Genomics技术进行了单细胞建库、BCR免疫组库和转录组的高通量测序。通过数据分析,我们对抗体序列按照不同参数如抗体序列的丰度、频率、使用的胚系基因、突变率等进行排序和打分,从中挑选出有潜在亲和里的抗体序列进行批量合成和真核表达纯化。接着采用ELISA、BLI等方法对候选抗体进行与MPXV A35和牛痘疫苗株A33R蛋白的结合能力和亲和能力的测试,并对MPXV真病毒的中和能力等进行探究,确保筛选出中和抗体是有效的。
实施例1:通过高通量单细胞测序获得抗体序列信息
从猴痘病毒感染后康复的患者采集新鲜血液,进行Ficoll梯度离心分离外周血单个核细胞(PBMCs),从PBMC中通过磁珠法分离出B细胞,通过流式分选法进行抗原特异性B细胞富集。然后进行抗体文库构建,抗体文库构建采用试剂盒(Chromium Single Cell V(D)JReagent Kits,10×Genomics)在P2实验室进行。委托诺禾测序平台上进行抗体测序。测序下机后对数据进行分析,并进行抗体组装,对抗体序列按照不同参数如抗体序列的丰度、频率、使用的胚系基因、突变率等进行排序和打分,从中挑选出有潜在亲和里的抗体序列进行批量合成和真核表达纯化。
实施例2抗体蛋白的表达及纯化
委托金斯瑞公司进行抗体蛋白表达及纯化。
实施例3ELISA法分析中和抗体与MPXV毒株抗原的结合能力
取100ng的猴痘病毒A35抗原或牛痘疫苗株A33R抗原包被ELISA板,4℃过夜。PBST(0.05%)洗涤3次。每孔中加入100ul的5wt%脱脂奶粉液,室温,封闭2h,PBST洗涤3次。中和抗体采用PBS液进行梯度稀释,起始浓度为10μg/ml,并依次进行3倍梯度稀释,共11个浓度梯度,加入孔中,每个浓度梯度重复3个孔,加入50ul用5wt%脱脂奶粉液配制成2ug/ml的一抗,室温孵育1h。PBST洗涤3次。加入50ul 8000倍稀释的Anti human-FC的二抗,室温孵育45min,PBST洗涤3次。加入100μl TMB显色液(abcam),显色10min,加入等体积TMB stopbuffer(abcam)终止显色,OD450读值。分析中和抗体分别与猴痘病毒(MPXV)毒株A35抗原和牛痘疫苗株A33R抗原结合能力。
采用猴痘病毒(MPXV)A35R抗原和牛痘疫苗株A33R抗原的ELISA检测结果如图1,图1结果表明:中和抗体MV92与猴痘病毒(MPXV)A35R抗原和A33R抗原均具有较好的结合活性。
实施例4BLI法测定中和抗体对猴痘病毒A35抗原和牛痘疫苗株A33R抗原的亲和力常数
将MV92抗体耦联至protein A探针,用HBS-P缓冲液稀释,本实施例中,MV92抗体起始浓度为11μg/ml,抗原(猴痘病毒A35抗原或牛痘疫苗株A33R)起始浓度为400nM,依次进行2倍梯度稀释,稀释7个浓度梯度,以HBS-P缓冲液作为对照。使用Biacore T200(GE)仪器进行亲和力检测:每次进样120s,解离240s,流速30ul/min,再用10mM PH2.0Glycine再生,重复循环直至所有浓度梯度进样完成。程序运行结束后,使用Biacore T200(GE)仪器自带分析程序进行拟合分析,得出中和抗体亲和力常数结果,结果如表2和图2。结果表明,中和抗体MV92均对猴痘病毒A35抗原和牛痘疫苗株A33R抗原具有较高的亲和力。
表2中和抗体亲和力的结合解离常数KD(M)
实施例5检测抗体对MPXV真病毒株的中和作用
委托军事兽医研究所进行中和抗体MV92对猴痘病毒(MPXV)的中和活性检测,具体方法为:
1.操作步骤
(1)细胞铺板:真病毒中和实验前一天用胰酶消化对数生长期的Vero细胞,计数,每孔800μL加入12孔板中,37℃培养箱、5% CO2培养过夜。
(2)稀释抗体:中和抗体MV92的浓度分别为400ug/mL和40ug/mL。
(3)稀释病毒:各猴痘病毒(MPXV)分别用10% FBS的DMEM稀释适当倍数,充分颠倒混匀,抗体稀释液和病毒稀释液体积按1:1混匀,制得抗体和病毒的混合液。
(4)在步骤(1)的12孔板上按列分别设试验孔、阳性对照孔和阴性对照孔,其中:
试验孔:加入800μL抗体和病毒的混合液。
阳性对照孔:加入800μL的10% FBS的DMEM与猴痘病毒(MPXV)的等体积混合液(即未加抗体)。
阴性对照孔:加入800μL的10% FBS的DMEM(即细胞中只有10% FBS的DMEM)。
12孔板于37℃、5% CO2培养箱中孵育1小时。
(5)转板:将前一天铺好的12孔平底板中的细胞上清吸干,转移抗体和病毒的混合液800μL到平底板的细胞中。37℃、5% CO2培养箱孵育2小时。吸弃培养基,更换培养基为含有1.2%琼脂糖,4%FBS,2%guinea pig complement的DMEM培养基。继续培养3-4天。除去培养上清,用2%多聚甲醛固定细胞30min,0.2%Triton X-100渗透,0.1%结晶紫染色计数。
