CN116179564B - 陆地棉GhABC1K12-A07基因及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种陆地棉GhABC1K12‑A07基因及其应用，属于基因工程技术领域。该基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示，本发明还公开了陆地棉GhABC1K12‑A07基因在提高植物抗干旱和耐盐性能中的应用。本发明利用VIGS技术将目的基因在棉花植株中沉默，并通过干旱和盐胁迫处理后，发现目的基因会引起抗氧化酶(CAT、POD和SOD)活性、可溶性糖和叶绿素含量的降低和MDA的含量增加，降低逆境胁迫相关基因GhSOS1、GhNHX1、GhCBL3等的表达，证明GhABC1K12‑A07正向调控棉花响应干旱和盐胁迫反应，为陆地棉的高抗旱和耐盐育种提供重要基因资源。

Description

陆地棉GhABC1K12-A07基因及其应用

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，特别是涉及一种陆地棉GhABC1K12-A07基因及其应用。

背景技术

棉花(Gossypium spp.)是世界上最重要的商业作物之一、也是纺织业天然纤维的重要来源。棉花种植和生产主要在干旱和半干旱地区进行，与水稻、小麦和玉米相比，棉花表现出更高的耐旱性。但是，水分和盐碱限制仍然会对棉花纤维产量和皮棉质量产生很大影响，是世界范围内影响棉花生产的主要非生物因素。尽管多年来，棉花育种者的主要目标一直是提高生产率和纤维质量，但气候因素的变化和极端天气频率事件，如干旱和盐碱对可持续棉花生产构成了重大威胁。陆地棉(Gossypium hirsutum L.)作为棉花的栽培种之一，占全球棉花年产量的95％，具有广泛的应用前景。因此，本发明拟通过生物信息学分析方法筛选陆地棉对干旱和盐胁迫响应的分子，为培育棉花优良品种提供优异基因资源。

发明内容

本发明的目的是提供一种陆地棉GhABC1K12-A07基因及其应用，以解决上述现有技术存在的问题，该基因正向调控棉花响应干旱和盐胁迫反应，在植物中上调表达可提高其抗旱和耐盐能力。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种陆地棉GhABC1K12-A07基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示。

本发明还提供一种扩增上述的陆地棉GhABC1K12-A07基因的引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1-2所示。

本发明还提供一种重组载体，包括上述的陆地棉GhABC1K12-A07基因。

本发明还提供一种重组菌，包括上述的重组载体。

本发明还提供一种扩增上述的陆地棉GhABC1K12-A07基因的方法，以棉花的cDNA为模板，利用上述的引物进行PCR扩增，获得所述陆地棉GhABC1K12-A07基因。

本发明还提供一种根据上述的陆地棉GhABC1K12-A07基因或上述的引物或上述的重组载体或上述的重组菌在提高植物抗干旱和/或耐盐性能中的应用。

进一步地，通过在植物中上调所述陆地棉GhABC1K12-A07基因水平，以提高所述植物抗干旱和/或耐盐性能。

进一步地，所述植物为锦葵科棉属植物。

进一步地，所述植物包括陆地棉。

本发明公开了以下技术效果：

本发明对陆地棉ABC1K基因(GhABC1K)家族在高温、低温、干旱和盐四种非生物胁迫下的表达模式进行分析，发现GhABC1K家族成员可以响应干旱和盐胁迫，同时发现GhABC1K12-A07在干旱和盐胁迫中高表达。为了进一步明确GhABC1K基因响应在干旱和盐胁迫分子机理，利用VIGS技术将目的基因在棉花植株中沉默，并通过干旱和盐胁迫处理后，发现GhABC1K12-A07基因会引起抗氧化酶(CAT、POD和SOD)活性、可溶性糖和叶绿素含量的降低和MDA的含量增加，降低逆境胁迫相关基因GhSOS1、GhNHX1、GhCBL3、GhCIPK6、GhSOS2、GhHDT4D、GhEREB2A和GhRD29A的表达，说明沉默GhABC1K12-A07基因导致棉花抗性降低，因此证明GhABC1K12-A07基因正向调控棉花响应干旱和盐胁迫反应，为陆地棉的高抗旱和耐盐育种提供重要基因资源。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为载体pGM-T和TRV2载体图谱；

图2为目的基因PCR扩增、目的基因与沉默载体构建体菌液PCR和双酶切结果；a:目的基因PCR扩增；b:目的基因VIGS片段扩增；c:目的基因VIGS片段与沉默载体构建体菌液PCR；d:目的基因与沉默载体构建体双酶切；12代表GhABC1K12-A07；V和M分别代表TRV2载体和Marker(D2000)；

图3为TRV2:GhPDS阳性对照表型；

图4为TRV2:GhABC1K12-A07植株中目的基因沉默效率检测结果；

图5为干旱和盐胁迫下陆地棉植株的表型分析；

图6为目的基因沉默植株MDA含量检测结果；

图7为目的基因沉默植株抗氧化酶SOD、POD和CAT活性水平检测；

图8为目的基因沉默植株可溶性糖含量检测结果；

图9为目的基因沉默植株叶绿素含量检测结果；

图10为沉默植株中逆境胁迫相关基因表达情况。

具体实施方式

现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。

应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。

除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。

在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见的。本发明说明书和实施例仅是示例性的。

关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。

发明人对陆地棉ABC1K基因(GhABC1K)家族在高温、低温、干旱和盐四种非生物胁迫下的表达模式进行分析，发现GhABC1K家族成员可以响应干旱和盐胁迫，同时发现GhABC1K12-A07在干旱和盐胁迫中呈现高表达水平。为了进一步明确GhABC1K12-A07基因响应干旱和盐胁迫分子机理，将该基因进行了克隆，构建GhABC1K12-A07的VIGS沉默载体，研究在干旱和盐胁迫下的生物学功能。实验如下：

1.实验材料及方法

1.1实验材料

所用实验材料为陆地棉品种中棉113，种子由中国农业科学院棉花研究所提供。

1.2载体与感受态细胞

pGM-T克隆载体(VT302-02，含TOP10大肠杆菌感受态细胞)和GV3101农杆菌感受态细胞分别购买自天根生化科技有限公司和上海唯地生物技术有限公司，用于基因沉默的VIGS载体系统(TRV1、TRV2和TRV2-GhPDS)由中国农学科学院棉花研究所馈赠，载体图谱如图1所示。

1.3实验方法

1.3.1引物设计

利用NCBI Primer-BLAST(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/)设计GhABC1K12-A07基因克隆引物、qRT-PCR引物，以及用于VIGS沉默载体构建引物，引物序列(SEQ ID NO：1-6)如表1：

表1引物序列

引物名称	引物序列(5’→3’)	目的
			GhABC1K12-A07-F	ATATCCCACAGGTGTTTTCTGCT	基因克隆
GhABC1K12-A07-R	TCCCAGCAGGGAGGCATTTC	基因克隆
			GhABC1K12-A07-F	AACAGGGAGCCAACTAGTGC	qRT-PCR
GhABC1K12-A07-R	CTCAGACTCTAGCACCCGGA	qRT-PCR
			GhABC1K12-A07-F	GGAATTCGAGGACCAGCCAA	VIGS
GhABC1K12-A07-R	CCGCTCGAGGGTACGCGGACCCACTTTAT	VIGS

注：表中下划线字体表示限制性酶切位点，其中GAATTC和CTCGAG表示EcoRⅠ和XhoⅠ限制性酶切位点。

1.3.2棉花种植、总RNA提取、cDNA合成及qRT-PCR

1.3.2.1棉花种植

a.在各个花盆中装等量的营养土(基质：蛭石＝1：1)，将其放置在含有自来水的大盆中浸水，直到将水吸到花盆表面，用于棉花种子萌发；

b.将中棉113的种子种植在上述花盆中，为使种子出苗一致，种子种植的深度保持在1.5cm，在人工气候培养箱进行培养(16h光照，8h黑暗，温度28℃，湿度70％)；

c.待棉花生长至四叶期时，选幼嫩的叶片进行取样，所取样品先在液氮中速冻，后在-80℃保存备用。

1.3.2.2棉花总RNA的提取

根据RNAprep pure多糖多酚植物总RNA提取试剂盒(货号DP441，购自天根生化科技有限公司)说明书进行提取。

1.3.2.3棉花RNA反转录(cDNA第一链的合成)

根据以下步骤将上述提取的总RNA进行反转录：

a.将从-80℃取出的RNA在冰上融化；将从-20℃取出的5×FastKing-RT SuperMix试剂和无RNA酶ddH₂O在室温下融化后迅速放置在冰上，在使用前将其轻摇混匀。

b.按照下表配制反应体系(表2)：

组成成分	使用量(μL)
		5×FastKing-RT SuperMix	4
总RNA	2
		无RNA酶ddH2O	补足至20μL

c.按照如下反应程序进行反转录反应(表3)：

反应温度(℃)	反应时间(min)
		42	15
95	3

d.反应完成后，检测cDNA的浓度及纯度后，-20℃保存备用。

1.4目的基因片段扩增与沉默载体构建

1.4.1 PCR扩增目的基因片段

以中棉113cDNA为模板，利用2×Pro Taq预混液(含染料)试剂盒(货号AG11109，购自艾科瑞公司)进行GhABC1K12-A07基因的扩增，体系如下(表4)：

操作完成后，轻摇混匀后短暂离心后按如下程序进行反应(表5)：

采用PCR方法从陆地棉上扩增出GhABC1K12-A07基因全长，其核苷酸序列如SEQ IDNO：7所示：

GhABC1K12-A07的核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示：

>12-A07

ATGACAGTAATACTGGCTTCACACAGTTGTTATTCCTGCAATTATGAAATGATGAATCAAGGAAGAGCAGTAGGTACTCTCAGTTTCTCGGGCTCTATTTCAAATAATTTTGTGACTCTCGAGAGGCAAATATGTAGTCTGCCTATGACAGGTAAGTCATTCAGGTTTCAAGTGGAAATGCAACAAACTGAACCAACCCCTAAAGTAGGAATCAATGGCCGAGCTGTTAAAATGGTGCCTGCAAGTGAAGTAGTGAAAAGACAGGTTCCTGCCACTAGGAAAGTGGAGCAGGTAAATGGTGTAAAGCAGGTTATAAATGGAAATGGTGCTAGCATAGTTAGGAGAAAAAACAGTCCATCCCTTGTAAAGATGCCCATATCGAGAGTGTCTAAAGAACTTCCACCATTAGAGGAGTTAAAGATTCTGCCTTCAGATGAAAATTTCAGTTGGGCCAATGAGAATTACAGTTCCTTGCAAAGGAGTATAGATGTTTGGTCTTTTATTATTTCTTTACGTGTACGAGTTCTATTGGACAATGCCAAATGGGCATATGCAGGGGGCTTCACTGAGGATAAGCAGAAAAAGAGGAGAAGAATGACTGCCTCATGGCTAAGAGAACGTGTATTGCAACTTGGTCCCACTTTTATTAAGCTTGGACAGTTATCATCGACAAGATCAGATTTATTTCCGCGTGAGTTTGTCGATGAGCTTGCCAAATTGCAGGATAAAGTCCCTGCATTCTCTCCAAAGAAAGCAAGGGGCTTCATTGAGAATGAACTGGGAGCTCCTATCCATGTACTGTTTAAGGAATTCGAGGACCAGCCAATTGCTGCAGCTAGCCTTGGTCAGGTACATCGGGCTGTTCTGCATAATGGGGAGAAAGTTGTTGTCAAGGTTCAAAGGCCTGGTCTTAAGAAGCTTTTCGACATCGATTTACGAAATCTAAAGCTAATTGCAGAGTATTTTCAAAATAGTGAAACTCTTGGTGGTCCATCAAGAGATTGGGTTGGTATATATGAGGAATGCTCGACGATTTTGTATCAAGAAATTGATTATATAAATGAAGGGAAAAATGCTGATAGGTTTCGTCGAGATTTTCGAAATATAAAGTGGGTCCGCGTACCTATGGTGTTTTGGGATTACACTGCTACAAAGGTGTTGACGTTGGAGTATGTACCAGGCATTAAAATCAATCAATTAGATGCATTAGATGCTGGGGGATATAATCGTTCTCGAATTTCATCACGTGCCATTGAAGCATACTTGATTCAGATACTGAGAACTGGTTTCTTTCATGCTGATCCGCATCCTGGAAATCTTGCTATTGATGTAGATGAATCAATCATCTATTATGATTTTGGCATGATGGGGGAGATTAAATCTTTCACTCGTGAGAGATTGCTAGAACTTTTCTATGCAGTGTATGAGAAAGATGCGAAAAAGGTTATGCAGAGCCTCATAGATCTTGGAGCTCTTCAACCCACAGGAGATTTGTCCTCGGTGAGGAGATCCGTGCAATTCTTCTTGGAAAATTTATTGGACCAGAGGCCAGATCAGGACACTACTTTAGCTGCAATAGGAGAGGATTTGTTTGCAATAGCTCAGGATCAACCATTCCGGTTCCCATCCACGTTTACCTTTGTTTTGAGAGCATTCTCCACACTCGAAGGTATTGGCTACATACTTGATCCTAATTTCTCCTTTGCAAAGATTGCTGCACCTTATGCACAGGAGCTTTTAGATATTAGACAAAGGCAGCGAACAGGGAGCCAACTAGTGCAAGAGATAAGGAAACAAGCTGATGATGCCAGGTCTTACACCATGTCTATGCCATACAGAGTTCAGCGAATAGAGGAAATCCTTAAACAACTTGAGTCGGGAGATTTGAGACTCCGAGTCCGGGTGCTAGAGTCTGAGAGAGCAGCACGGAAGGCAACAATTCTGCAAATGGCAACCATGTACACAGTACTAGGAGGGACCCTGCTAAACCTAGGTGTCACCTTCAGCAGTCAGGGAAGCCAAATTATTGCAAACGGATCATTCGTTGGAGCAGGAGTTTTCTTGACACTTTTTCTTAGGTCAATGCAAAGGGTGAAGAAGCTTGATAAATTCGAGAAGATGATATGA。

1.4.2目的基因与克隆载体pGM-T的连接

a.从-80℃冰箱中取出pGM-T载体后，在冰上融化。

b.计算所加目的片段的体积(载体与目的片段的摩尔比＝1:5)，向无菌的1.5mL离心管中加入以下成分(整个操作在冰上完成)：

c.将其轻摇混匀，短暂离心后，16℃连接过夜。

1.4.3转化TOP10大肠杆菌感受态细胞

采用热激法转化到TOP10大肠杆菌感受态细胞中，以目的基因序列引物进行PCR验证并测序(由上海生工生物工程有限公司完成)。

1.4.4沉默载体的构建

将1.4.3测序成功的阳性质粒为模板，通过添加了限制性酶EcoR I和Xho I酶切位点和保护碱基的引物进行沉默片段扩增，并通过双酶切的方法将GhABC1K12-A07的片段插入到TRV2沉默载体中，构建TRV2:GhABC1K12-A07沉默载体，具体酶切体系如下：

37℃，3h后加10×Loading Buffer停止反应，胶回收目的基因片段PCR产物，载体回收酶切大片段。酶切产物回收后，将目的片段与沉默载体连接，将连接产物转化到大肠杆菌感受态细胞中进行蓝白斑筛选实验后，进行菌液PCR和双酶切鉴定，完成后将阳性质粒测序(上海生工)，并转入农杆菌GV3101感受态中。

1.5 VIGS沉默目的基因

对中棉113幼苗进行VIGS沉默，具体方法如下：

a.按1.3.2.1的方法种植中棉113种子，待其生长至第七天，子叶完全展开时，将其浸水，直至花盆内的营养土将水吸收至表面后，停止浸水，放置备用。

b.向LB液体培养基中加入Kan⁺和Rif备用，其中Kan⁺和Rif的终浓度分别为50μg/mL和25μg/mL。将从-80℃取出的VIGS载体系统和目的基因菌液在冰上融化，28℃，200rpm活化12-16h(菌液:LB液体培养基＝1:10)。活化完成后，按同样比例进行扩繁。

c.菌液扩繁完成后，以5000rpm的转速，离心10min，倒掉上清液，保留菌体，并将其利用分光光度计用重悬液使菌体悬浮，OD₆₀₀在0.8-1.0之间即可。

d.重悬完成后，黑暗放置3h，使菌体复苏后，将TRV1分别与含TRV2(为空白对照组)、TRV2:GhPDS(为阳性对照)、TRV2:GhABC1K12-A07(为实验组)的菌体重悬液1:1混合，并将其充分混匀。

e.在棉花幼苗生长的第七天，将其按照步骤a的方法浸水。在棉花幼苗生长的第八天对其进行VIGS注射，具体操作为：将子叶背面使用1mL注射器针头划口(注意伤口不易过大，针尖般大小即可)，将步骤d的混合菌液注射到棉花子叶中，尽可能使菌液充满整个子叶。

f.注射完成后，为了达到更好的侵染效果，使用塑料袋将其包裹，25℃黑暗放置24h后，在正常生长条件下培养。

g.待阳性对照棉花幼苗出现白化后，采取实验组及空白组的棉花幼叶进行荧光定量实验检测其沉默效率。

1.5.1目的基因沉默棉花植株的干旱和盐胁迫处理

待注射过的阳性棉花幼苗出现白化后，将空白对照和实验组生长至四周龄的棉花幼苗分别用200mmol/L NaCl和15％PEG进行盐和干旱处理，进行表型观察。

1.5.2目的基因沉默棉花叶片生理指标测定

按照常规方法分别检测空白对照组和实验组棉花叶片的抗氧化酶(SOD、POD和CAT)活性、MDA含量、可溶性糖含量及叶绿素含量，以分析目的基因沉默植株对干旱和盐胁迫的反应。

1.5.3目的基因沉默株系中逆境胁迫相关基因荧光定量

采摘沉默株系的幼叶，通过根据RNAprep pure多糖多酚植物总RNA提取试剂盒(货号DP441，购自天根生化科技有限公司)提取RNA，并通过FastKing一步法除基因组cDNA第一链合成预混试剂盒(货号KR118，购自天根生化科技有限公司)进行反转录，最后通过SuperReal荧光定量预混试剂增强版试剂盒(货号FP205，购自天根生化科技有限公司)进行GhSOS1、GhNHX1、GhCBL3、GhSOS2、GhCIPK6、GhHDT4D、GhDREB2C、GhDREB2A、GhWRKY33、GhRD29A等胁迫相关基因的表达水平检测，具体方法参照说明书。

2结果与分析

2.1目的基因片段的扩增与沉默载体的构建

以中棉113cDNA为模板，引物如表1，使用2×Pro Taq预混液(艾科瑞)进行基因全长扩增，并通过琼脂糖凝胶电泳检测片段大小，并送测序确定序列(图2a)。以前述检测正确的阳性质粒为模板，引物如表1，使用2×Pro Taq预混液(艾科瑞)进行VIGS片段扩增，并通过琼脂糖凝胶电泳检测片段大小(图2b)，将合适大小的目的片段与pGM-T载体连接成功后，通过双酶切的方法将阳性质粒与TRV2载体连接，通过菌液PCR(图2c)和双酶切(图2d)鉴定阳性质粒，并测序成功。

2.2目的基因的沉默及沉默效率的检测

将构建2.1中构建完成的TRV2:GhABC1K14-A09沉默载体侵染子叶完全展平的棉苗，发现在侵染后的第7天，阳性对照(TRV2:GhPDS)植株开始出现白化，VIGS沉默后的第15天白化明显(图3)，说明VIGS沉默系统构建成功。对目的基因的沉默效率检测发现(图4)，与对照组相比，TRV2:GhABC1K12-A07植株中GhABC1K12-A07表达受到明显抑制，其沉默效率为94.44％(34/36)，通过对VIGS沉默植株和对照植株的表达量分析，说明目的基因已被沉默。

2.3干旱和盐胁迫对目的基因沉默植株的表型分析

挑选四周龄的VIGS沉默株系，包括目标基因沉默(TRV2:GhABC1K12-A07)和对照(TRV2:00)植株进行干旱和盐胁迫处理。结果发现(图5)，15％PEG和200mmol/LNaCl处理12天后，处理组和对照组相比，注射TRV2:00菌液和目的基因沉默菌液的植株子叶已完全脱落，真叶出现萎蔫和黄化，并发现TRV2:GhABC1K12-A07沉默植株相比TRV2:00株系真叶严重失水，黄化和萎蔫也更严重，说明GhABC1K12-A07基因参与陆地棉抗旱耐盐反应。

2.4干旱和盐胁迫对目的基因沉默棉花叶片MDA含量的影响

生长在逆境条件下的植物，由于活性氧(ROS)的积累会使MDA含量升高。对胁迫后的GhABC1K12-A07基因沉默植株和空载体植株进行MDA含量检测分析发现(图6)，PEG和盐胁迫下沉默植株的MDA含量均显著升高，说明GhABC1K12-A07基因的沉默造成棉花抗性降低。

2.5干旱和盐胁迫对目的基因沉默棉花叶片抗氧化酶活性的影响

为了了解GhABC1K12-07基因的抗逆机制，对沉默植株的抗氧化酶(SOD、POD和CAT)活性进行检测，如图7所示，与TRV2:00对照植株相比，在干旱和盐胁迫10天后，CAT、SOD和POD活性均表现出不同程度的下降。

2.6干旱和盐胁迫对目的基因沉默棉花叶片可溶性糖含量的影响

当植物受到非生物胁迫(如干旱和盐胁迫)时，植物通过增加可溶性糖的积累来抵御外界环境的变化和伤害，对沉默植株的叶片可溶性糖含量测定发现(图8)：与对照TRV2:00相比，GhABC1K12-07基因的沉默引起可溶性糖含量的降低，并发现在盐胁迫下的可溶性糖含量的降低程度比在PEG胁迫下的高，说明沉默GhABC1K12-A07基因均会增加棉花对干旱和盐胁迫的敏感度，并且对盐胁迫的响应更加敏感。

2.7干旱和盐胁迫对目的基因沉默棉花叶片叶绿素含量的影响

当植物受到高强度的非生物胁迫后，植物叶片会出现明显的黄化和萎蔫现象。对叶绿素含量的检测是检测植物耐逆性重要的指标之一。对胁迫后棉花叶绿素含量进行检测，发现目标基因沉默植株的叶绿素含量显著低于对照植株(图9)，表明GhABC1K12-A07基因沉默，导致棉花植株的耐旱性和耐盐性减弱。

2.8干旱和盐胁迫对沉默株系中逆境胁迫相关基因表达情况

在TRV2:GhABC1K12-A07植株中，除DREB2C和WRKY33基因表达与TRV2:00相比无明显差异外，GhSOS1、GhNHX1、GhCBL3、GhCIPK6、GhSOS2、GhHDT4D、GhEREB2A和GhRD29A基因在TRV2:GhABC1K12-A07沉默株系中表达量均明显降低(图10)，表明GhABC1K12-A07基因与这些胁迫相关基因存在正向调控关系。

综上所述，通过VIGS沉默GhABC1K12-A07的陆地棉相比于对照对干旱和盐胁迫更为敏感，说明棉花抗性降低，因此证明上述基因正向调控棉花响应干旱和盐胁迫反应。

以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

Claims (1)

1.一种陆地棉GhABC1K12-A07基因在降低陆地棉抗干旱和/或耐盐性能中的应用，其特征在于，所述陆地棉GhABC1K12-A07基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示；

通过在所述陆地棉中下调所述陆地棉GhABC1K12-A07基因表达水平，以降低所述陆地棉抗干旱和/或耐盐性能。