CN118050501A - 病毒蛋白提取保存试剂、其制备方法和其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及病毒蛋白提取保存试剂、其制备方法和其应用。具体地，本发明的病毒蛋白提取保存试剂包含以下组分：电解质，其浓度为0.5～2.5w/v％，非离子表面活性剂，其浓度为0.01～1w/v％，增稠剂，其浓度为0.1～2w/v％，螯合剂，其浓度为5～50mmol/L，蛋白稳定剂，其浓度为0.1～2w/v％，生物防腐剂，其浓度为0.05～2w/v％，和溶剂。本发明还涉及制备病毒蛋白提取保存试剂的方法、病毒蛋白提取保存试剂在制备病毒样本保存试剂盒中的应用、病毒样本保存试剂盒、病毒蛋白的提取方法和病毒蛋白的保存方法。
Description
技术领域
本发明涉及体外诊断领域。具体地，本发明涉及到一种病毒蛋白提取保存试剂、其制备方法和其应用，特别涉及通用型病毒N蛋白提取保存试剂、其制备方法和其应用。
背景技术
各种病毒对人类健康、社会秩序和全球经济都产生了巨大危害。新型冠状病毒在潜伏期的隐蔽性高且传播性广，因此对感染人群和密切接触人群的早期、快速筛查成为预防和治疗的重要举措。为了满足目前新冠疫情防控形势的需求，降低新冠病毒核酸筛查的压力，实现对疑似患者和密切接触者的快速筛查，可通过检测患者鼻、咽拭子样本中新型冠状病毒抗原用于新型冠状病毒患者的辅助诊断，对是否携带新冠病毒抗原的检测成为重要的临床指标。为了提高检测的便携性，缓解医疗机构筛查压力，需要研发出能够快速进行新冠病毒抗原检测且对检测人员技术以及环境无特殊要求的简便的检测方法。
现有的较为成熟的新冠病毒的抗原检测方案主要有两种：
第一种方案基于荧光免疫层析法。检测时，首先进行取样，通常取受检人群的口、鼻咽拭子，之后放入新冠病毒提取试剂中，用手隔着采样管外壁挤压拭子头与提取试剂充分混匀，取适量混合液(通常为80-100uL)滴加到试纸条的加样孔。当样本中含有相应的待测物且浓度不低于最低检测限时，待测物会与预包被的荧光微球标记的抗体反应形成抗原-抗体复合物，随后复合物通过毛细作用向前层析，则在检测线处被抗体捕获聚集，通过免疫荧光分析仪产生的激发光激发被标记的抗原-抗体复合物产生荧光，并读出信号峰值，根据读出的数值对新冠病毒抗原阳性进行判定。如果样本中不含新冠病毒，则不会形成抗原-抗体复合物，检测线处不会出现荧光信号，表明样本为阴性。无论样本中是否含有待测物质，质控线处都应出现荧光检测信号峰值，作为层析过程是否正常、试剂是否失效的内控标准。在此过程中新冠病毒提取试剂对抗原蛋白的提取能力直接决定了检测的浓度下限，同时其对病毒蛋白的保存能力也直接影响检测的效果，另外，其对试纸条预置的抗体及荧光标记物应无不良影响，且应避免产生假阳性。
第二种技术方案是基于胶体金法，检测原理与上述荧光免疫层析法相似。检测时，同样是取受检人群的口、鼻咽拭子，之后放入新冠病毒提取试剂中，将拭子头与提取试剂充分混匀，之后将混合液滴加到试纸条的加样孔处。当样本中含有相应的待测物且浓度不低于最低检测限时，样本待测物会与预包被的胶体金标记的抗体反应形成抗原-抗体复合物，随后复合物同样是通过毛细作用向前层析，在检测线处被抗体捕获聚集而显色，通过人眼观察即可判断新冠病毒抗原检测为阳性；如果样本中不含新冠病毒，则不会形成抗原-抗体复合物，检测线处不显色，证明样本为阴性。而无论样本中是否含有待测物质，质控线C处都应显色。而当观察到质控线C处没有显色时，表明层析过程异常，或者提取试剂失效，无论检测线T处是否显色，均不能判断待测样本的阴阳性。在此技术方案的流程中新冠病毒提取试剂对抗原蛋白的提取能力依然决定了检测的浓度下限，直接影响检测的效果，另外，其对试纸条预置的抗体及胶体金应无不良影响，同样也应避免产生假阳性。
目前广泛应用的是基于上述两种方案制备的含有荧光微球作为示踪标记物或胶体金颗粒标记新冠病毒抗原的特异性抗体的试纸条，利用病毒抗原与抗体特异的免疫结合原理来进行抗原筛查，此方法便捷且对进行检测的专业技术无特殊要求，适宜广大人群进行居家检测，但是检测的灵敏度要弱于核酸检测方法。而提高病毒抗原检测灵敏度的关键在于提高病毒抗原与抗体的结合能力。
因此，急需开发一种病毒蛋白提取保存试剂，其：首先需要具备兼容性，能同时应用于荧光免疫层析法和胶体金法两种检测技术方案中；其次需要具备高灵敏度，在以上两种技术方案中都能提高检测的准确性；第三需要具备高安全性，确保待测样本中的病毒在检测时能够迅速裂解失活以保证检测人员的安全；第四需要具备高稳定性，对抗原蛋白具有一定的保存能力，可应用于样本的较长距离运输而不影响检测结果。
发明内容
因此，本发明的主要目的在于提供一种病毒蛋白提取保存试剂，特别是病毒N蛋白提取保存试剂，其能够在快速裂解新冠病毒的同时不破坏其蛋白结构，将抗原N蛋白充分暴露出来，同时提取液中的有效成分能够加强抗原与抗体的结合能力，并且适配于荧光免疫层析法或胶体金法检测试纸条，将大大提高检测的灵敏度以及应用价值，有助于对病毒抗原进行检测。另外，该提取保存试剂具有对蛋白的保存能力，可应用于样本的较长距离运输而不影响检测结果。本发明的病毒蛋白提取保存试剂对于实现对新冠病毒的早筛查、早发现、早治疗的防治理念，维护居民公共安全具有重要意义。
为了实现上述目的，根据本发明的第一方面，本发明提供了一种病毒蛋白提取保存试剂，试剂包含以下组分：电解质，其浓度为0.5～2.5w/v％，非离子表面活性剂，其浓度为0.01～1w/v％，增稠剂，其浓度为0.1～2w/v％，螯合剂，其浓度为5～50mmol/L，蛋白稳定剂，其浓度为0.1～2w/v％，生物防腐剂，其浓度为0.05～2w/v％；和溶剂。
进一步地，试剂的pH为5.5～8.5。
进一步地，溶剂为无机溶剂，优选为水，更优选为去离子水。
进一步地，电解质的浓度为1～2.5w/v％，优选选自由以下各项组成的组：1w/v％、1.2w/v％、1.4w/v％、1.6w/v％、1.8w/v％、2w/v％、2.2w/v％和2.4w/v％；并且电解质包含缓冲化合物，缓冲化合物选自磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液和HEPES缓冲液。