结果如图3,与阳性对照孔相比,中和抗体MV92在400ug/mL和40ug/mL两个浓度对MPXV真病毒都有中和能力。
综上,中和抗体MV92能够作为高中和活性的猴痘病毒(MPXV)的中和抗体,在高浓度和低浓度下均能发挥中和作用。
最后应说明的是:以上实施例仅用以说明本发明的技术方案,而非对其限制;尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明,本领域的普通技术人员应当理解:其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替换;而这些修改或者替换,并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
Claims (11)
1.一种与猴痘病毒的A35蛋白和/或牛痘病毒的A33R蛋白结合的人源中和抗体或其抗原结合片段,其包含重链可变区和轻链可变区,其中,
所述重链可变区的氨基酸序列包括分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的CDR1H、CDR2H和CDR3H;或与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示氨基酸序列分别具有1、2或3个氨基酸差异的CDR1H、CDR2H和CDR3H;
所述轻链可变区的氨基酸序列包括分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的CDR1L、CDR2L和CDR3L;或与SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示氨基酸序列分别具有1、2或3个氨基酸差异的CDR1L、CDR2L和CDR3L。
2.根据权利要求1所述的人源中和抗体或其抗原结合片段,其特征在于,所述重链可变区还包括4个框架区HFR1~4,所述HFR1~4与所述CDR1H、CDR2H和CDR3H按顺序交错排列;
和/或,所述轻链可变区还包括4个框架区LFR1~4,所述LFR1~4与所述CDR1L、CDR2L和CDR3L按顺序交错排列。
3.根据权利要求1或2所述的人源中和抗体或其抗原结合片段,其特征在于,所述重链可变区包含如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列,或与SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列具有至少95%,96%,97%,98%或99%序列同一性且与其具有相同或基本相同的免疫原性的氨基酸序列;和,
所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列,或与SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列具有至少95%,96%,97%,98%或99%序列同一性且与其具有相同或基本相同的免疫原性的氨基酸序列。
4.如权利要求1至3任一所述的人源中和抗体或其抗原结合片段,其中所述抗原结合片段选自Fab、Fab'、Fab'-SH、Fv、scFv、F(ab')2或双抗体。
5.多核苷酸,其编码权利要求1至4任一所述的与猴痘病毒的A35蛋白和/或牛痘病毒的A33R蛋白结合的人源中和抗体或其抗原结合片段;
可选地,所述多核苷酸为DNA或mRNA;可选地所述多核苷酸具有如SEQ ID NO:9和/或SEQ ID NO:10的核苷酸序列。
6.一种核酸构建体,其包含权利要求5所述的多核苷酸。
7.一种表达载体,其包含权利要求6所述的核酸构建体。
8.一种转化的细胞,其包括如权利要求5所述的多核苷酸、权利要求6所述的核酸构建体或权利要求7所述的表达载体;可选地,为真核表达载体。
9.一种药物组合物,其包含权利要求1至4任一项所述的与猴痘病毒的A35蛋白和/或牛痘病毒的A33R蛋白结合的人源中和抗体或其抗原结合片段、权利要求5所述的多核苷酸、权利要求6所述的核酸构建体、权利要求7所述的表达载体或权利要求8所述的转化的细胞,以及药学上可接受的载体和/或赋形剂;
可选地,所述药物组合物为鼻喷剂、口服制剂、栓剂或胃肠外制剂的形式。
10.一种权利要求1至4任一项所述的与猴痘病毒的A35蛋白和/或牛痘病毒的A33R蛋白结合的人源中和抗体或其抗原结合片段、权利要求5所述的多核苷酸、权利要求6所述的核酸构建体、权利要求7所述的表达载体、权利要求8所述的转化的细胞或权利要求9所述的药物组合物在制备预防或治疗或检测或诊断痘病毒感染或因感染痘病毒引起的并发症的药物中的应用。
11.根据权利要求10所述的应用,其特征在于,所述痘病毒为正痘病毒,可选地为猴痘病毒MPXV或牛痘病毒,可选地牛痘病毒为牛痘病毒疫苗株VACV。
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