CN117990914A - 肌少症的诊断标志物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本公开涉及肌少症的诊断标志物及其应用。本公开特别涉及帕金森病相关去糖酶(DJ‑1)蛋白在诊断肌少症中的用途。
Description
技术领域
本发明属于生物检测领域，具体涉及用于肌少症的诊断标志物及其应用。
背景技术
肌少症(sarcopenia)是与年龄增长相关的，全身进行性肌肉力量与数量下降导致的肌肉衰竭性疾病。肌少症增加了跌倒和骨折风险，使患者日常生活能力下降，与心脏疾病、呼吸系统疾病和认知障碍相关，可以导致患者运动功能失调、生活质量下降，丧失独立生活能力，或长期需要别人照料，死亡风险增加。另外，肌少症也增加了住院风险，提高了住院期间的护理成本，增加了住院费用。因此，肌少症不仅严重降低老龄人群的生活质量，而且加重了家庭和社会养老的经济负担。
肌少症进展隐匿，渐行加重，早发现、早诊断、早干预是延缓肌少症发展和提升老年人生活质量降低死亡率的重要环节，获得最大健康收益的有效手段。但是，迄今为止对肌少症的致病机制仍然不清楚。
目前，肌少症的诊断也主要依赖于临床标准，包括通过SARC-F(简易5项评分量表，包括Strength、Assistance in walking、Rise from a chair、Climb stairs and Falls)量表进行病例筛查，肌力测试，肌肉量测试及肌酸稀释试验。SARC-F问卷方法是由5项问卷组成，由患者自我报告，从患者自我报告的征象中获取肌少症的特征。患者基于其在力量、行走能力、从椅子上站起来及爬楼梯能力受限的感知和摔倒的体验作出反应。但是，SARC-F量表由于是患者自我报告，结果会受患者对不良结果主观结论的影响。
因此，亟需一种能使用血液进行鉴定的特定生物标志物，可用于无创筛查，对肌少症进行准确地诊断和监测。
发明内容
为了解决现有技术中存在的至少一个技术问题，本公开提供了一种肌少症的生物标志物及其相关应用。
根据本公开的一个方面，提供了检测生物标志物的试剂在制备肌少症的诊断试剂中的用途，其中所述生物标志物包括帕金森病相关去糖酶(DJ-1)蛋白。
在一些实施方式中，所述DJ-1蛋白的第46位、第53位、第106位和/或第121位半胱氨酸是氧化型。
在一些实施方式中，所述DJ-1蛋白的第46位、第53位、第106位和/或第121位半胱氨酸是氧化型。在具体的实施方式中，所述DJ-1蛋白的第46位半胱氨酸是氧化型。在具体的实施方式中，所述DJ-1蛋白的第53位半胱氨酸是氧化型。在具体的实施方式中，所述DJ-1蛋白的第106位半胱氨酸是氧化型。在具体的实施方式中，所述DJ-1蛋白的第121位半胱氨酸是氧化型。
在一些实施方式中，所述诊断试剂用于检测来自对象的样品中，所述生物标志物的水平。根据一些实施方案中，所述样品选自血液样品、血清样品、血浆样品、唾液样品和尿液样品，或上面提到的任何样品的提取物。在优选的实施方式中，所述样品是血液样品，更优选为血清样品或血浆样品。
当来自对象的样品中，所述生物标志物的水平显著高于对照样品时，则可以判断该对象患有肌少症，或者具有患肌少症的高风险。所述对照样品可以是来自健康者的样品。
在一些实施方式中，当来自所述对象的样品中，所述DJ-1蛋白的表达水平(即，表达量)显著高于对照样品时，则判断该对象患有肌少症或者具有患肌少症的高风险。
在一些实施方式中，当来自所述对象的样品中，第46位、第53位、第106位和第121位半胱氨酸中的一个或多个为氧化型的DJ-1蛋白的表达水平显著高于对照样品时，则判断该对象患有肌少症或者具有患肌少症的高风险。在优选的实施方式，当来自所述对象的样品中，第46位和/或第106位为氧化型的DJ-1蛋白的表达水平显著高于对照样品时，则判断该对象患有肌少症或者具有患肌少症的高风险。
在一些实施方式，可以检测样品中所述DJ-1蛋白转录或者蛋白水平上的表达水平。
在一些实施方式中，所述检测可以是在诊断学领域中应用的任何类型的检测方法。在一些实施方式中，所述检测可以包括免疫测定法，例如放射免疫测定法(RIA)、化学发光和荧光免疫测定法、酶联免疫测定法(ELISA)、基于Luminex的珠子阵列、蛋白质微阵列测定法以及快速检测法(例如免疫层析条样试验)等。在一些实施方式中，所述检测可以包括聚合酶链式反应(PCR)，例如定量PCR(qPCR)、实时定量PCR(RT-PCR)等。
根据另一方面，提供了一种诊断肌少症的方法，所述方法包括：提供来自对象的样品；测定所述样品中的上述生物标志物的水平。
在一些实施方式中，所述方法还包括：将来自所述样品中的生物标志物的水平与对照样品中的生物标志物的水平进行对比，当来自所述样品中的生物标志物的水平显著较高时，则可以判断该对象患有肌少症，或者具有患肌少症的高风险。
在一些实施方式中，所述对象是人类或非人类生物体。在优选的实施方式中，所述对象是人类。
根据本公开的又一方面，提供了一种用于诊断肌少症的标志物，所述生物标志物包括帕金森病相关去糖酶(DJ-1)蛋白。
在一些实施方式中，所述DJ-1蛋白的第46位、第53位、第106位和/或第121位半胱氨酸是还原型。
在一些实施方式中，所述DJ-1蛋白的第46位、第53位、第106位和/或第121位半胱氨酸是氧化型。在具体的实施方式中，所述DJ-1蛋白的第46位半胱氨酸是氧化型。在具体的实施方式中，所述DJ-1蛋白的第53位半胱氨酸是氧化型。在具体的实施方式中，所述DJ-1蛋白的第106位半胱氨酸是氧化型。在具体的实施方式中，所述DJ-1蛋白的第121位半胱氨酸是氧化型。
附图说明
图1示出了根据一个实施方式的年轻小鼠和老年小鼠的DJ-1蛋白的第46、53、106及121位半胱氨酸的氧化状态。
图2示出了根据一个实施方式的年轻小鼠和老年小鼠的DJ-1蛋白、Cys46氧化型DJ-1蛋白和Cys106氧化型DJ-1蛋白的表达。图2A示出了蛋白免疫印迹的结果；图2B是蛋白免疫印迹的灰度统计结果。
图3示出了根据一个实施方式的女性肌少症患者及同年龄段老年女性血清中DJ-1蛋白免疫印迹的灰度统计结果。
图4示出了根据一个实施方式的男性肌少症患者及同年龄段老年男性血清中DJ-1蛋白免疫印迹的灰度统计结果。
图5示出了根据一个实施方式的女性肌少症患者及同年龄段老年女性血清中，第46位Cys氧化型DJ-1蛋白免疫印迹的灰度统计结果。
图6示出了根据一个实施方式的男性肌少症患者及同年龄段老年男性血清中，第46位Cys氧化型DJ-1蛋白免疫印迹的灰度统计结果。
图7示出了根据一个实施方式的女性肌少症患者及同年龄段老年女性血清中，第106位Cys氧化型DJ-1蛋白免疫印迹的灰度统计结果。
图8示出了根据一个实施方式的男性肌少症患者及同年龄段老年男性血清中，第106位Cys氧化型DJ-1蛋白免疫印迹的灰度统计结果。
具体实施方式
下面提供实施例以帮助理解本发明。但应理解，这些实施例仅用于说明本发明，但不构成任何限制。本发明的实际保护范围在权利要求书中进行阐述。应理解，在不脱离本发明精神的情况下，可以进行任何修改和改变。
全球已步入老龄化社会。据统计，至2025年全球超过60岁的老年人口为12亿，2050年将达20亿。健康老龄化是现代老年医学的重要使命。老年医学的宗旨是维护老年人的躯体功能和认知功能，而不是治愈慢病；延长健康期望寿命，而不是延长失能卧床、没有生活质量的寿命。
肌少症是与增龄相关的全身性进行性肌肉力量与数量下降导致肌肉衰竭性疾病。肌少症(sarcopenia)已经被正式确定为一种肌肉疾病，根据国际疾病分类(InternationalClassification of Diseases，ICD)标准第10版，其诊断码是M62.84。肌少症增加了跌倒和骨折风险，使患者日常生活能力下降，与心脏疾病、呼吸系统疾病和认知障碍相关，可以导致患者运动功能失调、生活质量下降，丧失独立生活能力，或长期需要别人照料，死亡风险增加。肌少症还增加了住院风险，提高了住院期间的护理成本，增加了住院费用。有研究发现住院老年人肌少症者的住院费用比非肌少症者高5倍。肌少症发病率高，在60岁以上人群中超过10％，80岁以上超过30％。增龄相关的肌肉数量和力量丢失，剥夺了老年人最基本的日常生活能力，还可能为他们带来毁灭性的打击以及意外死亡风险。据统计，美国2000年，因肌少症引起的各种疾病造成经济损失超过180亿美元，占全美医疗费用的1.5％。因此，肌少症不仅严重降低老龄人群的生活质量，而且加重了家庭和社会养老的经济负担。
2018年初，欧洲老年人肌少症工作组再次召开会议(European Working Group onSarcopenia in Older People，EWGSOP2)，总结了近10年来肌少症临床和科研的最新研究成果，修正了诊断标准。2018年的定义中，EWGSOP2使用低肌力作为肌少症评价的首要参数，肌力是目前衡量肌肉功能的最可靠指标。当发现肌力低下时可能存在肌少症；当发现肌肉数量或质量低下时可诊断肌少症；当肌力低、肌肉数量或质量低下及身体机能低下均存在时，则确诊为严重肌少症。
现在肌少症诊断主要依赖于临床标准，包括通过SARC-F(简易5项评分量表，包括Strength、Assistance in walking、Rise from a chair、Climb stairs and Falls)量表进行病例筛查，肌力测试，肌肉量测试及肌酸稀释试验。SARC-F问卷方法由5项问卷组成，由患者自我报告，从患者自我报告的征象中获取肌少症的特征。患者基于其在力量、行走能力、从椅子上站起来及爬楼梯能力受限的感知和摔倒的体验作出反应。
SARC-F量表由于是患者自我报告，结果会受患者对不良结果主观结论的影响。临床医生更偏向使用比较客观的检查工具，例如根据测量年龄、握力和小腿周径，根据得分评估肌少症的概率。握力的准确测定要求有确定的测试条件，手持式测力计要校准，并要有来自适当人群的参考数据。肌量可以使用双能X线吸收法(Dualenergy X-rayabsorptiometry，DXA)或者生物电阻抗分析(Bioelectrical impedance analysis，BAI)测量测定全身骨骼肌总量及四肢骨骼肌量。该设备是根据全身的导电性得出肌量的估计值，不是直接测量肌量。
但是，SARC-F问卷方法，在预测低肌力方面具有低中度的敏感性，主要用于发现重症病例。临床医生通过肌力测试进行初步判断，然后通过力量的检测确诊。但是当患者出现肌力及肌量减少时，其机体机能已经发生不可逆转的变化，存在潜在的风险。如果在肌力及肌量发生变化前筛查进行早期干预将更有利于疾病进展的控制。肌少症进展隐匿，渐行加重，早发现、早诊断、早干预是延缓肌少症发展和提升老年人生活质量降低死亡率的重要环节，获得最大健康收益的有效手段。因此对于在血液中发现鉴定出特定的生物标志物，用于无创筛查，诊断和监测肌少症是最为可行、简单、方便和经济的有效方法。潜在的生物标志物包括神经肌肉连接、肌肉蛋白转换、行为介导通路、炎症介导通路、氧化还原相关因子、激素或其他合成代谢的标志物，但是现在并没有任何相关的生物标志物出现。
生物标志物可以在一定程度上有助于干预及药物治理效果的评估，在干预前后分别检测一次生物标志物，通过分析生物标记物的变化可以评估干预或者治疗的效果。还可以通过长时间的生物标志物的监测对疾病的进展进行预判积极进行后期的干预与监管。另一方面，生物标志物可以用于药物的研发，用于药物有效性的测评。
DJ-1蛋白，也称为帕金森病蛋白7，已知是致癌基因。另外，发现DJ-1中的第166位亮氨酸的缺失或点突变(L166P)会导致细胞死亡，导致家族性帕金森病。
而本公开通过筛选，发现分泌型DJ-1蛋白(也称为帕金森病蛋白7)，及其Cys46和/或Cys106氧化型DJ-1蛋白与肌少症密切相关，且经进一步验证了DJ-1蛋白及其Cys46和/或Cys106氧化型能够作为生物标志物，对肌少症进行准确的诊断和筛查结果。另外，DJ-1蛋白为分泌型蛋白，能够使用血液或者血清样品进行检测，使得临床检测相对容易。
定义
除非另有定义，否则本发明使用的所有技术术语和科技术语都具有如在本发明所属领域中通常使用的相同含义。出于解释本说明书的目的，将应用以下定义，并且在适当时，以单数形式使用的术语也将包括复数形式，反之亦然。
除非上下文另有明确说明，否则本文所用的表述“一种”和“一个”包括复数指代。例如，提及“一个细胞”包括多个这样的细胞及本领域技术人员可知晓的等同物等等。
本文所用的术语“肌少症”是指与年龄增长相关的，全身进行性肌肉力量与数量下降导致的肌肉衰竭性疾病。
肌少症是与增龄相关的肌肉相关的疾病，在衰老过程中机体内的氧化自由基累积，改变细胞的氧化还原状态，氧化还原稳态下降，从而导致骨骼肌功能障碍，基于此细胞中氧化态蛋白的积累有可能作为肌少症的分子标志物。本公开利用氧化还原蛋白质谱技术，比较分析了年轻与老年小鼠骨骼肌组织中差异的氧化还原态蛋白质，筛选并鉴定了DJ-1蛋白可以作为肌少症的生物标志物，用于早期筛查和诊断。
术语“帕金森病相关去糖酶”、“DJ-1”或“PARK7”在本文中可互换使用，属于肽酶C56蛋白家族。DJ-1蛋白具有多个半胱氨酸，例如人DJ-1蛋白具有三个半胱氨酸残基，即Cys46、Cys53和Cys106；小鼠DJ-1具有四个半胱氨酸残基，即Cys46、Cys53、Cys106和Cys121。已知DJ-1蛋白的这些半胱氨酸残基可响应于细胞氧化应激而被氧化。半胱氨酸可形成3种不同的氧化形式，半胱氨酸-次磺酸(Cys-SOH)、半胱氨酸-亚磺酸(Cys-SO2H)和半胱氨酸-磺酸(Cys-SO3H)。已有报道，DJ-1可以通过氧化Cys106来调控转录因子，显示出抗氧化的防御作用。已知DJ-1与帕金森病和癌症相关，但是还没有任何研究表明DJ-1与肌少症之间的关系。本公开通过筛选首次发现了DJ-1及其半胱氨酸(Cys)氧化型与肌少症高度相关，能作为标志物分子对肌少症作出准确的诊断，或在早期对肌少症进行筛选。
本文关于半胱氨酸的“氧化型”是指DJ-1蛋白中的相应位点处的半胱氨酸被氧化形成亚磺酸和磺酸形式。
本公开通过氧化还原质谱，对比了年轻与年老小鼠骨骼中有显著差异的分泌型蛋白质，出乎意料地发现了DJ-1，以及氧化型DJ-1(Cys46/Cys106)在肌少症患者血清中的水平显著升高，因此可以作为肌少症的潜在分子标记物，用于肌少症早期的预防筛查，疾病进展的监控及在后期药物或者是物理干预过程中可以监控测评。
本文所用的术语“诊断”是指确定和/或鉴定对象的可能患有的疾病的过程，即诊断过程，又指通过该程序得出的意见，即诊断意见。因此，它也可以被视为尝试将对象的状况分类为单独和不同的类别，以便做出有关治疗和预后的医疗决策。应当理解，在优选的实施方式中，该过程是在体外进行的，即不在人体或动物体上实施。
本文所用的术语“对象”是指活的人类或非人类生物体。在本文中，优选情况下的对象是人类对象。
本文所用的术语“样品”是指为了对目标对象(例如患者)进行诊断、预后或评估的目的而获得的体液样品。优选的测试样品包括血液、血清、血浆、尿液和唾液。此外，本领域技术人员应当认识到，某些测试样品在分级或纯化步骤，例如将全血分离成血清或血浆组分后，可以更容易地进行分析。
本文所用的样品中生物标志物的水平“显著”高于对照样品，是通过统计学显著性水平分析确定的。统计学显著性通常通过比较多个对象的样品并确定置信区间和/或p值来确定。优选的，当与对照相比，待测样品的生物标志物水平的p值为0.05或更小，优选0.01或更小，更优选0.001或更小，则判断生物标志物水平显著高于对照样品，具有显著性差异。
为使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步的详细说明。此处所描述的具体实施例仅用于解释本发明，并不用于构成对本发明的任何限制。此外，在以下说明中，省略了对公知结构和技术的描述，以避免不必要地混淆本公开的概念。这样的结构和技术在许多出版物中也进行了描述。
实施例
实施例1
本实施例利用蛋白还原质谱，对比分析了年轻(3月龄)与年老小鼠(22月龄)骨骼肌组织中有显著变化的蛋白，然后与疾病数据库(Gene Card/Disgenet)及分泌蛋白组数据库(https://www.proteinatlas.org/humanproteome/blood+protein/secretome#predicting_secreted_protei ns)进行共同分析。
简单来讲，蛋白还原质谱实验包括以下步骤。首先收集小鼠的胫骨前肌，使用4％脱氧胆酸钠(SDC)去垢剂(Thermo ScientificTM)进行蛋白质提取。通过PierceTM BCA蛋白测定试剂盒(赛默飞世尔公司)法检测蛋白浓度，将各样品的蛋白质浓度使用4％ SDC去垢剂均稀释成2mg/mL。取1mg(0.5mL全蛋白质提取液)进行蛋白质还原态测定。加入终浓度为0.1mM的碘乙酰胺炔(Iodoacetamide alkyne)，在室温下反应1小时；加入终浓度为0.2mM的Diazo Biotin-Azide，10mM维生素C，2.5mM THPTA(三(3-羟丙基三唑甲基)胺)和0.5mM硫酸铜，室温反应2小时。利用丙酮沉淀法对蛋白质进行纯化，在37℃的条件下，使用胰蛋白酶对蛋白质进行酶切消化。消化结束后，利用链霉素亲和素-琼脂糖球对还原态的半胱氨酸肽段进行富集，并使用100mM的硫代亚硫酸钠将富集的肽段进行洗脱。将洗脱的肽段进行除盐干燥后，使用Orbitrap Eclipse三合一高分辨质谱仪(赛默飞)对肽段进行分析，使用MaxQuant对质谱结果进行定性定量分析。
通过对3月龄与22月龄(老年)小鼠的胫骨前肌做蛋白质还原质谱，通过生物信息分析(例如使用Hiplot或Sangerbox 3.0)鉴定在老年小鼠骨骼肌中氧化位点升高的蛋白质。然后与疾病数据库(Gene Card/Disgenet)及分泌蛋白质组数据库取交集。筛选到在老年小鼠中，氧化态升高的分泌型蛋白质DJ-1蛋白。
小鼠骨骼肌的DJ-1蛋白(Genbank No:NP_001116849.1)存在4个半胱氨酸(Cys)氧化位点，分别是第46、53、106及121位氨基酸。
通过蛋白还原质谱，对比分析了年轻(3月龄)与年老小鼠(22月龄)骨骼肌组织中有显著变化的蛋白氧化位点。结果发现在小鼠的骨骼肌组织中检测到DJ-1的4个半胱氨酸氧化位点，其中第46、53及106位半胱氨酸为氧化型的DJ-1蛋白的量在老年鼠中显著高于年轻小鼠，而第121位半胱氨酸氧化型在老年鼠和年轻小鼠之间没有显著性差异(图1)。
实施例2
在人的DJ-1蛋白中不存在第53位半胱氨酸，因此本实施例中集中研究了DJ-1蛋白，及其第46和106位Cys的氧化状态。
本实施例中，利用蛋白免疫印迹(Western Blot)方法，检测了在年轻(3月龄)与老年小鼠(22月龄)血清中的DJ-1蛋白，以及第46和106位Cys为氧化型的DJ-1蛋白的水平。具体来讲，使用氧化还原质谱相同小鼠的血清样本，首先静置离心取上清，样本稀释20倍。取相同体积的血清上样，SDS-PAGE跑胶90～120分钟，使用分别针对DJ-1蛋白(Proteintech，#11681-1-AP)，第46位Cys氧化型DJ-1蛋白(oxDJ-1(Cys46)，自制)和第106位Cys氧化型DJ-1蛋白(oxDJ-1(Cys106)，Merk，#MABN1773)的一抗，及山羊抗小鼠IgG二抗(Biosharp，BL001A)或者山羊抗兔IgG二抗(Biosharp，BL003A)，进行蛋白免疫印迹。结果显示，在老年小鼠血清中，DJ-1蛋白，第46位Cys氧化型DJ-1蛋白和第106位Cys氧化型DJ-1蛋白的量明显高于年轻小鼠(图2A)。使用ImageJ软件，统计蛋白免疫印迹的灰度图，也显示出老年小鼠血清中，DJ-1蛋白，第46位Cys氧化型DJ-1蛋白和第106位Cys氧化型DJ-1蛋白的量显著高于年轻小鼠(图2B)。
实施例3
本实施例在人类受试者中，验证了DJ-1蛋白，第46位Cys氧化型DJ-1蛋白和第106位Cys氧化型DJ-1蛋白可以作为肌少症的分子标记物。收集了年龄在80至100岁之间的正常的老年人(女性握力>18kg，男性握力>28kg)的血清20例，其中男性样本12例，女性样本8例。肌少症患者(女性握力<18kg，男性握力<28kg)血清样本30例，其中男性样本16例，女性样本14例。
图3示出了女性DJ-1蛋白免疫印迹的灰度统计结果，显示出在女性肌少症患者血清中的DJ-1水平显著性高于正常的老年女性。图4示出了男性DJ-1蛋白免疫印迹的灰度统计结果，同样显示出男性肌少症患者血清中的DJ-1水平显著高于同年龄段正常男性血清中的DJ水平。这些结果均表明，肌少症患者血清中的DJ-1水平显著高于同年龄段的正常老年人。
同时，也检测了女性肌少症患者及同年龄段老年女性血清中，第46和106位Cys氧化型DJ-1蛋白的水平，蛋白免疫印迹的灰度统计结果显示，女性肌少症患者血清中第46位和第106位Cys氧化型DJ-1水平显著性高于同年龄女性(图5和图7)。男性肌少症患者血清中第46位和第106位Cys氧化型DJ-1水平也显著性高于同年龄男性(图6和图8)。
因此，所有数据表明，DJ-1蛋白，及第46位和第106位Cys氧化型DJ-1蛋白在肌少症患者中水平显著高于同年龄段正常老年人。
本公开的技术方案不限于上述具体实施例的限制，凡是根据本公开的技术方案做出的技术变形，均落入本公开的保护范围之内。
Claims (10)
1.检测生物标志物的试剂在制备肌少症的诊断试剂中的用途，其中所述生物标志物包括帕金森病相关去糖酶(DJ-1)蛋白。
2.根据权利要求1所述的用途，其中所述DJ-1蛋白的第46位、第53位、第106位和第121位半胱氨酸中的一个或多个是还原型。
3.根据权利要求1所述的用途，其中所述DJ-1蛋白的第46位、第53位、第106位和第121位半胱氨酸中的一个或多个是氧化型，优选地所述DJ-1蛋白的第46位和/或第106位半胱氨酸是氧化型。
4.根据权利要求1所述的用途，其中所述诊断试剂用于检测来自对象的样品中，所述DJ-1蛋白的表达水平。
5.根据权利要求1所述的用途，其中所述诊断试剂用于检测来自对象的样品中，和/或所述DJ-1蛋白的第46位、第53位、第106位和第121位半胱氨酸中的一个或多个为氧化型。
6.根据权利要求4或5所述的用途，其中所述样品选自血液样品、唾液样品和尿液样品，优选血液样品，更优选为血清样品或血浆样品。
7.根据权利要求4或5所述的用途，其中所述检测包括免疫测定法或聚合酶链式反应(PCR)。
8.根据权利要求4或5所述的用途，其中所述对象是人类或非人类生物体，优选地，所述对象是人类。
9.根据权利要求4或5所述的用途，其中，当来自所述对象的样品中，所述DJ-1蛋白的表达水平显著高于对照样品时，则判断该对象患有肌少症或者具有患肌少症的高风险；其中所述对照样品来自健康者。
10.根据权利要求4或5所述的用途，其中，当来自所述对象的样品中，第46位、第53位、第106位和第121位半胱氨酸中的一个或多个，优选地第46位和/或第106位半胱氨酸，为氧化型的DJ-1蛋白的表达水平显著高于对照样品时，则判断该对象患有肌少症或者具有患肌少症的高风险；其中所述对照样品来自健康者。
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