进一步地，非离子表面活性剂的浓度为0.05～0.5w/v％，优选选自由以下各项组成的组：0.1w/v％、0.2w/v％、0.3w/v％、0.4w/v％和0.5w/v％；非离子表面活性剂包括聚乙二醇辛基苯基醚、聚山梨酯类和乙基苯基聚乙二醇中的一种或多种，优选选自由以下各项组成的组：Triton X-100、Tween-20和NP-40；更优选为NP-40。
进一步地，增稠剂的浓度为0.1～1w/v％，优选选自由以下各项组成的组：0.1w/v％、0.2w/v％、0.3w/v％、0.4w/v％、0.5w/v％、0.6w/v％、0.7w/v％和0.8w/v％；并且增稠剂包括聚酪蛋白酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、海藻糖中的一种或多种，优选为酪蛋白酸钠和聚乙二醇20000。
进一步地，螯合剂的浓度为5～10mmol/L，优选选自由以下各项组成的组：5mmol/L、6mmol/L、7mmol/L、8mmol/L或9mmol/L；并且螯合剂为乙二胺四乙酸(EDTA)二钠盐。
进一步地，蛋白稳定剂的浓度为0.1～1w/v％，优选选自由以下各项组成的组：0.5w/v％、0.6w/v％、0.7w/v％、0.8w/v％、0.9w/v％和1w/v％；蛋白稳定剂为无蛋白酶牛血清白蛋白。
进一步地，生物防腐剂的浓度为0.1～1w/v％，优选选自由以下各项组成的组：0.1w/v％、0.2w/v％、0.3w/v％、0.4w/v％和0.5w/v％；生物防腐剂包括Proclin-300、Proclin-950、BND-10、BIT-10中的一种或多种，优选为Proclin-950和BIT-10。
根据本发明的第二方面，本发明提供了制备本发明的第一方面的病毒蛋白提取保存试剂的方法，其特征在于，方法包括以下步骤：
(1)将电解质、非离子表面活性剂、增稠剂、螯合剂、蛋白稳定剂加入溶剂中，溶解；(2)调节pH值到7.5～8.0；(3)加入生物防腐剂，定容；和(4)除菌。
进一步地，电解质的浓度为0.5～2.5w/v％，优选为1～2.5w/v％，更优选选自由以下各项组成的组：1w/v％、1.2w/v％、1.4w/v％、1.6w/v％、1.8w/v％、2w/v％、2.2w/v％和2.4w/v％；电解质包含缓冲化合物，缓冲化合物选自磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液和HEPES缓冲液；非离子表面活性剂的浓度为0.01～1w/v％，优选为0.05～0.5w/v％，更优选选自由以下各项组成的组：0.1w/v％、0.2w/v％、0.3w/v％、0.4w/v％和0.5w/v％；非离子表面活性剂包括聚乙二醇辛基苯基醚、聚山梨酯类和乙基苯基聚乙二醇中的一种或多种，优选选自由以下各项组成的组：Triton X-100、Tween-20和NP-40；更优选为NP-40；增稠剂的浓度为0.1～2w/v％，优选为0.1～1w/v％，更优选选自由以下各项组成的组：0.1w/v％、0.2w/v％、0.3w/v％、0.4w/v％、0.5w/v％、0.6w/v％、0.7w/v％和0.8w/v％；增稠剂包括聚酪蛋白酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、海藻糖中的一种或多种，优选为酪蛋白酸钠和聚乙二醇20000；螯合剂的浓度为5～50mmol/L，优选为5～10mmol/L，更优选选自由以下各项组成的组：5mmol/L、6mmol/L、7mmol/L、8mmol/L或9mmol/L；并且螯合剂为乙二胺四乙酸(EDTA)二钠盐；蛋白稳定剂的浓度为0.1～2w/v％，优选为0.1～1w/v％，更优选选自由以下各项组成的组：0.5w/v％、0.6w/v％、0.7w/v％、0.8w/v％、0.9w/v％和1w/v％；蛋白稳定剂为无蛋白酶牛血清白蛋白；液体生物防腐剂的浓度为0.05～2w/v％，优选为0.1～1w/v％，更优选选自由以下各项组成的组：0.1w/v％、0.2w/v％、0.3w/v％、0.4w/v％和0.5w/v％；生物防腐剂包括Proclin-300、Proclin-950、BND-10、BIT-10中的一种或多种，优选为Proclin-950和BIT-10。
根据本发明的第三方面，本发明提供了根据本发明的第一方面的病毒蛋白提取保存试剂在制备病毒样本保存试剂盒中的应用，试剂盒可用于选自由以下各项组成的组的样本类型：鼻拭子、咽拭子、口咽拭子、鼻咽抽取物、呼吸道抽取物、深咳痰液、支气管灌洗液、肺泡灌洗液、血液样品、血清样品、血细胞样品、粪便样品和眼结膜拭子。
进一步地，试剂盒是基于荧光免疫层析法或胶体金法制备的。
根据本发明的第四方面，本发明提供了一种病毒样本保存试剂盒，试剂盒包含根据本发明的第一方面的病毒蛋白提取保存试剂或根据本发明的第二方面的方法制备的病毒蛋白提取保存试剂。
根据本发明的第五方面，本发明提供了一种病毒蛋白的提取方法，其使用根据本发明的第一方面的病毒蛋白提取保存试剂或根据本发明的第二方面的方法制备的病毒蛋白提取保存试剂进行提取。
根据本发明的第六方面，本发明提供了一种病毒蛋白的保存方法，其使用根据本发明的第一方面的病毒蛋白提取保存试剂或根据本发明的第二方面的方法制备的病毒蛋白提取保存试剂进行保存。
应用本发明的技术方案提供了一种病毒蛋白提取保存试剂，其首先具备兼容性，能同时应用于荧光免疫层析法和胶体金法两种检测技术方案中；其次具备高灵敏度，在以上两种技术方案中都能提高检测的准确性，均不会出现假阳性；具备高安全性，具有较强的病毒裂解作用确保待测样本中的病毒在检测时能够迅速裂解失活；并且具备高稳定性，对抗原蛋白具有一定的保存能力，可应用于样本的较长距离运输而不影响检测结果。还提供了一种病毒蛋白提取保存试剂的制备方法、该病毒蛋白提取保存试剂应用、包含该病毒蛋白提取保存试剂的试剂盒、使用该病毒蛋白提取保存试剂的病毒蛋白的提取方法和使用该病毒蛋白提取保存试剂的病毒蛋白的保存方法。
具体实施方式
呈现以下描述以使本领域普通技术人员能够获得和使用各种实施方式。特定装置、技术和应用程序的描述仅作为实例提供。对本文描述的实例的各种修改对于本领域普通技术人员将是显而易见的，并且在不脱离各种实施方式的范围的情况下，本文中定义的一般原理可以应用于其他实例和应用。因此，各种实施方式不旨在限于本文描述和示出的实例，而是与符合权利要求的范围相一致。需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将结合实施例来详细说明本发明。
如背景技术部分所描述的，目前广泛应用的是基于上述两种方案制备的含有荧光微球作为示踪标记物或胶体金颗粒标记新冠病毒抗原的特异性抗体的试纸条，此方法便捷且对进行检测的专业技术无特殊要求，适宜广大人群进行居家检测，但是检测的灵敏度要弱于核酸检测方法。而提高病毒抗原检测灵敏度的关键在于提高病毒抗原与抗体的结合能力。由于上述问题，因此需要对病毒蛋白提取保存试剂进行改善，以提高兼容性、提高灵敏度，同时也需要具备安全性和稳定性。
为了达到上述目的，在一种典型的实施方式中，病毒蛋白提取保存试剂包含以下组分：电解质，其浓度为0.5～2.5w/v％，非离子表面活性剂，其浓度为0.01～1w/v％，增稠剂，其浓度为0.1～2w/v％，螯合剂，其浓度为5～50mmol/L，蛋白稳定剂，其浓度为0.1～2w/v％，生物防腐剂，其浓度为0.05～2w/v％，和溶剂；并且试剂的pH为5.5～8.5。
溶剂用于溶解病毒蛋白提取保存试剂的各组分，只要不影响试剂的最终性能即可。通常，出于适用的考虑，溶剂优选为无机溶剂，更优选为水。去离子水是特别适合的。
电解质包括一些缓冲化合物，其缓冲pH值范围较广，可依据需要配置各种pH值的酸性、碱性和中性缓冲液。电解质的浓度为0.5～2.5w/v％，以将pH调节在5.5～8.5的中性范围，且在此范围内pH受温度影响较小，缓冲能力很强，缓冲液被稀释后pH变化小，从而维持制剂的稳定性。此外，通过包含一定量的钾盐和钠盐，可以在维持渗透压的同时通过盐析作用提高对病毒抗原N蛋白的浓缩能力。
非离子表面活性剂由于不能在水中解离成离子，因此稳定性高，酸、碱、离子对它的影响较小。当非离子表面活性剂作用于病毒细胞时，通过破坏脂质双分子层来破裂细胞，从而释放病毒抗原蛋白。此外，相对于SDS、脱氧胆酸钠、胍盐等强力的离子型表面活性剂，非离子表面活性剂在溶液中以相对较弱的作用力如疏水作用力、氢键等与蛋白质结合，这类相互作用通常不会引起蛋白质构象的强烈改变，因此可以保持抗原N蛋白的抗原性。当浓度在0.01～1w/v％范围内时是特别适合的。
增稠剂因其分子中分别具有亲水基团和疏水基团而可以诱导溶液中大分子的聚集，使局部蛋白浓度提高，对提高检测的灵敏度有重要贡献。同时也起到改变各类细胞的生物膜结构，使细胞质膜的脂类分子发生疏散的作用。因此起到提取和浓缩病毒抗原N蛋白的作用。当浓度在0.1～2w/v％范围内时是特别适合的。
螯合剂用于络合金属离子，尤其是二价金属离子，是多数酶类保持催化活性所必须的，因此常用做核酸酶、蛋白酶的抑制剂。在本发明的试剂中，螯合剂通过抑制蛋白酶的作用避免病毒N蛋白降解，从而提高了试剂的保存能力。当螯合剂的浓度在5～50mmol/L范围内时是特别适合的。
蛋白在高浓度时更不容易降解，而在低浓度时极易降解而失活。因此，添加蛋白稳定剂可以通过提高溶液中不影响抗原抗体结合的蛋白质的浓度来维持蛋白的稳定，并且，蛋白稳定剂具有一定的维持渗透压和pH缓冲的能力，因此可以对病毒抗原N蛋白起到保护和稳定的作用，从而延长保存时间。本发明使用的蛋白稳定剂不含有IgG球蛋白。当蛋白稳定剂的浓度在0.1～2w/v％范围内时是特别适合的。
生物防腐剂具有广谱抑菌能力，对细菌、真菌、酵母菌均有效，具有良好的配伍性，可与表面活性剂配伍，不含金属离子，化学稳定性高，并且适用的酸碱范围广，与水完全兼容，另外不会对抗原抗体结合产生影响。因此可有效的起到抑菌，延长样本保存时间的作用。当生物防腐剂的浓度在0.05～2w/v％范围内时是特别适合的。
在一个优选的实施方式中，电解质的浓度为1～2.5w/v％，优选选自由以下各项组成的组：1w/v％、1.2w/v％、1.4w/v％、1.6w/v％、1.8w/v％、2w/v％、2.2w/v％和2.4w/v％；并且电解质包含缓冲化合物，缓冲化合物选自磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液和HEPES缓冲液。本发明的磷酸盐缓冲液可以用磷酸氢二钠和磷酸二氢钾按照不同比例进行混合。由于它有二级解离，所以缓冲的pH值范围很广。Tris缓冲液对生物化学过程干扰很小，不与钙、镁离子及重金属离子发生沉淀。HEPES在开放式培养或细胞观察时能维持较恒定的pH值，并对细胞无毒性作用。通过选择上述浓度的上述缓冲化合物能够使pH值稳定在5.5～8.5环境，保证病毒提取保存试剂的性能。
在一个优选的实施方式中，非离子表面活性剂的浓度为0.05～0.5w/v％，优选选自由以下各项组成的组：0.1w/v％、0.2w/v％、0.3w/v％、0.4w/v％和0.5w/v％；非离子表面活性剂包括聚乙二醇辛基苯基醚、聚山梨酯类和乙基苯基聚乙二醇中的一种或多种，优选选自由以下各项组成的组：Triton X-100、Tween-20和NP-40；更优选为NP-40。
在一个优选的实施方式中，增稠剂的浓度为0.1～1w/v％，优选选自由以下各项组成的组：0.1w/v％、0.2w/v％、0.3w/v％、0.4w/v％、0.5w/v％、0.6w/v％、0.7w/v％和0.8w/v％；并且增稠剂包括聚酪蛋白酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、海藻糖中的一种或多种，优选为酪蛋白酸钠和聚乙二醇20000。
在一个优选的实施方式中，螯合剂的浓度为5～10mmol/L，优选选自由以下各项组成的组：5mmol/L、6mmol/L、7mmol/L、8mmol/L或9mmol/L；并且螯合剂为乙二胺四乙酸(EDTA)二钠盐。
在一个优选的实施方式中，蛋白稳定剂的浓度为0.1～1w/v％，优选选自由以下各项组成的组：0.5w/v％、0.6w/v％、0.7w/v％、0.8w/v％、0.9w/v％和1w/v％；蛋白稳定剂为无蛋白酶牛血清白蛋白。
在一个优选的实施方式中，生物防腐剂的浓度为0.1～1w/v％，优选选自由以下各项组成的组：0.1w/v％、0.2w/v％、0.3w/v％、0.4w/v％和0.5w/v％；生物防腐剂包括Proclin-300、Proclin-950、BND-10、BIT-10中的一种或多种，优选为Proclin-950和BIT-10。
在一种典型的实施方式中，制备本法明的病毒蛋白提取保存试剂的方法，包括以下步骤：(1)将电解质、非离子表面活性剂、增稠剂、螯合剂、蛋白稳定剂加入溶剂中，溶解；(2)调节pH值到7.5～8.0；(3)加入生物防腐剂，定容；和(4)除菌。通过上述操作和获得本发明的病毒蛋白提取保存试剂。
在一个优选的实施方式中，电解质的浓度为0.5～2.5w/v％，优选为1～2.5w/v％，更优选选自由以下各项组成的组：1w/v％、1.2w/v％、1.4w/v％、1.6w/v％、1.8w/v％、2w/v％、2.2w/v％和2.4w/v％；电解质包含缓冲化合物，缓冲化合物选自磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液和HEPES缓冲液；非离子表面活性剂的浓度为0.01～1w/v％，优选为0.05～0.5w/v％，更优选选自由以下各项组成的组：0.1w/v％、0.2w/v％、0.3w/v％、0.4w/v％和0.5w/v％；非离子表面活性剂包括聚乙二醇辛基苯基醚、聚山梨酯类和乙基苯基聚乙二醇中的一种或多种，优选选自由以下各项组成的组：Triton X-100、Tween-20和NP-40；更优选为NP-40；增稠剂的浓度为0.1～2w/v％，优选为0.1～1w/v％，更优选选自由以下各项组成的组：0.1w/v％、0.2w/v％、0.3w/v％、0.4w/v％、0.5w/v％、0.6w/v％、0.7w/v％和0.8w/v％；增稠剂包括聚酪蛋白酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、海藻糖中的一种或多种，优选为酪蛋白酸钠和聚乙二醇20000；螯合剂的浓度为5～50mmol/L，优选为5～10mmol/L，更优选选自由以下各项组成的组：5mmol/L、6mmol/L、7mmol/L、8mmol/L或9mmol/L；并且螯合剂为乙二胺四乙酸(EDTA)二钠盐；蛋白稳定剂的浓度为0.1～2w/v％，优选为0.1～1w/v％，更优选选自由以下各项组成的组：0.5w/v％、0.6w/v％、0.7w/v％、0.8w/v％、0.9w/v％和1w/v％；蛋白稳定剂为无蛋白酶牛血清白蛋白；生物防腐剂的浓度为0.05～2w/v％，优选为0.1～1w/v％，更优选选自由以下各项组成的组：0.1w/v％、0.2w/v％、0.3w/v％、0.4w/v％和0.5w/v％；生物防腐剂包括Proclin-300、Proclin-950、BND-10、BIT-10中的一种或多种，优选为Proclin-950和BIT-10。
在一种典型的实施方式中，提供了本发明的病毒蛋白提取保存试剂在制备病毒样本保存试剂盒中的应用，其中，试剂盒可用于选自由以下各项组成的组的样本类型：鼻拭子、咽拭子、口腔拭子、鼻咽抽取物、呼吸道抽取物、痰液、支气管灌洗液、肺泡灌洗液、血液样品、血清样品、血细胞样品、粪便样品和眼结膜拭子，并且试剂盒是基于荧光免疫层析法或胶体金法制备的。
在一种典型的实施方式中，提供了一种病毒样本保存试剂盒，其中，试剂盒包含本发明的病毒蛋白提取保存试剂或根据本发明的方法制备的病毒蛋白提取保存试剂。
在一种典型的实施方式中，提供了一种病毒蛋白的提取方法，其中，使用根据本发明的病毒蛋白提取保存试剂或根据本发明的方法制备的病毒蛋白提取保存试剂进行提取。
在一种典型的实施方式中，提供了一种病毒蛋白的保存方法，其中，使用根据本发明的病毒蛋白提取保存试剂或根据本发明的方法制备的病毒蛋白提取保存试剂进行保存。
以下结合具体实施例对本发明作进一步详细描述，这些实施例不能理解为限制本发明所要求保护的范围。
实施例1：
在本实施例中，制备了病毒蛋白提取保存试剂和病毒蛋白提取对比试剂。
按照如下组成和含量配制本发明的病毒蛋白提取保存试剂：
试剂1，包含以下组分：0.8w/v％的NaCl、0.02w/v％的KCl、0.14w/v％的Na2HPO4、0.03w/v％的KH2PO4、0.5w/v％的Tween-20、0.5w/v％的NP-40、1.2w/v％的酪蛋白酸钠和0.8w/v％的聚乙二醇20000、5mmol/L的EDTA·2Na、1w/v％的牛血清白蛋白、0.1w/v％的Proclin-950和0.5w/v％的BIT-10，溶剂为去离子水，试剂1的pH＝7.5。
试剂2，包含以下组分：2.2w/v％的NaCl、0.02w/v％的KCl、0.14w/v％的Na2HPO4、0.03w/v％的KH2PO4、0.5w/v％的NP-40，0.8w/v％的酪蛋白酸钠和0.5w/v％的聚乙二醇20000、5mmol/L的EDTA·2Na、1w/v％的牛血清白蛋白、0.1w/v％的Proclin-950和0.5w/v％的BIT-10，溶剂为去离子水，试剂2的pH＝7.5。
试剂3，包含以下组分：2.4w/v％的NaCl、0.02w/v％的KCl、0.14w/v％的Na2HPO4、0.03w/v％的KH2PO4，0.5w/v％的NP-40，0.8w/v％的酪蛋白酸钠和0.1w/v％的聚乙二醇20000、5mmol/L的EDTA·2Na、1w/v％的牛血清白蛋白、0.1w/v％的Proclin-950和0.5w/v％的BIT-10，溶剂为去离子水，试剂3的pH＝7.5。
试剂4，与试剂1的不同之处在于酪蛋白酸钠的浓度为0.8w/v％。
试剂5，与试剂1的不同之处在于聚乙二醇20000的浓度为0.5w/v％，酪蛋白酸钠的浓度为0.8w/v％。
试剂6，与试剂1的不同之处在于不包含聚乙二醇20000。
试剂7，与试剂1的不同之处在于不包含氯化钠。
试剂8，与试剂1的不同之处在于不包含Tween-20。
试剂9，与试剂2的不同之处在于不包含氯化钠。
试剂10，与试剂2的不同之处在于不包含酪蛋白酸钠。
按照如下组成和含量配制病毒蛋白提取对比试剂：
试剂11，与试剂1的不同之处在于聚乙二醇20000的含量提高至1％。
试剂12，与试剂2的不同之处在于不包含NP-40(即，不包含表面活性剂)。
试剂13，与试剂2的不同之处在于NP-40的含量提高至1.5％。
试剂14，与试剂2的不同之处在于不包含聚乙二醇20000和酪蛋白酸钠(即，不含增稠剂)。
试剂15，与试剂2的不同之处在于聚乙二醇20000的含量提高至1％，酪蛋白酸钠的含量也提高至1.2％。
试剂16，与试剂2的不同之处在于不包含牛血清蛋白(即，不包含稳定剂)。
试剂17，与试剂2的不同之处在于牛血清蛋白的含量提高至2.5％。
实施例2：
在本实施例中，进行病毒提取保存试剂的特异性和兼容性测试。
测试方法：
(1)将正常健康人群的鼻咽拭子混匀作为阴性样本，加入上述10种病毒提取保存试剂和7种对比试剂中进行测试。
(2)使用2种新冠抗原荧光免疫层析检测卡(华大因源：PGI202203131001、华大因源：PGI202203214001)，以及5种新冠抗原胶体金检测卡(华大基因：3079202202002、诺维赞：V2022020757B、明德生物：C22030301、亚辉龙：20220302、万孚：W196203161)，按照各自说明书的流程进行检测。
(3)在检测开始后15分钟时观察检测卡并记录、判定结果。
判定标准：
阴性结果：a.荧光免疫层析：检测仪读值，仅质控线处(C值)大于阈值(500)；b.胶体金：肉眼观察仅可见一条紫红色质控线(C线)。
阳性结果：a.荧光免疫层析：检测仪读值，检测线处(T值)与质控线处(C值)均大于阈值(500)；b.胶体金：肉眼观察可见两条清晰的紫红色线条，一条为质控线(C线)，一条为T检测线。
无效结果：a.荧光免疫层析：检测仪读值，质控线处(C值)小于阈值(500)；b.胶体金：质控线(C线)处未出现肉眼可见的紫红色线条，表示该项目检测错误或检测结果无效，应对该项目重新测试。
首先进行所用各供应商新冠抗原检测试剂盒中的试剂的特异性和兼容性测试：
对供应商的试剂进行特异性测试：使用供应商的荧光免疫层析法和胶体金法检测试剂盒中的原装试剂分别加入阴性样本，在各试剂盒原装的检测卡上进行检测，结果如以下表1所示：
表1：
“+”代表阳性，“-”代表阴性
表1中的结果显示：供应商的试剂没有出现假阳性。说明各试剂盒的特异性合格，可用于后续测试。
然后对供应商的试剂进行兼容性测试：使用供应商的胶体金法检测试剂加入阴性样本，在荧光免疫层析法检测卡上进行阴性样本的检测，结果如以下表2所示：
表2：
“+”代表阳性，“-”代表阴性
表2中的结果显示：供应商的试剂有假阳性出现。说明市面上两种检测方法的抗原提取试剂不能相互兼容。
然后进行本发明中各试剂的特异性和兼容性测试，测试方法如上文所述，对于试剂1至试剂10，其结果如以下表3至表12所示：
表3.试剂1的测试结果：
“+”代表阳性，“-”代表阴性
表3中的结果显示：在荧光免疫层析法检测和胶体金法的阴性样本检测中均不会出现假阳性。这表明试剂1具有良好的特异性和兼容性，可用于荧光免疫层析法或胶体金试剂盒的新冠抗原检测。
表4.试剂2的测试结果：
“+”代表阳性，“-”代表阴性
表4中的结果显示：在荧光免疫层析法检测和胶体金法的阴性样本检测中均不会出现假阳性。说明试剂2具有良好的特异性和兼容性，可用于荧光免疫层析法或胶体金试剂盒的新冠抗原检测。
表5.试剂3的测试结果：
“+”代表阳性，“-”代表阴性
表5中的结果显示：在荧光免疫层析法检测和胶体金法的阴性样本检测中均不会出现假阳性。这说明在试剂2的基础上稍微增加电解质含量，同时降低增稠剂含量得到的试剂3也具有良好的特异性和兼容性，也可用于荧光免疫层析法或胶体金试剂盒的新冠抗原检测。
表6.试剂4的测试结果：。
“+”代表阳性，“-”代表阴性
表6中的结果显示：在荧光免疫层析法检测和胶体金法的阴性样本检测中均不会出现假阳性。这说明试剂4也具有良好的特异性和兼容性，可用于荧光免疫层析法或胶体金试剂盒的新冠抗原检测。
表7.试剂5的测试结果：
“+”代表阳性，“-”代表阴性
表7中的结果显示：在荧光免疫层析法检测和胶体金法的阴性样本检测中均不会出现假阳性。这说明试剂5也可用于荧光免疫层析法或胶体金试剂盒的新冠抗原检测。
表8.试剂6的测试结果：
“+”代表阳性，“-”代表阴性
表8中的结果显示：在荧光免疫层析法检测和胶体金法的阴性样本检测中均不会出现假阳性。这说明试剂6也可用于荧光免疫层析法或胶体金试剂盒的新冠抗原检测。
表9.试剂7的测试结果：
“+”代表阳性，“-”代表阴性
表9中的结果显示：在荧光免疫层析法检测和胶体金法的阴性样本检测中均不会出现假阳性。这说明试剂7也可用于荧光免疫层析法或胶体金试剂盒的新冠抗原检测。
表10.试剂8的测试结果：
“+”代表阳性，“-”代表阴性
表10中的结果显示：在荧光免疫层析法检测和胶体金法的阴性样本检测中均不会出现假阳性。这说明试剂8也可用于荧光免疫层析法或胶体金试剂盒的新冠抗原检测。
表11.试剂9的测试结果：
“+”代表阳性，“-”代表阴性
表11中的结果显示：在荧光免疫层析法检测和胶体金法的阴性样本检测中均不会出现假阳性。这说明试剂9也可用于荧光免疫层析法或胶体金试剂盒的新冠抗原检测。
表12.试剂10的测试结果：
“+”代表阳性，“-”代表阴性
表12中的结果显示：在荧光免疫层析法检测和胶体金法的阴性样本检测中均不会出现假阳性。这说明试剂10也可用于荧光免疫层析法或胶体金试剂盒的新冠抗原检测。
然后针对对比例的各试剂也进行了特异性和兼容性的测试，测试方法如上文所述，对于试剂11至试剂17，其结果如下表13至表16所示：
表13.试剂11的测试结果：
“+”代表阳性，“-”代表阴性
表14.试剂13的测试结果：
“+”代表阳性，“-”代表阴性
表15.试剂15的测试结果：
“+”代表阳性，“-”代表阴性
表16.试剂17的测试结果：
“+”代表阳性，“-”代表阴性
从以上表格中可以看出，对于试剂11、13、15、17，在荧光免疫层析法检测中会出现阴性样本的假阳性检出，说明过量的表面活性剂、增稠剂、蛋白稳定剂会对病毒抗原检测的特异性造成负面影响。另外，试剂15在荧光免疫层析法检测中频繁出现假阳性，证明电解质氯化钠与增稠剂的含量同时提高会导致特异性变差，因此，这些关键成分的适宜浓度范围是影响特异性的关键因素。
表17.试剂12、14、16的测试结果：
“+”代表阳性，“-”代表阴性
对于试剂12、14、16，得到与试剂2，3一致的结果：在荧光免疫层析法检测和胶体金法的阴性样本检测中均不会出现假阳性，说明推荐浓度范围内的氯化钠、表面活性剂、增稠剂，蛋白稳定剂并不会影响荧光免疫层析法检测和胶体金法检测的特异性和兼容性。
实施例3：
在本实施例中，进行病毒提取保存试剂的灵敏度验证。
测试方法：
(1)在上述10种病毒提取保存试剂和7种对比试剂以及所用检测试剂盒的原装试剂中加入新冠病毒的N蛋白溶液标准物，并稀释至以下浓度：200pg/mL、100pg/mL、50pg/mL、25pg/mL、10pg/mL、5pg/mL，或加入新冠病毒的已灭活病毒培养物，并稀释至以下浓度：1x10^5copies/mL、5x10^4copies/mL、1x10^4copies/mL。
(2)使用2种新冠抗原荧光免疫层析检测卡(华大因源：PGI202203131001、华大因源：PGI202203214001)，以及5种新冠抗原胶体金检测卡(华大基因：3079202202002、诺维赞：V2022020757B、明德生物：C22030301、亚辉龙:20220302、万孚：W196203161)，对试剂(1～10)和对比试剂(11～17)以及上述2种荧光免疫层析试剂盒的原装试剂和上述5种胶体金试剂盒的原装试剂按照各自说明书的流程进行检测。每个实验重复三次。
(3)在检测开始后15分钟时观察检测卡并记录、判定结果。
判定标准：与实施例2中一致。
表18.试剂1的检测结果：
“+”代表阳性，“-”代表阴性
从表格中可见：在搭配2种荧光免疫层析检测试纸条时，200pg/mL、100pg/mL、50pg/mL、25pg/mL、10pg/mL的N蛋白和1x10^5copies/mL和5x10^4copies/mL的病毒培养物检测中均表现为阳性；5pg/mL的N蛋白和1x10^4copies/mL的病毒培养物检测中均无法有效检出，而在5家供应商的胶体金法检测中，200pg/mL、100pg/mL、50pg/mL、25pg/mL的N蛋白和1x10^5copies/mL病毒培养物检测中表现为阳性；5x10^4copies/mL病毒培养物检测中表现为弱阳性，同时并不能完全检出；5pg/mL的N蛋白和1x10^4copies/mL的病毒培养物检测中表现为阴性。
以上数据说明：试剂1具有较强的病毒裂解作用以及较高的抗原检测效果，兼容于荧光免疫层析法和胶体金试剂盒的新冠抗原检测。
表19.试剂2的检测结果：
“+”代表阳性，“-”代表阴性
从表格中可见：在搭配2种荧光免疫层析检测试纸条时，200pg/mL、100pg/mL、50pg/mL、25pg/mL、10pg/mL、5pg/mL的N蛋白和1x10^5copies/mL、5x10^4copies/mL和1x10^4copies/mL的病毒培养物检测中均表现为阳性；同时，在5家供应商的胶体金法检测中，200pg/mL、100pg/mL、50pg/mL、25pg/mL的N蛋白和1x10^5copies/mL病毒培养物检测中表现为阳性，其中25pg/mL的N蛋白表现为弱阳性；10pg/mL、5pg/mL的N蛋白、5x10^4copies/mL和1x10^4copies/mL的病毒培养物检测中表现为阴性。
以上数据说明：试剂2相较于试剂1具有更强的病毒裂解作用以及较高的抗原检测效果，尤其在荧光免疫层析法检测灵敏度上具有明显优势。并且兼容于荧光免疫层析法和胶体金试剂盒的新冠抗原检测。
表20.试剂3的检测结果：
“+”代表阳性，“-”代表阴性
从表格中可见：在搭配2种荧光免疫层析检测试纸条时，200pg/mL、100pg/mL、50pg/mL、25pg/mL、10pg/mL、5pg/mL的N蛋白和1x10^5copies/mL、5x10^4copies/mL和1x10^4copies/mL的病毒培养物检测中均表现为阳性；同时，在5家供应商的胶体金法检测中，200pg/mL、100pg/mL、50pg/mL、25pg/mL的N蛋白和1x10^5copies/mL病毒培养物检测中表现为阳性，其中25pg/mL的N蛋白表现为弱阳性；10pg/mL、5pg/mL的N蛋白、5x10^4copies/mL和1x10^4copies/mL的病毒培养物检测中表现为阴性。
以上数据说明：试剂3也具有较强的病毒裂解作用以及较高的抗原检测效果，其与试剂2表现相似，证明适当提高电解质含量的同时降低部分增稠剂含量也可达到类似效果。并且也兼容于荧光免疫层析法和胶体金试剂盒的新冠抗原检测。
表21.试剂6，试剂7和试剂8的胶体金法检测结果：
/>
“+”代表阳性，“-”代表阴性
从表格中可见：在5家供应商的胶体金法检测中，试剂6的灵敏度表现较试剂1大幅下降，说明PEG20000对提高检测灵敏度有重要作用；试剂7的灵敏度表现较试剂1小幅下降，说明氯化钠对提高检测灵敏度也有辅助作用；试剂8的灵敏度表现较试剂1相差不大，说明Tween-20对提高检测灵敏度的作用有限。
表22.试剂9，10的检测结果：
“+”代表阳性，“-”代表阴性
从表格中可见：在2家供应商的荧光免疫层析法和5家供应商的胶体金法检测中，检测灵敏度与试剂2，3相比均有所下降，说明氯化钠，酪蛋白酸钠对提高检测灵敏度均有重要作用。
由于在上述实施例2的试剂11～17进行的特异性测试中，试剂11、13、15、17在荧光免疫层析法检测中均有假阳性出现，说明过量的表面活性剂、增稠剂、蛋白稳定剂对抗原检测特异性有不利影响，无法有效判断灵敏度。因此只选择试剂12、14、16进行灵敏度的测试。
表23.试剂12、14、16的测试结果：
“+”代表阳性，“-”代表阴性
结果表明：在缺少表面活性剂的试剂12中，病毒抗原检测灵敏度明显降低，在缺少增稠剂的试剂14中，阳性样本的检出受到严重影响，而在缺少蛋白稳定剂的试剂16中，病毒抗原检测灵敏度也明显降低。由此可见，表面活性剂、增稠剂和蛋白稳定剂都是影响检测灵敏度的关键因素，并且适宜的浓度范围对保证检测的灵敏度和维持检测的特异性至关重要。
为了进一步验证本发明中病毒提取保存试剂的兼容性优于市面上现有技术的试剂，对供应商的试剂进行以下测试：使用供应商的胶体金法检测试剂加入阳性样本，在荧光免疫层析法检测卡上进行阳性样本的检测。
表24.供应商的试剂阳性样本测试结果：
“+”代表阳性，“-”代表阴性
“+”代表阳性，“-”代表阴性
以上结果表明：检测灵敏度显著下降，并且由于上述实施例2中对供应商的试剂进行的兼容性测试结果显示阴性样本的检测会出现假阳性，因此阳性样本检测的阳性结果也存疑。进一步说明市面上两种检测方法的抗原提取试剂不能相互兼容。
实施例4：
在本实施例中，进行病毒提取保存试剂对样本的保存能力验证。
为了验证本发明中病毒提取保存试剂的保存能力，选择新冠病毒培养物分别加入到试剂1，2，3中，使病毒培养物浓度为1x107 copies/mL。为了更好的体现保存时间的差异对检测结果的影响，分别在室温和4℃条件下保存。之后用华大基因胶体金检测卡(3079202202002)进行检测结果并记录。
表25.试剂1的样本保存稳定性检测结果：
“+”代表阳性，“-”代表阴性
表26.试剂2的样本保存稳定性检测结果：
“+”代表阳性，“-”代表阴性
表27.试剂3的样本保存稳定性检测结果：
“+”代表阳性，“-”代表阴性
以上结果表明，在室温条件下病毒样本保存4小时内不会影响检测结果，室温保存6小时，会影响部分阳性结果的检出；8小时后严重影响检测结果。而在4℃条件下保存的样本，48小时内均能稳定检出。
实施例5：
在本实施例中，进行病毒提取保存试剂的通用性验证。
为了验证本发明的试剂的通用性，即可兼容非新冠病毒样本的抗原检测，我们选择了猪流行性腹泻病毒(PEDV)的抗原以及胶体金法PEDV抗原检测试剂盒(佑隆生物，生产批号：22052301)中的检测卡，搭配本发明中的试剂1、2、3进行了验证。检测方法如说明书所述。
表28.试剂1、2、3用于猪流行性腹泻病毒(PEDV)抗原检测的结果：
/>
“+”代表阳性，“-”代表阴性
结果显示本发明的试剂搭配PEDV胶体金检测卡的特异性好，不会出现假阳性；同时，灵敏度高，与原装试剂相比具有明显优势。
以上实施例的结果表明，本发明的方法利用各组分的合理配比，提供了一种病毒蛋白提取保存试剂，其首先具备兼容性，能同时应用于荧光免疫层析法和胶体金法两种检测技术方案中；其次具备高灵敏度，在以上两种技术方案中都能提高检测的准确性，均不会出现假阳性；具备高安全性，具有较强的病毒裂解作用确保待测样本中的病毒在检测时能够迅速裂解失活；并且具备高稳定性，对抗原蛋白具有一定的保存能力，可应用于样本的较长距离运输而不影响检测结果。
工业实用性
从以上的描述中，可以看出本发明提供一种病毒蛋白提取保存试剂，具体而言，其：
1)具备兼容性，能同时应用于荧光免疫层析法和胶体金法两种检测技术方案中；
2)具备高灵敏度，在荧光免疫层析法和胶体金法两种技术方案中都能提高检测的准确性，均不会出现假阳性；
3)具备高安全性，具有较强的病毒裂解作用确保待测样本中的病毒在检测时能够迅速裂解失活；并且
4)具备高稳定性，对抗原蛋白具有一定的保存能力，可应用于样本的较长距离运输而不影响检测结果。
本发明还提供了制备病毒蛋白提取保存试剂的方法、病毒蛋白提取保存试剂的应用、包含其的试剂盒、使用其的病毒蛋白的提取方法和使用其的病毒蛋白的保存方法。
Claims (16)
1.一种病毒蛋白提取保存试剂，其特征在于：
所述试剂包含以下组分中的一种或多种：
电解质，其浓度为0.5～2.5w/v％，
非离子表面活性剂，其浓度为0.01～1w/v％，
增稠剂，其浓度为0.1～2w/v％，
螯合剂，其浓度为5～50mmol/L，
蛋白稳定剂，其浓度为0.1～2w/v％，
生物防腐剂，其浓度为0.05～2w/v％，和
溶剂。
2.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于：所述试剂的pH为5.5～8.5。
3.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于：所述溶剂为无机溶剂，优选为水，更优选为去离子水。
4.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于：
所述电解质的浓度为1～2.5w/v％，优选选自由以下各项组成的组：1w/v％、1.2w/v％、1.4w/v％、1.6w/v％、1.8w/v％、2w/v％、2.2w/v％和2.4w/v％；并且
所述电解质包含缓冲化合物，所述缓冲化合物选自磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液和HEPES缓冲液。
5.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于：
所述非离子表面活性剂的浓度为0.05～0.5w/v％，优选选自由以下各项组成的组：0.1w/v％、0.2w/v％、0.3w/v％、0.4w/v％和0.5w/v％；
所述非离子表面活性剂包括聚乙二醇辛基苯基醚、聚山梨酯类和乙基苯基聚乙二醇中的一种或多种，优选选自由以下各项组成的组：Triton X-100、Tween-20和NP-40；更优选为NP-40。
6.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于：
所述增稠剂的浓度为0.1～1w/v％，优选选自由以下各项组成的组：0.1w/v％、0.2w/v％、0.3w/v％、0.4w/v％、0.5w/v％、0.6w/v％、0.7w/v％和0.8w/v％；并且
所述增稠剂包括聚酪蛋白酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、海藻糖中的一种或多种，优选为酪蛋白酸钠和聚乙二醇20000。
7.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于：
所述螯合剂的浓度为5～10mmol/L，优选选自由以下各项组成的组：5mmol/L、6mmol/L、7mmol/L、8mmol/L或9mmol/L；并且
所述螯合剂为乙二胺四乙酸(EDTA)二钠盐。
8.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于：
所述蛋白稳定剂的浓度为0.1～1w/v％，优选选自由以下各项组成的组：0.5w/v％、0.6w/v％、0.7w/v％、0.8w/v％、0.9w/v％和1w/v％；
所述蛋白稳定剂为无蛋白酶牛血清白蛋白。
9.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于：
所述生物防腐剂的浓度为0.1～1w/v％，优选选自由以下各项组成的组：0.1w/v％、0.2w/v％、0.3w/v％、0.4w/v％和0.5w/v％；
所述生物防腐剂包括Proclin-300、Proclin-950、BND-10、BIT-10中的一种或多种，优选为Proclin-950和BIT-10。
10.一种制备权利要求1-9中任一项所述的病毒蛋白提取保存试剂的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)将电解质、非离子表面活性剂、增稠剂、螯合剂、蛋白稳定剂加入溶剂中，溶解；
(2)调节pH值到7.5～8.0；
(3)加入生物防腐剂，定容；和
(4)除菌。
11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于：
所述电解质的浓度为0.5～2.5w/v％，优选为1～2.5w/v％，更优选选自由以下各项组成的组：1w/v％、1.2w/v％、1.4w/v％、1.6w/v％、1.8w/v％、2w/v％、
2.2w/v％和2.4w/v％；所述电解质包含缓冲化合物，所述缓冲化合物选自磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液和HEPES缓冲液；
所述非离子表面活性剂的浓度为0.01～1w/v％，优选为0.05～0.5w/v％，更优选选自由以下各项组成的组：0.1w/v％、0.2w/v％、0.3w/v％、0.4w/v％和0.5w/v％；所述非离子表面活性剂包括聚乙二醇辛基苯基醚、聚山梨酯类和乙基苯基聚乙二醇中的一种或多种，优选选自由以下各项组成的组：Triton X-100、Tween-20和NP-40；更优选为NP-40；
所述增稠剂的浓度为0.1～2w/v％，优选为0.1～1w/v％，更优选选自由以下各项组成的组：0.1w/v％、0.2w/v％、0.3w/v％、0.4w/v％、0.5w/v％、0.6w/v％、0.7w/v％和0.8w/v％；所述增稠剂包括聚酪蛋白酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、海藻糖中的一种或多种，优选为酪蛋白酸钠和聚乙二醇20000；
所述螯合剂的浓度为5～50mmol/L，优选为5～10mmol/L，更优选选自由以下各项组成的组：5mmol/L、6mmol/L、7mmol/L、8mmol/L或9mmol/L；并且所述螯合剂为乙二胺四乙酸(EDTA)二钠盐；
所述蛋白稳定剂的浓度为0.1～2w/v％，优选为0.1～1w/v％，更优选选自由以下各项组成的组：0.5w/v％、0.6w/v％、0.7w/v％、0.8w/v％、0.9w/v％和1w/v％；所述蛋白稳定剂为无蛋白酶牛血清白蛋白；
所述生物防腐剂的浓度为0.05～2w/v％，优选为0.1～1w/v％，更优选选自由以下各项组成的组：0.1w/v％、0.2w/v％、0.3w/v％、0.4w/v％和0.5w/v％；所述生物防腐剂包括Proclin-300、Proclin-950、BND-10、BIT-10中的一种或多种，优选为Proclin-950和BIT-10。
12.根据权利要求1至9中任一项所述的病毒蛋白提取保存试剂在制备病毒样本保存试剂盒中的应用，其特征在于，
所述试剂盒可用于选自由以下各项组成的组的样本类型：鼻拭子、咽拭子、口腔拭子、鼻咽抽取物、呼吸道抽取物、痰液、支气管灌洗液、肺泡灌洗液、血液样品、血清样品、血细胞样品、粪便样品和眼结膜拭子。
13.根据权利要求1至9中任一项所述的病毒蛋白提取保存试剂在制备病毒样本保存试剂盒中的应用，其特征在于，所述试剂盒是基于荧光免疫层析法或胶体金法制备的。
14.一种病毒样本保存试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含根据权利要求1至9中任一项所述的病毒蛋白提取保存试剂或根据权利要求10或11所述的方法制备的病毒蛋白提取保存试剂。
15.一种病毒蛋白的提取方法，其特征在于，使用根据权利要求1至9中任一项所述的病毒蛋白提取保存试剂或根据权利要求10或11所述的方法制备的病毒蛋白提取保存试剂进行提取。
16.一种病毒蛋白的保存方法，其特征在于，使用根据权利要求1至9中任一项所述的病毒蛋白提取保存试剂或根据权利要求10或11所述的方法制备的病毒蛋白提取保存试剂进行保存。
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| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |