CN118178731A - 一种猪松质骨作为组织工程骨的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种猪松质骨作为组织工程骨的制备方法，具体包括以下步骤：准备猪松质骨支架制备的材料与试剂；将猪骨用35℃‑42℃的生理盐水浸泡，洗净表面，剔除软组织、骨膜和密质骨，然后使用35℃‑42℃的盐水对骨骼进行冲洗；将经过清洁处理的骨块置于30％双氧水中，然后将其放入35℃‑42℃恒温箱中，连续放置68‑75小时，通过观察发现，经过杀菌干燥处理的猪松质骨能够被制备成骨支架。这些支架不仅能够提供必要的结构支持，还含有催化因子，能够有效促进新骨组织的生长。这种骨支架能够填补缺损骨区域，逐步实现骨的修复和重建过程。这些经过处理的猪松质骨支架在促进缺损骨区域的骨生长修复方面具有显著作用。
Description
技术领域
本发明涉及猪松质骨制备领域，更具体地说，本发明涉及一种猪松质骨作为组织工程骨的制备方法。
背景技术
发明人口腔医学的临床工作中，发现许多患有唇腭裂并伴有牙槽嵴裂的患者。在进行牙槽嵴裂的修复过程中，通常需要进行髂骨骨松质的切取进行骨移植。这种手术对患者造成了较大的创伤，需要同时进行两处手术。术后的恢复较为缓慢，而且对患者的跑步功能产生了一定的影响。
发明内容
本发明针对现有技术中存在的技术问题，提供一种猪松质骨作为组织工程骨的制备方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种猪松质骨作为组织工程骨的制备方法，包括以下步骤：
步骤S1，准备猪松质骨支架制备的材料与试剂；
步骤S2，将猪骨用35℃-42℃的生理盐水浸泡，洗净表面，剔除软组织、骨膜和密质骨，然后使用35℃-42℃的盐水对骨骼进行冲洗；
步骤S3，将经过清洁处理的骨块置于30％双氧水中，然后将其放入35℃-42℃恒温箱中，连续放置68-75小时；
步骤S4，取出骨块后，使用35℃-42℃的双蒸水反复冲洗，以确保彻底清洁。接着，将骨块置于氯仿和甲醇混合溶液中浸泡4小时，以完成下一步的处理过程；
步骤S5，再次取出骨块，用35℃-42℃的双蒸水反复清洗，然后放入的盐酸溶液中，室温下浸泡68-75小时；
步骤S6，再次使用双蒸水进行反复清洗以确保彻底清洁，然后将骨块置于室温下进行真空干燥，持续3-5小时；
步骤S7，干燥后将骨块置于液氮中18-27小时，然后用钴射线进行照射以消毒灭菌；
步骤S8，对猪松质骨骨块的强度和抗压强度、抗压力进行检测；
步骤S9，最后密封处理后的骨块，放入-38℃-45℃的冰箱中保存备用。
优选的，步骤S3中每18-27小时更换一次双氧水，步骤S4中氯仿和甲醇的体积比为3:1。
优选的，步骤S5中盐酸溶液的浓度为0.6mol/L，步骤S7中照射剂量为35Gy。
优选的，在步骤S9中，备用的猪松质骨骨块呈现乳白色，具有透明度，并且形状没有发生变化。
优选的，使用液体静力称重法对猪松质骨骨块的孔隙率进行测试，结果显示孔隙率为78.26％±2.01％。
优选的，通过试验机进行测试，得出猪松质骨骨块的最大抗压强度为25MPa，而最大抗压力为12N。
优选的，通过扫描电子显微镜观察后得知猪松质骨骨块保留了原始骨组织的网状孔隙系统，其表面呈现出三维多孔结构，并且这些孔隙之间相互连通。
本发明的有益效果是：通过观察发现，经过杀菌干燥处理的猪松质骨能够被制备成骨支架。这些支架不仅能够提供必要的结构支持，还含有催化因子，能够有效促进新骨组织的生长。这种骨支架能够填补缺损骨区域，逐步实现骨的修复和重建过程。这些经过处理的猪松质骨支架在促进缺损骨区域的骨生长修复方面具有显著作用。
附图说明
图1为本发明的猪松质骨制备后的骨支架结构示意图
图2为本发明的猪松质骨制备后的骨块保留原骨组织网状孔隙系统示意图；
图3为本发明的猪松质骨材料抗压-体积变化与压力-位移变化曲线示意图；
具体实施方式
下面将结合本申请实施例中的附图，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。
在本申请的描述中，术语“例如”一词用来表示“用作例子、例证或说明”。本申请中被描述为“例如”的任何实施例不一定被解释为比其它实施例更优选或更具优势。为了使本领域任何技术人员能够实现和使用本发明，给出了以下描述。在以下描述中，为了解释的目的而列出了细节。应当明白的是，本领域普通技术人员可以认识到，在不使用这些特定细节的情况下也可以实现本发明。在其它实例中，不会对公知的结构和过程进行详细阐述，以避免不必要的细节使本发明的描述变得晦涩。因此，本发明并非旨在限于所示的实施例，而是与符合本申请所公开的原理和特征的最广范围相一致。
实施例1
本实施例提供了如图1-2所示一种猪松质骨作为组织工程骨的制备方法，具体包括以下步骤：
步骤S1，准备猪松质骨支架制备的材料与试剂；
步骤S2，将猪骨用37℃的生理盐水浸泡，洗净表面，剔除软组织、骨膜和密质骨，然后使用37℃的盐水对骨骼进行冲洗；通过用37℃的生理盐水浸泡和冲洗，可以有效清洁猪骨表面，去除污垢和残留物质，确保骨表面的干净。在37℃的温度下进行处理有助于保持猪骨的适宜状态，避免温度过高或过低对骨质结构造成不利影响。
步骤S3，将经过清洁处理的骨块置于30％双氧水中，然后将其放入37℃恒温箱中，每24小时更换一次双氧水，连续放置72小时；将骨块置于30％双氧水中能够有效消毒和灭菌，除去表面和内部的细菌、病毒等微生物，从而降低感染的风险。同时，将骨块放入37℃恒温箱中连续放置72小时，有助于在适宜的温度下进行处理。这种恒温条件有助于增强双氧水的消毒效果，并确保处理过程的稳定性和一致性。另外，双氧水还可用作漂白剂，能够有效去除骨块表面的色素和污渍，使其更加清洁和美观。
步骤S4，取出骨块后，使用37℃的双蒸水反复冲洗，以确保彻底清洁。接着，将骨块置于氯仿和甲醇混合溶液中浸泡4小时，氯仿和甲醇的体积比为3:1，以完成下一步的处理过程；使用37℃的双蒸水反复冲洗，能够有效去除骨块表面的污垢和细菌，确保骨块彻底清洁，为后续处理步骤提供干净的基础。随后，通过反复冲洗和浸泡，进一步消毒和灭菌骨块，从而减少微生物的存在。氯仿和甲醇混合溶液具有较强的溶解能力，可以有效清除骨块表面和内部的残留物质，如脂肪、蛋白质等，以确保骨块的纯净度和质量。这一过程不仅有助于提高骨块的适用性，还能够减少术后感染的风险，确保临床应用的安全性和有效性。
步骤S5，再次取出骨块，用37℃的双蒸水反复清洗，然后放入的盐酸溶液中，盐酸溶液的浓度为0.6mo l/L，室温下浸泡72小时；通过再次使用37℃的双蒸水反复清洗，可以进一步去除骨块表面的污垢和细菌，确保骨块的彻底清洁，将骨块放入盐酸溶液中浸泡72小时，有助于进一步清洁和处理骨块，去除可能残留的有机物质和其他杂质，确保骨块的纯净度和质量。
步骤S6，再次使用双蒸水进行反复清洗以确保彻底清洁，然后将骨块置于室温下进行真空干燥，持续4小时；将骨块置于室温下进行真空干燥，有助于去除骨块内部的水分，使其干燥均匀，防止细菌滋生。
步骤S7，干燥后将骨块置于液氮中24小时，然后用钴射线(照射剂量为35Gy)进行照射以消毒灭菌；使用液氮冷冻可以在不破坏骨块结构的情况下快速冷冻，并使细菌无法生存。随后使用钴射线进行照射可以对骨块进行灭菌，杀死残留的微生物，确保骨块的纯净度和无菌性。
步骤S8，对猪松质骨骨块的强度和抗压强度、抗压力进行检测；通过对猪松质骨骨块的强度和抗压强度、抗压力进行检测。
步骤S9，最后密封处理后的骨块，放入-40℃的冰箱中保存备用。
实施例2
本实施例提供了如图1-2所示一种猪松质骨作为组织工程骨的制备方法，具体包括以下步骤：
步骤S1，准备猪松质骨支架制备的材料与试剂；
步骤S2，将猪骨用40℃的生理盐水浸泡，洗净表面，剔除软组织、骨膜和密质骨，然后使用40℃的盐水对骨骼进行冲洗；通过用40℃的生理盐水浸泡和冲洗，可以有效清洁猪骨表面，去除污垢和残留物质，确保骨表面的干净。在40℃的温度下进行处理有助于保持猪骨的适宜状态，避免温度过高或过低对骨质结构造成不利影响。
步骤S3，将经过清洁处理的骨块置于30％双氧水中，然后将其放入40℃恒温箱中，连续放置72小时；将骨块置于30％双氧水中能够有效消毒和灭菌，除去表面和内部的细菌、病毒等微生物，从而降低感染的风险。同时，将骨块放入40℃恒温箱中连续放置72小时，有助于在适宜的温度下进行处理。这种恒温条件有助于增强双氧水的消毒效果，并确保处理过程的稳定性和一致性。另外，双氧水还可用作漂白剂，能够有效去除骨块表面的色素和污渍，使其更加清洁和美观。
步骤S4，取出骨块后，使用40℃的双蒸水反复冲洗，以确保彻底清洁。接着，将骨块置于氯仿和甲醇混合溶液中浸泡4小时，以完成下一步的处理过程；使用40℃的双蒸水反复冲洗，能够有效去除骨块表面的污垢和细菌，确保骨块彻底清洁，为后续处理步骤提供干净的基础。随后，通过反复冲洗和浸泡，进一步消毒和灭菌骨块，从而减少微生物的存在。氯仿和甲醇混合溶液具有较强的溶解能力，可以有效清除骨块表面和内部的残留物质，如脂肪、蛋白质等，以确保骨块的纯净度和质量。这一过程不仅有助于提高骨块的适用性，还能够减少术后感染的风险，确保临床应用的安全性和有效性。
步骤S5，再次取出骨块，用40℃的双蒸水反复清洗，然后放入的盐酸溶液中，室温下浸泡72小时；通过再次使用40℃的双蒸水反复清洗，可以进一步去除骨块表面的污垢和细菌，确保骨块的彻底清洁，将骨块放入盐酸溶液中浸泡72小时，有助于进一步清洁和处理骨块，去除可能残留的有机物质和其他杂质，确保骨块的纯净度和质量。
步骤S6，再次使用双蒸水进行反复清洗以确保彻底清洁，然后将骨块置于室温下进行真空干燥，持续5小时；将骨块置于室温下进行真空干燥，有助于去除骨块内部的水分，使其干燥均匀，防止细菌滋生。
步骤S7，干燥后将骨块置于液氮中24小时，然后用钴射线进行照射以消毒灭菌；使用液氮冷冻可以在不破坏骨块结构的情况下快速冷冻，并使细菌无法生存。随后使用钴射线进行照射可以对骨块进行灭菌，杀死残留的微生物，确保骨块的纯净度和无菌性。
步骤S8，对猪松质骨骨块的强度和抗压强度、抗压力进行检测；通过对猪松质骨骨块的强度和抗压强度、抗压力进行检测
步骤S9，最后密封处理后的骨块，放入-40℃的冰箱中保存备用。
进一步的，步骤S3中每24小时更换一次双氧水，步骤S4中氯仿和甲醇的体积比为3:1。在步骤S3中，每24小时更换一次双氧水有助于保持其消毒效果的持续性和有效性。随着时间的推移，双氧水可能会失去其活性，更换新的双氧水可以确保骨块在清洁处理过程中始终处于良好的消毒状态，减少细菌和微生物的存在，降低感染风险。
进一步的，在步骤S9中，备用的猪松质骨骨块呈现乳白色，具有透明度，并且形状没有发生变化。
进一步的，使用液体静力称重法对猪松质骨骨块的孔隙率进行测试，结果显示孔隙率为78.26％±2.01％。使用液体静力称重法对猪松质骨骨块的孔隙率进行测试，结果显示孔隙率为78.26％±2.01％。通过上述的孔隙率可以说明材料保存了天然骨组织良好的孔隙率和孔隙交通，能成为种子细胞的吸附、生长、分化提供良好的支架。
进一步的，通过试验机进行测试，得出猪松质骨骨块的最大抗压强度为25MPa，而最大抗压力为12N。
进一步的，通过扫描电子显微镜观察后得知猪松质骨骨块保留了原始骨组织的网状孔隙系统，其表面呈现出三维多孔结构，并且这些孔隙之间相互连通。
参考图3所示，进一步的，通过试验机进行测试，得出猪松质骨骨块的最大抗压强度为25MPa，而最大抗压力为12N。通过力学侧视说明了材料保留了一定的力学性能，这种骨的性能为非承重区的骨缺损的修复提供了可供应用的骨组织修复的新的组织工程骨的来源。当材料承受25MPa以下的压强和15N以下压力时其体积变化与位移变化不明显，超出此界限则出现明显变化且随持续时间延长愈明显。试验机的型号为DDW—100型万能试验机。
进一步的，通过扫描电子显微镜观察后得知猪松质骨骨块保留了原始骨组织的网状孔隙系统，其表面呈现出三维多孔结构，并且这些孔隙之间相互连通。
尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造概念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包括这些改动和变型在内。
Claims (7)
1.一种猪松质骨作为组织工程骨的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
步骤S1，准备猪松质骨支架制备的材料与试剂；
步骤S2，将猪骨用35℃-42℃的生理盐水浸泡，洗净表面，剔除软组织、骨膜和密质骨，然后使用35℃-42℃的盐水对骨骼进行冲洗；
步骤S3，将经过清洁处理的骨块置于30％双氧水中，然后将其放入35℃-42℃恒温箱中，连续放置68-75小时；
步骤S4，取出骨块后，使用35℃-42℃的双蒸水反复冲洗，以确保彻底清洁，接着，将骨块置于氯仿和甲醇混合溶液中浸泡4小时，以完成下一步的处理过程；
步骤S5，再次取出骨块，用35℃-42℃的双蒸水反复清洗，然后放入的盐酸溶液中，室温下浸泡68-75小时；
步骤S6，再次使用双蒸水进行反复清洗以确保彻底清洁，然后将骨块置于室温下进行真空干燥，持续3-5小时；
步骤S7，干燥后将骨块置于液氮中18-27小时，然后用钴射线进行照射以消毒灭菌；
步骤S8，对猪松质骨骨块的强度和抗压强度、抗压力进行检测；
步骤S9，最后密封处理后的骨块，放入-38℃-45℃的冰箱中保存备用。
2.根据权利要求1所述的一种猪松质骨作为组织工程骨的制备方法，其特征在于：步骤S3中每18-27小时更换一次双氧水，步骤S4中氯仿和甲醇的体积比为3:1。
3.根据权利要求1所述的一种猪松质骨作为组织工程骨的制备方法，其特征在于：步骤S5中盐酸溶液的浓度为0.6mol/L，步骤S7中照射剂量为35Gy。
4.根据权利要求1所述的一种猪松质骨作为组织工程骨的制备方法，其特征在于：在步骤S9中，备用的猪松质骨骨块呈现乳白色，具有透明度，并且形状没有发生变化。
5.根据权利要求1所述的一种猪松质骨作为组织工程骨的制备方法，其特征在于：使用液体静力称重法对猪松质骨骨块的孔隙率进行测试，结果显示孔隙率为78.26％±2.01％。
6.根据权利要求1所述的一种猪松质骨作为组织工程骨的制备方法，其特征在于：通过试验机进行测试，得出猪松质骨骨块的最大抗压强度为25MPa，而最大抗压力为12N。
7.根据权利要求1所述的一种猪松质骨作为组织工程骨的制备方法，其特征在于：通过扫描电子显微镜观察后得知猪松质骨骨块保留了原始骨组织的网状孔隙系统，其表面呈现出三维多孔结构，并且这些孔隙之间相互连通。
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- 2024-03-28 CN CN202410367525.2A patent/CN118178731A/zh active Pending
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