CN118019984A - 身体衰弱的测试方法、身体衰弱的测试试剂、身体衰弱的治疗药候选物质的筛选方法、精神衰弱的测试方法、精神衰弱的测试试剂以及精神衰弱的治疗药候选物质的筛选方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种能够检测身体衰弱的测试方法以及用于其的测量试剂。本发明的身体衰弱的测试方法包括：测定步骤，所述测定步骤测定被检者的生物样本中的自由基的清除能力。

Description

身体衰弱的测试方法、身体衰弱的测试试剂、身体衰弱的治疗 药候选物质的筛选方法、精神衰弱的测试方法、精神衰弱的测 试试剂以及精神衰弱的治疗药候选物质的筛选方法
技术领域
本发明涉及身体衰弱的测试方法、身体衰弱的测试试剂、身体衰弱的治疗药候选物质的筛选方法、精神衰弱的测试方法、精神衰弱的测试试剂以及精神衰弱的治疗药候选物质的筛选方法。
背景技术
随着社会老龄化，处于健康状态和需要护理状态的中间阶段的衰弱的患者数正在增加。衰弱包括身体衰弱和精神衰弱等。身体衰弱与肌力下降引起的肌肉减少症等有关(非专利文献1)。
现有技术文献
非专利文献
非专利文献1：「フレイルの意義」、[online]、日本老年医学会杂志、[令和3年8月18日検索]、互联网<https://www.jpn-geriat-soc.or.jp/publications/other/pdf/review_51_6_497.pdf>
发明内容
发明所要解决的课题
肌肉减少症可以通过在身体衰弱的状态下进行干预来抑制向需要护理状态的发展速度。因此，需要能够检测身体衰弱的测试方法。
因此，本发明的目的在于提供一种能够检测身体衰弱的测试方法以及用于其的测量试剂。
课题解决手段
为了达到上述目的，本发明的身体衰弱的测试方法(以下也称为“测试方法”)包括：测量步骤(以下也称为“第一测定步骤”)，在所述测定步骤中测量被检者的生物样本中的自由基的清除能力。
本发明的身体衰弱的测试试剂(以下也称为“第一测试试剂”)包括：自由基的清除能力的测量试剂。
本发明的身体衰弱的治疗药候选物质的筛选方法(以下也称为“筛选方法”)包括：选择步骤(以下也称为“第一选择步骤”)，在所述选择步骤中从被检物质中选择降低自由基的清除能力的活性物质作为身体衰弱的治疗药候选物质。
本发明的检测方法(以下也称为“第一检测方法”)是有身体衰弱嫌疑的被检者的自由基的清除能力的检测方法，所述检测方法包括：检测步骤，在所述检测步骤中使用自由基的清除能力的测量试剂检测所述被检者的生物样本中的自由基的清除能力。
本发明的精神衰弱的测试方法(以下也称为“第二测试方法”)包括：测量步骤(以下也称为“第二测量步骤”)，在所述测量步骤中测量被检者的生物样本中的自由基的清除能力的测定值以及超氧化物歧化酶(SOD)活性。
本发明的精神衰弱的测试试剂盒(以下也称为“测试试剂盒”)包括自由基的清除能力的测量试剂和超氧化物歧化酶(SOD)活性的测量试剂。
本发明的精神衰弱的治疗药候选物质的筛选方法(以下也称为“第二筛选方法”)包括：选择步骤(以下也称为“第二选择步骤”)，在所述选择步骤中从被检物质中选择降低自由基的清除能力且提高超氧化物歧化酶(SOD)活性的活性物质作为精神衰弱的治疗药候选物质。
本发明的检测方法(以下也称为“第二检测方法”是有精神衰弱嫌疑的被检者的自由基的清除能力以及超氧化物歧化酶(SOD)活性的检测方法，所述检测方法包括：
第一检测步骤，在所述第一检测步骤中使用自由基的清除能力的测量试剂检测所述被检者的生物样本中的自由基的清除能力；和
第二检测步骤，在所述第二检测步骤中使用SOD活性的测量试剂检测所述被检者的生物样本中的SOD活性。
发明效果
根据本发明，可以通过使用被检者来源的生物样本来检测所述被检者是否有身体衰弱。
附图说明
图1是示出实施例1中的各被检者的唾液量的图表。
图2是示出实施例1中的各年龄层中的被检者的唾液量的平均值的图表。
图3是示出实施例1中的被检者的握力最大值的图表。图3(A)示出各被检者的握力最大值的结果，图3(B)示出各被检者的握力最大值的平均的结果。
图4是示出实施例1中的各年龄层中的被检者的握力最大值以及各图表中的握力最大值的平均值的图表。
图5是示出实施例1中的各唾液样品中的ESR的结果和示出各被检者的i-STrap值的结果的图表。
图6是示出实施例1中的各唾液样品中的ESR的结果和示出各年龄层中的被检者的i-STrap值的平均值的结果的图表。
图7是示出实施例1中的各被检者的握力与自由基的清除能力的相关性的图表。
图8是示出实施例1中的各50岁以下的被检者的握力与自由基的清除能力的相关性的图表。
图9是示出实施例1中的各50岁以上70岁以下的被检者的握力与自由基的清除能力的相关性的图表。
图10是示出实施例1中的各70岁以上的被检者的握力与自由基的清除能力的相关性的图表。
图11是示出实施例2中的各被检者的唾液量的图表。
图12是示出实施例2中的ESR频谱中14N和β、γ位的1H的内部磁场来源的12条吸收线(峰值)的图。
图13是示出实施例2中的各唾液样品中的ESR的结果的图表。
具体实施方式
<定义>
在本说明书中，“身体衰弱的测试”意味着例如身体衰弱的检测、身体衰弱的判定、身体衰弱的筛选、身体衰弱的预防效果的判定、身体衰弱的治疗效果的判定、治疗药起效的身体衰弱的患者的判定、对各个对身体衰弱的患者起效的治疗药的判定、用于身体衰弱的诊断的检查方法、或用于身体衰弱的治疗的检查等。所述“身体衰弱的判定”例如既可以是身体衰弱有无的判定、测试、检测或诊断，也可以是罹患身体衰弱的可能性(风险度)的判定、测试、检测或诊断，也可以是身体衰弱治疗后的预后的预测，也可以是身体衰弱治疗药的治疗效果的判定，可被每一者替换。
在本说明书中，“精神衰弱的测试”意味着例如精神衰弱的检测、精神衰弱的判定、精神衰弱的筛选、精神衰弱的预防效果的判定、精神衰弱的治疗效果的判定、治疗药起效的精神衰弱的患者的判定、对各个对精神衰弱的患者起效的治疗药的判定、用于精神衰弱的诊断的检查方法、或用于精神衰弱的治疗的检查等。所述“精神衰弱的判定”例如既可以是精神衰弱有无的判定、测试、检测或诊断，也可以是罹患精神衰弱的可能性(风险度)的判定、测试、检测或诊断，也可以是精神衰弱治疗后的预后的预测，也可以是精神衰弱治疗药的治疗效果的判定，可被每一者替换。
在本说明书中，“罹患”既可以意味着正在患该疾病的状态，也可以意味着该疾病的发病。
在本说明书中，“处理”意味着治疗性处理和/或预防性处理。在本说明书中，“治疗”是指疾病、病症或障碍的治疗、治愈、防止、抑制、缓解、改善，或疾病、病症或障碍进展的停止、抑制、减少或延迟。在本说明书中，“预防”意味着疾病或病症的发病的可能性的降低，或疾病或病症的发病的延迟。所述“治疗”例如可以是对出现目标疾病的患者的治疗，也可以是对目标疾病的模型动物的治疗。
在本说明书中，“衰弱”(Frailty)意味着基于随着年龄增长的各种功能减退(预备能力的降低)对于各种出现的健康障碍的脆弱性增加的状态。所述衰弱通常以包括身体和/或精神问题的概念使用。
在本说明书中，“身体衰弱”是包含在所述衰弱中，指与年龄增长相伴的体力和肌力下降而容易引起健康障碍的状态。所述身体衰弱例如可以对移动能力、肌力、认知功能、营养状态、平衡能力、耐力、身体活动性、以及社会性等的构成要素进行多项综合评价。所述身体衰弱的诊断基准例如也可以使用CHS基准(Cardiovascular Health Study：CHSindex)或衰弱指数(Frailty index)等进行评价。在使用所述CHS基准进行评价时，如下述表1所示，在所述身体衰弱的评价中，将被检者的(1)体重减少、(2)主观疲劳感(低能量状态、易疲劳性)、(3)活动性(日常生活活动量)的降低、(4)动作：步行速度(身体能力)的降低、以及(5)肌力(握力)的降低这5个项目作为衰弱的代表性征兆来评价身体衰弱。在所述CHS基准中，如果所述5个项目中的3个项目符合则评价为衰弱，如果1-2个项目符合则评价为衰弱前期(身体衰弱的前阶段)。在本说明书中，身体衰弱例如也可以组合其他评价方法进行评价。作为其他评价方法，例如，可以列举出衰弱筛查量表(Frail scale)、埃德蒙衰弱量表(Edmonton Frail Scale，EFS)、Tilburg衰弱指数(Tilburg Frailty Indicator，TFI)等。
[表1]
在本说明书中，“轻度认知障碍”意味着例如在国际疾病分类第11版(ICD11)中被分类为ICD代码F06.7(轻度认知障碍)的疾病。所述MCI例如可以使用MoCA-J(日语版MoCA)进行评价，在评分为25分以下的情况下，可以评价为MCI。在本说明书中，MCI例如可以组合其他评价方法进行评价。作为其他评价方法，例如，有日本版连线测试(Trail Making Test日本版，TMT-J)、临床痴呆评定量表(Clinical Dementia Rating：CDR)、功能评定分期(Functional Assessment Staging：FAST)、改良长谷川痴呆量表(Hasegawa’sDementiaScal-Revised：HDS-R)、简易精神状态检查表(Mini-Mental State Examination：MMSE)、DASC-21(社区综合护理系统中痴呆评定表(Dementia Assessment Sheet in Community-based Integrated Care System)等。
在本说明书中，“精神衰弱”是指除了上述身体衰弱之外还伴随认知功能下降的发展并产生轻度认知障碍的状态。
在本说明书中，“自由基”是指具有不成对电子的原子、分子或离子。
在本说明书中，“抗氧化物质”是指捕捉活性氧簇的物质。所述活性氧簇例如可以列举出所述自由基簇(自由基)；单线态氧(1O2)、臭氧(O3)、过氧化氢(H2O2)等的非自由基簇；等。
在本说明书中，“自由基的清除能力”是指被检物质捕获自由基的能力。
＜身体衰弱的标志物＞
在一方面，本说明书公开了作为身体衰弱的指标的标志物。本公开的身体衰弱的标志物是自由基的清除能力。本公开的身体衰弱的标志物的特征在于自由基的清除能力，其他的结构以及条件没有特别限制。
本发明人等深入研究的结果发现，生物体中自由基的消除能力，特别是唾液中抗氧化物质引起的自由基的清除能力，与身体衰弱的发病相关，从而确立了本发明。根据本公开，可以通过测量自由基的清除能力来测试被检者的身体衰弱的罹患可能性(罹患风险度)等。另外，在本公开中，由于自由基成为身体衰弱的靶点，因此通过使用所述靶点的筛选，也可以得到身体衰弱的治疗药候选物质。因此，本发明在临床领域以及生物化学领域极为有用。
所述自由基例如可以列举出羟基自由基(·OH)、烷氧基自由基(LO·)、过氧自由基(LOO·)、氢过氧自由基(HOO·)、一氧化氮(NO·)、二氧化氮(NO2·)、超氧化物阴离子(O2-)、脂质自由基等。
所述抗氧化物质例如可以捕获所述活性氧簇中的任意一种，也可以捕获两种以上。所述活性氧簇的捕获例如也可以称为活性氧簇的清除。所述自由基的捕获例如也可以称为自由基的清除。所述活性氧簇的捕获例如也可以通过所述抗氧化物质向所述活性氧簇供给氢原子并将所述活性氧簇转变为更稳定的其他分子(例如，水)来实施。所述抗氧化物质例如也可以称为活性氧簇、自由基簇或单线态氧的捕获物质，或活性氧簇、自由基簇或单线态氧的清除物质。另外，所述抗氧化物质例如可以抑制或防止共存的其他分子的活性氧簇的氧化。
所述自由基的清除能力可以依据后述的实施例1并通过使用i-Strap法评价抗氧化能力的方法来评价。具体地，使用所述i-Strap法的抗氧化能力的评价可以以2-二苯基氧膦基-2-甲基-3,4-二氢-2H-吡咯N-氧化物(2-diphenylphosphinoyl-2-methyl-3,4-dihydro-2H-pyrrole N-oxide，DPhPMPO)自旋捕获的ESR(电子自旋共振：Electron spinresonance)自旋加合物(DPhPMPO-OOtBu、DPhPMPO-OtBu、DPhPMPO-tBu)的ESR信号作为基准值来对tBuO·(tert-butyloxyl radicals，叔丁氧基自由基)和tBu·(tert-butylradicals，叔丁基自由基)等自由基进行评价。作为具体例，当具有抗氧化作用的唾液与所述自由基共存时，由于ESR信号与基准值相比减少，因此可以评价自由基的清除能力。因此，所述自由基清除能力可以通过以下方式来评价：将未添加(唾液)样品的反应体系中的i-STrap值设为1(基准值)，算出所述基准值与添加(唾液)样品的反应体系中的i-STrap值(R)的差(1-R)。在所述抗氧化能力的评价方法中，在与使用被检物质得到的测量值的差(1-R)例如为0.1以上、0.15以上、0.2以上、0.21以上、0.22以上、0.23以上、0.24以上、0.25以上、0.26以上、0.27以上、0.28以上、0.29以上、0.30以上、0.31以上、0.32以上、0.33以上、0.34以上、0.35以上、0.36以上、0.37以上、0.38以上、0.39以上或0.4以上的情况下，可以将所述被检物质评价为具有自由基的清除能力。
所述自由基的清除能力可以用作身体衰弱的标志物，并且特别适合用作由肌肉减少症、运动障碍综合征、抑郁、健忘、轻度痴呆、痴呆、步行障碍、跌倒、以及关节萎缩引起的身体衰弱的标志物。
所述自由基的清除能力优选脂质自由基的清除能力。推测所述生物体中的自由基的清除能力起因于所述生物体所含有的抗氧化物质。因此，在本说明书中，作为所述身体衰弱的标志物，除了所述自由基的清除能力之外还可以使用所述抗氧化物质，或也可以使用所述抗氧化剂来替代所述自由基的清除能力。
如后文所述，所述身体衰弱的标志物也可以作为例如用于诊断或检测身体衰弱的标志物、预测身体衰弱的预后的标志物、预测或判定身体衰弱的治疗效果的标志物使用。
＜身体衰弱的测试方法＞
另一方面，本说明书公开了测试身体衰弱的可能性的方法。如上所述，本公开的身体衰弱的测试方法包括测量步骤，在所述测量步骤中测量被检者的生物样本中的自由基的清除能力。本公开的第一测试方法的特征在于测量作为身体衰弱的标志物的所述被检者的生物样本中的自由基的清除能力，其他步骤以及条件没有特别限制。对于本公开的第一测试方法，可以引用所述本公开的身体衰弱的标志物的说明。
根据本公开的第一测试方法，例如，可以实施身体衰弱的可能性的测试。所述“身体衰弱的测试”意味着例如身体衰弱的检测、身体衰弱的判定、身体衰弱的筛选、身体衰弱的预防效果的判定、身体衰弱的治疗效果的判定、治疗药起效的身体衰弱的患者的判定、对各个对身体衰弱的患者起效的治疗药的判定、用于身体衰弱的诊断的检查方法、或用于身体衰弱的治疗的检查等。所述“身体衰弱的判定”例如既可以是身体衰弱有无的判定、测试、检测或诊断，也可以是罹患身体衰弱的可能性(风险度)的判定、测试、检测或诊断，也可以是身体衰弱治疗后的预后的预测，也可以是身体衰弱治疗药的治疗效果的判定。
所述被检者例如可以列举出人、除人以外的非人动物等，如上所述，所述非人动物例如可以列举出小鼠、大鼠、狗、猴、兔、羊、马等的哺乳类，鸟类，鱼类等。
对所述生物样本的种类没有特别限制，例如可以列举出从生物体分离的体液、体液来源细胞、器官、组织或细胞等。所述体液可以列举例如血液、唾液、尿、淋巴液、关节等的滑液，骨髓液、脑脊髓液等髓液等。作为所述血液的具体例，例如可以列举出全血、血清、血浆等。所述体液来源细胞例如可以列举出血液来源细胞，具体地，可以列举出红细胞、白细胞、淋巴细胞等血细胞。另外，根据所述身体衰弱的标志物，例如，可以通过唾液中的自由基的消除能力测试被检者的身体衰弱。因此，例如，从能够减轻患者和医生的负担来看，所述生物样本优选为唾液。
作为测量目标的自由基的清除能力，例如，可以列举出脂质自由基的清除能力。对于所述自由基的消除能力，例如，可以通过对所述生物样本测量脂质自由基的消除能力来实施，也可以通过在从所述生物样本中提取、粗提纯化或纯化抗氧化物质后对得到的抗氧化物质测量脂质自由基的消除能力来实施。抗氧化物质的脂质自由基的消除能力的测量方法没有特别限制，可以采用公知的方法。作为具体例，所述抗氧化物质的脂质自由基的消去能力的测量方法可以列举出以下方法：例如，以叔丁基氢过氧化物(tBuOOH)和血红蛋白作为脂质自由基产生剂并使用2-二苯基氧膦基-2-甲基-3,4-二氢-2H-吡咯N-氧化物(2-diphenylphosphinoyl-2-methyl-3,4-dihydro-2H-pyrrole N-oxide，DPhPMPO)作为自旋捕获剂的电子自旋共振(Electron spin resonance：ESR)自旋捕获法(i-STrap法)；ORAC(Oxygen Radical absorption Capacity：氧自由基吸收能力)法；对过氧自由基的捕获活性(总自由基捕获抗氧化参数，Total Radical-Trapping Antioxidant Parameter：TRAP))法等；由于可以抑制过氧化氢、羟基自由基、单线态氧等其他活性氧簇的影响，可以特异地检测自由基，特别是脂质自由基，并且灵敏度好，因此优选i-STrap法。所述自由基的清除能力的测量可以是定性的测量，也可以是定量的测量。在所述自由基的清除能力的测量是定量的测量的情况下，自由基的清除能力也可以称为自由基的清除能力的测量值。
本公开的第一测试方法例如还包括测试步骤(以下称为“第一测试步骤”)，在所述测试步骤中，通过将所述被检者的生物样本(以下也称为“被检生物样本”)中的自由基的清除能力的测量值与阈值进行比较来测试所述被检者罹患身体衰弱的可能性。所述阈值没有特别限制，例如可以列举出从健康者、身体衰弱的患者、或从所述健康者以及所述身体衰弱的患者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值计算出的阈值。在预后的评价的情况下，所述阈值也可以是例如在同一被检者的治疗之前或之后(例如，刚治疗之后)的自由基的清除能力的测量值。
所述阈值例如可以使用如上所述的从健康者和/或身体衰弱的患者分离的生物样本(以下也称为“基准生物样本”)获得。另外，对于所述阈值，例如，可以在从多个健康者以及多个身体衰弱的患者中分离出基准生物样本后，测量自由基的清除能力，并基于得到的自由基的清除能力进行统计学计算。在这种情况下，作为所述阈值，例如，可以使用诊断阈值(截止值)、治疗阈值、以及预防医学阈值等的临床诊断值。另外，在预后的评价的情况下，例如，也可以使用从同一被检者治疗后分离的基准生物样本。所述阈值例如可以与所述被检者的被检生物样本同时测量，也可以预先测量。在后者的情况下，例如，由于不需要在每次测量所述被检者的被检生物样本时得到阈值，因此是优选的。优选的是，所述被检者的被检生物样本和所述基准生物样本例如在相同的条件下采集，并在相同的条件下进行自由基的消除能力的测量。
在所述第一测试步骤中，被检者罹患身体衰弱的可能性的评价方法没有特别限制，可以根据所述阈值的种类适当决定。作为具体例，所述被检者的被检生物样本中的自由基的清除能力的测量值在与所述健康者的基准生物样本中的自由基的清除能力的测量值相同的情况下(没有显著差异的情况下)，在比所述健康者的基准生物样本中的自由基的清除能力的测量值显著低的情况下，在比所述身体衰弱的患者的基准生物样本中的自由基的清除能力的测量值显著低的情况下，和/或在比从所述健康者以及所述身体衰弱的患者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值计算出的阈值低的情况下，所述被检者可以被评价为罹患身体衰弱的可能性(也称为“风险性”或“风险度”，下同)没有或可能性较低。另外，所述被检者的被检生物样本中的自由基的清除能力的测量值在比所述健康者的基准生物样本中的自由基的清除能力的测量值显著高的情况下，在与所述身体衰弱的患者的基准生物样本中的自由基的清除能力的测量值相同的情况下(没有显著差异的情况下)，在比所述身体衰弱的患者的基准生物样本中的自由基的清除能力的测量值显著高的情况下，和/或在比从所述健康者以及所述身体衰弱的患者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值计算出的阈值高的情况下，所述被检者可以被评价为有罹患身体衰弱的可能性或可能性(风险性)高。另外，在所述测试步骤中，通过将所述被检者的被检生物样本中的自由基的清除能力的测量值与所述身体衰弱的各程度的身体衰弱的患者的基准生物样本中的自由基的清除能力的测量值进行比较，可以评价身体衰弱的程度。具体地，所述被检者的被检生物样本在例如与身体衰弱的所述基准生物样本具有相同程度的自由基的消除能力的测量值的情况下(没有显著差异的情况下)，所述被检者可以被评价为有所述身体衰弱程度的可能性或可能性高。
在所述第一测试步骤中，在评价预后的状态时，例如，可以与上述同样地进行评价，也可以使用同一被检者的治疗后的基准生物样本中的自由基的清除能力的测量值作为阈值进行评价。作为具体例，所述被检者的被检生物样本中的自由基的清除能力的测量值在与所述阈值相同的情况下(没有显著差异的情况下)，和/或在比所述阈值显著低的情况下，所述被检者可以被评价为在所述治疗后没有复发或恶化的可能性或可能性低。另外，在所述被检者的被检生物样本中的自由基的清除能力的测定值比所述阈值显著高的情况下，所述被检者可以被评价为在所述治疗后有复发或恶化的可能性或可能性高。
在所述第一测试步骤中，例如，也可以随时间地采集同一被检者的生物样本，比较所述生物样本中的自由基的清除能力的测量值。由此，在所述测试步骤中，例如，如果测量值随时间而降低，则能够判罹患的可能性变低或治愈等，如果测量值随时间而增加，则能够判断罹患的可能性变高等。
本公开的第一测试方法例如也可以根据所述第一测试步骤的结果对所述被检者进行治疗。具体地，本公开的第一测试方法例如也可以包括施用步骤，在所述施用步骤中对在所述第一测试步骤中得到患有身体衰弱的测试结果的被检者施用身体衰弱治疗药。所述身体衰弱治疗药的施用方式、施用时期、施用量、施用间隔等的条件可以根据所述身体衰弱治疗药的种类适当设定。所述身体衰弱治疗药也可以是通过后述的筛选方法得到的治疗药候选物质。
在本公开的第一测试方法中，虽然使用了作为所述身体衰弱的指标(标志物)的所述自由基清除能力，但在本公开的第一测试方法中，除了所述自由基的清除能力之外还可以使用所述抗氧化物质，或也可以使用所述抗氧化物质来替代所述自由基的清除能力。在这种情况下，在所述本公开的测试方法中，可以将“自由基的消去能力”解读为“抗氧化物质”，将“自由基消去能力的测量值”解读为“抗氧化物质的量”，并引用对其的说明。
所述被检者没有特别限制，例如，可以是身体衰弱的患者，也可以是不清楚身体虚弱与否的个体，也可以是怀疑身体虚弱的个体。所述被检者也可以是轻度认知障碍(MCI)患者。在这种情况下，本公开的测试方法可以实施精神衰弱的可能性的测试，将“身体衰弱”解读为“精神衰弱”，并引用对其的说明。在所述被检者为人的情况下，所述被检者优选50岁以上且未满70岁。
在本公开的第一测试方法中，评价了是否“身体衰弱”，但本公开不限于此，也可以代替所述“身体衰弱”而评价是否“衰弱”。在这种情况下，在本公开的第一测试方法中，可以将“身体衰弱”解读为“衰弱”，并引用对其的说明。
如上所述，本公开的第一测试方法例如可以作为诊断或检测身体衰弱的方法、预测身体衰弱的预后的方法、预测或判定身体衰弱的治疗效果的方法使用。因此，本公开的第一测试方法也可以作为用于选择对身体衰弱治疗药响应的患者(响应者)、调整身体衰弱治疗药的施用量的协助诊断方法。
＜测试试剂＞
另一方面，本说明书公开了能够测试身体衰弱的可能性的测试试剂。如上所述，本公开的测试试剂包括自由基的清除能力的测量试剂。本公开的测量试剂的特征在于包括自由基的清除能力的测试试剂，其他的结构以及条件没有特别限制。根据本发明的测试试剂，可以简便地实施所述本发明的测试方法。对于本公开的测试试剂，可以引用对所述本公开的身体衰弱的标志物以及测试方法的说明。
所述自由基的清除能力的测量试剂例如可以根据所述自由基的清除能力的测量方法适当决定。作为具体例，在通过i-STrap法等的ESR法测量所述自由基的清除能力时，所述自由基的清除能力的测量试剂可以列举出自由基的产生剂以及自由基的检测剂。所述自由基的产生剂可以包括脂质自由基的产生剂，所述自由基的检测剂可以包括脂质自由基的检测剂。所述自由基的产生剂例如可以列举出叔丁基氢过氧化物(tBuOOH)和血红蛋白的组合等。所述自由基的检测剂例如可以列举出2-二苯基氧膦基-2-甲基-3,4-二氢-2H-吡咯N-氧化物(2-diphenylphosphinoyl-2-methyl-3,4-dihydro-2H-pyrrole N-oxide，DPhPMPO)、N-叔丁基-α-苯基硝酮(N-tert-buthyl-α-phenylnitrone，PBN)、α-(4-吡啶基-1-氧化物)-N-叔丁基硝酮(α-(4-Pyridyl-1-Oxide)-N-tert-Butylnitrone，4-POBN)、3,3,5,5-四甲基-1-吡咯烷-N-氧化物(3,3,5,5-Tetramethyl-1-Pyrroline-N-Oxide，M4PO)、3,5-二溴-4-亚硝基苯磺酸钠盐(3,5-Dibromo-4-Nitrosobenzenesulfonic Acid，DBNBS)、3,5-二溴-4-亚硝基苯磺酸-d2钠盐(3,5-Dibromo-4-Nitrosobenzenesulfonic Acid-d2,Sodium Salt，DBNBS-d2)等。
如上所述，本公开的测试试剂可以简便地实施所述本公开的第一测试方法。因此，本公开的测试试剂优选用于所述本发明的测试方法。
本公开例如还可以是自由基的清除能力的测量试剂用于测试身体衰弱的可能性的应用。
各试剂例如可以混合配置，也可以单独配置其一部分或全部。在后者的情况下，本发明的测试试剂也可以称为测试试剂盒。
本公开的测试试剂例如也可以包括其它结构。所述其他结构例如可以列举出生物样本的前处理试剂、使用说明书等。
本公开的测试试剂也可以包括抗氧化物质的测量试剂来代替所述自由基的清除能力的测量试剂。所述抗氧化物质的测量试剂例如可以根据所述抗氧化物质的种类适当决定。在所述抗氧化物质为蛋白质的情况下，所述测试试剂例如可以是所述抗氧化物质的蛋白质的测量试剂，也可以是编码所述抗氧化物质的蛋白质的mRNA的测量试剂。作为所述抗氧化物质的蛋白质的测量试剂，例如可以使用针对抗氧化物质的抗体等。在所述抗氧化物质为核酸的情况下，对于编码所述抗氧化物质的蛋白质的mRNA的测量试剂，例如可以列举出逆转录酶、dNTP、聚合酶、引物等。所述抗氧化物质的量的测量试剂，例如，在ORAC法中，作为标准物质可以列举出高纯度Trolox标准品等。
＜身体衰弱的诊断方法以及诊断试剂＞
另一方面，本说明书公开了诊断身体衰弱的可能性的方法以及诊断试剂。本公开的身体衰弱的诊断方法包括测量被检者的生物样本中的自由基的清除能力的步骤。另外，本公开的身体衰弱的诊断试剂包括自由基的清除能力的测量试剂。另外，对于本公开，可以引用所述本公开的测试方法以及测试试剂的说明。
<第一筛选方法>
另一方面，本说明书公开了筛选身体衰弱的治疗药候选物质的方法。如上所述，本公开的身体衰弱的治疗药候选物质的筛选方法包括选择步骤，在所述选择步骤中从被检物质中选择降低自由基的清除能力的活性物质作为身体衰弱的治疗药候选物质。本公开的特征在于身体衰弱的治疗药候选物质的靶点是自由基的清除能力，其他步骤以及条件没有特别限制。对于本公开的第一筛选方法，可以引用对所述本公开的身体衰弱的标志物、第一测试方法以及测试试剂的说明。
所述被检物质例如可以列举出低分子化合物、肽、蛋白质、核酸等。所述低分子化合物例如可以列举出公知的低分子化合物的文库等。所述肽例如是直链、支链或环状的肽，构成肽的各氨基酸是天然氨基酸、修饰氨基酸、人工氨基酸或其组合。所述蛋白质可以是天然蛋白质或人工蛋白质中的任一者。所述蛋白质可以列举出例如抗体、生长因子、增殖因子、或它们的变体等。
所述第一选择步骤例如包括：测量步骤，在所述测量步骤中，使所述被检物质共存于自由基的产生体系来测量自由基的清除能力；和选择步骤，在所述选择步骤中，在所述测量步骤中得到的自由基的清除能力比所述被检物质不共存的对照共存体系低时，将所述被检物质选择作为所述治疗药候选物质。在所述测量步骤中，对于所述自由基的消除能力的测量，例如，可以引用对所述的自由基的消除能力的测量方法的说明。所述自由基的产生体系例如包括身体衰弱的患者来源的细胞。
＜检测方法＞
另一方面，本说明书公开了可用于检测有身体衰弱嫌疑的被检者中的身体衰弱的可能性的自由基清除能力的检测方法。本公开的检测方法是有身体衰弱嫌疑的被检者的自由基的清除能力的检测方法，包括检测步骤，在所述检测步骤中使用自由基的清除能力的测量试剂检测所述被检者的生物样本中的自由基的清除能力。本公开的第一检测方法的特征在于检测所述被检者的生物样本中的自由基的清除能力，其他步骤以及条件没有特别限制。对于本公开的检测方法，可以引用对所述身体衰弱的标志物、第一测试方法以及测试试剂的说明。
所述有身体衰弱嫌疑的被检者例如可以是被检者本人主观上抱有怀疑的个体，也可以是医生等诊察的结果判断为有身体衰弱嫌疑或者有罹患身体衰弱可能性的个体。所述被检者本人主观上抱有怀疑的个体例如可以列举出有某种主观症状的个体、希望接受预防检查的个体等。
＜精神衰弱的标志物集＞
另一方面，本说明书公开了作为精神衰弱的指标的标志物集(以下称为“标志物”)。本公开的精神衰弱的标志物是自由基的清除能力以及超氧化物歧化酶(SOD)。本公开的精神衰弱的标志物的特征在于为自由基的清除能力以及SOD，其他的结构以及条件没有特别限制。
本发明人深入研究的结果发现，生物体中SOD的活性，特别是唾液中的SOD的活性，显示出与轻度认知障碍(MCI)的发病相关。如上所述，本发明人发现，生物体中自由基的清除能力显示出与身体衰弱的发病相关。一般认为，精神衰弱通常是由于身体衰弱加上MCI的发病而产生的。因此，根据本公开，可以通过测量SOD的活性和所述自由基清除能力来测试被检者的身体衰弱的罹患可能性(罹患风险度)等。另外，在本公开中，由于SOD的活性以及自由基的清除能力成为精神衰弱的靶点，因此通过使用所述靶点的筛选，也可以得到精神衰弱的治疗药候选物质。
各种动物来源的SOD例如可以参照登记在现有数据库中的信息。作为具体例，对于人来源SOD，作为cDNA，例如，可以列举出由以NCBI登录号NM_000454.5登记的下述碱基序列(序列号1)的碱基序列构成的多核苷酸，作为蛋白质，例如，可以列举出以NCBI登录号NP_000445.1登记的下述氨基酸序列(序列号2)。序列号1的碱基序列是编码序列号2的氨基酸序列的序列。
人SODcDNA(序列号1)
人SOD蛋白质(序列号2)
所述SOD的活性通过与所述自由基清除能力组合，可以作为精神衰弱的标志物使用，特别适合作为氧化应激引起的血管疾病所致的精神衰弱的标志物使用。上述应激引起的血管疾病例如可以列举出循环系统疾病、呼吸系统疾病、脑神经系统疾病、消化系统疾病、血液系统疾病、内分泌系统疾病、泌尿系统疾病、皮肤疾病、支持组织系统疾病、眼科疾病、肿瘤、医原性疾病、环境污染性疾病、以及牙科疾病等。所述脑神经疾病也可以包括：作为脑血管障碍的脑梗塞、脑水肿、脑出血；作为神经变性疾病的痴呆症；以及抑郁症、自主神经障碍(Reilly现象)；等。所述循环系统疾病可以包括心肌梗塞、心律失常、动脉硬化、血管痉挛以及缺血再灌注障碍等。
如后文所述，所述精神衰弱的标志物也可以作为例如用于诊断或检测精神衰弱的标志物、预测精神衰弱的预后的标志物、预测或判定精神衰弱的治疗效果的标志物使用。
＜精神衰弱的测试方法＞
另一方面，本说明书公开了测试精神衰弱的可能性的方法。如上所述，本公开的精神衰弱的测试方法包括测量步骤，在所述测量步骤中测量被检者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值以及SOD的活性。本公开的第二测试方法的特征在于测量作为精神衰弱的标志物的所述被检者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值以及SOD的活性，其他步骤以及条件没有特别限制。对于本公开的第二测试方法，可以引用对所述身体衰弱的标志物、所述精神衰弱的标志物、以及第一测试方法的说明。
根据本公开的第二测试方法，例如，可以实施精神衰弱的可能性的测试。所述“精神衰弱的测试”意味着例如精神衰弱的检测、精神衰弱的判定、精神衰弱的筛选、精神衰弱的预防效果的判定、精神衰弱的治疗效果的判定、治疗药起效的精神衰弱的患者的判定、对各个对精神衰弱的患者起效的治疗药的判定、用于精神衰弱的诊断的检查方法、或用于精神衰弱的治疗的检查等。所述“精神衰弱的判定”例如既可以是精神衰弱有无的判定、测试、检测或诊断，也可以是罹患精神衰弱的可能性(风险度)的判定、测试、检测或诊断，也可以是精神衰弱治疗后的预后的预测，也可以是精神衰弱治疗药的治疗效果的判定。
根据本公开的精神衰弱的标志物，例如，可以通过唾液中的自由基的清除能力以及SOD的活性测试被检者的精神衰弱。因此，例如，从能够减轻患者和医生的负担来看，所述生物样本优选为唾液。
作为测量目标的SOD的活性，例如，可以列举出SOD的超氧化物(O2 ·-)的消除能力(清除活性)。所述SOD的活性例如也可以通过对所述生物体试样测量SOD的O2 ·-的消除能力来实施，也可以通过在从所述生物体试样中提取、粗提纯化或纯化SOD后对得到的SOD测量SOD的O2 ·-的消除能力来实施。SOD的O2 ·-的消除能力的测量方法没有特别限制，可以采用公知的方法。作为具体例，所述SOD的O2 ·-的消除能力的测量方法可以列举出以下方法：例如，将黄嘌呤和黄嘌呤氧化酶用作O2 ·-产生剂并使用自旋捕获剂的电子自旋共振(Electronspin resonance：ESR)自旋捕获法；使用氮蓝四唑(nitroblue tetrazolium，NBT)、2,3,5-三苯基氯化四唑(2,3,5-triphenyltetrazoliumchloride，XTT)等四唑盐(显色剂)的吸光光度法；使用海萤萤光素类似物(MCLA)、光泽精(lucigenin)等的化学发光探针的化学发光法；利用细胞色素C还原的方法；利用四硝基甲烷(TNM)还原的方法；利用肾上腺素(epinephrine/adrenaline)的氧化(链式反应)的方法；利用乳酸脱氢酶-NADH的氧化(链式反应)的方法；通过乳超氧化物酶·超氧化物复合体生成的测量方法等；由于可以抑制过氧化氢、羟基自由基、单线态氧等其他活性氧簇的影响，可以特异性地检测O2 ·-，而且灵敏度好，因此优选ESR自旋捕获法。所述SOD的活性的测量可以是定性的测量，也可以是定量的测量。在所述SOD的测量是定量的测量的情况下，SOD的活性也可以称为SOD的活性的测量值。
本公开的第二测试方法例如还包括测试步骤，在所述测试步骤中，将所述被检者的生物样本(以下也称为“被检生物样本”)中的自由基的清除能力的测量值与第一阈值进行比较，并将所述被检生物样本的SOD的活性值与第二阈值进行比较，由此来测试所述被检者罹患精神衰弱的可能性。
所述第一阈值没有特别限制，例如可以列举出从健康者、身体衰弱的患者、或从所述健康者以及所述身体衰弱的患者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值计算出的阈值。在预后的评价的情况下，所述第一阈值也可以是例如在同一被检者的治疗之前或之后(例如，刚治疗之后)的自由基的清除能力的测量值。
所述第一阈值例如可以使用如上所述的从健康者和身体衰弱的患者或精神衰弱的患者分离的生物样本(以下也称为“基准生物样本”)获得。具体地，对于所述第一阈值，例如，可以在从多个健康者以及多个身体衰弱的患者或者多个精神衰弱的患者中分离出基准生物样本后，测量自由基的清除能力，并基于得到的自由基的清除能力进行统计学计算。在这种情况下，作为所述第一阈值，例如，可以使用诊断阈值(截止值)、治疗阈值、以及预防医学阈值等的临床诊断值。另外，在预后的评价的情况下，例如，也可以使用从同一被检者治疗后分离的基准生物样本。对于所述第一阈值，例如，可以与所述被检者的被检生物样本同时测量，也可以预先测量。在后者的情况下，例如，由于不需要在每次测量所述被检者的被检生物样本时得到第一阈值，因此是优选的。优选的是，所述被检者的被检生物样本和所述基准生物样本例如在相同的条件下采集，并在相同的条件下进行自由基的消除能力的测量。
所述第二阈值没有特别限制，例如可以列举出从健康者、轻度认知障碍(MCI)的患者、精神衰弱的患者、或从所述健康者以及所述MCI患者或所述精神衰弱的患者的生物样本中的SOD的活性的测量值计算出的阈值。在预后的评价的情况下，所述第二阈值也可以是例如在同一被检者的治疗之前或之后(例如，刚治疗之后)的SOD的活性的阈值。
所述第二阈值例如可以使用如上所述的从健康者和轻度认知障碍(MCI)的患者或精神衰弱的患者分离的生物样本(以下也称为“基准生物样本”)获得。具体地，对于所述第二阈值，例如，可以在从多个健康者以及多个MCI患者或者多个精神衰弱的患者中分离出基准生物样本后，测量SOD的活性，并基于得到的SOD的活性进行统计学计算。在这种情况下，作为所述第二阈值，例如，可以使用诊断阈值(截止值)、治疗阈值、以及预防医学阈值等的临床诊断值。另外，在预后的评价的情况下，例如，可以使用从同一被检者治疗后分离的基准生物样本。所述第二阈值例如也可以与所述被检者的被检生物样本同时测量，也可以预先测量。在后者的情况下，例如，由于不需要在每次测量所述被检者的被检生物样本时得到第二阈值，因此是优选的。所述被检者的被检生物体试样和所述基准生物体试样例如优选在相同的条件下采集，在相同的条件下进行SOD的活性的测量。
在所述第二测试步骤中，被检者罹患精神衰弱的可能性的评价方法没有特别限制，可以根据所述阈值的种类适当决定。作为具体例，在所述测试步骤中，也可以根据所述被检者的生物样本是否满足下述(1)-(4)的条件的组合来进行评价。下述条件(1)和(2)是评价所述被检者是否为身体性衰弱的评价基准。另外，下述条件(3)和(4)是评价所述被检者是否为MCI的评价基准。因此，在以下的示例中，在所述第二测试步骤中，通过组合下述条件(1)或(2)和下述条件(3)或(4)进行评价，能够评价所述被检者是否为精神衰弱。
条件(1)：
所述被检者的被检生物样本中的自由基的清除能力的测量值在比所述健康者的基准生物样本中的自由基的清除能力的测量值(显著)高的情况下，在与所述身体衰弱的患者的基准生物样本中的自由基的清除能力的测量值相同的情况下(没有显著差异的情况下)，在比所述身体衰弱的患者的基准生物样本中的自由基的清除能力的测量值(显著)高的情况下，和/或在比从所述健康者以及所述身体衰弱的患者或所述精神衰弱的患者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值计算出的第一阈值高的情况下；
条件(2)：
所述被检者的被检生物样本中的自由基的清除能力的测量值在比所述健康者的基准生物样本中的自由基的清除能力的测量值(显著)低的情况下，在与所述健康者的基准生物样本中的自由基的清除能力的测量值相同的情况下(没有显著差异的情况下)，在比所述身体衰弱的患者的基准生物样本中的自由基的清除能力的测量值(显著)低的情况下，和/或比在从所述健康者以及所述身体衰弱的患者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值计算出的第一阈值低的情况下；
条件(3)：
所述被检者的被检生物样本中的SOD的活性值在比所述健康者的基准生物样本中的SOD的活性值(显著)高的情况下，在与所述健康者的基准生物样本中的SOD的活性值相同的情况下(没有显著差异的情况下)，在比所述MCI患者或所述精神衰弱的患者的基准生物样本中的SOD的活性值(显著)高的情况下，和/或在比从所述健康者以及所述MCI患者或所述精神衰弱的患者的生物样本中的SOD的活性值计算出的第二阈值高的情况下；
条件(4)：
所述被检者的被检生物样本中的SOD的活性值在比所述健康者的基准生物样本中的SOD的活性值(显著)低的情况下，在与所述MCI患者或所述精神衰弱的患者的基准生物样本中的SOD的活性值相同的情况下(没有显著差异的情况下)，在比所述MCI患者或所述精神衰弱的患者的基准生物样本中的SOD的活性值(显著)低的情况下，和/或在比从所述健康者以及所述MCI患者或所述精神衰弱的患者的生物样本中的SOD活性的测量值计算出的第二阈值低的情况下。
在所述第二测试方法中，例如，在所述第二测试步骤中，在所述被检者的生物样本满足所述条件(1)和(4)的情况下，所述被检者可以被评价为有罹患精神衰弱的可能性或可能性(风险性)高。在所述第二测试步骤中，在所述被检者的生物样本满足所述条件(1)和(4)的情况下，所述被检者还可以被进一步评价为有罹患身体衰弱的可能性或可能性(风险性)高、和/或有罹患MCI的可能性或可能性(风险性)高。
在所述第二测试方法中，例如，在所述第二测试步骤中，在所述被检者的生物样本满足条件(1)和(3)的情况下，所述被检者可以被评价为没有罹患精神衰弱的可能性或可能性(风险性)低。在所述第二测试步骤中，在所述被检者的生物样本满足所述条件(1)和(3)的情况下，所述被检者还可以被进一步评价为罹患身体衰弱的可能性高、和/或没有罹患MCI的可能性或可能性(风险性)低。
在所述第二测试方法中，例如，在所述第二测试步骤中，在所述被检者的生物样本满足条件(2)和(4)的情况下，所述被检者可以被评价为没有罹患精神衰弱的可能性或可能性(风险性)低。在所述第二测试步骤中，在所述被检者的生物样本满足所述条件(2)和(4)的情况下，所述被检者还可以被进一步评价为没有罹患身体衰弱的可能性或可能性(危险性)低、和/或有罹患MCI的可能性或可能性(危险性)高。
在所述第二测试方法中，例如，在所述第二测试步骤中，在所述被检者的生物样本满足条件(2)和(3)的情况下，所述被检者可以被评价为没有罹患精神衰弱的可能性或可能性(风险性)低。在所述第二测试步骤中，在所述被检者的生物样本满足所述条件(2)和(3)的情况下，所述被检者还可以被进一步评价为没有罹患身体衰弱的可能性或可能性(危险性)低、和/或没有罹患MCI的可能性或可能性(危险性)低。
在所述第二测试步骤中，通过将所述被检者的被检生物样本中的自由基清除能力的测量值和SOD的活性值与所述精神衰弱的各程度的精神衰弱的患者的基准生物样本中的自由基清除能力的测量值和SOD的活性值进行比较，可以评价精神衰弱的程度。具体地，在所述被检者的被检生物样本例如与特定程度的精神衰弱的患者的所述基准生物样本具有相同程度的自由基消除能力的测量值和SOD的活性值的情况下(没有显著差异的情况下)，所述被检者可以被评价为有所述特定程度的精神衰弱的可能性。
在所述第二测试步骤中，在评价预后的状态时，例如，可以与上述同样地进行评价判断，也可以使用同一被检者的治疗后的基准生物样本中的自由基清除能力和SOD的活性值作为所述第一阈值和所述第二阈值进行评价。作为具体例，所述被检者的被检生物样本中的自由基清除能力和SOD的活性值在与所述第一阈值和所述第二阈值相同的情况下(没有显著差异的情况下)，和/或在比所述第一阈值(显著)高且比所述第二阈值(显著)低的情况下，所述被检者可以被评价为在所述治疗后有复发或恶化的可能性。另外，所述被检者的被检生物样本中的自由基清除能力的测量值和/或SOD的活性值在比所述第一阈值(显著)低的情况下，且/或在比所述第二阈值(显著)高的情况下，所述被检者可以被评价为在所述治疗后没有复发的可能性或可能性低。
在所述第二测试步骤中，例如，也可以随时间地采集同一被检者的生物样本，比较所述生物样本中的自由基清除能力和SOD的活性值。由此，在所述第二测试步骤中，例如，如果所述自由基清除能力的测量值随时间而增加且所述SOD的活性值随时间而降低，则能够判断罹患的可能性变高等，如果所述自由基清除能力的测量值随时间而降低且/或所述SOD的活性值随时间而增加，则能够判断罹患的可能性变低或治愈等。
本公开的第二测试方法例如也可以根据所述第二测试步骤的结果对所述被检者进行治疗。具体地，本公开的第二测试方法例如也可以包括施用步骤，在所述施用步骤中，对在所述第二测试步骤中得到患有精神衰弱的测试结果的被检者施用精神衰弱治疗药。所述精神衰弱治疗药的施用方式、施用时期、施用量、施用间隔等条件可以根据所述精神衰弱治疗药的种类适当设定。所述精神衰弱治疗药也可以是通过后述的本公开的筛选方法得到的治疗药候选物质。
如上所述，本公开的第二测试方法例如可以作为诊断或检测精神衰弱的方法、预测精神衰弱的预后的方法、预测或判定精神衰弱治疗的效果的方法使用。因此，本公开的第二测试方法也可以作为用于选择对精神衰弱治疗药响应的患者(响应者)、调整精神衰弱治疗药的施用量的协助诊断方法。
＜测试试剂盒＞
另一方面，本说明书公开了测试精神衰弱的可能性的测试试剂盒。如上所述，本公开的测试试剂盒包括自由基的清除能力的测量试剂和超氧化物歧化酶(SOD)的活性的测量试剂。本公开的测试试剂盒的特征在于包括自由基的清除能力的测量试剂和SOD的活性的测量试剂，其他的结构以及条件没有特别限制。根据本公开的测试试剂盒，可以简便地实施所述本公开的测试方法。对于本公开的测试试剂盒，可以引用对所述本公开的精神衰弱的标志物以及第二测试方法的说明。
所述自由基的清除能力的测量试剂例如可以根据所述自由基的清除能力的测量方法适当决定。作为具体例，在通过i-STrap法等的ESR法测量所述自由基的清除能力时，所述自由基的清除能力的测量试剂可以列举出自由基的产生剂以及自由基的检测剂。所述自由基的产生剂可以包括脂质自由基的产生剂，所述自由基的检测剂可以包括脂质自由基的检测剂。所述自由基的产生剂例如可以列举出tBuOOH和血红蛋白的组合等。所述自由基的产生剂例如可以列举出叔丁基氢过氧化物(tBuOOH)和血红蛋白的组合等。所述自由基的检测剂例如可以列举出2-二苯基氧膦基-2-甲基-3,4-二氢-2H-吡咯N-氧化物(2-diphenylphosphinoyl-2-methyl-3,4-dihydro-2H-pyrrole N-oxide，DPhPMPO)、N-叔丁基-α-苯基硝酮(N-tert-buthyl-α-phenylnitrone，PBN)、α-(4-吡啶基-1-氧化物)-N-叔丁基硝酮(α-(4-Pyridyl-1-Oxide)-N-tert-Butylnitrone，4-POBN)、3,3,5,5-四甲基-1-吡咯烷-N-氧化物(3,3,5,5-Tetramethyl-1-Pyrroline-N-Oxide，M4PO)、3,5-二溴-4-亚硝基苯磺酸钠盐(3,5-Dibromo-4-Nitrosobenzenesulfonic Acid，DBNBS)、3,5-二溴-4-亚硝基苯磺酸-d2钠盐(3,5-Dibromo-4-Nitrosobenzenesulfonic Acid-d2,Sodium Salt，DBNBS-d2)等。所述SOD的活性的测量试剂例如可以根据所述SOD的活性的测量方法适当决定。作为具体例，在通过ESR法测量所述SOD的活性时，所述SOD活性的测量试剂可以列举出超氧化物(O2 ·-)产生剂以及自旋捕获剂。所述O2 ·-产生剂例如可以列举出黄嘌呤和黄嘌呤氧化酶的组合等。所述自旋捕集剂例如可以列举出5,5-二甲基-1-吡咯啉-N-氧化物(5,5-dimethyl-1-pyrroline-N-oxide，DMPO)、5-(二乙氧基磷酰基)-5-甲基-1-吡咯啉-N-氧化物(5-(diethoxyphosphoryl)-5-methyl-1-pyrroline-N-oxide，DEPMPO)、5-(2,2-二甲基-1,3-丙氧基环磷酰基)-5-甲基-1-吡咯啉-N-氧化物(5-(2,2-dimethyl-1,3-propoxycyclophosphoryl)-5-methyl-1-pyrroline N-oxide，CYPMPO)等。
如上所述，本公开的测试试剂盒可以简便地实施所述本公开的第二测试方法。因此，本公开的测试试剂盒优选用于所述本公开的第二测试方法。
本公开例如还可以是自由基的清除能力的测量试剂以及SOD活性的测量试剂用于测试精神衰弱的可能性的应用。
在本公开中，试剂盒例如可以混合配置，也可以单独配置其一部分或全部。在所述试剂盒混合配置的情况下，所述测试试剂盒例如也可以称为精神衰弱的测试试剂盒。
本公开的测试试剂盒例如也可以包括其它结构。所述其他结构例如可以列举出生物样本的前处理试剂、使用说明书等。
本公开的测试试剂盒也可以包括抗氧化物质的测量试剂来代替所述自由基的清除能力的测量试剂。所述抗氧化物质的测量试剂例如可以是抗氧化物质的蛋白质的测量试剂，也可以是编码抗氧化物质的蛋白质的mRNA的测量试剂。作为所述抗氧化物质的蛋白质的测量试剂，例如，可以使用针对抗氧化物质的抗体等。所述编码抗氧化物质的蛋白质的mRNA的测量试剂例如可以列举出逆转录酶、dNTP、聚合酶、引物等。另外，也可以包括SOD的测量试剂来代替所述SOD的活性的测量试剂。所述SOD的测量试剂例如可以是SOD蛋白质的测量试剂，也可以是编码SOD蛋白质的mRNA的测量试剂。作为所述SOD蛋白质的测量试剂，例如，可以使用针对SOD的抗体等。在所述抗氧化物质为核酸的情况下，所述编码SOD蛋白质的mRNA的测量试剂例如可以列举出逆转录酶、dNTP、聚合酶、引物等。
＜精神衰弱的诊断方法以及诊断试剂＞
另一方面，本说明书公开了诊断精神衰弱的可能性的方法以及诊断试剂。本公开的精神衰弱的诊断方法的特征在于包括测量被检者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值以及SOD的活性的步骤。另外，本公开的精神衰弱的诊断试剂的特征在于包括自由基的清除能力的测量试剂和超氧化物歧化酶(SOD)的活性的测量试剂。另外，本公开可以引用对所述本公开的第一测试方法、第二测试方法、测试试剂、以及测试试剂盒的说明。
<第二筛选方法>
另一方面，本说明书公开了筛选精神衰弱的治疗药候选物质的方法。如上所述，本公开的精神衰弱的治疗药候选物质的筛选方法包括选择步骤，在所述选择步骤中，从被检物质中选择降低自由基的清除能力并提高超氧化物歧化酶(SOD)的活性的活性物质作为精神衰弱的治疗药候选物质。本公开的特征在于精神衰弱的治疗药候选物质的靶点是自由基的清除能力和SOD的活性，其他步骤以及条件没有特别限制。对于本公开的第二筛选方法，可以引用所述本公开的精神衰弱的标志物、第二测试方法，以及测试试剂盒的说明。
所述被检物质例如可以列举出低分子化合物、肽、蛋白质、核酸等。所述低分子化合物例如可以列举出公知的低分子化合物的文库等。所述肽例如是直链、支链或环状的肽，构成肽的各氨基酸是天然氨基酸、修饰氨基酸、人工氨基酸或其组合。所述蛋白质可以是天然蛋白质或人工蛋白质中的任一者。所述蛋白质可以列举出例如抗体、生长因子、增殖因子、或它们的变体等。所述核酸例如可以列举出SOD的表达抑制物质，作为具体例，可以列举出抑制从SOD基因转录mRNA的物质、切割被转录的mRNA的物质以及抑制从mRNA翻译蛋白质的物质等。所述核酸例如可以列举出siRNA等的RNA干扰剂、反义、核酶等。
所述第二选择步骤例如包括：第一测量步骤，在所述第一测量步骤中使所述被检物质共存于自由基的产生体系来测量自由基的清除能力；和第二测量步骤，在所述第二测量步骤中使所述被检物质共存于超氧化物和SOD的共存体系来测量SOD的活性。所述第二选择步骤例如包括：选择步骤，在所述选择步骤中，在所述第一测量步骤中得到的自由基的清除能力比所述被检物质不共存的对照共存体系低且所述第二测量步骤中得到的SOD的活性比所述被检物质不共存的对照共存体系高时，将所述被检物质选择作为所述治疗药候选物质。在所述第一测量步骤中，对于所述自由基的消除能力的测量，例如，可以引用所述的对自由基的消除能力的测量方法的说明。在所述第二测量步骤中，对于所述SOD的活性的测量，例如，可以引用所述的对SOD的活性值的测量方法的说明。所述自由基的产生体系以及所述超氧化物和SOD的共存体系例如可以使用所述测试试剂盒来制备。所述自由基的产生体系例如包括身体衰弱的患者来源的细胞。
＜检测方法＞
另一方面，本说明书公开了可用于检测有精神衰弱嫌疑的被检者中的精神衰弱的可能性的自由基的清除能力和SOD的活性的检测方法。本公开的检测方法是有精神衰弱嫌疑的被检者中的自由基的清除能力和超氧化物歧化酶(SOD)的活性的检测方法，包括：第一检测步骤，在所述第一检测步骤中使用自由基的清除能力的测量试剂检测所述被检者的生物样本中的自由基的清除能力；第二检测步骤，在所述第二检测步骤中使用SOD的活性的测量试剂检测所述被检者的生物样本中的SOD的活性。本公开的检测方法的特征在于检测所述被检者的生物样本中的自由基的清除能力和SOD的活性，其他步骤以及条件没有特别限制。对于本公开的第二检测方法，可以引用对所述本公开的精神衰弱的标志物、第二测试方法、测试试剂、以及测试试剂盒的说明。
所述有精神衰弱嫌疑的被检者例如可以是被检者本人主观上抱有怀疑的个体，也可以是医生等诊察的结果判断为有精神衰弱嫌疑或者有罹患精神衰弱可能性的个体。所述被检者本人主观上抱有怀疑的个体例如可以列举有某种主观症状的个体、希望接受预防检查的个体等。
【实施例】
下面对本发明的实施例进行说明。但是，本发明不限于下面的实施例。除非有特别的说明，否则市售的试剂都是基于其规定使用的。
[实施例1]
使用本发明对唾液的自由基的清除能力进行了分析。
(1)被检者
被检者分为3组。具体地，分为(1)未满50岁(n＝18)、(2)50岁以上且未满70岁(n＝32)、(3)70岁以上(n＝32)的组。研究了自由基的清除能力与身体衰弱是否相关。
(2)唾液的采集
唾液的采集使用市售的唾液采集用管(Salikids(注册商标)、Sarstedt株式会社制造)，如下进行。首先，使各被检者将连接于Salikids(注册商标)的棉卷含在口腔内5分钟，使棉卷充分吸收被检者的唾液。然后，将含有唾液的棉卷插入到Sarikids(注册商标)的悬浮插入物中，盖上盖子后，在3000×g、3分钟的条件下离心分离。分离后，将管内的上清液部分作为各被检者的唾液样品，在-40℃下保存。另外，在采集唾液时，对各被检者从采集1小时前开始禁止饮食、口服药物、刷牙以及专业口腔清洁(Professional MechanicalTooth Cleaning：PMTC)。对采集的唾液测量唾液量。其结果示于图1和图2。
(3)唾液量
图1和图2示出各被检者的唾液量。图1示出各被检者的唾液量的结果。在图1中，纵轴表示被检者的唾液量，横轴表示被检者的年龄。图2是示出各年龄层中的被检者的唾液量的平均值的图表。在图2中，纵轴表示各年龄层中的唾液量，横轴表示被检者的年龄层。如图1所示，发现所述被检者的年龄与唾液量的相关系数为-0.34288，所述唾液量与所述年龄之间存在负相关。如图2所示，50岁以上且未满70岁的组与未满50岁的组相比，唾液量的平均值减少。另外，70岁以上的组与未满50岁的组和50岁以上且未满70岁的组相比，唾液量的平均值进一步减少。
(4)握力
在身体衰弱中可以看到身体能力的降低。为了研究自由基的清除能力与身体衰弱是否相关，测量了所述被检者的身体能力。具体地，测量了被检者的握力最大值。在握力的测量中，使用握力计，在立位状态下对左右手分别进行2次测量(2次测量困难时，测量1次)。这些结果示于图3和图4。
图3和图4是示出各被检者的握力的图表。在图3中，(A)示出各被检者的握力最大值的结果，(B)示出各被检者的握力最大值的平均的结果。在图3(A)和(B)中，纵轴表示被检者的握力，横轴表示各被检者的年龄。图4是示出各年龄层中的被检者的握力最大值以及各组中的握力最大值的平均值的图表。在图4中，纵轴表示各年龄层的握力，横轴表示被检者的年龄层。如图3所示，就相关系数而言，握力的最大值为-0.47048，右手的最大值的平均为-0.47936，左手的最大值的平均为-0.48541，双手的最大值的平均为-0.4885。由这些结果可知，所述被检者的握力与年龄之间存在负相关。然后，如图4所示，50岁以上且未满70岁的组与未满50岁的组相比，各组中的握力最大值和握力最大值的平均值减少。另外，70岁以上的组与未满50岁的组和50岁以上且未满70岁的组相比，各组中的握力最大值和握力最大值的平均值进一步减少。在达到肌肉减少症时，首先，由于身体功能的降低而产生身体衰弱。在所述身体衰弱的状态下，如果进一步伴随肌肉量的减少等，则成为肌肉减少症。因此，推测在此次被检查者群中，50岁以上且未满70岁的群体是产生身体衰弱的群体，70岁以上群体是因肌肉量减少而产生肌肉减少症的群体。
(5)唾液的自由基的清除能力的测量
通过将2-二苯基氧膦基-2-甲基-3,4-二氢-2H-吡咯氮氧化物(DPhPMPO)作为自旋捕获剂使用的电子自旋共振(Electron spin resonance；ESR)自旋捕获法i-Strap(株式会社同仁化学研究所)测量了各唾液样品的自由基的清除能力。按照下述参考文献1实施了所述i-Strap。具体地，将DPhPMPO溶液(最终浓度10mmol/l)、80μl的生理盐水以及20μl的血红蛋白混合得到混合液。在将实施例1(2)中采集的100μl的唾液添加到所述混合液中后，使用搅拌装置(VORTEX-GENIE2 Mixer，M&S机器公司制造)混合了得到的反应液。所述混合后，添加20μl的tBuOOH(最终浓度10mmol/l)，通过芬顿反应生成膜脂质自由基叔丁基(tert-butyl)、叔丁氧基(tert-butyloxyl)以及叔丁基过氧基(tert-butylperoxyl)自由基，在室温(约25℃，下同)下孵育30分钟。然后，添加1ml以体积比2:1混合的氯仿/甲醇溶液(和光纯药工业公司)，将得到的混合液使用所述搅拌装置在室温下搅拌10分钟。然后，使用氯仿/甲醇有机溶剂从所述搅拌后的混合液中提取自旋加合物。将通过所述提取得到的试样(160μl)回温至室温，并导入至石英扁平池(Cat.No：RST-LC09F，Flashpoint公司)后，使用X波段ESR光谱法测定唾液样品的自由基的清除能力。ESR的测量条件如后文所述。
参考文献1：Sun,Lue,et al.“Dose-dependent decrease in anti-oxidantcapacity of whole blood after irradiation:Anovel potential marker forbiodosimetry.”Scientific reports 8.1(2018):1-8.
未被唾液中的自由基的清除能力清除的脂质自由基(叔丁基(tert-butyl)、叔丁氧基(tert-butyloxyl)、以及叔丁基过氧基(tert-butylperoxyl)自由基)与添加到反应体系中的DPhPMPO反应。在所述反应之后，生成可由ESR检测的稳定自由基DPhPMPO-叔丁基(tert-butyl)、DPhPMPO-叔丁氧基(tert-butyloxyl)、以及DPhPMPO-叔丁基过氧基(tert-butylperoxyl)。
对于ESR的测量，将电子自旋共振装置(Cat.No：JES-TE200，日本电子公司制造)连接至WIN-RAD ESR数据分析仪(Radical Research，东京，日本)进行。ESR的测定条件如下。超精细耦合常数是使用微波频率计数器测量的共振频率和电场测量器ES-FC5(日本电子公司制造)测量的共振电场来计算的。检测到的自旋加合物根据氧化锰标准物质的ESR频谱进行定量。实际测量的信号强度用归一化为氧化锰标准物质的ESR频谱的信号强度的相对高度表示，并得到i-STrap值。另外，对于自由基的清除能力，将未添加唾液样品的反应体系中的i-STrap值设为1(基准值)，并作为所述基准值与添加唾液样品的反应体系中的i-STrap值(R)的差(1-R)来计算。另外，对于自由基的清除能力，按各组计算了平均值。这些结果示于图5和图6。
(ESR的测量条件)
装置：
电子自旋共振装置(JES-TE200、X波段光谱仪、日本电子公司制造)
测量条件：
微波频率9.422GHz
微波输出：2.00mW
扫描时间：4分钟
扫描宽度：0.3mT
磁场中心：332.0mT
时间常数：0.3秒
图5和图6是示出在各唾液样品中的ESR的结果的图表。图5示出各被检者的自由基的清除能力的结果。在图5中，纵轴表示被检者的自由基的清除能力，横轴表示被检者的年龄。图6是各年龄层中被检者的自由基的清除能力的平均值的结果。在图6中，纵轴表示各年龄层的自由基的清除能力，横轴表示被检者的年龄层。如图5所示，发现被检者的年龄和自由基的清除能力之间的相关系数为-0.35168，自由基的清除能力与年龄之间存在负相关。另外，如图6所示，50岁以上且未满70岁的组与未满50岁的组相比，自由基的清除能力的平均值上升。另外，70岁以上的组与50岁以上且未满70岁的组相比，唾液量的平均值减少。因此，发现在产生身体衰弱的群体中，唾液中的自由基消除能力正在增加。
(6)握力和抗氧化能力
为了研究在产生身体衰弱的群体中握力与自由基的清除能力是否相关，根据所述被检者的身体能力的结果和所述唾液的自由基的清除能力的结果，研究了握力与自由基的清除能力的相关性。具体地，使用所述实施例1(4)中的握力的值和所述实施例1(5)中的唾液的自由基的清除能力的值，研究了握力与自由基的清除能力之间的相关性。这些结果示于图7。
图7是示出各被检者的握力与自由基的清除能力的相关性的图表。在图7中，(A)示出使用握力最大值的结果，(B)示出使用握力最大值的平均值的结果。在图7(A)中，纵轴表示被检者的自由基的清除能力，横轴表示被检者的握力最大值。在图7(B)中，纵轴表示被检者的自由基的清除能力，横轴表示被检者的握力最大值的平均值。如图7(A)所示，发现被检者的自由基的清除能力和握力最大值之间的相关系数为0.002802，在不考虑年龄的情况下，自由基的清除能力与握力最大值不相关。如图7(B)所示，发现被检者的自由基的清除能力和握力最大值的平均值之间的相关系数为-0.005699668，在不考虑年龄的情况下，自由基的清除能力与握力最大值的平均值不相关。
然后，为了研究握力与自由基的清除能力的相关性是否依赖于年龄，根据所述被检者的身体能力的结果和所述唾液的自由基的清除能力的结果，研究了握力与自由基的清除能力的相关。具体地，使用所述实施例1(4)中的50岁以下的被检者的握力的值和所述实施例1(5)中的50岁以下的被检者的唾液的自由基的清除能力的值，研究握力与自由基的清除能力的相关性。这些结果示于图8。
图8是示出50岁以下的各被检者的握力与自由基的清除能力的相关性的图表。在图8中，(A)示出使用握力最大值的结果，(B)示出使用握力最大值的平均值的结果。在图8(A)中，纵轴表示被检者的自由基的清除能力，横轴表示被检者的握力最大值。在图8(B)中，纵轴表示被检者的自由基的清除能力，横轴表示被检者的握力最大值的平均值。如图8(A)所示，发现被检者的自由基的清除能力和握力最大值之间的相关系数为0.093193349，在50岁以下的被检者中，自由基的清除能力与握力最大值不相关。如图8(B)所示，发现被检者的自由基的清除能力和握力最大值的平均值之间的相关系数为0.103521583，在50岁以下的被检者中，自由基的清除能力与握力最大值的平均值不相关。
然后，为了研究握力与自由基的清除能力的相关性是否依赖于年龄，根据所述被检者的身体能力的结果和所述唾液的自由基的清除能力的结果，研究了握力与自由基的清除能力的相关。具体地，使用所述实施例1(4)中的50岁以上且70岁以下的被检者的握力的值和所述实施例1(5)中的50岁以上且70岁以下的被检者的唾液的自由基的清除能力的值，研究了握力与自由基的清除能力的相关性。这些结果示于图9。
图9是示出50岁以上且70岁以下的各被检者的握力与自由基的清除能力的相关性的图表。在图9中，(A)示出使用握力最大值的结果，(B)示出使用握力最大值的平均值的结果。在图9(A)中，纵轴表示被检者的自由基的清除能力，横轴表示被检者的握力最大值。在图9(B)中，纵轴表示被检者的自由基的清除能力，横轴表示被检者的握力最大值的平均值。如图9(A)所示，发现被检者的自由基的清除能力和握力最大值之间的相关系数为-0.230907942，在50岁以上且70岁以下的被检者中，自由基的清除能力与握力最大值存在负相关。如图9(B)所示，发现被检者的自由基的清除能力和握力最大值的平均值之间的相关系数为-0.316011381，在50岁以上且70岁以下的被检者中，自由基的清除能力与握力最大值的平均值存在负相关。
然后，为了研究握力与自由基的清除能力的相关性是否依赖于年龄，根据所述被检者的身体能力的结果和所述唾液的自由基的清除能力的结果，研究了握力与自由基的清除能力的相关。具体地，使用实施例1(4)中的70岁以上的被检者的握力的值和实施例1(5)中的70岁以上的被检者的唾液的自由基的清除能力的值，研究了握力与自由基的清除能力的相关性。这些结果示于图10。
图10是示出70岁以上的各被检者的握力与自由基的清除能力的相关性的图表。在图10中，(A)示出使用握力最大值的结果，(B)示出使用握力最大值的平均值的结果。在图10(A)中，纵轴表示被检者的自由基的清除能力，横轴表示被检者的握力最大值。在图10(B)中，纵轴表示被检者的自由基的清除能力，横轴表示被检者的握力最大值的平均值。如图10(A)所示，发现被检者的自由基的清除能力和握力最大值之间的相关系数为0.226630158，在70岁以上的被检者中，自由基的清除能力与握力最大值相关。如图10(B)所示，发现被检者的自由基的清除能力和握力最大值的平均值之间的相关系数为0.241535217，在70岁以上的被检者中，自由基的清除能力与握力最大值的平均值相关。
如上所述，推测在50岁以上且未满70岁的群体中产生了身体衰弱。另外，在50岁以上且未满70岁的群体中，握力与自由基的清除能力相关。因此，发现通过测量自由基的清除能力，可以推测身体衰弱的程度。
[实施例2]
使用唐氏综合征患者作为MCI模型，确认了来自唐氏综合征患者的唾液中的SOD活性降低。
(1)被检者
据说唐氏综合征患者早期表现出MCI。因此，将唐氏综合征患者作为MCI模型，研究了SOD活性与MCI是否相关。
以唐氏综合征患者组(DA，实施例2，n＝31，男性22名，女性9名，平均年龄为48.9±6.5岁)以及健康者组(NA，对照2，n＝24，男性7名，女性14名，平均年龄为47.1±4.9岁)为被检者。各被检者为获得书面同意的人。另外，在被检者的选择中，长期服用肾上腺皮质激素或免疫抑制剂的人、过去3个月内有抗生素服用史的人、过去6周内接受抗真菌药治疗的人除外。
(2)唾液的采集
唾液的采集通过与实施例1(2)相同的方法进行采集。对采集的唾液测量唾液量。其结果示于图11。
(3)唾液量
图11示出各被检者的唾液量。图11是示出各组中的被检者的唾液量的平均值的图表，纵轴表示各组的唾液的分泌量的平均值，横轴示出被检者组。如图11所示，唐氏综合征患者组(实施例2)与健康者组(对照2)相比，唾液量显著降低。另外，图中的星号表示p值，＊＊表示p＜0.01。另外，统计分析采用Student-Newman-Keuls法实施(以下相同)。
(4)唾液的超氧化物(O2 ·－)清除能力的测量
通过将5,5-二甲基-1-吡咯啉-N-氧化物(DMPO)作为自旋捕获剂的电子自旋共振(Electron spin resonance：ESR)自旋捕获法确认各唾液样品的超氧化物(O2 ·-)清除能力。O2 ·-产生体系为黄嘌呤(Xanthine)/黄嘌呤氧化酶(Xanthine oxidase：XO)产生体系。具体地，通过在包含440mmol/l的DMPO 20μl和362μmol/l的黄嘌呤20μl的0.1mol/l的磷酸缓冲生理盐水(pH7.2)180μl中添加0.1U/ml的黄嘌呤氧化酶20μl，生成O2 ·-。然后，将混合物(200μl)转移到平池(flat cell)中，使用X波段ESR自旋捕获法测量DMPO-OH自旋加合物，确认O2 ·-的生成。ESR的测量条件如后文所述。
如下式(A)所示，生成的O2 ·-与添加到反应体系中的DMPO反应，生成作为可以通过ESR检测出的稳定自由基的硝基氧(DMPO-OOH)。对于该自由基，如图12所示，示出ESR频谱中的14N以及β、γ位的1H的内部磁场来源的12条吸收线(峰值)。
[化学式A]
在向所述反应体系中添加唾液样品时，ESR得到的信号强度发生变化。唾液样品的O2 ·－的消除能力的测量如下进行。首先，通过在包含440mmol/l的DMPO 20μl和362μmol/l的黄嘌呤20μl和唾液样品20μl的0.1mol/l的磷酸缓冲生理盐水(pH7.2)180μl中添加0.1U/ml的黄嘌呤氧化酶20μl生成O2 ·－。然后，将得到的混合物(200μl)转移到扁平池中，使用X波段ESR自旋捕获法测量DMPO-OH自旋加合物，并测量唾液样本的O2 ·－的清除能力。
对于ESR的测量，将电子自旋共振装置(JES-RE3X，X波段光谱仪，日本电子公司制造)连接至WIN-RAD ESR数据分析仪(Radical Research，东京，日本)，测量条件如下。超精细耦合常数是使用微波频率计数器测量的共振频率和电场测量器ES-FC5(日本电子公司制造)测量的共振电场来计算的。检测到的自旋加合物根据氧化锰标准物质的ESR频谱进行定量。实际测量的信号强度用归一化为氧化锰标准物质的ESR频谱的信号强度的相对高度表示。另外，对于O2 ·－的清除能力，计算各组(实施例2以及对照2)的平均值，并计算以未添加唾液样品的反应体系作为基准(100％)的相对值。这些结果示于图13。
(ESR的测量条件)
装置：
电子自旋共振装置(JES-RE3X，X波段光谱仪，日本电子公司制造)
测量条件：
微波输出：8.00mW
扫描时间：1分钟
扫描宽度：334.8±5mT
磁场调制：100kHz 0.079mT
Gain：×400
扫描时间：1分钟
时间常数：0.03秒
图13是示出在各唾液样品中的ESR的结果的图表。在图13中，纵轴表示O2 ·－清除率的相对值，横轴表示唾液样品的种类。如图13所示，唐氏综合征患者组(实施例2)与健康者组(对照2)相比，O2 ·－的清除能力(SOD活性)显著降低。
从上述可知，在唐氏综合征患者的唾液中，SOD活性降低。
据悉,唐氏综合征由于第21号染色体是三体性的，因此SOD的活性值上升。但是，如实施例2所示，可知与健康者相比，SOD活性降低。因此，在唐氏综合征患者中，由于第21号染色体的三体性，SOD的表达量上升，表观SOD活性值上升，但实际上推测唐氏综合征患者的SOD变性为超氧化物(O2 ·－)清除能力减弱的SOD。另外，本发明不受所述推测的任何限制。
另外，已知由于唐氏综合征患者出现早衰，因此容易引起痴呆症，出现轻度认知障碍(Mild Cognitive Impairment：MCI)的症状。因此，认为通过测量SOD活性，对轻度认知障碍(Mild Cognitive Impairment：MCI)的诊断也有用。
[实施例3]
确认了来自MCI患者的唾液中的超氧化物歧化酶(SOD)活性降低。
以获得书面同意的22名健康的被检者(21岁至68岁)为对象，进行认知功能测试(日语版MoCA：MoCA-J)，测量认知功能(视空间、执行功能、命名、记忆、注意力、复述、词语想起、抽象概念、延迟记忆、以及定向)。将MoCA-J的结果为25分以下的被检者作为MCI患者(实施例3，n＝8，平均认知功能为22.5)，将26分以上的被检者作为健康者(对照3，n＝14，平均认知功能为27.9)。在被检者的选择中，长期服用肾上腺皮质激素或免疫抑制剂的人、过去3个月内有抗生素服用史的人、过去6周内接受抗真菌药治疗的人除外。
另外，除了将实施例2的被检者(实施例2和对照3)替换为实施例3的被检者(实施例3和对照3)以外，与实施例1(2)和实施例2同样地进行了唾液的采集以及超氧化物(O2 ·－)清除能力(SOD活性)的测量。所述唾液样品是从各受试者分别采集的4个至6个样品，测量多个样品的O2 ·－清除能力，并计算平均值，将所述平均值作为各受试者的O2 ·－清除能力。
这些结果示于下表2。如下表2所示，实施例3的唾液与对照3的唾液相比，SOD活性为1/2以下。
[表2]
从上述可知，由于MCI患者的唾液中的SOD活性降低，因此SOD活性作为针对MCI的标志物发挥作用。
根据上述结果，在实施例1中，可知自由基的清除能力作为针对身体衰弱的标志物发挥作用。在实施例2和实施例3中，可知SOD活性作为针对MCI的标志物发挥作用。从上述可知，通过联合地测量自由基的清除能力和SOD活性，可以评价精神衰弱。
以上参照实施方式和实施例对本发明进行了说明，但是本发明不限于上述实施方式和实施例。本发明的构成和细节可以在本申请发明的范围内做出本领域技术人员能够理解的各种改变。
该申请要求以2021年8月18日申请的日本申请特愿2021-133689为基础的优先权，将其公开的全部并入此处。
<附记>
上述的实施方式以及实施例的一部分或全部可以记载为以下附记，但不限于以下。
(附记1)
一种身体衰弱检测用标志物，所述标志物是自由基。
(附记2)
根据附记1所述的标志物，其中所述标志物是自由基的清除能力。
(附记3)
根据附记1或2所述的标志物，其中所述标志物是唾液中的自由基。
(附记4)
一种身体衰弱的测试方法，所述测试方法包括：测量步骤，在所述测量步骤中测量被检者的生物样本中的自由基的清除能力。
(附记5)
根据附记4所述的测试方法，其中在所述测量步骤中测量自由基的清除能力的测量值。
(附记6)
根据附记5所述的测试方法，其中所述测试方法包括：测试步骤，在所述测试步骤中通过将所述被检者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值与阈值进行比较来测试所述被检者的身体衰弱的可能性，
所述阈值是健康者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值、身体衰弱的患者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值、或从所述健康者和所述身体衰弱的患者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值计算出的阈值。
(附记7)
根据附记6所述的测试方法，其中在所述测试步骤中，所述被检者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值在比所述健康者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值高的情况下，在与所述身体衰弱的患者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值相同的情况下，在比所述身体衰弱的患者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值高的情况下，和/或在比从所述健康者和所述身体衰弱的患者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值计算出的阈值高的情况下，所述被检者是身体衰弱。
(附记8)
根据附记4-7中任一项所述的测试方法，其中所述自由基的清除能力是脂质自由基的清除能力。
(附记9)
根据附记4-8中任一项所述的测试方法，其中所述生物样本是唾液。
(附记10)
根据附记4-9中任一项所述的测试方法，其中所述身体衰弱的测试是身体衰弱的检测、身体衰弱的判定、身体衰弱的筛选、身体衰弱的预防效果的判定、身体衰弱的治疗效果的判定、治疗药起效的身体衰弱的患者的判定、对各个对身体衰弱的患者起效的治疗药的判定、用于身体衰弱的诊断的检查方法、或用于身体衰弱的治疗的检查。
(附记11)
根据附记4-10中任一项所述的测试方法，其中所述被检者是轻度认知障碍患者，所述身体衰弱是精神衰弱。
(附记12)
根据附记4-11中任一项所述的测试方法，其中所述测试方法包括施用步骤，在所述施用步骤中对得到是身体衰弱的测试结果的被检者施用身体衰弱治疗药。
(附记13)
一种身体衰弱的测试试剂，所述测试试剂包括自由基的清除能力的测量试剂。
(附记14)
根据附记13所述的测试试剂，其中所述测量试剂包括自由基的产生剂和自由基的检测剂。
(附记15)
根据附记14所述的测试试剂，其中所述自由基的产生剂包括脂质自由基的产生剂，所述自由基的检测剂包括脂质自由基的检测剂。
(附记16)
根据附记13-15中任一项所述的测试试剂，其中所述测试试剂用于根据附记4-12中任一项所述的测试方法。
(附记17)
一种身体衰弱的治疗药候选物质的筛选方法，包括：选择步骤，在所述选择步骤中从被检物质中选择降低自由基的清除能力的活性物质作为身体衰弱的治疗药候选物质。
(附记18)
根据附记17所述的筛选方法，其中所述筛选方法包括：
测量步骤，在所述测量步骤中使所述被检物质共存于自由基的产生体系来测量自由基的清除能力；和
选择步骤，在所述选择步骤中，在所述测量步骤中得到的自由基的清除能力比所述被检物质不共存的对照共存体系低时，将所述被检物质选择作为所述治疗药候选物质。
(附记19)
根据附记17或18所述的筛选方法，其中所述被检物质是由低分子化合物、肽、蛋白质以及核酸构成的组中选择的至少一个。
(附记20)
一种有身体衰弱嫌疑的被检者中的自由基的清除能力的检测方法，所述检测方法包括：
检测步骤，在所述检测步骤中使用自由基的清除能力的测量试剂检测所述被检者的生物样本中的自由基的清除能力。
(附记21)
根据附记20所述的检测方法，其中所述生物样本是唾液。
(附记22)
自由基的清除能力的测量试剂用于测试身体衰弱的可能性的应用。
(附记23)
一种精神衰弱的测试方法，所述测试方法包括：
第一测量步骤，在所述第一测量步骤中测量被检者的生物样本中的自由基的清除能力；和
第二测量步骤，在所述第二测量步骤中测量所述被检者的生物样本中的SOD活性。
(附记24)
根据附记23所述的测试方法，其中在所述第一测量步骤中测量自由基的清除能力的测量值，在所述第二测量步骤中测量SOD的活性值。
(附记25)
根据附记24所述的测试方法，其中所述测试方法包括：
测试步骤，在所述测试步骤中，通过将所述被检者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值与第一阈值进行比较，将所述被检生物样本中的SOD的活性值与第二阈值进行比较，由此来测试所述被检者的精神衰弱的可能性，
所述第一阈值是健康者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值、身体衰弱的患者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值、精神衰弱的患者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值、或从所述健康者和所述身体衰弱的患者或所述精神衰弱的患者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值计算出的阈值，
所述第二阈值是健康者的生物样本中的SOD的活性值、轻度认知障碍(MCI)的患者的生物样本中的SOD的活性值、精神衰弱的患者的生物样本中的SOD的活性值、或从所述健康者和所述MCI的患者或所述精神衰弱的患者的生物样本中的SOD的活性值计算出的阈值。
(附记26)
根据附记25所述的测试方法，其中在所述测试步骤中，所述被检者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值在比所述健康者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值高的情况下，在与所述身体衰弱的患者或所述精神衰弱的患者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值相同的情况下，在比所述身体衰弱的患者或所述精神衰弱的患者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值高的情况下，和/或在比从所述身体衰弱的患者或所述精神衰弱的患者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值计算出的阈值高的情况下，且，
所述被检者的生物样本中的SOD的活性值在比所述健康者的生物样本中的SOD的活性值低的情况下，在与所述MCI的患者或精神衰弱的患者的生物样本中的SOD的活性值相同的情况下，和/或在比所述MCI的患者或所述精神衰弱的患者的生物样本中的SOD的活性值低的情况下，所述被检者是精神衰弱。
(附记27)
根据附记23-26中任一项所述的测试方法，其中所述自由基的清除能力是脂质自由基的清除能力，和/或所述SOD的活性是超氧化物的清除活性。
(附记28)
根据附记23-27中任一项所述的测试方法，其中所述生物样本是唾液。
(附记29)
根据附记23-28中任一项所述的测试方法，其中所述精神衰弱的测试是精神衰弱的检测、精神衰弱的判定、精神衰弱的筛选、精神衰弱的预防效果的判定、精神衰弱的治疗效果的判定、治疗药起效的精神衰弱的患者的判定、对各个对精神衰弱的患者起效的治疗药的判定、用于精神衰弱的诊断的检查方法、或用于精神衰弱的治疗的检查。
(附记30)
一种精神衰弱的测试试剂盒，所述测试试剂盒包括自由基的清除能力的测量试剂和超氧化物歧化酶(SOD)活性的测量试剂。
(附记31)
根据附记30所述的测试试剂盒，其中所述自由基的清除能力的测量试剂包括自由基的产生剂和自由基的检测剂，和/或
所述超氧化物歧化酶(SOD)活性的测量试剂包括黄嘌呤、黄嘌呤氧化酶以及超氧化物的检测探针。
(附记32)
根据附记30或31所述的测试试剂盒，其中所述自由基是脂质自由基。
(附记33)
根据附记30-32中任一项所述的测试试剂，其中所述测试试剂用于根据附记23-29中任一项所述的测试方法。
(附记34)
一种精神衰弱的治疗药候选物质的筛选方法，包括：选择步骤，在所述选择步骤中从被检物质中选择降低自由基的清除能力且提高SOD活性的活性物质作为精神衰弱的治疗药候选物质。
(附记35)
根据附记34所述的筛选方法，其中所述筛选方法包括：
第一测量步骤，在所述第一测量步骤中使所述被检物质共存于自由基的产生体系来测量自由基的清除能力；和
第二测量步骤，在所述第二测量步骤中使所述被检物质共存于超氧化物以及SOD的共存体系来测量SOD的活性；和
选择步骤，在所述选择步骤中，在所述第一测量步骤中得到的自由基的清除能力比所述被检物质不共存的对照低且在所述第二测量步骤中得到的SOD的活性比所述被检物质不共存的对照共存体系高时，将所述被检物质选择作为所述治疗药候选物质。
(附记36)
根据附记34或35所述的筛选方法，其中所述被检物质是由低分子化合物、肽、蛋白质以及核酸构成的组中选择的至少一个。
(附记37)
一种有精神衰弱嫌疑的被检者的自由基的清除能力和超氧化物歧化酶(SOD)活性的检测方法，所述检测方法包括：
第一检测步骤，在所述第一检测步骤中使用自由基的清除能力的测量试剂检测所述被检者的生物样本中的自由基的清除能力；和
第二检测步骤，在所述第二检测步骤中使用SOD活性的测量试剂检测所述被检者的生物样本中的SOD活性。
(附记38)
根据附记37所述的检测方法，其中所述生物样本是唾液。
(附记39)
自由基的清除能力的测量试剂用于测试精神衰弱的可能性的应用。
工业可用性
如上所述，根据本发明，可以通过测量自由基的清除能力来测试被检者罹患身体衰弱的可能性(罹患风险度)等。另外，在本发明中，由于自由基的清除能力成为身体衰弱的靶点，因此通过使用所述靶点的筛选，也可以得到身体衰弱的治疗药候选物质。因此，本发明在临床领域以及生物化学领域极为有用。
序列表
<110> 株式会社生物自由基研究所
<120> 身体衰弱的测试方法、身体衰弱的测试试剂、身体衰弱的治疗药候选物质的筛选方法、精神衰弱的测试方法、精神衰弱的测试试剂以及精神衰弱的治疗药候选物质的筛选方法
<130> IF240073S/P
<150> JP2021-133689
<151> 2021-08-18
<160> 2
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 895
<212> DNA
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 1
gcgtcgtagt ctcctgcagc gtctggggtt tccgttgcag tcctcggaac caggacctcg 60
gcgtggccta gcgagttatg gcgacgaagg ccgtgtgcgt gctgaagggc gacggcccag 120
tgcagggcat catcaatttc gagcagaagg aaagtaatgg accagtgaag gtgtggggaa 180
gcattaaagg actgactgaa ggcctgcatg gattccatgt tcatgagttt ggagataata 240
cagcaggctg taccagtgca ggtcctcact ttaatcctct atccagaaaa cacggtgggc 300
caaaggatga agagaggcat gttggagact tgggcaatgt gactgctgac aaagatggtg 360
tggccgatgt gtctattgaa gattctgtga tctcactctc aggagaccat tgcatcattg 420
gccgcacact ggtggtccat gaaaaagcag atgacttggg caaaggtgga aatgaagaaa 480
gtacaaagac aggaaacgct ggaagtcgtt tggcttgtgg tgtaattggg atcgcccaat 540
aaacattccc ttggatgtag tctgaggccc cttaactcat ctgttatcct gctagctgta 600
gaaatgtatc ctgataaaca ttaaacactg taatcttaaa agtgtaattg tgtgactttt 660
tcagagttgc tttaaagtac ctgtagtgag aaactgattt atgatcactt ggaagatttg 720
tatagtttta taaaactcag ttaaaatgtc tgtttcaatg acctgtattt tgccagactt 780
aaatcacaga tgggtattaa acttgtcaga atttctttgt cattcaagcc tgtgaataaa 840
aaccctgtat ggcacttatt atgaggctat taaaagaatc caaattcaaa ctaaa 895
<210> 2
<211> 154
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 2
Met Ala Thr Lys Ala Val Cys Val Leu Lys Gly Asp Gly Pro Val Gln
1 5 10 15
Gly Ile Ile Asn Phe Glu Gln Lys Glu Ser Asn Gly Pro Val Lys Val
20 25 30
Trp Gly Ser Ile Lys Gly Leu Thr Glu Gly Leu His Gly Phe His Val
35 40 45
His Glu Phe Gly Asp Asn Thr Ala Gly Cys Thr Ser Ala Gly Pro His
50 55 60
Phe Asn Pro Leu Ser Arg Lys His Gly Gly Pro Lys Asp Glu Glu Arg
65 70 75 80
His Val Gly Asp Leu Gly Asn Val Thr Ala Asp Lys Asp Gly Val Ala
85 90 95
Asp Val Ser Ile Glu Asp Ser Val Ile Ser Leu Ser Gly Asp His Cys
100 105 110
Ile Ile Gly Arg Thr Leu Val Val His Glu Lys Ala Asp Asp Leu Gly
115 120 125
Lys Gly Gly Asn Glu Glu Ser Thr Lys Thr Gly Asn Ala Gly Ser Arg
130 135 140
Leu Ala Cys Gly Val Ile Gly Ile Ala Gln
145 150

Claims (33)

1.一种身体衰弱的测试方法，所述测试方法包括：测量步骤，在所述测量步骤中测量被检者的生物样本中的自由基的清除能力。
2.根据权利要求1所述的测试方法，其中在所述测量步骤中测量自由基的清除能力的测量值。
3.根据权利要求2所述的测试方法，其中所述测试方法包括：
测试步骤，在所述测试步骤中通过将所述被检者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值与阈值进行比较来测试所述被检者的身体衰弱的可能性，
所述阈值是健康者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值、身体衰弱的患者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值、或从所述健康者和所述身体衰弱的患者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值计算出的阈值。
4.根据权利要求3所述的测试方法，其中在所述测试步骤中，所述被检者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值在比所述健康者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值高的情况下，在与所述身体衰弱的患者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值相同的情况下，在比所述身体衰弱的患者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值高的情况下，和/或在比从所述健康者和所述身体衰弱的患者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值计算出的阈值高的情况下，所述被检者是身体衰弱。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的测试方法，其中所述自由基的清除能力是脂质自由基的清除能力。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的测试方法，其中所述生物样本是唾液。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的测试方法，其中所述身体衰弱的测试是身体衰弱的检测、身体衰弱的判定、身体衰弱的筛选、身体衰弱的预防效果的判定、身体衰弱的治疗效果的判定、治疗药起效的身体衰弱的患者的判定、对各个对身体衰弱的患者起效的治疗药的判定、用于身体衰弱的诊断的检查方法、或用于身体衰弱的治疗的检查。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的测试方法，其中所述被检者是轻度认知障碍患者，所述身体衰弱是精神衰弱。
9.一种身体衰弱的测试试剂，所述测试试剂包括自由基的清除能力的测量试剂。
10.根据权利要求9所述的测试试剂，其中所述测试试剂包括自由基的产生剂和自由基的检测剂。
11.根据权利要求10所述的测试试剂，其中所述自由基的产生剂包括脂质自由基的产生剂，所述自由基的检测剂包括脂质自由基的检测剂。
12.根据权利要求9-11中任一项所述的测试试剂，其中所述测试试剂用于根据权利要求1-8中任一项所述的测试方法。
13.一种身体衰弱的治疗药候选物质的筛选方法，包括：
选择步骤，在所述选择步骤中从被检物质中选择降低自由基的清除能力的活性物质作为身体衰弱的治疗药候选物质。
14.根据权利要求13所述的筛选方法，其中所述筛选方法包括：
测量步骤，在所述测量步骤中使所述被检物质共存于自由基的产生体系来测量自由基的清除能力；和
选择步骤，在所述选择步骤中，在所述测量步骤中得到的自由基的清除能力比所述被检物质不共存的对照低时，将所述被检物质选择作为所述治疗药候选物质。
15.根据权利要求13或14所述的筛选方法，其中所述被检物质是由低分子化合物、肽、蛋白质以及核酸构成的组中选择的至少一者。
16.一种有身体衰弱嫌疑的被检者的自由基的清除能力的检测方法，所述检测方法包括：
检测步骤，在所述检测步骤中使用自由基的清除能力的测量试剂检测所述被检者的生物样本中的自由基的清除能力。
17.根据权利要求16所述的检测方法，其中所述生物样本是唾液。
18.一种精神衰弱的测试方法，所述测试方法包括：
第一测量步骤，在所述第一测量步骤中测量被检者的生物样本中的自由基的清除能力；和
第二测量步骤，在所述第二测量步骤中测量所述被检者的生物样本中的SOD活性。
19.根据权利要求18所述的测试方法，其中在所述第一测量步骤中测量自由基的清除能力的测量值，在所述第二测量步骤中测量SOD的活性值。
20.根据权利要求19所述的测试方法，其中所述测试方法包括：
测试步骤，在所述测试步骤中，通过将所述被检者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值与第一阈值进行比较，将所述被检生物样本中的SOD的活性值与第二阈值进行比较，由此来测试所述被检者的精神衰弱的可能性，
所述第一阈值是健康者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值、身体衰弱的患者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值、精神衰弱的患者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值、或从所述健康者和所述身体衰弱的患者或所述精神衰弱的患者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值计算出的阈值，
所述第二阈值是健康者的生物样本中的SOD的活性值、轻度认知障碍(MCI)的患者的生物样本中的SOD的活性值、精神衰弱的患者的生物样本中的SOD的活性值、或从所述健康者和所述MCI的患者或所述精神衰弱的患者的生物样本中的SOD的活性值计算出的阈值。
21.根据权利要求20所述的测试方法，其中在所述测试步骤中，所述被检者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值在比所述健康者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值高的情况下，在与所述身体衰弱的患者或所述精神衰弱的患者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值相同的情况下，在比所述身体衰弱的患者或所述精神衰弱的患者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值高的情况下，和/或比在从所述身体衰弱的患者或所述精神衰弱的患者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值计算出的第一阈值高的情况下，且，
所述被检者的生物样本中的SOD的活性值在比所述健康者的生物样本中的SOD的活性值低的情况下，在与所述MCI患者或精神衰弱的患者的生物样本中的SOD的活性值相同的情况下，在比所述MCI患者或所述精神衰弱的患者的生物样本中的SOD的活性值低的情况下，和/或在比从所述健康者以及所述精神衰弱的患者或所述MCI患者的生物样本中的SOD活性的测量值计算出的第二阈值低的情况下，所述被检者是精神衰弱。
22.根据权利要求18-21中任一项所述的测试方法，其中所述自由基的清除能力是脂质自由基的清除能力，和/或所述SOD的活性是超氧化物的清除活性。
23.根据权利要求18-22中任一项所述的测试方法，其中所述生物样本是唾液。
24.根据权利要求18-23中任一项所述的测试方法，其中所述精神衰弱的测试是精神衰弱的检测、精神衰弱的判定、精神衰弱的筛选、精神衰弱的预防效果的判定、精神衰弱的治疗效果的判定、治疗药起效的精神衰弱的患者的判定、对各个对精神衰弱的患者起效的治疗药的判定、用于精神衰弱的诊断的检查方法、或用于精神衰弱的治疗的检查。
25.一种精神衰弱的测试试剂盒，所述测试试剂盒包括自由基的清除能力的测量试剂和超氧化物歧化酶(SOD)活性的测量试剂。
26.根据权利要求25所述的测试试剂盒，其中所述自由基的清除能力的测量试剂包括自由基的产生剂和自由基的检测剂，和/或
所述超氧化物歧化酶(SOD)活性的测量试剂包括黄嘌呤、黄嘌呤氧化酶以及超氧化物的检测探针。
27.根据权利要求25或26所述的测试试剂盒，其中所述自由基是脂质自由基。
28.根据权利要求25-27中任一项所述的测试试剂盒，其中所述测试试剂盒用于根据权利要求18-24中任一项所述的测试方法。
29.一种精神衰弱的治疗药候选物质的筛选方法，包括：选择步骤，在所述选择步骤中从被检物质中选择降低自由基的清除能力且提高SO D活性的活性物质作为精神衰弱的治疗药候选物质。
30.根据权利要求29所述的筛选方法，其中所述筛选方法包括：
第一测量步骤，在所述第一测量步骤中使所述被检物质共存于自由基的产生体系来测量自由基的清除能力；和
第二测量步骤，在所述第二测量步骤中使所述被检物质共存于超氧化物以及SOD的共存体系来测量SOD的活性；和
选择步骤，在所述选择步骤中，在所述第一测量步骤中得到的自由基的清除能力比所述被检物质不共存的对照低且在所述第二测量步骤中得到的SOD的活性比所述被检物质不共存的对照共存体系高时，将所述被检物质选择作为所述治疗药候选物质。
31.根据权利要求29或30所述的筛选方法，其中所述被检物质是由低分子化合物、肽、蛋白质以及核酸构成的组中选择的至少一者。
32.一种有精神衰弱嫌疑的被检者的自由基的清除能力和超氧化物歧化酶(SOD)活性的检测方法，所述检测方法包括：
第一检测步骤，在所述第一检测步骤中使用自由基的清除能力的测量试剂检测所述被检者的生物样本中的自由基的清除能力；和
第二检测步骤，在所述第二检测步骤中使用SOD活性的测量试剂检测所述被检者的生物样本中的SOD活性。
33.根据权利要求32所述的检测方法，其中所述生物样本是唾液。
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