CN117794515A - 用于治疗干眼综合征的包含瑞可黄酮的滴眼剂组合物及其制备方法 - Google Patents

用于治疗干眼综合征的包含瑞可黄酮的滴眼剂组合物及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种用于治疗干眼综合征的包含瑞可黄酮的滴眼剂组合物。具体地，本发明涉及一种滴眼剂组合物，其通过在组合物中包含一定浓度或更高的主要成分并且包含一种或多种渗透增强剂，使得活性成分瑞可黄酮在体内充分递送至角膜上皮细胞以表现出有效的药用效果，可以最大化改善干眼症状。

Description

用于治疗干眼综合征的包含瑞可黄酮的滴眼剂组合物及其制 备方法
技术领域
本发明涉及用于治疗干眼症的包含瑞可黄酮(recoflavone)的眼用组合物及其制备方法，所述瑞可黄酮是3’,4’,5-三甲氧基黄酮衍生化合物。特别地，为了最大化改善干眼症状，本发明涉及包含一定浓度的活性成分和至少一种渗透增强剂的眼用组合物及其制备方法，使得活性成分瑞可黄酮可以在体内充分渗透角膜以表现出显著的治疗效果。
背景技术
干眼症已知为由于泪膜的渗透性增加和由泪液缺乏或过度泪液蒸发引起的泪液内稳态丧失而引起眼球表面上的炎症和眼部不适的疾病。然而，直到几年前，关于干眼症的适当定义，还存在许多争议，泪膜和眼球表面学会(Tear Film and Ocular SurfaceSociety(TFOS))在2017年将干眼症定义如下：“干眼症是眼球表面的多因素疾病，其特征在于泪膜内稳态丧失，并伴随眼球症状，其中泪膜不稳定性、高渗透性、眼球表面的炎症和损伤、以及神经感觉异常发挥病因学作用。(TFOSDEWS II introduction.Ocul.Surf.2017,15,269-275)。”通过使用如下方法进行干眼症的诊断：诸如关于症状、泪液体积、泪膜破裂时间、泪液渗透性、角结膜染色和脂质层或睑板腺的分析的调查表，并且取决于干眼症的程度，将人工泪液、抗炎剂、泪液分泌促进剂、自体血清和眼睑治疗用于治疗(J.KoreanMed.Assoc.2018,61(6),352-364)。
对于干眼症的治疗，最常使用的是用眼球润滑剂(例如人工泪液)替代泪液的方法并且其典型实施例是含有透明质酸钠或羧甲基纤维素钠的滴眼剂。对于抗炎疗法，使用环孢霉素制剂来降低角结膜上皮中的免疫活性标志物(例如，人白细胞抗原-抗原D相关的)、细胞凋亡标志物(例如，Fas)以及炎性细胞因子(例如，白细胞介素-6)，以治疗眼球表面上的炎症并且改善干眼症状。最近开发的地夸磷索(diquafosol)(地夸磷索四钠)制剂是P2Y2受体激动剂并且表现出促进泪液的水性组分和粘液组分的分泌。在日本，已经证明瑞巴派特(rebamipide)悬浮液制剂在增加眼中杯状细胞的密度和增加泪液的粘液组分和水性组分中是有效的，并且将其用作用于干眼症的治疗剂。
瑞可黄酮是3’,4’,5-三甲氧基黄酮衍生物化合物，C20H18O8，并且由2-((2-(3,4-二甲氧基苯基)-5-甲氧基-4-氧代-4H-色烯-7-基)氧基)乙酸表示，具有386.4的分子量。
韩国专利登记号10-0447918、10-0327621和10-0644928公开了通过抗炎作用和促进胃黏液分泌，瑞可黄酮适用于胃肠疾病如胃炎和胃溃疡，以及炎性肠疾病如克罗恩氏病和结肠炎。韩国专利登记号10-0930467公开了3’,4’,5-三甲氧基黄酮衍生物化合物(包括瑞可黄酮)的结膜粘液分泌促进作用以及适合作为用于治疗和预防干眼症的试剂。
韩国专利登记号10-0644928公开了可以以酸酐原样的形式使用瑞可黄酮，但是由于它的吸湿性在处理和管理方面引起问题，当它用作水合物时可以将其改善。
瑞可黄酮实际上不溶于水。它具有在低pH下低溶解度的特性。随着pH增加，它被离子化并且其溶解度增加。然而，即使当将它溶解时，由于高电离度，瑞可黄酮显示出差的细胞渗透性并且在吸收到身体中可能具有问题。事实上，当将3％滴眼剂给予兔眼并且评估随着时间推移在眼部每个组织中的药物分布时，结果表明瑞可黄酮很少分布在位于眼睛内部的组织中并且主要分布在眼睛外部的周围组织中，如角膜、结膜、以及巩膜。特别地，结果显示在刚刚给药后角膜中药物浓度较高，但是随着时间推移浓度快速降低，并且药物主要分布在结膜和巩膜中(数据未显示)。
因此，需要的是，一定量或更多瑞可黄酮的滴眼剂制剂能够在体内渗透角结膜及其制备方法，从而能够对干眼症的整体症状表现出显著的治疗效果。
[现有技术]
[专利文献]
(专利文献1)韩国专利登记号10-0327621
(专利文献2)韩国专利登记号10-0447918
(专利文献3)韩国专利登记号10-0644928
(专利文献4)韩国专利登记号10-0930467
[非专利文献]
(非专利文献1)TFOSDEWS II introduction.Ocul.Surf.2017,15,269-275
(非专利文献2)J.Korean Med.Assoc.2018,61(6),352-364
(非专利文献3)Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.,2014,55(10),6569～6574
(非专利文献4)Cornea,2017,36(6),712-718
(非专利文献5)Br.J.Ophthalmol.2010,94,1519～1522
发明内容
[技术问题]
本发明涉及用于治疗干眼症的包含瑞可黄酮的眼用组合物，并且提供了其一定量或更多的活性成分可以在体内渗透角结膜的眼用组合物及其制备方法，使得瑞可黄酮对干眼症的整体症状可以表现出显著的治疗效果。
韩国专利登记号10-0930467公开了瑞可黄酮在低药物浓度下显示出用于治疗干眼症的一些证据，如促进粘液分泌，并且具有开发作为干眼症治疗剂的可能性。
通常，当在眼睛的角结膜中出现瘢痕时，主要粘蛋白(如MUC1、MUC14、MUC16、和MUC5AC)的表达增加。然而，患有干眼症的患者出现一些不适，这是因为粘液分泌不足够好，即使在其角膜中容易产生瘢痕。研究了在人类角结膜上皮细胞中通过瑞可黄酮的药理学粘蛋白分泌，并且证实了当施用100μM的活性成分溶液时，粘蛋白层的厚度显著增加。然而，实时聚合酶链式反应(PCR)证实，与干眼症状相关的粘蛋白(其是MUC1、MUC14、MUC16和MUC15AC)显示出显著增加4小时然后快速降低的趋势。蛋白质印迹分析还显示MUC5AC仅具有增加的趋势，并且其他蛋白则不是这样(Investigative Ophthalmology and VisualScience,2014,55(10),6565～6574)。这些结果表明，瑞可黄酮的药理学作用可以仅改善干眼症状的一部分并且当认为干眼症具有由不同因素引起的不同症状时，可能限制有效治疗剂的开发潜力。
在开发包含瑞可黄酮作为干眼症治疗剂的制剂的过程中，已经证实难以在简单溶解状态下以低药物浓度在体内研究中有效地改善干眼的整体症状。通过本发明发现，恰好在一定量或更多的瑞可黄酮可以在体内渗透到组织和细胞中时可以有效地改善干眼的整体症状。然后可以将它开发为干眼症的实际治疗剂。因此，在本发明中，需要开发能够有效穿透角膜以在眼睛的组织和细胞中显著改善干眼整体症状的、包含瑞可黄酮的制剂及其制备方法。
[问题的解决方案]
本发明提供了包含瑞可黄酮的眼用组合物，其有效地渗透到角结膜中以在眼睛的组织和细胞中表现出干眼症状的显著改善。特别地，本发明提供了一种眼用组合物，其中：
(a)滴眼剂中瑞可黄酮或其药学上可接受的盐、其水合物、酸酐或溶剂化物的有效浓度为5％(w/v)或更高；以及
(b)眼用组合物包含0.1％至5.0％(w/v)的量的渗透增强剂；和0.01％至1.0％(w/v)的量的张度剂。
此外，本发明提供了一种用于治疗干眼症的眼用组合物，其中可以将活性成分瑞可黄酮透明地溶解。特别地，本发明提供了一种眼用组合物，包含：
(a)以5％(w/v)或更大量的瑞可黄酮、其水合物、酸酐或溶剂化物；以及
(b)碱化剂，其中碱化剂与瑞可黄酮的摩尔浓度比率是1.05或更高。
此外，本发明提供了一种用于制备包含瑞可黄酮的眼用组合物的方法，该眼用组合物有效地渗透到角结膜中以在眼睛的组织和细胞中表现出干眼症状的显著改善。特别地，该方法包括：
(S1)将瑞可黄酮、其水合物、酸酐或溶剂化物加入并溶解在通过将碱化剂加入并溶解在纯水中而制得的溶液中；
(S2)通过向通过(S1)获得的溶液中添加酸化剂将pH调节至4至8的范围；
(S3)将由渗透增强剂、张度剂、缓冲剂和防腐剂组成的至少一种药物添加剂添加和溶解到通过(S2)获得的溶液中；和
(S4)将通过(S3)获得的溶液过滤。
此外，本发明提供了一种维持pH稳定性的眼用组合物。特别地，本发明提供了一种眼用组合物，包含：
(a)5％(w/v)或更大量的瑞可黄酮或其药学上可接受的盐、其水合物、酸酐或溶剂化物；
(b)0.01％至3.0％(w/v)的量的pH调节剂；以及
(c)在长期储存条件(25℃/60％RH)下将pH保持在4至8的范围内。
此外，本发明提供了用于给予(使用)眼用组合物的方法。特别地，本发明提供了一种眼用组合物，包含：
(a)5％(w/v)或更大量的瑞可黄酮或其药学上可接受的盐、其水合物、酸酐或溶剂化物；以及
(b)0.1％至5.0％(w/v)的量的渗透增强剂；
(c)一次给予1至2滴并且每天至少三次。
[本发明的有利效果]
通过增加用于治疗干眼症的包含瑞可黄酮的眼用组合物的体内角结膜渗透的量本发明可以有效地改善干眼症的症状。特别地，通过在临床研究中证实本发明的眼用组合物的功效优于安慰剂，并且通过改善干眼症的整体迹象，如泪液分泌、角膜荧光染色评分、角膜上皮细胞的脱离、角膜表面不规则性、结膜杯状细胞密度和粘蛋白细胞密度，本发明提供了一种用于治疗干眼症的实用且有效的眼用组合物。
此外，提供了用于包含5％(w/v)或更多的瑞可黄酮或其药学上可接受的盐、其水合物、酸酐或溶剂化物的透明眼用组合物的商业可应用的组合物及其制备方法。出人意料地，如果需要，本发明还提供了不含缓冲剂的眼用组合物在长期储存条件(25℃/60％RH)下的稳定pH。
本发明的效果不限于上述效果，并且各种效果可以包括在本领域技术人员从下面的描述中显而易见的范围内。
附图说明
图1示出了在小型猪的角膜中瑞可黄酮的角膜渗透6小时的累积量。
图2示出了在实验性干眼小鼠模型中比较例1与实施例1的眼用组合物之间的泪液分泌的比较。
图3示出了在实验性干眼小鼠模型中比较例1和实施例1的眼用组合物之间的角膜荧光染色评分的比较。
图4示出了在实验性干眼小鼠模型中比较例1和实施例1的眼用组合物之间的角膜表面不规则性的比较。
图5示出了在实验性干眼小鼠模型中比较例1和实施例1的眼用组合物之间的分离的角膜上皮细胞数量的比较。
图6示出了在实验性干眼小鼠模型中比较例1与实施例1的眼用组合物之间的杯状细胞密度的比较。
图7示出了比较在实验性干眼小鼠模型中比较例1和实施例1的眼用组合物之间的粘蛋白细胞密度的照片。
图8示出了比较在实验性干眼小鼠模型中比较例1和实施例1的眼用组合物之间的粘蛋白细胞密度的图。
图9是示出作为表2结果的在制备包含5％(w/v)的瑞可黄酮组合物的过程中取决于氢氧化钠水溶液的摩尔浓度的瑞可黄酮的溶解状态的照片。
图10是示出在临床研究中通过荧光素测量的总角膜染色评分(TCSS)的从基线变化量的图。
图11是比较在长期储存条件(25℃/60％RH)下实施例5的pH稳定性的图。
具体实施方式
在下文中，将更详细地描述本说明书。
在本发明中公开的每个描述和实施方案可以应用于针对每一个的其他描述和实施方案。换言之，本文公开的各种要素的所有组合都落入本发明的范围内。此外，不能认为本发明的范围受以下描述的具体说明的限制。
本发明的发明人在将包含瑞可黄酮的制剂开发成为干眼症治疗剂的过程中发现，难以在刚溶解状态下以低的药物浓度在体内研究中有效地改善干眼的整体症状。在研究开发瑞可黄酮作为干眼症有效治疗剂的过程中，已发现当制剂包含5％(w/v)或更多的瑞可黄酮和0.1％至5.0％(w/v)的渗透增强剂时，体内角结膜渗透量增加以有效改善干眼症状。此外，本发明的发明人完成了用于透明眼用组合物的商业上可应用的组合物及其制备方法，该透明眼用组合物包含5％(w/v)或更多的瑞可黄酮或其药学上可接受的盐、其水合物、酸酐或溶剂化物。出人意料地，如果需要，本发明还提供了在长期储存条件(25℃/60％RH)下包含5％(w/v)或更多的瑞可黄酮或其药学上可接受的盐、水合物、酸酐或溶剂化物而没有缓冲剂的眼用组合物的稳定pH。
在下文中，将更详细地描述本说明书。
如在本说明书中在本文中使用的，包含5％(w/v)或更多的瑞可黄酮或其药学上可接受的盐、其水合物、酸酐或溶剂化物是指作为瑞可黄酮包含5％(w/v)或更多，是指对于作为实施例描述的内容和与说明书类似的内容两者作为瑞可黄酮包含的浓度。此外，瑞可黄酮的浓度还指作为瑞可黄酮的浓度。
用于治疗干眼症的眼用组合物
本发明的眼用组合物包括5％(w/v)或更多的瑞可黄酮或其药学上可接受的盐、其水合物、酸酐或溶剂化物，以及渗透增强剂和张度剂。这种眼用组合物可以任选地进一步包含粘度剂、缓冲剂、pH调节剂以及防腐剂。
具体地，本发明提供了一种用于治疗干眼症的眼用组合物，该组合物包含5％(w/v)或更多的瑞可黄酮或其药学上可接受的盐、其水合物、酸酐或溶剂化物；0.1％至5.0％(w/v)的渗透增强剂；以及0.01％至1.0％(w/v)的张度剂。
作为本发明活性成分的瑞可黄酮可以以酸酐或包括水合物的溶剂化物的形式使用，并且还可以用作其药学上可接受的盐之一。
在本发明中，瑞可黄酮可以直接通过常规已知的制造方法制备，或可以通过商业购买来制备。
在本发明中，术语“瑞可黄酮(recoflavone)”是指具有以下化学式1的结构的3’,4’,5-三甲氧基黄酮衍生化合物。
[化学式1]
韩国专利登记号10-0644928公开了如由化学式本身表示的酸酐形式的瑞可黄酮具有吸湿性，但是当它以水合物形式存在时，它是稳定的而没有吸湿性，并且它可以存在于各种溶剂化物中。因此，在稳定性方面，优选使用固体剂型(如片剂和胶囊)的溶剂化物(包括水合物)，但是在液体剂型(如滴眼剂)中，可以获得各种形式的瑞可黄酮(如酸酐)、溶剂化物(包括水合物)及其药学上可接受的盐。
关于瑞可黄酮的浓度，韩国专利登记号10-0930467和现有技术实现了1％至3％(w/v)作为活性成分。然而，在本发明中发现为了显著改善干眼整体症状，一定量或更多的瑞可黄酮必须在体内穿透组织，并且在这种情况下，在制剂中瑞可黄酮的浓度应该是5％(w/v)或更多。
优选地，瑞可黄酮的浓度是5％(w/v)或更多以及10％(w/v)或更少。由于渗透性，大于10％(w/v)的瑞可黄酮难以应用于滴眼剂制剂。
在本发明中，“渗透增强剂”是指在向眼部给予包含瑞可黄酮的眼用组合物时，在使一定量或更多的瑞可黄酮在体内渗透到角膜中从而显著改善干眼整体症状中起作用的物质，并且它可以是在增强瑞可黄酮细胞膜渗透中起作用的一种表面活性剂。
渗透增强剂可以是选自聚山梨醇酯、聚氧乙烯烷基醚、聚乙二醇(macrogol)115羟基硬脂酸酯、聚氧乙烯甘油酯、生育酚聚乙二醇琥珀酸酯、泊洛沙姆(poloxamer)和聚氧乙烯蓖麻油衍生物中的至少一种。具体地，它可以是聚山梨醇酯80、聚氧乙烯10油基醚、solutol HS15、月桂酰基聚氧乙烯甘油酯、维生素E-TPGS、泊洛沙姆407和聚氧乙烯35蓖麻油。
在本发明中，渗透增强剂可以单独地或组合地使用，并且当单独地或组合地包含时，它可以以0.1％至5.0％(w/v)的范围包含在眼用组合物中。
在本发明中，可以使用通常用于泪液等渗性的张度剂。例如，可以使用非离子化合物如甘露醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇、麦芽糖、蔗糖、山梨醇、海藻糖和葡萄糖，或离子化合物如氯化钠、硝酸钠和硝酸钾。这些张度剂可以单独使用或以其两种或更多种的任意组合使用以将渗透压调节至与泪液渗透压相似，并且可以以0.01％至1.0％(w/v)的范围包含在眼用组合物中。
在本发明中，用于治疗干眼症的眼用组合物可以任选地进一步包含粘度剂、缓冲剂、pH调节剂和防腐剂中的任何一种或多种。
在下文中，描述了粘度剂、缓冲剂、pH调节剂和防腐剂。
在本发明中，如果需要，可以任选地使用通常用于滴眼剂的粘度剂。例如，可以使用非离子聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、甲基纤维素；离子聚合物，如羧甲基纤维素钠、聚卡波非(polycarbophil)、卡波姆(carbomer)；糖，如葡聚糖、壳聚糖、海藻糖；以及树胶，如黄原胶，并且可以以0至3.0％(w/v)的范围任选地包含在眼用组合物中。
作为缓冲剂，可以使用磷酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、碳酸氢盐、碳酸盐、葡萄糖酸盐、乳酸盐、丙酸盐、TRIS或硼酸盐。在这种情况下，缓冲剂可以以0至3.0％(w/v)的范围包含在眼用组合物中，并且这些可以单独地或以两种或更多种的任意组合使用。
通常包含缓冲剂以在大多数眼用组合物中获得稳定的物理化学性质，特别是pH，用于成品的保质期。然而，在最近研究中已经报道，尽管硼酸盐、磷酸盐、柠檬酸盐或TRIS缓冲液通常用于滴眼剂，但是当高浓度的它们暴露于人类角膜缘上皮细胞和人类结膜上皮细胞时，它们可以是有毒的(Cornea,2017,36(6),712～718)。还已经报道，包含磷酸盐缓冲液的透明质酸盐滴眼剂可以导致角膜创伤处的灼烧或角膜钙化(Br.J.Ophthalmol.2010,94,1519-1522)。
因此，如果可以在没有缓冲剂的情况下确保滴眼剂的pH稳定性，则可能希望将其排除。在来自本发明的包含5％(w/v)或更多瑞可黄酮或其药学上可接受的盐、其水合物、酸酐或溶剂化物的眼用组合物的情况下，出人意料地发现没有缓冲剂的眼用组合物的pH在保质期过程中保持稳定。另一方面，还发现没有瑞可黄酮或其药学上可接受的盐、其水合物、酸酐或溶剂化物的安慰剂组合物的pH连续地降低。
在本发明中，通常用于滴眼剂的pH调节剂可以用于将pH调节并保持在不刺激或损害角膜或结膜的范围内。作为pH调节剂，可以单独地或以其两种或更多种的任意组合使用常规的酸如盐酸、乳酸、乙酸、磷酸、硼酸和柠檬酸或常规的碱如氢氧化钠、氢氧化钾。在这种情况下，可以任选地包含pH调节剂及其在眼用制剂中的量，使得pH可以在4至8的范围内，或者可以在制备组合物的过程中设定pH调节剂的量，优选在5至7的pH范围内。pH调节剂可以以0.01％至3.0％(w/v)的范围包含在眼用组合物中。
在本发明中，为了防止滴眼剂被细菌或真菌污染，如果需要，可以任选地使用滴眼剂中常用的防腐剂，并且通常取决于是多次使用容器还是一次性容器将其用作眼用制剂的包装。例如，可以单独地或以其两种或更多种的任意组合使用叔铵盐，如苯扎氯铵(benzalkonium chloride)和苄索氯铵(benzethonium chloride)；对羟基苯甲酸酯，如对羟基苯甲酸甲酯(methylparaben)和对羟基苯甲酸丙酯(propylparaben)；醇，如氯丁醇和苄醇；乙酸氯己定(chlorhexidine acetate)和依地酸钠(sodium edetate)，并且可以以0至0.1％(w/v)的范围任选地包含在眼用组合物中。
在本发明中，用于治疗干眼症的眼用组合物可以不包含粘度剂、缓冲剂和/或防腐剂，并且如果不包含，每种成分的含量下限可以表示为0％(w/v)。换言之，在本发明中，0％(w/v)的含义是，如果需要的话，可以任选地使用这些成分。
改善眼用组合物的渗透性
在本发明中，对于用于治疗干眼症的眼用组合物，与不包含渗透增强剂的眼用组合物相比，在小型猪角膜中瑞可黄酮6小时累积渗透量是130μg/cm2或更大、或3倍或更大。在这种情况下，瑞可黄酮的累积渗透量是指当根据实验实施例1测试时渗透小型猪角膜6小时的瑞可黄酮的总量。
因为角膜具有保护眼睛的功能并且充当药物吸收的屏障，所以需要确保药物的适当角膜渗透量以成功地开发滴眼剂。
瑞可黄酮具有即使在3％(w/v)或5％(w/v)的高浓度下，通过本发明的制备方法也能够在完全透明溶液中制备滴眼剂的优点。然而，包含刚刚以高浓度溶解的瑞可黄酮的滴眼剂在体内研究中没有显示出对干眼症整体症状的显著改善，并且角膜渗透性测试的结果证实，尽管瑞可黄酮以高浓度溶解，但是瑞可黄酮不能以足够的量渗透。在本发明中，已证实了当将渗透增强剂包含在含有瑞可黄酮的眼用组合物中时，瑞可黄酮的角膜渗透量显著增加，这在临床研究中导致了本发明的眼用组合物的功效优于安慰剂，以及在实验性干眼动物模型中对于干眼症整体症状的改善。
在这种情况下，所提到的关于用于治疗干眼症的眼用组合物和眼用组合物改善渗透性的细节是同样应用的，只要它们不彼此矛盾。关于用于治疗干眼症的眼用组合物的描述可以全部应用于改善眼用组合物的渗透性。
用于治疗干眼症的眼用组合物，其中调节碱化剂的含量
此外，本发明提供了一种用于治疗干眼症的眼用组合物，其中可以透明地溶解活性成分瑞可黄酮。
特别地，本发明提供了一种用于治疗干眼症的眼用组合物，包含：
5％(w/v)或更多的瑞可黄酮或其药学上可接受的盐、其水合物、酸酐或溶剂化物；以及
碱化剂，其中碱化剂与瑞可黄酮的摩尔浓度比率是1.05或更高。
在本发明中，碱化剂是氢氧化钠或氢氧化钾。
关于此的细节将描述在用于治疗干眼症的眼用组合物的制备方法中。
在这种情况下，所提到的关于用于治疗干眼症的眼用组合物和其中调节碱化剂含量的眼用组合物的细节是同样应用的，只要它们不彼此矛盾。关于用于治疗干眼症的眼用组合物的描述可以全部应用于其中调节碱化剂含量的眼用组合物。
用于治疗干眼症的眼用组合物的制备方法
此外，本发明提供了一种用于治疗干眼症的眼用组合物的制备方法，该眼用组合物可以表现出对于干眼症状的有效改善。
具体地，该方法包括：(S1)将瑞可黄酮、其水合物、酸酐或溶剂化物加入并溶解于通过将碱化剂加入并溶解于纯水中所制备的溶液中；(S2)通过将酸化剂加入到通过(S1)获得的溶液中将pH调节至4至8的范围；(S3)将由渗透增强剂、张度剂、缓冲剂和防腐剂组成的至少一种药物添加剂添加和溶解于通过(S2)获得的溶液中；和(S4)将通过(S3)获得的溶液过滤。
在本发明的制备方法中，将瑞可黄酮及其水合物、酸酐或溶剂化物称为瑞可黄酮。
通常，考虑到在眼部使用的感觉和药物的有效吸收，优选以透明溶液状态制备眼用组合物。然而，如上所述，因为水合物形式或其他形式的瑞可黄酮实际上不溶于水，所以需要特定的方法来制备透明溶液。因此，如果瑞可黄酮不溶于用于眼用组合物的纯水中，则可以通过(S1)步骤来制备透明溶液。
在本发明中，(S1)步骤中用于pH调节的碱化剂是氢氧化钠或氢氧化钾，优选氢氧化钠。在(S2)步骤中，可以通过选择盐酸、乳酸、乙酸、磷酸、硼酸、以及柠檬酸中的一种或多种，优选地，选自盐酸、磷酸、以及乙酸中的一种或多种，并且最优选地，盐酸来使用用于pH调节的酸化剂。
当瑞可黄酮不溶于纯水中时，在(S1)步骤中，以不小于1.05(其是摩尔浓度与瑞可黄酮的摩尔浓度的比率)的量添加作为碱化剂的氢氧化钠。在本文中，摩尔浓度的比率表示为通过将氢氧化钠的摩尔浓度除以包含在眼用组合物中的瑞可黄酮的摩尔浓度的值。
具体地，(S1)步骤是其中将氢氧化钠添加至纯水以制备具有不大于0.16M或不小于0.19M的摩尔浓度的水溶液，并且然后添加瑞可黄酮的过程。通过上述方法可以透明地溶解瑞可黄酮。
在上述溶解过程中，而不是在制造过程的最终体积中计算氢氧化钠的摩尔浓度。出人意料地，当将瑞可黄酮添加到具有在不大于0.16M或不小于0.19M的范围之外的摩尔浓度的氢氧化钠的水溶液中时，即使在搅拌数小时之后也不能透明地溶解瑞可黄酮。因此，不能有效地制备眼用组合物。将参见下表1、表2和图9详细描述相应内容。
在这种情况下，考虑到眼用组合物的渗透性可以在可得到的范围内调节碱化剂，特别是氢氧化钠的量，并且因此不使用2.0或更高的摩尔浓度比率。
[表1]
[表2]
在具有氢氧化钠的摩尔浓度比率不小于1.05的包含7％(w/v)或更多瑞可黄酮的眼用组合物的情况下，由于氢氧化钠的摩尔浓度在不小于0.19M的范围内，即使应用总体积的纯水，也不难制备活性成分的清澈溶解物。
在包含3％(w/v)瑞可黄酮的眼用组合物的情况下，也不难获得对应于相反情况的活性成分的清澈溶解物。
然而，在包含5％(w/v)或6％(w/v)瑞可黄酮的眼用组合物的情况下，氢氧化钠水溶液的摩尔浓度可以在不大于0.16M或不小于0.19M的范围之外，这取决于在该方法中首先施加的纯水的量。出乎意料地，如果此时由于超出上述范围导致瑞可黄酮不能清澈地溶解，即使再次加入纯水将摩尔浓度调节到不大于0.16M，即使在搅拌数小时之后也很难获得瑞可黄酮的清澈溶液。这将在滴眼剂的制造过程中引起大的麻烦。
在本发明中，在(S1)步骤中，可以将瑞可黄酮、其水合物、酸酐、或溶剂化物作为瑞可黄酮以5％(w/v)或更大的量透明地溶解在眼用组合物中，并且具体地它可以作为瑞可黄酮以5％至10％(w/v)的量透明地溶解在眼用组合物中。
在本发明中，在(S2)步骤中使用的pH调节剂可以是酸化剂。具体地，当在(S1)步骤中使用碱化剂溶解瑞可黄酮时，将溶液的pH增加至10或更高。因此，在(S2)步骤中，考虑到直接给予眼睛的滴眼剂的特性和瑞可黄酮的物理化学特性，添加酸化剂以将pH调节到4至8的范围内。
在本发明中，在(S3)步骤中，当添加一种或多种药物添加剂时，可以将渗透增强剂添加至在眼用组合物中为0.1％至5.0％(w/v)，将张度剂添加至在眼用组合物中为0.01％至1.0％(w/v)，并且将pH调节剂添加至在眼用组合物中为0.01％至3.0％(w/v)。在这种情况下，具体地，pH调节剂包含0.01％至2.5％(w/v)的碱化剂和0.001％至0.5％(w/v)的酸化剂。
在本发明中，在(S3)步骤中，当添加一种或多种药物添加剂时，可以将缓冲剂添加至为眼用组合物中为0至3.0％(w/v)，并且防腐剂则是在眼用组合物中为0至0.1％(w/v)。
在本发明中，渗透增强剂可以是选自聚山梨醇酯、聚氧乙烯烷基醚、聚乙二醇(macrogol)15羟基硬脂酸酯、聚氧乙烯甘油酯、生育酚聚乙二醇琥珀酸酯、泊洛沙姆和聚氧乙烯蓖麻油衍生物中的一种或多种，具体地，选自聚山梨醇酯80、聚氧乙烯10油基醚、solutol HS15、月桂酰基聚氧乙烯甘油酯、维生素E-TPGS、泊洛沙姆407和聚氧乙烯35蓖麻油中的一种或多种。
在本发明中，张度剂可以是选自由甘露醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇、麦芽糖、蔗糖、山梨醇、海藻糖和葡萄糖组成的非离子化合物或由氯化钠、硝酸钠和硝酸钾组成的离子化合物中的一种或多种。
在本发明中，在(S4)之前可以进一步包括通过将粘度剂添加到通过(S3)步骤获得的溶液中进行混合的步骤。这不是必不可少的步骤，并且可以添加并且混合0至3.0％(w/v)的粘度剂。
在本发明中，在(S4)步骤之前，可以进一步包括将纯水添加到通过(S3)步骤获得的溶液中并且检查在4至8范围内的pH的过程。
具体地，在检查在4至8范围内的pH之后，如果需要，可以添加pH调节剂以进行调节。
所提到的关于用于治疗干眼症的眼用组合物、其中调节碱化剂含量的眼用组合物、以及用于制备根据本发明的用于治疗干眼症的眼用组合物的方法的细节是同样应用的，只要它们不彼此矛盾。关于用于治疗干眼症的眼用组合物和其中调节碱化剂含量的眼用组合物的描述均可以应用于用于治疗干眼症的眼用组合物的制备方法。
提供pH稳定性的眼用组合物
此外，本发明提供了一种眼用组合物，如果需要的话，甚至在没有缓冲剂的情况下，该眼用组合物提供pH稳定性。
具体地，本发明提供了用于治疗干眼症的眼用组合物，该组合物包含5％(w/v)或更多的瑞可黄酮或其药学上可接受的盐、其水合物、酸酐或溶剂化物，
以0.01-3.0％(w/v)的量包含pH调节剂；并且在长期储存条件(25℃/60％RH)下将pH保持在4-8的范围内。在这种情况下，更具体地，pH调节剂可以包含0.01％至2.5％(w/v)的碱化剂和0.001％至0.5％(w/v)的酸化剂。
在本发明中，碱化剂是氢氧化钠或氢氧化钾。
在本发明中，酸化剂是选自下组的一种或多种：盐酸、乳酸、乙酸、磷酸、硼酸以及柠檬酸。
在本发明中，提供pH稳定性的眼用组合物在长期储存条件(25℃/60％RH)下将pH维持在4至8的范围内，具体地，将pH维持在5至7的范围内。
具体地，由于在长期储存条件(25℃/60％RH)下将pH保持在4至8，具体地5至7的范围内18个月，证实了pH稳定性。
所提到的关于用于治疗干眼症的眼用组合物和提供pH稳定性的眼用组合物的细节是同样应用的，只要它们不彼此矛盾。关于用于治疗干眼症的眼用组合物的描述可以全部应用于提供pH稳定性的眼用组合物。
眼用组合物的用途
此外，本发明提供了用于给予眼用组合物的方法。
具体地，本发明提供了一种用于治疗干眼症的眼用组合物，该组合物包含5％(w/v)或更多的瑞可黄酮或其药学上可接受的盐、其水合物、酸酐或溶剂化物；以及
包含0.1％至5.0％(w/v)的量的渗透增强剂，
用于每次给予1至2滴，每天3次或更多次。
对于本发明的眼用组合物，有利的是活性成分充分暴露于眼睛，使得药物可以以一定量或更多量递送至眼睛的角结膜细胞的内部或外部，以显著改善干眼的整体症状。因此，用于给予本发明眼用组合物的方法优选每次滴注1至2滴，每天3次或更多次。
具体地，可以每次滴注1滴，滴注3次或更多次、4次或更多次、5次或更多次、或6次或更多次，更具体地，可以每次滴注1滴，滴注3-6次。
在本发明中，渗透增强剂可以是选自聚山梨醇酯、聚氧乙烯烷基醚、聚乙二醇15羟基硬脂酸酯、聚氧乙烯甘油酯、生育酚聚乙二醇琥珀酸酯、泊洛沙姆和聚氧乙烯蓖麻油衍生物中的一种或多种，具体地，选自聚山梨醇酯80、聚氧乙烯10油基醚、solutol HS15、月桂酰基聚氧乙烯甘油酯、维生素E-TPGS、泊洛沙姆407和聚氧乙烯35蓖麻油中的一种或多种。
在本发明中，瑞可黄酮的浓度优选是不小于5％(w/v)并且不大于10％(w/v)。大于10％(w/v)的瑞可黄酮引起涉及物理特性(如滴眼剂渗透性)的许多困难以及实际问题(如产品成本)。
根据本发明的眼用组合物可以与其他滴眼剂组合给予，并且在这种情况下，可以以至少5分钟的间隔给予。
所提到的关于用于治疗干眼症的眼用组合物和眼用组合物的用途的细节是同样应用的，只要它们不彼此矛盾。关于用于治疗干眼症的眼用组合物的描述可以全部应用于眼用组合物的用途。
在下文中，给出优选实施例以帮助理解本发明。然而，提供以下实施例是为了更容易理解本发明，并且本发明的内容不受实施例的限制。
实施例1-5和比较例1-3：制备眼用组合物
根据下表3中所示的比率制备眼用组合物。在搅拌适量纯水的同时，将氢氧化钠添加至纯水中以溶解，并且然后添加瑞可黄酮一水合物以透明地溶解。在溶解后，向溶解的溶液中添加盐酸以将pH调节至4至8，然后添加渗透增强剂、张度剂、缓冲剂和防腐剂以溶解。将粘度剂单独地放入适量纯水中，并且根据类型通过加热或通过保持在室温溶解，然后加入到上述溶液中并混合。然而，防腐剂、渗透增强剂、粘度剂和张度剂的加入顺序可以根据其类型和量而改变。如果需要，可以省去粘度剂、缓冲剂和防腐剂。在检查pH是否是4至8之后，如果需要，使用pH调节剂调节pH。施加另外的纯水以确保正确的体积。使溶液通过0.22μm或更小的过滤器以制备透明眼用组合物。
[表3]
实验实施例1：角膜渗透性测试
为了评估眼用组合物在角结膜中的渗透度，通过使用小型猪的角膜来测量渗透速率，该角膜是相对不易渗透的并且允许进行角膜渗透测试。通常，据报道与角膜相比，结膜是2-3倍更容易渗透。
通过使用垂直Franz扩散池装置进行对于根据比较例和实施例的眼用组合物的角膜渗透的体外测试。从称重为40至50kg的小型猪的眼睛收获用于测试的具有周围巩膜的角膜。为了将角膜固定在Franz扩散池中，将角膜区域仅暴露于受体室(receptor chamber)的中心。然后，覆盖供体室(donor chamber)并用接头固定。注意从受体室与角膜接触的区域去除空气。在pH 7.4下将5mL的磷酸盐溶液(PBS缓冲液)以及磁力搅拌器放入受体室中。将1mL的测试溶液放入供体室中，然后将其用盖子封闭并且用封口膜(parafilm)密封。在渗透性测试期间，搅拌器保持在约500rpm，Franz扩散池保持在36.5℃。在0.5、1、2、4和6小时，取200μL的每个样品并且补充相同量的磷酸盐溶液(PBS缓冲液)。使用HPLC分析仪器测量收集的样品中的药物浓度。将每个样品中测量的浓度换算为每次的渗透量，并且校正稀释剂的量以计算瑞可黄酮6小时的累积渗透量。通过使用小型猪角膜的体外渗透性测试的结果证实了实施例中包含的渗透增强剂增加了瑞可黄酮的累积渗透量。
将每个单独样品中每单位面积的累积渗透量与采样时间的平均值作图，并进行线性回归分析。等式的斜率计算为药物6小时的平均渗透速率(通量)。相对渗透增强比率计算为与比较例1相比每个实施例6小时的平均渗透速率的比率(参见等式1)。
[等式1]
通过上述方法，计算实施例1至3和比较例1和2的眼用组合物的平均累积渗透量和每单位角膜面积的平均渗透速率随时间的变化以及相对渗透增强比率，并且示于表4中。
参见表4，实施例1至3证实了与仅包含活性成分(如常规滴眼剂组合物)的比较例1相比，在相同药物浓度下，取决于存在或不存在渗透增强剂，药物的渗透是不同的。此外，实施例1证实了与比较例2相比，在相同组成下取决于瑞可黄酮的浓度增强了渗透。
此外，证实了具有较低浓度的瑞可黄酮但具有渗透增强剂的比较例2的渗透性高于比较例1的渗透性。
结果表明，实施例1具有27μg/cm2/hr的6小时平均渗透速率，因此与没有渗透增强剂的比较例1相比，相对渗透增强比率增加3.4倍。
在以下描述的实验实施例中也以比较方式评价了体内干眼症状的改善，并且结果示出实施例1的整体改善显著好于没有渗透增强剂的比较例1的整体改善。
因此，为了实现体内干眼症状的整体改善而不是简单地获得更好的实验室数据，已证实与不具有渗透增强剂的比较例1相比，在小型猪角膜中6小时的相对渗透增强比率应当优选地是3.0或更高，或累积渗透量应当优选地是130μg/cm2或更高。
[表4]
实验实施例2：泪液分泌
在实验性干眼小鼠模型中，评估了眼用组合物改善的角膜渗透对泪液分泌的影响。
将12至14周龄的NOD.B10.H2b小鼠(Jackson Laboratory,Bar Harbor,USA)适应7天，并且用0.5mg/0.2mL氢溴酸东莨菪碱皮下注射到后腿中，每天4次(上午8点、上午11点、下午2点、下午5点)，持续10天(在低于平均40％环境湿度的干燥应激下)。在检查干眼出现之后，以5μL的剂量将安慰剂(实施例1中不含活性成分的组合物)、比较例1和实施例1各自滴注到双眼中，每天四次，持续21天。
为了测量泪液体积，将酚红浸渍的棉线置于外眦(lateral canthus)中20秒。将吸收泪液的线长度转换成微升(μL)。
图2显示通过上述方法在实验性干眼小鼠模型中的泪分泌结果。具有增加的角膜渗透的实施例1改善了泪液体积，而包括与实施例1相同的5％(w/v)瑞可黄酮的比较例1显示出与安慰剂的泪液体积差异很小的泪液体积。
实验实施例3：角膜荧光素染色(CFS)
在实验性干眼小鼠模型中，评估了眼用组合物改善的角膜渗透对角膜荧光染色(CFS)的影响。
在实验实施例2相同条件下，将比较例3、比较例1以及实施例1滴注10天，并且将1μL的1％荧光素试剂施加至眼睛中以使角膜染色，并且用盐水洗涤眼睛。用数字狭缝灯拍摄图像以对上皮损伤程度(荧光染色程度)进行评分和评估。给出了对于角膜的每五个区域从1至3分的分数，并且将其相加。
图3显示角膜荧光染色(CFS)的结果作为通过上述方法改善干眼症的直接指数。实施例1显示角膜荧光染色(CFS)显著减少，这意味着干眼症状显著改善，而与安慰剂(比较例3)相比，比较例1未表现出改善。
实验实施例4：评估角膜表面不规则性
在实验性干眼小鼠模型中，评估了眼用组合物改善的角膜渗透对角膜表面不规则性的影响。
在实验实施例2相同条件下，将比较例3、比较例1和实施例1滴注10天。从立体显微镜(SZX7，Olympus)的光纤环照明器反射和获取角膜表面的白色环图像。在反射环中给出角膜表面不规则性分数：0点无变形；1点，在1/4环中有变形；2点，在2/4中有变形；3点，在3/4中有变形；4点，在所有4/4中有变形；5点，严重变形。
通过上述方法评价角膜表面不规则性以检查对角膜治愈的影响(图4)。实施例1显示角膜表面不规则性减少约30％，这表明干眼症状显著改善，而比较例1与作为安慰剂的比较例3没有显示出任何差异。
实验实施例5：角膜上皮细胞的脱离
在实验性干眼小鼠模型中，评估了眼用组合物改善的角膜渗透对角膜上皮细胞脱离的影响。
在实验实施例2相同条件下，将比较例3、比较例1以及实施例1滴注21天并且处死动物。
将手术切除的眼周区域和泪腺在10％福尔马林中固定3天，并且包埋在石蜡中。用显微镜薄片切片机(microtome)切割5μm组织并在载玻片上干燥1小时。通过苏木精-曙红(H&E)染色方法制备组织，并且通过虚拟显微镜(virtual microscope)(Nanozoomer2.0RS，Hamamatsu，Japan)在1mm2的角膜区域中评估脱离的上皮细胞。为了精确地比较干眼症状的改善程度，将刚好在干眼后给予药物之前的时间的眼组织完全诱导(初始)，并且将既不暴露于药物也不暴露于干环境应激持续10天的正常小鼠的眼组织(正常眼睛)一起比较。
图5示出了评估脱离的角膜上皮细胞的结果。虽然在正常眼睛中脱离的上皮细胞非常少，但是通过暴露于干眼诱导环境10天(初始)，脱离剧烈增加。虽然与作为安慰剂的比较例3相比，比较例1表现出明显改善，但是实施例1显示恢复至正常眼睛状态的更好结果，这表明脱离的上皮细胞有效地减少。
实验实施例6：结膜杯状细胞密度
在实验性干眼小鼠模型中，评估了眼用组合物改善的角膜渗透对用于黏液分泌的杯状细胞密度的影响。
在实验实施例5相同条件下，将石蜡包埋的组织切片并放置在载玻片上。根据PAS(高碘酸-席夫碱(Periodic-Acid-Schiff))试剂盒的说明书进行染色，并且通过虚拟显微镜(Nanozoomer 2.0RS，Hamamatsu，Japan)在1mm2的结膜区域中评估杯状细胞的密度。
图6示出了通过上述方法评估结膜杯状细胞密度的结果。与正常眼睛相比，通过暴露于干眼诱导环境10天初始的结膜杯状细胞显示出显著减少。作为安慰剂的比较例3显示结膜杯状细胞没有恢复。与安慰剂相比，比较例1表现出明显改善的效果，而实施例1显示出比比较例1进一步的改善，这表现出接近于正常眼睛水平的更好的恢复结果。
实验实施例7：粘蛋白的分布
在实验性干眼小鼠模型中，评估了眼用组合物改善的角膜渗透对粘蛋白(粘液的主要组分)分布的影响。
在实验实施例5相同条件下，将石蜡包埋的组织切片并放置在载玻片上。根据阿尔新蓝染色试剂盒(Alcian Blue Stain kit)的说明书进行染色，并且通过虚拟显微镜(Nanozoomer 2.0RS，Hamamatsu，Japan)在1mm2的角结膜区域中对其进行评估。
图7和图8示出了通过上述方法的粘蛋白分布。与正常眼睛相比，通过暴露于干眼诱导环境10天，初始的粘蛋白表现出显著减少。安慰剂显示没有粘蛋白恢复，粘蛋白是粘液的关键组分。与作为安慰剂的比较例3相比，比较例1表现出明显改善的效果，而实施例1表现出比比较例1进一步的改善，这表现出接近正常眼睛水平的更好的恢复结果。这些与实验实施例6中用于粘蛋白分泌的杯状细胞密度的结果一致。
实验实施例8：眼用组合物的临床研究
在纳入标准内，评估了包含5％(w/v)瑞可黄酮的眼用组合物(实施例5)在患有干眼症患者中的临床功效和安全性。它是多中心、随机、双盲、安慰剂对照、2期临床研究。具体地，在筛选在该临床研究的纳入标准内的患者后使用磨合期(run-in period)。将保持可接受水平的医药依从性的患者随机分成三组(安慰剂组，每天测试3次组，和每天测试6次组)。将三十三名受试者分配到每组中。通过每次给予1滴，每天3次或6次，持续最长达12周来评估功效和安全性。通过荧光素测量总角膜染色评分(TCSS)相对于基线的变化用于功效评估。此外，进行不良事件、生命体征、实验室测试、心电图和眼科测试以评估每次访问时的安全性。
表5和图10示出了作为主要疗效变量的总角膜染色评分(TCSS)的变化量。随着给药时间继续，与安慰剂组的差异倾向于增加。当以p＜0.05的水平进行t检验以验证这些组之间差异的显著性时，结果显示直到给药后第2周差异才显著，但在第8周，每天测试3次组和每天测试6次组均显示与安慰剂组显著差异。然而，在第2周和第8周，在每天测试3次组和每天测试6次组之间差异不显著。
基于以上临床研究的结果，评估了本发明的含有渗透增强剂的新的含有瑞可黄酮的眼用组合物以显示出对于人类干眼症的实际的和显著的改善，这不能由常规发明克服。
[表5]
安慰剂组 3次给药组 6次给药组
第2周 -1.36±1.80 -1.85±1.72 -1.91±2.69
第8周 -2.22±2.17 -3.45±1.95* -3.35±2.24*
*与安慰剂组显著不同的水平p＜0.05。
实验实施例9：评估眼用组合物的pH稳定性
在长期储存条件(25℃/60％RH)下评估实施例5的眼用溶液和安慰剂的pH，并且结果示于图11中。
尽管在实施例5中没有缓冲剂，在长期储存条件下在6至7的范围内pH是稳定的，该范围是初始pH，持续18个月，而不包含瑞可黄酮的安慰剂的pH显示出连续下降。
缓冲剂已经用于大多数滴眼剂以在产品的保质期期间维持稳定的物理化学性质，尤其是pH。最近，据建议缓冲剂可以引起一些问题。出人意料地，已证实了本发明的眼用组合物可以在长期储存条件(25℃/60％RH)下保持pH稳定，即使该组合物不包含缓冲剂(如果需要的话)。
如上所述，已详细描述了本发明的具体部分，并且对于相关领域的普通技术人员而言，该特定技术仅是优选实施方案，并且显然本发明的范围不限于此。因此，本发明的实质范围将由所附权利要求书及其等效物限定。

Claims (8)

1.一种用于治疗干眼症的眼用组合物，所述组合物包含5％(w/v)或更多的瑞可黄酮或其药学上可接受的盐、其水合物、酸酐或溶剂化物；
0.1％至5.0％(w/v)的量的渗透增强剂；以及
0.01％至1.0％(w/v)的量的张度剂。
2.根据权利要求1所述的用于治疗干眼症的眼用组合物，其中所述用于治疗干眼症的眼用组合物进一步包含粘度剂、缓冲剂、pH调节剂和防腐剂中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的用于治疗干眼症的眼用组合物，其中在Franz扩散池中在小型猪角膜中测量的瑞可黄酮6小时累积渗透量是130μg/cm2或更多，或与不包含渗透增强剂的眼用组合物相比是3倍或更多。
4.根据权利要求1所述的用于治疗干眼症的眼用组合物，其中所述渗透增强剂包含选自聚山梨醇酯、聚氧乙烯烷基醚、聚乙二醇115羟基硬脂酸酯、聚氧乙烯甘油酯、生育酚聚乙二醇琥珀酸酯、泊洛沙姆以及聚氧乙烯蓖麻油衍生物中的至少一种。
5.根据权利要求4所述的用于治疗干眼症的眼用组合物，其中所述渗透增强剂包括选自以下各项的至少一种：聚山梨醇酯80、聚氧乙烯10油基醚、solutolHS15、月桂酰基聚氧乙烯甘油酯、维生素E-TPGS、泊洛沙姆407以及聚氧乙烯35蓖麻油。
6.根据权利要求1所述的用于治疗干眼症的眼用组合物，其中所述张度剂包含选自由甘露醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇、麦芽糖、蔗糖、山梨醇、海藻糖和葡萄糖组成的非离子化合物或由氯化钠、硝酸钠和硝酸钾组成的离子化合物中的至少一种。
7.一种用于治疗干眼症的眼用组合物，所述组合物包含5％(w/v)或更多的瑞可黄酮或其药学上可接受的盐、其水合物、酸酐或溶剂化物；以及
0.1％至5.0％(w/v)的量的渗透增强剂；
每次给予1至2滴并且每天至少3次。
8.根据权利要求7所述的用于治疗干眼症的眼用组合物，其中所述眼用组合物每次给予1滴，每天3次至6次。
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