CN117730083A - 用作map4k1抑制剂的嘧啶化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用作MAP4K1抑制剂的式(I)的化合物及其药学上可接受的盐、它们的制备方法、包括该化合物的药物组合物以及该化合物或该组合物在治疗或预防由MAP4K1介导的各种疾病、病症和/或障碍中的用途。

Description

用作MAP4K1抑制剂的嘧啶化合物
相关申请的交叉引用
本申请要求于2021年7月6日提交的申请号为202121030204的印度临时专利申请的优先权，该专利通过引用的方式并入本文。
技术领域
本专利申请涉及用作MAP4K1抑制剂的嘧啶磷化合物。
背景技术
蛋白激酶代表一个大的蛋白质家族，在调节许多细胞过程中发挥各种关键作用。这类激酶包括Akt、Axl、AuroraA、Aurora B、DYRK2、EPHAa2、FGFR3、FLT-3、VEGFr3、IGFLr、IKK2、JNK3、VEGFr2、MEK1、MET、P70s6K、Plk1、RSK1、Src、TrkA、Zap70、cKit、bRaf、EGFR、Jak2、PI3K、NPM-Alk、c-Abl、BTK、FAK、PDGFR、TAK1、LimK、Flt1、PDK1、Erk和RON。抑制(特别是选择性抑制)各种蛋白激酶，已经成为治疗许多疾病和障碍的重要策略。
MAP4K1是Ste20家族的丝氨酸/苏氨酸激酶。MAP4K酶(MAP激酶激酶)一般在很大程度上线性的激酶活化途径的最高水平下参与。MAP4K将磷酸化并激活特定的底物，该底物为MAP3K(一种MAP激酶激酶)。MAP3K反过来磷酸化并激活MAP2K(一种MAP激酶激酶)。MAP2K反过来磷酸化并激活MAPK(MAP激酶)。MAP激酶是该途径的最终效应器，它反过来磷酸化底物以控制关键的细胞过程，如细胞增殖、细胞分化、基因表达、转录调节和细胞凋亡。MAPK的底物通常为一种核蛋白，如核因子κB(NF-кB)。通过MAP2K磷酸化激活MAPK，使得级联中的最后一种酶转移到细胞核中。
MAP4K1，也称为HPK1，主要在免疫系统的T细胞和B细胞中表达，这些细胞在免疫系统的调节中至关重要。T细胞和B细胞激活途径的过度刺激可导致自身免疫疾病，而这些途径的刺激不足可导致免疫功能障碍、对病毒和细菌感染的易感性以及对癌症的易感性增加。MAP4K1通过与活化的T细胞受体(TCR)和B细胞受体(BCR)的相互作用而被激活，因此MAP4K1的激活用于将细胞活化信号从T或B细胞表面传递到细胞核中的效应蛋白。也有证据表明，MAP4K1可以通过TGF-β受体、红细胞生成素受体和FAS蛋白(参与细胞凋亡信号传导(signaling))被激活。MAP4K1的激活最终导致几种已鉴定的核效应蛋白的激活，包括那些参与NF-κ1、AP-1、ERK2和Fos信号传导途径的蛋白。
MAP4K1被认为是T细胞受体(TCR)激活信号的负调节因子，是暴露于前列腺素E2(PGE2)后介导T细胞反应免疫抑制的效应分子之一。研究表明，MAPK1活性抑制了T细胞受体信号转导(signal transduction)级联的强度，因此，MAP4K1的靶向遗传破坏导致TCR激活信号增强。
MAP4K1似乎参与的一个特别重要的途径是JNK途径。MAP4K1调节MAP3K的MEKK1、TAK1和MLK3。这些反过来调节MAP2K的MKK4和MKK7。这些反过来调节MAPK JNK。然后JNK调节重要的转录因子和其他蛋白质，包括p53、SMAD4、NFAT-2、NFAT-4、ELK1、ATF2、HSF1、c-Jun和JunD。JNK与细胞凋亡、神经退行性变、细胞分化和增殖、炎症状态和细胞因子产生有关。
JNK信号转导途径响应环境应激并通过几类细胞表面受体(包括细胞因子受体、蛇形受体和受体酪氨酸激酶)的参与而被激活。在哺乳动物细胞中，JNK途径与生物学过程(如致癌转化和介导对环境应激的适应性反应)有关。JNK还与调节免疫反应(包括免疫细胞的成熟和分化，以及在被免疫系统鉴定为破坏的细胞中实现细胞程序性死亡)有关。在几种神经障碍中，JNK信号传导尤其与缺血性中风和帕金森病有关，但也与下文进一步提及的其他疾病有关。
值得注意的是，MAPKp38α示出通过拮抗JNK-c-Jun-途径来抑制细胞增殖。p38α似乎在抑制正常细胞和癌症细胞的增殖中具有活性，并且这强烈地表明JNK参与过度增殖性疾病(参见，例如，Hui等人，Nature Genetics，第39卷，第6期，2007年6月)。JNK信号传导还与诸如海马神经元兴奋性毒性、肝脏缺血、再灌注、神经退行性疾病、听力损失、耳聋、神经管先天缺陷、癌症、慢性炎症性疾病、肥胖症、糖尿病、特别是胰岛素抗性糖尿病等疾病有关，并且已经提出需要选择性JNK抑制剂用于治疗具有高度特异性和缺乏毒性的各种疾病。
因为MAP4K1为JNK的上游调节剂，所以MAP4K1的有效抑制剂将可用于治疗已经建议或暗示用JNK抑制剂的相同疾病，特别是当这种疾病或功能障碍表现在造血细胞(如T细胞和B细胞)中时。
MAP4K1(HPK1)等位基因的靶向破坏已被证明可使T细胞在应答TCR时产生升高的Th1细胞因子。Burakoff等人，ImmunologicResearch，54(1)：262-265(2012)。发现HPK1-/-T细胞比单倍型匹配的野生型(haplotype-matched wild-type)细胞增殖更快，并且对前列腺素E2(PGE2)介导的抑制有抗性。最显著地，接受HPK1-/-T细胞过继转移的小鼠对肺肿瘤生长产生了抗性。此外，树突细胞(DC)中HPK1的缺失赋予了它们优越的抗原呈递能力，使HPK1-/-DC在用作癌症疫苗时能够引发更有效的抗肿瘤免疫反应。人们认为，用小分子抑制剂阻断MAP4K1激酶活性可能会激活两种细胞类型的优越抗肿瘤活性，从而协同放大抗肿瘤潜力。鉴于MAP4K1不在任何主要器官中表达，MAP4K1的选择性抑制剂不太可能引起任何严重的副作用。
MAP4K1和PGE2之间的关系特别值得注意，因为PGE2为癌细胞(包括肺癌、结肠癌和乳腺癌细胞)释放的主要类花生酸产物。已知肿瘤产生的PGE2显著促进肿瘤介导的免疫抑制。
张等人，J.Autoimmunity，37:180-189(2011)，描述了由于与HPK1基因座结合的JMJD3组蛋白去甲基化酶的选择性缺失，狼疮患者CD4 T细胞中HPK1表达减少。这表明HPK1是参与维持外周耐受的关键分子之一。外周耐受是发展有效抗肿瘤免疫的主要障碍之一。
已经报道了几种MAP4K1的小分子抑制剂，但是它们不能选择性地或者甚至优先地抑制MAP4K1。这些抑制剂包括星形孢菌素、博苏替尼、舒尼替尼、来他替尼、克唑替尼、福瑞替尼、多韦替尼和KW-2449。例如，星形孢菌素广泛抑制丝氨酸/苏氨酸和酪氨酸激酶家族中的多种蛋白激酶。博苏替尼主要为酪氨酸激酶BCR-Abl的抑制剂，具有抗Src家族酪氨酸激酶的额外活性。舒尼替尼为一种广泛的酪氨酸激酶抑制剂。来他替尼主要为FLT、JAK和TRK家族酪氨酸激酶的抑制剂。克唑替尼主要为c-met和ALK酪氨酸激酶的抑制剂。目前正在研究福瑞替尼作为c-Met和VEGFR酪氨酸激酶的抑制剂。多维替尼主要为FGFR受体酪氨酸激酶的抑制剂。KW-2449是一种主要针对FLT3酪氨酸激酶的实验性抑制剂。
舒尼替尼在纳摩尔浓度下抑制MAP4K1，但它是一种广谱受体酪氨酸激酶抑制剂。用舒尼替尼处理T细胞会产生增强的细胞因子产物，类似于用HPK1-/-T细胞处理观察到的结果，这表明在T细胞中，选择性MAP4K1抑制剂可以产生相同的增强的免疫反应表型。
目前，对治疗与蛋白激酶信号传导中断相关的疾病和障碍的有效方法的需求在很大程度上没有得到满足。自身免疫性疾病、炎症性疾病、神经和神经退行性疾病、癌症、心血管疾病、过敏和哮喘都是可受功能障碍的蛋白激酶信号传导影响的疾病和障碍。迫切需要用于治疗这些疾病和病症的改进的治疗化合物、组合物和方法。MAP4K1抑制是癌症免疫治疗的一个特别理想的靶点。
该领域目前面临的主要挑战是缺乏MAP4K1特异性抑制剂。本发明提供了新型的、高效的MAP4K1小分子抑制剂。
发明内容
一方面，本发明涉及式(I)的化合物，或其互变异构体、其立体异构体或其药学上可接受的盐，
其中
R1选自氯和-CONH2；
L选自
p和q为连接点；
Rc选自C1-8烷基；
选自
环A选自
式(I)的化合物可以涉及一个或多个实施方案。应当理解，以下实施方案是对本发明的说明，并不旨在将权利要求限制为所列举的具体实施方案。还应理解的是，本文定义的实施方案可以独立使用或与本文定义的任何定义、任何其他实施方案结合使用。因此，本发明考虑了各种独立描述的实施方案的所有可能的组合和排列。例如，本发明提供如上定义的式(I)的化合物，其中R1为氯(根据下文定义的实施方案)，R1为-CONH2(根据下文定义的另一个实施方案)并且Rc为甲基(根据下文定义的又一个实施方案)。
根据一个实施方案，具体提供了式(I)的化合物，其中R1为氯。
根据另一个实施方案，具体提供了式(I)的化合物，其中R1为-CONH2。
根据又一个实施方案，具体提供了式(I)的化合物，其中
/>
根据又一个实施方案，具体提供了式(I)的化合物，其中L为
根据又一个实施方案，具体提供了式(I)的化合物，其中L为
根据又一个实施方案，具体提供了式(I)的化合物，其中L为在该实施方案中，Rc为甲基。
根据又一个实施方案，具体提供了式(I)的化合物，其中L为
根据又一个实施方案，具体提供了式(I)的化合物，其中环A为
/>
/>
/>
根据又一个实施方案，具体提供了式(I)的化合物，其中R1为氯；
L为
且环A为
根据又一个实施方案，具体提供了式(I)的化合物，其中R1为氯；
L为
为/>且环A为
根据又一个实施方案，具体提供了式(I)的化合物，其中R1为氯；
L为
为/>且环A为
/>
根据又一个实施方案，具体提供了式(I)的化合物，其中R1为氯；
/>
L为且环A为/>
/>
/>
根据一个实施方案，具体提供了式(I)的化合物，其相对于MAP4K1抑制具有小于500nM、优选小于100nM、更优选小于50nM的IC50值。
本发明的化合物包括实施例1-61中的化合物。应当理解，式(I)在结构上包括所有几何异构体、立体异构体、对映异构体和非对映异构体、N-氧化物和药学上可接受的盐，可以从本文所述种类的化学结构中考虑。
本申请还提供了一种药物组合物，其包括至少一种本文所述的化合物和至少一种药学上可接受的赋形剂(例如药学上可接受的载体或稀释剂)。优选地，药物组合物包括治疗有效量的至少一种本文所述的化合物。本文所述的化合物可以与药学上可接受的赋形剂(例如载体或稀释剂)结合，或者被载体稀释，或者被封装在载体中，载体可以是片剂、胶囊、小袋或其他容器的形式。
包括本发明化合物的药物组合物可以使用本领域已知的常规稀释剂或赋形剂和技术来制备。
具体实施方式
定义：
术语“卤素(halogen)”或“卤代(halo)”是指氟(fluorine)(氟代(fluoro))、氯(chlorine)(氯代(chloro))、溴(bromine)(溴代(bromo))或碘(iodine)(碘代(iodo))。
术语“烷基(alkyl)”是指在主链中仅包括碳和氢原子，不含不饱和，具有1个至8个碳原子(即C1-8烷基)，并且通过单键连接到分子的其余部分的烷烃链自由基，例如但不限于甲基、乙基、正丙基、1-甲基乙基(异丙基)、正丁基、正戊基和1,1-二甲基乙基(叔丁基)。术语“C1-6烷基(C1-6alkyl)”是指具有1个至6个碳原子的烷基链。术语“C1-4烷基(C1-4alkyl)”是指具有1个至4个碳原子的烷基链。除非有相反的陈述或叙述，本文描述或要求保护的所有烷基基团可以为直链或支链的。
术语“卤代烷基(haloalkyl)”是指至少一个卤代基团(选自F、Cl、Br或I)连接到如上定义的烷基基团(即卤代C1-8烷基(haloC1-8alkyl))。这种卤代烷基部分的实例包括但不限于三氟甲基、二氟甲基和氟甲基基团。术语“卤代C1-4烷基(haloC1-4alkyl)”是指至少一个连接到具有1个至4个碳原子的烷基链上的卤代基团。除非有相反的陈述或叙述，本文描述的所有卤代烷基基团可以为直链或支链的。
术语“氘代C1-8烷基(deuterated C1-8alkyl)”是指如上定义的C1-8烷基基团，其中碳原子上的一个至三个氢原子被一个或多个氘原子取代。
术语“烷氧基(alkoxy)”表示通过氧键连接到分子其余部分的烷基基团(即C1-8烷氧基(C1-8 alkoxy))。这类基团的代表性实例为-OCH3和-OC2H5。除非有相反的陈述或叙述，本文描述或要求保护的所有烷氧基基团可以为直链或支链的。
术语“卤代烷氧基(haloalkoxy)”是指被一个或多个卤素原子取代的烷氧基基团(即卤代C1-8烷氧基(haloC1-8alkoxy))。“卤代烷氧基(haloalkoxy)”的实例包括但不限于氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、2,2,2-三氟乙氧基、五氟乙氧基、五氯乙氧基、氯甲氧基、二氯甲氧基、三氯甲氧基和1-溴乙氧基。除非有相反的陈述或叙述，本文所述的所有卤代烷氧基基团可以为直链或支链的。
术语“烷氧基烷基(alkoxyalkyl)”或“烷氧基烷基(alkyloxyalkyl)”是指如上定义的烷氧基(alkoxy)或烷氧基基团(alkyloxy group)直接键合到如上定义的烷基基团上(即C1-8烷氧基C1-8烷基(C1-8alkoxyC1-8alkyl)或C1-8烷氧基C1-8烷基(C1-8alkyloxyC1-8alkyl))。这种烷氧基烷基部分的实例包括但不限于，-CH2OCH3(甲氧基甲基)和-CH2OC2H5(乙氧基甲基)。除非有相反的陈述或叙述，本文所述的所有烷氧基烷基基团可以为直链或支链的。
术语“氘代C1-8烷氧基(deuterated C1-8alkoxy)”是指如上定义的C1-8烷氧基基团，其中碳原子上的一个至三个氢原子被一个或多个氘原子取代。
术语“羟基C1-8烷基(hydroxyC1-8alkyl)”是指如上定义的C1-8烷基基团，其中不同碳原子上的一个至三个氢原子被羟基基团取代(即羟基C1-4烷基)。羟基C1-4烷基部分的实例包括但不限于-CH2OH和-C2H4OH。
术语“环烷基(cycloalkyl)”表示3个至约12个碳原子的非芳族单环或多环体系(即C3-12环烷基(C3-12cycloalkyl))。单环环烷基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基和环己基。多环环烷基基团的实例包括但不限于全氢萘基、金刚烷基和降冰片基团、桥接环基团或螺二环基团，例如螺(4,4)壬-2-基。术语“C3-6环烷基(C3-6cycloalkyl)”是指具有3个至6个碳原子的环状环。“C3-6环烷基(C3-6cycloalkyl)”的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基或环己基。
术语“环烷基烷基(cycloalkylalkyl)”是指直接连接到烷基基团上的具有3个至约6个碳原子的含环状环基(即C3-6环烷基C1-8烷基(C3-6cycloalkylC1-8alkyl))。环烷基烷基基团可以在烷基基团中的任何碳原子处连接到主结构上，从而产生稳定的结构。这些基团的非限制性实例包括环丙基甲基、环丁基乙基和环戊基乙基。
术语“芳基(aryl)”是指具有6个至14个碳原子的芳族基(即C6-14芳基(C6-14aryl))，包括单环、双环和三环芳族体系，例如苯基、萘基、四氢萘基、茚满基和联苯基。
除非另有说明，否则术语“杂环(heterocyclic ring)”或“杂环基(heterocyclyl)”是指由碳原子和一个至五个选自氮、磷、氧和硫的杂原子组成的取代或未取代的非芳族3元至15元环基团(即3元至15元杂环基)。杂环基团可以为单环、双环或三环体系，其可以包括稠环、桥环或螺环体系，并且杂环基团中的氮、磷、碳、氧或硫原子可以任选地被氧化成各种氧化态。此外，氮原子可以任选地季铵化；此外，除非定义另有限制，否则杂环或杂环基可任选含有一个或多个烯键。这种杂环基团的实例包括但不限于氮杂环庚三烯基(azepinyl)、氮杂环丁烷基(azetidinyl)、苯并二氧杂环戊烯基(benzodioxolyl)、苯并二氧杂环己烷基(benzodioxanyl)、色满基(chromanyl)、二氧戊环基(dioxolanyl)、二氧杂磷杂环戊烷基(dioxaphospholanyl)、十氢异喹啉基(dioxaphospholanyl)、茚满基(indanyl)、吲哚啉基(indolinyl)、异吲哚啉基(isoindolinyl)、异色满基(isochromanyl)、异噻唑烷基(isothiazolidinyl)、异噁唑烷基(isoxazolidinyl)、吗啉基(morpholinyl)、噁唑啉基(oxazolinyl)、噁唑烷基(oxazolidinyl)、2-氧代哌嗪基(2-oxopiperazinyl)、2-氧代哌啶基(2-oxopiperidinyl)、2-氧代吡咯烷基(2-oxopyrrolidinyl)、2-氧代氮杂环庚三烯基(2-oxoazepinyl)、八氢吲哚基(octahydroindolyl)、八氢异吲哚基(octahydroisoindolyl)、全氢氮杂环庚三烯基(perhydroazepinyl)、哌嗪基(piperazinyl)、4-哌啶酮基(4-piperidonyl)、吡咯啶基(pyrrolidinyl)、哌啶基(piperidinyl)，吩噻嗪基(phenothiazinyl)、吩噁嗪基(phenoxazinyl)、奎宁环基(quinuclidinyl)、四氢异喹啉基(tetrahydroisquinolyl)、四氢呋喃基(tetrahydrofuryl)或四氢呋喃基(tetrahydrofuranyl)、四氢吡喃基(tetrahydropyranyl)、噻唑啉基(thiazolinyl)、四氢噻唑基(thiazolidinyl)、硫代吗啉基(thiamorpholinyl)、硫代吗啉亚砜(thiamorpholinyl sulfoxide)和硫代吗啉砜(thiamorpholinyl sulfone)。杂环基团可以在任何杂原子或碳原子处连接到主结构上，从而产生稳定的结构。
术语“杂环基烷基(heterocyclylalkyl)”是指直接键合到烷基上的杂环基基团(即3元至15元杂环基C1-8烷基(heterocyclylC1-8alkyl))。20杂环基烷基基团可以在烷基中的任何碳原子处连接到主结构上，从而产生稳定的结构。
除非另有说明，否则术语“杂芳基(heteroaryl)”是指具有一个或多个独立选自N、O或S的杂原子的5元至14元芳族杂环基团(即5元至14元杂芳基)。杂芳基可以为单环、双环或三环体系。杂芳基环基团可以在任何杂原子或碳原子处连接到主结构上，从而产生稳定的结构。这种杂芳基环基团的实例包括但不限于噁唑基(oxazolyl)、异噁唑基(isoxazolyl)、咪唑基(imidazolyl)、呋喃基(furyl)、吲哚基(indolyl)、异吲哚基(isoindolyl)、吡咯基(pyrrolyl)、三唑基(triazolyl)、三嗪基(triazinyl)、四唑基(tetrazoyl)、噻吩基(thienyl)、噁二唑基(oxadiazolyl)、噻唑基(thiazolyl)、异噻唑基(isothiazolyl)、吡啶基(pyridyl)、嘧啶基(pyrimidinyl)、吡嗪基(pyrazinyl)、哒嗪基(pyridazinyl)、吡唑基(pyrazolyl)、苯并呋喃基(benzofuranyl)、苯并噻唑基(benzothiazolyl)、苯并噁唑基(benzoxazolyl)、苯并咪唑基(benzimidazolyl)、苯并噻吩基(benzothienyl)、苯并吡喃基(benzopyranyl)、咔唑基(carbazolyl)、喹啉基(quinolinyl)、异喹啉基(isoquinolinyl)、喹唑啉基(quinazolinyl)、噌啉基(cinnolinyl)、萘啶基(naphthyridinyl)、蝶啶基(pteridinyl)、嘌呤基(purinyl)、喹喔啉基(quinoxalinyl)、喹啉基(quinolyl)、异喹啉基(isoquinolyl)，噻二唑基(thiadiazolyl)、吲哚嗪基(indolizinyl)、吖啶基(acridinyl)、吩嗪基(phenazinyl)和酞嗪基(phthalazinyl)。
术语“药学上可接受的盐(pharmaceutically acceptable salt)”包括由药学上可接受的碱或酸(包括无机或有机碱和无机或有机酸)制备的盐。这种盐的实例包括但不限于乙酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、碳酸氢盐、硫酸氢盐、酒石酸氢盐、硼酸盐、溴化物(bromide)、樟脑磺酸盐(camsylate)、碳酸盐、氯化物、克拉维酸(clavulanate)、柠檬酸盐、二盐酸盐、乙二胺四乙酸盐(edetate)、乙二磺酸盐(edisylate)、丙酸酯十二烷基硫酸盐(estolate)、乙磺酸盐(esylate)、富马酸盐、葡庚糖酸盐(gluceptate)、葡萄糖酸盐、谷氨酸盐、对羟乙酰氨基苯胂酸盐(glycollylarsanilate)、己基间苯二酚盐(hexylresorcinate)、海巴明(hydrabamine)、氢溴酸盐(hydrobromide)、盐酸盐、羟基萘甲酸盐(hydroxynaphthoate)、碘化物(iodide)、异拌磷(isothionate)、乳酸盐、乳糖酸盐、月桂酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基溴化物、甲基硝酸盐、甲基硫酸盐、粘液酸盐(mucate)、萘磺酸盐、硝酸盐、N-甲基葡糖胺铵盐(N-methylglucamine ammoniumsalt)、油酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐(pamoate)(双羟萘酸盐(embonate))、棕榈酸盐、泛酸盐、磷酸盐、二磷酸盐、聚半乳糖醛酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、硫酸盐、碱式乙酸盐(subacetate)、琥珀酸盐、单宁酸盐(tannate)、酒石酸盐、8-氯茶碱盐(teoclate)、甲苯磺酸盐(tosylate)，三乙基碘化物(triethiodide)和戊酸盐(valerate)。衍生自无机碱的盐的实例包括但不限于铝、铵、钙、铜、铁、亚铁、锂、镁、三价锰(manganic)、锰、钾、钠和锌。
一种状态、障碍或病症的术语“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”包括：(a)预防或延缓受试者出现该状态、障碍和病症的临床症状，该受试者可能患有或易患该状态、障碍或病症，但尚未经历或表现出该状态、障碍或病症的临床或亚临床症状；(b)抑制状态、障碍或病症，即阻止或减少疾病或其至少一种临床或亚临床症状的发展；或(c)缓解疾病，即引起状态、障碍或病症或其临床或亚临床症状中的至少一种的消退。
术语“受试者(subject)”包括哺乳动物(尤其是人类)和其他动物，例如家畜(例如，包括猫和狗的家庭宠物)和非家畜(例如野生动物)。
“治疗有效量(therapeutically effective amount)”是指当给药受试者用于治疗某种状态、障碍或病症时，足以实现这种治疗的化合物的量。“治疗有效量”将根据化合物、疾病及其严重程度以及待治疗受试者的年龄、体重、身体状况和反应性而有所不同。
式(I)的化合物可含有不对称或手性中心，因此以不同的立体异构形式存在。旨在使式(I)的化合物的所有立体异构形式及其混合物(包括外消旋混合物)构成本发明的一部分。此外，本发明包括所有的几何异构体和位置异构体。非对映异构体混合物可以基于它们的物理化学差异，通过本领域技术人员熟知的方法(例如通过色谱法和/或分级结晶)分离成它们各自的非对映异构体。通过与适当的光学活性化合物(例如手性助剂，如手性醇或Mosher酰氯)反应，将对映异构体混合物转化为非对映异构混合物，分离非对映异构体，并将单个非对映异构体转化(例如水解)为相应的纯对映异构体，可以分离对映异构体。对映异构体也可以通过使用手性HPLC柱来分离。本发明的手性中心可以具有如IUPAC 1974所定义的S或R构型。
术语“盐(salt)”或“溶剂化物(solvate)”等旨在同样适用于本发明化合物的对映异构体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、位置异构体或外消旋体的盐、溶剂化物和前药。
药物组合物
本发明的化合物通常以药物组合物的形式给药。这样的组合物可以使用药学领域熟知的方法制备，并且包括至少一种本发明的化合物。本文所述的药物组合物包括一种或多种本文所述化合物和一种或多种药学上可接受的赋形剂。
治疗方法
本文所述的式(I)的化合物是MAP4K1激酶的高效抑制剂，在纳摩尔浓度下产生抑制作用。因此，本发明的MAP4K1抑制剂可用于治疗和预防与蛋白激酶信号传导功能障碍相关的疾病。因此，在不受任何理论的情况下，据信MAP4K1的抑制可以例如逆转或防止与JNK信号传导途径的扰动相关的细胞功能障碍，特别是在T和B细胞中。因此，本文所述的MAP4K1抑制剂的给药可以提供调节MAPK信号转导途径，特别是JNK途径的潜在方法，并进而提供对多种疾病和障碍的治疗，包括自身免疫性、神经退行性、神经、炎症性、过度增殖性和心血管疾病和障碍。
此外，在不受理论约束的情况下，由本发明化合物提供的选择性MAP4K1抑制可以提供癌症治疗的新方法。传统的信号转导策略涉及干扰促进肿瘤细胞增殖或转移的途径。相反，本发明提供了一种增强身体T细胞的活性和有效性的方法，例如，克服许多癌症使用的免疫抑制策略。美国食品药物监督管理局(FDA)最近批准了一些基于单克隆抗体的治疗方法，这些方法通过干扰促进TCR活性抑制的T细胞表面受体(例如，抗CTLA-4和抗PD-1抗体，分别以Ipilimumab和Pembrolizumab的名字市售)来获得相同的结果。治疗的成功证明了通过干扰抑制TCR信号传导的途径可以有效治疗癌症的概念。使用MAP4K1的小分子抑制剂靶向这些途径，使用更方便患者的给药技术应该会产生更好的结果。
因此，在第三方面，本发明提供了用于治疗或预防疾病或障碍的方法，该疾病或病症可通过调节(例如抑制)MAP4K1依赖性信号传导途径(包括JNK途径)来改善，该疾病或障碍例如为自身免疫性、神经退行性、神经、炎症性、过度增殖性和心血管疾病和障碍，该方法包括向有此需要的患者施用有效量的本文所述的游离或药学上可接受的盐形式的式(I)的化合物。
在特定的实施方案中，施用本发明的化合物导致增强的T细胞受体(TCR)信号传导，例如导致增强的T细胞介导的免疫反应(例如，增加了T细胞细胞因子的产生)。
在其它特定的实施方案中，施用本发明的化合物导致T细胞对PGE2介导的T细胞抑制的抗性增加。
在某些实施方案中，待治疗的疾病或障碍也可能与受损的MAP4K1依赖性信号传导有关。受损的MAP4K1信号传导可导致免疫细胞(例如T和B细胞)功能降低，这可允许或增强新生癌细胞逃避免疫监视。因此，通过用MAP4K1抑制剂治疗来恢复T和B细胞功能可以促进从体内清除致癌和致癌前细胞。因此，在一个具体的实施方案中，本发明提供了治疗或预防过度增殖性疾病，如癌症的方法。
一般制备方法
本文所述的化合物，包括通式(I)的化合物、中间体和通过合成方案1-15中所述的合成方法制备的具体实例。此外，在以下方案中，当提到特定的酸、碱、试剂、偶联试剂、溶剂等时，应当理解，可以使用其他合适的酸、碱、试剂、偶联试剂、溶剂等，并且这些都包括在本发明的范围内。对反应条件的修改，例如温度、反应持续时间或其组合，被认为是本发明的一部分。使用一般反应顺序所得化合物可能纯度不足。这些化合物可以使用本领域技术人员已知的任何纯化有机化合物的方法进行纯化，例如使用合适比例的不同溶剂的结晶或硅胶或氧化铝柱色谱法。所有可能的几何异构体和立体异构体都在本发明的范围内。
总体方案
制备式(I(a-c))化合物(其中X1、X2、X3为CH或N；X5为CH或N；R3为氢、C1-8烷基、氘代C1-8烷基，卤代C1-8烷基或3-15元杂环基；R6为C1-8烷基、氘代C1-8烷基或卤代C1-8烷基；R7为氢、氧代、氘或C1-8烷基且R1如一般描述中所定义)的一般方法被描述在合成方案1中。
合成方案1
在合适的碱存在下，式(1)的二卤代嘧啶(其中X为卤素)与式(2)的氨基苯基氧化膦的取代反应产生式(3)化合物。该反应可以在合适的碱(如二异丙基乙胺)的存在下和合适的溶剂(如异丙醇)的存在下进行。在作为催化剂的对甲苯磺酸和溶剂(如异丙醇)的存在下，式(3)化合物与式(4)化合物的取代的异喹啉在密封管中在高温下反应，得到式(5)化合物。在碱(如DBU)的存在下，式(5)化合物与作为氟代硫酸化试剂的AISF反应，得到式(I-a)氟硫酸酯化衍生物。用无机酸(如盐酸)处理式(I-a)化合物，得到式(I-b)化合物。或者，用无机酸如盐酸处理式(5)化合物，得到式(I-c)化合物。
制备式(Id)化合物(其中R1如一般描述中所定义)的一般方法被描述在合成方案2中。
合成方案2
在合适的碱存在下，式(1)的二卤代嘧啶(其中X为卤素)与式(6)的氨基苯基氧化膦的取代反应产生式(7)化合物。该反应可以在合适的碱(如二异丙基乙胺)的存在下和合适的溶剂(如异丙醇)的存在下进行。在作为催化剂的对甲苯磺酸和溶剂(如异丙醇)的存在下，式(7)化合物与式(4)化合物的取代的异喹啉(其中R6为C1-8烷基、氘化C1-8烷基或卤代C1-8烷基)在高温下反应，得到式(8)化合物。在三甲基氯硅烷和碘化钠以及合适的溶剂(如乙腈)存在下，式(8)化合物的选择性O-脱甲基化产生式(9)化合物。在碱(如DBU)的存在下，式(9)化合物与作为氟硫酸化试剂的AISF反应，产生式(I-d)化合物。
制备式(I-e)化合物(其中R6为C1-8烷基、氘代C1-8烷基或卤代C1-8烷基；R7为氢、氧代、氘或C1-8烷基且R1如一般描述中所定义)的一般方法被描述在合成方案3中。
合成方案3
在作为催化剂的对甲苯磺酸和合适的溶剂(如异丙醇)的存在下，式(3)的卤代嘧啶(其中X为卤素)与式(4)化合物的取代的异喹啉在高温下的取代反应得到式(11)化合物。式(10)化合物的胺保护通过在合适的碱和溶剂存在下用二碳酸二叔丁酯处理来进行，产生式(11)化合物。该反应可以在合适的碱(如氢氧化钠或氢氧化钾)的存在下和合适的溶剂(如甲醇、乙醇、异丙醇)的存在下进行。在碱(如DBU)的存在下，式(12)化合物与作为氟硫酸化试剂的AISF反应，得到式(12)的氟硫酸酯化衍生物。用无机酸(如盐酸)处理式(12)化合物，得到式(I-e)化合物。
制备式(I-f)化合物(其中R1如一般描述中所定义)的一般方法被描述在合成方案4中。
合成方案4
在合适的碱存在下，式(1)的二卤代嘧啶(其中X为卤素)与式(13)的氨基苯基氧化膦的取代反应产生式(14)化合物。偶联反应可以在合适的碱(如二异丙基乙胺)的存在下和合适的溶剂(如异丙醇)的存在下进行。在合适的二膦配体、碱、催化剂和溶剂存在下，式(14)化合物与合适的取代氨基吡咯并吡唑boc保护的式(15)化合物偶联，产生式(16)化合物。反应中使用的合适的碱可以为乙酸钾、叔丁醇钠或钾、碳酸钠、碳酸铯等，合适的二膦配体，如4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽。反应中使用的合适的钯催化剂可以为乙酸钯。偶联反应可以在合适的极性溶剂或其混合物中进行。合适的溶剂可以选自1,4-二噁烷、二甲基亚砜(DMSO)、水或其组合。使用10％碳载钯进行式(16)化合物的脱苄基反应，得到式(17)化合物。在碱(如DBU)的存在下，式(17)的化合物与作为氟硫酸化试剂的AISF反应，得到式(18)的boc保护的氟硫酸酯化衍生物，其用HCl二噁烷去保护时得到式(I-f)化合物。
制备式(Ig)的化合物(其中R6为C1-8烷基、氘代C1-8烷基或卤代C1-8烷基；R7为氢、氧代、氘或C1-8烷基且R1如一般描述中所定义)的一般方法被描述在合成方案5中。
合成方案5
在合适的碱存在下，式(1)的二卤代嘧啶(其中X为卤素)与式(19)的氨基苯基氧化膦的取代反应产生式(20)化合物。该反应可以在合适的碱(如二异丙基乙胺)的存在下和合适的溶剂(如异丙醇)的存在下进行。在合适的二膦配体、碱、催化剂和溶剂存在下，式(20)化合物与合适的式(4)的取代的异喹啉保护化合物偶联，产生式(21)化合物。反应中使用的合适的碱可以为乙酸钾、叔丁醇钠或钾、碳酸钠、碳酸铯等，合适的二膦配体，如4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽。反应中使用的合适的钯催化剂可以为三(二亚苄基丙酮)二钯(0)，乙酸钯。取代反应可以在合适的极性溶剂或其混合物中进行。合适的溶剂可以选自1,4-二噁烷、DMSO、水或其组合。用无机酸(如盐酸)处理式(21)化合物，得到去保护的式(22)化合物。在碱(如三乙胺)和溶剂(如二氯甲烷)的存在下，式(22)化合物与1-(氟磺酰基)-2,3-二甲基-1H-咪唑-3-鎓三氟甲磺酸盐反应，产生式(23)化合物。用无机酸(如盐酸)处理式(23)化合物，得到式(I-g)化合物。
制备式(I-h)化合物(其中R4为氢、卤代C1-8烷基、C1-8烷基C1-8烷氧基或3-15元杂环基；R6为C1-8烷基、氘代C1-8烷基或卤代C1-8烷基且R1如一般描述中所定义)的一般方法被描述在合成方案6中。
合成方案6
在合适的碱存在下，式(1)的二卤代嘧啶(其中X为卤素)与式(24)的氨基苯基氧化膦的取代反应产生式(25)化合物。偶联可以在合适的碱(如二异丙基乙胺)的存在下和合适的溶剂(如异丙醇)的存在下进行。在合适的二膦配体、碱、催化剂和溶剂存在下，式(25)化合物与合适的式(4)化合物的取代的异喹啉胺偶联，产生式(I-h)化合物。反应中使用的合适的碱可以为乙酸钾、叔丁醇钠或钾、碳酸钠、碳酸铯等，合适的二膦配体，如4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽。反应中使用的合适的钯催化剂可以为三乙酸钯。偶联反应可以在合适的极性溶剂或其混合物中进行。合适的溶剂可以选自1,4-二噁烷、DMSO、水或其组合。
制备式(I-i)化合物(其中R4为氢、卤代C1-8烷基、C1-8烷基C1-8烷氧基或3-15元杂环基；R6为C1-8烷基、氘代C1-8烷基或卤代C1-8烷基且R1如一般描述中所定义)的一般方法被描述在合成方案7中。
合成方案7
在碱(如叔丁醇钠或钾、碳酸钠、碳酸钾、氢化钠、碳酸铯)的存在下，式(9)化合物与式(26)化合物的合适的烷基化试剂在溶剂(如二甲基甲酰胺(DMF))中进行O-烷基化产生式(I-i)化合物。
制备式(I-j)化合物(其中R6为C1-8烷基、氘代C1-8烷基或卤代C1-8烷基；Rx为C1-8烷基；Ry为卤代C1-8烷基且R1如一般描述中所定义)的一般方法被描述在合成方案8中。
合成方案8
在合适的碱存在下，式(1)的二卤代嘧啶(其中X为卤素)与式(27)的氨基苯基氧化膦的取代反应产生式(28)化合物。偶联反应可以在合适的碱(如氢化钠(60％)、二异丙基乙胺)和合适的溶剂(如二甲基甲酰胺、异丙醇)的存在下进行。在作为催化剂的对甲苯磺酸和溶剂(如异丙醇)的存在下，式(28)化合物与式(4)化合物的取代的异喹啉(其中R6为-CH3、-CD3或-CHF2)在密封管中在高温下偶联，得到式(I-j)化合物。
制备式(I-k)化合物(其中R6为C1-8烷基、氘代C1-8烷基或卤代C1-8烷基；Rx为C1-8烷基；Ry为卤代C1-8烷基且R1如一般描述中所定义)的一般方法被描述在合成方案9中。
合成方案9
在合适的碱和催化剂存在下，式(1)的二卤代嘧啶(其中X为卤素)与式(29)的氨基苯基氧化膦的取代反应产生式(30)化合物。偶联反应可以在合适的碱(如二异丙基乙胺)的存在下和合适的溶剂(如二甲基甲酰胺、异丙醇)的存在下进行。在作为催化剂的对甲苯磺酸和溶剂(如异丙醇)的存在下，式(30)化合物与式(4)化合物的取代的异喹啉在密封管中在高温下偶联，得到式(I-k)化合物。
制备式(I-l)化合物(其中R6为C1-8烷基、氘代C1-8烷基或卤代C1-8烷基且R1如一般描述中所定义)的一般方法被描述在合成方案10中。
合成方案10
在合适的碱存在下，式(1)的二卤代嘧啶(其中X为卤素)与式(31)的氨基苯基氧化膦的取代反应产生式(32)化合物。偶联反应可以在合适的碱(如氢化钠(60％)、二异丙基乙胺)和合适的溶剂(如二甲基甲酰胺、异丙醇)的存在下进行。使用PCC作为氧化剂和溶剂(如二氯甲烷、二氯化乙烯)氧化式(32)化合物产生式(33)的醛化合物。用DAST作为氟化剂在合适的溶剂(如二氯甲烷)中氟化式(33)化合物，产生式(34)化合物。在合适的二膦配体、碱、催化剂和溶剂存在下，式(34)化合物与合适的式(4)的取代的异喹啉保护化合物偶联，产生式(I-l)化合物。反应中使用的合适的碱可以为乙酸钾、叔丁醇钠或钾、碳酸钠、碳酸铯等，合适的二膦配体，如4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽。反应中使用的合适的钯催化剂可以为三(二亚苄基丙酮)二钯(0)，乙酸钯。
制备式(I-m)化合物(其中R6为C1-8烷基、氘代C1-8烷基或卤代C1-8烷基且R1如一般描述中所定义)的一般方法被描述在合成方案11中。
合成方案11
在合适的碱存在下，式(1)的二卤代嘧啶(其中X为卤素)与式(35)的氨基苯基氧化膦的取代反应产生式(36)化合物。偶联反应可以在合适的碱(如碳酸铯、碳酸钠、氢化钠、二异丙基乙胺)的存在下和合适的溶剂(如二甲基甲酰胺、异丙醇)的存在下进行。在作为催化剂的对甲苯磺酸和溶剂(如异丙醇)的存在下，式(36)化合物与式(4)化合物的取代的异喹啉在密封管中在高温下偶联，得到式(37)化合物，其进一步进行硝基还原，然后进行N-乙酰化，得到式(I-m)化合物。
制备式(I-n)化合物(其中R6为C1-8烷基、氘代C1-8烷基或卤代C1-8烷基且R1如一般描述中所定义)的一般方法被描述在合成方案12中。
合成方案12
在合适的碱存在下，式(1)的二卤代嘧啶(其中X为卤素)与式(39)的磺酰亚胺化合物的取代反应产生式(40)化合物。偶联反应可以在合适的碱(如氢化钠(60％)、碳酸铯、碳酸钠)的存在下，使用合适的溶剂如(二甲基甲酰胺、四氢呋喃(THF))进行。在作为催化剂的对甲苯磺酸和溶剂(如异丙醇)的存在下，式(40)化合物与式(4)化合物的取代的异喹啉在密封管中在高温下偶联，得到式(I-n)化合物。
制备式(I-o)化合物(其中R6为C1-8烷基、氘代C1-8烷基或卤代C1-8烷基且R1如一般描述中所定义)的一般方法被描述在合成方案13中。
合成方案13
在合适的碱存在下，式(1)的二卤代嘧啶(其中X为卤素)与式(41)化合物的取代反应产生式(42)化合物。偶联反应可以在合适的碱(如氢化钠(60％)、碳酸铯、碳酸钠、二异丙基乙胺)的存在下和在合适的溶剂(如二甲基甲酰胺、四氢呋喃)的存在下进行。在作为催化剂的对甲苯磺酸和溶剂(如异丙醇)的存在下，式(42)化合物与式(4)化合物的取代的异喹啉在密封管中在高温下偶联，得到式(I-o)化合物。
制备式(I-p)化合物(其中R6为C1-8烷基、氘代C1-8烷基或卤代C1-8烷基且R1如一般描述中所定义)的一般方法被描述在合成方案14中。
合成方案14
在合适的碱存在下，式(1)的二卤代嘧啶(其中X为卤素)与式(43)化合物的取代反应产生式(44)化合物。偶联反应可以在合适的碱(如氢化钠(60％)、碳酸铯、碳酸钠)的存在下，使用合适的溶剂(如二甲基甲酰胺、四氢呋喃)进行。在作为催化剂的对甲苯磺酸和溶剂(如异丙醇)的存在下，式(44)化合物与式(4)化合物的取代的异喹啉在高温下偶联，得到式(I-p)化合物。
在合适的碱存在下，式(1)的二卤代嘧啶与式(45)化合物的取代反应产生式(46)化合物。偶联反应可以在合适的碱(如氢化钠(60％)、碳酸铯、碳酸钠)的存在下，使用合适的溶剂(如二甲基甲酰胺、四氢呋喃)进行。使用BBr3将式(46)化合物脱苄基化，产生式(47)化合物苯酚化合物。在合适的二膦配体、碱、催化剂和溶剂存在下，式(47)化合物与合适的式(4)的取代的异喹啉保护化合物偶联，产生式(48)化合物。反应中使用的合适的碱可以为乙酸钾、叔丁醇钠或钾、碳酸钠、碳酸铯等，合适的二膦配体，如4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽。反应中使用的合适的钯催化剂可以为三(二亚苄基丙酮)二钯(0)、乙酸钯。在碱(如DBU)存在下，式(48)化合物与作为氟代硫酸化试剂的AISF反应，得到氟硫酸酯化合物，用无机酸(如盐酸)处理后得到式(I-q)化合物。
制备式(I-r)化合物(其中R3为氢、C1-8烷基、氘代C1-8烷基、卤代C1-8烷基或3-15元杂环基且R1如一般描述中所定义)的一般方法被描述在合成方案15中。
合成方案15
在氢溴酸存在下，式(49)化合物在高温下的脱甲基化反应产生式(50)化合物。用无机酸(如盐酸)处理式(50)化合物，得到式(I-r)化合物。
中间体
中间体A1
(2-氨基-5-((4-甲氧基苄基)氧基)苯基)二甲基氧化膦
步骤1：3-碘-4-硝基苯酚
在-10℃下，在30分钟内，向3-碘苯酚(40.0g，180mmol)在冰醋酸(200mL)中的搅拌溶液中加入发烟HNO3(8.4mL，100mmol)在醋酸(60mL)中的溶液。在室温(RT)下搅拌反应混合物30min。在冰冷水中淬灭反应混合物，用乙酸乙酯萃取。分离有机层，用无水硫酸钠干燥，并在真空下浓缩。在硅胶柱上纯化粗物质，所得固体在二氯甲烷(DCM)中搅拌1小时并过滤。所得固体在真空下干燥，产生14g所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.94(d,J＝9.2Hz1H),7.46(s,1H),7.95(d,J＝8.8Hz 1H),11.07,(br s,1H)；ESI-MS(m/z)＝265.2(M+H)+。
步骤2：2-碘-4-((4-甲氧基苄基)氧基)-1-硝基苯
在室温下，向3-碘-4-硝基苯酚(步骤1中间体)(15g，56.60mmol)和碳酸钾(8.60g，62.26mmol)在乙腈(500mL)中的搅拌悬浮液中加入4-甲氧基苄基氯(9.75g，62.26mmol)。将反应混合物回流过夜。用水稀释反应混合物，用乙酸乙酯萃取三次。分离有机层，用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。用硅胶柱色谱法纯化由此所得的剩余物，产生12g所需产物。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ3.76(s,3H),5.15(s,2H),6.95(d,J＝8.8Hz,2H),7.20(d,J＝9.2Hz,1H),7.38(d,J＝8.8Hz,2H),7.70(s,1H),8.01(d,J＝9.2Hz,1H)；ESI-MS(m/z)383(M-H)+。
步骤3：2-碘-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苯胺
在室温下，向2-碘-4-((4-甲氧基苄基)氧基)-1-硝基苯(12g，31.1mmol)和铁粉(5.5g，95.5mmol)在异丙醇(200mL)中的搅拌悬浮液中加入氯化铵(16.7g，31.16mmol)和水(20mL)。将反应混合物回流3小时。用乙酸乙酯稀释反应混合物，通过硅藻土床过滤，滤液用乙酸乙酯萃取三次。用无水硫酸钠干燥有机体积，并在减压下浓缩。用硅胶柱色谱法纯化由此所得的剩余物，产生10g所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ3.75(s,3H),4.75(s,2H),4.87(s,2H),6.69(d,J＝8.8Hz,1H),6.81(d,J＝8.8Hz,1H),6.92(d,J＝6.8Hz,2H),7.21(s,1H),7.31(d,J＝8.4Hz,2H)；ESI-MS(m/z)355.9(M+H)+。
步骤4：(2-氨基-5-((4-甲氧基苄基)氧基)苯基)二甲基氧化膦
室温下，向2-碘-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苯胺(步骤3中间体)(10g，28.16mmol)和二甲基氧化膦(3.3g，42.25mmol)在DMF(60mL)中的脱气溶液中加入K3PO4(9g，42.25mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(0.814g，1.40mmol)和[Pd(OAc)2]3(1.9g，2.8mmol)。在115℃下搅拌反应混合物3h。用乙酸乙酯稀释反应混合物，通过硅藻土床过滤，并用乙酸乙酯洗涤。用盐水洗涤合并的滤液。用无水硫酸钠干燥有机体积，并在减压下浓缩。用硅胶柱色谱法纯化由此所得的剩余物，产生10g所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.66(d,J＝13.2Hz,6H),3.75(s,3H),4.89(s,2H),5.73(s,2H),6.52-6.62(m,1H),6.81-6.94(m,4H),7.33(d,J＝8.4Hz,2H)；ESI-MS(m/z)306(M+H)+。
按照上述步骤制备的中间体的分析数据如下表1所示。
表1：中间体A2至A6的结构、化学名称和分析数据。
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中间体A7
(2-氨基-5-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)二甲基氧化膦
步骤1：3,5-二溴-2-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)吡啶
在dean-stark装置中，将2-氨基-3,5-二溴吡啶(3g，11.90mmol)在甲苯(50mL)中的搅拌溶液、丙酮基丙酮(1.62g，14.28mmol)、对甲苯磺酸一水合物(45mg，0.238mg)加热回流6h。用乙酸乙酯稀释反应混合物，并用碳酸氢钠水溶液洗涤。分离有机层，并用无水硫酸钠干燥。在减压下除去溶剂，用硅胶柱色谱法纯化所得的剩余物，产生3.6g所需产物。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.90(s,6H),5.81(s,2H),8.76(d,J＝2.4Hz,1H),8.80(d,J＝2.0Hz,1H)；ESI-MS(m/z)328.9(M+H)+。
步骤2：5-(苄氧基)-3-溴-2-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)吡啶
在0℃下，向苄醇(1.87g，17.37mmol)在DMF(25mL)中的搅拌溶液中加入60％氢化钠(695mg，17.37mol)，并在室温下搅拌1h。将反应混合物冷却至0℃，并加入3,5-二溴-2-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)吡啶(4.41g，13.36mmol)。将反应混合物搅拌30分钟并加热至80℃-90℃，保持16小时。用氯化铵水溶液淬灭反应混合物，用水稀释并用DCM萃取三次。分离有机层，用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。用硅胶柱色谱法纯化由此所得的剩余物，产生2.6g所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.88(s,6H),5.28(s,2H),5.78(s,2H),7.37-7.52(m,5H),8.08(d,J＝2.8Hz,1H),8.41(d,J＝2.8Hz,1H)；ESI-MS(m/z)357.1(M+H)+。
步骤3：5-(苄氧基)-3-溴吡啶-2-胺
向5-(苄氧基)-3-溴-2-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)吡啶(2.6g，7.28mmol)和盐酸羟胺(10.12g，145mmol)在异丙醇(50mL)中的搅拌悬浮液中加入三乙胺(1.83g，18.2mmol)及水(25mL)。将反应混合物回流48h。用碳酸氢钠水溶液碱化反应混合物，并用氯仿萃取三次。有机层用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。用硅胶柱色谱法纯化由此所得的剩余物，产生1.05g所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ5.04(s,2H),5.76(brs,2H),7.31-7.43(m,5H),7.60(d,J＝2.4Hz,1H),7.80(d,J＝2.4Hz,1H)；ESI-MS(m/z)279.1(M+H)+。
步骤4：(2-氨基-5-(苄氧基)吡啶-3-基)二甲基氧化膦
向5-(苄氧基)-3-溴吡啶-2-胺(1.05g，3.76mmol)和二甲基氧化膦(440mg，5.64mmol)在DMF(10mL)中的脱气溶液中加入K3PO4(2.4g，11.28mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(108mg，0.188mmol)和[Pd(OAc)2]3(126mg，0.188mmol)。将反应混合物在115℃下搅拌4h。用氯仿稀释反应混合物，通过硅藻土床过滤并用氯仿洗涤。合并的滤液用盐水溶液洗涤。过滤有机层，用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。用硅胶柱色谱法纯化由此所得的剩余物，产生580mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.67(d,J＝13.2Hz,6H),5.05(s,2H),6.39(s,2H),7.33-7.47(m,6H),7.91(s,1H)；ESI-MS(m/z)277.1(M+H)+。
步骤5：(2-氨基-5-羟基吡啶-3-基)二甲基氧化膦
向(2-氨基-5-(苄氧基)吡啶-3-基)二甲基氧化膦(1.5g，8.06mmol)在甲醇(30mL)中的搅拌悬浮液中加入10％的Pd/C(50％湿，1.5g)，并在Parr Shaker中，在50psi氢气压力下氢化6h。反应混合物通过硅藻土床过滤并用甲醇洗涤。将所得滤液在减压下浓缩。用硅胶柱色谱法纯化由此所得的剩余物，产生760mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.64(d,J＝13.6Hz,6H),6.11(s,2H),7.11(s,J＝14Hz,1H),7.19(s,1H),8.98(s,1H)；ESI-MS(m/z)187.2(M+H)+。
步骤6：(2-氨基-5-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)二甲基氧化膦
在0℃下，向(2-氨基-5-羟基吡啶-3-基)二甲基氧化膦(760mg，4.08mmol)在DMF(15mL)中的搅拌溶液中，加入叔丁醇钾(571mg，5.1mmol)，并在室温下搅拌1h。将反应混合物冷却至0℃，加入4-甲氧基苄基氯(735mg，4.69mmol)并在室温下搅拌3h。用氯化铵水溶液淬灭反应混合物，用水稀释并用DCM萃取三次。分离有机层，用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。用硅胶柱色谱法纯化由此所得的剩余物，产生800mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.67(d,J＝13.6Hz,6H),3.75(s,3H),4.96(s,2H),6.42(brs,2H),6.93(d,J＝8.4Hz,2H),7.33-7.42(m,3H),7.88(d,J＝2.0Hz,1H)；ESI-MS(m/z)307.2(M+H)+。
中间体A8
(3-氨基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-2-基)二甲基氧化膦
步骤1：2-((4-甲氧基苄基)氧基)-5-硝基吡啶
在0℃下，向60％NaH(680mg，28.4mmol)在THF中的搅拌悬浮液中加入2-氯-5-硝基吡啶(3.0g，18.93mmol)并搅拌5min。向该混合物中加入4-甲氧基苄醇(3.29g，28.4mmol)并在室温下搅拌16小时。用水淬灭反应混合物并用乙酸乙酯萃取两次。分离有机层，用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并浓缩。将由此所得的剩余物用乙醚研制，过滤并在真空下干燥，产生3.22g所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ3.76(s,3H),5.42(s,2H),6.95(d,J＝8.8Hz,2H),7.06(d,J＝9.2Hz,1H),7.42(d,J＝8.8Hz,2H),8.50(dd,J＝2.8Hz,J＝9.2Hz,1H),9.12(d,J＝2.4Hz,1H)。
步骤2：6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-胺
向2-((4-甲氧基苄基)氧基)-5-硝基吡啶(3.0g，11.53mmol)和铁粉(3.22g，57.64mmol)在异丙醇(120mL)中的搅拌悬浮液中加入氯化铵(6.16g，115.3mmol)和水(30mL)，并回流2小时。用乙酸乙酯稀释反应混合物并通过硅藻土床过滤。用乙酸乙酯萃取所得滤液，用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并浓缩。用硅胶柱色谱法纯化由此所得的剩余物，产生2.02g所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ3.75(s,3H),4.76(s,2H),5.11(s,2H),7.57(d,J＝8.4Hz,1H),6.91(d,J＝8.8Hz,2H),7.01(dd,J＝2.8Hz,J＝8.8Hz 1H),7.33(d,J＝8.4Hz,2H),7.50(d,J＝2.8Hz,1H)；ESI-MS(m/z)231.1(M+H)+。
步骤3：2-溴-6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-胺
在0℃下，向6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-胺(1.5g，6.51mmol)在乙腈(60mL)中的搅拌溶液中逐份加入NBS(1.16g，6.51mmol)并搅拌10分钟。用EtOAc稀释反应混合物，并用水和盐水溶液洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。用硅胶柱色谱法纯化由此所得的剩余物，产生1.4g所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ3.75(s,3H),4.96(s,2H),5.09(s,2H),6.67(d,J＝8.4Hz,1H),6.92(dd,J＝2.0Hz,J＝6.8Hz,2H),7.18(d,J＝8.4Hz,1H),7.36(d,J＝8.8Hz,2H)；ESI-MS(m/z)310.9(M+2H)+。
步骤4：(3-氨基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-2-基)二甲基氧化膦
通过2-溴-6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-胺(100mg，0.323mmol)与二甲基氧化膦(38mg，0.485mmol)、CuI(7mg，0.032mmol)，K3PO4(206mg，0.97mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(9.3g，0.016mmol)和[Pd(OAc)2]3(11mg，0.016mmol)在DMF(5mL)中的反应，按照中间体A1的步骤4所述的步骤制备标题化合物，产生44mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.62(d,J＝13.2Hz,6H),3.74(s,3H),5.12(s,2H),5.83(s,2H),6.74(d,J＝8.8Hz,1H),6.91(d,J＝8.4Hz,2H),7.10(d,J＝8.8Hz,1H),7.33(d,J＝8.4Hz,2H)；ESI-MS(m/z)307.10(M+H)+。
中间体A9
(5-氨基-2-甲氧基吡啶-4-基)二甲基氧化膦
步骤1：叔丁基(6-甲氧基吡啶-3-基)氨基甲酸酯
向6-甲氧基吡啶-3-胺(3g，24.17mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的搅拌溶液中加入Boc-酸酐(7.37g，33.84mmol)，并加热至70℃，保持18h。用水稀释反应混合物，用乙酸乙酯萃取。分离有机层，用无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。用硅胶柱色谱法纯化所得的剩余物，产生4.5g所需产物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.53(s,9H),3.91(s,3H),6.38(s,1H),6.73(d,J＝8.8Hz,1H),7.83(s,1H),8.01(d,J＝2.4Hz,1H)；ESI-MS(m/z)225.1(M+H)+。
步骤2：叔丁基(4-碘-6-甲氧基吡啶-3-基)氨基甲酸酯
在室温下，向叔丁基(6-甲氧基吡啶-3-基)氨基甲酸酯(4.0g，17.85mmol)在THF(110mL)中的搅拌溶液中加入四甲基乙二胺(8.93mL，55.35mmol)。将反应混合物冷却至-78℃，并在15分钟内滴加正丁基锂(38mL，60.69mmol)，搅拌30min。将混合物缓慢加热至-20℃，搅拌20分钟。将反应混合物再次冷却至-78℃，并加入碘(4.53g，17.85mmol)在THF(40mL)中的溶液中。将反应混合物逐渐加热至室温并在室温下搅拌18h。用氯化铵溶液淬灭反应混合物并用乙酸乙酯萃取。分离有机层，用无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。用硅胶柱色谱法纯化所得的粗剩余物，产生2g所需产物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.54(s,9H),3.91(s,3H),6.31(s,1H),7.24(s,1H),8.46(s,1H)；ESI-MS(m/z)351.2(M+H)+。
步骤3：4-碘-6-甲氧基吡啶-3-胺
向叔丁基(4-碘-6-甲氧基吡啶-3-基)氨基甲酸酯(2.0g，5.71mmol)在DCM(10mL)中的搅拌溶液中加入三氟乙酸(TFA)(10mL)并在室温下搅拌1h。然后在真空下蒸发溶剂，用NaHCO3溶液碱化，并用乙酸乙酯萃取产物。分离有机层，用无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩，产生1.35g所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ3.71(s,3H),4.84(bs,2H),7.12(s,1H),7.60(s,1H)；ESI-MS(m/z)250.1(M+H)+。
步骤4：(5-氨基-2-甲氧基吡啶-4-基)二甲基氧化膦
通过4-碘-6-甲氧基吡啶-3-胺(1.3g，5.2mmol)与二甲基氧化膦(609mg，7.8mmol)、K3PO4(1.6g，7.8mmol)和4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(150mg，0.26mmol)在DMF(20mL)中的反应，按照中间体A1的步骤4中所述的步骤制备标题中间体，产生608mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.71(d,J＝14Hz,6H),3.74(s,3H),5.64(bs,2H),6.73(d,J＝14Hz,1H),7.67(d,J＝6Hz,1H)；ESI-MS(m/z)201.1(M+H)+。
中间体A10
(5-(苄氧基)-2-羟基苯基)二甲基氧化膦
步骤1：4-(苄氧基)苯酚
向对苯二酚(5g，45mmol)在丙酮(45mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(3.45g，25mmol)，然后加入苄基溴(2.97mL，25mmol)，将所得反应混合物回流18小时。将反应混合物浓缩，用乙酸乙酯稀释，用水洗涤。分离有机层，用无水硫酸钠干燥并浓缩。用硅胶柱色谱法纯化所得的剩余物，产生2.6g产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ4.98(s,2H,6.68-6.65(m,2H),6.83-6.80(m,2H),7.43-7.29(m,5H),8.93(s,1H)；ESI-MS(m/z)201.2(M+H)+。
步骤2：4-(苄氧基)-2-溴苯酚
在0℃下，向4-(苄氧基)苯酚(2.35g，11mmol)在CHCl3(50mL)中的搅拌溶液中滴加溴(947mg，11mmol)，并在室温下搅拌18h。用硫代硫酸钠溶液淬灭反应，并用乙酸乙酯萃取三次。分离有机层，用无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。用硅胶柱色谱法纯化粗物质，产生1.15g所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ4.98(s,2H)；6.86(d,J＝2.8Hz,1H),6.92(s,1H),7.09(d,J＝2.8Hz,1H)；7.41-7.32(m,5H)；ESI-MS(m/z)281(M+H)+。
步骤3：(5-(苄氧基)-2-羟基苯基)二甲基氧化膦
在密封管中，向4-(苄氧基)-2-溴苯酚(900mg，3.225mmol)和二甲基氧化膦在DMF(14mL)中的脱气溶液中加入K3PO4(1.02g，4.83mmol)和4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(186mg，0.322mmol)。再次将混合物脱气15分钟，并加入[Pd(OAc)2]3(49mg，0.322mmol)。将所得混合物在120℃下搅拌18h。用水稀释反应混合物，并用乙酸乙酯萃取三次。分离有机层，用无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。用硅胶柱色谱法纯化所得的剩余物，产生201mg产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.68(d,J＝14Hz,6H)；5.03(s,2H),6.78-6.82(m,1H),7.04-7.07(m,1H),7.20-7.24(m,1H),7.32-75(m,5H),10.30(s,1H)；ESI-MS(m/z)277(M+H)+。
中间体A11
叔丁基[4-氨基-3-(二甲基磷酰基)苯基](甲基)氨基甲酸酯
步骤1：3-碘-N-甲基-4-硝基苯胺
在室温下，向4-氟-2-碘-1-硝基苯(4.5g，10.86mmol)在DMF(20mL)中的搅拌溶液中加入甲胺盐酸盐(1.5g，21.9mmol)和碳酸钾(3g，21.9mmol)，并加热至80℃保持4h。用冰冷水淬灭反应混合物，并用氯仿萃取。分离有机层，用无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。用硅胶柱色谱法纯化所得的剩余物，产生1.7g所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)2.75(d,J＝4.8Hz,3H),6.62(d,J＝9.2Hz,1H),7,18(d,J＝2.0Hz,1H),7.24(brs,1H),7.96(d,J＝9.2Hz,1H)；ESI-MS(m/z)279.12(M+H)+。
步骤2：叔丁基(3-碘-4-硝基苯基)(甲基)氨基甲酸酯
在0℃下，向3-碘-N-甲基-4-硝基苯胺(1.7g，6.115mmol)在THF(30mL)中的搅拌溶液中加入60％氢化钠(293mg，7.33mmol)，并在相同温度下搅拌20min。滴加Boc-酸酐，将反应混合物在室温下搅拌16h。用氯化铵水溶液淬灭反应混合物，用水稀释并用DCM萃取三次。分离有机层，用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。用硅胶柱色谱法纯化由此所得的剩余物，产生1.4g所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.44(s,9H),3.24(s,3H),7.54(d,J＝9.2Hz,1H),7.95(d,J＝8.8Hz,1H),8.06(d,J＝2.4Hz,1H)。
步骤3：叔丁基(4-氨基-3-碘苯基)(甲基)氨基甲酸酯
向叔丁基(3-碘-4-硝基苯基)(甲基)氨基甲酸酯(1.4g，5.64mmol)和铁粉(1.9g，33.84mmol)在异丙醇(25mL)中的搅拌悬浮液中加入氯化铵(1.5g，28.2mmol)和水(8mL)并加热回流3h。用乙酸乙酯稀释反应混合物，通过硅藻土床过滤，所得滤液用乙酸乙酯萃取三次。分离有机层，用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。用硅胶柱色谱法纯化由此所得的剩余物，产生950mg所需产物。ESI-MS(m/z)348.9(M+H)+。
步骤4：叔丁基[4-氨基-3-(二甲基磷酰基)苯基](甲基)氨基甲酸酯
向叔丁基(4-氨基-3-碘苯基)(甲基)氨基甲酸酯(中间体-4)(950mg，2.73mmol)和二甲基氧化膦(320mg，4.10mmol)在DMF(10mL)中的脱气溶液中加入K3PO4(870mg，4.10mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(0.78g，0.136mmol)以及[Pd(OAc)2]3(180mg，0.273mmol)，并在115℃下搅拌16h。用乙酸乙酯稀释反应混合物，通过硅藻土床过滤并用乙酸乙酯洗涤。合并的滤液用盐水溶液洗涤。分离有机层，用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。通用硅胶柱色谱法纯化由此所得的剩余物，产生690mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.36(s,9H),1.65(d,J＝13.2Hz,6H),3.08(s,3H),6.14(brs,2H),6.59-6.62(m,1H),7.03-7.07(m,2H).；ESI-MS(m/z)299.1(M+H)+。
中间体A12
(2-氨基-5-(二氟甲氧基)苯基)二甲基氧化膦
步骤1：4-(二氟甲氧基)-2-碘代苯胺
在65℃下，向4-二氟甲氧基苯胺(1.0g，6.28mmol)在乙酸(21mL)中的搅拌溶液中滴加一氯化碘(1.07g，6.65mmol)。将反应混合物在65℃下搅拌1.5h。将反应混合物在减压下浓缩，用NaHCO3水溶液中和，并用乙酸乙酯溶液萃取。分离有机层并用无水硫酸钠干燥。在减压下除去溶剂，用柱色谱法(25-30％乙酸乙酯在石油醚中)纯化收集的粗产物，产生800mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ5.22(brs,2H),6.76(d,J＝8.8Hz,1H),6.97(d,J＝2.8Hz,8.8Hz,1H),7.00(t,J＝74.8Hz,1H),7.39(d,J＝2.0Hz,1H)；ESI-MS(m/z)286.1(M+H)+。
步骤2：(2-氨基-5-(二氟甲氧基)苯基)二甲基氧化膦
在室温下，在氮气氛下，向4-二氟甲氧基-2-碘代苯胺(200mg，0.70mmol)在DMF(2mL)中的搅拌溶液中加入二甲基氧化膦(82mg，1.05mmol)和磷酸钾(223mg，1.05mmol)，然后加入4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(4mg，0.0070mmol)和乙酸钯三聚体(47mg，0.070mmol)。将反应混合物在120℃下搅拌12h。反应混合物在室温下冷却，通过硅藻土床过滤，用乙酸乙酯洗涤，滤液在减压下浓缩。用快速柱色谱法纯化粗物质，产生130mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.67(s,3H),1.70(s,3H),6.16(br s,2H)),6.68(dd,J＝4.4&8.8Hz,1H),6.99(t,J＝74.8Hz,1H),7.10-7.00(m,2H)；ESI-MS(m/z)236(M+H)+。
中间体A13
(2-氨基-5-(2,2-二氟乙氧基)苯基)二甲基氧化膦
步骤1：4-(2,2-二氟乙氧基)-2-碘-1-硝基苯
向3-碘-4-硝基苯酚(0.3g，1.13mmol)在DMF(4mL)中的搅拌溶液中加入碳酸钾(0.470g，3.96mmol)，然后加入2-碘-1,1-二氟乙烷(0.434g，2.26mmol)。将反应混合物在80℃下搅拌过夜。用水稀释反应混合物，并用乙酸乙酯萃取。分离有机层并用无水硫酸钠干燥。在减压下除去溶剂，用柱色谱法纯化收集的粗产物，产生300mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ4.47-4.52(m,2H),6.42(tt,J＝6.8Hz,54Hz,1H),7.22(d,J＝8.8Hz,1H),7.72(s,1H),8.02(d,J＝9.2Hz,1H)；ESI-MS(m/z)328(M)+。
步骤2：4-(2,2-二氟乙氧基)-2-碘代苯胺
在室温下，向搅拌的化合物4-(2,2-二氟乙氧基)-2-碘-1-硝基苯(步骤1中间体)(0.3g，0.91mmol)在IPA(5mL)中加入铁(0.161g，2.74mmol)和氯化铵水溶液(0.492g，10mmol)。将反应混合物加热回流3h。将混合物通过硅藻土过滤，滤液用硫酸钠干燥并在减压下浓缩，产生250mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ3.30-3.41(m,2H),5.38(tt,J＝3.6Hz,53.6Hz,1H),6.00-6.15(m,2H),6.52(t,J＝2.4Hz,1H)；ESI-MS(m/z)299(M)+。
步骤3：(2-氨基-5-(2,2-二氟乙氧基)苯基)二甲基氧化膦
通过4-(2,2-二氟乙氧基)-2-碘苯胺(250mg，0.83mmol)与二甲基氧化膦(98mg，1.25mmol)、三磷酸钾(266mg，1.25mmol)和4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(5mg，0.008mmol)、乙酸钯三聚体(56mg，0.083mmol)在DMF(2mL)中的反应，按照中间体A1的步骤4中所述的步骤制备标题化合物，产生250mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.69(d,J＝13.2Hz,6H),4.13-4.24(m,2H),5.85(br s,2H),6.32(tt,J＝3.6Hz,54.8Hz,1H),6.60-6.67(m,1H),6.83-6.95(m,2H)；ESI-MS(m/z)＝249.9(M+H)+。
中间体A14
(2-氨基-4-氟-5-甲氧基苯基)二甲基氧化膦
步骤1：5-氟-2-碘-4-甲氧基苯胺
向3-氟-4-甲氧基苯胺(100mg，0.709mmol)在甲醇(5mL)中的搅拌溶液中加入碘氯化吡啶(241.46mg，0.709mmol)，并在室温下搅拌30min。在减压下浓缩反应混合物，用水稀释所得剩余物，并用乙酸乙酯萃取三次。分离有机层并进一步用水和盐水溶液洗涤。分离有机层，用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。用柱色谱法纯化由此所得的剩余物，产生32mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ3.71(s,3H),5.0(s,2H),6.65(d,J＝13.6Hz,1H),7.29(d,J＝9.2Hz,1H)；ESI-MS(m/z)268(M+H)+。
步骤2：(2-氨基-4-氟-5-甲氧基苯基)二甲基氧化膦
在密封管中，将5-氟-2-碘-4-甲氧基苯胺(28mg，0.105mmol)和二甲基膦(12.3mg，0.157mmol)溶于DMF(2mL)中，并用氮气吹扫混合物30min。向混合物中加入K3PO4(44.5mg，0.209mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(3mg，0.0052mmol)以及Pd(OAc)2(2.35mg，0.0105mmol)。将反应混合物在110℃下加热16h。用乙酸乙酯稀释反应混合物并过滤。将所得滤液在减压下浓缩。用柱色谱法纯化由此所得的剩余物，产生11mg所需产物。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.67(d,J＝13.2Hz,6H),3.73(s,3H),6.01(s,2H),6.51(dd,J＝4.4Hz,14Hz,1H),6.95(dd,J＝9.6Hz,14Hz,1H),ESI-MS(m/z)218(M+H)+。
中间体A15
4-氨基-3-(二甲基磷酰基)-N-(2-氟乙基)-N-甲基苯甲酰胺
步骤1：4-氨基苯甲酸甲酯
在室温下，向4-氨基苯甲酸(250mg，1.655mmol)在甲醇(4mL)中的搅拌溶液中加入浓硫酸。将反应混合物回流18h。在减压下除去溶剂，并用碳酸氢钠水溶液碱化反应物质。过滤反应物质，用水洗涤所得剩余物并在真空下干燥，产生178mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ3.73(s,3H),5.97(bs,2H),7.56(dd,J＝1.6,6.8Hz 2H),7.63(d,J＝8.8Hz,2H)；ESI-MS(m/z)152(M+H)+。
步骤2：4-氨基-3-碘苯甲酸甲酯
在0℃下，向4-氨基苯甲酸甲酯(100mg，0.662mmol)在DMF(1mL)中的搅拌溶液中加入N-碘代琥珀酰胺(148mg，0.662mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16h。用水稀释反应混合物并搅拌5min。过滤混合物，用水洗涤所得固体并干燥，产生150mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ3.75(s,3H),6.08(bs,2H),6.77(d.J＝8.8Hz,1H),7.67(dd,J＝2.08.4Hz,1H),8.11(d,J＝2Hz,1H)；ESI-MS(m/z)278.0(M+H)+。
步骤3：4-氨基-3-(二甲基磷酰基)苯甲酸甲酯
通过4-氨基-3-碘代苯甲酸甲酯(800mg，2.87mmol)与二甲基氧化膦(338mg，4.31mmol)、磷酸钾(913mg，4.31mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(17mg，0.278mmol)和乙酸钯三聚体(194mg，0.287mmol)在DMF(10mL)中的反应，按照中间体A1的步骤4中所述的步骤制备标题化合物，产生605mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.72(d,J＝13.2Hz,6H),3.76(s,3H),6.67-6.71(m,1H),6.98(br s,2H),7.71-7.81(m,2H)；ESI-MS(m/z)228.1(M+H)+。
步骤4：4-氨基-3-(二甲基磷酰基)苯甲酸
向4-氨基-3-(二甲基磷酰基)苯甲酸甲酯(900mg，3.96mmol)在甲醇(10mL)中的搅拌溶液中加入氢氧化钾(333mg，5.94mmol)和水(3mL)。将反应物在70℃下搅拌16h。在减压下除去溶剂。反应物质用1NHCl酸化。含水混合物用乙酸乙酯萃取两次，合并的有机萃取物用水洗涤，然后用盐水洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。用硅胶柱色谱法纯化所得剩余物，产生450mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.71(d,J＝13.2Hz,6H),6.66-6.69(m,2H),6.90(br s,2H),7.70-7.79(m,2H),12.32(br s,1H),ESI-MS(m/z)214.1(M+H)+。
步骤5：4-氨基-3-(二甲基磷酰基)-N-(2-氟乙基)-N-甲基苯甲酰胺
向4-氨基-3-(二甲基磷酰基)苯甲酸(350mg，1.64mmol)和2-氟-N-甲基乙胺盐酸盐(186mg，1.64mmol)在1,2-二氯乙烷(10mL)中的搅拌溶液中加入EDCI.HCl(470mg，2.46mmol)、HOBT(222mg，1.643mmol)，然后加入N-甲基吗啉(0.548mL，4.929mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16h。用水稀释反应混合物并用乙酸乙酯萃取两次，合并的有机萃取物用水洗涤，然后用盐水洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。用硅胶柱色谱法纯化所得剩余物，产生415mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.69(d,J＝13.2Hz,6H),2.99(s,3H),3.55-3.68(m,2H),4.55(t,J＝4.8Hz,1H),4.67(t,J＝4.8Hz,1H),6.56(br s,2H),6.66-6.67(m,1H),7.24-7.30(m,2H)；ESI-MS(m/z)273.1(M+H)+。
中间体A16
N-(4-氨基-3-(二甲基磷酰基)苯基)-2,2-二氟-N-甲基乙酰胺
步骤1：3-碘-N-甲基-4-硝基苯胺
向4-氟-2-碘-1-硝基苯(150mg，0.563mmol)在DMF(1mL)中的搅拌溶液中加入碳酸钾(311mg，2.25mmol)和甲胺盐酸盐(91mg，1.126mmol)。将反应混合物在80℃下搅拌4-5h。将反应混合物冷却至室温并用水淬灭。含水混合物用乙酸乙酯萃取两次，合并的有机萃取物用水洗涤，然后用盐水洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。用硅胶柱色谱法纯化所得剩余物，产生85mg所需产物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ2.97(s,3H),6.55(dd,J＝2.4,9.2Hz,1H),7.18(d,J＝2.8Hz,1H),8.03(d,J＝9.2Hz,1H)。
步骤2：2,2-二氟-N-(3-碘-4-硝基苯基)-N-甲基乙酰胺
在0℃下，向3-碘-N-甲基-4-硝基苯胺(400mg，1.44mmol)在THF(10mL)中的搅拌溶液中加入TEA(436mg，4.32mmol)和二氟乙酸酐(376mg，2.16mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16h并用水淬灭。含水混合物用乙酸乙酯萃取两次，合并的有机萃取物用水洗涤，然后用盐水洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。用硅胶柱色谱法纯化所得剩余物，产生300mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ3.34(s,3H),6.27-6.44(m,1H),7.67(d,J＝7.2Hz,1H),8.04(d,J＝8.8Hz,1H),8.21(br s,1H)。
步骤3：N-(4-氨基-3-碘苯基)-2,2-二氟-N-甲基乙酰胺
向2,2-二氟-N-(3-碘-4-硝基苯基)-N-甲基乙酰胺(300mg，0.845mmol)在IPA/H2O混合物(6mL/2mL)中的搅拌溶液中加入铁粉(147mg，2.55mmol)和氯化铵(447mg，8.45mmol)。将反应混合物在110℃下搅拌3h。将反应混合物通过硅藻土过滤并用乙酸乙酯洗涤。将所得滤液浓缩并用饱和NaHCO3中和。含水混合物用乙酸乙酯萃取两次，合并的有机萃取物用水洗涤，然后用盐水洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。用硅胶柱色谱法纯化所得剩余物，产生255mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ3.13(s,3H),5.52(br s,2H),6.09(t,J＝53.2Hz,1H),6.76(d,J＝8.4Hz,1H),7.08(dd,J＝2.4,8.4Hz,1H),7.59(br s,1H)；ESI-MS(m/z)326.9(M+H)+。
步骤4：N-(4-氨基-3-(二甲基磷酰基)苯基)-2,2-二氟-N-甲基乙酰胺
通过N-(4-氨基-3-碘苯基)-2,2-二氟-N-甲基乙酰胺(250mg，0.769mmol)与二甲基氧化膦(89mg，1.153mmol)、二乙酸钯三聚体(51mg，0.0769mmol)、K3PO4(244mg，1.153mol)和4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(4.4mg，0.00769mmol)在DMF(2mL)中的反应，按照中间体A1的步骤4中所述的步骤制备标题化合物，产生200mg所需产物。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.67(d,J＝13.2Hz,6H),3.15(s,3H),6.08(t,J＝52.8Hz,1H),6.45(br s,2H),6.70-6.75(m,1H),7.15(dd,J＝2.0,8.4Hz,1H),7.26(dd,J＝2.4,14Hz,1H)；ESI-MS(m/z)277(M+H)+。
中间体A17
(2-氨基-5-(羟甲基)苯基)二甲基氧化膦
步骤1：(4-氨基-3-碘苯基)甲醇
向(4-氨基苯基)甲醇(2.0g，16.26mmol)在甲醇(12mL)中的搅拌溶液中加入碳酸钙(2.43g，24.39mmol)水溶液。将反应混合物搅拌10-15min。向反应混合物中滴加ICl(0.8mL，16.26mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16h。将反应混合物用醚稀释并用水淬灭。含水混合物用乙酸乙酯萃取两次，合并的有机萃取物用水洗涤，然后用盐水洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。用硅胶柱色谱法纯化所得剩余物，产生1.3g所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ4.27(d,J＝5.6Hz,2H),4.95(t,J＝6Hz,1H),5.10(br s,2H),6.70(d,J＝8Hz,1H),7.00-7.05(m,1H),7.49(s,1H)。
步骤2：(2-氨基-5-(羟甲基)苯基)二甲基氧化膦
通过(4-氨基-3-碘代苯基)甲醇(1.00g，4.016mmol)与二甲基氧化膦(409mg，6.024mmol)、K3PO4(1.28g，1.153mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(116mg，0.200mmol)和二乙酸钯三聚体(270mg，0.4016mmol)在DMF(5mL)中的反应，按照中间体A1的步骤4中所述的步骤制备标题化合物，产生790mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.66(d,J＝13.6Hz,6H),4.30(d,J＝5.6Hz,2H),4.91(t,J＝5.6Hz,1H)),6.06(s,2H),6.60-6.63(m,1H),7.10-7.12(m,1H),7.14(s,1H)。
中间体A18
(2-氨基-5-硝基苯基)二甲基氧化膦
步骤1：2-碘-4-硝基苯胺
向4-硝基苯胺(5gm，36.23mmol)在乙腈中的搅拌溶液中加入N-碘代琥珀酰亚胺(9gm，39.85mmol)，然后逐滴加入TMS氯化物(460μL，3.623mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16h。用水稀释反应混合物。含水混合物用乙酸乙酯萃取两次，合并的有机萃取物用水洗涤，然后用盐水洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。用硅胶柱色谱法纯化所得剩余物，产生9.1g所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.76(d,J＝8Hz,1H),8.4(d,J＝2.4Hz,1H),8.73(brs,2H),ESI-MS(m/z)264(M+H)+。
步骤2：(2-氨基-5-硝基苯基)二甲基氧化膦
通过2-碘-4-硝基苯胺(2g，7.604mmol)与二甲基氧化膦(890mg，11.406mmol)、K3PO4(2.4gm，11.406)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(219mg，0.380mmol)和乙酸钯三聚体(511mg，0.760mmol)在DMF中的反应，按照中间体A1的步骤4中所述的步骤制备标题化合物，产生1.1g所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.77(d,J＝13.6Hz,6H)；6.73-6.77(m,1H),7.59(br s,2H),8.01-8.05(m,1H),δ8.14-8.20(m,1H)；ESI-MS(m/z)215(M+H)+。
中间体A19
(2-(S-甲基磺酰亚胺基)苯基)二甲基氧化膦
步骤1：(2-碘苯基)(甲基)硫烷
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在-10℃下，向2-(甲硫基)苯胺(1g，7.18mmol)在10％H2SO4(10mL)中的冷却溶液中滴加3mLNaNO2(545mg，7.9mmol)的水溶液。将反应混合物在0℃-10℃下搅拌30min，然后向反应混合物中加入3mL KI(2.1g，12.92mmol)的水溶液。将反应混合物在室温下搅拌3h。用乙酸乙酯稀释反应混合物，并用1N HCl洗涤，然后用水洗涤。分离、浓缩有机层，并用硅胶柱色谱法纯化由此所得剩余物，产生1g所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ2.46(s,3H),6.89-6.94(m,1H),7.19-7.22(m,1H),7.40-7.45(m,1H),7.79-7.82(m,1H)。
步骤2：(2-(甲硫基)苯基)二甲基氧化膦
通过(2-碘苯基)(甲基)硫烷(500mg，2mmol)与二甲基氧化膦(234mg，1.5mmol)、K3PO4(636mg，1.5mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(58mg，0.1mmol)和乙酸钯三聚体(138mg，0.2s mmol)在DMF(2mL)中的反应，按照中间体A1的步骤4中所述的步骤制备标题化合物，产生325mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.77d,J＝13.6Hz,6H),2.55(s,3H),7.31-7.36(m,1H),7.46-7.58(m,2H),7.80-7.86(m,1H)；ESI-MS(m/z)201(M+H)+。
步骤3：(2-(S-甲基磺酰亚胺基)苯基)二甲基氧化膦
向(2-(甲硫基)苯基)二甲基氧化膦(300mg，1.5mmol)在甲醇(15mL)中的搅拌溶液中加入碳酸铵(720mg，2.25mmol)和二乙酸碘苯(1.1g，3.45mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1h。将反应混合物浓缩，并用硅胶柱色谱法纯化所得剩余物，产生245mg所需产物。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.84-1.92(m,6H),3.36(s,3H),4.50(br s,1H),7.75-7.80(m,2H),7.95-8.01(m,1H),8.17-8.21(m,1H)。
中间体A20
叔丁基((4-氨基-3-(二甲基磷酰基)苯基)(甲基)(氧代)-λ6-亚硫基)氨基甲酸酯
步骤1：1-(S-甲基磺酰亚胺基)-4-硝基苯
向4-硝基茴香硫醚(500mg，2.95mmol)在甲醇(30mL)中的搅拌溶液中加入碳酸铵(5.6g，4.43mmol)、碘苯二乙酸(9.15g，6.79mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1h。在减压下浓缩反应混合物，并用柱色谱法纯化所得剩余物，产生521mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ3.17(s,3H),4.61(s,1H),8.19(d,J＝8.8Hz,2H),8.42(d,J＝8.8Hz,2H)；ESI-MS(m/z)201(M+H)+。
步骤2：叔丁基(甲基(4-硝基苯基)(氧代)-λ6-亚硫基)氨基甲酸酯
在0℃下，向KOtBu(73mg，0.65mmoles)在THF(8.0mL)中的搅拌溶液中加入1-(S-甲磺酰亚胺基)-4-硝基苯(100mg，0.5mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15min，然后加入boc酸酐(218mg，1.0mmol)，并在室温下搅拌16h。用水淬灭反应混合物，并用乙酸乙酯萃取。分离有机层，用无水Na2SO4干燥。蒸发溶剂，并用柱色谱法纯化所得剩余物，产生122mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.24(s,9H)3.50(s,3H),8.20-8.23(m,2H),8.48-8.50(m,2H)；ESI-MS(m/z)301(M+H)+。
步骤3：叔丁基((4-氨基苯基)(甲基)(氧代)-λ6-亚硫基)氨基甲酸酯
在室温下，向叔丁基(甲基(4-硝基苯基)(氧代)-λ6-亚硫基)氨基甲酸酯(650mg)在MeOH(25mL)中的搅拌溶液中加入10％Pd/C(300mg)。在氢气气氛(气球压力)下将反应混合物在室温下搅拌2h。将反应混合物通过硅藻土过滤，并浓缩所得滤液，产生563mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.29(s,9H)3.25(s,3H),6.16(s,2H),6.67(d,J＝8.8,2H),7.51(d,J＝8.4Hz,2H)；ESI-MS(m/z)271(M+H)+。
步骤4：叔丁基((4-氨基-3-碘苯基)(甲基)(氧代)-λ6-亚硫基)氨基甲酸酯
向叔丁基((4-氨基苯基)(甲基)(氧代)-λ6-亚硫基)(100mg，0.369mmol)在乙醇(4.0mL)中的溶液中加入硫酸银(115mg，0.369mmol)、碘(94mg，0.369mmol)的混合物。反应混合物在室温下搅拌16h。用MeOH稀释反应混合物，过滤，浓缩滤液。用柱色谱法纯化所得粗产物，产生67mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.28(s,9H),3.34(s,3H),6.252(s,2H),6.83(d,J＝8.8Hz,1H),7.56(dd,J＝2.0Hz,8.4Hz,1H),7.96(d,J＝2Hz,1H)；ESI-MS(m/z)397(M+H)+。
步骤5：叔丁基((4-氨基-3-(二甲基磷酰基)苯基)(甲基)(氧代)-λ6-亚硫基)氨基甲酸酯
通过二甲基氧化膦(15mg，0.189mmol)、叔丁基((4-氨基-3-碘苯基)(甲基)(氧代)-λ6-亚硫基)氨基甲酸酯(50mg，0.126mmol)在DMF(1mL)中、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(7mg，0.012mmol)、磷酸钾(40mg，0.189mmol)、乙酸钯三聚体(9.0mg，0.012mmol)在DMF中的反应，按照中间体A1的步骤4中所述的步骤制备标题化合物，产生27mg所需产物。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.27(s,9H),1.70-1.74(m,6H),3.30(s,3H),6.80(dd,J＝4.0,8.8Hz,1H),7.61(dd,J＝2.0,8.8Hz,1H),7.68(dd,J＝2.40,14.0Hz,1H)；ESI-MS(m/z)347(M+H)+。
中间体A21
(2-羟基苯基)二甲基氧化膦
通过二甲基氧化膦(106mg，1.36mmol)、2-碘苯酚(200mg，0.909mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(53mg，0.09mmol)、K3PO4(289mg，1.36mmol)、乙酸钯三聚体(61mg，0.09mmol)在DMF(3mL)中的反应，按照中间体A1的步骤4中所述的步骤制备标题化合物，产生75mg所需产物。1NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.68(d,J＝13.6Hz,6H),6.85-6.95(m,2H),7.36-7.41(m,1H),7.56-7.61(m,1H),10.73(s,1H)；ESI-MS(m/z)171(M+H)+。
中间体B1
6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
步骤1：3-甲氧基苯乙基氨基甲酸乙酯
在0℃下，向2-(3-甲氧基苯基)乙胺(50g，330.6mmol)在二氯甲烷(300mL)中的搅拌溶液中加入氯甲酸乙酯(34.8mL，363.7mmol)。将混合物逐渐升温至室温，并搅拌2h。将混合物用NaHCO3水溶液碱化，并用水稀释。水层用DCM萃取三次。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，减压浓缩，产生67.5克所需产物。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩，得到67.5g所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.15(t,J＝6.8Hz,3H),2.69(t,J＝7.6Hz,2H),3.21-3.16(m,2H),3.73(s,3H),3.99(q,J＝7.2Hz,2H),6.75-6.77(m,3H),7.14-7.17(m,1H),7.18-7.21(m,1H)；ESI-MS(m/z)224.1(M+H)+。
步骤2：6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮
将3-甲氧基苯乙基氨基甲酸乙酯(67g，300mmol)在聚膦酸(80g)中的搅拌溶液在120℃下搅拌2h。将混合物冷却至0℃，用氨水溶液缓慢碱化并充分搅拌。将得到的固体过滤并用水洗涤，并在真空下干燥，产生26g所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ2.88(t,J＝6.4Hz,2H),3.34-3.36(m,2H),3.80(s,3H),6.85-6.89(m,2H),7.78(d,J＝8.4Hz,1H),7.73(brs,1H)；ESI-MS(m/z)177.08(M+H)+。
步骤3：6-甲氧基-2-甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮
向6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮(33g，186.4mmol)在DMF(240mL)中溶液中加入氢化钠(60％w/w，11.18g，279.66mmol)。将甲基碘(52.95g，372.89mmol)加入混合物中并在室温下搅拌2h。用水淬灭反应混合物并用乙酸乙酯萃取。分离有机层并用无水硫酸钠干燥。将溶剂过滤、浓缩，并用硅胶柱色谱法纯化由此所得剩余物，产生35g所需产物。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ2.99(t,J＝6.8Hz,2H),3.56(s,3H),3.56(t,J＝6.4Hz,2H),3.85(s,3H),6.67(s,1H),6.35(dd,J＝2.4,8.4Hz,1H),8.04(t,J＝6.8Hz,1H)。
步骤4：6-甲氧基-2-甲基-7-硝基-3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮
在-20℃下，向冷却的硫酸(100mL)中缓慢滴加发烟硝酸(2.4mL)，并在相同温度下搅拌20min。在-20℃下，将6-甲氧基-2-甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮(10g，52.36mmol)逐份加入到反应混合物中。将混合物在-20℃下搅拌60min。用冰冷水淬灭混合物，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥，并在减压下除去溶剂。将粗产物在乙醚/乙酸乙酯(1∶1,100mL)中搅拌16h。过滤所得固体，产生9g所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ3.02(s,3H),3.06(t,J＝6.8Hz,2H),3.58(t,J＝6.8Hz,2H),3.98(s,3H),7.33(s,1H),8.26(s,1H)；ESI-MS(m/z)237(M+H)+。
步骤5：7-氨基-6-甲氧基-2-甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮(中间体B1-a)
在10％钯/碳(3g)的存在下，在50psi的氢气压力下，将6-甲氧基-2-甲基-7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉(9g，38.14mmol)在甲醇(200mL)中的溶液，在室温下氢化3h。过滤混合物，并在减压下浓缩滤液。将所得固体用正戊烷研制并在真空下干燥，产生7g所需产物。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ2.83(t,J＝6.8Hz,2H),2.96(s,3H),3.46(d,J＝6.40Hz,2H),3.82(s,3H),5.64(br s,2H),6.73(s,1H),7.27(s,1H)；ESI-MS(m/z)207(M+H)+。
步骤6：6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
在0℃下，向7-氨基-6-甲氧基-2-甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮(7g，33.98mmol)在THF(80mL)中的搅拌溶液中逐份加入氢化铝锂(3.2g，84.95mmol)，并在室温下搅拌30min。将反应混合物在70℃下加热2h。将混合物冷却至0℃，并用冰冷水和15％氢氧化钠水溶液淬灭。混合物用乙酸乙酯稀释，并通过硅藻土床过滤。滤液用无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩，产生3.5g所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ2.28(s,3H),2.48-2.51(m,2H),2.65(t,J＝5.6Hz,2H),3.27(s,2H),3.70(s,3H),4.45(s,2H),6.27(s,1H),6.49(s,1H)；ESI-MS(m/z)193(M+H)+。
通过上述步骤制备的中间体的化学结构、名称和分析数据如下表2所示。
表2：中间体B2至B9的结构、化学名称和分析数据。
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中间体B10
7-氨基-6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯
步骤1：6-甲氧基-7-硝基-3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮
在-20℃下，向冷却的硫酸(256mL)中缓慢滴加发烟硝酸(6.65mL)，并在相同温度下搅拌20min。在-20℃下将6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮(25.6g，52.36mmol)加入反应混合物中并搅拌60min。用冰冷水淬灭反应混合物。将所得固体过滤并用水洗涤并干燥。用硅胶柱色谱法纯化粗产物，产生18.05g所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ3.02(t,J＝6.4Hz,2H),3.39-3.43(m,2H),3.98(s,3H),7.35(s,1H),8.09(brs,1H),8.25(s,1H)；ESI-MS(m/z)222.0(M+H)+。
步骤2：6-甲氧基-7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉
在氮气氛下，在0℃下，向6-甲氧基-7-硝基-3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮(18g，81.08mmol)在THF(250mL)中的溶液中加入硼烷-THF(1M)(324mL，324mmol)。将反应混合物在65℃下加热18h。在0℃下，用6N HCl(120mL)处理反应，并在80℃下热60min。用K2CO3饱和水溶液碱化反应混合物，并用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机层用水洗涤，然后用盐水洗涤。溶液用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。用硅胶柱色谱法纯化由此所得剩余物，产生9.65g所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ2.91(t,J＝6.0Hz,2H),3.13(t,J＝6.0Hz,2H),3.89(s,3H),3.99(s,2H),7.15(s,1H),7.71(s,1H)；ESI-MS(m/z)208.8(M+H)+。
步骤3：6-甲氧基-7-硝基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯
向6-甲氧基-7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉(9.6g，46.15mmol)在二氯甲烷(100mL)中的搅拌溶液中加入三乙胺(9.7mL，69.22mmol)，然后加入二叔丁基碳酸氢盐(11.06g，50.76mmol)，并在室温下搅拌混合物16h。用水稀释反应混合物。含水混合物用氯仿萃取两次，合并的有机萃取物用盐水溶液洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。用硅胶柱色谱法纯化由此所得剩余物，产生8.61g所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.43(s,9H),2.85(t,J＝6.0Hz,2H),3.57(t,J＝5.6Hz,2H),3.89(s,3H),4.48(s,2H),7.18(s,1H),7.79(s,1H)；ESI-MS(m/z)308.8(M+H)+。
步骤4：7-氨基-6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯
在10％钯/碳(3g)的存在下，在35psi氢气压力下，将6-甲氧基-7-硝基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯(6.0g，19.45mmol)在甲醇(120mL)中的搅拌溶液中，在室温下搅拌3h。过滤混合物，并在减压下浓缩滤液。将固体用正戊烷研制并在真空下干燥，产生4.75g所需产物。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.43(s,9H),2.61(t,J＝6.0Hz,2H),3.50(t,J＝5.6Hz,2H),3.72(s,3H),4.29(brs,2H),4.55(s,2H),6.36(s,1H),6.55(s,1H)；ESI-MS(m/z)279.1(M+H)+。
中间体B11
6-(甲氧基-d3)-3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮
步骤1：6-羟基-3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮
将6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮(10g，56.49mmol)在47％HBr水溶液(150mL)中的搅拌溶液加热至100℃保持18h。在真空下蒸发溶剂，将所得剩余物在0℃下用饱和碳酸氢钠溶液碱化并搅拌10min。通过烧结漏斗过滤所得固体，用水洗涤并在减压下干燥，产生6.01g所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ2.79-2.81(m,2H),3.29-3.31(m,2H),6.62(s,1H),6.68-6.70(m,1H),7.61(bs,1H),7.67(d,J＝8.4Hz,1H),9.99(bs,1H)；ESI-MS(m/z)163.2(M+H)+。
步骤2：6-(甲氧基-d3)-3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮
向6-羟基-3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮(12.0g，73.61mmol)在DMF(120mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(11.2g，80.97mmol)，并在室温下搅拌20min。加入甲基-d3碘化物(5.3mL，80.98mmol)并搅拌过夜。用水稀释反应混合物，并用乙酸乙酯萃取。将有机层用无水硫酸钠干燥并浓缩。将所得剩余物在乙醚中搅拌，过滤并在真空下干燥，产生11.56g所需产物。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ2.86-2.89(m,2H),3.34-3.65(m,2H),6.84-6.89(m,2H),7.76(s,1H),7.83(s,1H)；ESI+MS(m/z)181.1(M+H)+。
按照上述步骤制备的中间体的分析数据如下表3所示。
表3：中间体B12的结构、化学名称和分析数据。
中间体B13
7-氨基-6-(甲氧基-d3)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯-1,1-d2
步骤1：6-(甲氧基-d3)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1,1-d2
在0℃下，向氘化锂铝(465mg，11.11mmol)在THF(20mL)中的搅拌悬浮液中加入6-(甲氧基-d3)-3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮(500mg，2.77mmol)，并在密封管中加热至120℃保持16h。用5mL水缓慢淬灭反应混合物，然后用0.5mL 15％NaOH溶液和1.5mL水淬灭反应混合物，并在室温下搅拌30min。用乙酸乙酯稀释反应混合物，通过硅藻土床过滤。将所得滤液在真空下浓缩，产生476mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ2.64(t,J＝6Hz,2H),2.89(t,J＝6Hz,2H),6.62(d,J＝2.4Hz,1H),6.70-6.80(m,1H),6.9(d,J＝2.4Hz,1H)；ESI-MS(m/z)169(M+H)+。
步骤2：2,2,2-三氟-1-(6-(甲氧基-d3)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基-1,1-d2)乙酮
在0℃下，向6-(甲氧基-d3)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1,1-d2(600mg，3.64mmol)在DCM(20mL)中的搅拌溶液中加入吡啶(875μL，10.843mmol)，然后加入TFAA(1.5mL，10.84mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。用水稀释反应混合物，并用乙酸乙酯萃取。分离有机层，用无水硫酸钠干燥并浓缩。用柱色谱法纯化所得剩余物，产生435mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ2.80-2.95(m,2H),3.70-3.85(m,2H),6.70-6.85(m,2H),7.15-7.25(m,1H)；ESI-MS(m/z)265.1(M+H)+。
步骤3：2,2,2-三氟-1-(6-(甲氧基-d3)-7-硝基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基-1,1-d2)乙-1-酮
在0℃下，向2,2,2-三氟-1-(6-(甲氧基-d3)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基-1,1-d2)乙酮(700mg，2.64mmol)在TFA(12mL)中的搅拌溶液中，逐滴加入90％HNO3(203mg，2.905mmol)在TFA(3mL)中的溶液并搅拌1h。用碳酸氢钠水溶液碱化反应混合物，并用乙酸乙酯萃取。分离有机层，用无水硫酸钠干燥并浓缩。用柱色谱法纯化所得剩余物，产生372mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ2.95-3.10(m,2H),3.80-3.95(m,2H),7.24(s,1H),7.90(s,1H)。
步骤4：6-(甲氧基-d3)-7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1,1-d2
向2,2,2-三氟-1-(6-(甲氧基-d3)-7-硝基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基-1,1-d2)乙-1-酮(360mg，1.165mmol)在THF(7mL)中的搅拌溶液中加入NaOH(79mg，1.98mmol)在水(2mL)中的溶液，并在室温下搅拌过夜。将反应混合物用水稀释并用DCM萃取。分离有机层并用无水硫酸钠干燥。过滤溶剂并在减压下浓缩，产生257mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ2.70-2.80(m,2H),2.85(brs,1H),2.90-3.00(m,2H),7.05(s,1H),7.59(s,1H)。
步骤5：6-(甲氧基-d3)-7-硝基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯-1,1-d2
向6-(甲氧基-d3)-7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1,1-d2(250mg，1.173mmol)在DCM(5mL)中的搅拌溶液中加入DIPEA(404μL，2.346mmol)，然后加入Boc-酸酐(383mg，1.76mmol)并在室温下搅拌过夜。用水稀释反应混合物，并用乙酸乙酯萃取。将有机层用无水硫酸钠干燥并浓缩。用硅胶色谱法纯化所得剩余物，产生247mg所需化合物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.42(s,9H),2.80-2.95(m,2H),3.50-3.65(m,2H),7.17(s,1H),7.79(s,1H)。
步骤6：7-氨基-6-(甲氧基-d3)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯-1,1-d2
在室温下，向6-(甲氧基-d3)-7-硝基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯-1,1-d2(240mg，0.766mmol)在MeOH(10mL)中的搅拌溶液中加入Pd/C(10％，100mg)。反应混合物在氢气气氛(气球压力)下在室温下搅拌2h。反应混合物通过硅藻土床过滤，所得滤液在减压下浓缩，产生195mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.41(s,9H),2.6(t,J＝6Hz,2H),3.40-3.55(m,2H),4.62(brs,2H),6.37(s,1H),6.55(s,1H)；ESI-MS(m/z)228.1(M-55)+。
中间体B14
6-(二氟甲氧基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
步骤1：6-羟基-7-硝基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯
将6-甲氧基-7-硝基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯(1.2g)在47％HBr水溶液(20mL)中的搅拌溶液加热至120-130℃，保持18h。在减压下浓缩反应混合物。将所得化合物7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-醇(1g，3.63mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，加入DIPEA(1.8g，14.52mmol)，然后加入二叔丁基碳酸氢盐(801mg，4mmol)。将反应混合物在室温下搅拌18h。在减压下浓缩反应混合物。用硅胶柱色谱法纯化由此所得剩余物，产生700mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.42(s,9H),2.50-2.51(m,2H),3.32-3.34(m,2H),4.46(brs,2H),6.92(s,1H),7.80(s,1H),10.73(s,1H)；ESI-MS(m/z)295.42(M+H)+。
步骤2：6-(二氟甲氧基)-7-硝基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯
在0℃下，向6-羟基-7-硝基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯(25mg，0.0085mmol)在乙腈(2mL)中的搅拌溶液中加入KOH水溶液(95mg，1.7mmol)，随后在0℃下加入溴氟甲基磷酸二乙酯(45mg，0.170mmol)，并在0℃下搅拌30min，在室温下搅拌2h。混合物用水淬灭，用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥，并在减压下除去溶剂。用硅胶柱色谱法纯化由此所得剩余物，产生19mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(400MHz,DMSO-d6)δ1.43(s,9H),2.87-2.90(m,2H),3.55-3.58(m,2H),4.57(bs,2H),7.29(t,J＝72.8Hz,1H),7.35(s,1H),8.00(s,1H)。
步骤3：6-(二氟甲氧基)-2-甲基-7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉
向6-(二氟甲氧基)-7-硝基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯(300mg)在DCM(10mL)中的搅拌溶液中加入TFA(1mL)并在室温下搅拌1h。浓缩反应混合物并用饱和NaHCO3中和。水层用10％DCM/MeOH萃取三次。分离有机层，用无水硫酸钠干燥并浓缩。将由此所得剩余物用于下一步骤。向6-(二氟甲氧基)-7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉(250mg，1.024mmol)在DCM(5mL)中的搅拌溶液中加入37％甲醛溶液(1mL)和一滴乙酸，并在室温下搅拌30min。在0℃下将氰基硼氢化钠(244mg，4.096)加入该混合物中，并在室温下搅拌18h。用饱和NaHCO3淬灭混合物，并用10％DCM/MeOH萃取三次。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。用硅胶柱色谱法纯化所得剩余物，产生130mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ2.35(s,3H),2.59-2.62(m,2H),2.90-2.93(m,2H),3.52(brs,2H),7.28(s,1H),7.28(t,J＝72Hz,1H),7.85(s,1H)；ESI-MS(m/z)259.29(M+H)+。
步骤4：6-(二氟甲氧基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
在钯/碳(75mg)的存在下，在parr振荡器中，在50-60psi氢气压力下，将6-(二氟甲氧基)-2-甲基-7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉(130mg，0.503mmol)在甲醇/DCM(13mL)中的搅拌溶液氢化2h。过滤反应混合物，并在减压下浓缩所得滤液。将所得固体用正戊烷研制并在真空下干燥，产生110mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ2.68(s,3H),2.79-2.83(m,2H),3.11-3.16(m,2H),3.92(bs,2H),4.38(bs,2H),6.48(s,1H),6.82(s,1H)7.00(t,J＝74.8Hz,1H)；ESI-MS(m/z)229.11(M+H)+。
中间体B15
6-甲氧基-1,2-二甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
步骤1：N-(3-甲氧基苯乙基)乙酰胺
在0℃下，向2-(3-甲氧基苯基)乙胺(5g，33mmol)在二氯甲烷(100mL)中的搅拌溶液中加入三乙胺(14mL，99mmol)，然后加入乙酰氯(3.53mL，49.60mmol)。混合物在室温下搅拌2h。反应混合物用1N HCl酸化并用DCM萃取。分离有机层并用无水硫酸钠干燥。在减压下除去溶剂，产生6.7g所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.78(s,3H),2.69(t,J＝7.6Hz,2H),3.27-3.22(m,2H),3.73(s,3H),6.77-6.76(m,3H),7.22-7.18(m,1H),7.91(bs,1H)；ESI-MS(m/z)194.2(M+H)+。
步骤2：6-甲氧基-1-甲基-3,4-二氢异喹啉
在40℃下，向N-(3-甲氧基苯乙基)乙酰胺(4.0g，20.72mmol)在甲苯(80mL)中的搅拌溶液中滴加POCl3(3.80mL，41.45mmol)，并加热回流2h。将反应混合物冷却至0℃，用水淬灭并用DCM洗涤。水层用50％NaOH溶液碱化，并用DCM萃取。将有机层用无水硫酸钠干燥，并在减压下除去溶剂，产生2.51g所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ2.24(s,3H),2.62(t,J＝7.6Hz,2H),3.49(t,J＝7.6Hz,2H),3.79(s,3H),6.86-6.82(m,2H),7.48(d,J＝8.4Hz,1H)；ESI-MS(m/z)176.2(M+H)+。
步骤3：6-甲氧基-1,2-二甲基-3,4-二氢异喹啉-2-鎓碘化物
向6-甲氧基-1-甲基-3,4-二氢异喹啉(1.5g，8.56mmol)在丙酮(30mL)中的搅拌溶液中加入甲基碘(0.590mL，9.41mmol)，并在室温下搅拌18h。在减压下除去溶剂，产生2.3g所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ2.75(s,3H),3.13(t,J＝7.6Hz,2H),3.65(s,3H),3.91(s,3H),3.99(t,J＝7.2Hz,2H),7.07(s,1H),7.06(d,J＝2.8Hz,1H),8.07(d,J＝9.6Hz,1H),ESI-MS(m/z)190.2(M+H)+。
步骤4：6-甲氧基-1,2-二甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉
在0℃下，向6-甲氧基-1,2-二甲基-3,4-二氢异喹啉-2-鎓碘化物(1.0g，3.154mmol)在甲醇(20mL)中的搅拌溶液中缓慢逐份加入NaBH4(239mg，6.309mmol)，并在室温下搅拌过夜。将反应混合物用水稀释并用DCM萃取。将有机层用无水硫酸钠干燥，并在减压下除去溶剂，产生615mg所需产物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.40(d,J＝6.4Hz,3H),2.49(s,3H),2.67-2.61(m,1H),2.90-2.79(m,2H),3.07-3.01(m,1H),3.59-3.55(m,1H),3.80(s,3H)；ESI-MS(m/z)192.2(M+H)+。
步骤5：6-甲氧基-1,2-二甲基-7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉
向6-甲氧基-1,2-二甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉(600mg，3.14mmol)在浓H2SO4(9mL)中的搅拌溶液中加入硝酸胍(326mg，2.67mmol)并搅拌1h。用饱和NaHCO3溶液碱化反应混合物，并用乙酸乙酯萃取。有机层用无水硫酸钠干燥并过滤。在减压下除去溶剂，产生207mg所需产物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.41(d,J＝6.8Hz,3H),2.49(s,3H),2.69-2.63(m,1H),3.08-2.85(m,3H),3.61(m,1H),3.95(s,3H),6.78(s,1H),7.71(s,1H),ESI-MS(m/z)237.2(M+H)+。
步骤6：6-甲氧基-1,2-二甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
在氢气氛下，在10％Pd/C(100mg)的存在下，将6-甲氧基-1,2-二甲基-7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉(220mg，0.932mmol)在甲醇(5mL)中的搅拌溶液氢化1h。用甲醇稀释反应混合物，并通过硅藻土床过滤。将所得滤液在减压下浓缩，产生191mg所需产物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.40(d,J＝6.8Hz,3H),2.49(s,3H),2.70-2.75(m,2H),2.81-2.93(m,2H),3.09-3.10(m,1H),3.86(s,3H),4.50(brs,2H),6.48(s,1H),6.50(s,1H)；ESI-MS(m/z)207.2(M+H)+。
中间体B15(a-b)
6-甲氧基-1,2-二甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺(异构体-1和异构体-2)
外消旋甲氧基-1,2-二甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺(1.2g)用超临界流体色谱法(SFC)纯化，使用(S,S)-Whelk-O1((4.6×150)mm，5μ)柱，0.1％氨/甲醇作为流动相(波长210-400nm)，得到异构体-1(400mg)和异构体-2(325mg)。
B15-a(异构体1)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.37(d,J＝6.4Hz,3H),2.50(s,3H),2.72-2.78(m,2H),2.80-2.93(m,2H),3.15-3.22(m,1H),3.85(s,3H),4.58(brs,2H),6.42(s,1H),6.52(s,1H)；ESI-MS(m/z)207.2(M+H)+。
B15-b(异构体2)： 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.37(d,J＝6.4Hz,3H),2.50(s,3H),2.76-2.78(m,2H),2.85-2.93(m,2H),3.19-3.22(m,1H),3.80(s,3H),4.58(brs,2H),6.40(s,1H),6.52(s,1H)；ESI-MS(m/z)207.2(M+H)+。
中间体B16
6-甲氧基-1,1,2-三甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
步骤1：6-甲氧基-1,1,2-三甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉
在-78℃下，向6-甲氧基-1,2-二甲基-3,4-二氢异喹啉-2-鎓碘化物(800mg，2.52mmol)在干THF(8mL)中的搅拌溶液中缓慢加入甲基溴化镁(在THF中的1.5M溶液)(239mg，6.309mmol)并搅拌1h。将反应混合物缓慢加热至室温，然后在室温下搅拌2天。用水稀释反应混合物，并用乙酸乙酯萃取。有机层用无水硫酸钠干燥并过滤。在减压下除去溶剂，产生697mg所需产物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.41(s,6H),2.45(s,3H),2.90-2.86(m,4H),3.79(s,3H),6.59(d,J＝2.4Hz,1H),6.77(dd,J＝2.8Hz,8.8Hz,1H),7.19(d,J＝8.8Hz,1H)；ESI-MS(m/z)206.2(M+H)+。
步骤2：6-甲氧基-1,1,2-三甲基-7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉
在0℃下，向6-甲氧基-1,1,2-三甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉(550mg，2.68mmol)在浓H2SO4(8mL)中的搅拌溶液中加入硝酸胍(278mg，2.27mmol)，并搅拌1h。用饱和NaHCO3溶液碱化反应混合物，并用乙酸乙酯萃取。有机层用无水硫酸钠干燥并过滤。在减压下除去溶剂，产生117mg所需产物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.42(s,3H),2.46(s,2H),2.91(s,2H),3.94(s,3H),6.74(s,1H),7.84(s,1H),ESI-MS(m/z)251.2(M+H)+。
步骤3：6-甲氧基-1,1,2-三甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
在10％Pd/C(20mg)存在下，将6-甲氧基-1,1,2-三甲基-7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉(110mg，0.44mmol)在甲醇(5mL)中的搅拌溶液氢化，并在氢气气氛下搅拌1h。用甲醇稀释反应混合物，并通过硅藻土床过滤。将所得滤液在减压下浓缩，产生79mg所需产物。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ1.42(d,J＝14.8Hz,6H),2.45(s,3H),2.80(t,J＝6.0Hz,2H),2.91(t,J＝5.6Hz,2H),3.83(s,3H),3.86(s,2H),6.46(s,1H),6.62(s,1H),ESI-MS(m/z)221.2(M+H)+。
中间体B17
6-甲氧基-2,3-二甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
步骤1：(E)-N-(1-(3-甲氧基苯基)丙-2-亚基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
向1-(3-甲氧基苯基)丙-2-酮(2.0g，12.18mmol)和2-甲基-2-丙烷磺酰胺(2.2g，18.27mmol)在THF(50mL)中的搅拌溶液中加入乙醇钛(IV)(6.4mL，30.45mmol)并加热回流18h。用乙酸乙酯稀释反应混合物并用水淬灭。分离有机层并在减压下浓缩，产生3.26g所需粗产物。1H NMR(400MHz DMSO-d6)δ1.03(d,J＝6.4Hz,3H),1.09(s,9H),2.61-2.67(m,1H),2.92-2.96(m,1H),2.30-2.34(m,1H),3.79(s,3H),4.97(d,J＝6.4Hz,1H),6.76-6.79(m,1H),7.18-7.22(m,3H)；ESI-MS(m/z)270.1(M+H)+。
步骤2：(E)-N-(1-(3-甲氧基苯基)丙-2-亚基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
向(E)-N-(1-(3-甲氧基苯基)丙-2-亚基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(3.25g，12.17mmol)在THF(60mL)中的搅拌溶液中加入硼氢化钠(920mg，24.34mmol)，并在室温下搅拌过夜。将反应混合物用甲醇淬灭并浓缩。将所得剩余物用乙酸乙酯稀释并用水洗涤。分离有机层，用无水硫酸钠干燥并浓缩。用硅胶色谱法纯化所得剩余物，产生3.27g所需化合物。1HNMR(400MHz DMSO-d6)δ1.03(d,J＝6.4Hz,3H),1.09(s,9H),2.61-2.67(m,1H),2.92-2.96(m,1H),2.30-2.34(m,1H),3.79(s,3H),4.97(d,J＝6.4Hz,1H),6.76-6.79(m,1H),7.18-7.22(m,3H)；ESI-MS(m/z)270.1(M+H)+。
步骤3：1-(3-甲氧基苯基)丙-2-胺
向N-(1-(3-甲氧基苯基)丙-2-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(3.26g)在1,4-二噁烷(20mL)中的搅拌溶液中加入4M HCl在二噁烷(10mL)中，并在室温下搅拌过夜。反应混合物用饱和碳酸氢钠溶液碱化，并用乙酸乙酯萃取。有机层用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，产生1.97g所需产物。ESI-MS(m/z)166.2(M+H)+。
步骤4：6-甲氧基-3-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉甲酸酯
向1-(3-甲氧基苯基)丙-2-胺(1.96g，11.87mmol)在甲酸(20mL)中的搅拌溶液中加入甲醛(4.8mL，59.39mmol)，并在室温下搅拌过夜。在真空下蒸发溶剂，所得剩余物用甲醇(30mL)稀释，滴加乙酰氯(2mL)，并在室温下搅拌30min。在减压下蒸发溶剂并用乙酸乙酯和乙醚洗涤所得剩余物。将所得固体过滤并干燥，得到1.64g作为甲酸盐的所需产物。ESI-MS(m/z)178.2(M+H)+。
步骤5：6-甲氧基-2,3-二甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉
在0℃下，向6-甲氧基-3-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉甲酸酯(1.6g，8.37mmol)在甲醇(20mL)中的搅拌溶液中逐份加入甲醛(4.8mL)、NaBH4(1.1g，29.3mmol)，并在室温下搅拌3h。在减压下浓缩反应混合物，使用NaHCO3溶液碱化所得剩余物，并用乙酸乙酯萃取。有机层用无水硫酸钠干燥。在减压下除去溶剂，产生1.2g所需化合物。1H NMR(400MHz CDCl3)δ1.18(d,J＝6Hz,3H),2.42(s,3H),2.61-2.70(m,2H),2.81-2.83(m,1H),3.49-3.53(m,1H),3.80(s,3H),6.62(s,1H),6.69-6.72(m,1H),6.95(d,J＝8.4Hz,1H)；ESI-MS(m/z)192.1(M+H)+。
步骤6：6-甲氧基-2,3-二甲基-7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉
在-10℃下，向6-甲氧基-2,3-二甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉(1g，5.23mmol)在TFA(10mL)中的搅拌溶液中加入浓HNO3(0.218mL)，搅拌30min并加热至室温，保持1h。将反应混合物在0℃下用1N NaOH溶液缓慢淬灭并搅拌5分钟。过滤所得固体并用水洗涤。用硅胶柱色谱法纯化所得固体，产生405mg所需化合物。1H NMR(400MHz DMSO-d6))δ1.06(d,J＝6Hz,3H),2.28(s,3H),2.56-2.61(m,2H),2.88-2.94(m,1H),3.38-3.42(m,1H),3.69-3.72(m,1H),3.87(s,3H),7.07(s,1H),7.63(s,1H)；ESI-MS(m/z)237.1(M+H)+。
步骤7：6-甲氧基-2,3-二甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
在10％Pd/C(180mg)的存在下，将6-甲氧基-2,3-二甲基-7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉(390mg，164mmol)在甲醇(10mL)中的搅拌溶液氢化，并在氢气气氛下搅拌1h。用甲醇稀释反应混合物，通过硅藻土床过滤并用甲醇洗涤。将所得滤液在减压下浓缩，产生305mg所需化合物。1H NMR(400MHz DMSO-d6))δ1.02(d,J＝6Hz,3H),2.24(s,3H),2.44-2.47(m,2H),2.60-2.65(m,1H),3.22-3.26(m,1H),3.48-3.52(m,1H),3.72(s,3H),4.44(brs,2H),6.27(s,1H),6.46(s,1H)；ESI-MS(m/z)207.1(M+H)+。
中间体B18
6-甲氧基-2,3,3-三甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
步骤1：1-(3-甲氧基苯基)-2-甲基丙-2-醇
在0℃下，向1-(3-甲氧基苯基)丙-2-酮(9g，49mmol)在干THF(100mL)中的搅拌悬浮液中加入1.5M甲基溴化镁(100mL，143mmol)，并在相同温度下搅拌3小时并在室温下过夜。反应混合物用饱和氯化铵溶液稀释，用乙酸乙酯萃取三次。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩。用柱色谱法纯化由此所得剩余物，产生5.10g所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.26(s,6H),2.77(s,2H),3.82(s,3H),6.79-6.84(m,3H),7.23-7.28(m,1H)；ESI-MS(m/z)181.26(M+H)+。
步骤-2：1-(2-叠氮基-2-甲基丙基)-3-甲氧基苯
在0℃下，向1-(3-甲氧基苯基)-2-甲基丙-2-醇(5.0g，27.0mmol)在干DCM(100mL)中的搅拌悬浮液中加入叠氮化钠(3.97g，61.11mmol)和TFA(11mL，135mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物用碳酸氢钠溶液碱化，用DCM萃取三次。分离有机层，用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。用硅胶柱色谱法纯化由此所得剩余物，产生5g所需产物。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.24(s,6H),2.61(s,2H),3.72(s,3H),6.75-6.77(m,3H),7.14-7.18(m,1H)；ESI-MS(m/z)206.38(M+H)+。
步骤3：1-(3-甲氧基苯基)-2-甲基丙-2-胺
在10％Pd/C(1g)的存在下，向1-(2-叠氮基-2-甲基丙基)-3-甲氧基苯(5.0g，24.3mmol)在干EtOAc(100mL)中的搅拌悬浮液中进行氢化(气球法)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物通过硅藻土床过滤并用乙酸乙酯洗涤。将所得滤液在减压下浓缩。用硅胶柱色谱法纯化由此所得剩余物，产生2.50g所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.12(s,6H),1.87(brs,2H),2.71(s,2H),3.74(s,3H),6.79-6.84(m,3H),7.21-7.25(m,1H)；ESI-MS(m/z)180.13(M+H)+。
步骤4：6-甲氧基-3,3-二甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉
在0℃下，向1-(3-甲氧基苯基)-2-甲基丙-2-胺(2.5g，13.80mmol)在甲酸(25mL)中的搅拌悬浮液中加入37％甲醛溶液(6mL，69.40mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物用碳酸氢钠溶液碱化，用DCM萃取三次。分离有机层，用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。用硅胶柱色谱法纯化由此所得剩余物，产生1.5g所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.34(s,6H),2.72(s,2H),2.88(s,2H),3.74(s,3H),6.75(s,1H),6.84(d,J＝8.4Hz,1H),7.16(d,J＝8.4Hz,1H)；ESI-MS(m/z)192.56(M+H)+。
步骤5：6-甲氧基-2,3,3-三甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉
在0℃下，向6-甲氧基-3,3-二甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉(1.5g，7.80mmol)在甲醇(10mL)中的搅拌悬浮液中加入37％甲醛溶液(3mL，23.4mmol)和乙酸(0.2mL)。将反应混合物在RT下搅拌5小时，然后加入硼氢化钠(0.59g，15.7mmol)，并在室温下搅拌过夜。反应混合物用碳酸氢钠水溶液碱化，并用DCM萃取三次。分离有机层，用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。用硅胶柱色谱法纯化由此所得剩余物，产生1.2g所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.98(s,6H),2.22(s,2H),2.57(s,2H),3.52(s,3H),3.74(s,3H),6.60(s,1H),6.67(d,J＝8.4Hz,1H),6.96(d,J＝8.4Hz,1H)；(m/z)206.97(M+H)+。
步骤6：6-甲氧基-2,3,3-三甲基-7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉
在-10℃下，向6-甲氧基-2,3,3-三甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉(1.0g，48.0mmol)在TFA(10mL)中的搅拌悬浮液中逐份加入硝酸钾(0.44g，44.30mmol)。将反应混合物在-10℃下搅拌3h。用碳酸氢钠溶液碱化反应混合物，并用DCM萃取三次。分离有机层，用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。用硅胶柱色谱法纯化由此所得残留物，产生0.60g所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.00(s,6H),2.24(s,2H),2.51(s,2H),3.59(s,3H),3.87(s,3H),7.70(s,1H),7.64(s,1H)；(m/z)251.45(M+H)+。
步骤7：6-甲氧基-2,3,3-三甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
在10％Pd/C(0.1g)存在下，将6-甲氧基-2,3,3-三甲基-7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉(0.5g，20mmol)在干MeOH(100mL)中的搅拌悬浮液进行氢化(气球法)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物通过硅藻土床过滤并用甲醇洗涤。将所得滤液在减压下浓缩。用硅胶柱色谱法纯化由此所得剩余物，产生0.25g所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO)δ0.96(s,6H),2.19(s,3H|),2.45(s,2H),3.40(s,2H),3.70(s,3H),4.42(brs,2H),6.28(s,1H),6.44(s,1H)；ESI-MS(m/z)221.32(M+H)+。
中间体B19
2-甲氧基-6-甲基-5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-3-胺
步骤1：6-甲基-3-硝基-5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶
在密封管中，将1-甲基-3,5-二硝基-1H-吡啶-2-酮(200mg，1.00mmol)和1-甲基-4-哌啶酮(125mg，1.11mmol)在7M NH3在二噁烷(3mL)中的搅拌悬浮液在60℃加热16h。浓缩反应混合物并用DCM稀释。有机层用碳酸氢钠水溶液洗涤，然后用盐水溶液洗涤。分离有机层，用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。用硅胶柱色谱法纯化所所得剩余物，产生110mg所需产物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ2.54(s,3H),2.87(t,J＝6Hz,2H),3.19(t,J＝5.6Hz,2H),3.71(s,2H),8.15(d,J＝2.4Hz,1H),8.24(d,J＝2.4Hz,1H),ESI-MS(m/z)194.2(M+H)+。
步骤2：6-甲基-5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-3-胺
在10％Pd/C(40mg)的存在下，将6-甲基-3-硝基-5,6,7,8-四氢-1,6-萘吡啶(105mg，0.54mmol)在MeOH(10mL)中的搅拌悬浮液氢化并搅拌2h。用MeOH稀释反应混合物并通过硅藻土床过滤。将所得滤液在真空下浓缩，产生76mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6))δ2.31(s,3H),2.61(t,J＝5.6Hz,2H),2.69(t,J＝6Hz,2H),3.36(s,2H),5.02(brs,2H),6.57(d,J＝2.4Hz,1H),7.73(d,J＝2.4Hz,1H)；ESI-MS(m/z)164.3(M+H)+。
步骤3：2-溴-6-甲基-5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-3-胺
向6-甲基-5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-3-胺(700mg，4.29mmol)在AcOH(13.5mL)中的搅拌悬浮液中加入乙酸钠(704mg，8.58mmol)，然后逐滴加入溴(682mg，4.29mmol)。将所得混合物在室温下搅拌2h。用DCM稀释反应混合物并用NaHCO3水溶液洗涤。分离有机层并用盐水溶液洗涤。分离有机层，用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将所得剩余物用乙醚研制，在真空下过滤，产生691mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6))δ2.32(s,3H),2.61(t,J＝5.6Hz,2H),2.70(t,J＝5.6Hz,2H),3.37(s,2H),5.23(s,2H),6.78(s,1H),ESI-MS(m/z)243.12(M+2H)+。
步骤4：2-甲氧基-6-甲基-5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-3-胺
在微波小瓶中，向2-溴-6-甲基-5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-3-胺(500mg，2.06mmol)和1,10-邻菲咯啉(74.4mg，0.413mmol)在脱气的MeOH(12mL)中的搅拌悬浮液中加入碳酸铯(1.35g，4.13mmol)，然后加入CuI(39mg，0.206mmol)。将反应混合物置于100℃加热的微波辐射下2h。浓缩反应混合物，将所得剩余物溶解在乙酸乙酯(100mL)中，并用盐水溶液洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。用硅胶柱色谱法纯化如此所得剩余物，产生146mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6))δ2.32(s,3H),2.61-2.65(m,4H),3.34(s,2H),3.80(s,3H),4.69(brs,2H),6.55(s,1H)；ESI-MS(m/z)194.2(M+H)+。
中间体B20
6-甲氧基异苯并二氢吡喃-7-胺
步骤1：2-(3-甲氧基-4-硝基苯基)丙二酸二乙酯
向丙二酸二乙酯(7.0gm，43.8mmol)在DMF(50mL)中的搅拌悬浮液中逐份加入NaH(3.5gm，73.0mmol)，并在0℃下搅拌30min。向该反应混合物中加入4-氟-2-甲氧基-1-硝基苯(5.0g，29.2mmol)，并在100℃下搅拌2h。用冰冷水淬灭反应混合物，并用乙酸乙酯萃取。分离有机层，用无水硫酸钠干燥并浓缩。用柱色谱法纯化所得剩余物，产生4.1g所需产物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.29(t,J＝7.2Hz,6H),3.90(s,3H),4.20-4.29(m,4H),7.05(d,J＝8.4Hz,1H),7.23(s,1H),7.84(d,J＝8.4Hz,1H)；ESI-MS(m/z)312.1(M+H)+。
步骤2：2-(3-甲氧基-4-硝基苯基)乙酸
将2-(3-甲氧基-4-硝基苯基)丙二酸二乙酯(4.0g，12.8mmol)在AcOH(20mL)和浓HCl(20mL)中的搅拌溶液中，在100℃下搅拌16h。将反应混合物浓缩并用水稀释。水层用EtOAC萃取两次。将有机层分离出来并用无水硫酸钠干燥。将有机层在真空下浓缩，产生2.2g所需化合物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ3.71(s,2H),3.90(s,3H),7.00-7.02(m,1H),7.29(d,J＝1.2Hz,1H).7.83(d,J＝8.4Hz,1H),12.57(s,1H)。
步骤3：2-(3-甲氧基-4-硝基苯基)乙醇
在0℃下，向2-(3-甲氧基-4-硝基苯基)乙酸(2.2g，10.4mmol)在THF(20mL)中的搅拌溶液中加入LAH(0.79g，20.8mmol)。将反应混合物在室温下搅拌30min。用水淬灭反应混合物，并用乙酸乙酯萃取两次。将有机层分离出来并用无水硫酸钠干燥。将有机层在真空下浓缩，并用柱色谱法纯化所得剩余物，产生700mg所需化合物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ2.94(t,J＝6.4Hz,2H),3.86-3.98(m,6H),6.92(d,J＝8.4Hz,1H),6.98(s,1H),7.85,(d,J＝8.4Hz,1H),ESI-MS(m/z)198.2(M+H)+。
步骤4：2-甲氧基-4-(2-(甲氧基甲氧基)乙基)-1-硝基苯
在0℃下，向2-(3-甲氧基-4-硝基苯基)乙醇(700mg，3.04mmol)在DCM(6mL)中的搅拌溶液中加入DIPEA(1.5mL，9.13mmol)和MOM-Cl(1.15mL，15.2mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3h。用水稀释反应混合物，用乙酸乙酯萃取两次。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩，产生705mg所需化合物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δδ2.97(t,J＝6.8Hz,2H),3.31(s,3H),3.81(t,J＝6.4Hz,2H),3.98(s,3H),4.63(s,2H),6.93,(d,J＝8.0Hz,1H),6.98(s,1H),7.84,(d,J＝8.4Hz,1H),ESI-MS(m/z)242.2(M+H)+。
步骤5：6-甲氧基-7-硝基异苯并二氢吡喃
向2-甲氧基-4-(2-(甲氧基甲氧基)乙基)-1-硝基苯(700mg，2.90mmol)在DCE(10mL)中的搅拌混合物中加入PTSA(275mg，1.45mmol)，并在90℃下搅拌16h。用水稀释反应混合物，并用DCM萃取。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩。用柱色谱法纯化所得剩余物，产生350mg所需化合物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ2.92(t,J＝5.6Hz,2H),3.96-4.01(m,5H),4.75(s,2H),6.84(s,1H),7.58(s,1H)。
步骤6：6-甲氧基异苯并二氢吡喃-7-胺
向6-甲氧基-7-硝基异色满(步骤5中间体)(360mg，1.72mmol)在IPA(7mL)和H2O(3mL)中的搅拌溶液中加入NH4Cl(460mg，8.6mmol)和铁粉(506mg，8.6mmol)，并在100℃下搅拌2h。通过硅藻土床过滤反应混合物，用水稀释所得滤液，并用乙酸乙酯萃取两次。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩。用柱色谱法纯化所得剩余物，产生192mg所需化合物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ2.76(t,J＝5.6Hz,2H),3.72(s,2H),3.85(s,3H),3.95(t,J＝5.6Hz,2H),4.66(s,2H),6.35(s,1H),6.54(s,1H).ESI-MS(m/z)180.2(M+H)+。
中间体B21
3-氨基-1-甲基-4,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-5(1H)-羧酸叔丁酯
向3-氰基-4-氧代吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(5g，23mmol)在IPA(60mL)中的搅拌溶液中加入硫酸甲基肼(6.85g，47mmol)、三乙胺(8.3mL，59mmol)，并加热回流18h。在真空下浓缩反应混合物。所得剩余物用碳酸钾水溶液碱化，并用乙酸乙酯萃取三次。分离有机层，用硫酸钠干燥并在减压下浓缩，产生2.6g所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.43(s,9H),3.47(s,3H),4.10-4.14(m,4H),5.31(brs,2H)。
实施例
方法A
(2-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-5-羟基苯基)二甲基氧化膦二盐酸盐(实施例1)
步骤1：(2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-5-((4-甲氧基苄基)氧基)苯基)二甲基氧化膦
在室温下，向2,4,5-三氯嘧啶(7g，38.3mmol)在异丙醇(50mL)中的搅拌溶液中加入(2-氨基-5-((4-甲氧基苄基)氧基)苯基)二甲基氧化膦(中间体A1)(5.84g，19.14mmol)、DIPEA(5g，38.3mmol)。在密封管中，将反应混合物于100℃加热过夜。将反应混合物在减压下浓缩。用硅胶柱色谱法纯化由此所得剩余物，产生5.83g所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.79(d,J＝13.6Hz,6H),3.76(s,3H),5.07(s,2H)6.97(d,J＝8.8Hz,2H),7.27-7.30(m,2H),7.42(d,J＝8.8Hz,2H),8.26-8.29(m,1H),8.39(s,1H),11.50(s,1H)；ESI-MS(m/z)452.1(M+H)+。
步骤2：(2-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-5-羟基苯基)二甲基氧化膦
向(2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-5-((4-甲氧基苄基)氧基)苯基)二甲基氧化膦(步骤1中间体)(5.2g，11.44mmol)在IPA(40mL)中的搅拌悬浮液中加入6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺(中间体B1)(2g，10.4mmol)和对甲苯磺酸一水合物(2g，10.4mmol)。在密封管中，将混合物于120℃下加热过夜。用水稀释反应混合物，用氨水碱化，并用10％甲醇的氯仿萃取三次。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。通过在回流温度下，在IPA(30mL)中搅拌2h来纯化由此所得固体，然后冷却至室温并过滤，产生2.2g所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.68(d,J＝13.6Hz,6H),2.33(s,3H),2.50-2.54(m,2H),2.74-2.77(m,2H),3.19(s,2H),3.77(s,3H),6.72(s,1H),6.92(d,J＝8.8Hz,1H),7.03-7.07(m,1H),7.45(s,1H),7.77(s,1H),7.86-7.88(m,1H),8.08(s,1H),9.72(s,1H),10.10(s,1H)；ESI-MS(m/z)488.2(M+H)+。
步骤3：(2-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-5-羟基苯基)二甲基氧化膦二盐酸盐
向(2-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-5-羟基苯基)二甲基氧化膦(200mg，0.409mmol)在乙醚(2mL)中的搅拌悬浮液中加入4M HCl在二噁烷(0.5mL)中的溶液，并在室温下搅拌1h。反应混合物用戊烷研制，倾析并在真空下干燥，产生175mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.69(d,J＝13.6Hz,6H),2.93(s,3H),3.15-3.40(m,2H),3.60-3.70(m,2H),3.83(s,3H),3.90-4.05(m,2H),4.05(brs,1H),6.96(s,1H),7.10-7.15(m,2H),7.46(s,1H),7.83(brs,1H),8.29(s,1H),8.85(brs,1H),10.06(brs,1H),10.69(brs,1H),10.86(brs,1H)；ESI-MS(m/z)488.2(M+H)+。
4-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯二盐酸盐(实施例2)
步骤1：4-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯
在0℃下，向(2-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-5-羟基苯基)二甲基氧化膦(实施例1的步骤2中间体)(2g，4.09mmol)和[4-(乙酰氨基)苯基]酰亚胺磺酰二氟化物(1.54g，4.91mmol)在THF(25mL)中的搅拌悬浮液中加入DBU(1.24g，8.18mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1h。用水稀释反应混合物并用氯仿萃取。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。用硅胶柱色谱法纯化所得剩余物，产生1.40g所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6))δ1.83(d,J＝13.6Hz,6H),2.34(s,3H),2.62(t,J＝5.2Hz,2H),2.82(t,J＝5.2Hz,2H),3.38(s,2H),3.77(s,3H),6.81(s,1H),7.34(s,1H),7.54(dd,J＝2.4,9.2Hz,1H),7.90(dd,J＝2.8Hz,13.6Hz,1H),8.18(s,1H),8.27(s,1H),8.64(brs,1H),11.39(brs,1H)；ESI-MS(m/z)570.1(M+H)+。
步骤2：4-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯二盐酸盐
向4-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯(1.4g，0.409mmol)在乙醚(15mL)中的搅拌悬浮液中加入4M HCl在二噁烷(5mL)中的溶液，并在室温下搅拌1h。倾析溶剂并在真空下干燥，产生1.37g所需产物的二盐酸盐。1H NMR(400MHz,DMSO-d6))δ1.88(d,J＝14.0Hz,6H),2.87(s,3H),2.99-3.04(m,1H),3.27-3.35(m,2H),3.55-3.65(m,1H),3.81(s,3H),4.09-4.15(m,1H),4.24-4.27(m,1H),4.79(brs,1H),7.02(s,1H),7.43(s,1H),7.84(dd,J＝2.4Hz,9.2Hz,1H),7.99(dd,J＝2.8Hz,13.6Hz,1H),8.36(s,1H),8.60(brs,1H),9.32(brs,1H),11.30(brs,1H),11.95(brs,1H)；ESI-MS(m/z)570.2(M+H)+。
由上述方法制备的实施例的合成和分析数据的详细信息如下表4所示。
表4：实施例(3-28)的结构、化学名称、方法、使用的中间体和分析数据
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方法A1：
下面提到的实施例是通过SFC纯化相应的外消旋化合物制备的，SFC纯化使用Chiralpak IH(4.6×150)mm，5μ柱(检测波长210-400nm)，以含0.1％NH3的甲醇作为流动相，分别得到异构体1和异构体2。由上述方法制备的实施例的合成和分析数据的详细信息如下表5所示。
表5：实施例(29-36)的结构、化学名称、方法、使用的中间体和分析数据
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方法B：
5-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-4-(二甲基磷酰基)吡啶-2-基氟磺酸酯(实施例37)
步骤1：(5-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-2-甲氧基吡啶-4-基)二甲基氧化膦
按照实施例1的步骤1所述的步骤，通过(5-氨基-2-甲氧基吡啶-4-基)二甲基氧化膦(290mg，1.45mmol)与DIPEA(0.5mL，2.9mmol)、2,4,5-三氯嘧啶(531mg，2.9mmol)在IPA(5mL)中反应，制备标题中间体，产生268mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.82(d,J＝14Hz,6H),3.91(s,3H),7.19(d,J＝14Hz,1H),8.43(s,1H),9.03(d,J＝5.2Hz,1H),10.97(s,1H)；ESI-MS(m/z)347.2(M+H)+。
步骤2：(5-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-2-甲氧基吡啶-4-基)二甲基氧化膦
按照实施例1的步骤2所述的步骤，通过(5-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-2-甲氧基吡啶-4-基)二甲基氧化膦(260mg，0.749mmol)与PTSA(171mg，0.898mmol)、6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺(中间体B1)
(143mg，0.749mmol)在IPA(10mL)中反应，制备标题中间体，产生171mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.75(d,J＝14,Hz6H),2.33(s,3H),2.50-2.56(m,2H),2.75-2.77(m,2H),3.30-3.34(m,2H),3.80(s,3H),3.93(s,3H),6.73(s,1H),7.14(s,1H),7.25(d,J＝6.8Hz,1H),7.45(s,1H),7.90(s,1H),8.13(s,1H),9.01(d,J＝4.4Hz,1H),10.21(s,1H)；ESI+MS(m/z)503.2(M+H)+。
步骤3：(5-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-2-羟基吡啶-4-基)二甲基氧化膦
向(5-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-2-甲氧基吡啶-4-基)二甲基氧化膦(160mg，0.318mmol)在CH3CN(12mL)中的搅拌溶液中加入NaI(239mg，1.593mmol)、三甲基氯硅烷(0.241mL，1.593mmol)，随后加入水(0.060mL)，并加热至80℃，保持3h。反应混合物冷却至室温，用NaHCO3溶液碱化并用乙酸乙酯萃取。分离有机层，用无水硫酸钠干燥，并在真空下浓缩。用硅胶柱色谱法纯化所得粗剩余物，产生91mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.63(d,J＝14Hz,6H),2.38(s,3H),2.51-2.62(m,2H),2.75-2.76(m,2H),2.40-2.47(m,2H),3.80(s,3H),6.73(s,1H),6.85(d,J＝15.2Hz,1H),7.59(s,1H),7.72(s,1H),7.93(s,1H),8.10(s,1H),9.21(s,1H)；ESI-MS(m/z)488.6(M)+。
步骤4：5-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-4-(二甲基磷酰基)吡啶-2-基氟磺酸酯
按照实施例2的步骤1所述的步骤，通过(5-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-2-羟基吡啶-4-基)二甲基氧化膦(85mg，0.174mmol)与AISF(60mg，0.191mmol)、DBU(0.058mL，0.382mmol)在THF(8mL)中反应，制备标题中间体，产生34mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.91(d,J＝14Hz,6H),2.33(s,3H),2.57-2.59(m,2H),2.77-2.79(m,2H),3.40-3.42(m,2H),3.78(s,3H),6.77(s,1H),7.31(s,1H),7.89(d,J＝12.8Hz,1H),8.21(s,1H),8.42(s,1H),9.65(s,1H),11.28(s,1H)；ESI-MS(m/z)571.1(M+H)+。
方法C：
4-((5-氯-2-((6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯二盐酸盐(实施例38)
步骤1：(2-((5-氯-2-((6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-5-羟基苯基)二甲基氧化膦
向(2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-5-((4-甲氧基苄基)氧基)苯基)二甲基氧化膦(4.0g，8.83mmol)在IPA(50mL)中的搅拌溶液中加入7-氨基-6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯(中间体B10)(2.46g，8.83mmol)和PTSA(1.7g，8.83mmol)，在密封管中加热至120℃过夜。在减压下蒸发溶剂，用氨水溶液碱化并搅拌10min。过滤所得固体，用水洗涤并在真空下干燥。将由此所得固体在乙醚中搅拌并过滤，产生3.23g所需产物。1H NMR(400MHz DMSO-d6))δ1.69(d,J＝13.2Hz,6H),2.64-2.70(m,2H),2.91-2.94(m,2H),3.65(s,2H),3.77(s,3H),6.69(s,1H),6.90(d,J＝8.8Hz,1H),6.97-7.01(m,1H),7.43(s,1H),7.81(s,1H),7.99-8.02(m,1H),8.08(s,1H),10.32(s,1H),；ESI-MS(m/z)474.2(M+H)+。
步骤2：7-((5-氯-4-((2-(二甲基磷酰基)-4-羟基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯
向(2-((5-氯-2-((6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-5-羟基苯基)二甲基氧化膦(3.2g，6.75mmol)在MeOH(60mL)中的搅拌溶液中加入NaOH(540mg，13.5mmol)的水(12mL)溶液，然后加入Boc-酸酐(2.2g，10.12mmol)，并在室温下搅拌过夜。用水稀释反应混合物，并用乙酸乙酯萃取。将有机层用无水硫酸钠干燥并浓缩。用硅胶色谱法纯化所得剩余物，产生2.58g所需产物。1H NMR(400MHz DMSO-d6))δ1.43(s,9H),1.70(d,J＝13Hz,6H),2.70-2.80(m,2H),3.53-3.56(m,2H),3.78(s,3H),4.33(s,2H),6.81(s,1H),6.87-6.90(m,1H),6.94-6.98(m,1H),7.58(s,1H),7.91(s,1H),8.04(s,1H),8.09(s,1H),9.60(s,1H),10.46(s,1H)；ESI-MS(m/z)574.1(M+H)+。
步骤3：7-((5-氯-4-((2-(二甲基磷酰基)-4-((氟磺酰基)氧基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯
在0℃下，向7-((5-氯-4-((2-(二甲基磷酰基)-4-羟基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯(2.5g，4.35mmol)在THF(60mL)中的搅拌溶液中加入AISF(1.36g，4.35mmol)，然后加入DBU(1.42mL，9.57mmol)，并搅拌30min。用水稀释反应混合物并用乙酸乙酯萃取三次。分离有机层，用无水硫酸钠干燥并浓缩。用硅胶色谱法纯化由此所得剩余物，产生1.59g所需产物。1H NMR(400MHz DMSO-d6))δ1.43(s,9H),1.85(d,J＝13.6Hz,6H),2.75-2.78(m,2H),3.50-3.56(m,2H),3.78(s,3H),4.37(s,2H),6.88(s,1H),7.48(s,1H),7.56(s,1H),7.87-7.91(m,1H),8.20(s,1H),8.31-8.33(m,1H),8.65(s,1H),11.42(s,1H)；ESI-MS(m/z)656.3(M+H)+。
步骤4：4-((5-氯-2-((6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯二盐酸盐
向7-((5-氯-4-((2-(二甲基磷酰基)-4-((氟磺酰基)氧基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯(1.5g，3.03mmol)在乙醚(10mL)中的搅拌溶液中加入4M HCl在二噁烷(20mL)中的溶液，并在室温下搅拌3h。在真空下蒸发溶剂，并与乙醚:乙腈(1:1，50mL)一起搅拌并过滤。将由此所得固体在真空下干燥，产生1.95g所需产物。1H NMR(400MHz DMSO-d6))δ1.86(d,J＝13.6Hz,6H),3.00-3.03(m,2H),3.34-3.70(m,2H),3.80(s,3H),4.10(s,2H),6.99(s,1H),7.49(s,1H),7.74(dd,J＝2.8Hz,13.6Hz,1H),7.96(dd,J＝2.8Hz,9.6Hz,1H),8.29(s,1H),8.65(s,1H),8.99(s,1H),9.49(brs,2H),11.78(s,1H)；ESI-MS(m/z)556.0(M+H)+。
由上述方法制备的实施例的合成和分析数据的详细信息如下表6所示。
表6：实施例39-40的结构、化学名称、方法、使用的中间体和分析数据。
方法D：
4-((5-氯-2-((1-甲基-1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯二盐酸盐(实施例41)
步骤1：(5-(苄氧基)-2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦
按照实施例1的步骤1所述的步骤，通过(2-氨基-5-(苄氧基)苯基)二甲基氧化膦(400mg，0.36mmol)与2,4,5-三氯嘧啶(0.72mmol)、DIPEA(0.72mmol)在IPA(4mL)中反应，制备标题化合物，产生360mg所需化合物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.78(d,J＝13Hz,6H),5.16(s,2H),7.30-7.42(m,5H)7.42-7.45(m,2H),8.25-8.30(m,1H),8.40(s,1H),11.49(s,1H)；ESI-MS(m/z)424.2(M+2H)+。
步骤2：3-((4-((4-(苄氧基)-2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶-2-基)氨基)-1-甲基-4,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-5(1H)-羧酸叔丁酯
向3-氨基-1-甲基-4,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-5-羧酸叔丁酯(202mg，0.84mmol)在1,4-二噁烷(6mL)中的搅拌溶液中加入(5-(苄氧基-2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦(360mg，0.84mmol)、碳酸铯(828mg，2.54mmol)、乙酸钯(77.7mg，0.084mmol)和4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(98mg，0.16mmol)。在微波中，将反应于140℃加热1h。反应混合物在真空下浓缩并用硅胶柱色谱法纯化，产生300mg所需产物。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.32(s,9H),1.80(d,J＝13.6Hz,6H),3.69(s,3H),4.03(s,2H),4.33(s,2H),5.06(s,2H),6.94-7.05(m,1H),7.10-7.23(m,1H),7.42-7.48(m,5H),8.14(s,1H),8.32(s,1H),9.39(s,1H),11.15(s,1H)；ESI-MS(m/z)626.7(M+2H)+。
步骤3：3-((5-氯-4-((2-(二甲基磷酰基)-4-羟基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-1-甲基-4,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-5(1H)-羧酸叔丁酯
在20％钯/碳(50mg)存在下，将搅拌的3-((4-((4-(苄氧基)-2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶-2-基)氨基)-1-甲基-4,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-5(1H)-羧酸叔丁酯(270mg，0.43mmol)在甲醇(10mL)中的溶液氢化，并在室温下搅拌16h。过滤混合物并在减压下浓缩滤液，得到90mg目的产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.41(s,9H),1.75(d,J＝13.6Hz,6H),3.41(s,3H),3.66(s,2H),4.01(s,2H),6.69(d,J＝8Hz,1H),6.91(d,J＝8Hz,1H),7.46(s,1H),8.10(s,1H),9.26(s,1H),9.59(br s,1H),10.58(s,1H)；ESI-MS(m/z)533.2(M)+.。
步骤4：4-((5-氯-2-((1-甲基-1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯盐酸盐
在0℃下，向3-((5-氯-4-((2-(二甲基磷酰基)-4-羟基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-1-甲基-4,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-5(1H)-羧酸叔丁酯(70mg，0.13mmol)和[4-(乙酰氨基)苯基]亚氨基磺酰基二氟化物(50mg，0.15mmol)在THF(5mL)中的搅拌的悬浮液中加入DBU(43.7mg，0.28mmol)。将混合物在室温下搅拌1h。用水稀释反应混合物并用氯仿萃取三次。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将由此所得固体在4M HCl的二噁烷(1mL)中搅拌30min，并用乙酸乙酯研制。将所得固体过滤并在真空下干燥，产生25mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.50(d,J＝13.6Hz,6H),3.81(s,3H),4.20-4.30(m,4H),7.71(d,J＝9.2Hz,1H),7.91-7.95(m,1H),8.26(s,1H),8.85(s,1H),9.65(s,1H),9.97(brs,2H),11.60(br s,1H)；ESI-MS(m/z)516.3(M+H)+。
由上述方法制备的实施例的合成和分析数据的详细信息如下表7所示。
表7：实施例42的结构、化学名称、方法、使用的中间体和分析数据。
方法E：
4-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基)(甲基)氨磺酰氟二盐酸盐(实施例43)
步骤1：叔丁基[4-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基](甲基)氨基甲酸酯
向2,4,5-三氯嘧啶(510mg，2.32mmol)在异丙醇(12mL)中的搅拌溶液中加入叔丁基[4-氨基-3-(二甲基磷酰基)苯基](甲基)氨基甲酸酯(690mg，2.32mmol)、DIPEA(598mg，4.64mmol)，并在密封管中，在120℃下加热过夜。将反应混合物在减压下浓缩。用硅胶柱色谱法纯化由此所得剩余物，产生690mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.40(s,9H),1.82(d,J＝13.2Hz,6H),3.21(s,3H),7.51-7.55(m,2H),8.32-8.39(m,1H),8.45(s,1H),11.77(s,1H)；ESI-MS(m/z)445.1(M+H)+。
步骤2：叔丁基[4-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基](甲基)氨基甲酸酯
在微波小瓶中，向叔丁基[4-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基](甲基)氨基甲酸酯(690mg，1.55mmol)和6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺(中间体B1)(268mg，1.39mmol)在二噁烷(10mL)中的脱气溶液中加入Cs2CO3(1g，3.1mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(179mg，0.31mmol)、Pd2(dba)3(141mg，0.155mmol)，在140℃的微波下搅拌1h。用氯仿稀释反应混合物，通过硅藻土床过滤，并用氯仿洗涤。合并的滤液用盐水溶液洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。用硅胶柱色谱法纯化由此所得剩余物，产生390mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.40(s,9H),1.78(d,J＝13.6Hz,6H),2.34-2.36(m,5H),2.66-2.68(m,2H),2.81-2.83(m,2H),3.21(s,3H),3.77(s,3H),6.80(s,1H),7.32-7.47(m,3H),8.07(s,1H),8.14(s,1H),11.16(s,1H),11.57(s,1H)；ESI-MS(m/z)601.6(M+H)+。
步骤3：(2-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(甲基氨基)苯基)二甲基氧化膦
向叔丁基[4-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基](甲基)氨基甲酸酯(390mg)在DCM(4mL)中的搅拌溶液加入4M HCl在二噁烷(5mL)中的溶液，并在室温下搅拌3h。反应混合物在减压下浓缩，用碳酸氢钠水溶液碱化并用DCM萃取。分离有机层，用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。用硅胶柱色谱法纯化由此所得剩余物，产生390mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.63(d,J＝13.6Hz,6H),2.36(s,3H),2.58-2.60(brs,2H),2.67-2.76(m,5H),3.20-3.21(brs,2H),3.78(s,3H),5.88(q,J＝5.2Hz,1H),6.69-6-71(m,2H),6.82(d,J＝14.4Hz,1H),7.51(s,1H),7.68-7.72(m,2H),8.06(s,1H),9.84(s,1H).；ESI-MS(m/z)501.3(M+H)+。
步骤4：(4-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基)(甲基)氨磺酰氟
在0℃下，向(2-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(甲基氨基)苯基)二甲基氧化膦(150mg，0.3mmol)和三乙胺(303mg，3mmol)在DCM(3mL)中的搅拌溶液中加入1-(氟磺酰基)-23-二甲基-1h-咪唑-3-鎓三氟甲磺酸盐(984mg，3mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16h。用水稀释反应混合物并用氯仿萃取三次。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。用硅胶柱色谱法纯化所得剩余物，产生20mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6))δ1.82(d,J＝13.6Hz,6H),2.35-2.36(m,3H),2.49-2.50(m,2H),2.63-2.65(m,2H),2.82-2.83(m,2H),3.45(s,3H),3.77(s,3H),6.81(s,1H),7.38(s,1H),7.47(d,J＝8.4Hz,1H),7.72(d,J＝14.0Hz,1H),8.17(s,1H),8.24(s,1H),8.59(brs,1H),11.45(s,1H).；ESI-MS(m/z)583.1(M+H)+。
步骤5：4-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基)(甲基)氨磺酰氟二盐酸盐
向[4-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基](甲基)氨磺酰氟(11mg)在DCM(0.5mL)中的搅拌悬浮液中加入4M HCl在二噁烷(0.1mL)中的溶液，并在室温下搅拌1h。在减压下蒸发溶剂，所得固体用乙醚研制，过滤并在真空下干燥，产生14mg所需产物的二盐酸盐。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.85(d,J＝13.6Hz,6H),2.87(d,J＝4.8Hz,3H),2.98-3.03(m,1H),3.12-3.50(m,3H),3.62(s,3H),3.82(s,3H),4.16-4.18(m,1H),4.30-4.33(m,1H),7.00(s,1H),7.55(s,1H),7.66(d,J＝9.2Hz,1H),7.77-7.80(m,1H),8.25(s,1H),8.61-8.69(m,2H),10.75(brs,1H),11.70(s,1H)；ESI-MS(m/z)583.2(M+H)+。
由上述方法制备的实施例的合成和分析数据的详细信息如下表8所示。
表8：实施例44的结构、化学名称、所用中间体、制备方法和分析数据。
方法F：
(2-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(二氟甲氧基)苯基)二甲基氧化膦(实施例45)
步骤1：(2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-5-(二氟甲氧基)苯基)二甲基氧化膦
按照实施例1的步骤1所述的步骤，通过(2-氨基-5-(二氟甲氧基)苯基)二甲基氧化膦(130mg，0.55mmol)与2,4,5-三氯嘧啶(203mg，1.106mmol)、DIPEA(2mL)在IPA(2mL)中反应，制备标题化合物，产生100mg所需化合物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.82(s,3H),1.86(s,3H),7.11(t,J＝74Hz,1H),7.50-7.46(m,2H),8.43(dd,J＝4.4&9.2Hz,1H),8.46(s,1H),11.68(brs,1H)；ESI-MS(m/z)382(M+H)+。
步骤2：(2-((5-氯-2-((7-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(二氟甲氧基)苯基)二甲基氧化膦
向(2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-5-(二氟甲氧基)苯基)二甲基氧化膦(60mg，0.31mmol)在1,4-二噁烷(3mL)中的搅拌溶液中加入6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺(中间体B1)(155mg，0.041mmol)和碳酸铯(304mg，0.94mmol)，将反应混合物在氮气下脱气5min，并加入4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(36mg，0.06mmol)和乙酸钯三聚体(42mg，0.062mmol)。将混合物在90℃下搅拌16h。将反应混合物在室温下冷却，通过硅藻土床过滤，并在减压下浓缩。用快速柱色谱法(5％氯仿的甲醇)纯化粗物质，产生9mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.78(s,3H),1.81(s,3H),2.34(s,3H),2.59-2.48(m,4H),2.81(s,2H),3.78(s,3H),6.55(s,1H),7.11(t,J＝74.0,1H),7.22(s,1H),7.49-7.38(m,2H),8.19-8.00(m,2H),8.40(s,1H),11.01(br s,1H)；ESI-MS(m/z)538(M+H)+。
按照上述步骤制备的实施例的分析数据如下表9所示。
表9：实施例46-47的结构、化学名称、所用中间体、制备方法和分析数据。
方法G：
(S)-(2-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-5-((四氢呋喃-3-基)氧基)苯基)二甲基氧化膦(实施例48)
向(2-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-5-羟基苯基)二甲基氧化膦(实施例1的步骤2中间体)(150mg，0.30mmol)在DMF(5mL)中的搅拌溶液中加入碳酸铯(293mg，0.90mmol)、(R)-四氢呋喃-3-基4-甲基苯磺酸盐(79.92mg，0.33mmol)，并在80℃下搅拌2h。将反应混合物冷却至室温，用水稀释并用乙酸乙酯萃取。分离合并的有机层，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。用硅胶色谱法纯化所得粗产物，产生21.7mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)1.75(d,J＝14.4Hz,6H),1.95-2.01(m,1H),2.24-2.26(m,1H),2.34(s,3H),2.50-2.65(m,2H),2.78-2.85(m,2H),3.30-3.35(m,2H),3.80(s,3H),3.80-3.95(m,4H),5.05-5.10(m,1H),6.77(s,1H),7.01(dd,J＝2.8,9.2Hz,1H),7.10-7.15(m,1H),7.44(s,1H),7.93(s,1H),8.10(s,1H),8.20(br s,1H),10.70(s,1H)；ESI-MS(m/z)558.4(M+H)+。
按照上述步骤制备的实施例的分析数据如下表10所示。
表10：实施例49-51的结构、化学名称、所用中间体、制备方法和分析数据。
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方法H：
4-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)-N-(2-氟乙基)-N-甲基苯甲酰胺(实施例52)
步骤1：4-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)-N-(2-氟乙基)-N-甲基苯甲酰胺
在0℃下，向4-氨基-3-(二甲基磷酰基)-N-(2-氟乙基)-N-甲基苯甲酰胺(215mg，0.790mmol)在DMF(5mL)中的冷却溶液中加入NaH(63mg，1.58mmol)并搅拌5min，然后加入2,4,5-三氯嘧啶(0.180mL，1.58mol)。将反应混合物在室温下搅拌16h。用水稀释反应混合物。含水混合物用乙酸乙酯萃取两次，合并的有机层用水洗涤，然后用盐水溶液洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。用硅胶柱色谱法纯化所得剩余物，产生151mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.86(d,J＝13.6,6H),3.03(s,3H),3.54-3.60(m,1H),3.75-3.81(m,1H),4.52-4.74(m,2H),7.62-7.67(m,2H),8.50(s,1H),8.53(t,J＝3.6Hz,1H),12.03(s,1H)；ESI-MS(m/z)419.2(M+H)+。
步骤2：4-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)-N-(2-氟乙基)-N-甲基苯甲酰胺
向4-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)-N-(2-氟乙基)-N-甲基苯甲酰胺(70mg，0.167mmol)在IPA(2mL)中的搅拌溶液中加入6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺(中间体B1)(31mg，0.167mmol)和PTSA(32mg，0.167mmol)。将反应混合物在120℃下加热18h。将反应混合物冷却至室温。用饱和NaHCO3溶液碱化反应混合物。水溶液用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥，并在减压下除去溶剂。用SFC纯化粗产物，产生10mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.82(d,J＝13.2Hz,6H),2.37(s,3H),2.60-2.67(m,2H),2.80-2.85(m,2H),2.99(s,3H),3.33-3.36(m,2H),3.35-3.38(m,2H),3.62-3.54(m,2H),3.77(s,3H),6.81(s,1H),7.39-7.45(m,2H),7.67-7.70(m,1H),8.17(s,1H),8.19(s,1H),8.51(d,J＝4.4Hz,1H),11.40(br s,1H)；ESI-MS(m/z)573.1(M+H)+。
方法I：
N-(4-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基)-2,2-二氟-N-甲基乙酰胺(实施例53)
步骤1：N-(4-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基)-2,2-二氟-N-甲基乙酰胺
按照实施例1的步骤1所述的步骤，通过N-(4-氨基-3-(二甲基磷酰基)苯基)-2,2-二氟-N-甲基乙酰胺(75mg，0.271mmol)、DIPEA(70mg，0.543mmol)，2,4,5-三氯嘧啶(99mg，0.543mmol)在IPA(3mL)中反应，制备标题化合物，产生50mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.84(d,J＝13.6Hz,6H),3.26(s,3H),6.20(t,J＝52.8Hz,1H),6.66-7.76(m,2H),8.50(s,1H),8.53-8.56(m,1H),11.97(s,1H)；ESI-MS(m/z)423.1(M+H)+。
步骤2：N-(4-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基)-2,2-二氟-N-甲基乙酰胺
按照实施例43的步骤2所述的步骤，通过N-(4-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基)-2,2-二氟-N-甲基乙酰胺(40mg，0.094mmol)与6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺(中间体B1)(16.3mg，0.085mmol)、碳酸铯(92mg，0.28mmol)，Pd2(dba)3(8.6mg，0.009mmol)和4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(11mg，0.018mmol)在1,4-二噁烷(2mL)中反应，制备标题化合物，产生15mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.81(d,J＝13.2Hz,6H),2.37(s,3H),2.67-2.68(m,2H),2.68-2.82(m,2H),3.24(s,3H),3.683.72(m,2H),3.77(s,3H),6.29(t,J＝56Hz,1H)),6.81(s,1H),7.39-7.40(m,2H),7.60-7.65(m,1H),8.16(s,1H),8.23(s,1H),8.63(br s,1H),11.42(s,1H)；ESI-MS(m/z)579.2(M+H)+。
方法J：
(2-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(二氟甲基)苯基)二甲基氧化膦(实施例54)
步骤1：(2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-5-(羟甲基)苯基)二甲基氧化膦
按照实施例1的步骤1所述的步骤，通过(2-氨基-5-(羟甲基)苯基)二甲基氧化膦(50mg，0.253mmol)、DIPEA(65mg，0.507mmol)和2,4,5-三氯嘧啶(94mg，0.507mmol)在IPA(2-3mL)中反应，制备标题化合物，产生40mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.80(d,J＝13.6Hz,6H),4.51(d,J＝5.6Hz,2H),5.30(t,J＝5.6Hz,1H),7.55-7.58(m,2H),8.32-8.36(m,1H),8.44(s,1H),11.71(s,1H)；ESI-MS(m/z)346(M+H)+。
步骤2：4-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯甲醛
向(2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-5-(羟甲基)苯基)二甲基氧化膦(50mg，0.251mmol)在DCM/EDC(8mL)中的搅拌溶液中加入氯铬酸吡啶(81mg，0.376mmol)，并在室温下搅拌1h。反应混合物通过硅藻土床过滤，用乙酸乙酯洗涤。滤液在减压下浓缩，用硅胶柱色谱纯化所得剩余物，产生30mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.90(d,J＝13.6Hz,6H),8.12(d,J＝8.8Hz,1H),8.10-8.21(m,1H),8.57(s,1H),8.70(dd,J＝3.6,8.4Hz,1H),9.95(s,1H),12.31(s,1H)；ESI-MS(m/z)343.7(M)+。
步骤3：(2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-5-(二氟甲基)苯基)二甲基氧化膦
在-78℃下，向4-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯甲醛(50mg，0.145mmol)在干DCM(5mL)中的搅拌溶液中滴加二乙氨基三氟化硫(DAST)(56mg，0.34mmol)。并在室温下搅拌16h。用饱和氯化铵溶液淬灭反应混合物。含水混合物用乙酸乙酯萃取两次。合并的有机层用水洗涤，然后用盐水溶液洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。用硅胶柱色谱法纯化所得剩余物，产生41mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.86(d,J＝13.6Hz,6H),7.02(t,J＝56Hz,1H),7.82-7.88(m,2H),7.51(s,1H),8.55-8.58(m,1H),12.01(s,1H)；ESI-MS(m/z)365.9(M+H)+。
步骤4：(2-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(二氟甲基)苯基)二甲基氧化膦
按照实施例43的步骤2中所述的步骤，通过(2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-5-(二氟甲基)苯基)二甲基氧化膦(65mg，0.178mmol)与6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺(中间体B1)(30mg，0.16mmol)、碳酸铯(173mg，0.534mmol)，Pd2(dba)3(16mg，0.0178mmol)和4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(20mg，0.035mmol)在1,4-二噁烷(2mL)中反应，制备标题化合物，产生35mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.85(d,J＝13.6Hz,6H),2.70(s,3H),2.95-3.00(m,2H),3.10-3.20(m,2H),3.80(s,3H),3.85-3.92(m,2H),6.91(s,1H),7.01(t,J＝56Hz,1H),7.55(s,1H),7.67(d,J＝8.8H z,1H),7.80(d,J＝14.4Hz,1H),8.20(s,1H),8.26(s,1H),8.60(br s,1H),11.43(br s,1H)；ESI-MS(m/z)522.2(M+H)+。
按照上述步骤制备的实施例的分析数据如下表11所示。
表11：实施例55的结构、化学名称、所用中间体、制备方法和分析数据。
方法K：
2-氯-N-(4-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基)乙酰胺盐酸盐(实施例56)
步骤1：(2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-5-硝基苯基)二甲基氧化膦
在室温下，向(2-氨基-5-硝基苯基)二甲基氧化膦(1g，4.67mmol)和2,4,5-三氯嘧啶(1.7gm，9.345mmol)在DMF(10mL)中的搅拌溶液中加入Cs2CO3(3gm，9.345mmol)。在密封管中将反应混合物加热至110℃保持14h。用水淬灭反应混合物，并用乙酸乙酯萃取。浓缩有机层并用硅胶柱色谱法纯化所得剩余物，产生610mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.94(d,J＝14Hz,6H),8.46-8.50(m,2H),8.60(s,1H),8.71-8.76(m,1H),12.44(s,1H)；ESI-MS(m/z)361(M+H)+。
步骤2：(2-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-5-硝基苯基)二甲基氧化膦
按照实施例1的步骤2所述的步骤，通过(2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-5-硝基苯基)二甲基氧化膦(230mg，0.637mmol)与6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺(中间体B1)(123mg，0.637mmol)和PTSA(121mg，0.637mmol)在IPA中反应，制备标题化合物，产生210mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)1.9(d,J＝14Hz,6H),δ2.35(s,3H),2.66-2.64(m,2H),2.87-2.83(m,2H),3.40(s,2H),3.77(s,3H),6.84(s,1H),7.38(s,1H),8.15(s,1H),8.32(s,1H),8.39-8.44(m,2H),8.72(brs,1H),11.90(s,1H)；ESI-MS(m/z)517(M+H)+。
步骤3：(5-氨基-2-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦
在室温下，向(2-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-5-硝基苯基)二甲基氧化膦(205mg，0.397mmol)在乙醇/水中的搅拌混合物中加入铁粉(107mg，1.98mmol)和NH4Cl(107mg，1.986mmol)。将反应混合物回流3h。通过硅藻土过滤反应混合物，并浓缩所得滤液。将所得剩余物用饱和碳酸氢钠碱化，并用乙酸乙酯萃取。将有机层分离、过滤并浓缩，产生165mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.61(d,J＝13.6Hz,6H),2.35(s,3H),2.49-2.55(m,2H),2.53-2.75(m,2H),3.18(s,2H),3.78(s,3H),5.3(s,2H),7.53(s,1H),6.70-6.76(m,2H),6.88-6.93(m,1H),7.61(br s,1H),7.66(s,1H),8.05(s,1H),9.74(s,1H),ESI-MS(m/z)487(M+H)+。
步骤4：2-氯-N-(4-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基)乙酰胺盐酸盐
在0℃下，向搅拌的(5-氨基-2-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦(73mg，0.150mmol)在DCM(2mL)中的溶液中加入氯乙酰氯(13μL，0.165mmol)。将反应混合物在室温下搅拌30min。在减压下除去溶剂。将所得剩余物在乙酸乙酯中搅拌，过滤并在真空下干燥，产生84mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6),δ1.76(d,J＝13.6Hz,6H),2.93(d,J＝4Hz,3H),3.05-3(m,1H),3.22-3.26(m,1H),3.39-3.40(m,1H),3.60-3.65(m,1H),3.82(s,3H),3.90-4.04(m,2H),4.36(s,2H),6.98(s,1H),7.49(s,1H),7.84-7.94(m,2H),8.19(br s,1H),8.33(s,1H),9.09(br s,1H),10.81(br s,1H),11.05(br s,1H),11.37(br s,1H)；ESI-MS(m/z)564(M+H)+。
方法L：
(2-(N-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)-S-甲基磺酰亚胺基)苯基)二甲基氧化膦(实施例57)
步骤1：(2-(N-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-S-甲磺酰亚胺基)苯基)二甲基氧化膦
在-10℃下，向二甲基(2-(S-甲磺酰亚胺基)苯基)氧化膦(240mg，1.038mmol)在DMF(5mL)中的搅拌溶液中加入氢化钠(83mg，2.077mmol)。将反应混合物搅拌10min，然后加入2,4,5-三氯嘧啶(381mg，2.077mmol)并在100℃下搅拌16h。用1N HCl酸化反应并用乙酸乙酯萃取。浓缩有机层并用柱色谱法纯化所得剩余物，产生114mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.92(d,J＝14Hz,6H),4.01(s,3H),7.83-7.92(m,2H),8.12-8.19(m,2H),8.47(s,1H)。
步骤2：(2-(N-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)-S-甲基磺酰亚胺基)苯基)二甲基氧化膦
按照实施例1的步骤2所述的步骤，通过(2-(N-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-S-甲磺酰亚胺基)苯基)二甲基氧化膦(100mg，0.264mmol)与6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺(中间体B1)(51mg，0.264mmol)和PTSA(50mg，0.264mmol)在IPA(2mL)中反应，制备标题化合物，产生11mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.93(d,J＝13.6Hz,6H),2.50(s,3H),2.67-2.73(m,3H),2.80-2.94(m,3H),3.81(s,3H),4.03(s,3H),6.81(s,1H),7.80-7.93(m,4H),8.07-8.20(m,1H),8.33(s,1H),8.35(brs,1H)；ESI-MS(m/z)534.2(M+H)+。
方法M：
(2-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(S-甲基磺酰亚胺基)苯基)二甲基氧化膦(实施例58)
步骤1：叔丁基(4-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基)(甲基)(氧代)-λ6-亚硫基)氨基甲酸酯
按照实施例57的步骤1所述的方法，通过67mg(0.193mmol)苯胺与2,4,5-三氯嘧啶(71mg，0.386mmol)、氢化钠(60％，15mg(0.386mol))在DMF(1mL)中反应，制备标题化合物，产生19mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.26(s,9H),1.87-1.93(m,6H),3.44(s,3H),8.06-8.12(m,2H),8.68(dd,J＝4.0,9.6Hz,1H),12.19(s,1H)；ESI-MS(m/z)491(M+H)+。
步骤2：(2-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(S-甲基磺酰亚胺基)苯基)二甲基氧化膦
按照实施例1的步骤2所述的步骤，通过叔丁基(4-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基)(甲基)(氧代)-λ6-亚硫基)氨基甲酸酯(50mg，0.101mmol)、6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺(中间体B1)(9.7mg(0.05mmol))、PTSA(9.66mg，0.101mmol)在IPA(2mL)中反应，制备标题化合物，产生9mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.73(d,J＝13.6Hz,6H),2.38(s,3H),2.62-2.65(m,2H),2.82-2.85(m,2H),3.33(s,3H),3.45(brs,2H),3.77(s,3H),4.30(brs,1H),6.83(s,1H),7.40(s,1H),7.88(d,J＝9.6Hz,1H),7.98(d,J＝13.2Hz,1H),8.21(s,1H),8.29(s,1H),8.66(s,1H),11.58(s,1H)；ESI-MS(m/z)549.1(M+H)+。
方法N：
(2-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)二甲基氧化膦(实施例59)
步骤1：(2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氧基)苯基)二甲基氧化膦
按照实施例57的步骤1所述的步骤，通过(2-羟基苯基)二甲基氧化膦(50mg，0.294mmol)与2,4,5三氯嘧啶(300mg，0.588mmol)、氢化钠(141mg，0.588mmol)在DMF(1mL)中反应，制备标题化合物，产生361mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝1.78(d,J＝13.6Hz,6H),7.29-7.32(m,1H),7.47-7.52(m,1H),7.64-7.69(m,1H),8.06-8.12(m,1H),8.57(s,1H)；ESI-MS(m/z)317(M+H)+。
步骤2：(2-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)二甲基氧化膦
向(2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氧基)苯基)二甲基氧化膦(75mg，0.237mmol)和6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺(中间体B1)(45mg，0.237mmol)在干1,4-二噁烷(2mL)中的脱气溶液中加入4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(28mg，0.04mmol)、Cs2CO3(154mg，0.47mmol)、Pd2(dba)3(22mg，0.023mmol)，并加热至120℃保持18h。用水淬灭反应混合物，并用乙酸乙酯萃取。分离有机层，用无水硫酸钠干燥并浓缩。用SFC纯化所得剩余物，产生10mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.63(d,J＝13.6Hz,6H),2.34(s,3H),2.50-2.53(m,2H),2.70-2.75(m,2H),3.00-3.05(m,2H),3.75(s,3H),6.69(s,1H),7.14(s,1H),7.46-7.52(m,2H),7.70-7.72(m,1H),7.89-7.94(m,1H),8.18(s,1H),8.50(s,1H)；ESI-MS(m/z)473(M+H)+。
4-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氧基)-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯二盐酸盐(实施例60)
步骤1：(5-(苄氧基)-2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氧基)苯基)二甲基氧化膦
按照实施例57的步骤1所述的方法，通过(5-(苄氧基)-2-羟基苯基)二甲基氧化膦(800mg，2.89mmol)与2,4,5三氯嘧啶(1g，5.79mmol)、氢化钠(231mg，5.79mmol)在DMF(10mL)中反应，制备标题化合物，产生402mg所需产物。ESI-MS(m/z)423(M+H)+。
步骤2：(2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氧基)-5-羟基苯基)二甲基氧化膦
在0℃下，向搅拌的(5-(苄氧基)-2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氧基)苯基)二甲基氧化膦(110mg，0.26mmol)在DCM(4mL)中的溶液中滴加溴，并在室温下搅拌2h。浓缩反应混合物，用饱和碳酸氢钠溶液碱化，并用DCM萃取。分离有机层，用硫酸钠干燥并浓缩。用硅胶色谱法纯化由此所得剩余物，产生35mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.62(d,J＝13.2Hz,6H),7.01-7.04(m,1H),7.18-7.22(m,1H),7.26-7.29(m,1H),8.84(s,1H),9.98(s,1H)；ESI-MS(m/z)334(M+H)+。
步骤3：(2-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氧基)-5-羟基苯基)二甲基氧化膦
按照实施例59的步骤2所述的步骤，通过(2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氧基)-5-羟基苯基)二甲基氧化膦(47mg，0.14mmol)与6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺(中间体B1)(27mg，0.14mmol)在4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(16mg，0.028mmol)、Cs2CO3(93mg，0.28mmol)、Pd2(dba)3(12.9mg，0.014mmol)在干1,4-二噁烷(2mL)在二噁烷(10mL)中反应，制备标题化合物，产生37mg所需产物。ESI-MS(m/z)489(M+H)+。
步骤4：4-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氧基)-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯二盐酸盐
按照实施例2的步骤1和2所述的步骤，通过(2-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氧基)-5-羟基苯基)二甲基氧化膦(35mg，0.071mmol)与AISF(27mg，0.086mmol)反应，制备标题化合物，产生7mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.70-1.80(m,6H),2.91(s,3H),3.10-3.20(m,1H),3.20-3.40(m,2H),3.60-3.72(m,1H),3.73(s,3H),4.05-4.12(m,2H),6.86(s,1H),7.14(s,1H),7.70-7.90(m,3H),8.49(s,1H),8.52(s,1H),10.42(brs,1H)；ESI-MS(m/z)571.1(M+H)+。
方法O：
4-((5-氯-2-((6-羟基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯二盐酸盐(实施例61)
步骤1：4-((5-氯-2-((6-羟基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯
将4-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯二盐酸盐(实施例2)(200mg，0.311mmol)在47％HBr水溶液(5mL)中的搅拌溶液，加热至110℃过夜。浓缩反应混合物，并用饱和NaHCO3溶液碱化得到的剩余物。将沉淀的固体过滤并在真空下干燥。用柱色谱法纯化所所得粗产物，产生53mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.84(d,J＝13.6Hz,6H),2.33(s,3H),2.50-2.70(m,4H),2.70-2.80(m,2H),6.63(s,1H),7.25(s,1H),7.57(d,J＝8Hz,1H),7.85-7.95(m,1H),8.18(s,1H),8.24(s,1H),8.7(brs,1H),9.51(s,1H),11.39(s,1H)；ESI-MS(m/z)556(M+H)+。
步骤2：4-((5-氯-2-((6-羟基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯二盐酸盐
在0℃下，向4-((5-氯-2-((6-羟基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯(30mg，0.054mmol)在DCM(2mL)中的搅拌溶液中加入4M HCl在二噁烷(0.1mL)中的溶液，并在室温下搅拌1h。将反应混合物浓缩并用二乙醚研制。将所得固体过滤并在真空下干燥，产生19mg所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.86(d,J＝14Hz,6H),2.86(s,3H),2.85-3.00(m,1H),3.05-3.20(m,1H),3.20-3.35(m,1H),3.50-3.65(m,1H),4.00-4.15(m,1H),4.20-4.35(m,1H),6.82(s,1H),7.39(s,1H),7.77(d,J＝8.4Hz,1H),7.90-8.00(m,1H),8.31(s,1H),8.71(brs,1H),8.96(brs,1H),10.87(brs,1H),11.79(brs,1H)；ESI-MS(m/z)554(M-H)+。
药理活性
FRET分析：
这是一种基于标记示踪剂的结合和置换的一步结合分析，其中添加化合物后，添加抗GST标记的铕(Eu)作为供体，Alexa Fluor标记的示踪剂作为受体。示踪剂和GST抗体与HPK1的激酶结构域的同时结合导致从抗GST标记的铕(Eu)荧光团到激酶示踪剂上的Alexa647荧光团的高度FRET(荧光共振能量转移)，并且该信号在存在可被测量的抑制剂时被降低。
将测试化合物溶解在二甲基亚砜(DMSO)中以制备10.0mM储备溶液，并稀释至目的浓度。反应中DMSO的最终浓度为3％(v/v)。通过在含有50mM HEPES(pH 7.5)、10mM MgCl2、1mM EGTA、0.01％Brij-35，的激酶缓冲液(加入或不加入所需浓度的化合物)中，混合2nM的Eu-Anti-GST抗体和5nM的MAP4K-1酶来制备分析混合物。将反应在冰上孵育15min。在预孵育步骤之后，将10nM激酶示踪剂222加入到反应混合物中。振荡5min后，将反应在室温下进一步孵育1小时，并将其保持在4℃，按照试剂盒说明(Thermo)在ARTEMIS读取器上读取。基于665nm/620nm的FRET比率来计算测试化合物的抑制作用。活性以对照反应的百分比计算。使用GraphPad Prism软件通过非线性回归分析从剂量反应曲线计算IC50值。
使用上述分析步骤测试制备的化合物，所得结果如表12所示。表中给出了浓度为1.0M和10.0M时的抑制百分比，以及所选实施例的IC50(nM)详细信息。
IC50(nM)值如表12所示，其中“A”是指小于50nM的IC50值，“B”是指50.01nM至100.0nM范围内的IC50值，“C”是指大于100.01nM至500nM的IC50值，“D”是指大于500nM的IC50值。
表12：
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/>
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(-)：未确定。
实施例2和实施例30对CT26的同基因小鼠结肠肿瘤模型的抗肿瘤功效的评估。
动物
从Glenmark动物设施获得健康雌性BALB/c小鼠(7周龄至9周龄，15a1g至2a1g)。将动物分组安置在聚丙烯笼中，控制温度为20-22℃，光/暗周期为12/12小时。它们以随意的标准小鼠颗粒饮食和水供养，所有动物实验都按照机构动物伦理委员会(InstitutionalAnimal Ethics Committee)(IAEC)批准的方案进行。
CT26细胞培养
CT-26细胞系从美国典型培养物保藏中心(American type culture)(CRL-2638TM)中获得。将细胞在具有完整RPMI-1640培养基的T型烧瓶(第5代)中复苏，并在37℃、5％CO2、80％相对湿度下孵育。将细胞重新悬浮、合并并以1:10的比例分成每瓶烧，维持3代，第8代用于将细胞接种到动物体内。
CT26细胞移植
用电动剃须刀对小鼠的右侧腹区域进行剃毛。从细胞培养实验室的冰上接收所需数量的CT26细胞(每毫升无血清培养基1000万个)。用异氟烷和O2麻醉小鼠(氧气流量计调到1-2升/min，并将异氟烷蒸发器刻度盘调至2-3％)。将细胞以100万个细胞/100μL/小鼠的细胞浓度接种到小鼠的右侧区域。将接种的小鼠安置在动物室中，每天观察是否有任何不当的临床症状。
动物分组
在细胞接种后第10天，根据肿瘤体积将小鼠随机分组为不同的治疗组。将肿瘤体积范围为57mm3至119mm3的小鼠纳入疗效研究。用数字游标卡尺测量肿瘤体积。使用以下公式计算体积
V(mm3)＝[L×(W×W)]×0.52
V为肿瘤体积，L为肿瘤长度，W为肿瘤宽度。
表13：治疗组
p.o.——每次口服；QD——每天一次；Q4D——每四天一次；μg–微克复合物制备和给药
将蒸馏水中的0.5％v/v吐温80和0.5％w/v甲基纤维素用作口服制剂的赋形剂。称量实施例2和实施例30，并通过加入吐温80(0.5％v/v)、甲基纤维素(MC，0.5％w/v)在研钵和研杵中制备50mg/kg/10mL的储备悬浮液。使用连续稀释法，通过用0.5％MC稀释储备液制备10mg/kg/10mL。每天记录体重，并在整个研究过程中保持给药时间。
通过肿瘤体积测量评估治疗效果
在整个研究过程中，以盲法测量肿瘤体积。在研究过程中保持肿瘤体积测量时间。从研究和数据分析中移除具有坏死肿瘤的动物。通过以下公式计算％TGI：
[1-{(Tt-T0)/(Ct-C0)}]×100。
Tt＝肿瘤体积当天治疗组的肿瘤体积
T0＝随机选择当天治疗组的肿瘤体积
Ct＝肿瘤体积当天赋形剂对照组的肿瘤体积
C0＝随机选择当天对照组的肿瘤体积。
实验品计划
在终止日，分离小鼠用于血液和肿瘤取样的药效学(PD)和药代动力学(PK)时间点。
数据分析
肿瘤体积数据采用双因素方差分析进行统计分析，然后进行Bonferroni多重比较检验。使用Graph Pad Prism版本7导出统计分析和图表。进行Grubbs异常值测试，以在适用的情况下移除异常值数据集。
结果：
实施例2第24天的肿瘤生长抑制(TGI)如图1所示。与赋形剂组相比，用10mg/kg和50mg/kg QD对实施例2治疗的反应中观察到肿瘤生长抑制分别为40％和61％。
实施例30第25天的肿瘤生长抑制(TGI)如图2所示。与赋形剂组相比，用10mg/kg和50mg/kg QD对实施例30治疗的反应中观察到肿瘤生长抑制分别为37％和62％。
尽管本发明已参照优选实施方案进行了描述，但是应当理解，这些实施方案仅仅是本发明的原理和应用的说明。因此，应当理解，在不脱离如上所述的本发明的精神和范围的情况下，可以对示例性实施方案进行多种修改，并且可以设计出其他布置。
本申请中引用的所有出版物和专利申请通过引用并入本文，其程度与每个单独的出版物或专利申请被明确且单独地指示通过引用并入本文相同。

Claims (32)

1.一种式(I)的化合物，或其互变异构体、其立体异构体或其药学上可接受的盐，
其中
R1选自氯和-CONH2；
L选自
p和q为连接点；
Rc选自C1-8烷基；
选自
环A选自
2.根据权利要求1所述的化合物，其中R1为氯。
3.根据权利要求1所述的化合物，其中R1为-CONH2。
4.根据权利要求1所述的化合物，其中L为
5.根据权利要求1所述的化合物，其中L为
6.根据权利要求1所述的化合物，其中L为
7.根据权利要求1所述的化合物，其中为
8.根据权利要求1所述的化合物，其中为
9.根据权利要求1所述的化合物，其中环A为
10.根据权利要求1所述的化合物，其中环A为
11.根据权利要求1所述的化合物，其中R1为氯，
L为
为/>环A为
12.根据权利要求1所述的化合物，其中R1为氯，
L为
为/>
环A为
13.根据权利要求1所述的化合物，其中R1为氯，
L为
为/>环A为
14.根据权利要求1所述的化合物，其中R1为氯，
为
L为且
环A为
/>
/>
15.一种化合物，及其药学上可接受的盐，所述化合物选自
(2-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-5-羟基苯基)二甲基氧化膦；
4-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯；
4-((5-氨基甲酰基-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯；
4-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-(甲基-d3)-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯；
4-((5-氯-2-((6-(甲氧基-d3)-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯；
4-((5-氯-2-((6-甲氧基-d3)-2-(甲基-d3)-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯；
4-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-(2,2,2-三氟乙基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯；
4-((5-氯-2-((2-(2,2-二氟乙基)-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯；
4-((5-氯-2-((2-乙基-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯；
4-((5-氯-2-((6-(二氟甲氧基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯；
4-((5-氯-2-((6-甲氧基-1,1,2-三甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯；
4-((5-氯-2-((6-甲氧基-1,2-二甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯；
4-((5-氯-2-((2-(2-氟乙基)-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯；
4-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基-3-(二甲基磷酰基)-5-氟苯基氟磺酸酯；
4-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基-3-(二甲基磷酰基)-5-甲基苯基氟磺酸酯；
4-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-(氧杂环丁烷-3-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯；
4-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1-氧代-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯；
3-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基-4-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯；
3-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-2-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯；
6-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(二甲基磷酰基)吡啶-3-基氟磺酸酯；
5-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-6-(二甲基磷酰基)吡啶-2-基氟磺酸酯；
4-((5-氯-2-((2-甲氧基-6-甲基-5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-3-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯；
6-((5-氯-2-((6-甲氧基-1,2-二甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(二甲基磷酰基)吡啶-3-基氟磺酸酯；
6-((5-氯-2-((6-甲氧基-1,2-二甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(二甲基磷酰基)吡啶-3-基氟磺酸酯；
4-((5-氯-2-((6-甲氧基-2,3,3-三甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯；
4-((5-氯-2-((6-氟-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯；
4-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(二甲基磷酰基)-2-氟苯基氟磺酸酯；
4-((5-氯-2-((6-甲氧基异苯并二氢吡喃-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯；
4-((5-氯-2-((6-甲氧基-1,2-二甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯(异构体1)；
4-((5-氯-2-((6-甲氧基-1,2-二甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯(异构体2)；
3-((5-氯-2-((6-甲氧基-1,2-二甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-4-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯(异构体1)；
3-((5-氯-2-((6-甲氧基-1,2-二甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)-嘧啶-4-基)氨基)-4-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯(异构体2)；
4-((5-氯-2-((6-甲氧基-2,3-二甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯(异构体1)；
4-((5-氯-2-((6-甲氧基-2,3-二甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯(异构体2)；
3-((5-氯-2-((6-甲氧基-2,3-二甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基-4-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯；
3-((5-氯-2-((6-甲氧基-2,3-二甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基-4-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯；
5-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基-4-(二甲基磷酰基)吡啶-2-基氟磺酸酯；
4-((5-氯-2-((6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯；
4-((5-氯-2-((6-甲氧基-d3-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯；
4-((5-氯-2-((6-甲氧基-d3-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基-1,1-d2)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯；
4-((5-氯-2-((1-甲基-1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯；
4-((5-氯-2-((4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯；
4-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基-3-(二甲基磷酰基)苯基)(甲基)氨磺酰氟；
(4-((5-氯-2-((6-甲氧基-1,2-二甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基-3-二甲基磷酰基)苯基)(甲基)氨磺酰氟；
(2-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(二氟甲氧基)苯基)二甲基氧化膦；
(2-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(2,2-二氟乙氧基)苯基)二甲基氧化膦；
2-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(三氟甲氧基)苯基)二甲基氧化膦；
(S)-(2-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-5-((四氢呋喃-3-基)氧基)苯基)二甲基氧化膦；
(R)-(2-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)胺基)-5-((四氢呋喃-3-基)氧基)苯基)二甲基氧化膦；
(2-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(2-甲氧基乙氧基)苯基)二甲基氧化膦；
(2-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(氧杂环丁烷-3-基氧基)苯基)二甲基氧化膦；
4-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)-N-(2-氟乙基)-N-甲基苯甲酰胺；
N-(4-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基)-2,2-二氟-N-甲基乙酰胺；
(2-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(二氟甲基)苯基)二甲基氧化膦；
(2-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(三氟甲基)苯基)二甲基氧化膦；
2-氯-N-(4-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-(二甲基磷酰基)苯基)乙酰胺；
(2-(N-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)-S-甲基磺酰亚胺基)苯基)二甲基氧化膦；
(2-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4基)氨基)-5-(S-甲基磺酰亚胺基)苯基)二甲基氧化膦；
(2-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)二甲基氧化膦；
4-((5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氧基)-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯二盐酸盐；或
4-((5-氯-2-((6-羟基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基-3-(二甲基磷酰基)苯基氟磺酸酯。
16.一种式的化合物
或其立体异构体或其药学上可接受的盐。
17.一种式的化合物
或其立体异构体或其药学上可接受的盐。
18.一种式的化合物
或其立体异构体或其药学上可接受的盐。
19.一种式的化合物或其立体异构体或其药学上可接受的盐。
20.一种式的化合物或其立体异构体或其药学上可接受的盐。
21.一种式的化合物或其立体异构体或其药学上可接受的盐。
22.一种式的化合物或其立体异构体或其药学上可接受的盐。/>
23.一种式的化合物或其立体异构体或其药学上可接受的盐。
24.一种式的化合物或其立体异构体或其药学上可接受的盐。
25.一种式的化合物或其立体异构体或其药学上可接受的盐。
26.一种式的化合物或其立体异构体或其药学上可接受的盐。/>
27.一种式的化合物
或其立体异构体或其药学上可接受的盐。
28.一种式的化合物
或其立体异构体或其药学上可接受的盐。
29.一种药物组合物，包括根据权利要求1至28中任一项所述的化合物和药学上可接受的赋形剂。
30.根据权利要求29所述的药物组合物，其中所述药学上可接受的赋形剂为载体或稀释剂。
31.一种在受试者中治疗MAP4K1(HPK1)介导的疾病、障碍、综合征或病症的方法，包括施用有效量的根据权利要求1至28中任一项所述的化合物。
32.根据权利要求31所述的方法，其中所述疾病、障碍、综合征或病症为癌症。
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