CN118045228A - 一种基于类弹性蛋白的组织填充剂的制备方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本申请属于生物材料技术领域，具体公开了一种基于类弹性蛋白的组织填充剂的制备方法及应用。组织填充剂的制备方法包括如下步骤：将透明质酸分散于超纯水中，得到透明质酸水溶液；将类弹性蛋白分散于超纯水中，得到类弹性蛋白水溶液；将戊二醛分散于超纯水中，得到戊二醛水溶液；将透明质酸水溶液和类弹性蛋白水溶液混合，得到混合液，然后再将戊二醛水溶液加入至混合液中，搅拌，加入复合微球，即得组织填充剂。本申请中透明质酸与类弹性蛋白互溶混合，会改善胶原溶液的黏度，再与戊二醛进行交联，形成的凝胶比单纯类弹性蛋白与戊二醛形成的凝胶软，配合复合微球进行填充后无异物感，且酸性条件下凝胶稳定。
Description
技术领域
本申请涉及生物材料技术领域，尤其是涉及一种基于类弹性蛋白的组织填充剂的制备方法及应用。
背景技术
人皮肤组织通过含有蛋白质例如胶原蛋白或弹性蛋白等和糖胺聚糖的细胞外基质来维持其结构，当软组织受到外部冲击或发生老化时，可以通过注入填充剂来增加和扩充软组织体积，从而以非外科的方式修复和矫正变形的软组织形状。
现有的填充剂包括透明质酸、胶原蛋白等物质，透明质酸即玻尿酸，由与构成人体的成分相似的多糖N-乙酰基-D-葡萄糖胺D-葡萄糖醛酸构成，常为无菌灌装产品，未经终端灭菌需要非常严格的中间过程控制，生产管理成本高昂，且对最终产品的无菌性的保障性较低。
而且，透明质酸降解时间过快，难以维持植入后的临床应用效果，即便经过交联的透明质酸钠凝胶也只能维持半年的降解时间。因此，亟需提供一种降解时间长的组织填充物，可应用于医用或美容。
发明内容
为了改善透明质酸降解时间过快，难以维持植入后的临床应用效果的问题，本申请提供了一种基于类弹性蛋白的组织填充剂的制备方法及应用。
第一方面，本申请提供了一种基于类弹性蛋白的组织填充剂的制备方法，采用如下的技术方案：一种基于类弹性蛋白的组织填充剂的制备方法，包括如下步骤：
（1）将透明质酸分散于超纯水中，搅拌均匀，得到透明质酸水溶液；
（2）将类弹性蛋白分散于超纯水中，搅拌均匀，得到类弹性蛋白水溶液；
（3）将戊二醛分散于超纯水中，搅拌均匀，得到戊二醛水溶液；
（4）将步骤（1）的透明质酸水溶液和步骤（2）的类弹性蛋白水溶液混合搅拌，搅拌时间为2-3h，得到混合液，然后再将步骤（3）的戊二醛水溶液加入至混合液中，继续搅拌，搅拌时间为5-20min，加入复合微球，搅拌30-35min，即得组织填充剂；
所述复合微球的制备方法，包括如下步骤：
（1）将壳聚糖分散于醋酸溶液中，在60-65℃下搅拌30-50min，然后加入十二烷基硫酸钠，继续搅拌，得到混合液；
（2）将纳米SiO2分散于氢氧化钠溶液中，在温度80-85℃下搅拌1-2h，水洗，然后再分散于无水乙醇中，加入碳纳米管，超声2-3h，干燥，得到混合物；
（3）将步骤（1）的混合液喷涂于步骤（2）的混合物表面，在90-95℃下干燥2-3h，得到复合微球。
通过采用上述技术方案，分别将透明质酸、类弹性蛋白和戊二醛分散于超纯水中，得到的水溶液具有较好的分散性、均匀性和稳定性，然后再将透明质酸水溶液和类弹性蛋白水溶液混合，改善了胶原溶液的黏度，得到的水溶液具有较好的稳定性，再与戊二醛进行交联，形成的凝胶比单纯类弹性蛋白与戊二醛形成的凝胶软，具有较好的力学性能，进行填充后无异物感，且酸性条件下凝胶稳定，具有较长的有效填充时间。
复合微球负载在透明质酸、类弹性蛋白和戊二醛形成的网络结构中，增加了凝胶的弹性，复合微球具有一定的支撑性，为凝胶增加支撑性能，进而提高了组织填充物的有效填充时间。
壳聚糖具有较好的生物活性和生物相容性，能够影响细胞的代谢和细胞的生长，起到修复、保湿皮肤的作用；壳聚糖溶解于醋酸中，具有良好的水溶性、生物相容性和膜形成性能，加入十二烷基硫酸钠作为交联剂，与壳聚糖形成交联网络结构，提高了壳聚糖的弹性。
纳米SiO2作为生物活性玻璃，填充到皮肤中，能够对机体组织进行修复、替代与再生、具有能使组织和材料之间形成键合的作用，纳米SiO2的降解产物能够促进皮肤生长因子的生成、促进细胞的繁衍、增强成骨细胞的基因表达和骨组织的生长；纳米SiO2分散于氢氧化钠溶液中，氢氧化钠溶液对纳米SiO2进行一定程度的剥蚀，提高了纳米SiO2的比表面积和孔隙率，有助于碳纳米管的负载，碳纳米管负载在纳米SiO2的表面以及孔隙内，进而提高了纳米SiO2的力学性能，改善了纳米SiO2的支撑性能。
在混合物表面喷涂混合液，使得混合液包覆混合物，增加了纳米SiO2和碳纳米管之间的连接性，使得碳纳米管牢固的负载在纳米SiO2的表面，进而提高了复合微球的力学稳定性，有助于后续应用于皮肤中，提高复合微球在皮肤中的稳定性，进而延长组织填充物的有效填充时间。
优选的，所述组织填充剂包括透明质酸、类弹性蛋白、戊二醛和复合微球。
通过采用上述技术方案，透明质酸具有很强的锁水性，可以填充皮肤，增加皮肤容积，使皮肤看起来饱满、丰盈、有弹性；类弹性蛋白是仿照天然弹性蛋白氨基酸序列特性人工合成的蛋白质聚合物，具有较好的生物相容性和弹性功能，应用于皮肤中，能够为皮肤提供抵抗反复压缩和变形的能力；戊二醛作为胶原蛋白凝固剂，植入皮肤后起到定点支撑，让皮肤变的更加紧致，具有非常好的提拉塑形作用，植入后不变形、不位移，支撑力更强。
透明质酸与类弹性蛋白互溶混合，会改善胶原溶液的黏度，再与戊二醛进行交联，形成的凝胶比单纯类弹性蛋白与戊二醛形成的凝胶软，进行填充后无异物感，且酸性条件下凝胶稳定，具有良好的生物活性，透明质酸、类弹性蛋白和戊二醛三者之间发生交联，形成的填充剂具有供给细胞营养以及促进纤维母细胞的再造能力时间更长，凝固后更长效，延长了维持时间，填充物有效填充时间在半年以上，此外，除了能进行填充的基础效果，还兼具原透明质酸的功效；复合微球负载在透明质酸、类弹性蛋白和戊二醛形成的交联网络中，具有较好的弹性和支撑性，提高了组织填充物的弹性，应用于皮肤中具有较好的支撑力，进而提高了应用于皮肤的效果，同时使得填充物具有较长的填充时间。
优选的，所述透明质酸水溶液的浓度为1-5mg/mL，类弹性蛋白水溶液的浓度为50-650mg/L，戊二醛水溶液的浓度为1-3%。
通过采用上述技术方案，进一步限定透明质酸、类弹性蛋白和戊二醛的水溶液浓度，得到具有弹性较好，有效填充时间更长的组织填充剂，透明质酸、类弹性蛋白和戊二醛配合具有较好的填充效果。
优选的，所述透明质酸水溶液与类弹性蛋白水溶液的质量比为1:1-4。
通过采用上述技术方案，进一步限定透明质酸水溶液与类弹性蛋白水溶液的质量比，使得透明质酸水溶液与类弹性蛋白水溶液配合具有较好的溶液黏度和力学稳定性，后续与戊二醛进行混合，得到的组织填充物具有较好的力学性能。
优选的，所述混合液与戊二醛水溶液的质量比为1: 0.5-20。
通过采用上述技术方案，进一步限定混合液与戊二醛水溶液的质量比，使得制备的组织填充物具有较优的力学性能和弹性，透明质酸、类弹性蛋白和戊二醛配合形成凝胶网络结构，使得填充物具有较长的填充时间，进而有助于皮肤的填充。
优选的，优选的，步骤（1）、（2）、（3）和（4）中搅拌的速率为800-900rpm。
通过采用上述技术方案，进一步限定各个步骤的搅拌速率，得到分散均匀的水溶液，使得最终制备的组织填充物具有较优的力学稳定性，后续应用于皮肤中，具有较长的有效填充时间。
优选的，所述复合微球的粒径为30-50μm。
优选的，所述壳聚糖、纳米SiO2和碳纳米管的质量比为1:0.2-0.5:0.06-0.09。
通过采用上述技术方案，进一步限定壳聚糖、纳米SiO2和碳纳米管的质量比在一定范围内，得到弹性较好的复合微球，碳纳米管负载在纳米SiO2的表面，壳聚糖包覆负载碳纳米管的纳米SiO2，进而增加了纳米SiO2和碳纳米管之间的连接性，提高了纳米SiO2的稳定性，有助于后续提高复合微球的稳定性。
第二方面，本申请还提供了一种基于类弹性蛋白的组织填充剂的制备方法制备的组织填充剂在医疗美容材料中的应用。
综上所述，本申请具有如下有益效果：1、本申请中透明质酸与类弹性蛋白互溶混合，会改善胶原溶液的黏度，再与戊二醛进行交联，形成的凝胶比单纯类弹性蛋白与戊二醛形成的凝胶软，进行填充后无异物感，且酸性条件下凝胶稳定，具有良好的生物活性，透明质酸、类弹性蛋白和戊二醛三者之间发生交联，形成的填充剂具有供给细胞营养以及促进纤维母细胞的再造能力时间更长，凝固后更长效，延长了维持时间，填充物有效填充时间在半年以上。
2、本申请中分别将透明质酸、类弹性蛋白和戊二醛分散于超纯水中，得到的水溶液具有较好的分散性、均匀性和稳定性，然后再将透明质酸水溶液和类弹性蛋白水溶液混合，改善了胶原溶液的黏度，得到的水溶液具有较好的稳定性，再与戊二醛进行交联，形成的凝胶比单纯类弹性蛋白与戊二醛形成的凝胶软，具有较好的力学性能，进行填充后无异物感，且酸性条件下凝胶稳定，具有较长的有效填充时间。
3、本申请中进一步限定透明质酸、类弹性蛋白和戊二醛的水溶液浓度，得到具有弹性较好，有效填充时间更长的组织填充剂，透明质酸、类弹性蛋白和戊二醛配合具有较好的填充效果。
附图说明
图1为类弹性蛋白的氨基酸序列。
具体实施方式
以下结合实施例对本申请作进一步详细说明。
实施例及对比例中所使用的原料均可通过市售获得。
实施例
一种基于类弹性蛋白的组织填充剂的制备方法，包括如下步骤：
（1）将3g透明质酸分散于超纯水中，搅拌均匀，得到透明质酸水溶液；
（2）将300mg类弹性蛋白分散于超纯水中，搅拌均匀，得到类弹性蛋白水溶液；
（3）将2g戊二醛分散于超纯水中，搅拌均匀，得到戊二醛水溶液；
（4）将1kg步骤（1）的透明质酸水溶液和2.5kg步骤（2）的类弹性蛋白水溶液混合搅拌，搅拌时间为3h，得到混合液，然后再将10kg步骤（3）的戊二醛水溶液加入至混合液中，继续搅拌，搅拌时间为15min，加入6g复合微球，搅拌32min，即得组织填充剂；复合微球的粒径为30-50μm。
复合微球的制备方法，包括如下步骤：
（1）将1kg壳聚糖分散于2L质量分数为20%的醋酸溶液中，在65℃下搅拌50min，然后加入0.2kg十二烷基硫酸钠，继续搅拌2h，得到混合液；
（2）将纳米SiO2分散于2.5L质量分数为10%的氢氧化钠溶液中，在温度85℃下搅拌2h，水洗，然后再分散于3L无水乙醇中，加入碳纳米管，超声3h，干燥，得到混合物；
（3）将步骤（1）的混合液喷涂于步骤（2）的混合物表面，在95℃下干燥3h，得到复合微球，喷涂的厚度为0.1mm。
壳聚糖、纳米SiO2和碳纳米管的质量比为1:0.2:0.09。
透明质酸水溶液的浓度为3mg/mL，类弹性蛋白水溶液的浓度为300mg/L，戊二醛水溶液的浓度为2%。
透明质酸水溶液与类弹性蛋白水溶液的质量比为1:2.5。
混合液与戊二醛水溶液的质量比为1: 10，步骤（1）、（2）、（3）和（4）中搅拌的速率为850rpm。
所使用类弹性蛋白均由北京瞬行生物技术有限公司合成获得，类弹性蛋白的氨基酸序列见图1；其中，下划线部分为重复单元[(VPGKG)9]，粗体部分为间隔物(VPGXG)。
实施例2
一种基于类弹性蛋白的组织填充剂的制备方法，包括如下步骤：
（1）将5g透明质酸分散于超纯水中，搅拌均匀，得到透明质酸水溶液；
（2）将650mg类弹性蛋白分散于超纯水中，搅拌均匀，得到类弹性蛋白水溶液；
（3）将3g戊二醛分散于超纯水中，搅拌均匀，得到戊二醛水溶液；
（4）将1kg步骤（1）的透明质酸水溶液和4kg步骤（2）的类弹性蛋白水溶液混合搅拌，搅拌时间为3h，得到混合液，然后再将20kg步骤（3）的戊二醛水溶液加入至混合液中，继续搅拌，搅拌时间为20min，加入6g复合微球，搅拌30min，即得组织填充剂。
透明质酸水溶液的浓度为5mg/mL，类弹性蛋白水溶液的浓度为650mg/L，戊二醛水溶液的浓度为3%。
透明质酸水溶液与类弹性蛋白水溶液的质量比为1:4。
混合液与戊二醛水溶液的质量比为1: 20。
步骤（1）、（2）、（3）和（4）中搅拌的速率为900rpm。
实施例3
一种基于类弹性蛋白的组织填充剂的制备方法，包括如下步骤：
（1）将1g透明质酸分散于超纯水中，搅拌均匀，得到透明质酸水溶液；
（2）将50mg类弹性蛋白分散于超纯水中，搅拌均匀，得到类弹性蛋白水溶液；
（3）将1g戊二醛分散于超纯水中，搅拌均匀，得到戊二醛水溶液；
（4）将1kg步骤（1）的透明质酸水溶液和1kg步骤（2）的类弹性蛋白水溶液混合搅拌，搅拌时间为2h，得到混合液，然后再将1kg步骤（3）的戊二醛水溶液加入至混合液中，继续搅拌，搅拌时间为5min，加入6g复合微球，搅拌35min，即得组织填充剂。
透明质酸水溶液的浓度为1mg/mL，类弹性蛋白水溶液的浓度为50mg/L，戊二醛水溶液的浓度为1%。
透明质酸水溶液与类弹性蛋白水溶液的质量比为1:1。
混合液与戊二醛水溶液的质量比为1: 0.5。
步骤（1）、（2）、（3）和（4）中搅拌的速率为800rpm。
实施例4
一种基于类弹性蛋白的组织填充剂的制备方法，与实施例1的区别在于，将透明质酸、类弹性蛋白、戊二醛和复合微球混合，然后分散于超纯水中，搅拌4h，得到组织填充剂。
实施例5
一种基于类弹性蛋白的组织填充剂的制备方法，与实施例1的区别在于，透明质酸水溶液的浓度为0.5mg/mL。
实施例6
一种基于类弹性蛋白的组织填充剂的制备方法，与实施例1的区别在于，透明质酸水溶液的浓度为7mg/mL。
实施例7
一种基于类弹性蛋白的组织填充剂的制备方法，与实施例1的区别在于，类弹性蛋白水溶液的浓度为30mg/L。
实施例8
一种基于类弹性蛋白的组织填充剂的制备方法，与实施例1的区别在于，类弹性蛋白水溶液的浓度为700mg/L。
实施例9
一种基于类弹性蛋白的组织填充剂的制备方法，与实施例1的区别在于，戊二醛水溶液的浓度为0.2%。
实施例10
一种基于类弹性蛋白的组织填充剂的制备方法，与实施例1的区别在于，戊二醛水溶液的浓度为4%。
实施例11
一种基于类弹性蛋白的组织填充剂的制备方法，与实施例1的区别在于，透明质酸水溶液与类弹性蛋白水溶液的质量比为1:0.2。
实施例12
一种基于类弹性蛋白的组织填充剂的制备方法，与实施例1的区别在于，透明质酸水溶液与类弹性蛋白水溶液的质量比为1:6。
实施例13
一种基于类弹性蛋白的组织填充剂的制备方法，与实施例1的区别在于，混合液与戊二醛水溶液的质量比为1:0.1。
实施例14
一种基于类弹性蛋白的组织填充剂的制备方法，与实施例1的区别在于，混合液与戊二醛水溶液的质量比为1:25。
实施例15
一种基于类弹性蛋白的组织填充剂的制备方法，与实施例15的区别在于，复合微球的制备方法中，壳聚糖、纳米SiO2和碳纳米管的质量比为1:0.5:0.06。
实施例16
一种基于类弹性蛋白的组织填充剂的制备方法，与实施例15的区别在于，壳聚糖、纳米SiO2和碳纳米管的质量比为1:0.8:0.01。
对比例
对比例1
一种基于类弹性蛋白的组织填充剂的制备方法，与实施例1的区别在于，不添加透明质酸。
对比例2
一种基于类弹性蛋白的组织填充剂的制备方法，与实施例1的区别在于，不添加类弹性蛋白。
对比例3
一种基于类弹性蛋白的组织填充剂的制备方法，与实施例15的区别在于，复合微球的制备方法中，不添加纳米SiO2。
对比例4
一种基于类弹性蛋白的组织填充剂的制备方法，与实施例15的区别在于，复合微球的制备方法中，不添加碳纳米管。
对比例5
一种基于类弹性蛋白的组织填充剂的制备方法，与实施例15的区别在于，复合微球的制备方法中，不添加壳聚糖。
性能检测试验
将实施例1-16和对比例1-5制备得到的组织填充物进行性能测试；
降解率测试：实验动物（SD大鼠）用3％的戊巴比妥腹腔注射（30.0 mg/kg）麻醉后，背部皮肤乙醇消毒，用1mL注射器将实施例和对比例制备的组织填充物注射到大鼠背部皮下组织中，注射剂量400μL；在注射后第3、6、8、12个月对各组动物随机分三批无菌条件下取注射位点皮下组织及其周边组织，固定于4%多聚甲醛中，1周后，经梯度乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋的组织切片，然后脱蜡复水，用Harris苏木素染色，0.5%盐酸乙醇分色，95%乙醇伊红染色，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固，显微镜下观察注射部位组织填充物的吸收降解情况；
粘性模量和弹性模量测试：对实施例和对比例制备的组织填充物进行相关性能测试，粘性模量和弹性模量测试采用安东帕旋转流变仪(MCR301)测试，检测条件：将样品升温至室温25℃，再恒温30min，0.1％的应变下0.1Hz频率扫描；结果见表1。
表1实施例和对比例的测试数据
从表1可以看出，本申请实施例1-3、实施例15制备的组织填充剂具有较好的弹性和有效填充时间，其中，实施例1在注射3个月的降解率为10%，6个月的降解率为30%，8个月的降解率为50%，12个月的降解率为80%，粘性模量为30.8Pa，弹性模量为325.6Pa。表明透明质酸与类弹性蛋白互溶混合，会改善胶原溶液的黏度，再与戊二醛进行交联，与复合微球复合，形成的凝胶具有较好的弹性，同时具有较长的有效填充时间。
实施例4组织填充剂的制备方法中，将透明质酸、类弹性蛋白、戊二醛和超纯水一起混合，而没有分步骤混合，从表1可以看出，在注射3个月的降解率为20%，6个月的降解率为40%，8个月的降解率为61%，12个月的降解率为91%，粘性模量为39.7Pa，弹性模量为300.1Pa。表明分别将透明质酸、类弹性蛋白、戊二醛和复合微球分散于超纯水中，得到的水溶液具有较好的分散性、均匀性和稳定性，得到的组织填充物具有较优的弹性和有效填充时间。
实施例5-6改变透明质酸水溶液的浓度，从表1可以看出，实施例5在注射3个月的降解率为16%，6个月的降解率为35%，8个月的降解率为58%，12个月的降解率为87%，粘性模量为36.4Pa，弹性模量为310.2Pa。表明进一步限定透明质酸的水溶液浓度，得到具有弹性较好，有效填充时间更长的组织填充剂，透明质酸的水溶液配合类弹性蛋白和戊二醛的水溶液具有较好的填充效果。
实施例7-8改变类弹性蛋白水溶液的浓度，从表1可以看出，实施例7在注射3个月的降解率为18%，6个月的降解率为39%，8个月的降解率为59%，12个月的降解率为89%，粘性模量为37.5Pa，弹性模量为305.6Pa，表明进一步限定类弹性蛋白水溶液浓度，得到具有弹性较好，有效填充时间更长的组织填充剂，类弹性蛋白的水溶液配合透明质酸和戊二醛的水溶液具有较好的填充效果。
实施例9-10改变戊二醛水溶液的浓度，从表1可以看出，实施例9在注射3个月的降解率为15%，6个月的降解率为33%，8个月的降解率为56%，12个月的降解率为86%，粘性模量为35.9Pa，弹性模量为311.9Pa。表明进一步限定戊二醛的水溶液浓度，得到具有弹性较好，有效填充时间更长的组织填充剂，戊二醛的水溶液配合类弹性蛋白和透明质酸的水溶液具有较好的填充效果。
实施例11-12改变透明质酸水溶液与类弹性蛋白水溶液的质量比，从表1可以看出，实施例11在注射3个月的降解率为22%，6个月的降解率为43%，8个月的降解率为64%，12个月的降解率为93%，粘性模量为45.0Pa，弹性模量为293.4Pa。表明进一步限定透明质酸水溶液与类弹性蛋白水溶液的质量比，使得透明质酸水溶液与类弹性蛋白水溶液配合具有较好的溶液黏度和力学稳定性，后续与戊二醛进行混合，得到的组织填充物具有较好的力学性能。
实施例13-14改变混合液与戊二醛水溶液的质量比，从表1可以看出，实施例13在注射3个月的降解率为23%，6个月的降解率为45%，8个月的降解率为66%，12个月的降解率为95%，粘性模量为45.6Pa，弹性模量为291.0Pa。表明进一步限定混合液与戊二醛水溶液的质量比，使得制备的组织填充物具有较优的力学性能和弹性，透明质酸、类弹性蛋白和戊二醛配合形成凝胶网络结构，使得填充物具有较长的填充时间，进而有助于皮肤的填充。
实施例16 改变壳聚糖、纳米SiO2和碳纳米管的质量比。从表1可以看出，在注射3个月的降解率为15%，6个月的降解率为34%，8个月的降解率为55%，12个月的降解率为86%，粘性模量为33.1Pa，弹性模量为310.4Pa。表明壳聚糖、纳米SiO2和碳纳米管的质量比在一定范围内，得到弹性较好的复合微球，碳纳米管负载在纳米SiO2的表面，壳聚糖包覆负载碳纳米管的纳米SiO2，进而增加了纳米SiO2和碳纳米管之间的连接性，提高了纳米SiO2的稳定性，有助于后续提高复合微球的稳定性。对比例1不添加透明质酸，从表1可以看出，在注射3个月的降解率为40%，6个月的降解率为80%，8个月和12个月的降解率均为100%，粘性模量为25.6Pa，弹性模量为335.1Pa。表明仅有类弹性蛋白和戊二醛制备的组织填充物具有较快的降解率，8个月降解完全，同时具有较好的弹性。
对比例2不添加类弹性蛋白，从表1可以看出，在注射3个月的降解率为60%，6个月、8个月和12个月的降解率均为100%，粘性模量为65.1Pa，弹性模量为250.3Pa。表明仅有透明质酸和戊二醛制备的组织填充物具有较快的降解率，6个月降解完全，粘性较高，但是弹性下降。
对比例3中复合微球的制备方法中不添加纳米SiO2。从表1可以看出，在注射3个月的降解率为30%，6个月的降解率为50%，8个月的降解率为70%，12个月的降解率为100%，粘性模量为52.3Pa，弹性模量为280.1Pa。表明纳米SiO2作为生物活性玻璃，填充到皮肤中，能够对机体组织进行修复、替代与再生、具有能使组织和材料之间形成键合的作用，纳米SiO2的降解产物能够促进皮肤生长因子的生成、促进细胞的繁衍、增强成骨细胞的基因表达和骨组织的生长。
对比例4中复合微球的制备方法中不添加碳纳米管。从表1可以看出，在注射3个月的降解率为35%，6个月的降解率为54%，8个月的降解率为76%，12个月的降解率为100%，粘性模量为56.8Pa，弹性模量为270.1Pa。表明碳纳米管负载在纳米SiO2的表面以及孔隙内，进而提高了纳米SiO2的力学性能，改善了纳米SiO2的支撑性能，后续改善复合微球的弹性。
对比例5中复合微球的制备方法中不添加壳聚糖。从表1可以看出，在注射3个月的降解率为28%，6个月的降解率为49%，8个月的降解率为67%，12个月的降解率为100%，粘性模量为50.1Pa，弹性模量为283.1Pa。表明在混合物表面喷涂混合液，使得混合液包覆混合物，增加了纳米SiO2和碳纳米管之间的连接性，使得碳纳米管牢固的负载在纳米SiO2的表面，进而提高了复合微球的力学稳定性，有助于后续应用于皮肤中，提高复合微球在皮肤中的稳定性，进而延长组织填充物的有效填充时间。
本具体实施例仅仅是对本申请的解释，其并不是对本申请的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本申请的权利要求范围内都受到专利法的保护。
Claims (9)
1.一种基于类弹性蛋白的组织填充剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）将透明质酸分散于超纯水中，搅拌均匀，得到透明质酸水溶液；
（2）将类弹性蛋白分散于超纯水中，搅拌均匀，得到类弹性蛋白水溶液；
（3）将戊二醛分散于超纯水中，搅拌均匀，得到戊二醛水溶液；
（4）将步骤（1）的透明质酸水溶液和步骤（2）的类弹性蛋白水溶液混合搅拌，搅拌时间为2-3h，得到混合液，然后再将步骤（3）的戊二醛水溶液加入至混合液中，继续搅拌，搅拌时间为5-20min，加入复合微球，搅拌30-35min，即得组织填充剂；
所述复合微球的制备方法，包括如下步骤：
（1）将壳聚糖分散于醋酸溶液中，在60-65℃下搅拌30-50min，然后加入十二烷基硫酸钠，继续搅拌，得到混合液；
（2）将纳米SiO2分散于氢氧化钠溶液中，在温度80-85℃下搅拌1-2h，水洗，然后再分散于无水乙醇中，加入碳纳米管，超声2-3h，干燥，得到混合物；
（3）将步骤（1）的混合液喷涂于步骤（2）的混合物表面，在90-95℃下干燥2-3h，得到复合微球。
2.根据权利要求1所述的一种基于类弹性蛋白的组织填充剂的制备方法，其特征在于，所述组织填充剂包括透明质酸、类弹性蛋白、戊二醛和复合微球。
3.根据权利要求1所述的一种基于类弹性蛋白的组织填充剂的制备方法，其特征在于，所述透明质酸水溶液的浓度为1-5mg/mL，类弹性蛋白水溶液的浓度为50-650mg/L，戊二醛水溶液的浓度为1-3%。
4.根据权利要求1所述的一种基于类弹性蛋白的组织填充剂的制备方法，其特征在于，所述透明质酸水溶液与类弹性蛋白水溶液的质量比为1:1-4。
5. 根据权利要求1所述的一种基于类弹性蛋白的组织填充剂的制备方法，其特征在于，所述混合液与戊二醛水溶液的质量比为1: 0.5-20。
6.根据权利要求1所述的一种基于类弹性蛋白的组织填充剂的制备方法，其特征在于，步骤（1）、（2）、（3）和（4）中搅拌的速率为800-900rpm。
7.根据权利要求1所述的一种基于类弹性蛋白的组织填充剂的制备方法，其特征在于，所述复合微球的粒径为30-50μm。
8.根据权利要求1所述的一种基于类弹性蛋白的组织填充剂的制备方法，其特征在于，所述壳聚糖、纳米SiO2和碳纳米管的质量比为1:0.2-0.5:0.06-0.09。
9.根据权利要求1-9任一项所述的一种基于类弹性蛋白的组织填充剂的制备方法制备的组织填充剂在医疗美容材料中的应用。
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