CN117843755A - 一种角蛋白yk93-8、制法和其药物组合物与用途 - Google Patents
一种角蛋白yk93-8、制法和其药物组合物与用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN117843755A CN117843755A CN202211217436.7A CN202211217436A CN117843755A CN 117843755 A CN117843755 A CN 117843755A CN 202211217436 A CN202211217436 A CN 202211217436A CN 117843755 A CN117843755 A CN 117843755A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- keratin
- nucleic acid
- acid molecule
- host cell
- expression vector
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108010076876 Keratins Proteins 0.000 title claims abstract description 74
- 102000011782 Keratins Human genes 0.000 title claims abstract description 74
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 26
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 24
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims abstract description 33
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 27
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 27
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 27
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 20
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims abstract description 10
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 claims abstract description 10
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims abstract description 10
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 10
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims abstract description 10
- 206010004446 Benign prostatic hyperplasia Diseases 0.000 claims abstract description 8
- 230000006651 lactation Effects 0.000 claims abstract description 8
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 206010046798 Uterine leiomyoma Diseases 0.000 claims abstract description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 60
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 46
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 44
- 235000019750 Crude protein Nutrition 0.000 claims description 35
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 claims description 28
- 238000005185 salting out Methods 0.000 claims description 27
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 21
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 21
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 19
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 19
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 19
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 15
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 15
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 claims description 11
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims description 10
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 10
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 10
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 9
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 8
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 8
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 7
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 7
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 5
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 5
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 5
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 5
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 4
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000008827 biological function Effects 0.000 claims description 3
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 3
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 3
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 claims description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 claims description 2
- 101710135898 Myc proto-oncogene protein Proteins 0.000 claims description 2
- 102100038895 Myc proto-oncogene protein Human genes 0.000 claims description 2
- 101710150448 Transcriptional regulator Myc Proteins 0.000 claims description 2
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 claims description 2
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 claims description 2
- 238000007792 addition Methods 0.000 claims description 2
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 claims description 2
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 claims description 2
- 230000009435 amidation Effects 0.000 claims description 2
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 claims description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 2
- 238000007413 biotinylation Methods 0.000 claims description 2
- 230000006287 biotinylation Effects 0.000 claims description 2
- 238000010504 bond cleavage reaction Methods 0.000 claims description 2
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 claims description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000009615 deamination Effects 0.000 claims description 2
- 238000006481 deamination reaction Methods 0.000 claims description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 2
- 108010048367 enhanced green fluorescent protein Proteins 0.000 claims description 2
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 claims description 2
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 claims description 2
- 230000011987 methylation Effects 0.000 claims description 2
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 claims description 2
- 238000005457 optimization Methods 0.000 claims description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 claims description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 claims description 2
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 claims description 2
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 claims description 2
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 claims description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 2
- 230000019635 sulfation Effects 0.000 claims description 2
- 238000005670 sulfation reaction Methods 0.000 claims description 2
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 2
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 claims 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 claims 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims 1
- 208000004403 Prostatic Hyperplasia Diseases 0.000 abstract description 7
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 abstract description 3
- 201000010260 leiomyoma Diseases 0.000 abstract description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 70
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 68
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 46
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 28
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 27
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 27
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 23
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 18
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 16
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 16
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 16
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 15
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 15
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 15
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 15
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 15
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 15
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 14
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 13
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 13
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 12
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 11
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 11
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 10
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 10
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 10
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 10
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 9
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 9
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- -1 and infusions) Substances 0.000 description 8
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 8
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 8
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 8
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 8
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 8
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 8
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 8
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 7
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 7
- 239000013622 capto Q Substances 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 7
- 229960001375 lactose Drugs 0.000 description 7
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 7
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 7
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 6
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 6
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 6
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 6
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 6
- 229940032147 starch Drugs 0.000 description 6
- 102000003946 Prolactin Human genes 0.000 description 5
- 108010057464 Prolactin Proteins 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 5
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 5
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 5
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 5
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 5
- DBEPLOCGEIEOCV-WSBQPABSSA-N finasteride Chemical compound N([C@@H]1CC2)C(=O)C=C[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H](C(=O)NC(C)(C)C)[C@@]2(C)CC1 DBEPLOCGEIEOCV-WSBQPABSSA-N 0.000 description 5
- 229960004039 finasteride Drugs 0.000 description 5
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 5
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 5
- 229940097325 prolactin Drugs 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 4
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 4
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 4
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 4
- 239000012459 cleaning agent Substances 0.000 description 4
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 description 4
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 4
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 description 4
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 4
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 4
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 4
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 4
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 4
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 4
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 4
- WNWHHMBRJJOGFJ-UHFFFAOYSA-N 16-methylheptadecan-1-ol Chemical class CC(C)CCCCCCCCCCCCCCCO WNWHHMBRJJOGFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 3
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 3
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 3
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 3
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 3
- PDMMFKSKQVNJMI-BLQWBTBKSA-N Testosterone propionate Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](OC(=O)CC)[C@@]1(C)CC2 PDMMFKSKQVNJMI-BLQWBTBKSA-N 0.000 description 3
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 3
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 3
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 3
- NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M coomassie brilliant blue Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=C1 NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 3
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 3
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 3
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 3
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 3
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 3
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 3
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 3
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 3
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 3
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 3
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 3
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 3
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 3
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 3
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 3
- 229960002920 sorbitol Drugs 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 229960001712 testosterone propionate Drugs 0.000 description 3
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 3
- 230000005760 tumorsuppression Effects 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N (2r,3r,4s,5r,6s)-4,5-dimethoxy-2-(methoxymethyl)-3-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trimethoxy-6-(methoxymethyl)oxan-2-yl]oxy-6-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4,5,6-trimethoxy-2-(methoxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxane Chemical compound CO[C@@H]1[C@@H](OC)[C@H](OC)[C@@H](COC)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](OC)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OC)[C@H](OC)O[C@@H]2COC)OC)O[C@@H]1COC LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N 0.000 description 2
- PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 2-(3-bromo-2-fluorophenyl)acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC(Br)=C1F PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710194180 Alcohol oxidase 1 Proteins 0.000 description 2
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 2
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 2
- 239000001856 Ethyl cellulose Substances 0.000 description 2
- ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N Ethyl cellulose Chemical compound CCOCC1OC(OC)C(OCC)C(OCC)C1OC1C(O)C(O)C(OC)C(CO)O1 ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012449 Kunming mouse Methods 0.000 description 2
- ARIWANIATODDMH-UHFFFAOYSA-N Lauric acid monoglyceride Natural products CCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO ARIWANIATODDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000007472 Leucaena leucocephala Species 0.000 description 2
- 235000010643 Leucaena leucocephala Nutrition 0.000 description 2
- 208000006552 Lewis Lung Carcinoma Diseases 0.000 description 2
- XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N Melanin Chemical compound O=C1C(=O)C(C2=CNC3=C(C(C(=O)C4=C32)=O)C)=C2C4=CNC2=C1C XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 2
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 2
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 2
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 2
- DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H aluminium sulfate (anhydrous) Chemical compound [Al+3].[Al+3].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 2
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 239000003098 androgen Substances 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000010216 calcium carbonate Nutrition 0.000 description 2
- OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L calcium sulfate Chemical compound [Ca+2].[O-]S([O-])(=O)=O OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 description 2
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 2
- 235000019868 cocoa butter Nutrition 0.000 description 2
- 229940110456 cocoa butter Drugs 0.000 description 2
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 2
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000002662 enteric coated tablet Substances 0.000 description 2
- 235000019325 ethyl cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 229920001249 ethyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 2
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 2
- 238000003304 gavage Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 229960000789 guanidine hydrochloride Drugs 0.000 description 2
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007902 hard capsule Substances 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N iodoacetamide Chemical compound NC(=O)CI PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 2
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 2
- 238000001294 liquid chromatography-tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 239000008297 liquid dosage form Substances 0.000 description 2
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 238000013227 male C57BL/6J mice Methods 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 2
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 2
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 2
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 2
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 description 2
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 2
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- 239000008299 semisolid dosage form Substances 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007901 soft capsule Substances 0.000 description 2
- 239000007909 solid dosage form Substances 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 2
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 2
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 2
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 2
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 2
- PPKXEPBICJTCRU-XMZRARIVSA-N (R,R)-tramadol hydrochloride Chemical compound Cl.COC1=CC=CC([C@]2(O)[C@H](CCCC2)CN(C)C)=C1 PPKXEPBICJTCRU-XMZRARIVSA-N 0.000 description 1
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N Acrylic acid Chemical compound OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000178 Acrylic resin Polymers 0.000 description 1
- 239000004925 Acrylic resin Substances 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 239000005995 Aluminium silicate Substances 0.000 description 1
- ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N Ammonium bicarbonate Chemical compound [NH4+].OC([O-])=O ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000013 Ammonium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 241001477352 Bengalia Species 0.000 description 1
- 108700031361 Brachyury Proteins 0.000 description 1
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 description 1
- 206010010904 Convulsion Diseases 0.000 description 1
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 1
- 229920002785 Croscarmellose sodium Polymers 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 206010062717 Increased upper airway secretion Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- AQLLBJAXUCIJSR-UHFFFAOYSA-N OC(=O)C[Na] Chemical compound OC(=O)C[Na] AQLLBJAXUCIJSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010067372 Pancreatic elastase Proteins 0.000 description 1
- 102000016387 Pancreatic elastase Human genes 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 206010042971 T-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000027585 T-cell non-Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 235000012211 aluminium silicate Nutrition 0.000 description 1
- 235000012538 ammonium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001099 ammonium carbonate Substances 0.000 description 1
- 230000000202 analgesic effect Effects 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021052 average daily weight gain Nutrition 0.000 description 1
- 210000001099 axilla Anatomy 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- SESFRYSPDFLNCH-UHFFFAOYSA-N benzyl benzoate Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(=O)OCC1=CC=CC=C1 SESFRYSPDFLNCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- GEHJBWKLJVFKPS-UHFFFAOYSA-N bromochloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)Br GEHJBWKLJVFKPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006189 buccal tablet Substances 0.000 description 1
- 210000001217 buttock Anatomy 0.000 description 1
- FUFJGUQYACFECW-UHFFFAOYSA-L calcium hydrogenphosphate Chemical compound [Ca+2].OP([O-])([O-])=O FUFJGUQYACFECW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940095672 calcium sulfate Drugs 0.000 description 1
- 235000011132 calcium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229960001631 carbomer Drugs 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000007910 chewable tablet Substances 0.000 description 1
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 description 1
- 235000015165 citric acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000036461 convulsion Effects 0.000 description 1
- 239000006184 cosolvent Substances 0.000 description 1
- 235000010947 crosslinked sodium carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000001767 crosslinked sodium carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000012045 crude solution Substances 0.000 description 1
- 239000003405 delayed action preparation Substances 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 235000019700 dicalcium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000007919 dispersible tablet Substances 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 1
- 239000007938 effervescent tablet Substances 0.000 description 1
- 230000003028 elevating effect Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 1
- 206010015037 epilepsy Diseases 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 229960004667 ethyl cellulose Drugs 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 210000001508 eye Anatomy 0.000 description 1
- 239000003889 eye drop Substances 0.000 description 1
- 229940012356 eye drops Drugs 0.000 description 1
- 210000003746 feather Anatomy 0.000 description 1
- 238000013230 female C57BL/6J mice Methods 0.000 description 1
- 239000010408 film Substances 0.000 description 1
- 239000007941 film coated tablet Substances 0.000 description 1
- 239000013020 final formulation Substances 0.000 description 1
- 229940083659 finasteride 1 mg Drugs 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 description 1
- 235000012907 honey Nutrition 0.000 description 1
- 210000000003 hoof Anatomy 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 239000008172 hydrogenated vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N hydroxypropyl methyl cellulose Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N kaolin Chemical compound O.O.O=[Al]O[Si](=O)O[Si](=O)O[Al]=O NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000865 liniment Substances 0.000 description 1
- 229940057995 liquid paraffin Drugs 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 229940031703 low substituted hydroxypropyl cellulose Drugs 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 229960001855 mannitol Drugs 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002900 methylcellulose Drugs 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000006919 modified lb Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000002200 mouth mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 239000007923 nasal drop Substances 0.000 description 1
- 229940100662 nasal drops Drugs 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 239000006191 orally-disintegrating tablet Substances 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003002 pH adjusting agent Substances 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 239000006072 paste Substances 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004303 peritoneum Anatomy 0.000 description 1
- 208000026435 phlegm Diseases 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 1
- 238000005932 reductive alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 210000004974 shell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000015424 sodium Nutrition 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940083575 sodium dodecyl sulfate Drugs 0.000 description 1
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 1
- DAJSVUQLFFJUSX-UHFFFAOYSA-M sodium;dodecane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCS([O-])(=O)=O DAJSVUQLFFJUSX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 229960004793 sucrose Drugs 0.000 description 1
- 239000007940 sugar coated tablet Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000007939 sustained release tablet Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960003107 tramadol hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4741—Keratin; Cytokeratin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
- A61P15/14—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for lactation disorders, e.g. galactorrhoea
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Pregnancy & Childbirth (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Immunology (AREA)
Abstract
本发明属于生物制药领域，公开了一种角蛋白YK93‑8、制法和其药物组合物与用途，具体涉及一种角蛋白YK93‑8，编码角蛋白YK93‑8的核酸分子，含有该核酸分子的表达载体，以及含有该表达载体或基因组整合该核酸分子的宿主细胞，以及角蛋白YK93‑8的制备方法，含有角蛋白YK93‑8的药物组合物，以及上述角蛋白YK93‑8、核酸分子、表达载体、宿主细胞、或药物组合物在制备前列腺增生、淋巴癌、黑色素瘤、乳腺癌、肺癌、镇痛、泌乳、子宫肌瘤、凝血药物中的应用。
Description
技术领域
本发明属于生物制药领域，涉及一种角蛋白YK93-8，编码角蛋白YK93-8的核酸分子，含有该核酸分子的表达载体，以及含有该表达载体或基因组整合该核酸分子的宿主细胞，以及角蛋白YK93-8的制备方法，含有这种角蛋白的药物组合物，以及这种角蛋白和所述药物组合物在制备预防或治疗前列腺增生、淋巴癌、黑色素瘤、乳腺癌、肺癌、镇痛、泌乳、子宫肌瘤、凝血药物中的应用。
背景技术
角蛋白是蛋白质的一种，广泛存在于人和动物的表皮，并且是毛发、羽毛、蹄、壳、爪、角等的主要成分，是结缔组织极重要的结构蛋白质，起着保护机体的作用。
角蛋白广泛存在于生物体中，是一种可再生资源，具有很大的利用价值，但并没有得到广泛有效的利用。主要原因是角蛋白不溶于各种溶剂，并且角蛋白一般都较其他蛋白质更耐蛋白酶的酶解。因此提取制备天然角蛋白的难度非常大。
随着基因组学、蛋白质组学、基因工程、微生物工程等现代生物技术的飞速发展，越来越多的基因被发现。而利用蛋白表达系统制备生产目的蛋白是研究基因或蛋白的生物功能的重要手段。
利用蛋白表达系统制备目的角蛋白，进而研究其结构与功能，未见其他文献报道，具有新颖性和创造性。
发明内容
本发明解决的技术问题是提供一种角蛋白YK93-8，编码角蛋白YK93-8的核酸分子，含有该核酸分子的表达载体，以及含有该表达载体或基因组整合该核酸分子的宿主细胞，以及角蛋白YK93-8的制备方法，含有角蛋白YK93-8的药物组合物，以及上述角蛋白YK93-8、核酸分子、表达载体、宿主细胞、或药物组合物在制备解热镇痛、镇咳祛痰、抗惊厥、抗癫痫、降血压、抗炎、抗病毒药物中的应用。
为解决本发明的技术问题，本发明提供如下技术方案：
本发明技术方案的第一方面是提供了一种角蛋白YK93-8，其特征在于，所述角蛋白YK93-8的氨基酸序列为：
(1)序列表中SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；
(2)序列表中SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列经替换、缺失或添加1-35个氨基酸形成的基本上保持相同生物学功能的氨基酸序列。
进一步的，在角蛋白YK93-8上可进行常规修饰；或者在角蛋白YK93-8上还连接有用于检测或纯化的标签。
更进一步的，所述的常规修饰包括乙酰化、酰胺化、环化、糖基化、磷酸化、烷基化、生物素化、荧光基团修饰、聚乙二醇PEG修饰、固定化修饰、硫酸化、氧化、甲基化、脱氨化、形成二硫键或二硫键断裂；所述的标签包括His6、GST、EGFP、MBP、Nus、HA、IgG、FLAG、c-Myc、Profinity eXact。
本发明技术方案的第二方面是提供了一种编码第一方面所述角蛋白YK93-8的核酸分子。
进一步的，所述的核酸分子的核苷酸序列为：
(1)序列表中SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列；
(2)基于SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列进行序列优化得到的核苷酸序列；
(3)与上述(1)或(2)中的核苷酸序列互补的核苷酸序列。
本发明技术方案的第三方面是提供了一种表达载体，其特征在于，所述的表达载体含有第二方面所述的核酸分子。
进一步的，表达载体可以为pET系列、pUC系列、pQE系列、pBV系列、pMAL系列，pPIC9、pPIC9K、pHIL-S1、pPICZα/A、pYAM75P，pHIL-D2、pA0815、pPIC3K、pPICZ、pHWO10、pGAPZ、pGAPZa、pPIC3.5K等；优选的表达载体为pET系列载体；最优选的表达载体为pET-30a(+)。
本发明技术方案的第四方面是提供了一种宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞含有第三方面所述的表达载体或者基因组中整合有第二方面所述的核酸分子。
进一步的，所述的宿主细胞包括细菌、酵母、曲霉菌、植物细胞、或昆虫细胞。
更进一步的，所述的细菌包括大肠杆菌或酵母。
感受态宿主细胞可以为BL21系列，Transetta系列，Rosetta系列，DH5α系列，JM系列，Top系列，Orgami系列，Trans1-T1，TG1，TB1；Y11430，MG1003，GS115(AOX1)，KM71，SMD1168等；优选的表达感受态细胞为BL21(DE3)，Transetta(DE3)。
本发明技术方案的第五方面是提供了一种制备第一方面所述角蛋白YK93-8的方法，其特征在于，包括以下步骤：
A.合成第一方面所述的角蛋白YK93-8对应的核酸分子，将核酸分子连入相应的表达载体，将表达载体转化到宿主细胞，在一定条件下在发酵设备中培养带表达载体的宿主细胞并诱导表达角蛋白YK93-8，得到含有角蛋白YK93-8的粗蛋白溶液；
B.对步骤A中所表达的粗蛋白溶液进行分离纯化干燥得到角蛋白YK93-8。
进一步的，在步骤A中，所述的宿主细胞主要为选自大肠杆菌，所述的角蛋白YK93-8在大肠杆菌包涵体中表达，所述的发酵设备包括摇瓶或发酵罐。
进一步的，在步骤A中，诱导表达角蛋白YK93-8后，可用清洗剂清洗杂质，用溶液溶解得到粗蛋白溶液。
进一步的，步骤A中的培养基可以为LB培养基、TB培养基、SB培养基、SOB培养基、SOC培养基，PDA培养基、YPD培养基、孟加拉红培养基、高盐察氏培养基、DOBA培养基、米曲培养基及其改良配方等；摇瓶发酵优选LB培养基；发酵罐优选LB培养基及其改良配方。
进一步的，步骤A中的诱导剂可以为IPTG、乳糖、阿拉伯糖等；优选为IPTG、乳糖。
进一步的，步骤A中，获得的发酵菌液，离心，弃去上清液；沉淀悬浮于缓冲液中，破碎菌体，再离心，弃去上清液；沉淀用清洗剂清洗后，再用尿素溶液溶解，得到YK93-8粗蛋白溶液。
其中，缓冲液优选为buffer A，其用量为：发酵液体积：buffer A体积＝1～100：1，优选为10：1；
清洗剂可以为尿素溶液、盐酸胍溶液、Triton、buffer A等，优选为尿素溶液，最优选为2M尿素溶液(可含有1％Triton)，其用量为：发酵液体积：2M尿素(可含有1％Triton)体积＝0.2～100：1，优选为1～15：1；
尿素溶液优选为8M尿素溶液，其用量为：发酵液体积：8M尿素体积＝0.2～100：1，优选为2～15：1。
进一步的，在步骤B中，所述的分离纯化的方法包括超滤微滤膜技术纯化方法、柱色谱纯化方法、盐析方法、透析方法。
进一步的，步骤B中，分离纯化方法如下：
(1)所述透析方法，即将步骤A中获得的粗蛋白溶液用透析的方法纯化，得到目标蛋白YK93-8溶液。
透析袋截留分子量可以为0.5-10kD，优选的透析袋截留分子量为3.5-10kD，最优选的透析袋截留分子量为10kD。
(2)所述超滤微滤方法，即将步骤A中获得的粗蛋白溶液用超滤膜或微滤膜等膜技术纯化，得到目标蛋白YK93-8浓缩溶液。
优选的是两次微滤膜纯化，第一次膜孔径1000～1500nm，第二次膜孔径20～50nm。
(3)所述柱色谱方法，即将步骤A中获得的粗蛋白溶液通过柱色谱，例如各种交换柱或排阻柱色谱，分离纯化得到目标蛋白YK93-8。
优选的排阻柱是葡聚糖凝胶柱，Superdex 30Increase，Superdex 75Increase，Superdex 200Increase，Superose 6Increase等；优选的交换柱是离子交换树脂柱：阴离子交换树脂柱，HiTrap Q FF，HiTrap Capto Q ImpRes，Capto Q ImpRes，HiTrap Capto Q，HiTrap DEAE，Toyopearl Q-650M，Toyopearl SuperQ-650M等；阳离子交换树脂柱，HiTrapSP FF，HiTrap Capto SP ImpRes，Capto SP ImpRes，HiTrap Capto SP，Toyopearl SP-650M，Toyopearl Super SP-650M。最优选的是阴离子交换树脂柱。
洗脱剂可以使用本领域常用的洗脱剂，例如水、盐溶液，所述盐溶液包括氯化钠溶液、磷酸二氢钠溶液、磷酸氢二钠溶液、醋酸钠、醋酸等。
(4)所述盐析方法，即将步骤A中获得的粗蛋白溶液中用盐析的方法纯化，得到目标蛋白YK93-8混悬液。
盐析剂可以为硫酸铵、硫酸钠、氯化钠、氯化镁、硫酸铝，硝酸铵、氯化铵、硫酸镁等。优选的盐析剂为硫酸铵及其水溶液。加入饱和硫酸铵水溶液使硫酸铵终浓度达到10～50％，优选为20～30％，更优选为25％。
盐析次数为1～3次，优选为2次。
盐析后沉淀加入纯水清洗，清洗次数为2～5次，优选为3次。
进一步的，步骤B纯化得到的目标蛋白YK93-8溶液可经冷冻干燥或真空干燥成干粉，也可将浓缩液直接喷雾干燥成干粉。
本发明技术方案的第六方面是提供了一种药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物含有第一方面所述的角蛋白YK93-8或第二方面所述的核酸分子或第三方面所述的表达载体或第四方面所述的宿主细胞以及药学上可接受的载体或赋形剂。
本发明上述步骤中得到的角蛋白可经冷冻干燥或真空干燥成干粉，也可把浓缩液体直接喷雾干燥成干粉，然后制成各种剂型。
本发明涉及一种药物组合物，包括上述步骤中得到的任意一种角蛋白及药学上可接受的载体。
本发明还涉及含有作为活性成份的本发明角蛋白以及常规药物赋形剂或辅剂的药物组合物。通常本发明角蛋白占药物组合物总重量的0.1～100.0％。
本发明还提供一种药物组合物，它包括药物有效剂量的作为活性成分的蛋白质及药学上可接受的载体。
本发明所述的药物组合物可根据本领域公知的方法制备。用于此目的时，如果需要，可将本发明蛋白质与一种或多种固体或液体药物赋形剂和/或辅剂结合，制成可作为人药或兽药使用的适当的施用形式或剂量形式。
本发明角蛋白或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺、皮肤、阴道、腹膜、直肠等，优选口服给药。
本发明角蛋白或含有它的药物组合物的给药途径可为注射给药。注射包括静脉注射、肌肉注射、皮下注射、皮内注射、腹腔注射和穴位注射等。
给药剂型可以是液体剂型、固体剂型或半固体剂型。液体剂型可以是溶液剂(包括真溶液和胶体溶液)、乳剂(包括水包油型、油包水型和复乳)、混悬剂、注射剂(包括水针剂、粉针剂和输液)、滴眼剂、滴鼻剂、洗剂和搽剂等。固体剂型可以是片剂(包括普通片、肠溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡腾片、口腔崩解片)、胶囊剂(包括硬胶囊、软胶囊、肠溶胶囊)、颗粒剂、散剂、微丸、滴丸、栓剂、膜剂、贴片、气(粉)雾剂、喷雾剂等；半固体剂型可以是软膏剂、凝胶剂、糊剂等。
本发明角蛋白可以制成普通制剂、也可以是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。
为了将单位给药剂型制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种赋形剂，包括稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、助流剂。稀释剂可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙等；湿润剂可以是水、乙醇、异丙醇等；粘合剂可以是淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纤维素、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、丙烯酸树脂、卡波姆、聚乙烯毗咯烷酮、聚乙二丙醇等；崩解剂可以是干淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯毗咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、碳酸氢钠与构椽酸、碳酸钙、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠；润滑剂和助流剂可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂酸盐、酒石酸、液体石蜡、聚乙二醇等。
还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。
为了将给药单元制成丸剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、月桂酸聚乙二醇甘油酯、高岭土、滑石粉等；粘合剂，如阿拉伯胶、黄菩胶、明胶、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解剂，如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸盐、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。
为了将给药单元制成栓剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如聚乙二醇、卵磷脂、可可脂、高级醇、高级醇的酯、明胶、半合成甘油酯等。
为了将给药单元制成胶囊，将有效成分本发明角蛋白与上述的各种载体混合，并将由此得到的混合物置于硬的明胶胶囊或软胶囊中。也可将有效成分本发明角蛋白制成微囊剂，混悬于水性介质中形成混悬剂，亦可装入硬胶囊中或制成注射剂应用。
例如，将本发明角蛋白制成注射用制剂，如溶液剂、混悬剂溶液剂、乳剂、冻干粉针剂，这种制剂可以是含水或非水的，可含一种和/或多种药效学上可接受的载体、稀释剂、粘合剂、润滑剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂。如稀释剂可选自水、乙醇、聚乙二醇、l,3-丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，为了制备等渗注射液，可以向注射用制剂中添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油，此外，还可以添加常规的助溶剂、缓冲剂、pH调节剂等。这些辅料是本领域常用的。
此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或其它材料。
为达到用药目的，增强治疗效果，本发明的角蛋白或药物组合物可用任何公知的给药方法给药。
本发明角蛋白药物组合物的给药剂量取决于许多因素，例如所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的性别、年龄、体重、性格及个体反应，给药途径、给药次数、治疗目的，因此本发明的治疗剂量可以有大范围的变化。一般来讲，本发明中药学成分的使用剂量是本领域技术人员公知的。可以根据本发明角蛋白组合物中最后的制剂中所含有的实际药物数量，加以适当的调整，以达到其治疗有效量的要求，完成本发明的预防或治疗目的。本发明角蛋白的每天的合适剂量范围：本发明的角蛋白的用量为0.01～1000mg/kg体重，优选为5～1000mg/kg体重，更优选为10～500mg/kg体重，最优选为20～300mg/kg体重。上述剂量可以单一剂量形式或分成几个，例如二、三或四个剂量形式给药，这取决于给药医生的临床经验以及包括运用其它治疗手段的给药方案。每一种治疗所需总剂量可分成多次或按一次剂量给药。本发明的蛋白质或药物组合物可单独服用，或与其他治疗药物或对症药物合并使用并调整剂量。
本发明技术方案的第七方面是提供了第一方面所述的角蛋白YK93-8或第二方面所述的核酸分子或第三方面所述的表达载体或第四方面所述的宿主细胞或第六方面所述的药物组合物在制备前列腺增生、淋巴癌、黑色素瘤、乳腺癌、肺癌、镇痛、泌乳、子宫肌瘤、凝血药物中的应用。
为了完成本发明之目的，本发明采取如下技术方案，具体地讲，制备本发明角蛋白YK93-8，包括如下步骤：
(1)合成核苷酸序列，并测定序列的准确性；
优选的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。
(2)将核苷酸序列转入表达载体中；
表达载体可以为pET系列、pUC系列、pQE系列、pBV系列、pMAL系列，pPIC9、pPIC9K、pHIL-S1、pPICZα/A、pYAM75P，pHIL-D2、pA0815、pPIC3K、pPICZ、pHWO10、pGAPZ、pGAPZa、pPIC3.5K等；优选的表达载体为pET系列载体；最优选的表达载体为pET-30a(+)。
(3)将表达载体转染入宿主细胞中；
宿主细胞可以为大肠杆菌或酵母；优选的宿主细胞为大肠杆菌；
感受态细胞可以为BL21系列，Transetta系列，Rosetta系列，DH5α系列，JM系列，Top系列，Orgami系列，Trans1-T1，TG1，TB1；Y11430，MG1003，GS115(AOX1)，KM71，SMD1168等；优选的表达感受态细胞为BL21(DE3)，Transetta(DE3)。
(4)将在适当的条件下，发酵培养宿主细胞，诱导表达目标蛋白YK93-8；
发酵设备可以采用摇瓶或发酵罐；
培养基可以为LB培养基、TB培养基、SB培养基、SOB培养基、SOC培养基，PDA培养基、YPD培养基、孟加拉红培养基、高盐察氏培养基、DOBA培养基、米曲培养基及其改良配方等；摇瓶发酵优选LB培养基；发酵罐优选LB培养基及其改良配方。
诱导剂可以为IPTG、乳糖、阿拉伯糖等；优选为IPTG、乳糖。
(5)目标蛋白YK93-8产物富集；
步骤(4)获得的发酵菌液，离心，弃去上清液；沉淀悬浮于缓冲液中，破碎菌体，再离心，弃去上清液；沉淀用清洗剂清洗后，再用尿素溶液溶解，得到YK93-8粗蛋白溶液。
其中，缓冲液优选为buffer A，其用量为：发酵液体积：buffer A体积＝1～100：1，优选为10∶1；
清洗剂可以为尿素溶液、盐酸胍溶液、Triton、buffer A等，优选为尿素溶液，最优选为2M尿素溶液(可含有1％Triton)，其用量为：发酵液体积：2M尿素(可含有1％Triton)体积＝0.2～100∶1，优选为1～15：1；
尿素溶液优选为8M尿素溶液，其用量为：发酵液体积：8M尿素体积＝0.2～100：1，优选为2～15：1。
(6)分离纯化目标蛋白YK93-8：
步骤(5)获得的粗蛋白溶液，需经过纯化获得目标蛋白YK93-8。所述纯化可以通过透析、或超滤微滤、或柱色谱、或盐析步骤进行。
A.所述透析步骤，即将步骤(5)获得的粗蛋白溶液用透析的方法纯化，得到目标蛋白YK93-8溶液。
透析袋截留分子量可以为0.5-10kD，优选的透析袋截留分子量为3.5-10kD，最优选的透析袋截留分子量为10kD。
B.所述超滤微滤步骤，即将步骤(5)获得的粗蛋白溶液用超滤膜或微滤膜等膜技术纯化，得到目标蛋白YK93-8浓缩溶液。
优选的是两次微滤膜纯化，第一次膜孔径1000～1500nm，第二次膜孔径20～50nm。
C.所述柱色谱步骤，即将步骤(5)获得的粗蛋白溶液通过柱色谱，例如各种交换柱或排阻柱色谱，分离纯化得到目标蛋白YK93-8。
优选的排阻柱是葡聚糖凝胶柱，Superdex 30Increase，Superdex 75Increase，Superdex 200Increase，Superose 6Increase等；优选的交换柱是离子交换树脂柱：阴离子交换树脂柱，HiTrap Q FF，HiTrap Capto Q ImpRes，Capto Q ImpRes，HiTrap Capto Q，HiTrap DEAE，Toyopearl Q-650M，Toyopearl SuperQ-650M等；阳离子交换树脂柱，HiTrapSP FF，HiTrap Capto SP ImpRes，Capto SP ImpRes，HiTrap Capto SP，Toyopearl SP-650M，Toyopearl Super SP-650M。最优选的是阴离子交换树脂柱。
洗脱剂可以使用本领域常用的洗脱剂，例如水、盐溶液，所述盐溶液包括氯化钠溶液、磷酸二氢钠溶液、磷酸氢二钠溶液、醋酸钠、醋酸等。
D.所述盐析步骤，即将步骤(5)获得的粗蛋白溶液中用盐析的方法纯化，得到目标蛋白YK93-8混悬液。
盐析剂可以为硫酸铵、硫酸钠、氯化钠、氯化镁、硫酸铝，硝酸铵、氯化铵、硫酸镁等。优选的盐析剂为硫酸铵及其水溶液。加入饱和硫酸铵水溶液使硫酸铵终浓度达到10～50％，优选为20～30％，更优选为25％。
盐析次数为1～3次，优选为2次。
盐析后沉淀加入纯水清洗，清洗次数为2～5次，优选为3次。
步骤A～D纯化得到的目标蛋白YK93-8溶液可经冷冻干燥或真空干燥成干粉，也可将浓缩液直接喷雾干燥成干粉。
本发明的有益技术效果：
1、本发明蛋白为首次获得的角蛋白，本发明的制备方法具备收率高、样品纯度高的特点。
2、本发明通过蛋白YK93-8对小鼠前列腺增生模型的药效研究，证明蛋白YK93-8可显著降低前列腺湿重与前列腺指数；
3、本发明通过蛋白YK93-8对Lewis肺癌药效研究，证明蛋白YK93-8具有明显的抑制肺癌增殖作用；
4、本发明通过蛋白YK93-8对孕鼠泌乳研究，证明蛋白YK93-8可一定程度增加母鼠血清泌乳素的含量；
5、本发明通过蛋白YK93-8对EL-4淋巴瘤药效研究，证明蛋白YK93-8可一定程度抑制淋巴瘤的增殖。
6、本发明通过蛋白YK93-8对小鼠镇痛模型的药效研究，证明蛋白YK93-8可一定程度减少扭体次数。
7、本发明通过蛋白YK93-8对B16F10黑色素瘤药效研究，证明蛋白YK93-8具有明显的抑制黑色素瘤增殖作用。
附图说明
图1.表达蛋白YK93-8还原型SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析(M：蛋白分子量标准；S：表达蛋白YK93-8)
图2.YK93-8对Lewis肺癌小鼠血常规的影响
(与正常对照组比较，**P<0.01，***P<0.001；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01，###P<0.001)
图3.YK93-8对母鼠泌乳量的影响
(与正常对照组比较，**P<0.01，***P<0.001；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01，###P<0.001)
图4.YK93-8对母鼠血清泌乳素的影响
(与正常对照组比较，**P<0.01，***P<0.001；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01，###P<0.001)
图5.YK93-8对EL-4淋巴瘤小鼠血常规的影响
(与正常对照组比较，**P<0.01，***P<0.001；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01，###P<0.001)
图6.YK93-8对小鼠醋酸扭体的抑制作用
(与正常对照组比较，**P<0.01，***P<0.001；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01，###P<0.001)
图7.YK93-8对B16F10黑色素瘤小鼠血常规的影响
(与正常对照组比较，**P<0.01，***P<0.001；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01，###P<0.001)
具体实施方式
下面的实施例及药理活性试验例用来进一步说明本发明，但这并不意味着对本发明的任何限制。
下述实施例及药理活性试验例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所用的实验材料，如无特殊说明，均购自常规生化试剂公司。
实施例1摇瓶发酵制备蛋白YK93-8粗溶液A(LB培养基)
合成如SEQ ID No.2所示的核苷酸序列，将其转入pET-30a(+)载体中；测序确定得到含有正确序列的表达载体；将表达载体转染入BL21(DE3)细胞，得到含有目标核苷酸序列的表达感受态宿主细胞。加入LB培养基中，于摇床中，在37℃、220rpm条件下培养1小时，得到重组菌株。
蘸取重组菌株在含有Kana霉素的LBA平板中划线，平板倒置于37℃恒温培养箱过夜培养16小时。
配置400ml LB培养基，分装2瓶，每瓶200ml。在每瓶(200ml)LB培养基中加入Kana霉素(终浓度50μg/ml)，取平板上单一菌落加入LB培养基中，于摇床中，在37℃、220rpm条件下过夜扩增培养，得到种子液。
配置9.6L LB培养基，分装于48瓶，每瓶200ml。在每瓶(200ml)LB培养基中加入Kana霉素(终浓度50μg/ml)，再加入2ml种子液，于摇床中，在37℃、220rpm条件下培养2-3小时。监测OD600，当OD600达到1.0左右时，加入诱导剂，于摇床中诱导表达蛋白，诱导条件选自下表。
合并各瓶菌液，7000rpm离心5分钟，上清液灭菌后弃去；沉淀悬浮于约1L缓冲液中，用80-100目筛网过滤，滤液用高压破碎仪破碎，压力800-1000bar，2次，每次2分钟。破碎后菌液7000rpm离心30分钟，弃去上清液，得到沉淀(即包涵体)。沉淀加入600ml清洗剂清洗2次，离心，弃去上清液。沉淀再加入尿素溶液溶解3次，体积均为600ml。合并3次溶液，7000rpm离心30分钟，沉淀弃去，上清液即为蛋白粗溶液A。
蛋白YK93-8粗溶液A，用还原型SDS-PAGE分析，分离胶浓度为12.5％，考马斯亮蓝R250法染色；在分子量63KD附近显示明显蓝色条带。
实施例2发酵罐制备蛋白YK93-8粗溶液B
实施例1中合成并测序确定得到含有如SEQ ID No.2所示的序列的表达载体；将表达载体转染入BL21(DE3)细胞，得到含有目标核苷酸序列的表达感受态宿主细胞。加入LB培养基中，于摇床中，在37℃、220rpm条件下培养1小时，得到重组菌株。
在含有Kana霉素的LBA平板中，加入重组菌株100μl，涂布器涂至均匀变干，平板倒置于37℃恒温培养箱过夜培养。分别取三个单菌落在含有Kana霉素的平板中划线，平板过夜培养，经三批摇瓶发酵表达验证确认无误后，用15％甘油保存菌株，分装成每支1ml，即得工作细胞库，冻存于-80℃冰箱备用。
从工作细胞库中取出1支甘油菌，取100μl，加入40ml LB培养基中，加入Kana霉素(终浓度50μg/ml)，于振荡器中，以37℃、220rpm条件培养6小时，得一级种子液。
取一级种子液1.2ml，加入120ml LB培养基中，加入Kana霉素(终浓度50μg/ml)，于振荡器中，以37℃、220rpm条件培养7小时，得二级种子液。
5L发酵罐中加入3L改良的LB培养液，再加入120ml二级种子液，3ml Kana霉素(终浓度50μg/ml)，以37℃、溶氧30％(串联转速)条件培养约4小时。监测OD值在20左右，3g乳糖作为诱导剂，于20℃进行诱导，以30ml/小时的速率进行补料，20℃培养24小时。
菌液7000rpm离心5分钟，上清液灭菌后弃去；沉淀悬浮于约200ml buffer A中，用80-100目筛网过滤，滤液用高压破碎仪破碎，压力800-1000bar，2次，每次2分钟。破碎后菌液7000rpm离心30分钟，弃去上清液。
沉淀加入2M尿素溶液(含1％Triton)清洗2次，每次600ml，离心，弃去上清液。沉淀依次加入4M尿素溶液溶解1次，8M尿素溶液溶解2次，体积均为600ml。合并三次溶液，7000rpm离心30分钟，沉淀弃去，上清液即为蛋白粗溶液B。
蛋白YK93-8粗溶液B，用还原型SDS-PAGE分析，分离胶浓度为12.5％，考马斯亮蓝R250法染色；在分子量63KD附近显示明显蓝色条带。
实施例3蛋白粗溶液B通过膜技术制备得蛋白YK93-8
实施例2获得的蛋白粗溶液B，通过微滤膜技术进行纯化：先用1500nm或1000nm陶瓷膜芯进行固液分离；内液弃去，外液再用20nm或50nm陶瓷膜芯反复微滤除去尿素；二次微滤的内液冷冻干燥，即得目标蛋白YK93-8。
蛋白YK93-8结构确证：
1、还原型SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)分析
仪器：蛋白质电泳仪(Bio-Rad)。
方法和结果：蛋白YK93-8溶液，用还原型SDS-PAGE分析，分离胶浓度为12.5％，考马斯亮蓝R250法染色。YK93-8条带分子量在63KD附近。
2、基于LC-MS/MS的蛋白质全序列分析
主要材料：乙腈、甲酸、碳酸氢铵、二硫苏糖醇(DTT)、碘乙酰胺(IAA)、胰蛋白酶、糜蛋白酶、Glu-C、Pepsin、Elastase；
主要仪器：纳流液相色谱仪(Thermo EastnLC1200)，质谱仪(Thermo OrbitrapFusion Lumos)，恒温培养箱(中仪国科(北京)科技有限公司，DHP-9052)。
方法和结果：
蛋白YK93-8通过溶解置换、还原烷基化、多种蛋白酶解等前处理，得到酶切肽段；酶切肽段溶液，经液相色谱串联质谱分析，质谱原始文件使用Byonic软件分析数据，鉴定结果覆盖率100％，确定其与目标序列SEQ ID No.1一致。
实施例4蛋白粗溶液A纯化制备得蛋白YK93-8
实施例1获得的蛋白粗溶液A通过下述三种方法进行纯化：
第一种方法：透析；
蛋白粗溶液A用0.45μm滤膜过滤，滤液用水透析，透析72小时以上，内液冷冻干燥，即得目标蛋白YK93-8。
| 透析袋 | 截留分子量：0.5kD、3.5kD、5kD、10kD |
第二种方法：盐析；
蛋白粗溶液A置于带搅拌的容器中进行两次盐析：沿壁缓慢加入硫酸铵饱和溶液，使硫酸铵终浓度为25％或50％，盐析过程中蛋白析出，待盐析完全后，过滤，完成第一次盐析；沉淀中加入400ml纯水混悬，再次沿壁缓慢加入硫酸铵饱和溶液，使硫酸铵终浓度为25％，进行第二次盐析，过滤，沉淀即为蛋白粗提物。蛋白粗提物用水进行三次清洗：加200ml纯水混悬，搅拌，静置，过滤；如此重复三次后，沉淀冷冻干燥即得目标蛋白YK93-8。
第三种方法：柱色谱；
蛋白粗溶液A分别经过HiTrap Q FF 16/10，HiTrap Capto Q ImpRes，Capto QImpRes，HiTrap Capto Q，HiTrap DEAE等阴离子交换树脂柱纯化。洗脱液为NaCl溶液梯度洗脱，加20mM NaH2PO4/Na2HPO4缓冲液(pH 8.0)。各洗脱流份用SDS-PAGE电泳检测合并，合并的洗脱液7000rpm离心2次，每次1小时；上清液用0.45μm滤膜过滤，合并滤液。滤液用水透析浓缩，透析袋截留分子量10kD，内液冷冻干燥，即得目标蛋白YK93-8。
三种方法得到的产物蛋白YK93-8，经与实施例3相同的结构确证方法，确认其与实施例3制备得到的蛋白具有相同的氨基酸序列。
实施例5蛋白粗溶液B通过盐析方法得蛋白YK93-8
实施例2获得的蛋白粗溶液B置于带搅拌的容器中进行两次盐析：沿壁缓慢加入硫酸铵饱和溶液，使硫酸铵终浓度为25％，盐析过程中蛋白析出，待盐析完全后，过滤，完成第一次盐析；沉淀中加入400ml纯水混悬，再次沿壁缓慢加入硫酸铵饱和溶液，使硫酸铵终浓度为25％，进行第二次盐析，过滤，沉淀即为蛋白粗提物。蛋白粗提物用水进行三次清洗：加200ml纯水混悬，搅拌，静置，过滤；如此重复三次后，沉淀冷冻干燥即得目标蛋白YK93-8。
产物蛋白YK93-8，经与实施例3相同的结构确证方法，确认其与实施例3制备得到的蛋白具有相同的氨基酸序列。
药理试验
实验例1 YK93-8(实施例3蛋白)对小鼠前列腺增生模型的药效试验
动物：雄性昆明种小鼠18-20克
药品：丙酸睾酮注射液(宁波第二激素厂)；非那雄胺(默沙东)：
仪器：电子天平
实验分组：
正常对照组；
模型组：雄激素负荷模型；
阳性对照组：非那雄胺(1mg/kg)组；非那雄胺(3mg/kg)组；
YK93-8(0.5g/kg)组。
方法：
实验动物的准备：实验动物在实验环境(温度22℃±2℃，相对湿度50％±2％)中适应1天。
皮下注射丙酸睾酮复制小鼠前列腺增生模型：造模前随机分组，每组10只。皮下注射丙酸睾酮(0.01mg/kg)，大豆油配制，每日一次，连续30日。对照组皮下注射等体积羧甲基纤维素钠。造模后立即口服给予非那雄胺1mg/kg、非那雄胺3mg/kg及YK93-8 0.5g/kg。隔日称量体重。给药30天后称重，处死小鼠，通过下腹正中切口切除前列腺，称取湿重，以前列腺湿重(mg)/小鼠体重(g)计算前列腺指数。
数据统计：
计算各组前列腺指数的均值、标准差及标准误，应用T.TEST将各组数据进行组间比较，P<0.05认为有显著性差异。
实验结果：
结果见表1。
表1.YK93-8对小鼠体重、前列腺湿重和前列腺指数的影响
(与正常对照组比较，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；与模型组比较，#P<0.05，
##P<0.01，###P<0.001)
实验结论：
1)雄激素负荷法可成功诱导小鼠前列腺增生，模型组小鼠造模后前列腺湿重与前列腺指数明显升高，与正常组比较，P<0.05，有统计学差异。
2)阳性药非那雄胺组低剂量和高剂量在造模后均可以有效降低模型小鼠前列腺湿重与指数，且高剂量效果略好，与模型组比较，P<0.05，有统计学差异。
3)与模型组比较，YK 93-8明显降低小鼠的前列腺湿重和前列腺指数P<0.05，有统计学差异。
实验例2YK93-8(实施例3蛋白)对Lewis肺癌模型的药效试验
动物：雄性C57BL/6J小鼠
药品：注射用环磷酰胺(CTX)，YK93-8；
仪器：电子天平、五分类计数仪
实验分组：
对照组；
阳性对照组：环磷酰胺(100mg/kg)
YK93-8(0.5g/kg)组。
方法：
实验动物的准备：实验动物在实验环境(温度22℃±2℃，相对湿度50％±2％)中适应1天。
皮下接种Lewis细胞悬液复制小鼠乳腺癌模型：将Lewis瘤组织用玻璃匀浆器研磨制成悬液，用注射器吸取瘤悬液，计算活细胞数，用生理盐水调整细胞浓度为2.6*106/ml，再将悬液按照0.2ml/只注射到小鼠左侧腋下。第二天随机分成对照组、环磷酰胺(100mg/kg)组和YK93-8(0.5g/kg)组。环磷酰胺单次腹腔注射，YK93-8组每日灌胃，连续10日，对照组口服等量体积羧甲基纤维素钠。处理当天测量体重，通过眼眶取血得到20μL血液并进行血常规分析，剥取瘤块，称重拍照，计算抑瘤率。
数据统计：
以(对照组平均质量-实验组平均质量)/对照组平均质量×100％计算抑瘤率及瘤重的均值、标准差及标准误，应用TTEST将各组数据进行组间比较，P<0.05认为有显著性差异。
实验结果：
结果见表2、图2。
表2.YK93-8对小鼠Lewis肺癌的抑制作用
(与对照组比较，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001)
实验结论：
1)皮下接种Lewis细胞可成功建立小鼠肺癌模型。
2)阳性药环磷酰胺组可以显著抑制肿瘤生长，瘤重明显降低，抑瘤率达95.35％，与对照组比较，P<0.05，有统计学差异。
3)与对照组比较，YK93-8(0.5g/kg)可显著抑制肺癌的增长，抑瘤率达27.83％，瘤重明显降低，与对照组比较，P<0.05，有统计学差异。YK93-8还可显著降低外周血中性粒细胞的数量，显著提高单核细胞的数量，P<0.05，有统计学差异。
实验例3蛋白YK93-8(实施例3蛋白)对孕鼠泌乳的药效试验
动物：雌性昆明种孕鼠30-50克
药品：YK93-8
仪器：电子天平
实验分组：
对照组；
YK93-8(2g/kg)组
方法：
实验动物的准备：实验动物在实验环境(温度22℃±2℃，相对湿度50％±2％)中适应1天。记录每只孕鼠生产日期，按照出生日期进行随机分为对照组、YK 93-8组。
YK93-8(2g/kg)灌胃给药，每天记录幼鼠体重及体重增加量。给药13天后颈椎脱臼法处死母鼠，眼眶取血400μl，室温静置1-2h，1000g离心20min；取血清测泌乳素的含量。
数据统计：
计算各组幼鼠每天平均体重增加量(母鼠泌乳量)与母鼠血清泌乳素含量，应用T.TEST将各组数据进行组间比较，P<0.05认为有显著性差异。
实验结果：
结果见图3、图4。
实验结论：
1)YK93-8对幼鼠的体重增长无明显影响。
2)与对照组比较，YK93-8可一定程度上增加母鼠血清泌乳素的含量。
实验例4 YK93-8(实施例3蛋白)EL-4淋巴瘤模型的药效试验
动物：雄性C57BL/6J小鼠
药品：注射用环磷酰胺(CTX)，YK93-8
仪器：电子天平、五分类计数仪
实验分组：
对照组；
阳性对照组：环磷酰胺(100mg/kg)
YK93-8(2g/kg)组。
方法：
实验动物的准备：实验动物在实验环境(温度22℃±2℃，相对湿度50％±2％)中适应1天。
皮下接种EL-4细胞悬液复制小鼠淋巴瘤模型：将EL-4瘤组织用玻璃匀浆器研磨制成悬液，用注射器吸取瘤悬液，计算活细胞数，用生理盐水调整细胞浓度为2.0*106/ml，再将悬液按照0.2ml/只注射到小鼠左侧腋下。第二天随机分成对照组、环磷酰胺(100mg/kg)组、YK93-8(2g/kg)组。环磷酰胺单次腹腔注射，YK93-8(2g/kg)组每日灌胃，连续13日，对照组口服等量体积羧甲基纤维素钠。处理当天测量体重，通过眼眶取血得到20μL血液并进行血常规分析，剥取瘤块，称重拍照，计算抑瘤率。数据统计：
以(对照组平均质量-实验组平均质量)/对照组平均质量×100％计算抑瘤率及瘤重的均值、标准差及标准误，应用TTEST将各组数据进行组间比较，P<0.05认为有显著性差异。
实验结果：
结果见表3、图5。
表3.YK93-8对小鼠EL-4淋巴瘤的抑制作用
(与对照组比较，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001)
实验结论：
1)皮下接种EL-4细胞建立小鼠T细胞淋巴瘤模型。
2)阳性药环磷酰胺组可以显著抑制肿瘤生长，瘤重明显降低，抑瘤率达95.67％，与对照组比较，P<0.05，有统计学差异。环磷酰胺组还可明显降低白细胞、淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞，P<0.05，有统计学差异。
3)与对照组比较，YK93-8能一定程度抑制淋巴瘤的生长，瘤重降低，抑瘤率达13.18％。YK93-8显著升高单核细胞数量，P<0.05，有统计学差异。
实验例5蛋白YK93-8(实施例3蛋白)对小鼠疼痛模型的药效试验
动物：雄性昆明小鼠
药品：盐酸曲马多缓释片，冰醋酸、YK93-8；
仪器：电子天平、计时器
实验分组：
对照组；
阳性对照组：盐酸曲马多组；
YK93-8(0.5g/kg)组。
方法：
实验动物的准备：实验动物在实验环境(温度22℃±2℃，相对湿度50％±2％)中适应1天。
YK93-8(0.5g/kg)组灌胃给药,模型组给予等体积的CMC-Na，每日1次,连续给药7日。末次给药30分钟后,均腹腔注射给予1％的醋酸,记录小鼠15min内扭体次数,并计算药物扭体反应抑制率。观察标准为腹腔内凹,伸展后肢,臀部抬高。
数据统计：
以(对照组扭体反应平均数-给药组扭体反应平均数)/对照组扭体反应平均数×100％计算抑制率。记录扭体次数的均值、标准差及标准误，应用TTEST将各组数据进行组间比较，P<0.05认为有显著性差异。
实验结果：
结果见表4、图6。
表4.YK93-8对小鼠疼痛模型的抑制作用
(与对照组比较，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001)
实验结论：
1)腹腔注射1％醋酸可成功诱导小鼠疼痛模型。15分钟平均扭体次数为14次。
2)阳性药盐酸曲马多组可以显著缓解疼痛，扭体发生次数明显减少，与对照组比较，P<0.05，有统计学差异。
3)与对照组比较，YK93-8对疼痛具有一定缓解作用，扭体发生次数减少。
实验例6YK93-8(实施例3蛋白)对B16F10黑色素模型的药效试验
动物：雌性C57BL/6J小鼠
药品：注射用环磷酰胺(CTX)，YK93-8；
仪器：电子天平、五分类计数仪
实验分组：
对照组；
阳性对照组：环磷酰胺(100mg/kg)
YK93-8(2g/kg)组。
方法：
实验动物的准备：实验动物在实验环境(温度22℃±2℃，相对湿度50％±2％)中适应1天。
皮下接种B16F10细胞悬液复制小鼠黑色素瘤模型：无菌条件下取出瘤块，研磨成瘤液，生理盐水调整浓度至2.58×106/ml，取0.2ml均匀接种于小鼠腋背部皮下。第二天将动物随机分组，开始给药(记为第0天)。CTX(100mg/kg)每周给药一次，YK-93-8(2g/kg)每天给药，对照组口服等量体积羧甲基纤维素钠。处理当天测量体重，通过眼眶取血得到20μL血液并进行血常规分析，剥取瘤块，称重拍照，计算抑瘤率。
数据统计：
以(对照组平均质量-实验组平均质量)/对照组平均质量×100％计算抑瘤率及瘤重的均值、标准差及标准误，应用TTEST将各组数据进行组间比较，P<0.05认为有显著性差异。
实验结果：
结果见表5、图7。
表5.YK93-8对小鼠B16F10黑色素瘤的抑制作用
(与对照组比较，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001)
实验结论：
1)皮下接种B16F10细胞可成功建立小鼠黑色素瘤模型。
2)阳性药环磷酰胺组可以显著抑制肿瘤生长，瘤重明显降低，抑瘤率达85.82％，与对照组比较，P<0.05，有统计学差异。
3)与对照组比较，YK93-8(2g/kg)可显著抑制肺癌的生长，瘤重明显降低，抑瘤率达50.18％，与对照组比较，P<0.05，有统计学差异。YK93-8明显升高外周血单核细胞的数量，P<0.05，有统计学差异。
Claims (15)
1.一种角蛋白YK93-8，其特征在于，所述角蛋白YK93-8的氨基酸序列为：
(1)序列表中SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；
(2)序列表中SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列经替换、缺失或添加1-35个氨基酸形成的基本上保持相同生物学功能的氨基酸序列。
2.根据权利要求1的角蛋白YK93-8，其特征在于，在角蛋白YK93-8上可进行常规修饰；或者在角蛋白YK93-8上还连接有用于检测或纯化的标签。
3.根据权利要求2的角蛋白YK93-8，其特征在于，所述的常规修饰包括乙酰化、酰胺化、环化、糖基化、磷酸化、烷基化、生物素化、荧光基团修饰、聚乙二醇PEG修饰、固定化修饰、硫酸化、氧化、甲基化、脱氨化、形成二硫键或二硫键断裂；所述的标签包括His6、GST、EGFP、MBP、Nus、HA、IgG、FLAG、c-Myc、Profinity eXact。
4.一种编码权利要求1-3任一项所述角蛋白YK93-8的核酸分子。
5.根据权利要求4的核酸分子，其特征在于，所述的核酸分子的核苷酸序列为：
(1)序列表中SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列；
(2)基于SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列进行序列优化得到的核苷酸序列；
(3)与上述(1)或(2)中的核苷酸序列互补的核苷酸序列。
6.一种表达载体，其特征在于，所述的表达载体含有权利要求4-5任一项所述的核酸分子。
7.一种宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞含有权利要求6所述的表达载体或者基因组中整合有权利要求4-5任一项所述的核酸分子。
8.根据权利要求7的宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞包括细菌、酵母、曲霉菌、植物细胞、或昆虫细胞。
9.根据权利要求8的宿主细胞，其特征在于，所述的细菌包括大肠杆菌。
10.一种制备生产权利要求1～3任一项所述角蛋白YK93-8的方法，其特征在于，包括以下步骤：
A.合成权利要求1～3任一项所述的角蛋白YK93-8对应的核酸分子，将核酸分子连入相应的表达载体，将表达载体转化到宿主细胞，在一定条件下在发酵设备中培养带表达载体的宿主细胞并诱导表达角蛋白YK93-8，得到含有角蛋白YK93-8的粗蛋白溶液；
B.对步骤A中所表达的粗蛋白溶液进行分离纯化干燥得到角蛋白YK93-8。
11.根据权利要求10的方法，其特征在于，在步骤A中，所述的宿主细胞主要为选自大肠杆菌，所述的角蛋白YK93-8在大肠杆菌包涵体中表达，所述的发酵设备包括摇瓶或发酵罐。
12.根据权利要求10的方法，其特征在于，在步骤A中，诱导表达角蛋白YK93-8后，可用清洗剂清洗杂质，用溶液溶解得到粗蛋白溶液。
13.根据权利要求10的方法，其特征在于，在步骤B中，所述的分离纯化的方法包括超滤微滤膜技术纯化方法、柱色谱纯化方法、盐析方法、透析方法。
14.一种药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物含有权利要求1～3任一项所述的角蛋白YK93-8及以及药学上可接受的载体或赋形剂。
15.权利要求1～3任一项所述的角蛋白YK93-8或权利要求4-5任一项所述的核酸分子或权利要求6所述的表达载体或权利要求7-9所述的宿主细胞或权利要求14所述的药物组合物在制备预防或治疗前列腺增生、淋巴癌、黑色素瘤、乳腺癌、肺癌、镇痛、泌乳、子宫肌瘤、凝血药物中的应用。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211217436.7A CN117843755A (zh) | 2022-10-04 | 2022-10-04 | 一种角蛋白yk93-8、制法和其药物组合物与用途 |
| PCT/CN2023/121527 WO2024074104A1 (zh) | 2022-10-04 | 2023-09-26 | 一种角蛋白yk93-8、制法和其药物组合物与用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211217436.7A CN117843755A (zh) | 2022-10-04 | 2022-10-04 | 一种角蛋白yk93-8、制法和其药物组合物与用途 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN117843755A true CN117843755A (zh) | 2024-04-09 |
Family
ID=90540698
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202211217436.7A Pending CN117843755A (zh) | 2022-10-04 | 2022-10-04 | 一种角蛋白yk93-8、制法和其药物组合物与用途 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN117843755A (zh) |
| WO (1) | WO2024074104A1 (zh) |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102590530B (zh) * | 2012-03-02 | 2014-06-25 | 常晓天 | Krt84自我免疫抗体作为诊断、检测类风湿性关节炎的诊断标记物的应用 |
| CN112724226B (zh) * | 2019-10-28 | 2023-09-26 | 中国医学科学院药物研究所 | 一种角蛋白bd-10、制法和其药物组合物与用途 |
| US20230192762A1 (en) * | 2020-04-17 | 2023-06-22 | Nanyang Technological University | Keratin Filament Networks |
| CN116535486A (zh) * | 2022-01-26 | 2023-08-04 | 中国医学科学院药物研究所 | 一种角蛋白yk93-1、制法和其药物组合物与用途 |
-
2022
- 2022-10-04 CN CN202211217436.7A patent/CN117843755A/zh active Pending
-
2023
- 2023-09-26 WO PCT/CN2023/121527 patent/WO2024074104A1/zh unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2024074104A1 (zh) | 2024-04-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN116535486A (zh) | 一种角蛋白yk93-1、制法和其药物组合物与用途 | |
| CN114599671B (zh) | 一种角蛋白bd-10、制法和其药物组合物与用途 | |
| CN114599670B (zh) | 一种角蛋白bd-13、制法和其药物组合物与用途 | |
| CN114599667B (zh) | 一种角蛋白bd-1、制法和其药物组合物与用途 | |
| CN112794894B (zh) | 一种角蛋白bd-17、制法和其药物组合物与用途 | |
| CN114599672B (zh) | 一种角蛋白bd-11、制法和其药物组合物与用途 | |
| CN114599673B (zh) | 一种角蛋白bd-6、制法和其药物组合物与用途 | |
| CN117843755A (zh) | 一种角蛋白yk93-8、制法和其药物组合物与用途 | |
| CN117843752A (zh) | 一种角蛋白yk93-6、制法和其药物组合物与用途 | |
| CN117843756A (zh) | 一种角蛋白yk93-9、制法和其药物组合物与用途 | |
| CN117843753A (zh) | 一种角蛋白yk93-2、制法和其药物组合物与用途 | |
| CN117843751A (zh) | 一种角蛋白yk93-4、制法和其药物组合物与用途 | |
| CN117843754A (zh) | 一种角蛋白yk93-5、制法和其药物组合物与用途 | |
| CN114599668B (zh) | 一种角蛋白bd-3、制法和其药物组合物与用途 | |
| CN114599669B (zh) | 一种角蛋白bd-4、制法和其药物组合物与用途 | |
| CN112724234B (zh) | 一种角蛋白bd-5、制法和其药物组合物与用途 | |
| CN112724224B (zh) | 一种角蛋白bd-15、制法和其药物组合物与用途 | |
| CN112724228B (zh) | 一种角蛋白bd-14、制法和其药物组合物与用途 | |
| CN112724232B (zh) | 一种角蛋白bd-2、制法和其药物组合物与用途 | |
| CN116535484A (zh) | 一种角蛋白bd-7、制法和其药物组合物与用途 | |
| CN116535485A (zh) | 一种角蛋白bd-8、制法和其药物组合物与用途 | |
| CN116655755A (zh) | 一种核糖体蛋白、其制备方法及其镇痛的用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |