CN118019860A - 检测分析物的组合物和方法 - Google Patents
检测分析物的组合物和方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN118019860A CN118019860A CN202280065725.1A CN202280065725A CN118019860A CN 118019860 A CN118019860 A CN 118019860A CN 202280065725 A CN202280065725 A CN 202280065725A CN 118019860 A CN118019860 A CN 118019860A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- composition
- optionally
- buffer
- kit
- less
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 87
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 29
- MCMNRKCIXSYSNV-UHFFFAOYSA-N Zirconium dioxide Chemical compound O=[Zr]=O MCMNRKCIXSYSNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 44
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims abstract description 31
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims abstract description 30
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 28
- VTLYFUHAOXGGBS-UHFFFAOYSA-N Fe3+ Chemical compound [Fe+3] VTLYFUHAOXGGBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 16
- 239000000797 iron chelating agent Substances 0.000 claims abstract description 15
- 229940075525 iron chelating agent Drugs 0.000 claims abstract description 15
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims abstract description 13
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims abstract description 13
- JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N iron(III) oxide Inorganic materials O=[Fe]O[Fe]=O JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 claims abstract description 8
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 claims abstract description 8
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims description 26
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 26
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 26
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 26
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 24
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 16
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 238000007397 LAMP assay Methods 0.000 claims description 14
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 claims description 13
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 claims description 13
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 12
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 10
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 claims description 9
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 9
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 claims description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 9
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 9
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 9
- FSVCELGFZIQNCK-UHFFFAOYSA-N N,N-bis(2-hydroxyethyl)glycine Chemical compound OCCN(CCO)CC(O)=O FSVCELGFZIQNCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 8
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 claims description 7
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical group [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 claims description 6
- WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L magnesium sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[O-]S([O-])(=O)=O WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 229940061634 magnesium sulfate heptahydrate Drugs 0.000 claims description 6
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 claims description 6
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims description 6
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims description 5
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 claims description 3
- 229910001447 ferric ion Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 3
- 150000004677 hydrates Chemical class 0.000 claims description 3
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 claims description 3
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims description 3
- URDCARMUOSMFFI-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl-(2-hydroxyethyl)amino]acetic acid Chemical compound OCCN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O URDCARMUOSMFFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- PPLIPNAKUAZPFR-UHFFFAOYSA-N 3-pyridin-2-ylpropane-1,2-diamine Chemical compound NCC(N)CC1=CC=CC=N1 PPLIPNAKUAZPFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000005336 cracking Methods 0.000 claims description 2
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000004227 thermal cracking Methods 0.000 claims description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 claims 3
- GXVUZYLYWKWJIM-UHFFFAOYSA-N 2-(2-aminoethoxy)ethanamine Chemical compound NCCOCCN GXVUZYLYWKWJIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 claims 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 abstract description 12
- 239000000047 product Substances 0.000 description 14
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 10
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 10
- DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetraacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCOCCOCCN(CC(O)=O)CC(O)=O DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- -1 nucleoside triphosphates Chemical class 0.000 description 7
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 6
- 230000029918 bioluminescence Effects 0.000 description 5
- 238000005415 bioluminescence Methods 0.000 description 5
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 5
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 5
- SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M potassium acetate Chemical compound [K+].CC([O-])=O SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 4
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 4
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N Magnesium ion Chemical compound [Mg+2] JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 3
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 3
- 238000003390 bioluminescence detection Methods 0.000 description 3
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 3
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 229910001425 magnesium ion Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 3
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 3
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 3
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 3
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 3
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- USIUVYZYUHIAEV-UHFFFAOYSA-N diphenyl ether Chemical compound C=1C=CC=CC=1OC1=CC=CC=C1 USIUVYZYUHIAEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 235000011056 potassium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 229910001414 potassium ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 159000000001 potassium salts Chemical class 0.000 description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 2
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940100555 2-methyl-4-isothiazolin-3-one Drugs 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- IGFHQQFPSIBGKE-UHFFFAOYSA-N Nonylphenol Natural products CCCCCCCCCC1=CC=C(O)C=C1 IGFHQQFPSIBGKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000003973 alkyl amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000005907 alkyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- FRHBOQMZUOWXQL-UHFFFAOYSA-L ammonium ferric citrate Chemical compound [NH4+].[Fe+3].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O FRHBOQMZUOWXQL-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007998 bicine buffer Substances 0.000 description 1
- 229920001400 block copolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- OBRMNDMBJQTZHV-UHFFFAOYSA-N cresol red Chemical group C1=C(O)C(C)=CC(C2(C3=CC=CC=C3S(=O)(=O)O2)C=2C=C(C)C(O)=CC=2)=C1 OBRMNDMBJQTZHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003292 diminished effect Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- LQZZUXJYWNFBMV-UHFFFAOYSA-N dodecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCO LQZZUXJYWNFBMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011143 downstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 229960004642 ferric ammonium citrate Drugs 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 239000004313 iron ammonium citrate Substances 0.000 description 1
- 235000000011 iron ammonium citrate Nutrition 0.000 description 1
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 1
- BEGLCMHJXHIJLR-UHFFFAOYSA-N methylisothiazolinone Chemical group CN1SC=CC1=O BEGLCMHJXHIJLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- SNQQPOLDUKLAAF-UHFFFAOYSA-N nonylphenol Chemical compound CCCCCCCCCC1=CC=CC=C1O SNQQPOLDUKLAAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical group 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920002503 polyoxyethylene-polyoxypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M potassium benzoate Chemical compound [K+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000001508 potassium citrate Substances 0.000 description 1
- 229960002635 potassium citrate Drugs 0.000 description 1
- QEEAPRPFLLJWCF-UHFFFAOYSA-K potassium citrate (anhydrous) Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O QEEAPRPFLLJWCF-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 235000011082 potassium citrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- 238000001223 reverse osmosis Methods 0.000 description 1
- 150000003385 sodium Chemical class 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2527/00—Reactions demanding special reaction conditions
- C12Q2527/119—Reactions demanding special reaction conditions pH
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2527/00—Reactions demanding special reaction conditions
- C12Q2527/125—Specific component of sample, medium or buffer
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本公开提供了一种水性组合物，例如用作裂解缓冲液的组合物，其包含氧化锆粒子、浓度大于或等于0.005％(质量/体积)的表面活性剂、对三价铁的第一亲和常数大于或等于104.2并且对镁的第二亲和常数小于103.8(在20℃去离子水中、在pH 8.45下测定)的有机铁螯合试剂、以及缓冲剂。所述水性组合物在所有情况下当在20℃下测量时，具有不小于7.7且小于8.45、更特别地7.8‑8.3的pH。还提供了使用所述组合物的方法和包含所述水性组合物的组分的试剂盒。
Description
背景技术
US10604787描述了一种用于在等温核酸扩增反应中消除样品抑制的水性裂解缓冲组合物(即与细胞接触以裂解所述细胞并释放其核酸的组合物)。所述组合物包含有机铁螯合试剂、三价铁、浓度大于或等于0.005％(质量/体积)的非离子型表面活性剂和2-羟基丙烷-1,2,3-三甲酸盐，所述2-羟基丙烷-1,2,3-三甲酸盐和有机铁螯合试剂是不同的分子。所述水性组合物具有约8.45-8.85的pH。
US2019/0112637公开了一种涉及使用裂解缓冲液的核酸扩增方法。所述裂解缓冲液可以包含三价铁离子，并且可以进一步包含选自以下的试剂：纳米粒子分散稳定剂、亲水-亲脂平衡值为约11至约16的非离子型表面活性剂、聚乙烯吡咯烷酮、七水合硫酸镁、含氟表面活化剂、指示染料、以及所述试剂中的两者或更多者的组合。据报道，所述裂解缓冲液在25℃下具有约9.8至10.5的pH。
US10619189公开了一种用于在核酸扩增反应中消除样品抑制的水性组合物，其包含多个氧化锆粒子、浓度大于或等于0.005％(质量/体积)的非离子型表面活性剂、有机铁螯合试剂以及纳米粒子分散稳定剂、聚乙烯吡咯烷酮或两者。所述组合物具有约8.45-8.85的pH。
US5693517公开了对被核酸污染的反转录反应进行消毒的试剂和方法，所述核酸从由混合常规和非常规核苷三磷酸而引起的前一个反转录/扩增反应产生。在消毒后，可以将待扩增的核酸在包括Tris-HCl(pH 8.3)、KCl和EDTA，Tris-HCl(pH 8.3)、KCl、DTT和MnCl2，以及N,N-二羟乙基甘氨酸(bicine)、KOAc和Mn(OAc)2(pH 7.97)的液体中温育。然而，这种液体不是裂解缓冲液，并且所述公开不涉及通过基质化合物减少样品抑制。
发明内容
本公开的上述概述不旨在描述本公开的每个公开的实施方式或每个实施方案。下面的描述更具体地举例说明了说明性实施方式。在整个本申请中的几处，通过实例的名单提供了指导，这些实例可以以各种组合使用。在每种情况下，所叙述的名单仅作为一个代表性组，并且不应被解释为排他性名单。
具体实施方式
在本申请中，没有具体数目的指称并非仅指单个实体，而是包括可以使用具体实例进行说明的总体类别。没有具体数目的指称可以与短语“至少一个”和“一个或多个”互换使用。后面跟有名单的短语“……中的至少一者”和“包含……中的至少一者”是指所述名单中的任一条目和所述名单中的两个或更多个条目的任何组合。
术语例如“常见”、“通常”、“经常”、“频繁”和“常常”被用于指称通常在本发明中使用的特征，但除非另有说明，否则并不意在暗示如此描述的特征在本公开之前是已知或常见的。
除非另有说明，否则在本公开和权利要求书中的所有pH值均是指在20℃下测量的pH值。
微生物或病毒，特别是在食物样品中发现的微生物或病毒，可以通过分子方法来检测。此类方法，例如与3M分子检测系统(3M Company，St.Paul,MN,USA)一起使用的方法，包括将所述样品(任选地在温育后)与水性缓冲液体接触。所述缓冲液体是裂解细胞以从所述细胞释放核酸的裂解缓冲液。在与所述裂解缓冲液接触后，可以进行所述核酸的扩增。
US10604787、US10619189和US2019/0112637公开了可以向裂解缓冲液添加氧化锆粒子以减少或消除食物基质的影响，所述食物基质是来自食物样品的存在于所述样品中的可能干扰核酸的扩增或检测的化学化合物。在这些公开中，Tris这种具有胺的阳离子缓冲剂是优选的缓冲剂，表明所述缓冲剂必须具有8.45-8.85的pH，这是Tris缓冲剂的缓冲区。
本公开认识到了伴随现有技术裂解缓冲液的几个问题。首先，某些样品在上述参考文献中公开的8.45-8.85的pH范围内可能不具有足够的稳定性，而是可能在较低的pH范围、即更接近中性的pH范围内更加稳定。其次，空气中的二氧化碳可以作为酸起作用(当它接触或溶解在水性液体中时变成碳酸)，从而中和现有技术缓冲液的相对高的pH。在较低pH下，这种效果可能稍微减弱。第三，可以在水性液体中使用的阴离子或阳离子缓冲剂例如tris缓冲剂的量在一定程度上受到限制，因为它会干扰核酸扩增或检测过程。因此，现有技术缓冲液的缓冲能力低。所述低缓冲能力限制了可以测试的食物基质的类型，因为某些食物基质可能是非常酸性或碱性的，使得现有技术的缓冲液不能将它们转变成对于扩增来说可接受的pH。第四，即使在不考虑pH的情况下，以更快的时间获得结果也将是有利的。
简而言之，这些和其他问题的解决方案在于一种水性组合物，其包含：氧化锆粒子；浓度大于或等于0.005％(质量/体积)的表面活性剂；对三价铁的第一亲和常数大于或等于104.2并且对镁的第二亲和常数小于103.8的有机铁螯合试剂，其中所述第一亲和常数和第二亲和常数在20℃去离子水中、在pH 8.45下测定；和缓冲剂，所述缓冲剂任选地具有40mM或更高的浓度，进一步任选地具有40mM至约200mM的浓度，并且还进一步任选地具有40mM至150mM的浓度。所述水性组合物在所有情况下当在20℃下测量时，具有不小于7.7且小于8.45、更特别地7.8-8.3的pH。所述水性组合物通常是裂解缓冲液，例如裂解缓冲组合物。
解决方案还在于一种扩增核酸的方法，所述方法包括：a)将本文所描述的水性组合物与包含微生物或病毒的组合物接触，以形成混合物；b)裂解所述混合物中的微生物或病毒，以形成裂解的混合物；和c)使所述裂解的混合物的至少一部分经历核酸扩增过程。
解决方案还在于一种试剂盒，其包含：多个氧化锆粒子；非离子型表面活性剂；对三价铁的第一亲和常数大于或等于104.2并且对镁的第二亲和常数小于103.8的有机铁螯合试剂，其中所述第一亲和常数和第二亲和常数在20℃去离子水中、在pH 8.45下测定；缓冲剂，所述缓冲剂在20℃下具有从7.8或更低的pH延伸到8.2或更高的pH的缓冲区。所述试剂盒中的组分可以作为干燥组分提供，由使用者溶解在水中，以例如形成本文所描述的水性组合物。或者，可以将所述试剂盒的一种或多种组分溶解在所述试剂盒中的水中，并稍后添加干燥组分(如果有的话)。
水性组合物
所述水性组合物可以是溶液或分散体。当是分散体时，通常将所述氧化锆粒子分散在所述组合物中。在某些实施方式中，所述氧化锆粒子是纳米粒子。在特定实施方式中，所述氧化锆粒子具有不大于500nm、更特别地不大于250nm、甚至更特别地不大于100nm的平均粒径，在每种情况下所述平均粒径通过本文中进一步描述的光子相关光谱法测量。所述氧化锆粒子任选地具有至少10，例如10-600，特别是25-600，更特别是50-600，甚至更特别是100-600，更特别是200-600，甚至更特别是300-600，最特别是400-600的表面积(单位为m2/L)。
在每种情况下，可以根据在US864710的“测试方法”章节下描述的方法，通过光子相关光谱(PCS)测量粒径。具体而言，可以使用PCS仪器，例如配备有红色激光器(633nm波长)的ZEN 3600型Zeta Sizer-Nano系列。将样品置于1cm的正方形比色杯中至适合的液体深度，例如10-14mm。所述液体深度取决于所使用的仪器的尺寸。然后将比色杯置于仪器中，并在25℃下平衡。仪器参数可以设置如下：分散剂折射率：1.3330，分散剂黏度：0.8872mPa-sec，材料折射率：2.10，材料吸收值0.10单位。然后，可以根据仪器的使用说明书运行仪器的尺寸测量程序。大多数PCS仪器将自动调整其激光束位置和衰减器设置，以获得粒径的最佳测量，但如果这些参数不由所使用的仪器自动调整，则可以根据仪器的使用说明书或根据标准的仪器优化技术对它们进行优化，以获得粒径的最佳测量(例如最可重复的测量、最佳信噪比等)。在许多情况下，不需要测量粒径，因为可获得具有标注的粒径(例如由制造商测量的)的可商购氧化锆粒子，并且通常可以信赖制造商对粒径的表述(例如在产品标签上)。
可以任选地添加稳定剂以稳定任何上述氧化锆粒子。最通常地，所述稳定剂是柠檬酸或其盐，例如柠檬酸钾、柠檬酸铁铵等。可以使用其他稳定剂，只要它们不干扰核酸的扩增或检测即可。在某些情况下不需要稳定剂，因为即使没有稳定剂，某些氧化锆粒子也可以在必需的pH值下形成稳定的分散体。
在任何上述情况下，pH(当在20℃下测量时)可以大于7.7且小于8.45。具体而言，pH(当在20℃下测量时)可以大于7.7、大于7.8、大于7.9或大于8.0。具体而言，pH(当在20℃下测量时)可以小于8.45、小于8.4、小于8.3或小于8.2。最常见且最特别地，pH为7.8-8.3。
所述缓冲剂具体来说包括至少一种两性离子化合物，意味着所述化合物在所述组合物的pH下以两性离子形式存在。不受理论约束，本发明人假设阳离子、阴离子或非离子缓冲剂可以与核酸链配位，从而干扰样品中微生物的扩增或检测。一种特别有用的两性离子化合物是N,N-二羟乙基甘氨酸。因此，所述缓冲剂最特别地是N,N-二羟乙基甘氨酸。
所述缓冲剂、特别是两性离子缓冲剂、最特别是N,N-二羟乙基甘氨酸，可以具有任何适合的浓度，但通常具有40mM或更高、更特别地40mM至200mM、更特别地40mM至150mM、甚至更特别地50mM至150mM的浓度。缓冲剂的这些浓度提供了比可以使用阳离子或阴离子缓冲剂例如tris获得的更高的缓冲能力，所述tris在高浓度下将干扰核酸扩增或检测过程。
所述铁螯合试剂对三价铁具有大于或等于104.2的第一亲和常数并且对镁具有小于103.8的第二亲和常数。所述第一亲和常数和第二亲和常数在20℃去离子水中、在pH 8.45下测定。因此，所述铁螯合试剂对三价铁的亲和力大于对镁的亲和力。所述铁螯合试剂通常是有机铁螯合试剂，这意味着所述铁螯合剂是有机化合物；这并不旨在意味着有机铁螯合化合物仅螯合有机铁化合物。
可以使用任何适合的有机铁螯合试剂。最通常地，所述有机铁螯合试剂包括乙二醇-双(2-氨基乙基醚)-N,N,N’,N’-四乙酸(EGTA)、N,N’,N’,N’-四(2-吡啶基甲基)乙-1,2-二胺、1,2-双(O-氨基苯氧基)乙烷-N,N,N,N’-四乙酸、N-(2-羟乙基)乙二胺-N,N’,N’-三乙酸、上述任一者的盐或上述任一者的水合物。最通常地，使用有机铁螯合试剂的盐，例如钠盐或钾盐或混合的钠/钾盐，特别是钾盐。EGTA是最常用的，最特别是EGTA的钾盐。
任选地，在任何本文提到的实施方式中，所述组合物可以需要三价铁。当包含时，所述三价铁通常具有50-385微摩尔，例如至少110微摩尔、至少165微摩尔、最少220微摩尔、最多275微摩尔或至少330微摩尔的浓度；在每种情况下，最高浓度可以是385微摩尔。当包含三价铁时，所述三价铁中的三价铁离子与有机铁螯合试剂的摩尔比通常为0.04至0.28，更特别为0.14至0.18。
所述至少一种非离子型表面活性剂可以是提供稳定制剂的任何适合的非离子型表面活性剂，其例如在制备所述组合物之后，在商业上可接受的时间内不沉淀打算处于溶液中的组分，悬浮打算悬浮的组分等。特别有用的非离子型表面活性剂包括那些亲水-亲脂平衡值(HLB)为11至16的非离子型表面活性剂。这个HLB范围促进了在核酸扩增例如PCR和LAMP中使用的DNA聚合酶的活性。可以使用的特定非离子型表面活性剂的非限制性实例包括那些可以在商品名TRITON下获得的表面活性剂例如TRITON X-100、TRITON X-114、TRITONX-405、TRITON-X-101等、失水山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯失水山梨糖醇脂肪酸酯(例如那些可以在商品名TWEEN下获得的)、聚氧乙烯烷基酯(例如那些可以在商品名BRIJ下获得的)、壬基酚、月桂醇、聚乙二醇、聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物、聚氧乙烯烷基胺、聚氧乙烯脂肪酸二苯醚和含氟表面活性剂(例如那些可以从3M Company St.Paul MN USA在商品名NOVEC下获得的)。
所述非离子型表面活性剂可以以任何适合的浓度存在，例如满足一个或多个上述标准或特定最终用途所需的其他标准的浓度。通常，使用0.005％(w/v)至0.3％(w/v)，例如0.01％-0.3％(w/v)的浓度。
镁离子、钾离子或二者也可用于所述组合物中。它们可以促进样品的下游核酸扩增，例如通过PCR例如qPCR、LAMP等。当使用时，镁离子的量通常为1mM至15mM。当使用时，钾离子的量通常为5mM至500mM，例如20mM至60mM。具体而言，镁离子作为镁盐(例如硫酸镁或其水合物，更特别是七水合硫酸镁)的组分被包含。
任选地，所述组合物可以进一步包含一种或多种另外的组分。当使用时，它们最通常是指示染料、防腐剂、LAMP反应增强剂、qPCR反应增强剂或含氟表面活化剂中的一者或多者。
当使用指示染料时，它可以是适合于目标用途例如适合于检测一种或多种感兴趣的微生物的任何染料。许多指示染料在本领域中是已知的，并且原则上可以使用它们中的任一者。一种特别常用的染料是邻甲酚红。指示染料并不总是必需的；某些检测系统不依赖于指示染料，并且在某些情况下所需的染料可以在下游处理步骤期间添加。
适合与生物体系一起使用的各种防腐剂是已知的，并且当使用防腐剂时，它可以由本领域技术人员根据所需的最终用途来选择。一种特别有用的防腐剂是甲基异噻唑啉酮。
用于促进LAMP或qPCR反应的增强剂在本领域中也是已知的，并且可以根据所需的最终用途例如要使用的核酸扩增类型来选择。实例包括硫酸盐例如硫酸镁和硫酸铵或其水合物，或氯化钾。
试剂盒
可以预先为最终用户制备如上所述的组合物，或者可以向最终用户提供试剂盒，然后最终用户可以从所述试剂盒的组分和任选的由所述用户提供的水来制备所述组合物。因此，试剂盒可以包含多个氧化锆粒子，其可以是如参考组合物所描述的任何前述粒子。所述氧化锆粒子可以作为固体提供，以分散在水例如去离子水中，或者它可以作为在水中的分散体提供。
试剂盒可以进一步包含对三价铁的第一亲和常数大于或等于104.2并且对镁的第二亲和常数小于103.8的有机铁螯合试剂，其中所述第一亲和常数和第二亲和常数在20℃去离子水中、在pH 8.45下测定。可以使用如上文参考组合物所描述的任何有机铁螯合试剂。EGTA是最常用的。所述有机铁螯合试剂将被分散在水例如去离子水中，或者它可以被提供在水中。
所述试剂盒可以进一步包含缓冲剂。最通常地，所述缓冲剂在20℃下具有从7.7或更低的pH延伸到8.2或更高的pH的缓冲区。因此，所述缓冲剂通常可以在所述组合物的pH范围内提供一定的缓冲能力，所述范围在上文中详细讨论。正如在上文中详细讨论的，所述缓冲剂通常是两性离子的，更特别是N,N-二羟乙基甘氨酸。所述缓冲剂可以作为固体提供，以在水例如去离子水中重构，或者它可以被溶解在水中。
类似地，所述试剂盒可以提供纳米粒子分散稳定剂，指示染料、防腐剂、LAMP反应增强剂、qPCR反应增强剂或含氟表面活化剂中的至少一者，和/或三价铁盐。这些物质中的任一者可以被分散在水中，或者它们可以作为固体提供，以稍后分散在水中。
最通常地，将所述多个氧化锆粒子、非离子型表面活性剂和有机铁螯合试剂中的至少一者配置在pH(当在20℃下测量时)大于7.7且小于8.45的水性液体中。在特定情况下，所述pH(当在20℃下测量时)可以大于7.7、大于7.8、大于7.9或大于8.0。特别地，所述pH(当在20℃下测量时)可以小于8.45、小于8.4、小于8.3或小于8.2。最常见并且最特别地，所述pH为7.8-8.3。任何其余组分最通常地作为固体提供，以稍后添加到所述水性液体中。
使用方法
本文所公开的组合物和试剂盒最常用于扩增核酸的方法中。所述试剂盒可以如下使用：首先将所述试剂盒的组分彼此和/或与水、特别是去离子水或反渗透纯化水合并，以形成本文所公开的组合物。然后可以根据本领域中已知的一般方法，例如US10619189中描述的那些方法使用所述组合物。
简而言之，可以将本文所描述的组合物与包含或疑似包含微生物或病毒的样品接触，以形成混合物。在这个接触步骤之前，所述样品可以任选地已被温育，特别是如果这样做对于增加微生物或病毒的数量来说是必要的。然后可以将所述微生物或病毒裂解，以形成裂解的混合物。然后可以使所述裂解的混合物经历核酸扩增过程，以扩增存在于所述微生物或病毒中的一种或多种核酸。
所述裂解步骤通常是热裂解，其最通常通过将所述混合物加热至80-115℃5-30分钟来完成。
所述核酸扩增方法可以是任何已知方法，但最通常是PCR例如qPCR或LAMP。qPCR扩增是已知的，并且已被描述在例如Mackay,I.的文章“微生物学实验室中的实时PCR”(Real-time PCR in the microbiology laboratory)，European Society of ClinicalMicrobiology and Infectious Diseases 2004(190)中。LAMP扩增被描述在例如US9090168中。扩增例如LAMP扩增的结果可以通过已知方法检测，例如在Gandelman,O.等人的论文“核酸扩增的实时新型生物发光定量检测”(Novel bioluminescent quantitativedetection of nucleic acid amplification in real-time)，PLoS One,Nov 30；5(11)中描述的方法。
实施例
氧化锆纳米粒子分散体(5重量％，在水中，平均粒径≤100nm(BET)，产品编号643122)获自Sigma Aldrich Company,St.Louis,MO。
柠檬酸(产品编号C1909)、聚乙烯吡咯烷酮(产品编号P5288)、TRITON X-100表面活性剂(产品编号T8787)、N,N-二羟乙基甘氨酸(产品编号B8660)、乙酸钾(P1190)、氢氧化钾(产品编号60370)、EGTA(产品编号03777)、七水合硫酸镁(产品编号63138)和PROCLIN950(产品编号46878-U)均获自Sigma Aldrich Company。
使用具有ACCUMET凝胶填充聚合物主体pH/ATC双结组合电极(无汞)的ACCUMETAE150台式pH计(获自Thermo Fisher Scientific,Waltham,MA)，在20℃下测量组合物的pH。测量在样品制备后24小时内进行。
实施例1.
通过将表1中列出的每种组分按规定的顺序添加到去离子水中并混合来制备悬液组合物。所述组合物具有8.1的pH。
表1.
比较例A.
如实施例1中所述制备组合物，区别在于在所述组合物中不包含柠檬酸、氧化锆分散体、EGTA、七水合硫酸镁组分。所述组合物具有8.3的pH。
实施例2.
通过按表2中规定的顺序将每种组分添加到去离子水中来制备组合物。所述组合物具有8.3的pH。与实施例1的组合物(表1)相比，这种组合物(表2)具有更高浓度的N,N-二羟乙基甘氨酸和氢氧化钾以及更低浓度的乙酸钾，以提供增加的缓冲能力。
表2.
比较例B.
如实施例2中所述制备组合物，区别在于在所述组合物中不包含柠檬酸、氧化锆分散体、EGTA、七水合硫酸镁组分。所述组合物具有8.3的pH。
比较例C.
如美国专利10619189的实施例2中所述制备组合物。所述组合物具有8.7的pH。
实施例3.使用实施例1-2和比较例A-C的组合物进行环介导等温扩增(LAMP)-生物发光检测测定
将生的、磨碎的鸡肉(32g)和缓冲的蛋白胨水富集培养基(BPW-ISO，162mL，预热至41.5℃，获自3M Company,St.Paul,MN)合并在Nasco WHIRL-PAK均质机过滤袋(产品编号01318，获自Thermo Fisher Scientific)中，并以230rpm(每分钟转数)混合2分钟。将样品在41.5℃下温育6小时。将选自实施例1-2和比较例A-C的组合物的等分试样(580微升)单独添加到独立的1.1mL AXYGEN小管(产品编号MTS-11-12-C-R，获自Corning Inc.,Corning,NY)中(即每管添加单个组合物)。接下来，将20微升来自均质机袋的富集样品添加到每个管中。
对于核酸扩增和生物发光检测而言，将每个管在100℃的加热块中加热15分钟，冷却至约40℃，然后将混合物的20微升等分试样添加到含有通用基质对照颗粒(产品编号MDMC96NA，获自3M Company)的反应管中。为每种组合物制备三个反应管(n＝3)。在溶解所述颗粒后，使用3M分子检测仪器(产品编号MDS100；获自3M Company)分析每个反应管，并根据制造商的说明书记录生物发光信号。记录最大生物发光信号(以相对光单位(RLU)为单位)和出现所述最大生物发光信号的反应时间。结果作为3次试验的平均值报告在表3-5中。
表3.
表4.
表5.
实施例4.使用具有不同pH值的组合物进行LAMP-生物发光检测测定
用不同量的冰醋酸调节按照实施例1(表1)的程序制备的组合物的pH，以提供pH为7.4、7.6、7.8、8.0或8.2的五种单独的组合物。根据实施例3的程序测定出现最大生物发光信号的反应时间。结果作为3次试验的平均值报告在表6中。
表6.
Claims (20)
1.一种水性组合物，其包含：
氧化锆粒子；
浓度大于或等于0.005％(质量/体积)的表面活性剂；
对三价铁的第一亲和常数大于或等于104.2并且对镁的第二亲和常数小于103.8的有机铁螯合试剂，其中所述第一亲和常数和第二亲和常数在20℃去离子水中、在pH 8.45下测定；和
缓冲剂，所述缓冲剂任选地具有40mM或更高的浓度，进一步任选地具有40mM至约200mM的浓度，并且还进一步任选地具有40mM至150mM的浓度；
其中所述组合物当在20℃下测量时，具有大于7.7且小于8.45、任选地7.8-8.3的pH。
2.根据权利要求1所述的水性缓冲组合物，其中所述缓冲剂包括至少一种两性离子化合物。
3.根据权利要求2所述的水性缓冲组合物，其中所述至少一种两性离子化合物包括N,N-二羟乙基甘氨酸。
4.根据前述权利要求中任一项所述的水性组合物，其进一步包含柠檬酸或其盐。
5.根据前述权利要求中任一项所述的水性组合物，其进一步包含镁盐，任选地其中所述镁盐是硫酸镁或其水合物，并且进一步任选为七水合硫酸镁。
6.根据前述权利要求中任一项所述的水性组合物，其中所述有机铁螯合试剂包括乙二醇-双(2-氨基乙基醚)-N,N,N’,N’-四乙酸、N,N’,N’,N’-四(2-吡啶基甲基)乙-1,2-二胺、1,2-双(O-氨基苯氧基)乙烷-N,N,N,N’-四乙酸、N-(2-羟乙基)乙二胺-N,N’,N’-三乙酸、上述任一者的盐或上述任一者的水合物。
7.根据前述权利要求中任一项所述的水性组合物，其进一步包含三价铁离子。
8.根据前述权利要求中任一项所述的水性组合物，其中所述氧化锆粒子在每种情况下当通过本文所描述的光子相关光谱法测量时，具有不大于500nm、任选地不大于250nm的平均粒径。
9.根据前述权利要求中任一项所述的水性组合物，其进一步包含指示染料、防腐剂、LAMP反应增强剂、qPCR反应增强剂或含氟表面活化剂中的至少一者。
10.一种扩增核酸的方法，所述方法包括：
a)将根据权利要求1-9中任一项所述的组合物与包含微生物或病毒的样品接触，以形成混合物；
b)裂解所述混合物中的微生物或病毒，以形成裂解的混合物；和
c)使所述裂解的混合物的至少一部分经历核酸扩增过程。
11.根据权利要求10所述的方法，其进一步包括在步骤a)之前将包含微生物或病毒的组合物在生长培养基中温育的步骤。
12.根据权利要求10-11中任一项所述的方法，其中所述核酸扩增过程包括聚合酶链反应(PCR)或环介导的等温扩增(LAMP)。
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述PCR是qPCR。
14.根据权利要求10-13中任一项所述的方法，其中所述裂解步骤包括热裂解，所述热裂解任选地包括将所述混合物加热至80-115℃5-30分钟。
15.一种试剂盒，其包含：
多个氧化锆粒子；
非离子型表面活性剂；
对三价铁的第一亲和常数大于或等于104.2并且对镁的第二亲和常数小于103.8的有机铁螯合试剂，其中所述第一亲和常数和第二亲和常数在20℃去离子水中、在pH 8.45下测定；
缓冲剂，所述缓冲剂在20℃下具有从7.8或更低的pH延伸到8.2或更高的pH的缓冲区。
16.根据权利要求14所述的试剂盒，其进一步包含纳米粒子分散稳定剂。
17.根据权利要求14至15中任一项所述的试剂盒，其中所述非离子型表面活性剂具有约11至约16的亲水-亲脂平衡值。
18.根据权利要求15-17中任一项所述的试剂盒，其中所述多个氧化锆粒子、所述非离子型表面活性剂和所述有机铁螯合试剂中的至少一者被配置在水性液体中，所述水性液体当在20℃下测量时具有大于7.7且小于8.45、任选地7.8-8.3的pH。
19.根据权利要求15-18中任一项所述的试剂盒，其进一步包含指示染料、防腐剂、LAMP反应增强剂、qPCR反应增强剂或含氟表面活化剂中的至少一者。
20.根据权利要求15-19中任一项所述的试剂盒，其中所述试剂盒进一步包含三价铁盐。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US202163239436P | 2021-09-01 | 2021-09-01 | |
| US63/239,436 | 2021-09-01 | ||
| PCT/IB2022/056142 WO2023031691A1 (en) | 2021-09-01 | 2022-07-01 | Compositions and methods of detecting analytes |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN118019860A true CN118019860A (zh) | 2024-05-10 |
Family
ID=82608143
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202280065725.1A Pending CN118019860A (zh) | 2021-09-01 | 2022-07-01 | 检测分析物的组合物和方法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR20240070556A (zh) |
| CN (1) | CN118019860A (zh) |
| WO (1) | WO2023031691A1 (zh) |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US864710A (en) | 1906-12-17 | 1907-08-27 | Cyrus S Vaughn | Wrench. |
| US5693517A (en) | 1987-06-17 | 1997-12-02 | Roche Molecular Systems, Inc. | Reagents and methods for coupled high temperature reverse transcription and polymerase chain reactions |
| JP5278490B2 (ja) | 2011-05-10 | 2013-09-04 | 株式会社デンソー | 電力変換装置 |
| US10604787B2 (en) | 2014-12-23 | 2020-03-31 | 3M Innovative Properties Company | Composition for reducing inhibition of nucleic acid amplification |
| BR112017024191B1 (pt) | 2015-05-11 | 2024-01-02 | 3M Innovative Properties Company | Composição aquosa, método de amplificação de ácido nucleico e kit |
| WO2017091809A1 (en) * | 2015-11-25 | 2017-06-01 | Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc | Compositions and methods for detecting and quantifying nucleic acid sequences in blood samples |
| JP6979409B2 (ja) | 2016-04-08 | 2021-12-15 | スリーエム イノベイティブ プロパティズ カンパニー | 細胞溶解及び核酸増幅のためのプロセス |
-
2022
- 2022-07-01 CN CN202280065725.1A patent/CN118019860A/zh active Pending
- 2022-07-01 KR KR1020247010792A patent/KR20240070556A/ko unknown
- 2022-07-01 WO PCT/IB2022/056142 patent/WO2023031691A1/en active Application Filing
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20240070556A (ko) | 2024-05-21 |
| WO2023031691A1 (en) | 2023-03-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0566625B1 (en) | Method for extraction of intracellular components | |
| EP2843054B1 (en) | Method for measuring component to be measured in specimen | |
| CN107980065B (zh) | 用于减少核酸扩增抑制的组合物 | |
| US5705345A (en) | Methods and kits for preparing nucleic acids using cyclodextrin | |
| CN105002263A (zh) | 一种还原型辅酶复合试剂及其应用 | |
| CN118019860A (zh) | 检测分析物的组合物和方法 | |
| EP4396374A1 (en) | Compositions and methods of detecting analytes | |
| WO2016193070A1 (en) | A method of inactivating microbes by citraconic anhydride | |
| WO2001034830A2 (en) | Assay of micro-organisms in cell cultures | |
| US20080014607A1 (en) | Atp-metry based on intracellular adenyl nucleotides for detecting and counting cells, use and implementing method for determining bacteria in particular devoid of atp | |
| JP5216968B2 (ja) | テトラゾリウム化合物を色原体として用いる試料中の測定対象物質の測定方法及び測定試薬、非特異的発色を抑制する方法、並びに非特異的発色抑制剤 | |
| JP2008197077A (ja) | 試料中の測定対象物質の測定方法及び測定試薬、非特異的発色を抑制する方法、並びに非特異的発色抑制剤 | |
| BR112014028748B1 (pt) | Métodos para estabilizar e para preservar uma oxidase do ácido ascórbico | |
| EP3218510B1 (en) | Kit comprising atp-diphosphohydrolase for detecting bacterial atp in a sample | |
| JP4797349B2 (ja) | ビタミンｂ６酵素を用いた試薬の安定化法およびその試薬 | |
| WO2023127774A1 (ja) | 遺伝子包含体の検出方法及び検出用キット | |
| JP2017000152A (ja) | 測定対象物質の測定方法、測定対象物質の測定試薬、及びビリルビンに由来する影響の回避方法 | |
| JP2009240289A (ja) | チラミンオキシダーゼの安定化方法およびその組成物 | |
| IE920779A1 (en) | Selective stabilization of lactate dehydrogenase isoenzyme¹ld1 by high molecular weight polyols | |
| Pazhanivel et al. | Development of Calorimetric PCR Assay as Cost Effective, Direct Post PCR Readout Platform | |
| JP2009247258A (ja) | チラミンオキシダーゼの安定化方法およびその組成物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |