CN117871861A - 一种蛋白s试剂和蛋白s活性检测试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种蛋白S试剂和蛋白S活性检测试剂盒。该蛋白S试剂包括兔脑磷脂、三(羟甲基)氨基甲烷、组织因子、活化蛋白C、冻干保护剂和防腐剂苯甲酸钠；所述冻干保护剂选自聚乙二醇6000、甘氨酸和蔗糖的组合。本发明采用特定组成的冻干保护剂，搭配其他组分，获得的试剂盒准确度和稳定性高，重复性好(正常质控和异常质控CV为2.42％和3.60％)，线性范围在(10‑130％)，线性相关系数r为0.9991。本发明提供的试剂性能优越，价格低廉，能够很好的替代价格昂贵的进口试剂，可以在全国各医院进行推广使用。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种蛋白S试剂和蛋白S活性检测试剂盒。
背景技术
蛋白S(Protein S,PS)是20世纪70年代新发现的维生素K依赖的血浆糖蛋白，主要由肝脏，血管内皮，单核细胞和巨核细胞产生。PS作为抗凝血酶活化蛋白C(APC)的辅因子，参与活性促凝物质FVA和FVIIIa的蛋白水解过程。蛋白C本身是无活性的酶原，当其被内皮细胞表面的凝血酶和血栓调节蛋白复合物激活后，成为活化蛋白C(APC)，这个过程使PC的活性增加20000倍。PS是APC发挥抗凝作用时的重要辅助因子，在PS存在时，APC与PS形成APC/PS复合体，其通过选择性地降解FVa和FVIIIa，使二者失活，丧失其促凝作用。因此APC抗凝血系统仅在凝血酶原被活化形成凝血酶后才能发挥作用。这使得APC系统的抗凝活性与凝血系统的活性表现为成比例地调节。蛋白S在人血浆中有两种存在形式：一种是有活性的蛋白S，通常为游离型，占40％；另一种是无活性的结合型，约占其总量的60％。PS的本质是单链蛋白质，由676个氨基酸组成，含有g-羧基谷氨酸结构域、凝血酶敏感区、四个表位生长因子样结构域以及和性激素结合球蛋白同源的羧基末端区。在正常情况下，约60％的PS与补体系统的调节成分C4b结合蛋白相结合形成复合物，其余40％作为APC的辅因子发挥作用。PS具有依赖于APC的抗凝血活性，此外，PS还能够通过直接抑制凝血酶原酶和液化酶的活性而发挥独立于APC的抗凝血功能。综上所述PS作为抗凝血蛋白，其自身的缺陷使机体发生静脉血栓栓塞的几率明显增加。
遗传性PS缺乏的主要症状是表面血栓性静脉炎，深静脉血栓形成和肺栓塞。根据其活性和抗原水平，将遗传性PS缺乏症分为3种类型：I型，II型和III型：患者血液中总PS水平、游离PS抗原水平及PS活性同等程度降低(量的减少)，此为I型的特征；患者血液中PS的功能活性降低，但总PS抗原水平及游离的PS抗原水平处于正常范围(质的减少)，此为II型的特征；III型的特征在于总PS抗原水平在正常范围内，而游离PS抗原的水平减少。大约95％的PS缺陷患者表现为I型或III型，而且I型和III型被认为是相同遗传缺陷的不同表型。
蛋白S缺乏症的诊断完全依赖于蛋白S的检测。临床上常用的实验室方法为蛋白S活性检测和蛋白S抗原检测，后者又包括游离蛋白S抗原和总蛋白S抗原。目前，市场上以蛋白S活性检测试剂为主，采用的方法为凝固法，然而，这类试剂普遍价格较高去，且重复性和稳定性也不够理想。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种蛋白S试剂和蛋白S活性检测试剂盒。将该蛋白S试剂及试剂盒用于检测血浆中S蛋白的活性，具有准确度高、稳定性高，重复性好、线性范围较宽，且试剂价格低廉的优点。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
蛋白S试剂，包括磷脂、三(羟甲基)氨基甲烷、组织因子、活化蛋白C、冻干保护剂和防腐剂；
所述磷脂为兔脑磷脂；
所述冻干保护剂选自聚乙二醇6000、甘氨酸、蔗糖中的至少一种。
一些实施方案中，所述蛋白S试剂，由水和如下浓度的组分组成：
兔脑磷脂0.04～0.08g/L、三(羟甲基)氨基甲烷3.029～6.057g/L、组织因子0.06～0.08g/L、活化蛋白C0.01～0.05g/L、聚乙二醇600010～20g/L、甘氨酸10～50g/L、蔗糖10～15g/L和防腐剂2～3g/L。
本发明所述的蛋白S试剂及试剂盒用于体外定量检测人血浆中蛋白S的活性。用于蛋白S缺乏症的辅助诊断。蛋白S水平降低从而导致静脉血栓风险增加,主要为下肢深静脉血栓形成及肺栓塞,部分报道提示其也会增加动脉栓塞如脑梗死及心肌梗死等风险。血栓性疾病,如DVT、DIC、暴发性紫癜等；心脑血管疾病，如心梗塞,脑梗塞等；而许多常见疾病,如肝病、肾病、心脑血管疾病等,都会影响血液中PS的活性,因此测定血浆中PS对上述疾病的预防诊断、观察病情及判断预后都有重要价值。
检验原理：将稀释后的样本加入到含有组织因子、磷脂、氯化钙、活化的蛋白C和乏蛋白S血浆的混合试剂中，测得血浆凝固时间来确定蛋白S的活性。蛋白S(PS)作为抗凝血酶活化蛋白C的辅因子，参与活性促凝物质FVA和FVIIIa的蛋白水解过程。PS是APC发挥抗凝作用时的重要辅助因子，在蛋白S存在时，APC与PS形成APC/PS复合体，其通过选择性地降解FVa和FVIIIa，使二者失活，丧失其促凝作用。
一些实施方案中，所述蛋白S试剂中，冻干保护剂由聚乙二醇6000、甘氨酸和蔗糖组成。本发明使用该冻干保护剂制备蛋白S试剂，明显提高了试剂的稳定性，且试剂表面光滑。
本发明中，所述磷脂为兔脑磷脂，相比于植物磷脂(大豆磷脂)和合成磷脂，兔脑磷脂更接近人体内所需磷脂(动物磷脂)，与其他试剂组分合理搭配，最终使得检测更加准确。
本发明中，所述蛋白S试剂中，缓冲液为三(羟甲基)氨基甲烷缓冲液，相较于其它缓冲液，三(羟甲基)氨基甲烷缓冲液具有更强的缓冲能力。
本发明中，所述蛋白S试剂中，所使用的组织因子为重组人组织因子，充分还原人体反应体系。
本发明所述蛋白S试剂中，对防腐剂的种类没有特殊限制，所述防腐剂包括但不限于苯甲酸钠。在本发明的具体实施例中，所述防腐剂为苯甲酸钠。
一些具体实施例中，本发明蛋白S试剂具体为：
兔脑磷脂0.08g/L、三(羟甲基)氨基甲烷6.057g/L、组织因子0.08g/L、活化蛋白C0.05g/L、聚乙二醇600020g/L、甘氨酸30g/L、蔗糖15g/L、苯甲酸钠3g/L，pH为8.0(即A13所示的蛋白S试剂)。
本发明还提供了用于血浆中蛋白S活性检测的试剂盒，包括本发明所述的蛋白S试剂、氯化钙试剂、蛋白S乏血浆试剂和稀释液。
一些实施方案中，所述蛋白S乏血浆试剂为包含苯甲酸钠和甘露醇的蛋白S活性小于1％的血浆，pH为7.5～8。进一步的，所述蛋白S乏血浆试剂为包含苯甲酸钠2～3g/L和甘露醇1～3.5g/L的蛋白S含量小于1％的血浆。一些具体实施例中，所述蛋白S乏血浆试剂选自如下之一：
蛋白S乏血浆试剂配方C1：苯甲酸钠3g/L和甘露醇1g/L，pH为8.0。
蛋白S乏血浆试剂配方C2：苯甲酸钠3g/L和甘露醇3.5g/L，pH为8.0。
一些实施方案中，所述稀释液包括水、氯化钠和苯甲酸钠，pH为7.5～8。进一步的，所述稀释液包括水、氯化钠5～9g/L和苯甲酸钠2～5g/L。具体的，所述苯甲酸钠的浓度具体可为2g/L、3g/L、4g/L、5g/L；一些具体实施例中，所述稀释液选自如下之一：
稀释液配方D1：氯化钠5g/L、苯甲酸钠3g/L，pH为8.0。
稀释液配方D2：氯化钠9g/L、苯甲酸钠3g/L，pH为8.0。
一些实施方案中，所述氯化钙试剂包括无水氯化钙和防腐剂，pH为7.5～8；进一步的，所述氯化钙试剂包括水、无水氯化钙0.55-1.1g/L和苯甲酸钠2～3g/L。
一些具体实施例中，所述氯化钙试剂选自如下之一：
氯化钙试剂配方B1：无水氯化钙0.55g/L和苯甲酸钠2g/L，pH为8.0。
氯化钙试剂配方B2：无水氯化钙1.1g/L和苯甲酸钠2g/L，pH为8.0。
氯化钙试剂配方B3：无水氯化钙1.1g/L和苯甲酸钠3g/L，pH为8.0。
本发明还提供了所述蛋白S试剂和所述试剂盒在血浆中蛋白S活性检测中的应用。
本发明还提供一种检测血浆中S蛋白活性的方法，利用本发明所述的蛋白S试剂或本发明所述的试剂盒对待测血浆中的S蛋白活性进行检测。
本发明提供的试剂盒中，蛋白S试剂和蛋白S乏血浆试剂是冻干粉试剂，氯化钙试剂和稀释液是液体试剂，四种试剂需要组合使用。本发明具体实施例中，制备冻干粉采用的冻干工艺为：预冻阶段：1.-20℃(1小时)；2.-40℃(2小时)、抽真空阶段：1)-40℃(12小时)；2)-30℃(5小时)；3)-20℃(5小时)；4)-10℃(3小时)；5)5.0℃(3小时)；6)15℃(3小时)；7)25℃(3小时)；8)37℃(2小时)。
实验表明，本发明采用特定的稳定剂并将其搭配适宜的其他试剂成分，最终获得的试剂盒准确度高，在2-8℃冷藏条件下复溶稳定性很好，重复性好(正常质控和异常质控CV为2.42％和3.60％)，线性范围在(10-130％)较宽，线性相关系数r为0.9991。以上结果说明本发明试剂性能优越。同时，试剂价格低廉，能够很好的替代价格昂贵的进口试剂，可以在全国各医院进行推广使用。
附图说明
图1示本发明蛋白S(PS)活性的测定试剂盒线性范围相关性。
具体实施方式
本发明提供了一种检测血浆中蛋白S(PS)活性的试剂盒。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
如无特殊说明，本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。
本发明提供的检测血浆中蛋白S活性的试剂盒包括蛋白S试剂、氯化钙试剂、蛋白S乏血浆试剂和稀释液。
蛋白S试剂由水和下述原料组成：兔脑磷脂、三(羟甲基)氨基甲烷、组织因子、活化蛋白C、聚乙二醇6000、甘氨酸、蔗糖、苯甲酸钠。兔脑磷脂浓度在0.02～0.1g/L范围，优选0.08g/L；三(羟甲基)氨基甲烷浓度在3.029～12.114g/L范围，优选6.057g/L；组织因子浓度在0.06～0.12g/L范围，优选0.08g/L；活化蛋白C浓度在0.01～0.08g/L范围，优选0.05g/L；聚乙二醇6000浓度在10～20g/L范围，优选20g/L；甘氨酸在浓度10～50g/L范围，优选30g/L；蔗糖浓度在10～30g/L范围，优选15g/L；苯甲酸钠浓度在2～5g/L范围，优选3g/L，试剂PH范围7.0～8.5，优选PH：8.0。
配制方法(1L)：将上述优选原料浓度依次加入800mL去离子水中，室温200rpm搅拌20min，调PH到8.0，再加入去离子水定容到1L，在室温200rpm搅拌20min，然后每瓶(7mL西林瓶)2mL，盖上胶塞，把试剂送入冻干机冷冻干燥后，可得到白色块状冻干试剂，放2-8℃冷库备用。
氯化钙试剂由水和下述原料组成：无水氯化钙和苯甲酸钠。无水氯化钙浓度在0.55～2.22g/L范围，优选1.1g/L；苯甲酸钠浓度在2～5g/L范围，优选3g/L.试剂PH范围7.0～8.5，优选PH：8.0。
配制方法(1L)：将上述优选原料浓度依次加入800mL去离子水中，室温200rpm搅拌20min，调pH到8.0，再加入去离子水定容到1L，在室温200rpm搅拌20min，然后分装每瓶(7mL西林瓶)5mL，放2-8℃冷库备用。
蛋白S乏血浆试剂组成：蛋白S含量小于1％的血浆、苯甲酸钠和甘露醇。蛋白S含量小于1％的血浆用免疫吸附法从正常血浆中制备，试剂中苯甲酸钠浓度在2～5g/L范围，优选3g/L，甘露醇的浓度在1～5g/L范围，优选3.5g/L。
配制方法(1L)：取800mL蛋白S含量小于1％的血浆，加入苯甲酸钠3g/L,再加入甘露醇3.5g/L，室温200rpm搅拌20min，调PH到8.0，再加入蛋白S含量小于1％的血浆定容到1L，在室温200rpm搅拌20min，然后分装每瓶(7mL西林瓶)1mL，盖上胶塞，把试剂送入冻干机冷冻干燥后，可得到黄色或淡黄色块状冻干试剂，放2-8℃冷库备用。
稀释液由水和下述原料组成：氯化钠和苯甲酸钠。试剂中氯化钠浓度在5～15g/L范围，优选9g/L；试剂中苯甲酸钠浓度在2～5g/L范围，优选3g/L。
配制方法(1L)：将上述优选原料浓度依次加入800mL去离子水中，室温200rpm搅拌20min，调PH到8.0，再加入去离子水定容到1L，在室温200rpm搅拌20min，然后分装每瓶(7mL西林瓶)5mL，放2-8℃冷库备用。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1本发明测试方法
1.试剂及仪器：
1.1标准品及控制品
1.1.1蛋白S血浆国际标准品购自NIBSC，(货号：03/228)，使用1ml纯化水复溶。
1.1.2正常质控、异常质控和校准品血浆购自德国西门子医学诊断产品有限公司。
1.2主要的仪器
1.2.1所有使用的仪器为希森美康CS5100凝血分析仪，本发明也可以使用市面上其它品牌凝血分析仪。
2.实验试剂的配制，按照表1试剂组合配制各实施例和对比例的试剂盒。
蛋白S试剂配制方法(1L)：将上述优选原料浓度依次加入800mL去离子水中，室温200rpm搅拌20min，调PH到8.0，再加入去离子水定容到1L，在室温200rpm搅拌20min，然后每瓶(7mL西林瓶)2mL，盖上胶塞，把试剂送入冻干机冷冻干燥后，可得到白色块状冻干试剂，放2-8℃冷库备用。
氯化钙试剂配制方法(1L)：将上述优选原料浓度依次加入800mL去离子水中，室温200rpm搅拌20min，调pH到8.0，再加入去离子水定容到1L，在室温200rpm搅拌20min，然后分装每瓶(7mL西林瓶)5mL，放2-8℃冷库备用。
蛋白S乏血浆试剂配制方法(1L)：取800mL蛋白S含量小于1％的血浆，加入苯甲酸钠3g/L,再加入甘露醇3.5g/L，室温200rpm搅拌20min，调PH到8.0，再加入蛋白S含量小于1％的血浆定容到1L，在室温200rpm搅拌20min，然后分装每瓶(7mL西林瓶)1mL，盖上胶塞，把试剂送入冻干机冷冻干燥后，可得到黄色或淡黄色块状冻干试剂，放2-8℃冷库备用。
稀释液配制方法(1L)：将上述优选原料浓度依次加入800mL去离子水中，室温200rpm搅拌20min，调PH到8.0，再加入去离子水定容到1L，在室温200rpm搅拌20min，然后分装每瓶(7mL西林瓶)5mL，放2-8℃冷库备用。
3.检验方法
3.1定标：用上述发明蛋白S活性检测试剂和西门子校准品搭配使用，建立定标曲线。
3.2样本检验：全自动血凝分析仪首先会吸取血浆样本进行稀释，然后依次加入蛋白S乏血浆试剂35uL、蛋白S试剂35uL和氯化钙试剂90uL，测定血浆凝固时间，再通过定标曲线得到蛋白S活性。
实施例2试剂盒配方优化实验
实验组1和对照组1～14试剂盒中蛋白S试剂、氯化钙试剂、蛋白S乏血浆试剂和稀释液选自A1～A15、B1～B3、C1～C2和D1～D2所示的配方，各试剂盒中试剂组合及稳定性结果见表1。
表1
由表1可知，蛋白S试剂配方A13组成的实验组1的试剂盒的结果偏差最小，稳定性最好，因此，确定A13可作为蛋白S试剂的最优配方。
蛋白S试剂配方A1：兔脑磷脂0.04g/L、三(羟甲基)氨基甲烷3.029g/L、组织因子0.06g/L、活化蛋白C0.01g/L、聚乙二醇600010g/L、甘氨酸10g/L、苯甲酸钠2g/L，pH为8.0。
蛋白S试剂配方A2：兔脑磷脂0.04g/L、三(羟甲基)氨基甲烷3.029g/L、组织因子0.06g/L、活化蛋白C0.01g/L、聚乙二醇600020g/L、甘氨酸50g/L、苯甲酸钠2g/L，pH为8.0。
蛋白S试剂配方A3：兔脑磷脂0.04g/L、三(羟甲基)氨基甲烷3.029g/L、组织因子0.06g/L、活化蛋白C0.01g/L、聚乙二醇600010g/L、蔗糖10g/L、苯甲酸钠2g/L，pH为8.0。
蛋白S试剂配方A4：兔脑磷脂0.04g/L、三(羟甲基)氨基甲烷3.029g/L、组织因子0.06g/L、活化蛋白C0.01g/L、聚乙二醇600020g/L、蔗糖15g/L、苯甲酸钠2g/L，pH为8.0。
蛋白S试剂优化配方A5：兔脑磷脂0.04g/L、三(羟甲基)氨基甲烷3.029g/L、组织因子0.06g/L、活化蛋白C 0.05g/L、甘氨酸10g/L、蔗糖10g/L、苯甲酸钠2g/L，pH为8.0。
蛋白S试剂配方A6：兔脑磷脂0.04g/L、三(羟甲基)氨基甲烷3.029g/L、组织因子0.06g/L、活化蛋白C 0.05g/L、甘氨酸20g/L、蔗糖15g/L、苯甲酸钠2g/L，pH为8.0。
蛋白S试剂配方A7：兔脑磷脂0.04g/L、三(羟甲基)氨基甲烷3.029g/L、组织因子0.06g/L、活化蛋白C 0.05g/L、聚乙二醇600010g/L、甘氨酸10g/L、蔗糖10g/L、苯甲酸钠2g/L，pH为8.0。
蛋白S试剂配方A8：兔脑磷脂0.04g/L、三(羟甲基)氨基甲烷3.029g/L、组织因子0.06g/L、活化蛋白C 0.05g/L、聚乙二醇600015g/L、甘氨酸20g/L、蔗糖15g/L、苯甲酸钠2g/L，pH为8.0。
蛋白S试剂配方A9：兔脑磷脂0.04g/L、三(羟甲基)氨基甲烷3.029g/L、组织因子0.06/L、活化蛋白C 0.05g/L、聚乙二醇600020g/L、甘氨酸30g/L、葡萄糖15g/L、苯甲酸钠2g/L，pH为8.0。
蛋白S试剂配方A10：兔脑磷脂0.04g/L、三(羟甲基)氨基甲烷3.029g/L、组织因子0.06/L、活化蛋白C 0.05g/L、聚乙二醇600020g/L、甘氨酸30g/L、蔗糖15g/L、苯甲酸钠2g/L，pH为8.0。
蛋白S试剂配方A11：兔脑磷脂0.08g/L、三(羟甲基)氨基甲烷3.029g/L、组织因子0.06g/L、活化蛋白C 0.05g/L、聚乙二醇600020g/L、甘氨酸30g/L、蔗糖15g/L、苯甲酸钠3g/L，pH为8.0。
蛋白S试剂配方A12：兔脑磷脂0.08g/L、三(羟甲基)氨基甲烷6.057g/L、组织因子0.06g/L、活化蛋白C 0.05g/L、聚乙二醇600020g/L、甘氨酸30g/L、蔗糖15g/L、苯甲酸钠3g/L，pH为8.0。
蛋白S试剂配方A13：兔脑磷脂0.08g/L、三(羟甲基)氨基甲烷6.057g/L、组织因子0.08g/L、活化蛋白C 0.05g/L、聚乙二醇600020g/L、甘氨酸30g/L、蔗糖15g/L、苯甲酸钠3g/L，pH为8.0。
蛋白S试剂配方A14：兔脑磷脂0.08g/L、三(羟甲基)氨基甲烷6.057g/L、组织因子0.08g/L、活化蛋白C 0.02g/L、聚乙二醇600020g/L、甘氨酸30g/L、蔗糖15g/L、苯甲酸钠3g/L，pH为8.0。
蛋白S试剂配方A15：兔脑磷脂0.08g/L、三(羟甲基)氨基甲烷6.057g/L、组织因子0.08g/L、活化蛋白C 0.05g/L、聚乙二醇600020g/L、甘氨酸30g/L、蔗糖15g/L、苯甲酸钠2g/L，pH为8.0。
氯化钙试剂配方B1：无水氯化钙0.55g/L和苯甲酸钠2g/L，pH为8.0。
氯化钙试剂配方B2：无水氯化钙1.1g/L和苯甲酸钠2g/L，pH为8.0。
氯化钙试剂配方B3：无水氯化钙1.1g/L和苯甲酸钠3g/L，pH为8.0。
蛋白S乏血浆试剂配方C1：苯甲酸钠3g/L和甘露醇1g/L，pH为8.0。
蛋白S乏血浆试剂配方C2：苯甲酸钠3g/L和甘露醇3.5g/L，pH为8.0。
稀释液配方D1：氯化钠5g/L、苯甲酸钠质3g/L，pH为8.0。
稀释液配方D2：氯化钠9g/L、苯甲酸钠3g/L，pH为8.0。
实施例3
1、本发明试剂盒和对照试剂盒的稳定性测试
根据表3所示试剂组合制备实验组2-10和对照组15-28的试剂盒，其中蛋白S试剂、氯化钙试剂、蛋白S乏血浆试剂和稀释液选自实施例2所示的配方。
检测步骤：(1)液体试剂平衡至室温即可使用。冻干型试剂、校准品和质控品按瓶签标示的装量加入去离子水复溶，轻摇混匀后室温静置20分钟，使用前轻轻旋转试剂瓶，勿剧烈振摇，上机前再轻轻摇匀，确保干粉完全溶解后定标，(2)审核定标曲线后可以直接检测样本，利用表3所示的实验组2-10和对照组15-28的试剂盒按照表2体积和步骤进行检测，结果见表3。
表2
表3本发明蛋白S(PS)活性测定试剂在37℃下稳定性
结果显示，37℃下14天，本发明实验组2-10的检测结果相对偏差在3.8％～13.9％之间，小于14％；对照组15～28采用其他蛋白S试剂的试剂盒相对偏差明显大于实验组，在18.5％～29％之间，说明本发明试剂盒稳定性明显优于对照组，其中，实验组9的相对偏差最小，仅为3.8％，稳定性最佳，为本发明蛋白S试剂盒最优配方。
2.本发明试剂盒准确度(用本发明实验组9的蛋白S试剂盒测定WHO国际标物)
表4
由上述表4可以得出，检测国际标物的相对偏差仅为1.19％，证明本发明蛋白S(PS)活性测定试剂的准确度非常高。
3.本发明实验组9的试剂盒的复溶稳定性
表5
表6
由上述表5和表6可得出，本发明蛋白S(PS)活性测定试剂在2-8℃冷藏条件下，连续检测3天，第3天测试正常质控和异常质控相对偏差为3.05％和3.86％，表明本发明蛋白S(PS)活性测定试剂在2-8℃冷藏条件下复溶稳定性很好。
4.本发明实验组9的蛋白S(PS)活性测定试剂盒的重复性
表7
表8对照试剂德国西门子蛋白S(PS)活性测定试剂的重复性
由上述表7-8可以得出，本发明试剂盒检测正常质控和异常质控CV为2.42％和3.60％，对照试剂德国西门子蛋白S(PS)活性测定试剂(货号：OPAP03)检测正常质控(货号：ORKE41)和异常质控(货号：OUPZ17)CV为3.50％和8.12％，表明本发明蛋白S活性检测试剂盒的重复性优于对照试剂。表明，本发明试剂盒重复非常好。
5.本发明实验组9蛋白S(PS)活性测定试剂的线性范围
见表9和图1。
表9
由上述表9可以得出，本发明蛋白S(PS)活性测定试剂的线性范围在10-130％之间，r为0.9991，说明本发明蛋白S(PS)活性测定试剂的线性非常好，能够很好的替代价格昂贵的进口试剂，可以在各个医院推广使用。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.蛋白S试剂，其特征在于，包括磷脂、三(羟甲基)氨基甲烷、组织因子、活化蛋白C、冻干保护剂和防腐剂；
所述磷脂为兔脑磷脂；
所述冻干保护剂包括聚乙二醇6000、甘氨酸和蔗糖。
2.根据权利要求1所述的蛋白S试剂，其特征在于，由水和如下浓度的组分组成：
兔脑磷脂0.04～0.08g/L、三(羟甲基)氨基甲烷3.029～6.057g/L、组织因子0.06～0.08g/L、活化蛋白C0.01～0.05g/L、聚乙二醇600010～20g/L、甘氨酸10～50g/L、蔗糖10～15g/L和防腐剂2～3g/L。
3.根据权利要求2所述的蛋白S试剂，其特征在于，所述组织因子为重组人组织因子；所述活化蛋白C为人源纯化的活化蛋白C；所述防腐剂为苯甲酸钠。
4.根据权利要求1～3任一项所述的蛋白S试剂，其特征在于，由水和如下组分组成：
兔脑磷脂0.08g/L、三(羟甲基)氨基甲烷6.057g/L、组织因子0.08g/L、活化蛋白C0.05g/L、聚乙二醇600020g/L、甘氨酸30g/L、蔗糖15g/L、苯甲酸钠3g/L，pH为8.0。
5.根据权利要求1～4任一项所述的蛋白S试剂，其特征在于，其pH为7.0～8.5。
6.一种用于血浆中蛋白S活性检测的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1～4任一项所述的蛋白S试剂、氯化钙试剂、蛋白S乏血浆试剂和稀释液。
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，
所述蛋白S乏血浆试剂为包含苯甲酸钠和甘露醇的蛋白S活性小于1％的血浆，pH为7.5～8；
所述氯化钙试剂包括无水氯化钙和防腐剂，pH为7.5～8；
所述稀释液包括水、氯化钠和苯甲酸钠，pH为7.5～8。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，
所述蛋白S乏血浆试剂为包含苯甲酸钠2～3g/L和甘露醇1～3.5g/L的蛋白S含量小于1％的血浆；
所述氯化钙试剂包括水、无水氯化钙0.55-1.1g/L和苯甲酸钠2～3g/L；
所述稀释液包括水、氯化钠5～9g/L和苯甲酸钠2～3g/L。
9.权利要求1～5任一项所述的蛋白S试剂和权利要求6～8任一项所述的试剂盒在血浆中蛋白S活性检测中的应用。
10.一种检测血浆中S蛋白活性的方法，其特征在于，利用权利要求1～5任一项所述的蛋白S试剂或权利要求6～8任一项所述的试剂盒对待测血浆中的S蛋白活性进行检测。
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| CN (1) | CN117871861A (zh) |
-
2023
- 2023-12-21 CN CN202311769300.1A patent/CN117871861A/zh active Pending
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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