CN117924527A - 一种基于麦麸的抗炎活性多糖及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种基于麦麸的抗炎活性多糖及其制备方法和应用,利用活化后的蝉拟青霉菌通过固态发酵麦麸制备抗炎活性多糖,基于蝉拟青霉繁殖力旺盛和较强的生物转化能力,对小麦麸皮进行固态发酵后水提醇沉得到了发酵麦麸多糖,所述抗炎活性多糖由甘露糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖和半乳糖组成,重均分子量分布范围为1.3×102Da~2.93×105Da,通过体内动物实验探究其对小鼠溃疡性结肠炎的影响,研究结果表明FWBP具有较为显著的抗炎效果。
Description
技术领域
本发明属于生物发酵技术领域,具体涉及到一种基于麦麸的抗炎活性多糖及其制备方法和应用。
背景技术
麦麸是小麦制粉加工生产中的主要副产物,富含膳食纤维、淀粉、蛋白质、维生素E及木质素等营养成分,具有很高的应用价值。麦麸中膳食纤维含量高达35%~60%,另含有10%~18%的蛋白质,10%~15%的淀粉,是一种理想的膳食纤维来源。
膳食纤维被认为是促进健康的食品重要成分,根据其水溶性可分为可溶性膳食纤维和不可溶性膳食纤维。其中,可溶性膳食纤维主要含有阿拉伯木聚糖和葡聚糖,单糖组成包括木糖、葡萄糖、阿拉伯糖,由于结构中含有更多的亲水基团,而且在肠道中可为益生菌酵解利用,被认为起到更重要的生理功能,有利于维持血糖稳定,降低血液胆固醇水平,还可以调节肠道菌群,降低结直肠癌风险。不可溶性膳食纤维则能吸收食物中的有毒物质,起到润肠通便,预防便秘的作用。
可溶性膳食纤维和不可溶性膳食纤维的比例对麦麸膳食纤维的生理功能有着显著影响,一般认为质量比为1:3为宜。麦麸中膳食纤维主要为不可溶性膳食纤维,可溶性膳食纤维含量仅为3%左右。因此,可通过物理、化学或生物技术,提高麦麸可溶性膳食纤维含量,改善其生物活性作用,有利于拓宽麦麸活性多糖在生物与医药领域中的应用与开发。
蝉拟青霉Paecilomyces cicadae(Miquel.)Samson是我国传统名贵中药蝉花又名金蝉花,属虫生性药用真菌,是蝉拟青霉菌寄生在某种同翅目蝉科昆虫蝉若虫上所形成的的虫菌复合体,含有多种蛋白质、多糖以及核苷类物质等活性成分。蝉花多糖在镇痛、降血糖、抗肿瘤、保护肾脏、调节免疫力等方面表面突出。
近年来,微生物固态发酵制备活性多糖受到越来越多的关注。利用微生物发酵来降解或转化原料中蛋白质、淀粉等营养成分,将不溶性膳食纤维转化为可溶性膳食纤维,从而改善其生物活性。微生物高固发酵制备工艺具有如下潜在优势:①提高麦麸底物固含量,增加单位设备产能,降低后续干燥过程能耗;②减少用水量,节约成本,减少废水排放;③改善麦麸膳食纤维的生物活性,是对麦麸中膳食纤维进行改性的优良方法。
因此,开发一种利用蝉拟青霉菌固态发酵麦麸制备的抗炎活性多糖,对于克服天然麦麸膳食纤维存在的诸多问题具有重要意义。
发明内容
本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊,而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。
鉴于上述和/或现有技术中存在的问题,提出了本发明。
因此,本发明的目的是,克服现有技术中的不足,提供一种基于麦麸的抗炎活性多糖。
为解决上述技术问题,本发明提供了如下技术方案:所述抗炎活性多糖通过蝉拟青霉菌(Isaria cicadae Miquel)固态发酵麦麸制得,其中,
(i)抗炎活性多糖的单糖组成包括甘露糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖;
(ii)抗炎活性多糖的总糖含量>71%;
(iii)抗炎活性多糖的分子量分布范围为1.3×102Da~2.93×105Da;
(iv)抗炎活性多糖的大分子量为2.93×105Da,占比>78%。
作为本发明所述基于麦麸的抗炎活性多糖的一种优选方案,其中:所述抗炎活性多糖的单糖组成中甘露糖的含量为30~32%,葡萄糖醛酸的含量为9~10%,葡萄糖的含量为17~19%,半乳糖的含量为35~36%。
本发明的再一目的是,提供一种基于麦麸的抗炎活性多糖作为活性组分在制备治疗溃疡性结肠炎的药物中的应用。
作为本发明所述基于麦麸的抗炎活性多糖作为活性组分在制备治疗溃疡性结肠炎的药物中的应用的一种优选方案,其中:所述溃疡性结肠炎为葡聚糖硫酸钠诱导的溃疡性结肠炎。
本发明的再一目的是,提供一种基于麦麸的抗炎活性多糖作为功能配料在制备保护肠道健康的食品中的应用。
本发明的再一目的是,提供一种基于麦麸的抗炎活性多糖的制备方法,包括,小麦麸皮原料烘干后粉碎过筛,调节水分含量至50%~60%,得到以麦麸为基质的发酵培养基;
将活化后的蝉拟青霉菌种子液接种于灭菌后的发酵培养基,恒温发酵后收集发酵麦麸,烘干后粉碎过筛,得到发酵麦麸干粉;
发酵麦麸干粉通过热水浸提法进行浸提处理,提取液旋转、浓缩、沉淀、离心,收集沉淀物冻干得到发酵麦麸粗多糖;
发酵麦麸粗多糖通过Sevage法脱除蛋白,即制得基于麦麸的抗炎活性多糖。
作为本发明所述基于麦麸的抗炎活性多糖的制备方法的一种优选方案,其中:所述蝉拟青霉菌通过活化培养基培养活化,其中,所述活化培养基包括蝉蛹粉1~8%,葡萄糖2%,琼脂1.5%,马铃薯浸粉1%,磷酸二氢钾0.03%,七水硫酸镁0.015%,硫胺素0.00008%。
作为本发明所述基于麦麸的抗炎活性多糖的制备方法的一种优选方案,其中:所述蝉拟青霉菌种子液的浓度为106~108cfu/mL。
作为本发明所述基于麦麸的抗炎活性多糖的制备方法的一种优选方案,其中:所述蝉拟青霉菌种子液的接种量为小麦麸皮原料的8~12%。
作为本发明所述基于麦麸的抗炎活性多糖的制备方法的一种优选方案,其中:所述恒温发酵的发酵温度为22~30℃,发酵时间为3~10d。
作为本发明所述基于麦麸的抗炎活性多糖的制备方法的一种优选方案,其中:所述浸提处理的浸提温度为50~100℃,浸提时间为1~5h。
本发明有益效果:
(1)本发明利用药用真菌蝉拟青霉繁殖能力旺盛和较强的生物转化能力,以小麦麸皮作为发酵基质进行固态发酵,采用水提醇沉法从发酵麦麸中获得的发酵麦麸多糖总糖含量为71.90%,糖醛酸含量为11.74%,蛋白含量为3.45%,且经真菌固态发酵后改变了原麦麸多糖的单糖组成,将原麦麸中的可溶性糖阿拉伯木聚糖转化为具有蝉花多糖相似单糖成分的半乳甘露聚糖。
(2)本发明利用蝉拟青霉固态发酵麦麸制备的活性多糖具有很好的抗炎活性,在抑制结肠缩短、脾脏肿大,肠道损伤以及促炎细胞因子TNF-α,1L-1β和1L-6表达水平升高上表现出更显著的治疗效果。
(3)本发明选用药用真菌蝉拟青霉作为固态发酵菌种,以小麦加工副产物麸皮作为发酵基质,一方面有效的提升了麦麸的综合利用度,另一方面为真菌资源的开发利用提供了科学支撑。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案,下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动性的前提下,还可以根据这些附图获得其它的附图。其中:
图1为本发明实施中WBP和FWBP分子量分布检测的液相色谱图。
图2为本发明实施中WBP和FWBP单糖组成检测的液相色谱图。
图3为本发明实施中WBP和FWBP对聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠结肠炎的缓解作用图。
图4为本发明实施中WBP和FWBP对聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠结肠组织病理学评分比较图。
图5为本发明实施中WBP和FWBP对聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠结肠组织炎症因子抑制作用图。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂,下面结合说明书实施例对本发明的具体实施方式做详细的说明。
在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明,但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施,本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广,因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。
其次,此处所称的“一个实施例”或“实施例”是指可包含于本发明至少一个实现方式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的“在一个实施例中”并非均指同一个实施例,也不是单独的或选择性的与其他实施例互相排斥的实施例。
本发明所用原料无特殊说明均为本领域普通市售分析纯。
具体的,本发明所用麦麸产自发达面粉厂;
本发明所用菌种为蝉花(Isaria cicadae Miquel)购于北京北纳创联生物技术研究院,菌种编号为116724。
实施例1
本实施例提供了一种基于麦麸的抗炎活性多糖的制备方法,具体为:
1)菌种活化:蝉拟青霉菌(Isaria cicadae Miquel)斜面菌种接入到活化培养基,在27℃下培养5天,得到活化的蝉花菌丝菌种,其中,蝉拟青霉菌活化培养基的配方为蝉蛹粉6%,琼脂1.5%,马铃薯浸粉1%,磷酸二氢钾0.03%,七水硫酸镁0.015%,葡萄糖2%,硫胺素0.00008%。
2)种子液培养:在无菌条件下挑取活化后6块蝉花菌丝块接种至装有100mL培养基的锥形瓶中,锥形瓶置于27℃恒温摇床中,摇床转速150r/min,震荡培养3天后无菌条件下过滤得到蝉拟青霉种子液。
3)发酵培养基:小麦麸皮105℃烘干至恒重,粉碎并过40目筛,得到麦麸干粉,调节水分含量至50wt%,得到以麦麸为基质的发酵培养基,最后再将发酵培养基在121℃下灭菌20min,冷却至室温后备用;
4)固态发酵:将步骤2)制得的种子液按麦麸原料质量的10%(w/v)接种到灭菌后的发酵培养基中,于27℃恒温培养箱内发酵6天,发酵结束后收集发酵麦麸在45℃鼓风干燥箱内烘12h,粉碎过40目筛,得到发酵麦麸干粉。
5)多糖提取:将步骤4)制得的发酵麦麸干粉采用热水浸提法提取发酵麦麸多糖,提取温度为80℃,提取时间为2h。提取液在60℃下旋转浓缩后加入95%(v/v)乙醇溶液使其乙醇质量浓度达到80%,在4℃下沉淀12h,然后以4000r/min离心10min,收集沉淀物冻干得到发酵麦麸粗多糖,得率为12.19%。
6)多糖脱蛋白:将步骤5)中的发酵麦麸粗多糖用Sevage法脱除蛋白质,以质量体积比为1:1将发酵麦麸多糖加入蒸馏水中,再以体积比为5:1将发酵麦麸多糖水溶液与Sevage溶液混合,所述Savage溶液中氯仿与正丁醇的质量比为5:1,在振荡20min后静置,离心弃去有机层,将上层多糖溶液进行再次除蛋白直至静置时有机相与水相间无白色物质析出,再在60℃下减压浓缩去除氯仿和正丁醇,冻干后得到去除蛋白质后的发酵麦麸多糖,并将其命名为FWBP。
对比例1
本对比例以未经过发酵的麦麸多糖做对比,具体为:
1)多糖提取:将小麦麸皮105℃烘干至恒重,粉碎并过40目筛,得到麦麸干粉。采用热水浸提法提取麦麸多糖,提取温度为80℃,提取时间为2h。提取液在60℃下旋转浓缩后加入95%(v/v)乙醇溶液使其乙醇质量浓度达到80%,在4℃下沉淀12h,然后以4000r/min离心10min,收集沉淀物冻干得到麦麸粗多糖,得率为3.24%。
2)多糖脱蛋白:将步骤1)中的麦麸粗多糖用Sevage法脱除蛋白质,以质量体积比为1:1将麦麸多糖加入蒸馏水中,再以体积比为5:1将麦麸多糖水溶液与Sevage溶液混合,所述Savage溶液中氯仿与正丁醇的质量比为5:1,在振荡20min后静置,离心弃去有机层,将上层多糖溶液进行再次除蛋白直至静置时有机相与水相间无白色物质析出,再在60℃下减压浓缩去除氯仿和正丁醇,冻干后得到去除蛋白质后的麦麸多糖,并将其命名为WBP。
对实施例1、对比例1的多糖进行如下分析;
采用苯酚-硫酸法测总糖含量,标准曲线为y=9.3478x+0.0153,R2=0.9952;采用间羟基联苯法测定糖醛酸含量,标准曲线为y=20.96x-0.0908,R2=0.9988;采用考马斯亮蓝法测定蛋白质含量,标准曲线y=6.8871x-0.0034,R2=0.9987。原麦麸多糖WBP和发酵麦麸多糖FWBP的总糖、糖醛酸和蛋白质的含量如表1所示。
表1 WBP和FWBP总糖、糖醛酸和蛋白质含量
分子量分布测定:
分子量(Mw)采用LC-20AT高效液相色谱体系,结合Rad-10A折射率检测器和OHpakSB-805HQ色谱柱测定。流动相为超纯水,流速为0.8mL/min。柱温保持在30℃。多糖样品(1mg/mL)溶解在超纯水中,通过0.22μm膜过滤。进样量为20μL。
图1为发酵麦麸多糖FWBP和原麦麸多糖WBP的分子量分布图。
由图1可以看出,发酵麦麸多糖FWBP和原麦麸多糖WBP的液相色谱图均呈现不均一性,发酵麦麸多糖FWBP的重均分子量范围是1.3×102Da~2.93×105Da,原麦麸多糖WBP重均分子量范围是1.7×102Da~2.98×105Da。发酵后麦麸多糖小分子量糖占比减少,大分子量占比由8.66%升至78.08%。
单糖组成分析:
采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生化法对麦麸多糖的单糖组分进行测定。
取5mg麦麸多糖样品,加入2mol/L三氟乙酸在密封安瓿瓶中,120℃下水解6h,减压蒸干、PMP柱前衍生反应40min、三氯甲烷萃取三次除去多余的PMP、取水相过0.22μm滤膜后用高效液相色谱仪进行分析。配备安捷伦1260Infinity II液相色谱系统,使用AgilentZORBAX SB-C18柱(4.6×250mm,5μm),流动相为0.1mol/L磷酸盐(pH=6.7)和乙腈(83:17),进样量为10μL,流速设定为1.0mL/min,在30℃、250nm波长下进行紫外检测。同样的方法也应用于标准单糖(Glc、Man、Gal、Rha、Ara、Xyl、GlcA和GalA)。通过与单糖标准品保留时间的比较,确定了FWBP和WBP的单糖组成。
图2为发酵麦麸多糖FWBP、原麦麸多糖WBP和混合标准品的单糖组成图,其中Man为甘露糖、Rha为鼠李糖、GlcA为葡萄糖醛酸、GalA为半乳糖醛酸、Glc为葡萄糖、Gal为半乳糖、Xyl为木糖、Ara为阿拉伯糖。
由如图2可知,利用蝉拟青霉发酵后麦麸多糖单糖组成发生了明显的改变,WBP主要由葡萄糖(34.33%)、木糖(27.26%)和阿拉伯糖(30.26%)组成,而FWBP则主要由甘露糖(31.93%)、葡萄糖醛酸(9.50%)、葡萄糖(17.94%)和半乳糖(35.55%)组成。
理化性质分析:
对发酵前后的麦麸多糖WBP和FWBP进行理化性质的测定,包括持水性,持油性和溶胀性,结果如表2所示。
表2发酵前后的麦麸多糖WBP和FWBP的理化性质
可以看出,发酵后多糖FWBP持水性,持油性和溶胀性均高于原麦麸多糖WBP。
实施例2
本实施例与实施例1不同之处在于,调整菌种活化的培养基配方,具体为:
蝉蛹粉2%,琼脂1.5%,马铃薯浸粉1%,磷酸二氢钾0.03%,七水硫酸镁0.015%,葡萄糖2%,硫胺素0.00008%;
其余步骤工艺均参照实施例1,发酵得到本实施例的麦麸多糖,并将其命名为FWBP1。
实施例3
本实施例与实施例1不同之处在于,调整菌种活化的培养基配方,具体为:
蝉蛹粉4%,琼脂1.5%,马铃薯浸粉1%,磷酸二氢钾0.03%,七水硫酸镁0.015%,葡萄糖2%,硫胺素0.00008%;
其余步骤工艺均参照实施例1,发酵得到本实施例的麦麸多糖,并将其命名为FWBP2。
实施例4
本实施例与实施例1不同之处在于,调整菌种活化的培养基配方,具体为:
蝉蛹粉8%,琼脂1.5%,马铃薯浸粉1%,磷酸二氢钾0.03%,七水硫酸镁0.015%,葡萄糖2%,硫胺素0.00008%;
其余步骤工艺均参照实施例1,发酵得到本实施例的麦麸多糖,并将其命名为FWBP3。
体内抗炎试验
实验动物及饲养条件:80只体重19~21g的6周龄SPF级雄性昆明小鼠购自SPF生物技术有限公司(北京,中国,生产许可证:SCXK(京)2019-0010)。23±2℃,相对湿度50%-60%的笼子里。可以自由获得水和标准食物。所有动物实验均按照中华人民共和国的立法路线和伦理准则进行,并经天津科技大学实验动物护理伦理委员会批准。
实验设计及测定指标:所有小鼠适应性饲养一周后,随机分为8组,每组10只。正常组给予正常饮用水,模型组、阳性组和多糖治疗组给予3%DSS水造模7天。
造模期结束后,正常组和模型组小鼠灌胃0.2mL无菌生理盐水。阳性组小鼠给予柳氮磺吡啶(SASP)(200mg/kg/天)。治疗组分别给予的多糖溶液,WBP组给予WBP(200mg/kg/天);FWBP组给予FWBP(200mg/kg/天);FWBP1组给予FWBP1(200mg/kg/天);FWBP2组给予FWBP2(200mg/kg/天);FWBP3组给予FWBP3(200mg/kg/天)。
每日灌胃一次,恢复期为7天,每天测量小鼠的体重。实验的第21天处死小鼠,称重脾脏,测量结肠长度,并取一段结肠用于HE染色,观察肠道损伤情况,并进行组织形态学评分,收集小鼠结肠组织用于测定小鼠炎症因子水平。
数据分析:所有实验经过至少3次独立实验后,数据以平均值±标准差表示。数据分析采用SPSS21.0软件进行单因素方差分析,然后采用Duncan检验。
图3是发酵麦麸多糖FWBP对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎小鼠症状缓解情况图。从图3可以看出,模型组小鼠出现体重下降、腹泻、便血等症状,表明DSS诱导的结肠炎小鼠模型成功建立。
如图3A所示,对照组小鼠的体重在实验过程中呈逐渐上升的趋势。相比之下,DSS造模的模型组体重在第5天有不同程度的下降,在第8天给予FWBP后逐渐增加,说明FWBP处理增强了DSS诱导的结肠炎模型中的体重恢复。
疾病活动指数(DAI)是评价小鼠结肠炎症状的主要指标。随着DSS诱导的持续,小鼠出现体重减轻、腹泻、便血等临床症状。如DAI评分所示(图3B),对照组体重无明显减轻,也无任何临床症状,DAI评分为0。与对照组相比,DSS诱导显著提高了小鼠的DAI水平。在第8-14天使用FWBP、WBP和柳氮磺吡啶干预,在干预结束时,FWBP组和SASP组小鼠的DAI评分均低于模型组,表明FWBP的干预可改善体重减轻,并减少腹泻和血便的存在。
结肠缩短是结肠炎的一个典型症状之一。各组小鼠结肠长度情况如图3C所示,与对照组结肠长度相比,DSS处理后的模型组小鼠结肠长度显著缩短(p<0.05)。与模型组相比,SASP、WBP、FWBP、FWBP1、FWBP2、FWBP3对结肠缩短的改善作用均显著(p<0.05),其中,FWBP组改善效果最好。
脾脏肿大是结肠炎患者的临床症状之一。DSS诱导的结肠炎小鼠会出现脾脏肿大的现象。如图3D所示,DSS组的脾脏指数显著高于Con组,SASP和多糖的治疗在一定程度上抑制了炎症小鼠的脾脏指数上升,对比发现,治疗组中FWBP组抑制效果最好。
图4是实施例1制备的多糖FWBP对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎小鼠结肠结肠损伤情况和组织学评分图。
由图4可知,对照组小鼠结肠结构完整,无明显的损伤或炎症征象。DSS诱导的模型组小鼠出现了溃疡性结肠炎的典型组织学损伤。包括炎症细胞浸润、隐窝结构缺失和上皮细胞损伤。然而,SASP和发酵前后麦麸WBP处理均可减少结肠炎症细胞浸润和结肠结构损伤,增加结肠杯状细胞,并显著降低组织病理学评分。相比之下,FWBP表现出更好的治疗效果,隐窝结构更完整,接近正常小鼠状态。
图5为不同处理组对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠结肠组织炎症因子水平影响图。为了证明发酵前后麦麸多糖对结肠炎小鼠炎症水平的影响,我们检测了小鼠结肠组织中主要炎症因子的表达。如图5所示,与Con组相比,模型组中促炎细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β的表达均显著增加(p<0.05)。SASP组和多糖治疗组处理降低了TNF-α、IL-6和IL-1β水平(图5A-C)。其中,发酵麦麸多糖FWBP处理对促炎细胞因子的抑制显著优于WBP组(p<0.05),与治疗药物SASP相比,FWBP具有更好的抑制效果。抗炎细胞因子IL-10负责维持免疫稳态从而抑制结肠炎的发展。如图5D所示,与模型组相比,多糖治疗组显著增加了DSS诱导的小鼠结肠中IL-10的水平(p<0.05),其中FWBP组和其他治疗组相比恢复效果更显著(p<0.05)。这些结果显示,发酵后麦麸多糖FWBP与原麦麸多糖WBP相比表现出更优越的溃疡性结肠炎治疗生物活性。
综上,本发明利用药用真菌蝉拟青霉繁殖能力旺盛和较强的生物转化能力,以小麦麸皮作为发酵基质进行固态发酵,采用水提醇沉法从发酵麦麸中获得的发酵麦麸多糖总糖含量为71.90%,糖醛酸含量为11.74%,蛋白含量为3.45%,且经真菌固态发酵后改变了原麦麸多糖的单糖组成,将原麦麸中的可溶性糖阿拉伯木聚糖转化为具有蝉花多糖相似单糖成分的半乳甘露聚糖。
本发明利用蝉拟青霉固态发酵麦麸制备的活性多糖具有很好的抗炎活性,在抑制结肠缩短、脾脏肿大,肠道损伤以及促炎细胞因子TNF-α,1L-1β和1L-6表达水平升高上表现出更显著的治疗效果。
本发明选用药用真菌蝉拟青霉作为固态发酵菌种,以小麦加工副产物麸皮作为发酵基质,一方面有效的提升了麦麸的综合利用度,另一方面为真菌资源的开发利用提供了科学支撑。
应说明的是,以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制,尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明,本领域的普通技术人员应当理解,可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换,而不脱离本发明技术方案的精神和范围,其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
Claims (10)
1.一种基于麦麸的抗炎活性多糖,其特征在于:所述抗炎活性多糖通过蝉拟青霉菌(IsariacicadaeMiquel)固态发酵麦麸制得,其中,
(i)抗炎活性多糖的单糖组成包括甘露糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖;
(ii)抗炎活性多糖的总糖含量>71%;
(iii)抗炎活性多糖的分子量分布范围为1.3×102Da~2.93×105Da;
(iv)抗炎活性多糖的大分子量为2.93×105Da,占比>78%。
2.如权利要求1所述的基于麦麸的抗炎活性多糖,其特征在于:所述抗炎活性多糖的单糖组成中甘露糖的含量为30~32%,葡萄糖醛酸的含量为9~10%,葡萄糖的含量为17~19%,半乳糖的含量为35~36%。
3.如权利要求1所述的抗炎活性多糖作为活性组分在制备治疗溃疡性结肠炎的药物中的应用,其特征在于:所述溃疡性结肠炎为葡聚糖硫酸钠诱导的溃疡性结肠炎。
4.如权利要求1所述的抗炎活性多糖作为功能配料在制备保护肠道健康的食品中的应用。
5.如权利要求1所述的抗炎活性多糖的制备方法,其特征在于:包括,
小麦麸皮原料烘干后粉碎过筛,调节水分含量至50%~60%,得到以麦麸为基质的发酵培养基;
将活化后的蝉拟青霉菌种子液接种于灭菌后的发酵培养基,恒温发酵后收集发酵麦麸,烘干后粉碎过筛,得到发酵麦麸干粉;
发酵麦麸干粉通过热水浸提法进行浸提处理,提取液旋转、浓缩、沉淀、离心,收集沉淀物冻干得到发酵麦麸粗多糖;
发酵麦麸粗多糖通过Sevage法脱除蛋白,即制得基于麦麸的抗炎活性多糖。
6.如权利要求4所述的基于麦麸的抗炎活性多糖的制备方法,其特征在于:所述蝉拟青霉菌通过活化培养基培养活化,其中,所述活化培养基包括蝉蛹粉1~8%,葡萄糖2%,琼脂1.5%,马铃薯浸粉1%,磷酸二氢钾0.03%,七水硫酸镁0.015%,硫胺素0.00008%。
7.如权利要求4所述的基于麦麸的抗炎活性多糖的制备方法,其特征在于:所述蝉拟青霉菌种子液的浓度为106~108cfu/mL。
8.如权利要求4或5任一所述的基于麦麸的抗炎活性多糖的制备方法,其特征在于:所述蝉拟青霉菌种子液的接种量为小麦麸皮原料的8~12%。
9.如权利要求4所述的基于麦麸的抗炎活性多糖的制备方法,其特征在于:所述恒温发酵的发酵温度为22~30℃,发酵时间为3~10d。
10.如权利要求4所述的基于麦麸的抗炎活性多糖的制备方法,其特征在于:所述浸提处理的浸提温度为50~100℃,浸提时间为1~5h。
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