CN117883466A - 一种具有降尿酸作用的多糖及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于药品领域，具体涉及一种仙茅多糖在制备降尿酸药物中的应用，本发明将仙茅用水提醇沉及碱提醇沉的方式，分别得到醇沉多糖以及碱提多糖，经提取纯化除杂后的仙茅多糖具有显著的降尿酸作用且毒副作用小、安全性高，给高尿酸及痛风患者提供了更多的药物选择。
Description
技术领域
本发明属于药品领域，具体涉及一种仙茅多糖在制备降尿酸及治疗痛风药物中的应用。
背景技术
植物多糖来源广泛，多糖活性与其水溶性，分子大小，基团类型，空间结构，聚合度等密切相关，不同的多糖具有不同的生物活性，已有研究发现多糖具有抗氧化，抗肿瘤，降血糖，免疫调节，抗骨质疏松等作用。
仙茅为石蒜科植物仙茅的干燥根茎。药典记载其功能为补肾阳，强筋骨，祛寒湿。用于阳痿精冷，筋骨痿软，腰膝冷痛，阳虚冷泻。现代对于仙茅的研究发现，其化学成分主要包括皂苷，酚酸，木质素，生物碱以及多糖，有文献研究表明仙茅醇提取物在骨质疏松，治疗更年期综合征，治疗勃起功能障碍，抗抑郁，免疫调节等方面均有一定的功效。仙茅多糖目前已有研究表明其在抗肿瘤，免疫调节，增强心脏收缩能力，以及抗骨质疏松有一定的功效。
目前未见仙茅多糖降尿酸或痛风相关报道。
发明内容
本发明提供一种新的植物来源的降尿酸药物，并提供了其制备方法。
为解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案来实现的：
本发明提供一种仙茅多糖在制备具有降尿酸及治疗痛风药物中的应用，仙茅多糖的多糖含量≥60%。
优选的，仙茅多糖的通过以下制备方法制得，包括以下步骤：
步骤一，取仙茅，粉碎，加入纯水提取，提取液减压浓缩后离心；
步骤二，取步骤一中离心后的上清液，边搅拌边加入乙醇，4℃静置，然后离心，所得沉淀即醇沉粗多糖；
步骤三，水提取后的药渣中加入NaOH水溶液，水浴提取，所得提取液加入HCl调节pH为7.0，上清液浓缩后，边搅拌边加入乙醇，4℃静置，然后离心，即得到碱提粗多糖；
步骤四，将所得到的醇沉粗多糖，以及碱提粗多糖用适量纯水溶解，采用sevag法除去蛋白，冷冻干燥后分别得到醇沉多糖以及碱提多糖。
进一步的，制备方法的步骤一中加入纯水的量为8倍药材重量，提取温度为85℃，提取时间为45min；步骤二中上清液加入乙醇的醇沉浓度先后依次为40%，70%，90%；步骤三中水浴提取温度为35℃，提取时间为1h。
进一步优选的，
步骤一中提取液减压浓缩约为5：1（V:W，浓缩液最终体积与提取药材起始质量比），步骤三水提取后的药渣中加入8：1（V:W，NaOH水溶液体积与提取药材起始质量比）浓度为0.5mol/L的NaOH水溶液，35℃水浴提取1小时，提取两次，合并提取液，加入HCl调节pH为7.0，取上清液浓缩至体积约为2：1（V:W，浓缩液最终体积与提取药材起始质量比），边搅拌边加入4倍浓缩液体积的95%乙醇，4℃静置12小时，经4000rmp离心15min，即得到碱提粗多糖。
本发明的技术方案具有如下优点：
本发明仙茅多糖，具有显著的降尿酸作用，仙茅本身作为历史沿用悠久的药材，经提取纯化除杂后毒副作用小、安全性高，且制备过程简单，给高尿酸及痛风患者提供了更多的药物选择。
具体实施方式
实施例1仙茅多糖的制备
取10kg的仙茅，粉碎，加入纯水80kg，85℃提取45min，提取三次，提取液合并，减压浓缩至体积约为50L，4000rmp离心15min，取上清液（体积约为45L），边搅拌边加入31L的95%乙醇（即溶液中乙醇终浓度约为40%），4℃静置12小时，经4000rmp离心15min，所得沉淀即为40%醇沉粗多糖，取上清浓缩至体积约为23L，边搅拌边加入57L的95%乙醇（即溶液中乙醇终浓度约为70%），4℃静置12小时，经4000rmp离心15min，所得沉淀即为70%醇沉粗多糖，取上清液浓缩至体积约为5L，边搅拌边加入50L的95%乙醇（即溶液中乙醇终浓度约为90%），4℃静置12小时，经4000rmp离心15min，所得沉淀即为90%醇沉粗多糖。水提取后的药渣中加入80L浓度为0.5mol/L的NaOH水溶液，35℃水浴提取1小时，提取两次，合并提取液，加入HCl调节pH为7.0，取上清液浓缩至体积约为20L，边搅拌边加入80L的95%乙醇，4℃静置12小时，经4000rmp离心15min，即得到碱提粗多糖。将所得到的40%醇沉粗多糖，70%醇沉粗多糖，90%醇沉粗多糖，以及碱提粗多糖用适量纯水溶解，采用sevag法除去蛋白，冷冻干燥后分别得到40%醇沉多糖E40，70%醇沉多糖E70，90%醇沉多糖E90以及碱提多糖B00。
多糖含量的测定：称取10mg烘干至恒重的葡萄糖于100mL容量瓶中，加纯水溶解，定容至刻度作为标准葡萄糖工作溶液。分别吸取0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mL的标准葡萄糖工作溶液置于20mL具塞试管中，用蒸馏水补至1.0mL。再加入1.0mL的5%的苯酚溶液，然后快速加入5.0mL硫酸，静置10min。使用漩涡振荡器振荡使得反应液充分混合，然后将试管置于30℃水浴中反应20min，随后490nm测吸光度。以葡萄糖质量浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，制定标准曲线。
精密称定E40， E70， E90以及B00样品各10mg，分别加纯水定容至100mL作为样品溶液，再分别吸取1.0mL样品溶液于20mL具塞试管中，再加入1.0mL的5%的苯酚溶液，然后快速加入5.0mL硫酸，静置10min。使用漩涡振荡器振荡使得反应液充分混合，然后将试管置于30℃水浴中反应20min，随后490nm测吸光度。根据标准曲线计算各部位多糖含量如下：E40多糖含量65.33%， E70多糖含量62.17%， E90多糖含量88.63%以及B00多糖含量71.36%。
实施例2仙茅多糖对高尿酸血症小鼠血清尿酸水平的影响。
2.1实验材料
实验药物：药性对照药物非布司他，试验药物实验例1制备所得的E40，E70，E90以及B00；
实验动物：雄性KM小鼠，购自上海灵畅生物科技有限公司。
2.2实验方法
小鼠按每笼5只进行分笼处理后，在屏障系统内适应性饲养7天。选取体重集中的小鼠按体重随机平均分组，每组10只，分别为空白对照组、模型对照组、阳性对照组、试验药物组。
2.3给药方法
适应期饲养7天后对小鼠灌胃给药，每天上午灌胃1次，连续灌胃给药7天。
试验药物组分别给予实施例1制备的E40，E70，E90以及B00多糖50mg/kg，多糖分别用0.5% 羧甲基纤维素钠（CMC-Na）溶液进行混悬；阳性对照组给予非布司他1.0mg/kg，用相同体积的0.5% 羧甲基纤维素钠（CMC-Na）溶液进行混悬；空白对照组和模型对照组均用0.5% 羧甲基纤维素钠（CMC-Na）溶液灌胃；各组均连续灌胃给药7天。在第7天上午灌胃给药0.5小时后，对各组小鼠进行腹腔注射进行高尿酸血症造模。其中，空白对照组腹腔注射0.5% 羧甲基纤维素钠（CMC-Na）溶液；模型对照组、阳性对照组、试验药物组均注射300mg/kg动物体重的氧嗪酸钾（OA），用CMC-Na溶液进行溶解。
2.4实验数据检测与处理
检测指标
高尿酸血症造模1.5小时后，各组小鼠摘除眼球进行采血，采血容量不低于0.5mL，血样采集后于室温放置约1小时，待血液完全凝固后于3500rpm/4℃条件下离心10分钟，取血清在同等条件下复离5分钟，然后取0.2mL血清通过生化分析仪检测UA值;
统计学分析
用Excel和SPSS对数据进行统计分析，计算平均数和SD，经单因素方差分析后比较各实验组的组间差异。
2.5实验结果
给药7天后，各试验组多糖对高尿酸血症小鼠的血清尿酸水平的影响如下表所示。
表1仙茅多糖对高尿酸血症小鼠血清中尿酸水平的影响（均值μmol/L）
| 样品 | 尿酸(μmol/L) |
| 空白对照组 | 70.22 |
| 模型对照组 | 151.32## |
| 阳性对照组 | 61.57** |
| E40 | 110.79* |
| E70 | 72.81** |
| E90 | 105.68* |
| B00 | 51.95** |
注：##表示和空白对照组相比，P<0.01；**表示和模型对照组相比，P<0.01；*表示和模型对照组相比，P<0.05（t-test检验）
由表1可知：
（1）与空白对照组相比，模型对照组小鼠的血清中尿酸显著升高（P<0.01），这表明高尿酸血症模型造模成功；
（2）与模型对照组相比，试验药物组小鼠的血清中尿酸水平的降低具有显著性差异（P<0.01或P<0.05）。其中E70醇沉多糖，B00碱提多糖对小鼠的血清中尿酸水平的降低效果优于E40及E90醇沉多糖；
（3）本发明制备仙茅多糖在小鼠体内实验中具有降尿酸作用，是潜在的降尿酸的药物。
Claims (4)
1.一种仙茅多糖在制备降尿酸及治疗痛风药物中的应用，其特征在于，所述仙茅多糖的多糖含量≥60%。
2.一种权利要求1所述仙茅多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一，取仙茅，粉碎，加入纯水提取，提取液减压浓缩后离心；
步骤二，取步骤一中离心后的上清液，边搅拌边加入乙醇，4℃静置，然后离心，所得沉淀即醇沉粗多糖；
步骤三，水提取后的药渣中加入NaOH水溶液，水浴提取，所得提取液加入HCl调节pH为7.0，上清液浓缩后，边搅拌边加入乙醇，4℃静置，然后离心，即得到碱提粗多糖；
步骤四，将所得到的醇沉粗多糖，以及碱提粗多糖用适量纯水溶解，采用sevag法除去蛋白，冷冻干燥后分别得到醇沉多糖以及碱提多糖。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤一中加入纯水的量为8倍药材重量，提取温度为85℃，提取时间为45min；步骤二中上清液加入乙醇的醇沉浓度先后依次为40%，70%，90%；步骤三中水浴提取温度为35℃，提取时间为1h。
4.根据权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于，步骤一中提取液减压浓缩约为5：1（V:W，浓缩液最终体积与提取药材起始质量比），步骤三中水提取后的药渣中加入8：1（V:W，NaOH水溶液体积与提取药材起始质量比）浓度为0.5mol/L的NaOH水溶液，35℃水浴提取1小时，提取两次，合并提取液，加入HCl调节pH为7.0，取上清液浓缩至体积约为2：1（V:W，浓缩液最终体积与提取药材起始质量比），边搅拌边加入4倍浓缩液体积的95%乙醇，4℃静置12小时，经4000rmp离心15min，即得到碱提粗多糖。
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