CN118177113A - 一种降低许氏平鲉苗种运输应激的方法 - Google Patents

一种降低许氏平鲉苗种运输应激的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种降低许氏平鲉苗种运输应激的方法，属于水产养殖领域。该方法包括以下步骤：(1)苗种选择；(2)运输前处理：运输前20‑30天投喂添加白术多糖的饲料，饲料中白术多糖的添加量为1.0‑3.0g/kg，运输前22‑26h禁食；(3)捕捞操作；(4)运输过程中的管理：在苗种运输的海水中添加γ‑氨基丁酸和维生素C，其中γ‑氨基丁酸添加量为25‑35mg/L，维生素C添加量为20‑30mg/L。本发明方法操作简单，解决了许氏平鲉大规格苗种陆海接力运输和入海初期因应激反应出现高死亡率的技术瓶颈问题，为许氏平鲉陆海接力养殖产业的健康发展提供了技术支撑，且经济实用，适宜广泛推广。

Description

一种降低许氏平鲉苗种运输应激的方法
技术领域
本发明属于水产养殖领域，尤其涉及一种降低许氏平鲉苗种运输应激的方法。
背景技术
许氏平鲉(Sebastesschlegelii)又称黑鮶，属鲉形目(Scorpaeniformes)、鲉科(Scorpaenidae)、平鲉属(Sebastes)，主要分布于我国黄、渤海及东海海区，也常见于日本及鄂霍次克海等，是近海冷温性底层岩礁鱼类。因其肉质鲜美、营养丰富，有“黑石斑”之称，具有适温范围广、适应性强、自然越冬等优点，是我国北方沿海的主要养殖鱼类品种，养殖模式以“陆海接力”为主，即在工厂化条件下完成育苗和大规格苗种培育，再转运至网箱中养成至商品鱼。因此，苗种运输成为许氏平鲉养殖产业中重要的技术环节。
许氏平鲉具有强烈的应激属性，背鳍、臀鳍和腹鳍具有尖锐的鳍棘数根，眶下骨有三个尖棘，侧线前端有三个尖棘，极易因应激反应、泳速加快、拥挤等相互刺伤，引起感染进而导致体质下降。在苗种的陆海接力运输中，一方面因捕捞操作、水体生物负载过高、蹿跳、碰撞导致鱼体体表损伤，影响后续养殖成活率，另一方面运输途中颠簸、水质恶化、水温变化、溶氧变化等都可能产生应激，这些应激反应可导致鱼苗机体免疫力下降，诱发患病甚至死亡，严重影响了后续养殖的经济效益和生态效益。
许氏平鲉大规格苗种陆海接力运输中主要采用消毒剂、抗生素对苗种进行处理，以降低苗种运输过程中的损伤，这种处理方式对体表有伤口的苗种有一定的效果，但不能解决苗种因运输过程导致的应激反应。麻醉剂(MS-222、丁香酚等)也大量应用于鱼类运输过程，使鱼苗处于镇静期或者麻醉期，降低其对外界刺激的反应，但该方法对于鳍条有硬棘的鱼类不适合，因为运输过程的颠簸会造成处于麻醉期的鱼苗扎堆、刺伤。已有大量报道表明，通过添加抗应激剂或投喂添加剂的饲料来缓解鱼类应激是一种有效措施，并且取得了显著效果。根据鱼类神经内分泌、生理生化和免疫、行为变化等三个适应性或防御性的应激反应阶段，抗应激剂种类主要包括麻醉剂类、氨基酸类、维生素类、生物活性多糖类、电解质和矿物元素类、天然产物类等多种类型，具备调节中枢神经系统功能、抗氧化作用、清除活性氧自由基能力以及调节机体物质代谢的特点。
因此，针对许氏平鲉强烈的应激属性和尖锐的鳍棘、棘刺，在运输前的营养强化、捕捞过程的镇静处理和运输过程的抗应激、抗氧化消减，筛选一组使用方便、安全无害、功能互补并能有效降低许氏平鲉苗种生理应激反应的抗应激剂组合，以保障运输过程和入海初期苗种的成活率，对于许氏平鲉陆海接力养殖具有重要意义。
发明内容
本发明提供了一种降低许氏平鲉苗种运输应激的方法，所述方法包括以下步骤：
(1)苗种选择；
(2)运输前处理：运输前20-30天投喂添加白术多糖的饲料，饲料中白术多糖的添加量为1.0-3.0g/kg，运输前22-26h禁食；
(3)捕捞操作：捕捞操作前一周以人工驱赶的方式对苗种进行强化训练，捕捞时添加麻醉剂MS-222使鱼苗处于深度镇静期，其中MS-222的添加量为30-45mg/L；
(4)运输过程中的管理：在苗种运输的海水中添加γ-氨基丁酸和维生素C，其中γ-氨基丁酸添加量为25-35mg/L，维生素C添加量为20-30mg/L。
优选地，所述步骤(1)中苗种规格为50-100g。
更优选地，所述步骤(2)中饲料为人工配合饲料。
更优选地，所述步骤(2)中饲料中白术多糖的添加量为2.0g/kg。
更优选地，所述步骤(2)中运输前24h禁食。
更优选地，所述步骤(3)中人工驱赶训练为运输前持续7天。
更优选地，所述步骤(3)中MS-222浓度为35mg/L。
更优选地，所述步骤(4)中γ-氨基丁酸添加量为30mg/L。
更优选地，所述步骤(4)中维生素C添加量为25mg/L。
更优选地，许氏平鲉苗种输时间少于12h，运输密度为苗种数量不超过1500尾/m3；运输时间为12-24小时，许氏平鲉运输密度为苗种数量不超过1000尾/m3；运输时间超过24h，许氏平鲉运输密度为苗种数量不超过600尾/m3。
更优选地，运输苗种的水温控制在8-12℃，溶解氧浓度维持在8mg/L以上。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明采用的是对许氏平鲉苗种无毒无害的天然产物类、麻醉剂类、维生素类和氨基酸类抗应激剂组合，水溶性好，利于苗种吸收利用，使用方便，不受环境条件影响，且不含激素、抗生素，对苗种无刺激，可显著降低苗种运输过程中的应激反应，有助于维持鱼体生理生化指标的相对稳定，提高苗种免疫能力，缓解捕捞操作、运输应激对鱼体产生的不利影响，进而提高苗种入海后的成活率。
其中，其中白术多糖是从中药白术中提取的多糖类物质，已证实具有抑菌、缓解肝损伤、减轻细胞凋亡、缓解胸腺铁下垂、调节肠道菌群和提高特异性免疫等功能，具有增强鱼苗免疫能力、保肝护肝和调节肠道菌群的作用。MS-222是唯一被美国FDA批准的唯一活鱼运输麻醉剂，MS-222具有镇静作用。维生素C，又称抗坏血酸，是一种水溶性的抗氧化剂，可介导机体内的氧化还原反应，消除体内过多的活性氧自由基，降低养殖或运输环境中产生的毒性物质与刺激对机体的损伤，抵抗脂质过氧化，具有增强免疫力和提高抗应激能力的作用；γ-氨基丁酸(GABA)，又名氨酪酸，是一种在动物体内起神经镇定作用的非蛋白质氨基酸，是中枢神经系统内最主要的抑制性氨基酸递质，具有突触后抑制作用，GABA具有多种功能，包括降低血压、抗癫痫、镇静神经以及改善肝肾功能等。
该发明方法操作简单，解决了许氏平鲉大规格苗种捕捞操作、陆海接力运输和入海初期因应激反应出现高死亡率的技术瓶颈问题，为许氏平鲉陆海接力养殖产业的健康发展提供了技术支撑，且经济实用，适宜广泛推广。
附图说明
图1为实施例1饲料中添加白术多糖对许氏平鲉免疫因子活性的影响结果。
图2为实施例1运输中添加维生素C对许氏平鲉模拟运输后血糖含量的影响结果。
图3为实施例1运输中添加γ-氨基丁酸(GABA)对许氏平鲉模拟运输后血糖含量的影响结果。
图4为实施例1运输中添加壳寡糖对许氏平鲉模拟运输后血糖含量的影响结果。
图5为实施例1运输中添加甘氨酸对许氏平鲉模拟运输后血糖含量的影响结果。
图6为实施例2运输中复合添加维生素C和γ-氨基丁酸对许氏平鲉运输后血清皮质醇含量的影响结果。
图7为实施例2运输中复合添加维生素C和γ-氨基丁酸对许氏平鲉运输后血糖含量的影响结果。
图1-图7中的正常对照是指未进行任何操作的正常养殖苗种。
具体实施方式
实施例1
一种降低许氏平鲉大规格苗种运输应激方法的建立：
(1)饲料中白术多糖添加量的确定
以白术多糖(购于上海融禾医药科技发展有限公司)作为饲料添加剂，对运输苗种进行免疫和抗应激强化，其使用剂量的选择根据如下方法确定：饲料中分别添加0.5g/kg、1.0g/kg、2.0g/kg和4.0g/kg白术多糖，每天人工投喂3次，每次饱食投喂，投喂30天后，通过检测血清中免疫因子水平变化确定免疫增强效果及最适添加量，设置不添加白术多糖的饲料投喂组作为对照。
结果如图1，饲料中添加白术多糖可有效增加TNF-α、IL-1β、IFN-γ和LZM表达水平，其中白术多糖添加量为2.0g/kg具有显著效果。
(2)达到深度镇静期麻醉剂MS-222浓度的确定
以MS-222作为麻醉剂，在海水水温14.5±0.5℃、pH7.85、盐度30、溶解氧浓度＞7.5mg/L条件下，水体中MS-222浓度依次设定为10、20、30、40、50、60mg/L，分别放入10尾同规格的许氏平鲉苗种，观察并记录苗种达到深度镇静期的时间，深度镇静期行为表现为幼鱼对碰触反应迟钝，仍能保持身体平衡。
结果表明，在MS-222浓度为20～40mg/L时，幼鱼在15min观察时间内仅达到深度镇静期(A2)，幼鱼可维持身体平衡，碰触后反应迟钝；50mg/L时，幼鱼3～4min可达到轻度麻醉期(A3)，表现为反应更为迟钝，躯体平躺后头尾上翘成弓形摆动，无法保持平衡；60mg/L时，幼鱼9～14min可达到麻醉期(A4)，幼鱼表现出典型的麻醉症状。由此，通过二次回归曲线分析，以3min进入深度镇静期的麻醉剂浓度为最适镇静期浓度，获得50-100g的大规格苗种深度镇静期对应的MS-222浓度为35mg/L。
(3)运输中抗应激剂选择及使用剂量
通过模拟运输车颠簸震动和运输船的摇摆，检测许氏平鲉大规格苗种(50-100g)在运输过程中特异性应激指标血糖变化(当鱼类处于应激状态时，血糖含量会显著上升)，筛选抗应激剂及其使用剂量。
分别向水体中添加4个不同剂量的维生素C(15mg/L、25mg/L、35mg/L、45mg/L)、γ-氨基丁酸(10mg/L、30mg/L、50mg/L、70mg/L)、壳寡糖(2.5mg/L、5mg/L、10mg/L、15mg/L)和甘氨酸(5mg/L、15mg/L、25mg/L、35mg/L)。上述浓度都为终浓度。
结果如图2、图3、图4和图5，模拟运输24h后立即检测血清中血糖含量，运输中添加维生素C、γ-氨基丁酸和甘氨酸均能有效缓解运输应激导致的血糖含量上升，而壳寡糖则无显著性效果，其中，25mg/L维生素C和30mg/Lγ-氨基丁酸效果最佳。
(4)鱼苗选择
苗种为工厂化人工培育的许氏平鲉苗种，苗种规格为50-100g，选择运动活泼、摄食积极、体表无明显外伤的健康苗种，剔除鳞片脱落、身体损伤溃疡、身体畸形的个体。
(5)运输前鱼苗强化及管理
运输前20天，以添加白术多糖的人工配合饲料(购于林兼产业株式会社，货号：星元5#)对运输苗种进行强化。根据许氏平鲉胃肠排空规律，运输前24h禁食，以保证运输时鱼苗胃肠道完全排空。
(6)捕捞前鱼苗的人工驱赶训练强化
运输前7天，每天早晚各进行一次人工驱赶苗种，以捕鱼网对鱼苗进行模拟捕捞操作，训练鱼苗适应捕捞胁迫。
(7)捕捞前深度镇静处理
正式运输捕捞前，将养殖池水体放至原水体的1/4处，全池泼洒MS-222，确保MS-222终浓度为35mg/L，静置5min，使鱼苗全部进入深度镇静期。
(8)运输过程中的处理
在苗种运输的海水中复合添加γ-氨基丁酸和维生素C，γ-氨基丁酸添加量为30mg/L，维生素C添加量为25mg/L。
本发明所述运输过程中的管理，运输时间少于12h，许氏平鲉运输密度为苗种数量不超过1200尾/m3；运输时间为12-24小时，许氏平鲉运输密度为苗种数量不超过1000尾/m3；运输时间超过24h，许氏平鲉运输密度为苗种数量不超过600尾/m3。
本发明所述运输过程中的管理，运输鱼苗的水温控制在8-12℃，溶解氧浓度维持在8mg/L以上。
实施例2许氏平鲉大规格苗种的运输
2021年5月从工厂化车间挑选均重为80g许氏平鲉苗种10000尾，采用上述运输方法，首先投喂含有白术多糖的配合饲料(添加量2.0g/kg)20天；后7天，每天进行人工捕捞模拟操作驯化鱼苗适应捕捞胁迫；运输前24h停食；正式运输捕捞前，全池泼洒MS-222，确保MS-222终浓度为35mg/L，静置5min，使鱼苗全部进入深度镇静期；以活鱼运输桶(体积1m3)装载实验鱼苗，运输桶中装载海水500L，取其中1桶水体中不添加任何抗应激剂(空白运输组)，1桶添加25mg/L维生素C(Vc添加运输组)，1桶添加30mg/Lγ-氨基丁酸(GABA运输组)，其余运输桶水体中复合添加30mg/Lγ-氨基丁酸和25mg/L维生素C(Vc&GABA运输组)，运输苗种密度均为1000尾/m3，通过活鱼运输车转运至码头，运输时间为2.5小时，后转入活鱼运输船运输至海上网箱，运输时间4.5h，运输过程中水温为8-12℃，溶解氧浓度高于8mg/L。投入网箱前，统计各运输桶鱼苗成活率，结果表明，不添加抗应激剂的运输桶鱼苗成活率为92.8％，单独添加维生素C组鱼苗成活率为95.2％，单独添加γ-氨基丁酸组鱼苗成活率为96.4％，复合添加Vc和γ-氨基丁酸组鱼苗成活率98.4％。采集血液样品用于检测血液抗应激指标(皮质醇和血糖)以评估抗应激剂对许氏平鲉大规格苗种的运输应激缓解作用，结果表明，运输结束后，空白运输组和Vc添加运输组皮质醇含量明显升高，GABA运输组皮质醇含量与运输前无显著性差异，稍低于空白运输组和Vc添加组，但差异不显著，而复合添加Vc&GABA运输组皮质醇含量则显著低于其他运输组，与运输前无显著性差异(图6)；空白运输组和Vc添加运输组血糖含量显著升高，单独添加GABA和复合添加Vc&GABA运输组血糖含量则与运输前对照组无显著性差异(图7)。
以上结果表明，本发明能够有效降低许氏平鲉大规格苗种运输过程导致的运输应激，且操作简单、经济实用，适宜广泛推广。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

Claims (10)

1.一种降低许氏平鲉苗种运输应激的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)苗种选择；
(2)运输前处理：运输前20-30天投喂添加白术多糖的饲料，饲料中白术多糖的添加量为1.0-3.0g/kg，运输前22-26h禁食；
(3)捕捞操作：捕捞操作前一周以人工驱赶的方式对苗种进行强化训练，捕捞时添加麻醉剂MS-222使鱼苗处于深度镇静期，其中MS-222的添加量为30-45mg/L；
(3)运输过程中的管理：在苗种运输的海水中添加γ-氨基丁酸和维生素C，其中γ-氨基丁酸添加量为25-35mg/L，维生素C添加量为20-30mg/L。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中苗种规格为50-100g。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中饲料为人工配合饲料。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中饲料中白术多糖的添加量为2.0g/kg。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中运输前24h禁食。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中MS-222浓度为35mg/L。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)中γ-氨基丁酸添加量为30mg/L。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)中维生素C添加量为25mg/L。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，许氏平鲉苗种输时间少于12h，运输密度为苗种数量不超过1500尾/m3；运输时间为12-24小时，许氏平鲉运输密度为苗种数量不超过1000尾/m3；运输时间超过24h，许氏平鲉运输密度为苗种数量不超过600尾/m3。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，运输苗种的水温控制在8-12℃，溶解氧浓度维持在8mg/L以上。
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