CN117904179A - GhANN11基因在调控陆地棉耐寒性和耐热性中的应用 - Google Patents
GhANN11基因在调控陆地棉耐寒性和耐热性中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN117904179A CN117904179A CN202410113053.8A CN202410113053A CN117904179A CN 117904179 A CN117904179 A CN 117904179A CN 202410113053 A CN202410113053 A CN 202410113053A CN 117904179 A CN117904179 A CN 117904179A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- gene
- upland cotton
- ghann
- cotton
- silencing
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 78
- 244000299507 Gossypium hirsutum Species 0.000 title claims abstract description 74
- 235000009429 Gossypium barbadense Nutrition 0.000 title claims abstract description 71
- 235000018322 upland cotton Nutrition 0.000 title claims abstract description 71
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 title description 7
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 claims abstract description 38
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims abstract description 28
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 7
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 7
- 238000010276 construction Methods 0.000 claims description 6
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 claims description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 2
- 230000035882 stress Effects 0.000 abstract description 29
- 230000028604 virus induced gene silencing Effects 0.000 abstract description 14
- 238000012226 gene silencing method Methods 0.000 abstract description 10
- 230000012010 growth Effects 0.000 abstract description 9
- 230000036579 abiotic stress Effects 0.000 abstract description 8
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 8
- 238000010367 cloning Methods 0.000 abstract description 5
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 abstract description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 abstract description 3
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 abstract description 2
- 230000008827 biological function Effects 0.000 abstract 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 23
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 21
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 20
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 19
- 241000219146 Gossypium Species 0.000 description 19
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 13
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 12
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 9
- OJOBTAOGJIWAGB-UHFFFAOYSA-N acetosyringone Chemical compound COC1=CC(C(C)=O)=CC(OC)=C1O OJOBTAOGJIWAGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 7
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 6
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 6
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 6
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 6
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 6
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 6
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 5
- SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 2-(N-morpholiniumyl)ethanesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)CC[NH+]1CCOCC1 SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 239000004575 stone Substances 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 108050008874 Annexin Proteins 0.000 description 3
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010802 RNA extraction kit Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- -1 polysaccharide polyphenol Chemical class 0.000 description 2
- 230000008844 regulatory mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 101150090724 3 gene Proteins 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 102000000412 Annexin Human genes 0.000 description 1
- 235000009438 Gossypium Nutrition 0.000 description 1
- 235000009432 Gossypium hirsutum Nutrition 0.000 description 1
- 239000012880 LB liquid culture medium Substances 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 101000702488 Rattus norvegicus High affinity cationic amino acid transporter 1 Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000009412 basement excavation Methods 0.000 description 1
- 239000003181 biological factor Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000015784 hyperosmotic salinity response Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000012160 loading buffer Substances 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 230000008121 plant development Effects 0.000 description 1
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- JQXXHWHPUNPDRT-WLSIYKJHSA-N rifampicin Chemical compound O([C@](C1=O)(C)O/C=C/[C@@H]([C@H]([C@@H](OC(C)=O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)\C=C\C=C(C)/C(=O)NC=2C(O)=C3C([O-])=C4C)C)OC)C4=C1C3=C(O)C=2\C=N\N1CC[NH+](C)CC1 JQXXHWHPUNPDRT-WLSIYKJHSA-N 0.000 description 1
- 229960001225 rifampicin Drugs 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000004753 textile Substances 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
- 230000017260 vegetative to reproductive phase transition of meristem Effects 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 238000010792 warming Methods 0.000 description 1
- 230000002087 whitening effect Effects 0.000 description 1
- 238000004383 yellowing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
- C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
- C12N15/8273—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for drought, cold, salt resistance
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
- C12N15/8218—Antisense, co-suppression, viral induced gene silencing [VIGS], post-transcriptional induced gene silencing [PTGS]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
- C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Botany (AREA)
- Virology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了GhANN11基因在调控陆地棉耐寒性和耐热性中的应用，属于基因工程技术领域。该GhANN11基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明实验发现：GhANN11基因在低温和高温胁迫中显著表达。通过将目的基因进行克隆，构建目的基因的VIGS沉默载体，研究其调控非生物胁迫的生物学功能，结果发现，GhANN11基因沉默在低温胁迫下导致陆地棉的叶片萎蔫影响陆地棉的生长发育，在高温胁迫下使陆地棉长势更好。以此证实GhANN11基因正向调控陆地棉对低温的耐受性，负向调控陆地棉对高温的耐受性。本发明为陆地棉应对非生物胁迫提供重要基因资源。
Description
技术领域
本发明涉及基因工程技术领域，特别是涉及GhANN11基因在调控陆地棉耐寒性和耐热性中的应用。
背景技术
棉花(Gossypium spp.)是世界上最重要的商业作物之一，也是纺织业天然纤维的重要来源。其中陆地棉(Gossypium hirsutum L.)作为棉花作物的栽培种之一，占全球棉花年产量的95％，具有广泛的应用前景。棉花种植面临全球变暖，极端天气严重的问题，与水稻、小麦和玉米相比，棉花表现出更高的耐受性。但是，低温和高温限制仍然会对棉花纤维产量和皮棉质量产生很大影响，是世界范围内影响棉花生产的主要非生物因素。尽管多年来，棉花育种者的主要目标一直是提高生产率和纤维质量，但气候因素的变化和极端天气频率事件，如低温和高温对棉花生产构成了重大威胁。
Annexin基因家族属于多基因蛋白家族，其成员普遍存在于植物中，在植物生长发育和响应逆境胁迫中发挥重要作用，然而至今未见关于棉花Annexin家族成员中耐寒、耐热基因资源的挖掘及筛选利用。
发明内容
本发明的目的是提供GhANN11基因在调控陆地棉耐寒性和耐热性中的应用，以解决上述现有技术存在的问题，GhANN11基因正向调控陆地棉对低温的耐受性，负向调控陆地棉对高温的耐受性，为陆地棉生长发育提供重要基因资源。
为实现上述目的，本发明提供了如下方案：
本发明提供GhANN11基因在调控陆地棉耐寒性和耐热性中的应用，所述GhANN11的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
本发明还提供由所述的GhANN11基因编码的蛋白在调控陆地棉耐寒性和耐热性中的应用。
本发明还提供包含所述的GhANN11基因的重组载体在调控陆地棉耐寒性和耐热性中的应用。
本发明还提供包含所述的重组载体的宿主菌在调控陆地棉耐寒性和耐热性中的应用。
优选的是，过表达所述陆地棉中的所述GhANN11基因，提高所述陆地棉的耐寒性；沉默所述陆地棉中的所述GhANN11基因，提高所述陆地棉的耐热性。
本发明还提供一种耐寒性转基因陆地棉的构建方法，包括过表达陆地棉中的GhANN11基因，提高所述陆地棉的耐寒性；所述GhANN11的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
本发明还提供一种耐热性转基因陆地棉的构建方法，包括沉默陆地棉中的GhANN11基因，提高所述陆地棉的耐热性；所述GhANN11的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
本发明公开了以下技术效果：
本发明采用基因家族分析挖掘与生殖发育相关的候选基因，发现GhANN11基因在棉花非生物胁迫中要重要作用。为了进一步明确GhANN11基因在非生物胁迫中的调控机制，将目的基因进行克隆，构建目的基因的VIGS沉默载体，研究其非生物学功能，结果发现，GhANN11基因沉默在低温胁迫导致陆地棉的叶片萎蔫更明显，影响陆地棉的生长发育；在高温胁迫下使陆地棉叶片更直立。以此证实GhANN11基因正向调控陆地棉对低温的耐受性，负向调控对高温的耐受性。本发明为陆地棉应对非生物胁迫提供重要基因资源。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为pEASY-T5 Zero载体(A)和TRV载体(B)的图谱；
图2为目的基因PCR扩增、沉默载体构建体菌液PCR和双酶切结果；A：目的基因PCR扩增结果，Marker为标准DNA分子2000bp，1-4均为PCR扩增产物；B：目的基因VIGS片段与沉默载体构建体菌液PCR扩增结果，Marker为标准DNA分子2000bp，1-3均为菌液；C：目的基因与沉默载体构建体双酶切为目的基因菌液的PCR检测结果，Marker为标准DNA分子2000bp，1-3均为双酶切产物；
图3为TRV：GhCLA阳性对照表型；A为低温阳性对照的表型，B为高温阳性对照的表型；
图4为TRV:GhANN11植株中目的基因沉默效率检测结果；A为低温沉默效率，B为高温沉默效率；
图5为低温和高温胁迫下陆地棉植株的表型分析；A：低温胁迫下的表型；B：高温胁迫下的表型；
图6为目的基因沉默植株抗氧化酶(SOD、POD和CAT)活性检测；A：低温胁迫下抗氧化酶活性检测结果；B:高温胁迫下抗氧化酶活性的检测结果；
图7为沉默植株中逆境胁迫相关基因表达情况；A：低温胁迫相关基因表达情况；B：
高温胁迫相关基因表达情况。
具体实施方式
现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值，以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本发明说明书和实施例仅是示例性的。
关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
本发明采用基因家族分析挖掘与生长发育相关的候选基因，发现GhANN11基因在棉花非生物胁迫中要重要作用。为了进一步明确GhANN11基因在非生物胁迫中的调控机制，将目的基因进行克隆，构建目的基因的VIGS沉默载体，研究其非生物学功能，结果发现，GhANN11基因沉默在低温胁迫导致陆地棉的叶片萎蔫更明显，影响陆地棉的生长发育；在高温胁迫下使陆地棉叶片更直立。以此证实GhANN11基因正向调控陆地棉对低温的耐受性，负向调控对高温的耐受性。
下面以具体实施例对上述的技术方案进一步说明。
以下实施例涉及的主要试验材料和试剂：
(1)试验材料
陆地棉新石K18(xinshiK18)，其种子是由中国农业科学院棉花研究所提供。
菌株与载体：GV3101农杆菌感受态细胞和pEASY-T5 Zero克隆载体(CT501-01，含DH5α大肠杆菌感受态细胞)分别购买自上海唯地生物技术有限公司和全式金生物科技有限公司，用于基因沉默的VIGS载体系统(TRV1、TRV2和TRV:GhCLA)由中国农业科学院棉花研究所转基因课题组馈赠，pEASY-T5 Zero载体图谱如图1所示。
(2)试验试剂
所用试验试剂见表1。
表1试验所用试剂
溶液配制：
a.培养基的配方见表2：
表2培养基配方
注：培养基需在121℃灭菌20min
b.100mL 50×TAE缓冲液：24.2g Tris+3.72g Na2EDTA·2H2O+5.71mL冰乙酸；
c.50mg/mL利福平(Rif)和20mg/mL乙酰丁香酮(AS)：将5g Rif粉末和2g乙酰丁香酮粉末分别溶于100mL DMSO溶液中，分别用0.22的滤膜过滤除菌，封装，-20℃保存；
d.0.5M吗啉乙磺酸(MES)：将10.65g MES粉末溶于50mL ddH2O中，用NaOH将pH值调至5.6，之后定容至100mL，用0.22的滤膜过滤除菌，封装，4℃保存；
e.1M MgCl2：用100mL ddH2O溶解9.521g MgCl2粉末(放大量热)，0.22滤膜过滤除菌，4℃保存；
f.500mL重悬液：10mL 0.5M MES+1mL 20mg/mL AS+5mL 1M MgCl2，无菌ddH2O补足至500mL。
(3)试验仪器
可见分光光度计、高速冷冻离心机、水浴锅、电泳仪、人工气候箱、切胶仪、超低温冰箱、荧光定量仪、梯度PCR仪、灭菌锅、电子天平、微波炉、台式恒温摇床、制冰机、超净工作台、生化培养箱、超微量分光光度计、超纯水仪器和迷你漩涡混匀仪。
实施例1陆地棉GhBRXL4.3基因在调控陆地棉抗旱和耐盐性中的应用
1、引物设计
利用NCBIPrimer-BLAST(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/)设计GhANN11(GH_D05G2842.1，见SEQ ID NO.1所示)基因的克隆引物、qRT-PCR引物、VIGS沉默引物(VIGS沉默引物产物片段大小为300～500bp)、逆境相关基因的荧光定量引物，引物序列如表3所示：
表3引物列表
注：表中下划线字体表示限制性酶切位点，其中GAATTC和GGTACC表示EcoRⅠ和KpnI限制性酶切位点。
2、RNA的提取和反转录
根据多糖多酚植物总RNA提取试剂盒说明书提取RNA。
反转录(cDNA第一链的合成)：
a.将分装的RNA从-80℃冰箱取出并在冰上融化，在-20℃冰箱中取出5×FastKing-RT SuperMix试剂和RNase-Free ddH2O在冰上融化，轻摇混匀；
b.反应体系见表4：
表4反转录反应体系
c.反应程序见表5：
表5反应程序
d.反应完成后，检测cDNA的纯度及浓度，分装，-20℃保存。
3、目的片段的扩增与克隆载体的连接和转化
3.1目的片段的扩增
以新石K18(xinshiK18)的cDNA为模板，利用Taq 2×PCR Mix with Dye V2预混液(含染料)试剂盒进行目的基因的扩增，扩增体系如表6：
表6扩增体系
根据上述体系加完反应液后，轻摇混匀，短暂离心，按照表7反应程序进行反应：
表7扩增反应程序
反应结束后，用1.8％的琼脂糖凝胶电泳检测其目的基因的大小是否与预期的一致。
3.2目的基因与克隆载体pEASY-T5 Zero的连接
a.从-80℃冰箱中取出pEASY-T5 Zero载体后，在冰上融化。
b.计算所加目的片段的体积(载体与目的片段的摩尔比＝1:5)，向无菌的1.5mL离心管中加入以下成分(整个操作在冰上完成)：
表8连接体系
c.将其轻摇混匀，短暂离心后，25℃连接5分钟。
3.3转化DH5α大肠杆菌感受态细胞
采用热激法转化到DH5α大肠杆菌感受态细胞中，以目的基因序列引物进行菌液PCR验证并测序(由上海生工生物工程有限公司完成)。
4、沉默载体的构建
将上述“3.3转化DH5α大肠杆菌感受态细胞”中测序成功的阳性质粒为模板，通过添加了限制性酶EcoR I和Kpn I酶切位点和保护碱基的引物进行沉默片段扩增，并通过双酶切的方法将GhANN11的片段插入到TRV2沉默载体中，构建TRV:GhANN11沉默载体，具体酶切体系如下表9所示：
表9酶切体系
37℃，3h后加10×Loading Buffer停止反应，胶回收目的基因片段PCR产物，载体回收酶切大片段，将目的片段与沉默载体连接，将连接产物转化到大肠杆菌感受态细胞中，进行菌液PCR和双酶切鉴定，完成后将阳性质粒测序(上海生工)，并转入农杆菌GV3101感受态中，具体操作如下：
a.将GV3101感受态细胞从-80℃超低温冰箱取出，在冰上解冻，分装成两管，吸取2μL测序成功的质粒，加入离心管中，进行转化。
b.完成上述步骤后，加入350μL的LB液体培养基(未加抗生素)，振荡培2h(28℃，200rpm)，将菌液均匀的涂布在固体培养基中(添加Kan+和Rif抗生素)，在黑暗，28℃条件下，培养2天。
c.培养完成后，将单菌落挑至5mL LB液体培养基中(添加Kan+和Rif抗生素)，按照步骤b中振荡培养的条件进行培养16h；
d.培养完成后，用50％甘油保存菌液(菌液:甘油＝1:1)，-80℃保存备用；做菌液PCR确认载体阳性。
5、陆地棉VIGS沉默目的基因
对新石K18幼苗进行VIGS沉默，具体方法如下：
a.种植新石K18种子，待其生长至第七天，子叶完全展开时，将其浸水，直至花盆内的营养土将水吸收至表面后，停止浸水，放置备用。
b.向LB液体培养基中加入Kan+和Rif备用，其中Kan+和Rif的终浓度分别为50μg/mL和25μg/mL。将从-80℃取出的VIGS载体系统和目的基因菌液在冰上融化，28℃，200rpm活化16h(菌液:LB液体培养基＝1:10)。活化完成后，按同样比例进行扩繁。
c.菌液扩繁完成后，以5000rpm的转速，离心10min，倒掉上清液，保留菌体，并将其利用分光光度计用重悬液使菌体悬浮，调整OD600为0.8。
d.重悬完成后，黑暗放置3h，使菌体复苏后，将TRV1分别与含TRV2:00(为空白对照组)、TRV2:GhCLA(为阳性对照)、TRV2:GhANN11(为实验组)的菌体重悬液1:1混合，并将其充分混匀。
e.在棉花幼苗生长的第七天，将其按照步骤a的方法浸水。在陆地棉幼苗生长的第八天对其进行VIGS注射，具体操作为：将子叶背面使用1mL注射器针头划口(注意伤口不过大，针尖般大小即可)，将步骤d的混合菌液注射到陆地棉子叶中，尽可能使菌液充满整个子叶。
f.注射完成后，为了达到更好的侵染效果，使用塑料袋将其包裹，25℃黑暗放置24h后，在正常生长条件下培养。
5.1沉默植株的鉴定
待阳性对照陆地棉幼苗出现白化后，采取实验组及空白组的陆地棉幼叶进行荧光定量实验，检测其沉默效率。
5.2目的基因沉默陆地棉植株的低温和高温胁迫处理
待注射过的阳性棉花幼苗出现白化后，将空白对照组和实验组生长至四周龄的棉花幼苗分别用10℃低和42℃进行低温和高温处理，进行表型观察。
5.3目的基因沉默陆地棉叶片生理指标测定
按照常规方法分别检测空白对照组和实验组棉花叶片的抗氧化酶(SOD、POD和CAT)活性，以分析目的基因沉默植株对低温和高温胁迫的反应。
5.4目的基因沉默株系中逆境胁迫相关基因荧光定量
采摘沉默株系的幼叶，通过根据RNAprep pure多糖多酚植物总RNA提取试剂盒(货号DP441，购自天根生化科技有限公司)提取RNA，并通过FastKing一步法除基因组cDNA第一链合成预混试剂盒进行反转录，最后通过SuperReal荧光定量预混试剂增强版试剂盒(货号FP205，购自天根生化科技有限公司)进行胁迫相关基因GhDREB2A，GhRD20-1，GhRD29A，GhWRKY33，GhDREB2C，GhHSP和GhSOS2的表达水平检测，具体方法参照说明书。
6、结果与分析
6.1目的基因片段的扩增与沉默载体的构建
用NCBI的blast-primer设计引物，以新石K18的cDNA为模板，使用艾伯泰科的Taq2X PCR Mix with Dye V2酶进行目的片段的扩增(见图2中A)，使用通用型DNA纯化回收试剂盒(天根)回收目的片段。将回收的目的片段与pEASY-T5 Zero载体连接进行筛选，提质粒。通过双酶切的方法将目的片段与TRV156载体连接并培养，通过菌液PCR(见图2中B)、双酶切(见图2中C)和测序(结果见SEQ ID NO：2所示序列)方法得到阳性质粒。根据测序可得连接到该载体上的目的片段并未发生碱基的缺失和替换，因此测序成功。将阳性质粒用冻融法转化到农杆菌进行培养。
GhANN11的基因序列(SEQ ID NO.1)如下：
SEQ ID NO.1：ATGGCTCTTCCAGTCGATATCGAAGCTCTTGATAAAGCCTTCTCAG GAATTGGAGTGGATGAGAAGTCACTAATCTCTATACTGACCAATTCAAACGAGGAACACAAAATATCCCTAAGGAAGGGAAGTTCCAAGTTGTTCATTGAGGATGAAAATGGATTTGAACGATGGGACCAATCTTCCATTAAAATTCTCAAACACCAATTCAACCGATTTAGGGATGCTGTGGTGCTTTCACTCCTACACCCATGGGAAAGAGATGCTCGTTTGATTGAAAAAGCAATAAGAAAGGGCCCAAAACACTATAACGTGATAGTGGAGGTGGCATGTACAAGA TCATCAGATCAATTATTGGGTGCTAGGAAGGCTTACCATTCCCTCTTTCATCACTCCATTGAGGAACATCTTACCCACATTAAAGGTCGTGAGCGTAAGCTGTTGGTGGCACTTGTTAGTGCTTACAGATATGAAGGGACAGGTGTAAATGAAGATGTTGCAAAATCAGAAGCTCAAATCCTCTACGAAGCAATCAACAATGGCGATAAAAACAAACTTCTCGACCACGAAGATGCCATCATGATCCTGGCTACCAGGAGCAAGCAACATCTTCAAGCACTGTATCGACACTACAGCCAAAGCTATGGCAAGACCCTTGCTCAGGA CCTCGAAGGTGAGGGAATTTTAAAAGATACCGTAGAATGCCTATGTACCCCTCAAACATATTTCACCAGGGTATTGGAAGCAGCTGTGAAGGAGGACGCAGATGAGGAATCAAAAAGAGCACTGACTCGAGTGATTGTTACTCAAAAGGAGCAGCTGGTGCAGGAAGGCTTTGTTCCTAATAAAATTCAAGACATTCTTTTAGGGCTTTACAAGGATTTCTTGCTTGCCTCCATTGCAAGTGGAGATATCAAATAASEQ ID NO.2：TGCTGTGGTGCTTTCACTCCTACACCCATGGGAAAGAGATGCTCG TTTGATTGAAAAAGCAATAAGAAAGGGCCCAAAACACTATAACGTGATAGTGGAGGTGGCATGTACAAGATCATCAGATCAATTATTGGGTGCTAGGAAGGCTTACCATTCCCTCTTTCATCACTCCATTGAGGAACATCTTACCCACATTAAAGGTCGTGAGCGTAAGCTGTTGGTGGCACTTGTTAGTGCTTACAGATATGAAGGGACAGGTGTAAATGAAGATGTTGCAAAATCAGAAGCTCAAATCCTCTACGAAGCAATCAACAATGGCGATAAAAACAAACTTCTCGACCACGAAGATGCCATCATGATCCTGGCTACCAGGAGCAAGCAACATCTTCAAGCACTGTATCGACACTACAGCCAAAGCTATGGCAAGACCCTTGCTCAGGACCT。
6.2目的基因的沉默效率检测及表型分析
基于基因家族数据分析，筛选出陆地棉生长发育的候选基因。因此利用VIGS技术研究目的基因在陆地棉开花调控中的作用。本发明选择基因GhANN11进行VIGS试验。通过在子叶下表皮注射的方法，沉默陆地棉新石K18中的目的基因，发现在感染后的第8天，阳性对照(TRV:GhCLA)植株开始白化，沉默后的第12天，阳性对照白化明显，说明农杆菌感染陆地棉成功(见图3)。对目的基因的沉默效率检测发现，与对照组相比，TRV:GhANN11植株中GhANN11的表达明显受到抑制(见图4)。通过VIGS沉默植株和对照植株的表达量分析，说明目的基因已被沉默。
6.3低温和高温胁迫对目的基因沉默植株的表型分析
挑选四周龄的VIGS沉默株系，包括目标基因沉默TRV:GhANN11和对照TRV:00植株进行低温和高温胁迫处理。结果如图5所示，结果发现：10℃和42℃分别处理10天和6天后，低温处理中实验组和对照组相比，注射TRV:00菌液和目的基因沉默菌液的植株子叶已完全脱落，真叶出现萎蔫和黄化，并发现TRV:GhANN11沉默植株相比TRV:00株系真叶严重失水，黄化和萎蔫也更严重。而在高温处理中TRV:GhANN11沉默植株比TRV:00植株的叶片更有生命力，长势也更好。说明GhANN11基因参与陆地棉耐寒和耐热反应。
6.4低温和高温胁迫对目的基因沉默棉花叶片抗氧化酶活性的影响
对沉默植株的抗氧化酶(SOD、POD和CAT)活性进行检测，如图6所示，与TRV:00对照植株相比，在低温胁迫10天后，GhANN11沉默植株的CAT、SOD和POD活性均表现出不同程度的下降；在高温胁迫6天时，GhANN11沉默植株的CAT、SOD和POD活性均表现出不同程度的上升。
6.5低温和高温胁迫对沉默株系中逆境胁迫基因表达情况的影响
结果如图7所示，10℃低温胁迫处理后，相比对照组，GhDREB2A，GhRD20-1，GhRD29A，GhWRKY33的表达水平明显降低；42℃高温处理后，相比对照组，GhDREB2C，GhHSP和GhSOS2的表达水平明显升高。
上述结果说明GhANN11基因正向调控陆地棉对低温的耐受性，反向调控陆地棉对高温的耐受性。本发明为陆地棉应对非生物胁迫提供重要基因资源。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。
Claims (7)
1.GhANN11基因在调控陆地棉耐寒性和耐热性中的应用，其特征在于，所述GhANN11的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
2.由权利要求1中所述的GhANN11基因编码的蛋白在调控陆地棉耐寒性和耐热性中的应用。
3.包含权利要求1中所述的GhANN11基因的重组载体在调控陆地棉耐寒性和耐热性中的应用。
4.包含权利要求3中所述的重组载体的宿主菌在调控陆地棉耐寒性和耐热性中的应用。
5.如权利要求1-4任一项所述的应用，其特征在于，过表达所述陆地棉中的所述GhANN11基因，提高所述陆地棉的耐寒性；沉默所述陆地棉中的所述GhANN11基因，提高所述陆地棉的耐热性。
6.一种耐寒性转基因陆地棉的构建方法，其特征在于，包括过表达陆地棉中的GhANN11基因，提高所述陆地棉的耐寒性；所述GhANN11的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
7.一种耐热性转基因陆地棉的构建方法，其特征在于，包括沉默陆地棉中的GhANN11基因，提高所述陆地棉的耐热性；所述GhANN11的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202410113053.8A CN117904179B (zh) | 2024-01-26 | 2024-01-26 | GhANN11基因在调控陆地棉耐寒性和耐热性中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202410113053.8A CN117904179B (zh) | 2024-01-26 | 2024-01-26 | GhANN11基因在调控陆地棉耐寒性和耐热性中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN117904179A true CN117904179A (zh) | 2024-04-19 |
| CN117904179B CN117904179B (zh) | 2024-06-18 |
Family
ID=90683780
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202410113053.8A Active CN117904179B (zh) | 2024-01-26 | 2024-01-26 | GhANN11基因在调控陆地棉耐寒性和耐热性中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN117904179B (zh) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101864413A (zh) * | 2010-05-27 | 2010-10-20 | 东北农业大学 | 5’-race接头序列添加方法及接头序列和5’端未知基因完整编码序列的扩增方法 |
| CN111118197A (zh) * | 2020-01-20 | 2020-05-08 | 福建农林大学 | 一组梨果肉qRT-PCR内参基因及其引物和应用 |
| CN113913439A (zh) * | 2021-11-22 | 2022-01-11 | 上海市农业生物基因中心 | 一种水稻基因OsAL11应用及其方法 |
| CN115725615A (zh) * | 2022-08-17 | 2023-03-03 | 甘肃农业大学 | 陆地棉GhABC1K14-A09基因及其在陆地棉抗旱和耐盐性中的应用 |
| CN117904181A (zh) * | 2024-01-26 | 2024-04-19 | 甘肃农业大学 | 陆地棉GhANN4基因在陆地棉抗旱和耐盐性中的应用 |
-
2024
- 2024-01-26 CN CN202410113053.8A patent/CN117904179B/zh active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101864413A (zh) * | 2010-05-27 | 2010-10-20 | 东北农业大学 | 5’-race接头序列添加方法及接头序列和5’端未知基因完整编码序列的扩增方法 |
| CN111118197A (zh) * | 2020-01-20 | 2020-05-08 | 福建农林大学 | 一组梨果肉qRT-PCR内参基因及其引物和应用 |
| CN113913439A (zh) * | 2021-11-22 | 2022-01-11 | 上海市农业生物基因中心 | 一种水稻基因OsAL11应用及其方法 |
| CN115725615A (zh) * | 2022-08-17 | 2023-03-03 | 甘肃农业大学 | 陆地棉GhABC1K14-A09基因及其在陆地棉抗旱和耐盐性中的应用 |
| CN117904181A (zh) * | 2024-01-26 | 2024-04-19 | 甘肃农业大学 | 陆地棉GhANN4基因在陆地棉抗旱和耐盐性中的应用 |
Non-Patent Citations (8)
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN117904179B (zh) | 2024-06-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN115725615B (zh) | 陆地棉GhABC1K14-A09基因及其在陆地棉抗旱和耐盐性中的应用 | |
| CN112410350B (zh) | 陆地棉GhWRKY74蛋白及其编码基因与应用 | |
| CN117904181A (zh) | 陆地棉GhANN4基因在陆地棉抗旱和耐盐性中的应用 | |
| CN101659965B (zh) | 一种培育叶夹角改变的转基因水稻的方法及其专用重组载体 | |
| CN103695439A (zh) | 金柑FcWRKY70基因及其在提高植物耐旱中的应用 | |
| CN102776203A (zh) | 枳抗寒转录因子PtrICE1及其在植物抗寒改良中的应用 | |
| CN116676320B (zh) | 一个调控棉花生长发育的基因GhBEL1 | |
| CN117925655A (zh) | 陆地棉GhPIP5K2和GhPIP5K22基因及其应用 | |
| CN116179564B (zh) | 陆地棉GhABC1K12-A07基因及其应用 | |
| CN117904179B (zh) | GhANN11基因在调控陆地棉耐寒性和耐热性中的应用 | |
| CN117904178B (zh) | GhBRXL4.3基因在调控陆地棉耐盐性和/或耐低温性中的应用 | |
| CN115772212A (zh) | 紫花苜蓿叶绿体MsSAP22基因及在提高植物抗旱性中的应用 | |
| CN102703466B (zh) | 小麦耐盐、抗旱基因TaWRKY80及其应用 | |
| CN118028310B (zh) | 一种陆地棉基因GhKMT3；2a及其在调控早熟性状中的应用 | |
| CN105695471B (zh) | 根特异性表达AhOda启动子及其应用 | |
| CN103014062A (zh) | 一种水稻OsICE1基因双元载体及其应用方法 | |
| CN104109192A (zh) | 一种小麦抗旱基因及其应用 | |
| CN116716316B (zh) | 一个响应环境温度调控陆地棉开花的关键基因GhPIF7 | |
| CN118028311A (zh) | 一种调控陆地棉早熟性状的基因GhKMT3;1a及其应用 | |
| CN102690838B (zh) | OsMADS57蛋白或其编码基因在促进水稻分蘖中的应用 | |
| CN117821474A (zh) | 一种调控陆地棉早熟性状的基因及其应用 | |
| CN104611335A (zh) | 花生特异启动子AhRSP与应用 | |
| CN108070598A (zh) | 一种棉花根尖特异性启动子及其应用 | |
| CN116640198B (zh) | 枇杷抗寒基因EjGLK1及其编码的蛋白与应用 | |
| CN105695470B (zh) | 根特异性表达AhMtan启动子及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |