CN117679504A

CN117679504A - 一种抗Claudin18.2抗体药物组合物及其用途

Info

Publication number: CN117679504A
Application number: CN202211103722.0A
Authority: CN
Inventors: 金秀梅; 闫哲贤; 李芸; 靳照宇; 魏依丹; 高洁; 任丽
Original assignee: Mingji Biopharmaceutical Beijing Co ltd
Current assignee: Mingji Biopharmaceutical Beijing Co ltd
Priority date: 2022-09-09
Filing date: 2022-09-09
Publication date: 2024-03-12

Abstract

本发明提供了一种药物组合物。具体地，本发明提供了一种包含抗Claudin18.2抗体或其抗原结合片段和缓冲剂的药物组合物，以及提供了所述药物组合在疾病治疗中的用途。任选地，所述药物组合物还可以包含稳定剂和/或表面活性剂。本发明的药物组合物具有良好的稳定性，可用于治疗肿瘤等疾病。

Description

一种抗Claudin18.2抗体药物组合物及其用途

技术领域

本发明属于药物制剂领域，具体涉及一种抗Claudin18.2抗体或其抗原结合片段的药物组合物及其应用。

背景技术

背景技术的陈述只是提供与本发明有关的信息，而不必然地构成现有技术。

封闭蛋白(Claudin)家族蛋白是广泛分布于上皮细胞中的紧密连接结构的主要组成部分。和其它封闭蛋白家族蛋白的结构类似，Claudin18.2(也称CLDN18.2)是分子量约27.8kd，具有四个跨膜区的膜蛋白，且具有两个较短的胞外区EC1和EC2。与其它封闭蛋白家族蛋白不同的是，在正常组织中CLDN18.2仅表达于胃部高度分化的上皮细胞中(Tureci Oet al.,Gene,2011)。在来源于胃上皮细胞的肿瘤中，有很高比例的肿瘤细胞表面表达CLDN18.2。在胃癌细胞的淋巴结和其它组织转移肿瘤中，也可以检测到高水平的CLDN18.2表达(Woll S.et al.,Int.J.Cancer,2013)。除胃癌外，也有很高比例的胆管癌、食道癌和胰腺癌等肿瘤细胞中表达CLDN18.2。作为特异性表面标志物，CLDN18.2成为癌症治疗的潜在靶点。研发针对CLDN18.2的高效抗体药物为多种癌症的治疗提供可能，具有巨大的应用潜力和市场价值。但是，目前的抗Claudin18.2抗体制剂不稳定，开发一种稳定的抗Claudin18.2抗体制剂仍是急需的。

发明内容

本发明一方面提供一种药物组合物，其包含抗Claudin18.2抗体或其抗原结合片段和缓冲剂，其中，所述缓冲剂为组氨酸缓冲剂或柠檬酸盐缓冲剂，优选为组氨酸-组氨酸盐酸缓冲剂或柠檬酸-柠檬酸钠缓冲剂；所述抗Claudin18.2抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含如SEQ ID NO:1所示的重链可变区中的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和如SEQ ID NO:2所示的轻链可变区中的LCDR1、LCDR2和LCDR3。在一些实施方案中，所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3是根据Kabat、IMGT、Chothia、AbM或Contact编号系统定义的；在一些具体实施方案中，所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3是根据Kabat编号规则确定的。

在一些实施方案中，所述的药物组合物中所述抗Claudin18.2抗体的HCDR1包含如SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列，HCDR2包含如SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列，HCDR3包含如SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列，LCDR1包含如SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列，LCDR2包含如SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列，且LCDR3包含如SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列。

在一些实施方案中，所述的药物组合物中所述抗Claudin18.2抗体的重链可变区包含氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示的HCDR1，如SEQ ID NO:4所示的HCDR2，和如SEQ IDNO:5所示的HCDR3；轻链可变区包含氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示的LCDR1，如SEQ ID NO:7所示的LCDR2，和如SEQ ID NO:8所示的LCDR3。

在一些实施方案中，所述的药物组合物中所述抗Claudin18.2抗体的重链可变区包含如SEQ ID NO:1所示或与SEQ ID NO:1具有至少90％序列同一性(例如具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列；轻链可变区包含如SEQ ID NO:2所示或与SEQ ID NO:2具有至少90％序列同一性(例如具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗Claudin18.2抗体包含如SEQ ID NO:1所示的重链可变区和如SEQID NO:2所示的轻链可变区。

在一些实施方案中，所述的药物组合物中所述抗Claudin18.2抗体的重链包含如SEQ ID NO:9所示或与SEQ ID NO:9具有至少85％序列同一性(例如具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列；轻链包含如SEQ ID NO:10所示或与SEQ ID NO:10具有至少85％序列同一性(例如具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗Claudin18.2抗体包含如SEQ ID NO:9所示的重链和如SEQ ID NO:10所示的轻链。

在一些实施方案中，所述的药物组合物的pH为5.0至6.7；在一些实施方案中，所述药物组合物的pH为5.5至6.5；在一些实施方案中，所述药物组合物的pH为5.8至6.2；在一些实施方案中，所述药物组合物的pH为6.0。在一些实施方案中，所述药物组合物的pH为5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.4、6.5、6.6或6.7，或为任意2个所述pH值之间的范围值(例如pH为5.0-6.5、5.5-6.2、5.8-6.2等等)。

在一些实施方案中，所述的药物组合物中所述缓冲剂的浓度为5mM至50mM；在一些实施方案中，所述缓冲剂的浓度为5mM至30mM；在一些实施方案中，所述缓冲剂的浓度为10mM至25mM；在一些实施方案中，所述缓冲剂的浓度为20mM。在一些实施方案中，所述缓冲剂的浓度为5mM、10mM、15mM、16mM、17mM、18mM、19mM、20mM、21mM、22mM、23mM、24mM、25mM、26mM、27mM、28mM、29mM、30mM、35mM、40mM、45mM或50mM，或为任意2个所述缓冲剂的浓度值之间的范围值(例如10mM-30mM、15mM-25mM、20mM-25mM等等)。

在一些实施方案中，所述的药物组合物中所述抗Claudin18.2抗体或其抗原结合片段的浓度为1mg/mL至80mg/mL；在一些实施方案中，所述抗Claudin18.2抗体或其抗原结合片段的浓度为10mg/mL至60mg/mL；在一些实施方案中，所述抗Claudin18.2抗体或其抗原结合片段的浓度为20mg/mL至30mg/mL；在一些实施方案中，所述抗Claudin18.2抗体或其抗原结合片段的浓度为20mg/mL。在一些实施方案中，其中所述抗Claudin18.2抗体或其抗原结合片段的浓度为1mg/mL、5mg/mL、10mg/mL、15mg/mL、16mg/mL、17mg/mL、18mg/mL、19mg/mL、20mg/mL、21mg/mL、22mg/mL、23mg/mL、24mg/mL、25mg/mL、26mg/mL、27mg/mL、28mg/mL、29mg/mL、30mg/mL、31mg/mL、32mg/mL、33mg/mL、34mg/mL、35mg/mL、40mg/mL、45mg/mL、50mg/mL、55mg/mL、60mg/mL、65mg/mL、70mg/mL、75mg/mL、80mg/mL，或为任意2个所述浓度值之间的范围值(例如1mg/mL-80mg/mL、5mg/mL-60mg/mL、10mg/mL-40mg/mL、15mg/mL-25mg/m等等)。

在一些实施方案中，所述的药物组合物还包含表面活性剂。在一些实施方案中，所述表面活性剂是非离子表面活性剂。在一些实施方案中，所述表面活性剂选自聚山梨酯、聚山梨酯20(也称吐温20或PS20)、聚山梨酯80(也称吐温80或PS80)、聚羟亚烃、Triton、十二烷基磺酸钠、月桂基磺酸钠、辛基糖甙钠、月桂基-磺基甜菜碱、肉豆蔻基-磺基甜菜碱、亚油基-磺基甜菜碱、硬脂基-磺基甜菜碱、月桂基-肌氨酸、肉豆蔻基-肌氨酸、亚油基-肌氨酸、硬脂基-肌氨酸、亚油基-甜菜碱、肉豆蔻基-甜菜碱、鲸蜡基-甜菜碱、月桂酰胺基丙基-甜菜碱、柯卡酰胺基丙基-甜菜碱、亚油酰胺基丙基-甜菜碱、肉豆蔻酰胺基丙基-甜菜碱、棕榈酰胺基丙基-甜菜碱、异硬脂酰胺基丙基-甜菜碱、肉豆蔻酰胺基丙基-二甲基胺、棕榈酰胺基丙基-二甲基胺、异硬脂酰胺基丙基-二甲基胺、甲基可可酰基钠、甲基油基牛磺酸钠、聚乙二醇、聚丙二醇、乙烯与丙烯二醇的共聚物等。在一些实施方案中，所述表面活性剂为聚山梨酯；在一些实施方案中，所述表面活性剂为聚山梨酯20。

在一些实施方案中，所述的药物组合物中所述表面活性剂的浓度为0.001％(w/v)至1％(w/v)。在一些实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.01％(w/v)至0.1％(w/v)；在一些实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.01％(w/v)至0.04％(w/v)；在一些实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.02％(w/v)。在一些实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.001％(w/v)、0.002％(w/v)、0.003％(w/v)、0.004％(w/v)、0.005％(w/v)、0.006％(w/v)、0.007％(w/v)、0.008％(w/v)、0.009％(w/v)、0.01％(w/v)、0.02％(w/v)、0.03％(w/v)、0.04％(w/v)、0.05％(w/v)、0.06％(w/v)、0.07％(w/v)、0.08％(w/v)、0.09％(w/v)、0.1％(w/v)、0.2％(w/v)、0.3％(w/v)、0.4％(w/v)、0.5％(w/v)、0.6％(w/v)、0.7％(w/v)、0.8％(w/v)、0.9％(w/v)、0.2％(w/v)、1％(w/v)，或为任意2个所述表面活性剂浓度值之间的范围值(例如0.001％(w/v)-0.1％(w/v)、0.01％(w/v)-0.1％(w/v)、0.01％(w/v)-0.08％(w/v)、0.02％(w/v)-0.06％(w/v)等等)。

在一些实施方案中，所述的药物组合物还包含稳定剂。在一些实施方案中，所述稳定剂为糖。在一些实施方案中，所述的糖选自常规组合物(CH₂O)_n及其衍生物，包括单糖，二糖，三糖，多糖，糖醇，还原性糖，非还原性糖等等。所述的糖可选自葡萄糖，蔗糖，海藻糖，乳糖，果糖，麦芽糖，右旋糖苷，甘油，赤藻糖醇，丙三醇，阿拉伯糖醇，sylitol，山梨糖醇，甘露醇，密二糖，松三糖，蜜三糖，甘露三糖，水苏糖，麦芽糖，乳果糖，麦芽酮糖，山梨醇，麦芽糖醇，乳糖醇，异-麦芽酮糖等。在一些实施方案中，所述稳定剂选自蔗糖、海藻糖或甘露醇。在一些实施方案中，所述稳定剂为海藻糖。

在一些实施方案中，所述的药物组合物中所述稳定剂的浓度为1mM至300mM。在一些实施方案中，所述稳定剂的浓度为100mM至250mM；在一些实施方案中，所述稳定剂的浓度为130mM至230mM；在一些实施方案中，所述稳定剂的浓度为200mM。在一些实施方案中，所述稳定剂的浓度为1mM、10mM、50mM、70mM、80mM、90mM、100mM、110mM、120mM、130mM、140mM、150mM、160mM、170mM、180mM、190mM、200mM、210mM、220mM、230mM、240mM、250mM、260mM、270mM、280mM、290mM、300mM，或为任意2个所述稳定剂浓度值之间的范围值(例如1mM-300mM、80mM-250mM、100mM-250mM、130mM-230mM、150mM-250mM等等)。

在一些实施方案中，所述的药物组合物，其包含：(a)1mg/mL至80mg/mL的抗Claudin18.2抗体或其抗原结合片段，(b)0.001至1％(w/v)的聚山梨酯20，(c)1mM至300mM的海藻糖，和(d)5mM至50mM的组氨酸缓冲剂；所述药物组合物的pH为5.0至6.7；

在一些实施方案中，所述的药物组合物，其包含：(a)20mg/mL至50mg/mL的重链如SEQ ID NO:9所示且轻链如SEQ ID NO:10所示的抗Claudin18.2抗体，(b)0.01至0.1％(w/v)的聚山梨酯20，(c)130mM至230mM的海藻糖，和(d)10mM至30mM的组氨酸-组氨酸盐酸缓冲剂；所述药物组合物的pH为5.5至6.2；

在一些实施方案中，所述的药物组合物，其包含：(a)20mg/mL的重链如SEQ ID NO:9所示且轻链如SEQ ID NO:10所示的抗Claudin18.2抗体，(b)0.02％(w/v)的聚山梨酯20，(c)200mM的海藻糖，和(d)20mM的组氨酸-组氨酸盐酸缓冲剂；所述药物组合物的pH为6.0。

在一些实施方案中，所述的药物组合物是溶液制剂。在一些实施方案中，所述溶液制剂的溶剂是水。

本发明另一方面还提供一种冻干制剂，其为所述药物组合物的冻干形式制剂。

本发明另一方面还提供一种冻干制剂，所述冻干制剂复溶后可形成所述的药物组合物。

本发明另一方面还提供一种制备冻干制剂的方法，所述方法包括将所述的药物组合物进行冷冻干燥的步骤。

本发明另一方面还提供一种冻干制剂，所述冻干制剂通过将所述的药物组合物冷冻干燥获得。在一些实施方案中，所述冷冻干燥依次包括预冻、一次干燥和二次干燥的步骤。

本发明另一方面还提供一种复溶溶液，所述复溶溶液是通过将所述的冻干制剂复溶制备获得。在一些实施方案中，所述复溶溶液的溶剂是水。

本发明另一方面还提供一种制品，其包括容器，该容器中装有所述的药物组合物、冻干制剂或复溶溶液。

在一些实施方案中，本发明还提供所述的药物组合物、冻干制剂、复溶溶液或制品在制备用于治疗疾病的药物中的用途。

本发明还提供一种治疗疾病的方法，包括给予有需要的受试者治疗有效量的所述药物组合物、冻干制剂、复溶溶液或制品。在一些实施方案中，本发明还提供所述药物组合物、冻干制剂、复溶溶液或制品，其用作治疗疾病的药物。在一些实施方案中，所述疾病为癌症；在一些实施方案中，所述癌症选自胃癌、胆管癌、食道癌、胰腺癌、肝癌和肺癌；在一些实施方案中，所述疾病为与CLDN18.2的表达相关的疾病。

本发明的药物组合物具有良好的稳定性。在一些实施方案中，其能有效地抑制抗体的聚集、脱酰胺作用和/或降解反应速率，提高抗体的物理、化学和/或生物活性(例如抗体的ADCC活性)的稳定性。

附图说明

图1是如实施例4中所述在高温条件下各处方SE-HPLC纯度随时间变化趋势图。

图2是如实施例4中所述在冻融条件下各处方SE-HPLC纯度随冻融循环数变化趋势图。

具体实施方式

定义

为了更容易理解本发明，以下具体定义了某些技术和科学术语。除非在本文中另有明确定义，本文使用的所有其它技术和科学术语都具有本发明所属领域的一般技术人员通常理解的含义。

本发明所用氨基酸三字母代码和单字母代码如J.biol.chem，243，p3558(1968)中所述。

说明书和权利要求书中所用的单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括复数指代，除非上下文清楚表明并非如此。

除非上下文另外清楚要求，否则在专利说明书和权利要求书中，应将词语“包含”、“具有”、“包括”等理解为“包括但不仅限于”的意义，而不是排他性或穷举性意义。

术语“和/或”，意指包含“和”与“或”两种含义。例如短语“A、B和/或C”旨在涵盖以下方面中的每一个：A、B和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A(单独)；B(单独)；和C(单独)。

本文中的术语“抗体”以最广义使用，其涵盖单克隆抗体、多克隆抗体，涵盖单特异性抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体、diabody、triabody和tetrabody、串联二-scFv、串联三-scFv)，也涵盖全长抗体(由两条相同的重链和两条相同的轻链通过链间二硫键连接而成的四肽链结构抗体)及其抗原结合片段(也称抗原结合部分，其是展现出期望的抗原结合活性的全长抗体的一部分，例如Fab、Fab’、F(ab’)2、scFv或Fv等)。天然存在的抗体(天然抗体)通常是约150,000道尔顿的异四聚糖蛋白，其是由两条相同的轻链(L)和两条相同的重链(H)通过链间二硫键连接而成的四肽链结构。每条重链由重链可变区(本发明中缩写为VH)和重链恒定区组成。重链恒定区由3个结构域CH1、CH2和CH3组成。每条轻链由轻链可变区(本发明中缩写为VL)和轻链恒定区(本发明中缩写为CL)组成。轻链恒定区由一个结构域CL组成。哺乳动物重链分为α、δ、ε、γ和μ重链。哺乳动物轻链分为λ或κ轻链。包含α、δ、ε、γ和μ重链的免疫球蛋白为免疫球蛋白(Ig)A、IgD、IgE、IgG和IgM。天然抗体形成“Y”形状；Y的茎由两条重链的第二和第三恒定区(并且对于IgE和IgM，第四恒定区)结合在一起组成，二硫键(链间)在铰链中形成。重链γ、α和δ具有由三个串联(成一行)Ig结构域构成的恒定区，和用于增加柔性的铰链区；重链μ和ε具有由四个免疫球蛋白结构域构成的恒定区。第二和第三恒定区分别称为“CH2结构域”和“CH3结构域”；Y的每个臂包括结合到单个轻链的单个重链的可变区和第一恒定区(CH1)。“Fc”区是包含抗体的CH2和CH3结构域的两个重链片段，两个重链片段由两个或多个二硫键并通过CH3结构域的疏水作用保持在一起。现有技术中已公开多种Fc恒定区变体，例如抗体的重链恒定区的Fc具有238、265、269、270、297、327和329(采用EU编号系统)中的一个或更多个氨基酸的替代(美国专利No.6,737,056)，或者抗体的重链恒定区的Fc具有234、235、265、329(采用EU编号系统)处的一个或更多个氨基酸的替代，或者抗体的重链恒定区的Fc具有238、252、254、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424或434(采用EU编号系统)处的一个或更多个氨基酸的替代(参见美国专利No.7,371,826)等。这些突变已被证实使得抗体具有新的性能，但不改变抗体可变区的功能。

术语“可变区”或“可变域”指抗体重链或轻链中涉及抗体结合抗原的域。VH和VL各包含四个保守的框架区(FR)和三个互补决定区(CDR)。其中，术语“互补决定区”或“CDR”指可变结构域内主要促成与抗原结合的区域；“框架”或“FR”是指除CDR残基之外的可变结构域残基。VH包含3个CDR区：HCDR1、HCDR2和HCDR3；VL包含3个CDR区：LCDR1、LCDR2和LCDR3。每个VH和VL由从氨基末端排到羧基末端按以下顺序排列的三个CDR和四个FR构成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。

本领域人员公知，可以通过多种方法来定义抗体可变区的CDR，例如基于抗体的三维结构和CDR环的拓扑学的Chothia(Chothia等人.(1989)Nature 342:877-883，Al-Lazikani等人，“Standard conformations for the canonical structures ofimmunoglobulins”，Journal of Molecular Biology，273，927-948(1997))，基于抗体序列可变性的Kabat(Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第4版，U.S.Department of Health and Human Services,National Institutes of Health(1987))，AbM(University of Bath)，Contact(University College London)，国际ImMunoGeneTics database(IMGT)(万维网imgt.cines.fr/)，以及基于利用大量晶体结构的近邻传播聚类(affinity propagation clustering)的North CDR定义。本领域技术人员应当理解的是，除非另有规定，否则术语给定抗体或其区(例如可变区)的“CDR”或“互补决定区”应理解为涵盖如通过本发明描述的上述已知方案中的任何一种界定的互补决定区。各种编号系统其对应CDR是本领域技术人员熟知的，如表1所示：

表1.抗体CDR定义方法

	Kabat	AbM	Chothia	Contact	IMGT
						LCDR1	L24–L34	L24–L34	L24–L34	L30–L36	L27–L32
LCDR2	L50–L56	L50–L56	L50–L56	L46–L55	L50–L52
						LCDR3	L89–L97	L89–L97	L89–L97	L89–L96	L89–L96
HCDR1	H31–H35	H26–H35	H26–H32	H30–H35	H26–H35
						HCDR2	H50–H65	H50–H58	H52–H56	H47–H58	H51–H57
HCDR3	H95–H102	H95–H102	H95–H102	H93–H101	H93–H102

备注：表1中，其中，Laa-Lbb指从抗体轻链的N端开始，按照其对应的编码规则从第aa位至第bb位的氨基酸序列；Haa-Hbb指从抗体重链的N端开始，按照其对应的编码规则从第aa位至第bb位的氨基酸序列。例如，表1第二行第二列的L24-L34指从抗体轻链可变区N端开始，按照Kabat编码规则从第24位至第34位残基所确定的氨基酸序列；其它依次类推。

术语“抗体片段”指不同于完整抗体的分子，其包含完整抗体的部分，所述部分与完整抗体所结合的抗原相结合。抗体片段的实例包括但不限于Fv、Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab′)2、单域抗体、单链Fab(scFab)、双抗体、线性抗体、单链抗体分子(例如scFv)；以及由抗体片段形成的多特异性抗体。

如本文所用，术语“单克隆抗体”，指由单一的克隆细胞株得到的抗体，所述的细胞株不限于真核的，原核的或噬菌体的克隆细胞株。

术语“特异性结合”是指抗体以比针对其他抗原或表位更高的亲和力结合至某个抗原或该抗原内的表位。通常，抗体以1×10^-7M或更小(例如1×10^-8M或更小、1×10^-9M或更小、1×10^-10M或更小、1×10^-11M或更小，或者1×10^-12M或更小)的平衡解离常数(KD)结合抗原或抗原内的表位。在一些实施方式中，抗体与抗原结合的KD为该抗体结合至非特异性抗原(例如BSA、酪蛋白)的KD的10％，或1％。可使用标准程序来测量KD，例如通过表面等离子体共振测定法所测量的。然而，特异性结合至抗原或抗原内的表位的抗体可能对其它相关的抗原具有交叉反应性，例如，对来自其它物种(同源)(诸如人或猴，例如食蟹猕猴(Macaca fascicularis)(cynomolgus，cyno)、黑猩猩(Pan troglodytes)(chimpanzee，chimp))或狨猴(Callithrix jacchus)(commonmarmoset，marmoset)的相同抗原具有交叉反应性。

如本文所用，术语“亲和力”是指分子(例如，抗体)的单个结合部位与其结合配体(例如，抗原)之间非共价相互作用的总体的强度。除非另外指明，如本文所用，“亲和力”是指内部结合亲和力，其反映出结合对(例如，抗体与抗原)的成员之间1:1相互作用。分子X对其配体Y的亲和力通常可以由解离常数(KD)表示。亲和力可以通过本领域已知的常规方法(包括本文所述的那些)测量。术语“kassoc”或“ka”指特定抗体-抗原相互作用的缔合速率，而如本文所使用的术语“kdis”或“kd”指特定抗体-抗原相互作用的解离速率。如本文所使用的，术语“KD”指解离常数，其获得自kd与ka的比率(即kd/ka)并且表示为摩尔浓度(M)。可以使用本领域良好建立的方法测定抗体的KD值。用于测定抗体KD的方法包括使用生物传感系统例如系统测量表面等离子体共振，或通过溶液平衡滴定法(SET)测量溶液中的亲和力。

序列之间“序列同一性”的计算。为确定两个氨基酸序列的同一性百分数，将所述序列出于最佳比较目的比对(例如，可以为了最佳比对而在第一和第二氨基酸序列中引入空位或可以为比较目的而抛弃非同源序列)。在一个优选实施方案中，为比较目的，所比对的参考序列的长度是至少30％、优选地至少40％、更优选地至少50％、60％和甚至更优选地至少70％、80％、90％、100％的参考序列长度。随后比较在对应氨基酸位置处的氨基酸残基。当第一序列中的位置由第二序列中对应位置处的相同氨基酸残基占据时，则所述分子在这个位置处是相同的。可以利用数学算法实现两个序列间的序列比较和同一性百分数的计算。在一个优选实施方案中，使用已经集成至GCG软件包的GAP程序中的Needlema和Wunsch((1970)J.Mol.Biol.48:444-453)算法(在http://www.gcg.com可获得)，使用Blossum 62矩阵或PAM250矩阵和空位权重16、14、12、10、8、6或4和长度权重1、2、3、4、5或6，确定两个氨基酸序列之间的同一性百分数。特别优选的参数集合(和除非另外说明否则应当使用的一个参数集合)是采用空位罚分12、空位延伸罚分4和移码空位罚分5的Blossum62评分矩阵。还可以使用PAM120加权余数表、空位长度罚分12、空位罚分4)，利用已经并入ALIGN程序(2.0版)的E.Meyers和W.Miller算法((1989)CABIOS,4:11-17)确定两个氨基酸序列之间的同一性百分数。额外地或备选地，可以进一步使用本发明所述的蛋白质序列作为“查询序列”以针对公共数据库执行检索，以例如鉴定其他家族成员序列或相关序列。

“缓冲剂”、“缓冲液”指通过其酸-碱共轭组分的作用而耐受pH变化的缓冲剂。将pH控制在适当范围中的缓冲剂的例子包括醋酸盐缓冲剂、琥珀酸盐缓冲剂、葡萄糖酸盐缓冲剂、组氨酸缓冲剂、草酸盐缓冲剂、乳酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂、枸橼酸盐缓冲剂、酒石酸盐缓冲剂、延胡索酸盐缓冲剂、甘氨酰甘氨酸缓冲剂和其它有机酸缓冲剂。

“组氨酸缓冲剂”、“组氨酸缓冲液”是包含组氨酸根离子的缓冲剂。组氨酸缓冲剂的实例包括组氨酸-组氨酸盐酸，组氨酸-醋酸盐，组氨酸-磷酸盐，组氨酸-硫酸盐等缓冲剂，优选组氨酸-组氨酸盐酸缓冲剂。组氨酸-组氨酸盐酸缓冲剂是组氨酸与组氨酸盐酸盐配制而成，或组氨酸与盐酸配制而成。

“柠檬酸盐缓冲剂”、“柠檬酸盐缓冲液”是包括柠檬酸根离子的缓冲剂。柠檬酸盐缓冲剂的实例包括柠檬酸-柠檬酸钠、柠檬酸-柠檬酸钾、柠檬酸-柠檬酸钙、柠檬酸-柠檬酸镁等。优选的柠檬酸盐缓冲剂是柠檬酸-柠檬酸钠。

“磷酸盐缓冲剂”、“磷酸盐缓冲液剂”是包括磷酸根离子的缓冲剂。磷酸盐缓冲剂的实例包括磷酸氢二钠-磷酸二氢钠、磷酸氢二钠-磷酸二氢钾、磷酸氢二钠-枸橼酸等。优选的磷酸盐缓冲剂是磷酸氢二钠-磷酸二氢钠。

“稳定剂”是指有助于维持生物制药药物的结构完整性的组分，特别是在冷冻和/或冻干和/或储存期间(特别是当暴露于应激(stress)时)。这种稳定作用可以由于多种原因而产生，通常这种稳定剂可起到减轻蛋白质变性的渗透剂的作用。在一些实施方案中，所述稳定剂为糖。在一些实施方案中，所述糖选自常规组合物(CH₂O)_n及其衍生物，包括单糖，二糖，三糖，多糖，糖醇，还原性糖，非还原性糖等等。所述的糖可选自葡萄糖，蔗糖，海藻糖，乳糖，果糖，麦芽糖，右旋糖苷，甘油，赤藻糖醇，丙三醇，阿拉伯糖醇，sylitol，山梨糖醇，甘露醇，密二糖，松三糖，蜜三糖，甘露三糖，水苏糖，麦芽糖，乳果糖，麦芽酮糖，山梨醇，麦芽糖醇，乳糖醇，异-麦芽酮糖等。在一些实施方案中，所述稳定剂选自蔗糖、海藻糖或甘露醇。在一些实施方案中，所述稳定剂为海藻糖。

“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述抗体与其他化学组分的混合物，所述其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是保持活性成分的稳定性，促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。

本发明中，“药物组合物”和“制剂”并不互相排斥。

本发明中所述药物组合物的溶液形式，若无特殊说明，其中的溶剂均为水。

“冻干制剂”表示液体或溶液形式的药物组合物或液体或溶液制剂经真空冷冻干燥步骤之后获得的制剂或药物组合物。

尽管本发明提供了含量范围或含量值，但本领域一般技术人员理解，所述含量范围或含量值涵盖了所测定具体值的可接受误差范围。

本发明所述的药物组合物能够达到一种稳定的效果：其中的抗体在贮藏后基本上保留其物理稳定性和/或化学稳定性和/或生物学活性的药物组合物，优选地，药物组合物在贮藏后基本上保留其物理和化学稳定性以及其生物学活性。贮藏期一般基于药物组合物的预定保存期来选择。目前有多种测量蛋白质稳定性的分析技术，可测量在选定温度贮藏选定时间段后的稳定性。

在一些实施方案中，稳定的制剂是在下述情况下没有观察到显著变化的制剂：在冷藏温度(2-8℃)保存至少3个月、优选6个月、更优选1年，且甚至更优选地多达2年。另外，稳定的液体制剂包括这样的液体制剂：其在包括25℃的温度保存包括1个月、3个月、6个月在内的时段后表现出期望的特征。稳定性的典型的例子：通过SE-HPLC测得，通常不超过约10％、优选不超过约5％的抗体单体发生聚集或降解。通过视觉分析，制剂是淡黄色近无色澄明液体或者无色澄明液体，或澄清至稍微乳白色。所述制剂的浓度、pH和重量克分子渗透压浓度具有不超过±10％变化。通常观察到不超过约10％、优选不超过约5％的减少。通常形成不超过约10％、优选不超过约5％的聚集。

如果在目检颜色和/或澄清度后，或者通过UV光散射、尺寸排阻色谱法(SEC)和动态光散射(DLS)测得，抗体没有显示出显著的聚集增加、沉淀和/或变性，那么所述抗体在药物制剂中“保留它的物理稳定性”。蛋白构象的变化可以通过荧光光谱法(其确定蛋白三级结构)和通过FTIR光谱法(其确定蛋白二级结构)来评价。

如果抗体没有显示出显著的化学改变，那么所述抗体在药物制剂中“保留它的化学稳定性”。通过检测和定量化学上改变的形式的蛋白，可以评估化学稳定性。经常改变蛋白化学结构的降解过程包括水解或截短(通过诸如尺寸排阻色谱法和CE-SDS等方法来评价)、氧化(通过诸如与质谱法或MALDI/TOF/MS结合的肽谱法等方法来评价)、脱酰胺作用(通过诸如离子交换色谱法、毛细管等电聚焦、肽谱法、异天冬氨酸测量等方法来评价)和异构化(通过测量异天冬氨酸含量、肽谱法等来评价)。

如果抗体在给定时间的生物活性是在制备药物制剂时表现出的生物活性的预定范围内，那么所述抗体在药物制剂中“保留它的生物活性”。

“施用”、“给予”和“处理”，当其应用于动物、人、实验受试者、细胞、组织、器官或生物流体时，是指外源性药物、治疗剂、诊断剂或组合物与动物、人、受试者、细胞、组织、器官或生物流体的接触。“施用”、“给予”和“处理”可以指例如治疗、药物代谢动力学、诊断、研究和实验方法。细胞的处理包括试剂与细胞的接触，以及试剂与流体的接触，其中所述流体与细胞接触。“施用”、“给予”和“处理”还意指通过试剂、诊断、结合组合物或通过另一种细胞体外和离体处理例如细胞。“处理”当其应用于人、兽医学或研究受试者时，是指治疗处理、预防或预防性措施，研究和诊断应用。

“治疗”意指给予患者内用或外用治疗剂，例如包含本发明的任一种的药物组合物，所述患者具有一种或多种疾病症状，而已知所述治疗剂对这些症状具有治疗作用。通常，在受治疗患者或群体中以有效缓解一种或多种疾病症状的量给予治疗剂，以诱导这类症状退化或抑制这类症状发展到任何临床右测量的程度。有效缓解任何具体疾病症状的治疗剂的量(也称作“治疗有效量”)可根据多种因素变化，例如患者的疾病状态、年龄和体重，以及药物在患者产生需要疗效的能力。通过医生或其它专业卫生保健人士通常用于评价该症状的严重性或进展状况的任何临床检测方法，可评价疾病症状是否已被减轻。尽管本发明的实施方案(例如治疗方法或制品)在缓解每个目标疾病症状方面可能无效，但是根据本领域已知的任何统计学检验方法如Student t检验、卡方检验、依据Mann和Whitney的U检验、Kruskal-Wallis检验(H检验)、Jonckheere-Terpstra检验和Wilcoxon检验确定，其在统计学显著数目的患者中应当减轻目标疾病症状。

本文所描述的药物组合物可经过配制用于肠胃外给药、皮下给药、静脉内给药、肌内给药、动脉内给药、鞘内给药或腹膜内给药。药物组合物可通过经鼻、喷雾、口服、气雾剂、直肠或阴道给药来给予。组合物还可通过输注、快速注射或通过植入装置来给予。

在以上说明书中提出了本发明一种或多种实施方式的细节。虽然可使用与本文所述类似或相同的任何方法和材料来实施或测试本发明，但是以下描述优选的方法和材料。通过说明书和权利要求书，本发明的其他特点、目的和优点将是显而易见的。在说明书和权利要求书中，除非上下文中有清楚的另外指明，单数形式包括复数指代物的情况。除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语都具有本发明所属领域普通技术人员所理解的一般含义。说明书中引用的所有专利和出版物都通过引用纳入。提出以下实施例是为了更全面地说明本发明的优选实施方式。这些实施例不应以任何方式理解为限制本发明的范围。

实施例

以下结合实施例进一步描述本发明，但这些实施例并非是对本发明范围的限制。本发明实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照原料或商品制造厂商所建议的条件。未注明具体来源的试剂，为市场购买的常规试剂。

制剂制备与检测过程中使用的方法、设备、抗体如下：

1.热稳定性分析

采用UNCle热稳定性分析仪，

取9uL样品置样品管中，进行SLS和DLS分析程序。

2.CE-SDS NR

采用proteinSimple maurice毛细管电泳仪。

具体实施过程：将样品用样品缓冲液稀释至浓度1mg/mL，加入1μL的10KDa内标和5μL 250mM的碘乙酰胺溶液，充分混匀后70℃金属浴10min，而后离心5min。使用CE-SDSCartridges卡盒，检测波长220nm，分离电压5750V，分离时间40分钟。

3.CE-SDS R

用proteinSimple maurice毛细管电泳仪。

具体实施过程：将样品用样品缓冲液稀释至浓度1mg/mL，加入1μL的10KDa内标和加入5μLβ-巯基乙醇，充分混匀后70℃金属浴10min，而后离心5min。使用CE-SDSCartridges卡盒，检测波长220nm，分离电压5750V，分离时间30分钟。

4.SE-HPLC

采用Agilent 1260高效液相色谱仪，

色谱柱(TOSOH，TSKgel G3000SWXL)，

流动相组成：50mmol/L磷酸盐缓冲液+200mmol/L NaCl溶液，pH 6.7，

流速为1mL/min，检测波长280nm。

移取100μL的供试品加入900μL供试品的空白处方溶液稀释至2mg/mL，进样20μl，等度运行时间15分钟。

5.CEX-HPLC

采用Agilent 1260高效液相色谱仪，

色谱柱(Thermo，ProPac WCX-10)，

流动相A，30mmol/L MES+20mmol/L NaCl缓冲液溶液，pH 6.5；流动相B，30mmol/LMES+200mmol/L NaCl缓冲液溶液，pH 6.5；流动相C，30mmol/L MES+500mmol/L NaCl缓冲液溶液，pH 6.5。

流速0.8mL/min，检测波长280nm，柱温40℃。

移取100μL的供试品加入900μL流动相A稀释至2mg/mL，进样10μL，梯度运行时间45分钟，流动相梯度见下表2。

表2.流动相梯度表

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6.ADCC生物学活性检测

ADCC指抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用。本实验采用荧光素酶报告基因检测技术，靶细胞为稳定表达caludin18.2抗原的细胞株(MC38-caludin18.2)，效应细胞为稳定表达FcγRIIIa的细胞株(Jurkat/NFAT-Luc-CD16a)。抗体的Fab段结合靶细胞的抗原表位，其FC段与效应细胞表面的FcR结合并活化效应细胞的FcRγIIIa受体，进而引起NFAT信号通路的激活，通过生物发光值定量检测细胞裂解液中的荧光素酶活性，从而快速、准确测定抗体的ADCC生物学活性。

具体实施方法：靶细胞浓度稀释至2.0×10⁵个细胞/mL，每孔50μL加至96孔细胞培养板中，置于二氧化碳培养箱培养16～18小时。将待测样品进行5倍，9个浓度点的浓度制备3000ng/mL、600ng/mL、120ng/mL、24ng/mL、4.8ng/mL、0.96ng/mL、0.19ng/mL、0.04ng/mL、0.008ng/mL，已接种靶细胞和抗体溶液的96孔板中，每孔加入50μL效应细胞悬液，置于二氧化碳培养箱培养6小时，加入50μL ONE-GloTM检测溶液，静止40分钟后采用化学发光全波长顶读模式进行检测。结果计算：采用相对生物学活性进行评价，供试品相对于参考品的ADCC生物学活性范围为70-130％。参考品为经本公司标定的活性物质，EC50值为1.0～9.0ng/mL。

7.蛋白含量UV

仪器与用具：紫外分光光度计(岛津、UV2600)、电子天平、容量瓶。

取供试品溶液，用空白处方溶液将供试品稀释蛋白浓度至0.2mg/mL～0.6mg/mL，读取OD280处的数值，计算蛋白含量。

计算公式：蛋白含量(mg/mL)＝(供试品OD280×稀释倍数D)/消光系数。

8.渗透压摩尔浓度、不溶性微粒、pH值等检测：参考中国药典2020年版，通则。

9.抗Claudin18.2抗体

本发明的抗Claudin18.2抗体详细记载于WO2021008463A1中，在此全文援引加入本文。示范性地，以下制剂实施例中所用的抗Claudin18.2抗体为18.2-A1F(以下称M108)。

M108重链可变区氨基酸序列为(SEQ ID NO：1)：

M108轻链可变区氨基酸序列为(SEQ ID NO：2)：

M108重链HCDR1序列为(SEQ ID NO：3)：SSWLI；

M108重链HCDR2序列为(SEQ ID NO：4)：TIVPSDSYTNYNQKFKD；

M108重链HCDR3序列为(SEQ ID NO：5)：FRTGNSFDY；

M108轻链LCDR1序列为(SEQ ID NO：6)：KSSQSVLNSGNQKNYLT；

M108轻链LCDR2序列为(SEQ ID NO：7)：WAVARQS；

M108轻链LCDR3序列为(SEQ ID NO：8)：QNSIAYPFT；

M108重链氨基酸序列为(SEQ ID NO：9)：

M108轻链氨基酸序列为(SEQ ID NO：10)：

实施例1.pH的筛选

使用下列不同pH缓冲液，配制蛋白浓度为20mg/mL的抗Claudin18.2抗体(M108)溶液制剂，制剂处方见表3。

表3.不同pH体系的制剂处方

将配制好的制剂在高温(37℃)条件下放置20天，考察第0天、7天、10天、20天时制剂的稳定性，并以CE-SDS NR、SE-HPLC和CEX-HPLC纯度百分比为评价指标，实验结果见表4。

表4.不同pH体系的制剂稳定性实验结果

备注：表中“--”表示该时间点未检测

37℃条件下放置20天时实验结果表明：

CE-SDS非还原纯度显示，4个制剂处方中BF-3和BF-4纯度显著下降，表明缓冲液pH在6.7以上时导致Claudin18.2抗体的稳定性下降，导致该抗体纯度显著下降。

SE-HPLC纯度数据显示，BF-1和BF-2纯度无明显差异。BF-3纯度下降幅度较大，约3％。表明缓冲剂pH在5.5～6.7范围内可以维持Claudin18.2抗体的稳定性。CEX-HPLC数据显示，pH5.5和pH6.0处方中，pH6.0的组氨酸缓冲剂最优。

因此，使用偏酸性的缓冲体系可明显改善抗Claudin18.2抗体的稳定性，且pH5.5～6.7范围内均可较好维持其稳定性。故选择6.0或接近6.0的pH值继续进一步缓冲剂种类的研究。

实施例2.缓冲剂种类筛选

采用3种缓冲盐组分(柠檬酸-柠檬酸钠、组氨酸-组氨酸盐酸、磷酸二氢钠-磷酸氢二钠)配制pH5.8、pH6.0、pH6.2的蛋白浓度为20mg/mL的抗Claudin18.2抗体(M108)溶液制剂，制剂处方见表5。

表5.不同缓冲剂的制剂处方

将配制好的制剂在高温条件(实验条件37℃)下放置2周，考察第2周的SE-HPLC、CEX-HPLC纯度的变化，实验结果见表6。

表6.缓冲剂筛选实验结果

备注：表中，“2W”表示实验开始后2周，下同

实验结果表明：

SE-HPLC数据显示，37℃条件下放置2周，BF-5～BF-7无明显差异，且与零时相比纯度略有下降，显示对蛋白有较好的保护作用。BF-8处方中纯度下降约1％，变化较其他处方明显。表明，磷酸盐缓冲液不利于Claudin18.2抗体的稳定性，组氨酸缓冲液和柠檬酸缓冲液可较好的维持Claudin18.2抗体的稳定性。

CEX-HPLC实验结果显示，CEX-HPLC电荷纯度各组间无明显差异；表明3种缓冲剂对该抗体电荷的稳定性影响无明显差异，该指标受pH变化的影响更为明显。

因此，使用柠檬酸盐，组氨酸盐缓冲剂可较好维持抗Claudin18.2抗体的稳定性。故选pH6.0组氨酸盐缓冲剂进行辅料筛选的研究。

实施例3.表面活性剂筛选

在含20mmol/L组氨酸缓冲液pH6.0、20mg/mL甘露醇基础上，设计含不同表面活性剂的蛋白浓度为20mg/mL的抗Claudin18.2抗体(M108)溶液制剂，制剂处方见表7。

表7.不同表面活性剂的处方

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将配制好的制剂样品进行振摇实验，条件为水平振幅200rpm，室温，振荡6天。通过考察样品外观、粒度、SE-HPLC纯度的变化来评价制剂的稳定性。实验结果见表8。

表8.表面活性剂剂筛选实验结果

备注：表中“--”表示未检测

实验结果表明：

外观结果显示，不添加任何表面活性剂的处方(EF-1)在振荡条件下6天时有较多白色碎片状沉淀，添加聚山梨酯20和0.02％～0.04％聚山梨酯80的处方外观均正常，均为澄清液体。含0.01％及0.1％聚山梨酯80的处方在第6天出现少量白色碎片状沉淀，聚山梨酯80在合适的添加量范围内对Claudin18.2抗体形成较好的保护作用。表明添加一定量的聚山梨酯类的表面活性剂在振荡条件下可维持Claudin18.2抗体溶液的外观澄清，有明显的保护作用。

SE-HPLC结果显示，两种表面活性剂条件下各处方纯度无明显差异，且与零点相比纯度几乎无变化；另外，不添加表面活性剂的处方EF-1因浑浊严重得不到有效的纯度数据。表明添加聚山梨酯类的处方在振荡条件下对Claudin18.2抗体纯度有较好的稳定作用。

粒度和分散系数PDI检测数据显示，振荡条件下添加聚山梨酯20和0.02％～0.04％聚山梨酯80的处方PDI数和粒度据无明显差异，且和零时数据较一致。不添加表面活性剂的处方EF-1在振荡6天时粒度的明显增加。表明添加聚山梨酯20的处方在振荡条件下对Claudin18.2抗体有更好的稳定作用

因此，添加表面活性剂聚山梨酯类可明显改善抗Claudin18.2抗体的稳定性，且在此表面活性剂种类中添加聚山梨酯20类最优。故选添加0.02％聚山梨酯20做进一步研究。

实施例4.其它辅料的筛选

在含0.02％(w/v)聚山梨酯20及pH6.0的20mM组氨酸-组氨酸盐酸条件下制备包含其它辅料(海藻糖、蔗糖、甘露醇或氯化钠)的蛋白浓度为20mg/mL的抗Claudin18.2抗体(M108)溶液制剂，制剂处方见表9。

表9.制剂处方组成

将配制好的上述处方制剂分别考察：在高温条件(40℃)下，样品在0点、第2周和第4周的稳定性；在反复冻融(冻融5个循环)条件下，样品的稳定性。通过外观、渗透压、SE-HPLC和CEX-HPLC纯度检测，考察制剂的稳定性。实验结果见以下表10-11，数据变化趋势图见图1-2。

表10. 40℃高温条件下制剂稳定性实验结果

备注：表中“--”表示未检测

表11.冻融条件下制剂稳定性实验结果

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实验结果显示：

高温试验结果显示，添加糖类包括糖醇类组分的各处方EF10～EF13中SE-HPLC纯度％无明显差异且与零点相比数据一致。添加氯化钠和无添加辅料的处方EF-14、EF-15的SE-HPLC纯度％与零时相比显著下降，40℃、2周时下降约4.0％。表明添加糖类和糖醇类例如海藻糖，蔗糖，甘露醇作为辅料的制剂处方在高温中可增加Claudin18.2抗体溶液稳定性。

冻融试验结果显示，添加糖类组分的各处方EF10～EF12中SE-HPLC纯度％无明显差异且与零点相比数据一致。添加糖醇类甘露醇处方中60mM含量的甘露醇处方中无明显异常，若使用甘露醇，则添加量范围需进行再考察。表明，糖类包括蔗糖和海藻糖作为辅料在冻融中均可增加Claudin18.2抗体溶液稳定性。

综上数据，海藻糖，蔗糖和甘露醇均可在不同条件下维持及增加Claudin18.2抗体的稳定性。本次研究选用海藻糖作为稳定剂进行进一步研究，其添加量可在130mM～230mM范围内。

实施例5.制剂蛋白浓度筛选

在含pH6.0的20mM组氨酸-组氨酸盐酸缓冲液，0.02％聚山梨酯20及200mM海藻糖条件下，配制不同蛋白浓度(20mg/mL、40mg/mL、50mg/mL)的抗Claudin18.2抗体(M108)溶液制剂，制剂处方见表12。

表12.不同蛋白浓度的制剂处方

将配制好的制剂在高温条件(40℃)下放置14天，考察第0天、7天、14天时SE-HPLC和CEX-HPLC纯度百分比的变化，评价制剂的稳定性。实验结果见表13。

表13.不同蛋白浓度的制剂稳定性实验结果

实验结果表明，SE-HPLC和CEX-HPLC纯度检测结果显示，不同蛋白浓度制剂中纯度组间均无明显差异。表明，该制剂中Claudin18.2抗体浓度在20mg/mL～50mg/mL范围内均具有良好的稳定性。

实施例6.制剂稳定性实验

制备含20mg/mL M108抗体，pH6.0的20mM组氨酸-组氨酸盐酸缓冲液，200mM海藻糖以及0.02％聚山梨酯20(w/v)的制剂。

配制完成后，过滤，灌装(规格为5mL/瓶)，加塞，轧盖；包装：中硼硅玻璃管制注射剂瓶、注射液用覆聚乙烯-四氟乙烯膜氯化丁基橡胶塞、铝塑组合盖。考察样品在常温(25℃±2℃，60％±10％RH)条件下存放3个月的制剂稳定性；以及样品在低温(5℃±3℃)条件下避光保存24月的制剂稳定性。实验结果见表14、15。

表14.制剂加速稳定性实验结果

备注：表中“--”表示未检测，“1M”表示1个月，下同

表15.制剂长期稳定性实验结果

备注：表中“--”表示未检测；“符合规定”指样品未检出肉眼可见的固体物质以及肉眼可见的微粒沉积物或摇不散的沉淀，也未见蛋白质絮状物等明显可见异物；“符合标准”指样品中10μm及10μm以上的微粒数不超过6000粒，25μm及25μm以上的微粒数不超过600粒。

实验结果表明，本发明的抗Claudin18.2抗体制剂处方具有很好的稳定性。长期稳定性的研究数据结果显示：即使存放24个月，本发明的制剂的外观、可见异物、pH值、渗透压、不溶性微粒及蛋白含量与0时对照相比，均无明显变化；SE-HPLC、CE-SDS NR及CE-SDS R法检测分子大小变异体，主峰纯度均无明显变化；CEX-HPLC法检测电荷异构体，主峰纯度稍有下降趋势，碱性峰无明显变化，ADCC生物学活性与0时对照相比无明显变化。

Claims

1.一种药物组合物，其包含抗Claudin18.2抗体或其抗原结合片段和缓冲剂，其中，所述缓冲剂为组氨酸缓冲剂或柠檬酸盐缓冲剂，优选为组氨酸-组氨酸盐酸缓冲剂或柠檬酸-柠檬酸钠缓冲剂；所述抗Claudin18.2抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含如SEQ ID NO:1所示的重链可变区中的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和如SEQ ID NO:2所示的轻链可变区中的LCDR1、LCDR2和LCDR3；

优选地，所述抗Claudin18.2抗体的HCDR1包含如SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列，HCDR2包含如SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列，HCDR3包含如SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列，LCDR1包含如SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列，LCDR2包含如SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列，且LCDR3包含如SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列；

更优选地，所述抗Claudin18.2抗体的重链可变区包含如SEQ ID NO:1所示或与SEQ IDNO:1具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；且轻链可变区包含如SEQ ID NO:2所示或与SEQ ID NO:2具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；

最优选地，所述抗Claudin18.2抗体的重链包含如SEQ ID NO:9所示或与SEQ ID NO:9具有至少85％序列同一性的氨基酸序列；且轻链包含如SEQ ID NO:10所示或与SEQ ID NO:10具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述药物组合物的pH为5.0至6.7；优选地，所述药物组合物的pH为5.5至6.5；更优选地，所述药物组合物的pH为5.8至6.2；最优选地，所述药物组合物的pH为6.0。

3.根据权利要求1或2所述的药物组合物，其中所述缓冲剂的浓度为5mM至50mM；优选地，所述缓冲剂的浓度为5mM至30mM；更优选地，所述缓冲剂的浓度为10mM至25mM；最优选地，所述缓冲剂的浓度为20mM。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的药物组合物，其中所述抗Claudin18.2抗体或其抗原结合片段的浓度为1mg/mL至80mg/mL；优选地，所述抗Claudin18.2抗体或其抗原结合片段的浓度为10mg/mL至60mg/mL；更优选地，所述抗Claudin18.2抗体或其抗原结合片段的浓度为20mg/mL至30mg/mL；最优选地，所述抗Claudin18.2抗体或其抗原结合片段的浓度为20mg/mL。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物还包含表面活性剂，所述表面活性剂优选为聚山梨酯，更优选为聚山梨酯20。

6.根据权利要求5所述的药物组合物，其中所述表面活性剂的浓度为0.001至1％(w/v)；优选地，所述表面活性剂的浓度为0.01至0.1％(w/v)；更优选地，所述表面活性剂的浓度为0.01至0.04％(w/v)；最优选地，所述表面活性剂的浓度为0.02％(w/v)。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物还包含稳定剂；优选地，所述稳定剂选自蔗糖、海藻糖或甘露醇；更优选为海藻糖。

8.根据权利要求7所述的药物组合物，其中所述稳定剂的浓度为1mM至300mM；优选地，所述稳定剂的浓度为100mM至250mM；更优选地，所述稳定剂的浓度为130mM至230mM；最优选地，所述稳定剂的浓度为200mM。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的药物组合物，其包含：(a)1mg/mL至80mg/mL的所述抗Claudin18.2抗体或其抗原结合片段，(b)0.001至1％(w/v)的聚山梨酯20，(c)1mM至300mM的海藻糖，和(d)5mM至50mM的组氨酸缓冲剂；所述药物组合物的pH为5.0至6.7；

优选地，所述药物组合物包含：(a)20mg/mL至50mg/mL的重链如SEQ ID NO:9所示且轻链如SEQ ID NO:10所示的抗Claudin18.2抗体，(b)0.01至0.1％(w/v)的聚山梨酯20，(c)130mM至230mM的海藻糖，和(d)10mM至30mM的组氨酸-组氨酸盐酸缓冲剂；所述药物组合物的pH为5.5至6.2；

更优选地，所述药物组合物包含：(a)20mg/mL的重链如SEQ ID NO:9所示且轻链如SEQID NO:10所示的抗Claudin18.2抗体，(b)0.02％(w/v)的聚山梨酯20，(c)200mM的海藻糖，和(d)20mM的组氨酸-组氨酸盐酸缓冲剂；所述药物组合物的pH为6.0。

10.一种冻干制剂，所述冻干制剂复溶后可形成权利要求1至9中任一项所述的药物组合物；优选地，所述冻干制剂通过将权利要求1至9中任一项所述的药物组合物冷冻干燥获得。

11.一种复溶溶液，所述复溶溶液是通过将权利要求10所述的冻干制剂复溶获得。

12.一种制品，其包括容器，该容器中装有如权利要求1至9中任一项所述的药物组合物、权利要求10所述的冻干制剂或权利要求11所述的复溶溶液。

13.一种治疗疾病的方法，所述方法包括给予受试者治疗有效量的如权利要求1至9中任一项所述的药物组合物、权利要求10所述的冻干制剂、权利要求11所述的复溶溶液或权利要求12所述的制品；优选地，所述疾病为癌症，优选自胃癌、胆管癌、食道癌、胰腺癌、肝癌和肺癌；可选地，所述疾病为与CLDN18.2的表达相关的疾病。