CN117624170A - 具有抗kras突变肿瘤活性的化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供可用作KRAS抑制剂的具有式(I)结构的化合物、包含这类化合物的药物组合物、制备这类化合物的方法以及这些化合物在治疗癌症中的用途。

Description

具有抗KRAS突变肿瘤活性的化合物
技术领域
本发明涉及药物化学领域。更具体地，本发明涉及一类可用作KRAS抑制剂的具有新结构的化合物、包含这类化合物的药物组合物、制备这类化合物的方法以及这些化合物在治疗癌症或肿瘤中的用途。
背景技术
Ras，即大鼠肉瘤致癌基因同系物，代表一组密切相关的单体球形蛋白，属于GTP酶蛋白家族。具体而言，在正常生理条件下，Ras接受生长因子和各种其他细胞外信号而被激活，负责调节细胞生长、存活、迁移和分化等功能。Ras的这些调节功能是通过GDP结合状态和GTP结合状态之间的转换即“分子开关”来进行(Alamgeer等人，Current OpinPharmacol.2013,13:394-401)。与GDP结合的Ras是非活性形式，处于休眠或关闭状态，此时信号系统关闭，当其暴露于一些促生刺激时会被活化，例如其可以被鸟嘌呤核苷酸交换因子(GEF)诱导而释放GDP并与GTP结合，结果是Ras被由此“开启”，从而转化为Ras活性形式，其募集并活化各类下游效应子，进行信号传递，能够将细胞表面的信号传送至细胞质中，从而控制众多关键的细胞过程如分化、存活和增殖(Zhi Tan等人，Mini-Reviews inMedicinal Chemistry,2016,16,345-357)。
Ras具有GTP酶活性，其可以裂解GTP的末端磷酸而将其转化为GDP，即将其自身转化为非活性状态。但是Ras的内源性GTP酶活性非常低，将GTP-Ras转化为GDP-Ras需要外源性蛋白GAP(GTP酶激活蛋白)。GAP与Ras相互作用并促进GTP向GDP的转化。因此，任何影响Ras与GAP相互作用或者影响GTP向GDP转化的Ras基因突变，都会导致Ras长时间处于活化状态，由此向细胞持续传达生长和分裂的信号，刺激细胞不断增殖，最终导致肿瘤形成和发展。
在人类肿瘤相关的基因中，存在三种遍在表达的Ras基因H-RAS、K-RAS和N-RAS，其分别编码高度同源的、约21KDa的HRas、NRas、KRas蛋白。1982年，研究人员首次发现Ras在癌细胞系中突变活化(Chang,E.H.等人，Proceedings of the National Academy ofSciences of the United States of America,1982,79(16),4848-4852)。随后在不同癌症类型中进行的大型基因组测序研究揭示，Ras蛋白在超过30％的癌症类型中发生突变，尤其在胰腺癌(>90％)、结肠癌(45％)和肺癌(35％)中的突变率最高。转基因和基因工程小鼠模型也已经揭示，突变的Ras蛋白足以驱动并引发多种类型的癌症，且Ras致癌基因对于多种癌症类型的肿瘤的维持和进展也是至关重要的，例如在Ras突变癌症细胞系和癌症动物模型中，已经显示RNA干预能够减缓肿瘤的生长。这些研究使得Ras肿瘤蛋白成为药学领域中广为接受的非常有吸引力的抗癌药物靶点。
研究表明，Ras突变最常见于KRas，约85％的Ras突变驱动的癌症中可以观察到KRas突变；绝大部分Ras突变发生在密码子G12、G13和Q61上，其中约80％的KRas突变又发生于密码子12的甘氨酸处，例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变及Q61H突变等。KRas突变常见于胰腺癌、肺腺癌、结直肠癌、胆囊癌、甲状腺癌和胆管癌，也可见于25％的非小细胞肺癌患者中(McCormick,F.等人，Clinical CancerResearch 21(8),1797-1801,2015)。因此，KRas突变蛋白已经成为Ras药物靶点研究中最重要的分支，对于其抑制剂的开发也被视为抗癌/肿瘤药物开发中非常具有前景的研发方向。
但是，过去几十年针对Ras的药物研发显示，由于Ras蛋白表面光滑，缺少明显的用于结合小分子抑制剂的沟状或口袋装结构，而且其对鸟嘌呤底物的亲和力非常高(皮摩尔级)，使得其小分子抑制剂的开发陷入了难以解决的困境，由此Ras在业内长久以来被认为是“不可成药的”靶点。同时，目前仍然非常需要作为KRas抑制剂的更多结构类型或模式的化合物，提供更多的治疗选择，或者提供相对于现有Kras抑制剂而言进一步改进的抑制活性，从而为临床提供更强效的治疗药物。
本发明解决了这些和其他需求。本发明提供了具有KRas突变蛋白抑制活性的新结构抑制剂化合物。这些本发明化合物因具有改进的结构模式，相比现有技术已有的KRas突变蛋白抑制剂，具有增强的抑制KRas突变蛋白的活性以及对相关肿瘤抑制活性，具有良好的药代动力学性质，从而具有良好的成药性，比如能够以方便的方式给药后更容易在体内吸收，且毒副作用减少，具有改善的耐药性和安全性，以及降低的药物相互作用风险。
发明简述
本发明提供了本文如下所定义的具有结构式(I)的化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物：
其中各个基团的定义如发明详述部分所定义。
本发明还提供了包含本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物以及任选的药学可接受的赋形剂或载体的药物组合物。
本发明还提供了用作药物的本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物。
本发明还提供了本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，用作Ras突变蛋白、尤其是KRas突变蛋白(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变及Q61H突变蛋白)及KRAS扩增型细胞的抑制剂。
本发明还提供了用于治疗和/或预防由Ras突变蛋白、尤其是KRas突变蛋白(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变及Q61H突变蛋白)及KRAS扩增介导的疾病的本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，或包含其的药物组合物。
本发明还提供了本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物、或包含其的药物组合物用于治疗和/或预防由Ras突变蛋白、尤其是KRas突变蛋白(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变及Q61H突变蛋白)及KRAS扩增介导的疾病的用途。
本发明还提供了本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物、或包含其的药物组合物在制备用于治疗和/或预防由Ras突变蛋白、尤其是KRas突变蛋白(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变及Q61H突变蛋白)及KRAS扩增介导的疾病的药物中的用途。
本发明还提供了治疗和/或预防由Ras突变蛋白、尤其是KRas突变蛋白(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变及Q61H突变蛋白)及KRAS扩增介导的疾病的方法，包括向有需要的对象施用治疗有效量的本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物、或包含其的药物组合物。
本发明还提供了一种治疗肿瘤或癌症的方法，其包括向有需要的患者施用本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物、或包含其的药物组合物。
本发明还提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物在研究中作为KRas抑制剂、特别是作为抑制KRas突变蛋白(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变及Q61H突变蛋白)及KRAS扩增的研究工具化合物的用途。
本发明还提供了药物组合，其包含本发明化合物其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物和一种或多种其他药物活性剂。
本发明还提供了用于制备本发明化合物的方法。
发明详述
定义
除非另外指出，说明书和权利要求书中使用的各个术语具有以下所示含义。在特定的术语或短语没有特别定义的情况下，应该按照本领域的普通含义理解。在冲突的情况下，以本说明书(包括定义)为准。
在本文所公开的化合物的化学结构和名称发生冲突的情况下，以化学结构为准。
本文所用的术语“Ras突变”或“Ras突变蛋白”是指其中一个或多个密码子发生突变的Ras基因所编码和表达的蛋白，典型地包括但不限于Ras的密码子12位的甘氨酸、密码子13位的甘氨酸或密码子61位的谷氨酰胺发生突变的Ras蛋白，例如突变的HRas、NRas或KRas。这些残基位于Ras的活性位点，其突变可损害Ras的固有的或GAP-催化的GTP酶活性，导致与GTP结合的Ras持续存在。
对本发明的目的而言，“Ras突变”或“Ras突变蛋白”以及描述抑制活性时所针对的“Ras”可互换使用，且一般地是指突变的HRas、NRas或KRas，例如但不限于KRas-G12C(密码子G12处甘氨酸向半胱氨酸的突变)、KRas-G12D(密码子G12处甘氨酸向天冬氨酸的突变)、HRas-G12D、NRas-G12D、KRas-G12V(密码子G12处甘氨酸向缬氨酸的突变)、KRas-G13D(密码子G13处甘氨酸向天冬氨酸的突变)；特别地是指KRas突变蛋白，更特别地是指KRas-G12C突变蛋白、KRas-G12D突变蛋白、KRas-G12V突变蛋白、KRas-G12A突变蛋白、KRas-G12R突变蛋白、KRas-G12S突变蛋白、KRas-G13D突变蛋白及KRas-Q61H突变蛋白。
本文所用的术语“治疗”是指给患有所述疾病、或者具有所述疾病的症状的受试者、例如哺乳动物、例如人施用一种或多种本文所述的本发明化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，用以治愈、缓解、减轻或影响所述疾病或所述疾病的症状。优选地，治疗是治愈性或改善性的。
本文所用的术语“预防”在本领域中是众所周知的，是给怀疑患上或易感于如本文所定义的Ras突变介导的疾病、尤其是癌症或肿瘤的受试者、例如哺乳动物、例如人施用一种或多种本文所述的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，使得罹患所定义疾病的风险降低，或预防疾病的发作。术语“预防”包含在诊断或确定任何临床和/或病理症状以前使用本发明的化合物。
本文所用的术语“抑制”和“降低”或这些术语的任何变体，是指生物活性剂的能力，其通过直接或间接与靶点相互作用，降低目标靶点的信号传导活性，且是指目标靶点活性的任何可以测量的减少或完全抑制。例如，与正常情况相比，可以是活性(例如KRas活性)降低量约、至多约或至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或更多、或其中可衍生的任何范围。
本文所用的术语“Ras突变介导的疾病”是指Ras突变对所述疾病的发生和发展起到促进作用，或抑制Ras突变将降低疾病的发生率、减少或消除疾病病状的疾病。对于本发明而言，“Ras突变介导的疾病”优选指的是KRas突变介导的疾病，更进一步优选KRas突变介导的癌症或肿瘤。
本文所用的术语“癌症”或“肿瘤”是指异常的细胞生长和增殖，无论是恶性的还是良性的，和所有的癌前期细胞和癌细胞和组织。对本发明的各个方面而言，所述癌症或肿瘤包括但不限于肺腺癌、肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、皮肤或眼内黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛门区域癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金病、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、慢性或急性白血病、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、肾脏或输尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌、中枢神经系统肿瘤(CNS)、原发性CNS淋巴瘤、脊柱肿瘤、脑干神经胶质瘤或垂体腺瘤。
对于本发明的各个方面，优选地，所述癌症或肿瘤与Ras突变、尤其是KRas突变及扩增相关，包括但不限于上述肿瘤类型以及其优选范围。本发明特别优选的肿瘤包括肺癌、肺腺癌、结肠癌、直肠癌、胰腺癌、子宫内膜癌、胆管癌、白血病和卵巢癌。
本文所用的术语“受试者”、“个体”或“患者”是指脊椎动物。在某些实施方案中，脊椎动物为哺乳动物。哺乳动物包括但不限于农场动物(如牛)、运动动物、宠物(如豚鼠、猫、狗、兔子和马)、灵长类动物、小鼠和大鼠。在某些实施方案中，哺乳动物是人类。
本文所用的术语“治疗有效量”是指通常足以对需要治疗的所述“Ras突变介导的疾病”如癌症或肿瘤患者产生有益治疗效果的量或剂量。本领域技术人员可以通过常规方法、结合常规影响因素来确定本发明中活性成分的有效量或剂量。
本文所用的术语“药物组合”是指本发明化合物可与其它活性剂组合用于实现本发明的目的。所述其他活性剂可以是一种或多种另外的本发明化合物，或可以是与本发明化合物相容即不会相互不利影响、或具有互补活性的第二种或另外的(例如第三种)化合物，例如这些活性剂已知调节其他生物活性通路，或者调节本发明化合物所涉及生物活性通路中的不同组分，或甚至是与本发明化合物的生物靶点相重叠。这类活性剂以达到预期目的的有效量适宜地组合存在。所述其他活性剂可以与本发明化合物在单一药物组合物中共同施用，或与本发明化合物处于不同的离散单元中分别施用，当分别施用时可以同时或相继进行。所述相继施用在时间上可以是接近或隔远的。
本文所用的术语“药学上可接受的”意指当向动物例如人类适量施用时不会产生不利、过敏或其它不良反应的分子实体和组合物。
本文所用的术语“药学上可接受的盐”是指保留了母体化合物的生物学有效性和性质并且在生物学或其它方面不是不可取的那些盐，包括酸加成盐和碱加成盐。“药学上可接受的酸加成盐”可由具有碱性基团的化合物与无机酸或有机酸形成，无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、碳酸、磷酸等，有机酸可以选自脂族、脂环族、芳香族、芳脂族、杂环类、羧酸类和磺酸类有机酸，如甲酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、葡萄糖酸、乳酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、天冬氨酸、抗坏血酸、谷氨酸、邻氨基苯甲酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、双羟萘酸、苯乙酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等。“药学上可接受的碱加成盐”包括衍生自无机碱如钠、钾、锂、铵、钙、镁、铁、锌、铜、锰、铝的盐等的那些，以及衍生自药学上可接受有机无毒碱的盐，包括但不限于伯胺、仲胺和叔胺、取代铵，包括天然存在的取代胺、环状胺和碱性离子交换树脂，如氨、异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、二乙醇胺、2-二甲氨基乙醇、2-二乙氨基乙醇、氨丁三醇、二环己胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、海巴明、胆碱、甜菜碱、乙二胺、葡糖胺、甲基葡糖胺、三乙醇胺、可可碱、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶、聚胺树脂等。
本文所用的术语“异构体”是指化合物在结构上可能存在的任何立体异构体、对映体混合物、包括外消旋物、非对映异构体混合物、几何异构体、阻旋异构体和/或互变异构体。所述异构体立体化学的确定和分离方法为本领域技术人员所熟知(S.P.Parker,Ed.,McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-Hill Book Company,NewYork；和Eliel,E.和Wilen,S.,“Stereochemistry of Organic Compounds”,John Wiley&Sons,Inc.,New York,1994)。
本发明的某些化合物包含至少一个不对称中心，且由此产生立体异构体，故本发明涵盖本文所定义化合物的所有可能的异构体形式，及其药学可接受的盐或溶剂合物，另有指示除外。
本文化合物结构式或结构片段中使用的表示立体中心即手性中心的绝对构型，相应地在本发明所提供的化合物或中间体的命名中以R或S表示关于该手性中心的绝对构型；在有些本发明化合物定义中也可以使用轴手性表示化合物构型，这些构型的确定使用本领域技术人员所熟知的Cahn-Ingold-Prelog规则，如下式两个示例结构中轴手性绝对构型描述如下：
应当理解的是，当本领域技术人员基于本文所示化合物结构能够判断该化合物存在且仅存在一对手性异构体、且判断基于本领域常规方法可以容易地拆分时，则本文对该化合物外消旋体的公开(无论是结构式还是化学名)，均应视为已经分别公开了该化合物的各个异构体。
本文所涉及结构片段中使用的指示与其交叉的键是结构片段连接于分子其余部分的键。
本文所涉及环状结构片段中以横跨化学键示出的取代基，例如中的-(R3)m，是指该一个或多个R3取代基可以取代在环中任意化学上可行的一个或多个取代位点，包括Z。
本发明的化合物包括本发明化合物的未标记形式及其同位素标记形式。化合物的同位素标记形式是仅在一个或多个原子被相应的同位素富集原子替换不同的化合物。可以并入本发明化合物中的同位素的实例包括例如氢、碳、氮、氧、氟、氯和碘的同位素，例如2H、3H、11C、13C、14C、15N、18O、17O、35S、18F、37Cl和125I。此类同位素标记的化合物可用作例如生物测定中的探针、分析工具或用作治疗剂。在某些实施方案中，本发明的化合物以未标记的形式提供。
本文所用的术语“溶剂合物”是指包含化学计量的或非化学计量的溶剂的化合物的溶剂加成形式，包括本发明化合物的任何溶剂化形式，包括例如与水的溶剂合物，例如水合物，或与有机溶剂的溶剂合物，例如甲醇、乙醇或乙腈，即分别作为甲醇化物、乙醇化物或乙腈化物；或为任何多晶型物的形式。应当理解的是，本发明化合物的这类溶剂合物还包括本发明化合物的药学上可接受盐的溶剂合物。
本文所用的术语“代谢物”意指化合物经由体内代谢生成的产物。这类产物可例如源自所施用化合物的氧化、还原、水解、酰胺化、脱酰胺化、酯化、去酯化、酶促剪切等。代谢物产物的鉴定和分析以本领域技术人员熟知的方式进行。
本文所用的术语“药学上可接受的赋形剂”或“药学上可接受的载体”是指一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，适合于人使用，且具有足够的纯度和足够低的毒性，其实例包括但不限于纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、醋酸纤维素等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂(如吐温类)、润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂等。
本文所用的术语“卤素”或“卤代”意指F、Cl、Br或I。此外，本文定义基团时使用的术语“被卤素取代的”基团旨在包括单卤代或多卤代基团，其中一个或多个相同或不同的卤素取代相应基团中的一个或多个氢。
本文所用的术语“烷基”意指由碳原子和氢原子组成的直链或支链的单价饱和烃基团。具体地，烷基具有1-10个，例如1至8个、1至6个、1至5个、1至4个、1至3个或1至2个碳原子。例如，如本文中所使用，术语“C1-6烷基”指具有1至6个碳原子的直链或支链的饱和烃基团，其实例例如甲基、乙基、丙基(包括正丙基和异丙基)、丁基(包括正丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基)、戊基(包括正戊基、异戊基、新戊基)、正己基、2-甲基戊基等。
本文所用的术语“烷氧基”意指通过氧原子与分子其余部分相连的本文定义的烷基。具体地，烷氧基具有1-10个，例如1至8个、1至6个、1至5个、1至4个、1至3个或1至2个碳原子。例如，如本文中所使用，术语“C1-6烷氧基”指通过氧原子与分子其余部分相连的具有1至6个碳原子的直链或支链的饱和烃基团，其实例例如-O-甲基、-O-乙基、-O-丙基(包括-O-正丙基和-O-异丙基)、-O-丁基(包括-O-正丁基、-O-异丁基、-O-仲丁基或-O-叔丁基)、-O-戊基(包括-O-正戊基、-O-异戊基、-O-新戊基)、-O-正己基、2-甲基戊基-O-等。
如本文中所使用的术语“任选被卤素取代的C1-6烷基”指上文所述的C1-6烷基，其中一个或多个(例如1、2、3、4或5个)氢原子任选被卤素代替。本领域技术人员应当理解，当卤素取代基多于一个时，卤素可以相同也可以不同，并且可以位于相同或不同的C原子上。“卤素取代的C1-6烷基”的实例有例如-CH2F、-CHF2、-CF3、-CCl3、-C2F5、-C2Cl5、-CH2CF3、-CH2Cl、-CH2CH2CF3或-CF(CF3)2等。
本文所用的术语“烯基”指由碳原子和氢原子组成的包含至少一个双键的直链或支链的不饱和烃基团。具体地，烯基具有2-8个，例如2至6个、2至5个、2至4个或2至3个碳原子。例如，如本文中所使用，术语“C2-6烯基”指具有2至6个碳原子的直链或支链的烯基，例如乙烯基、丙烯基、烯丙基、丁烯基、戊烯基等，烯基中与分子其余部分相连的碳原子可以是饱和的，也可以是烯键碳原子。
本文所用的术语“炔基”指由碳原子和氢原子组成的包含至少一个叁键的直链或支链的不饱和烃基团。具体地，炔基具有2-8个，例如2至6个、2至5个、2至4个或2至3个碳原子。例如，如本文中所使用，术语“C2-6炔基”指具有2至6个碳原子的直链或支链的炔基，例如乙炔基、丙炔基、炔丙基、丁炔基等，炔基中与分子其余部分相连的碳原子可以是饱和的，也可以是炔键碳原子。
如本文中所使用的术语“环烷基”意指具有指定环碳原子数的单环、稠合多环、桥接多环或螺环非芳族饱和单价烃环结构。环烷基可具有3至12个碳原子(即C3-12环烷基)，例如3至10个、3至8个、3至7个、3至6个、5至6个碳原子。适合的环烷基的实例包括但不限于单环结构，如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基或环辛基；或多环(例如双环)结构，包括螺环、稠合或桥连系统，如双环[1.1.1]戊基、双环[2.2.1]庚基、螺[3.4]辛烷基、双环[3.1.1]己烷基、双环[3.1.1]庚基或双环[3.2.1]辛基等。例如，如本文中所使用的术语“C3-6环烷基”是指单环环丙基、环丁基、环戊基或环己基。
本文所用的术语“杂环烷基”意指包括一或多个(例如1、2、3或4个)独立地选自O、N、P、Se及S的杂原子及指定环原子数的单环、稠合多环、螺环或桥接多环非芳族饱和或不饱和环结构，或其N-氧化物，或其S-氧化物或S-二氧化物。在多环杂环烷基的情况下，与分子其余部分相连的环结构为非芳族环即可，即便与该非芳族环进一步稠合、螺合或桥接的环是芳族环，该杂环体系在本文仍定义为杂环烷基。杂环烷基可具有3至12个环成员(可称为3-12元杂环烷基)，例如3至10个环成员，3至8个环成员，3至7个环成员，4至7个环成员、4至6个环成员、5至7个环成员、5至6个环成员、6至10个环成员、6至12个环成员，例如5至7元单环杂环烷基如5-7元单环饱和杂环烷基，或6至12元多环杂环烷基。杂环烷基通常含有至少1个、至多4个(例如1个、2个、3个或4个)杂原子，例如含有1至3个独立选自N、O、S的杂原子的5-7元单环杂环烷基如5-7元单环饱和杂环烷基，或含有1至4个独立地选自N、O、P、Se和S的杂原子的6-12元多环杂环烷基。适合的杂环烷基的实例包括但不限于氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁基、吡咯烷基(例如1-吡咯烷基、2-吡咯烷基及3-吡咯烷基)、四氢呋喃基(例如1-四氢呋喃基、2-四氢呋喃基及3-四氢呋喃基)、四氢噻吩基(例如1-四氢噻吩基、2-四氢噻吩基及3-四氢噻吩基)、哌啶基(例如1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基及4-哌啶基)、四氢吡喃基(例如4-四氢吡喃基)、四氢噻喃基(例如4-四氢噻喃基)、吗啉基(例如吗啉代)、硫吗啉基、二噁烷基、哌嗪基或氮杂环庚烷基、二氮杂环庚烷基例如1,4-二氮杂环庚基、3,6-二氮杂-双环[3.1.1]庚基或3-氮杂-双环[3.2.1]辛基。杂环烷基中与化合物其余部分连接的原子可以是碳原子，也可以是杂原子，只要化学上可行即可。
对本发明化合物而言，示例性的杂环烷基包括但不限于以下： 应当理解，具有不对称中心的结构涵盖其外消旋的和/或单一的对映异构形式，例如/>可代表/>和/或
优选的杂环烷基例如
本文所用的术语“羟基”是指-OH基团。
本文所用的术语“氰基”是指-CN基团。
本文所用的术语“任选取代的”，除非另外指出，表示基团可以是未取代的或被一个或多个(例如1、2、3、4或5或更多，或其中可衍生的任何范围)对该基团所列的取代基取代，其中所述取代基可以相同或不同。在一个实施方案中，任选取代的基团具有1个取代基。在另一个实施方案中，任选取代的基团具有2个相同或不同的取代基。在另一个实施方案中，任选取代的基团具有3个相同或不同的取代基。在另一个实施方案中，任选取代的基团具有4个相同或不同的取代基。在另一个实施方案中，任选取代的基团具有5个相同或不同的取代基。
本文定义的许多基团都是任选被取代的，该定义部分所给出的取代基列表仅仅是示例性的，不意欲限制本说明书和权利要求书中其他部分所定义的取代基。
除非另有规定，本发明化合物定义中的Cn-n+m或Cn-Cm包括n至n+m个碳的各种情况，例如C1-6包括C1、C2、C3、C4、C5和C6，也包括n至n+m中的任何一个范围，例如C0-6包括C1、C2、C3、C4、C5、C6、C0-1、C0-2、C0-3、C0-4、C0-5、C1-2、C1-3、C1-4、C2-3等，C1-6包括C1-2、C1-3、C1-4、C2-6、C3-6等。同理，本发明化合物定义中的n元至n+m元表示环原子数为n至n+m个，例如3-12元环包括3元环、4元环、5元环、6元环、12元环等，也包括n至n+m元的任何一个范围，例如3-12元环包括3-6元环、3-8元环、3-9元环、4-10元环、4-7元环、4-5元环、5-6元环、5-7元环、5-8元环、5-9元环、6-7元环、6-8元环、6-10元环和6至12元环等。
有机合成领域普通技术人员均理解，本发明化合物结构上携带的各个基团，无论是未取代的还是被所定义的各种取代基所取代，均以使得化合物分子在化学上可行且稳定为前提，其中取代基的类型和数量由基团中原子的数量和化学价决定。
如在本说明书和随后的权利要求书中所使用的，词语“包含”和该词语的变体如“包括”和“含有”，意指“包括但不限于”，并且不意图排除例如其他添加剂、成分、整数或步骤。当将要素描述为包括多个成分、步骤或条件时，应理解的是，该要素也可以被描述为包括该多个成分、步骤或条件的任何组合，或“由多个或组合的成分、步骤或条件组成”或“基本上由多个或组合的成分、步骤或条件组成”。
应理解，当本文描述本发明化合物、包含其的药物组合物、药物组合、药盒以及相关的用途和方法时所涉及的剂量，是基于游离形式的重量，不包括其任何盐、水合物或溶剂化物，除非说明书中指出该剂量基于盐、水合物或溶剂化物的重量。
本发明解决的问题
如上所述，能够抑制Ras突变蛋白、尤其KRas突变蛋白(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变和Q61H突变蛋白)及KRAS野生扩增型细胞的化合物能够用于治疗或预防由所述突变蛋白介导的疾病(例如癌症或肿瘤)。因此，在该领域，已经开发出多种结构类型的Ras抑制剂。但是，现有的KRas抑制剂仍然存在需要解决的问题，包括例如很多抑制剂的抗肿瘤活性不能令人满意、或具有毒副作用导致耐药性差、或药代动力学性质不足以允许通过方便的方式给药即“成药性”差，或因为对细胞色素P450酶系的抑制作用而导致不期望的药物相互作用，等等。进一方面，即便是对于具有良好抗肿瘤活性的抑制剂，人们仍期望能够通过结构优化，来进一步提高其在体内对靶蛋白的选择性抑制活性、进一步改进其耐药性(更少的毒副作用或更好的安全性)且进一步改善其药代动力学性质，以便为临床上提供更多更好的治疗选择。
解决问题的方法
本发明人通过广泛且深入的研究，已经开发出一组对Ras突变蛋白、尤其KRas突变蛋白(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变和Q61H突变蛋白)及KRAS扩增细胞具有明显抑制活性的化合物。本发明人通过结构改造和活性验证，发现在所述KRas抑制剂结构的苯并嘧啶环及喹唑啉的若干特定位点，进行特定类型的取代基修饰，所实施的若干取代位点和取代基类型的特定组合，获得了相比现有技术抑制剂进一步提高的对对KRas突变蛋白的抑制活性，而且这样修饰得到的化合物具有良好的安全性，具有减少的药物相互作用风险，还具有良好的、甚至是进一步改善的药代动力学性质，使得能够以方便的方式给药。
本发明主要提供有效的Ras抑制剂、具体地KRas抑制剂(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变、Q61H突变及KRAS扩增型抑制剂)化合物；含有此类化合物作为活性成分的药物组合物；作为药物、用于治疗或预防由Ras、具体地KRas(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变、Q61H突变及KRAS扩增)介导或得益于Ras、具体地KRas(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变、Q61H突变及KRAS扩增)抑制的肿瘤或癌症的所述化合物；使用所述化合物用于治疗或预防由Ras、具体地KRas(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变、Q61H突变及KRAS扩增)介导或得益于Ras、具体地KRas(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变、Q61H突变及KRAS扩增)抑制的疾病如肿瘤或癌症的方法；以及所述化合物在制备用于治疗或预防由Ras、具体地KRas(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变、Q61H突变及KRAS扩增)介导或得益于Ras、具体地KRas(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变、Q61H突变及KRAS扩增)抑制的疾病如肿瘤或癌症的药物中的用途。
本发明由此提供以下技术方案。
本发明化合物
本申请通篇使用的术语“发明的化合物”和“本发明的化合物”等，除非另外限定，涵盖本文各个实施方案及其优选实施方案中定义的化合物或其各个具体实施方式、包括其异构体，包括阻转异构体、对映体混合物、特别是外消旋体、非对映异构体混合物、几何异构体、互变异构体、溶剂化物、代谢物、前药、同位素变体和盐(例如药学上可接受的盐)。
因此，本发明化合物的上述各类异构体和衍生物由此均涵盖在本发明范围内，其各自的含义、制备及具体示例如上文“定义”部分所定义，或为本领域技术所熟知。然而，优选地为本发明化合物和/或其药学上可接受的盐或溶剂合物。
本发明还涵盖本发明化合物的N-氧化物，只要这些化合物含有碱性氮原子如存在于含氮杂环中的氮原子且化学和生物学上可行。本发明的某些化合物可以以多晶型或无定形形式存在，故它们也落入本发明的范围内。
本发明提供如下化合物实施方案：
实施方案1：式(I)的化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，
其中：
M选自N或C-R7；
X选自C和S，p选自0和1，条件是p为0时X为S，p为1时X为C；
Y选自O、S和Se；
W选自OH和NH2；
B选自包含1至3个独立地选自N、O、P、Se和S的杂原子的5-7元单环杂环烷基，和包含1至4个独立地选自N、O、P、Se和S的杂原子的6-12元多环杂环烷基，条件是各自通过氮杂原子连接至分子的嘧啶环部分；
Q选自其中
Z选自N、C、O、S和Se；
k选自0或1；
m和n各自独立地选自0至2的整数；
R1选自-C1-6烷基和-(CH2)n-C3-6环烷基，各自独立地任选被卤素或C1-6烷氧基取代；
R2选自H、-C1-6烷基和-(CH2)n-C3-6环烷基，其中的C1-6烷基或C3-6环烷基各自独立地任选被卤素或C1-6烷氧基取代，
或者连接于同一碳原子上的两个R2与它们所连接的碳原子一起形成C3-4环烷基；
R3选自H、卤素、-CN、-OH、-O-C1-6烷基、-O-C3-6环烷基、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基和-(CH2)n-C3-6环烷基，其中每次出现的C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基或C3-6环烷基各自独立地任选被卤素、CN或C1-6烷氧基取代，
或者连接于同一个碳原子上的两个R3形成＝C(Rc)2、任选被卤素取代的螺C3-6环烷基或任选被卤素取代的螺4-7元杂环烷基，其中Rc各自独立地选自H、卤素和任选被卤素取代的-C1-6烷基，
或者连接于相邻环碳原子上的R1和R3或连接于相邻环碳原子上的两个R3与它们所连接的碳原子一起形成C3-4环烷基；
或者连接在非相邻环碳原子上的两个R3一起形成桥连亚甲基或亚乙基；
R4选自H、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基和-(CH2)n-C3-6环烷基，其中的C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基或C3-6环烷基各自独立地任选被卤素、CN、-C1-6烷氧基或-O-CON(C1-6烷基)2取代；
R5选自H和卤素；
R6选自H、卤素、-C1-6烷基、-O-C1-6烷基、-S-C1-6烷基、-Se-C1-6烷基和-C2-6炔基，各自独立地任选被卤素取代；
R7选自H、卤素、CN和-C1-6烷基，其中-C1-6烷基任选被卤素或CN取代；
R8选自-OH、卤素、-CN、-B(OH)2、-C1-6烷基、-O-C1-6烷基、-CONH(C1-6烷基)、-CON(C1-6烷基)2、-CON(C1-6烷基)(C2-6烯基)、-CON(C1-6烷基)(C2-6炔基)、-PO(C1-6烷基)2、-PO(C1-6烷基)(C2-6烯基)、-PO(C1-6烷基)(C2-6炔基)、-SO-N(C1-6烷基)2、-SO-N(C1-6烷基)(C2-6烯基)、-SO-N(C1-6烷基)(C2-6炔基)、-SO2-N(C1-6烷基)2、-SO2-N(C1-6烷基)(C2-6烯基)和-SO2-N(C1-6烷基)(C2-6炔基)，其中的-C1-6烷基、C2-6烯基或C2-6炔基任选被卤素或CN取代；
R9和R10各自独立地选自H、卤素和任选被卤素取代的C1-6烷基；
R11选自H、卤素、任选被卤素取代的-C1-6烷基、任选被卤素取代的-O-C1-6烷基和任选
被卤素取代的-C2-6炔基；和
t选自1至4的整数。
实施方案1.1：实施方案1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中
R3选自H、卤素、-CN、-OH、-O-C1-6烷基、-O-C3-6环烷基、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基和-(CH2)n-C3-6环烷基，其中每次出现的C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基或C3-6环烷基各自独立地任选被卤素、CN或C1-6烷氧基取代，
或者连接于同一个碳原子上的两个R3形成＝C(Rc)2、螺C3-6环烷基或螺4-7元杂环烷基，其中Rc各自独立地选自H、卤素和任选被卤素取代的-C1-6烷基，
或者连接于相邻环碳原子上的R1和R3或连接于相邻环碳原子上的两个R3与它们所连接的碳原子一起形成C3-4环烷基；
或者连接在非相邻环碳原子上的两个R3一起形成桥连亚甲基或亚乙基；
R11选自H、卤素、任选被卤素取代的-C1-6烷基和任选被卤素取代的-O-C1-6烷基。
实施方案1.2：实施方案1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其为下式(I-1)，
/>
其中：
X选自C和S，p选自0和1，条件是p为0时X为S，p为1时X为C；
Y选自O、S和Se；
W选自OH和NH2；
B选自包含1至3个独立地选自N、O、P、Se和S的杂原子的5-7元单环杂环烷基，和包含1至4个独立地选自N、O、P、Se和S的杂原子的6-12元多环杂环烷基，条件是各自通过氮杂原子连接至分子的嘧啶环部分；
Q选自其中
Z选自N、C、O、S和Se；
k选自0或1；
m和n各自独立地选自0至2的整数；
R1选自-C1-6烷基和-(CH2)n-C3-6环烷基，各自独立地任选被卤素或C1-6烷氧基取代；
R2选自H、-C1-6烷基和-(CH2)n-C3-6环烷基，其中的C1-6烷基或C3-6环烷基各自独立地任选被卤素或C1-6烷氧基取代，
或者连接于同一碳原子上的两个R2与它们所连接的碳原子一起形成C3-4环烷基；
R3选自H、卤素、-OH、-O-C1-6烷基、-O-C3-6环烷基、-C1-6烷基和-(CH2)n-C3-6环烷基，其中每次出现的C1-6烷基或C3-6环烷基各自独立地任选被卤素或C1-6烷氧基取代，
或者连接于相邻环碳原子上的R1和R3或连接于相邻环碳原子上的两个R3与它们所连接的碳原子一起形成C3-4环烷基；
或者连接在非相邻环碳原子上的两个R3一起形成桥连亚甲基或亚乙基；
R4选自H、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基和-(CH2)n-C3-6环烷基，其中的C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基或C3-6环烷基各自独立地任选被卤素、CN、-C1-6烷氧基或-O-CON(C1-6烷基)2取代；
R5选自H和卤素；
R6选自H、卤素、-C1-6烷基、-O-C1-6烷基、-S-C1-6烷基、-Se-C1-6烷基和-C2-6炔基，各自独立地任选被卤素取代；
R7选自H、卤素、CN和-C1-6烷基，其中-C1-6烷基任选被卤素或CN取代；
R8选自-OH、卤素、-CN、-B(OH)2、-C1-6烷基、-O-C1-6烷基、-CONH(C1-6烷基)、-CON(C1-6烷基)2、-CON(C1-6烷基)(C2-6烯基)、-CON(C1-6烷基)(C2-6炔基)、-PO(C1-6烷基)2、-PO(C1-6烷基)(C2-6烯基)、-PO(C1-6烷基)(C2-6炔基)、-SO-N(C1-6烷基)2、-SO-N(C1-6烷基)(C2-6烯基)、-SO-N(C1-6烷基)(C2-6炔基)、-SO2-N(C1-6烷基)2、-SO2-N(C1-6烷基)(C2-6烯基)和-SO2-N(C1-6烷基)(C2-6炔基)，其中的-C1-6烷基、C2-6烯基或C2-6炔基任选被卤素或CN取代；
R9和R10各自独立地选自H、卤素和任选被卤素取代的C1-6烷基；和
t选自1至4的整数。
实施方案2.1：实施方案1或1.2的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中p为1且X为C，即X所在的稠合双环部分为
实施方案2.1.1：实施方案2.1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R5为H；或R5为卤素，选自F、Cl、Br、I；优选R5为卤素，最优选F。
实施方案2.1.2：实施方案2.1或2.1.1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R6为H；或R6为卤素，选自F、Cl、Br、I。
实施方案2.1.3：实施方案2.1或2.1.1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R6为-C1-6烷基、-O-C1-6烷基、-S-C1-6烷基、-Se-C1-6烷基，任选被卤素取代，例如但不限于-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH3、-CH(CH3)(CH3)、-CH2CH2CH2CH3、-CH2CH(CH3)CH3、-C(CH3)3、-CH2Cl、-CH2F、-CHF2、-CF3、-CCl3、-CH2CH2F、-CH2CHF2、-CH2CF3、-CH2CH2CH2F、-CH2CH2CHF2、-CH2CH2CF3、-C2F5、-C2Cl5、-O-CH3、-O-CH2CH3、-SCH3、-S-CH2CH3、-SeCH3。
实施方案2.1.4：实施方案2.1或2.1.1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R6为-C2-6炔基，任选被卤素取代，例如但不限于优选/>
实施方案2.1.5：实施方案2.1至2.1.4任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R9和R10各自为H；或者R9和R10各自为卤素，优选F。
实施方案2.1.6：实施方案2.1至2.1.4任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R9和R10之一为H，另一个选自卤素，优选F；优选R10为H且R9选自卤素，优选F，如以上所示例。
实施方案2.1.7：实施方案2.1至2.1.6任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中W为-OH。
实施方案2.1.8：实施方案2.1至2.1.6任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中W为-NH2。
实施方案2.1.9：实施方案2.1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中X所在的稠合双环部分为其中R5位卤素，优选F，R6选自-C1-6烷基、-C2-6炔基和卤素，优选选自-C1-6烷基和-C2-6炔基，例如
实施方案2.2：实施方案1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中p为0且X为S，即X所在的稠合双环部分为
实施方案2.2.1：实施方案2.2的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R5为H；或R5为卤素，选自F、Cl、Br、I；优选R5为卤素，最优选F。
实施方案2.2.2：实施方案2.2或2.2.1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R6为H；或R6为卤素，选自F、Cl、Br、I。
实施方案2.2.3：实施方案2.2或2.2.1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R6为-C1-6烷基、-O-C1-6烷基、-S-C1-6烷基、-Se-C1-6烷基，任选被卤素取代，例如但不限于-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH3、-CH(CH3)(CH3)、-CH2CH2CH2CH3、-CH2CH(CH3)CH3、-C(CH3)3、-CH2Cl、-CH2F、-CHF2、-CF3、-CCl3、-CH2CH2F、-CH2CHF2、-CH2CF3、-CH2CH2CH2F、-CH2CH2CHF2、-CH2CH2CF3、-C2F5、-C2Cl5、-O-CH3、-O-CH2CH3、-SCH3、-S-CH2CH3、-SeCH3。
实施方案2.2.4：实施方案2.2或2.2.1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R6为-C2-6炔基，任选被卤素取代，例如但不限于优选/>
实施方案2.2.5：实施方案2.2至2.2.4任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R9和R10各自为H；或者R9和R10各自为卤素，优选F。
实施方案2.2.6：实施方案2.2至2.2.4任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R9和R10之一为H，另一个选自卤素；优选R10为H且R9选自卤素，如以上所示例。
实施方案2.2.7：实施方案2.2至2.2.6任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中W为-OH。
实施方案2.2.8：实施方案2.2至2.2.6任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中W为-NH2。
实施方案2.2.9：实施方案2.2的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中X所在的稠合双环部分为例如
实施方案3.1：实施方案1至2.2.9任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中B为包含1至3个独立地选自N、O、P、Se和S的杂原子的5-7元单环杂环烷基，通过氮杂原子连接至分子的嘧啶环部分，例如但不限于其中各个环中的各个Z可以均为C，或其中至多两个为选自N、O、P、Se和S的杂原子，例如含有1-3个氮原子的5-7元杂环烷基、含有1个氮原子和1-2个选自O、P、Se和S的杂原子的5-7元杂环烷基、含有2个氮原子和1个选自O、P、Se和S的杂原子的5-7元杂环烷基、含有1个氮原子和1个O原子的5-7元杂环烷基，例如但不限于 各自被1-4个R8取代，优选被1-2个R8取代，更优选R8取代在环碳原子上。
实施方案3.1.1：实施方案3.1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中B为被1-2个R8取代，优选在N的间位被R8取代，例如但不限于/>
实施方案3.1.1.1：实施方案3.1.1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中B上的取代基R8呈立体异构形式，例如R或S构型，只有化学上可行即可。
实施方案3.1.2：实施方案3.1至3.1.1.1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中B上携带的取代基R8各自独立地选自-OH、卤素、CN、-C1-6烷基和-OC1-6烷基，其中的-C1-6烷基任选被卤素或CN取代；优选连接在同一环碳原子上的两个R8之一为-OH且另一个为任选被卤素或CN取代的-C1-6烷基，优选甲基；更优选在与分子其余部分(例如嘧啶环)连接的N原子的间位环碳院子上连接两个R8，其中之一为-OH且另一个为-C1-6烷基，优选甲基，例如B为优选/>
实施方案3.1.3：实施方案3.1至3.1.1.1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中B上携带的取代基R8选自-CONH(C1-6烷基)、-CON(C1-6烷基)2、-CON(C1-6烷基)(C2-6烯基)、-CON(C1-6烷基)(C2-6炔基)，其中的-C1-6烷基、C2-6烯基和C2-6炔基任选被卤素或CN取代；优选-CON(C1-6烷基)2，例如-CON(CH3)2，例如B为
实施方案3.1.4：实施方案3.1至3.1.1.1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中B上携带的取代基R8选自-PO(C1-6烷基)2、-PO(C1-6烷基)(C2-6烯基)和-PO(C1-6烷基)(C2-6炔基)，其中的-C1-6烷基、C2-6烯基和C2-6炔基任选被卤素或CN取代。
实施方案3.1.5：实施方案3.1至3.1.1.1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中B上携带的取代基R8选自-SO-N(C1-6烷基)2、-SO-N(C1-6烷基)(C2-6烯基)、-SO-N(C1-6烷基)(C2-6炔基)、-SO2-N(C1-6烷基)2、-SO2-N(C1-6烷基)(C2-6烯基)和-SO2-N(C1-6烷基)(C2-6炔基)，其中的-C1-6烷基、C2-6烯基和C2-6炔基任选被卤素或CN取代；优选-SO-N(C1-6烷基)(C2-6炔基)或-SO2-N(C1-6烷基)(C2-6炔基)，例如-SO2-N(CH3)(C≡CH)，例如B为
实施方案3.1.6：实施方案3.1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中B为被1-2个R8取代，优选在N的间位被R8取代，R8各自独立地选自-OH、卤素、CN、-C1-6烷基和-OC1-6烷基，其中的-C1-6烷基任选被卤素或CN取代；优选连接在同一环碳原子上的两个R8之一为-OH且另一个为任选被卤素或CN取代的-C1-6烷基，优选甲基；更优选在与分子其余部分(例如嘧啶环)连接的N原子的间位环碳院子上连接两个R8，其中之一为-OH且另一个为-C1-6烷基，优选甲基，例如B为优选/>
实施方案3.1.6.1：实施方案3.1.6的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中B上的取代基R8呈立体异构形式，例如R或S构型，只有化学上可行即可。
实施方案3.2：实施方案1至2.2.9任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中B为包含1至4个独立地选自N、O、P、Se和S的杂原子的6-12元多环杂环烷基(例如6-10元、6-9元、6-8元、6-7元多环杂环烷基)，通过氮杂原子连接至分子的嘧啶环部分，例如含有1-4个氮原子、含有1个氮原子和1-3个选自O、S、P和Se的杂原子、含有2个氮原子和1-2个选自O、S、P和Se的杂原子，含有3个氮原子和1个选自O、S、P和Se的杂原子，例如但不限于 />
各自被1-4个R8取代，优选被1-2个R8取代，更优选R8取代在环碳原子上。
实施方案3.2.1：实施方案3.2的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中B为被1个R8取代，例如但不限于/>
实施方案3.2.2：实施方案3.2或3.2.1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中B上携带的取代基R8各自独立地选自-CONH(C1-6烷基)、-CON(C1-6烷基)2、-CON(C1-6烷基)(C2-6烯基)、-CON(C1-6烷基)(C2-6炔基)，其中的-C1-6烷基、C2-6烯基和C2-6炔基任选被卤素或CN取代；优选-CON(C1-6烷基)2，例如-CON(CH3)2，例如B为
实施方案3.2.3：实施方案3.2或3.2.1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中B上携带的取代基R8选自-PO(C1-6烷基)2、-PO(C1-6烷基)(C2-6烯基)和-PO(C1-6烷基)(C2-6炔基)，其中的-C1-6烷基、C2-6烯基和C2-6炔基任选被卤素或CN取代。
实施方案3.2.4：实施方案3.2或3.2.1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中B上携带的取代基R8选自-SO-N(C1-6烷基)2、-SO-N(C1-6烷基)(C2-6烯基)、-SO-N(C1-6烷基)(C2-6炔基)、-SO2-N(C1-6烷基)2、-SO2-N(C1-6烷基)(C2-6烯基)和-SO2-N(C1-6烷基)(C2-6炔基)，其中的-C1-6烷基、C2-6烯基和C2-6炔基任选被卤素或CN取代；优选-SO-N(C1-6烷基)(C2-6炔基)或-SO2-N(C1-6烷基)(C2-6炔基)，例如-SO2-N(CH3)(C≡CH)，例如B为/>
实施方案4.1：实施方案1至3.2.4任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中Q为
实施方案4.2：实施方案1至3.2.4任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中Q为例如
实施方案4.2.1：实施方案4.2的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R1为-C1-6烷基，任选被卤素或C1-6烷氧基取代，例如但不限于-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH3、-CH(CH3)(CH3)、-CH2CH2CH2CH3、-CH2CH(CH3)CH3、-C(CH3)3、-CH2-OCH3、-CH2-O-CH2CH3、-CH2CH2-O-CH3、-CH2CH2-O-CH2CH3、-CH2F、-CH2Cl、-CHF2、-CF3、-CCl3、-CH2CH2F、-CH2CHF2、-CH2CF3、-CH2CH2CH2F、-CH2CH2CHF2、-CH2CH2CF3、-C2F5、-C2Cl5、-CF(CF3)2。
实施方案4.2.2：实施方案4.2的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R1为-(CH2)n-C3-6环烷基，任选被卤素或C1-6烷氧基取代，例如但不限于
实施方案4.2.3：实施方案4.2至4.2.2任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R2为H。
实施方案4.2.4：实施方案4.2至4.2.2任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中至少一个R2为-C1-6烷基，任选被卤素或C1-6烷氧基取代，例如但不限于-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH3、-CH(CH3)(CH3)、-CH2CH2CH2CH3、-CH2CH(CH3)CH3、-C(CH3)3、-CH2-OCH3、-CH2-O-CH2CH3、-CH2CH2-O-CH3、-CH2CH2-O-CH2CH3、-CH2F、-CH2Cl、-CHF2、-CF3、-CCl3、-CH2CH2F、-CH2CHF2、-CH2CF3、-CH2CH2CH2F、-CH2CH2CHF2、-CH2CH2CF3、-C2F5、-C2Cl5、-CF(CF3)2。
实施方案4.2.5：实施方案4.2至4.2.2任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中至少一个R2为-(CH2)n-C3-6环烷基，任选被卤素或C1-6烷氧基取代，例如但不限于
实施方案4.2.6：实施方案4.2至4.2.2任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中两个R2与它们所连接的碳原子一起形成环丙基或环丁基。
实施方案4.2.7：实施方案4.2至4.2.6任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R3为H。
实施方案4.2.8：实施方案4.2至4.2.6任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R3为卤素，选自F、Cl、Br、I；优选F。
实施方案4.2.9：实施方案4.2至4.2.6任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R3为-OH。
实施方案4.2.10：实施方案4.2至4.2.6任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R3为-C1-6烷基，任选被卤素或C1-6烷氧基取代，例如但不限于-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH3、-CH(CH3)(CH3)、-CH2CH2CH2CH3、-CH2CH(CH3)CH3、-C(CH3)3、-CH2-OCH3、-CH2-O-CH2CH3、-CH2CH2-O-CH3、-CH2CH2-O-CH2CH3、-CH2F、-CH2Cl、-CHF2、-CF3、-CCl3、-CH2CH2F、-CH2CHF2、-CH2CF3、-CH2CH2CH2F、-CH2CH2CHF2、-CH2CH2CF3、-C2F5、-C2Cl5、-CF(CF3)2。
实施方案4.2.11：实施方案4.2至4.2.6任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R3为-O-C1-6烷基，任选被卤素或C1-6烷氧基取代，例如但不限于-O-CH3、-O-CH2CH3、-O-CH2CH2CH3、-O-CH(CH3)2、-O-CH2F、-O-CH2Cl、-O-CHF2、-O-CF3、-O-CH2CH2F、-O-CH2CHF2、-O-CH2CF3、-O-CH2CH2CF3、-O-CH2-O-CH3、-O-CH2CH2-O-CH3。
实施方案4.2.12：实施方案4.2至4.2.6任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R3为-(CH2)n-C3-6环烷基，任选被卤素或C1-6烷氧基取代，例如但不限于
实施方案4.2.13：实施方案4.2至4.2.6任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R3为-O-C3-6环烷基，任选被卤素或C1-6烷氧基取代，例如但不限于
实施方案4.2.14：实施方案4.2.8至4.2.13任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中存在至少一个R3；优选存在一个R3，更优选所述一个R3与R1相邻，例如所述一个R3选自卤素如F、-C1-6烷基如甲基、-C1-6烷氧基如甲氧基。
实施方案4.2.15：实施方案4.2至4.2.6任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中连接于相邻环碳原子上的R1和R3与它们所连接的碳原子一起形成C3-4环烷基。
实施方案4.2.16：实施方案4.2至4.2.6任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中连接于相邻环碳原子上的两个R3与它们所连接的碳原子一起形成C3-4环烷基。
实施方案4.2.17：实施方案4.2至4.2.16任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R4为H。
实施方案4.2.18：实施方案4.2至4.2.16任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R4为-C1-6烷基，任选被卤素、CN、-C1-6烷氧基或-O-CON(C1-6烷基)2取代，例如但不限于-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH3、-CH(CH3)(CH3)、-CH2CH2CH2CH3、-CH2CH(CH3)CH3、-C(CH3)3、-CH2-OCH3、-CH2-O-CH2CH3、-CH2CH2-O-CH3、-CH2CH2-O-CH2CH3、-CH(CH3)CH2-OCH3、-CH2CH(CH3)-OCH3、-CH2F、-CH2Cl、-CHF2、-CF3、-CCl3、-CH2CH2F、-CH2CHF2、-CH(CH3)F、-CH(CH3)CH2F、-CH2CH(CH3)F、-CH2CF3、-CH2CH2CH2F、-CH2CH2CHF2、-CH2CH2CF3、-C2F5、-C2Cl5、-CF(CF3)2、-CH2CN、-CH2CH2CN、
实施方案4.2.19：实施方案4.2至4.2.16任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R4为-C2-6烯基或-C2-6炔基，例如但不限于乙烯基、丙烯基、乙炔基，各自任选被卤素、CN、-C1-6烷氧基或-O-CON(C1-6烷基)2取代。
实施方案4.2.20：实施方案4.2至4.2.16任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R4为-(CH2)n-C3-6环烷基，任选被卤素、CN、-C1-6烷氧基或-O-CON(C1-6烷基)2取代，例如但不限于
实施方案4.2.21：实施方案4.2至4.2.16任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R4为甲基。
实施方案4.2.22：实施方案4.2的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R1为-C1-6烷基，R2为H，R3选自卤素、C1-6烷基和C1-6烷氧基，且R4为C1-6烷基，例如Q为例如
实施方案4.3：实施方案1至3.2.4任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中Q为
实施方案4.3.1：实施方案4.3的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中k为0，则Q为例如/>优选/>
实施方案4.3.2：实施方案4.3的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中k为1，则Q为例如
实施方案4.3.3：实施方案4.3至4.3.2任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R1为-C1-6烷基，任选被卤素或C1-6烷氧基取代，例如但不限于-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH3、-CH(CH3)(CH3)、-CH2CH2CH2CH3、-CH2CH(CH3)CH3、-C(CH3)3、-CH2-OCH3、-CH2-O-CH2CH3、-CH2CH2-O-CH3、-CH2CH2-O-CH2CH3、-CH2F、-CH2Cl、-CHF2、-CF3、-CCl3、-CH2CH2F、-CH2CHF2、-CH2CF3、-CH2CH2CH2F、-CH2CH2CHF2、-CH2CH2CF3、-C2F5、-C2Cl5、-CF(CF3)2；优选-CH3。
实施方案4.3.4：实施方案4.3至4.3.2任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R1为-(CH2)n-C3-6环烷基，任选被卤素或C1-6烷氧基取代，例如但不限于
实施方案4.3.5：实施方案4.3至4.3.2任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中连接于相邻环碳原子上的R1和R3与它们所连接的碳原子一起形成C3-4环烷基，相应的结构片段例如但不限于/>
实施方案4.3.6：实施方案4.3至4.3.5任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R3为H。
实施方案4.3.7：实施方案4.3至4.3.5任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R3为卤素，选自F、Cl、Br、I，优选F。
实施方案4.3.7.1：实施方案4.3至4.3.5任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R3为CN。
实施方案4.3.8：实施方案4.3至4.3.5任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R3为-OH。
实施方案4.3.9：实施方案4.3至4.3.5任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R3为-C1-6烷基，任选被卤素或C1-6烷氧基取代，例如但不限于-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH3、-CH(CH3)(CH3)、-CH2CH2CH2CH3、-CH2CH(CH3)CH3、-C(CH3)3、-CH2-OCH3、-CH2-O-CH2CH3、-CH2CH2-O-CH3、-CH2CH2-O-CH2CH3、-CH2F、-CH2Cl、-CHF2、-CF3、-CCl3、-CH2CH2F、-CH2CHF2、-CH2CF3、-CH2CH2CH2F、-CH2CH2CHF2、-CH2CH2CF3、-C2F5、-C2Cl5、-CF(CF3)2。
实施方案4.3.9.1：实施方案4.3至4.3.5任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R3为-C2-6烯基或-C2-6炔基，任选被卤素、CN或-C1-6烷氧基取代；例如但不限于各自任选被卤素、CN或-C1-6烷氧基取代的乙烯基、丙烯基、乙炔基。
实施方案4.3.10：实施方案4.3至4.3.5任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R3为-O-C1-6烷基，任选被卤素或C1-6烷氧基取代，例如但不限于-O-CH3、-O-CH2CH3、-O-CH2CH2CH3、-O-CH(CH3)2、-O-CH2F、-O-CH2Cl、-O-CHF2、-O-CF3、-O-CH2CH2F、-O-CH2CHF2、-O-CH2CF3、-O-CH2CH2CF3、-O-CH2-O-CH3、-O-CH2CH2-O-CH3。
实施方案4.3.11：实施方案4.3至4.3.5任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R3为-(CH2)n-C3-6环烷基，任选被卤素或C1-6烷氧基取代，例如但不限于 />
实施方案4.3.12：实施方案4.3至4.3.5任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R3为-O-C3-6环烷基，任选被卤素或C1-6烷氧基取代，例如但不限于
实施方案4.3.13：实施方案4.3至4.3.5任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中连接于相邻环碳原子上的两个R3与它们所连接的碳原子一起形成C3-4环烷基，优选环丙基；相应的环例如但不限于
实施方案4.3.13.1：实施方案4.3至4.3.5任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中连接于同一个碳原子上的两个R3形成＝C(Rc)2，其中Rc各自独立地选自H、F、Cl、Br、I、任选被卤素取代的-C1-6烷基；例如但不限于＝CH2、＝CHF、＝CF2、＝CCl2、＝C(CH3)2、＝C(CF3)2。
实施方案4.3.13.2：实施方案4.3至4.3.5任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中连接于同一个碳原子上的两个R3形成螺C3-6环烷基或螺4-7元杂环烷基，例如但不限于螺环丙基、螺环丁基、螺环戊基、螺氮杂环丁烷、螺氮杂环戊烷。
实施方案4.3.14：实施方案4.3至4.3.5任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中连接于非相邻环碳原子上的两个R3一起形成桥连亚甲基或亚乙基。
实施方案4.3.14.1：实施方案4.3至4.3.5任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R3选自卤素、CN、OH、-O-C1-6烷基、-O-C3-6环烷基、-C1-6烷基、-C2-6炔基、-(CH2)n-C3-6环烷基，其中每次出现的C1-6烷基、-C2-6炔基或C3-6环烷基各自独立地任选被卤素或-OC1-6烷基取代；
或者连接于同一环碳原子上的两个R3与它们所连接的碳原子一起形成C3-4环烷基，
或者连接于同一个碳原子上的两个R3形成＝C(Rc)2，其中Rc各自独立地选自H、卤素和任选被卤素取代的-C1-6烷基，例如但不限于＝CH2、＝CHF、＝CF2、＝CCl2、＝C(CH3)2、＝C(CF3)2；优选地，
R3为-C1-3烷基，被卤素取代；或者连接于同一个碳原子上的两个R3形成＝C(Rc)2，其中Rc各自独立地选自H、卤素和任选被卤素取代的-C1-3烷基，例如但不限于＝CH2、＝CHF、＝CF2、＝CCl2、＝C(CH3)2、＝C(CF3)2。
实施方案4.3.14.2：实施方案4.3.14.1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R3所连接的环碳原子与R1所连接的环碳原子相邻且与环N-R4不相邻，例如
实施方案4.3.15：实施方案4.3至4.3.14.2任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R4为H。
实施方案4.3.16：实施方案4.3至4.3.14.2任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R4为-C1-6烷基，任选被卤素、CN、-C1-6烷氧基或-O-CON(C1-6烷基)2取代，例如但不限于-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH3、-CH(CH3)(CH3)、-CH2CH2CH2CH3、-CH2CH(CH3)CH3、-C(CH3)3、-CH2-OCH3、-CH2-O-CH2CH3、-CH2CH2-O-CH3、-CH2CH2-O-CH2CH3、-CH(CH3)CH2-OCH3、-CH2CH(CH3)-OCH3、-CH2F、-CH2Cl、-CHF2、-CF3、-CCl3、-CH2CH2F、-CH2CHF2、-CH(CH3)F、-CH(CH3)CH2F、-CH2CH(CH3)F、-CH2CF3、-CH2CH2CH2F、-CH2CH2CHF2、-CH2CH2CF3、-C2F5、-C2Cl5、-CF(CF3)2、-CH2CN、-CH2CH2CN、
优选地，R4为-C1-3烷基，例如甲基；
优选地，R4为被一个或多个氘取代的-C1-3烷基，例如-CD3。
实施方案4.3.17：实施方案4.3至4.3.14.2任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R4为-C2-6烯基或-C2-6炔基，例如但不限于乙烯基、丙烯基、乙炔基，各自任选被卤素、CN、-C1-6烷氧基或-O-CON(C1-6烷基)2取代。
实施方案4.3.18：实施方案4.3至4.3.14.2任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R4为-(CH2)n-C3-6环烷基，任选被卤素、CN、-C1-6烷氧基或-O-CON(C1-6烷基)2取代，例如但不限于/>
实施方案4.3.19：实施方案4.3至4.3.14.2任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R4为甲基。
实施方案4.3.20：实施方案4.3的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中Z选自C、Se和O，R1为-C1-6烷基，R3选自H、卤素、C1-6烷基和C1-6烷氧基，且R4为C1-6烷基；优选Z选自C。
实施方案4.3.21：实施方案4.3.1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中Z选自C，R1为-C1-6烷基，R3选自卤素、CN、OH、-O-C1-6烷基、-O-C3-6环烷基、-C1-6烷基、-C2-6炔基、-(CH2)n-C3-6环烷基，其中每次出现的C1-6烷基、-C2-6炔基或C3-6环烷基各自独立地任选被卤素或-OC1-6烷基取代，
或者连接于同一环碳原子上的两个R3与它们所连接的碳原子一起形成任选被卤素取代的螺C3-4环烷基，
或者连接于同一个碳原子上的两个R3形成＝C(Rc)2，其中Rc各自独立地选自H、卤素和任选被卤素取代的-C1-6烷基，例如但不限于＝CH2、＝CHF、＝CF2、＝CCl2、＝C(CH3)2、＝C(CF3)2；且
R4为C1-6烷基；
优选地，R3为-C1-3烷基，被卤素取代；或者连接于同一个碳原子上的两个R3形成＝C(Rc)2，其中Rc各自独立地选自H、卤素和任选被卤素取代的-C1-3烷基，例如但不限于＝CH2、＝CHF、＝CF2、＝CCl2、＝C(CH3)2、＝C(CF3)2；R4为-C1-3烷基或被一个或多个氘取代的-C1-3烷基，例如甲基、-CD3。
实施方案4.3.21.1：实施方案4.3至4.3.21任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中Q部分中连接至Y的亚甲基的两个氢原子任选被氘代替。
实施方案4.3.22：实施方案4.3.1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中Q的示例包括但不限于/>
/>
/>
/>
优选
实施方案4.3.23：实施方案4.3.1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中Q为其中R3和R4各自如实施方案1所定义，优选如实施方案4.3.6至4.3.19相应所定义；更优选地，其中R4为任选被-O-C1-6烷基或卤素取代的-C1-6烷基，优选-C1-3烷基；R3选自卤素、CN、任选被卤素取代的-C1-6烷基、任选被卤素取代的-C2-6炔基和任选被卤素取代的-O-C1-6烷基，或者连接于同一个碳原子上的两个R3形成＝C(Rc)2或任选被卤素取代的螺C3-6环烷基，其中Rc各自独立地选自H、卤素和任选被卤素取代的-C1-6烷基，且m选自1或2；R3的具体示例包括但不限于氟、氟代甲基、二氟甲基、甲基、甲氧基、乙炔基、氰基、氟代亚甲基、二氟代亚甲基、亚甲基、二氟、螺环丙基、双甲基；
最优选地，R3为-C1-3烷基，被卤素取代；或者连接于同一个碳原子上的两个R3形成＝C(Rc)2，其中Rc各自独立地选自H、卤素和任选被卤素取代的-C1-3烷基，例如但不限于＝CH2、＝CHF、＝CF2、＝CCl2、＝C(CH3)2、＝C(CF3)2；R4为-C1-3烷基或被一个或多个氘取代的-C1-3烷基，例如甲基、-CD3；
其中与Y连接的亚甲基的两个氢原子任选被氘代替。
实施方案4.3.23：实施方案4.3.1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中Q为其中R3和R4各自如实施方案1所定义，优选如实施方案4.3.6至4.3.19相应所定义；更优选地，其中R4为任选被-O-C1-6烷基或卤素取代的-C1-6烷基，优选-C1-3烷基；R3选自卤素、CN、任选被卤素取代的-C1-6烷基、任选被卤素取代的-C2-6炔基和任选被卤素取代的-O-C1-6烷基，或者连接于同一个碳原子上的两个R3形成＝C(Rc)2或任选被卤素取代的螺C3-6环烷基，其中Rc各自独立地选自H、卤素和任选被卤素取代的-C1-6烷基，且m选自1或2；R3的具体示例包括但不限于氟、氟代甲基、二氟甲基、甲基、甲氧基、乙炔基、氰基、氟代亚甲基、二氟代亚甲基、亚甲基、二氟、螺环丙基、双甲基；
最优选地，R3为-C1-3烷基，被卤素取代；或者连接于同一个碳原子上的两个R3形成＝C(Rc)2，其中Rc各自独立地选自H、卤素和任选被卤素取代的-C1-3烷基，例如但不限于＝CH2、＝CHF、＝CF2、＝CCl2、＝C(CH3)2、＝C(CF3)2；R4为-C1-3烷基或被一个或多个氘取代的-C1-3烷基，例如甲基、-CD3；
其中与Y连接的亚甲基的两个氢原子任选被氘代替。
实施方案4.4：实施方案1至3.2.4任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中Q为
实施方案4.4.1：实施方案4.4的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中Q选自
实施方案4.4.2：实施方案4.4或4.4.1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R2为H。
实施方案4.4.3：实施方案4.4或4.4.1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中至少一个R2为-C1-6烷基，任选被卤素或C1-6烷氧基取代，例如但不限于-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH3、-CH(CH3)(CH3)、-CH2CH2CH2CH3、-CH2CH(CH3)CH3、-C(CH3)3、-CH2-OCH3、-CH2-O-CH2CH3、-CH2CH2-O-CH3、-CH2CH2-O-CH2CH3、-CH2F、-CH2Cl、-CHF2、-CF3、-CCl3、-CH2CH2F、-CH2CHF2、-CH2CF3、-CH2CH2CH2F、-CH2CH2CHF2、-CH2CH2CF3、-C2F5、-C2Cl5、-CF(CF3)2。
实施方案4.4.4：实施方案4.4或4.4.1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中至少一个R2为-(CH2)n-C3-6环烷基，任选被卤素或C1-6烷氧基取代，例如但不限于
实施方案4.4.5：实施方案4.4或4.4.1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中两个R2与它们所连接的碳原子一起形成环丙基或环丁基，例如Q为例如/>
实施方案4.4.6：实施方案4.4至4.4.5任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R3为H。
实施方案4.4.7：实施方案4.4至4.4.5任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R3为卤素，选自F、Cl、Br、I；优选F。
实施方案4.4.8：实施方案4.4至4.4.5任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R3为-OH。
实施方案4.4.9：实施方案4.4至4.4.5任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R3为-C1-6烷基，任选被卤素或C1-6烷氧基取代，例如但不限于-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH3、-CH(CH3)(CH3)、-CH2CH2CH2CH3、-CH2CH(CH3)CH3、-C(CH3)3、-CH2-OCH3、-CH2-O-CH2CH3、-CH2CH2-O-CH3、-CH2CH2-O-CH2CH3、-CH2F、-CH2Cl、-CHF2、-CF3、-CCl3、-CH2CH2F、-CH2CHF2、-CH2CF3、-CH2CH2CH2F、-CH2CH2CHF2、-CH2CH2CF3、-C2F5、-C2Cl5、-CF(CF3)2。
实施方案4.4.10：实施方案4.4至4.4.5任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R3为-O-C1-6烷基，任选被卤素或C1-6烷氧基取代，例如但不限于-O-CH3、-O-CH2CH3、-O-CH2CH2CH3、-O-CH(CH3)2、-O-CH2F、-O-CH2Cl、-O-CHF2、-O-CF3、-O-CH2CH2F、-O-CH2CHF2、-O-CH2CF3、-O-CH2CH2CF3、-O-CH2-O-CH3、-O-CH2CH2-O-CH3。
实施方案4.4.11：实施方案4.4至4.4.5任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R3为-(CH2)n-C3-6环烷基，任选被卤素或C1-6烷氧基取代，例如但不限于
实施方案4.4.12：实施方案4.4至4.4.5任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R3为-O-C3-6环烷基，任选被卤素或C1-6烷氧基取代，例如但不限于
实施方案4.4.13：实施方案4.4.7至4.4.12任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中存在至少一个R3；优选存在一个R3。
实施方案4.4.14：实施方案4.4至4.4.5任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中连接于相邻环碳原子上的两个R3与它们所连接的碳原子一起形成C3-4环烷基。
实施方案4.4.15：实施方案4.4至4.4.5任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中连接于非相邻环碳原子上的两个R3一起形成桥连亚甲基或亚乙基，例如Q为
实施方案4.4.16：实施方案4.4的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中Z选自C、Se和O，两个R2与它们所连接的碳原子一起形成环丙基或环丁基，且R3选自H、卤素、C1-6烷基和C1-6烷氧基。
实施方案5.1：实施方案1至4.4.15任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中Y为O。
实施方案5.2：实施方案1至4.4.15任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中Y为S。
实施方案5.3：实施方案1至4.4.15任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中Y为Se。
实施方案6a：实施方案1至5.3任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中M是N。
实施方案6b：实施方案1至5.3任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中M是C-R7。
实施方案6.1：实施方案6b的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R7为H。
实施方案6.2：实施方案6b的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R7为卤素，选自F、Cl、Br和I；优选F或Cl。
实施方案6.3：实施方案6b的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R7为CN。
实施方案6.4：实施方案6b的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R7为-C1-6烷基，任选被卤素或CN取代；例如但不限于-CH3、-CH2CH3、-CH2F、-CH2Cl、-CHF2、-CF3、-CCl3、-CH2CH2F、-CH2CHF2、-CH2CF3、-CH2CN、-CH2CH2CN。
实施方案7a：实施方案1至6.4任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R11为H。
实施方案7b：实施方案1至6.4任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R11为卤素，优选F。
实施方案7c：实施方案1至6.4任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R11为任选被卤素取代的-C1-6烷基，例如但不限于-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH3、-CH(CH3)(CH3)、-CH2CH2CH2CH3、-CH2CH(CH3)CH3、-C(CH3)3、-CH2-OCH3、-CH2-O-CH2CH3、-CH2CH2-O-CH3、-CH2CH2-O-CH2CH3、-CH2F、-CH2Cl、-CHF2、-CF3、-CCl3、-CH2CH2F、-CH2CHF2、-CH2CF3、-CH2CH2CH2F、-CH2CH2CHF2、-CH2CH2CF3、-C2F5、-C2Cl5、-CF(CF3)2，优选-CH3。
实施方案7d：实施方案1至6.4任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R11为任选被卤素取代的-O-C1-6烷基，例如但不限于-O-CH3、-O-CH2CH3、-O-CH2CH2CH3、-O-CH(CH3)2、-O-CH2F、-O-CH2Cl、-O-CHF2、-O-CF3、-O-CH2CH2F、-O-CH2CHF2、-O-CH2CF3、-O-CH2CH2CF3、-O-CH2-O-CH3、-O-CH2CH2-O-CH3，优选-O-CH3。
实施方案7e：实施方案1至6.4任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R11为任选被卤素取代的-C2-6炔基，优选乙炔基。
实施方案7：实施方案1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其具有以下子通式：
/>
/>
/>
其中各个取代基具有前述各个相应实施方案所定义的含义。
实施方案7.1：实施方案7的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中：
Y为O；
B选自Z选自C、Se和O，优选O或C；
W为-OH；
R1为C1-6烷基，优选甲基；
R2为H，或连接在同一碳原子上的两个R2一起形成环丙基，
R3选自H、C1-6烷基、-OC1-6烷基和卤素，优选C1-6烷基、-OC1-6烷基和卤素，例如甲基、乙基、甲氧基、乙氧基和F；或
对于式(I-A-2)、(I-B-2)、(I-C-2)或(I-D-2)，R3选自卤素、CN、任选被卤素取代的-C1-6烷基、任选被卤素取代的-C2-6炔基和任选被卤素取代的-O-C1-6烷基，或者连接于同一个碳原子上的两个R3形成＝C(Rc)2或任选被卤素取代的螺C3-6环烷基，其中Rc各自独立地选自H、卤素和任选被卤素取代的-C1-6烷基；优选地，R3为-C1-3烷基，被卤素取代；或者连接于同一个碳原子上的两个R3形成＝C(Rc)2，其中Rc各自独立地选自H、卤素和任选被卤素取代的-C1-3烷基，例如但不限于＝CH2、＝CHF、＝CF2、＝CCl2、＝C(CH3)2、＝C(CF3)2；
R4选自H和C1-6烷基，优选C1-6烷基，例如甲基或乙基；更优选，R4为-C1-3烷基或被一个或多个氘取代的-C1-3烷基，例如甲基、-CD3；
R5选自H和卤素，优选卤素，例如F；
R6选自卤素、C1-6烷基和C2-6炔基，优选F、乙基或乙炔基；
R7选自H、卤素、CN和卤素取代的C1-6烷基，优选H、F、Cl、CN、CF3；
R8选自-OH、卤素、-CN、-C1-6烷基、-OC1-6烷基和-CON(C1-6烷基)2；
R9和R10各自独立地为H或卤素，例如各自独立地为H或F，或均为H，或均为卤素，例如F；
R11选自H、卤素、任选被卤素取代的C1-6烷基、任选被卤素取代的C1-6烷氧基和任选被卤素取代的-C2-6炔基；优选H、卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基和-C2-6炔基；
n选自0、1和2，k选自0和1，m和t各自独立地选自1或2，优选2；
其中与Y连接的Q的亚甲基的两个氢原子任选被氘代替。
实施方案8：实施方案7或7.1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其具有以下子通式：
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
优选地，其中
R8选自-OH和-C1-6烷基，优选其中之一为-OH，另一个为C1-6烷基，例如-CH3；Y为O；
R9为H；
R5选自卤素，优选F；且
R6选自C1-6烷基和C2-6炔基，优选乙基或乙炔基；
对于式(I-A’-2)、(I-B’-2)、(I-C’-2)或(I-D’-2)，R3为-C1-3烷基，被卤素取代；或者连接于同一个碳原子上的两个R3形成＝C(Rc)2，其中Rc各自独立地选自H、卤素和任选被卤素取代的-C1-3烷基，例如但不限于＝CH2、＝CHF、＝CF2、＝CCl2、＝C(CH3)2、＝C(CF3)2；R4为-C1-3烷基或被一个或多个氘取代的-C1-3烷基，例如甲基、-CD3；
R11选自H、卤素、C1-6烷基和C1-6烷氧基；
k选自0，m选自1或2；
其中与Y连接的亚甲基的两个氢原子任选被氘代替。
实施方案8.1：实施方案8的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中各个子通式中的B结构片段为
实施方案8.2：实施方案8的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中各个子通式中的B结构片段可替换为优选/>由此相应得到子通式(I-A”)、(I-A”’-1)、(I-A”’-2)、(I-A”’-3)、(I-A”’-4)、(I-B”’)、(I-B”’-1)、(I-B”’-2)、(I-B”’-3)、(I-B”’-4)、(I-C”’)、(I-C”’-1)、(I-C”’-2)、(I-C”’-3)、(I-C”’-4)、(I-D”’)、(I-D”’-1)、(I-D”’-2)、(I-D”’-3)、(I-D”’-4)的化合物，例如
/>
/>
/>
实施方案9：实施方案7或7.1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其具有以下子通式：
/>
/>
优选R8为-CON(C1-6烷基)2，优选-CON(CH3)2。
实施方案10：化合物，选自下文实施例1-185的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物。
需要说明的是，本发明的化合物涵盖以上各个独立的实施方案或各个具体实施方案，还涵盖上述各个实施方案或具体实施方案的任何组合或亚组合构成的实施方案，也涵盖以上任何优选或例举的实施方案的任何组合所构成的实施方案。
发明的有益效果
如前文所述，已知Ras突变蛋白、尤其KRas突变蛋白在肿瘤发生以及多种其它疾病中发挥作用。我们已令人惊讶地发现，具有上述结构特征的本发明化合物在携带由KRas突变蛋白(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变和Q61H突变蛋白)及KRAS野生扩增的细胞系中能够强效抑制细胞增殖，从而在预防、遏制和/或治疗相关肿瘤疾病方面具有潜在的、作为抗增殖、促凋亡和/或抗侵袭药物的价值。特别地，预期本发明化合物可用于预防或治疗那些Ras突变蛋白(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变和Q61H突变蛋白)或KRAS野生扩增介导的或得益于Ras突变(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变和Q61H突变)或KRAS野生扩增抑制的疾病或病症，例如本文所定义的癌症或肿瘤。
具体地，经研究发现，本发明的化合物能够实现以下一种或多种技术效果：
·高的突变蛋白抑制活性：本发明的化合物、尤其是本文上下文具体示例的化合物，在KRAS突变细胞(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变和Q61H突变)及KRAS扩增细胞增殖抑制实验中显示出增殖抑制活性，IC50值在0.0001-10μM范围内，优选在0.0001-1μM范围内；例如0.0001～1μM、0.001～1μM、0.0001～0.5μM、0.001～0.5μM、0.0001～0.1μM、0.001～0.5μM、0.001～0.1μM；
·具有良好的药代动力学性质，例如具有较长的t1/2，从而例如可以加大给药间隔，更长的半衰期，使患者具有更好的依从性；具有安全性/活性综合效应最佳的AUC0-t数据，具有更好的成药性，更高的生物利用度，如活性实施例3所验证；和/或
·具有明显令人满意的安全性，药物相互作用的风险降低，对于药物代谢关键CYP亚型没有显著抑制作用，如活性实施例4所验证。
·良好的药代动力学性质带来更便捷的口服给药模式，显示出良好的药效作用，如活性实施例7所验证。
基于以上本发明化合物的有益效果，本发明还提供以下各个方面的技术方案。
用于治疗或用作药物的本发明化合物
一方面，本发明提供了本发明化合物、优选其药学上可接受的盐或溶剂合物，用作药物。
另一方面，本发明提供了本发明化合物、优选其药学上可接受的盐或溶剂合物用作KRas突变蛋白(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变和Q61H突变蛋白)及KRAS野生扩增型细胞抑制剂。
另一方面，本发明提供本发明化合物、优选其药学上可接受的盐或溶剂合物，用于治疗和/或预防Ras突变蛋白、具体地KRas突变蛋白(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变和Q61H突变蛋白)及KRAS扩增介导的或得益于Ras突变、具体地KRas突变蛋白(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变和Q61H突变蛋白)及KRAS扩增抑制的疾病或病症。
在具体的实施方式中，本发明提供用于治疗和/或预防Ras突变蛋白、具体地KRas突变蛋白(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变和Q61H突变蛋白)及KRAS扩增对所述疾病的发生和发展起到促进作用或抑制Ras突变蛋白、具体地KRas突变蛋白(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变和Q61H突变蛋白)及KRAS扩增将降低疾病的发生率、减少或消除疾病病状的疾病的本发明化合物，所述疾病例如肿瘤或癌症，包括但不限于：肺癌、肺腺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、皮肤或眼内黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛门区域癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金病、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、慢性或急性白血病、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、肾脏或输尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌、中枢神经系统肿瘤(CNS)、原发性CNS淋巴瘤、脊柱肿瘤、脑干神经胶质瘤或垂体腺瘤。
本发明尤其提供可用于治疗患有胰腺癌、结肠癌、直肠癌、肺腺癌、肺癌、胆管癌、子宫内膜癌、卵巢癌、白血病；最优选选自胰腺癌、结肠癌、直肠癌、肺腺癌、胆管癌的患者的式(I)化合物或其异构体、它们药学上可接受的盐或溶剂合物。
药物组合物及其施用
另一方面，本发明提供药物组合物，其包含以上定义的式(I)化合物、优选其药学上可接受的盐或溶剂合物，以及可药用载体或赋形剂。本发明的药物组合物可用于治疗或预防由Ras突变、尤其KRas突变介导的疾病，例如KRas G12C、KRas G12D、KRas G12V、KRasG12A、KRas G12R、KRas G12S、KRas G13D突变或KRas Q61H突变、及KRAS扩增介导的疾病，例如肿瘤或癌症。
上述本发明药物组合物，可以通过本领域技术人员已知的技术来配制，如在Remington’sPharmaceutical Sciences第20版中公开的技术。例如，可配制为片剂、粉末、胶囊、锭剂、颗粒、溶液、分散剂、混悬剂、糖浆、喷雾、栓剂、凝胶、乳剂、贴剂等。所述组合物可含有药物制剂中的常规组分，例如稀释剂(例如葡萄糖、乳糖或甘露醇)、载体、pH调节剂、缓冲剂、甜味剂、填充剂、稳定剂、表面活性剂、润湿剂、润滑剂、乳化剂、悬浮剂、防腐剂、抗氧化剂、遮光剂、助流剂、加工助剂、着色剂、加香剂、调味剂、其它已知添加剂以及其它活性剂。合适的载体和赋形剂为本领域技术人员熟知并详述于例如Ansel,Howard C.,等,Ansel’sPharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems.Philadelphia:Lippincott,Williams&Wilkins,2004中。
本发明药物组合物的给药和施用均符合良好的医学实践。在此背景下需要考虑的因素包括所治疗特定障碍、所治疗的特定哺乳动物、个体患者的临床情况、障碍的起因、药剂递送位置、施用方法、施用安排以及医生从业者熟知的其它因素。本发明化合物或药物组合物的最佳剂量水平和给药频率可由本领域技术人员通过药学研究领域的标准试验确定。
本发明的组合物可采取任意合适方式施用，包括口服、局部(包括颊和舌下)、直肠、阴道、透皮、胃肠外、皮下、腹膜内、肺内、皮内、鞘内、吸入和硬膜外和鼻内，和如需局部治疗，也可采取病灶内施用。胃肠外输注包括肌肉、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下施用。在一些实施方案中，本发明的药物组合物通过口服施用。
对于70kg的人类对象，本发明化合物的适合的剂量范围可由本领域技术人员常规确定，例如可以为1-1000mg/天。
当本文描述药物或其药学上可接受的盐的剂量时，应理解，该剂量基于游离碱的重量，不包括其任何水合物或溶剂化物，除非说明书中指出该剂量基于盐、水合物或溶剂合物的重量。
治疗方法和用途
如上所述，本发明的化合物及其各种具体实施方案的化合物、尤其是实施例中具体制备和表征的化合物，显示出对Ras突变、尤其是KRas突变、例如KRas G12C、KRas G12D、KRas G12V、KRas G12A、KRas G12R、KRas G12S或KRas G13D突变、或KRas Q61H，及KRAS扩增型细胞的抑制作用。
因此，另一方面，本发明提供了一种抑制细胞中Ras突变、尤其是KRas突变、优选KRas G12D突变的方法，包括使细胞与本发明的化合物、优选其药学上可接受的盐或溶剂合物相接触以抑制细胞中Ras突变、尤其是KRas突变(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变和Q61H突变)及KRAS扩增的活性。
基于同样的性质，本发明还相应地提供一种抑制哺乳动物中异常细胞生长的方法，包括给所述哺乳动物施用治疗有效量的本发明的化合物、优选其药学上可接受的盐或溶剂合物、或包含本发明的化合物、优选其药学上可接受的盐或溶剂合物的药物组合物。
另一方面，本发明提供了用于治疗和/或预防由Ras突变、尤其是KRas突变(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变和Q61H突变)及KRAS扩增介导的疾病的方法，包括向有需要的对象施用治疗有效量的本发明化合物、优选其药学上可接受的盐或溶剂合物、或包含本发明化合物优选药学上可接受的盐或溶剂合物的药物组合物。
另一方面，本发明提供了本发明的化合物、优选其药学上可接受的盐或溶剂合物、或包含本发明的化合物、优选其药学上可接受的盐或溶剂合物的药物组合物的用途，用于抑制细胞中Ras突变、尤其是KRas突变、优选KRas G12C、KRas G12D、KRas G12V、KRas G12A、KRas G12R、KRas G12S或KRas G13D、或KRas Q61H突变，及KRAS扩增介导的疾病。
另一方面，本发明提供了本发明的化合物、优选其药学上可接受的盐或溶剂合物、或包含本发明的化合物、优选其药学上可接受的盐或溶剂合物的药物组合物在制备用于治疗和/或预防由Ras突变、尤其是KRas突变(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变和Q61H突变)及KRAS扩增介导的疾病的药物中的用途。
对上述本发明提供的各个方法和用途技术方案而言，所述异常细胞生长或由Ras突变、尤其KRas突变、优选KRas G12C、KRas G12D、KRas G12V、KRas G12A、KRas G12R、KRasG12S或KRas G13D、或KRas Q61H突变，及KRAS扩增介导的疾病尤其指的是癌症或肿瘤。示例性的所述癌症或肿瘤包括但不限于肺癌、肺腺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、皮肤或眼内黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛门区域癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金病、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、慢性或急性白血病、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、肾脏或输尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌、中枢神经系统肿瘤(CNS)、原发性CNS淋巴瘤、脊柱肿瘤、脑干神经胶质瘤或垂体腺瘤。
对上述本发明提供的各个方法和用途技术方案而言，所述异常细胞生长或由Ras突变、尤其KRas突变(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变和Q61H突变)及KRAS扩增介导的疾病优选选自胰腺癌、结肠癌、直肠癌、肺腺癌、肺癌、胆管癌、子宫内膜癌、卵巢癌、白血病；最优选选自胰腺癌、结肠癌、直肠癌、肺腺癌、胆管癌。
因此，在该方面的优选实施方案中，本发明提供了用于通过抑制KRas突变或扩增而治疗或预防癌症或肿瘤的上述各项方法和用途技术方案。在更进一步优选的实施方案中，本发明提供了通过抑制KRas突变或扩增而治疗或预防胰腺癌、结肠癌、直肠癌、肺腺癌和胆管癌的上述各项方法和用途技术方案。
本发明还提供了本发明的化合物、优选其药学上可接受的盐或溶剂合物在研究中作为KRas抑制剂(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变、Q61H突变及KRAS扩增抑制剂)的研究工具化合物的用途。因此，本发明涉及本发明化合物、优选其药学上可接受的盐或溶剂合物作为KRas抑制剂的体外用途，特别地涉及本发明化合物、优选其药学上可接受的盐或溶剂合物作为KRas抑制剂起效的研究工具化合物的体外用途。本发明同样涉及抑制KRas(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变、Q61H突变及KRAS扩增)的方法，特别是体外方法，该方法包括将本发明的化合物、优选其药学上可接受的盐或溶剂合物施用于样品(例如生物样品)。。应理解，术语“体外”在该特定上下文中以“活的人体或动物体外”的含义使用，其具体包括用细胞、细胞或亚细胞提取物和/或人工环境中的生物分子进行的实验，例如可以在烧瓶、试管、培养皿、微量滴定板等中提供的水溶液或培养基。
药物组合
本发明的化合物可以作为唯一的活性成分进行施用，也可以与另外的药物或疗法组合进行施用。
因此，另一方面，本发明提供了药物组合，其包含本发明的化合物、优选其药学上可接受的盐或溶剂合物以及其他活性剂，或由二者组成。该药物组合用于抑制哺乳动物中异常细胞生长，或用于治疗和/或预防由Ras突变、优选KRas突变(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变和Q61H突变)及KRAS扩增介导的疾病。
所述其他活性剂可以是一种或多种另外的本发明化合物，或可以是与本发明化合物相容即不会相互不利影响、或具有互补活性的第二种或另外的(例如第三种)化合物，例如这些活性剂可以是已知调节其他生物活性通路的化合物，或者可以是调节本发明化合物所涉及生物活性通路中的不同组分的化合物，或甚至是与本发明化合物的生物靶点相重叠的化合物。
在一个具体的实施方案中，可以与本发明化合物组合使用的其他活性剂包括但不限于化疗剂、治疗性抗体和放疗，例如烷化剂、抗代谢物、细胞周期抑制剂、有丝分裂抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、抗激素类药物、血管生成抑制剂、细胞毒性剂。
与本发明组合使用的其他活性剂可以与本发明的化合物通过相同或不同的施用途径同时、分别或依次地进行施用。所述其他活性剂可以与本发明化合物在单一药物组合物中共同施用，或与本发明化合物处于不同的离散单元中分别施用，例如组合产品,优选为药盒形式，当分别施用时可以同时或相继进行，所述相继施用在时间上可以是接近或隔远的。它们可以由相同或不同的制造商制备和/或配制。而且，本发明的化合物和其他活性剂可以(i)在将组合产品发送给医师之前(例如在包含本发明的化合物和另外的药物的药盒的情形中)；(ii)在临施用前由医师自身(或在医师指导下)；(iii)由患者自身、例如在本发明的化合物和其他活性剂的依次施用期间一起加入组合治疗中。
本发明的化合物还可以与抗肿瘤疗法组合，所述抗肿瘤疗法包括但不限于手术、辐射治疗、移植(例如干细胞移植、骨髓移植)、肿瘤免疫疗法和化疗等。
因此，另一方面，本发明还提供了药盒，其包含两种或多种单独的药物组合物，其中至少一种包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，以及分别容纳所述组合物的装置，如容器、分装瓶或分立的箔包装，例如用于包装片剂、胶囊等的泡罩包装，还包括使用说明书。本发明的药盒特别适用于施用不同的剂型，如口服剂型和胃肠外剂型，或者适合于以不同的剂量间隔施用不同的组合物。
对于上述本发明的药物组合物、药物组合或药盒的技术方案而言，其中所涉及的异常细胞生长或由Ras突变、尤其KRas突变、优选KRas G12C、KRas G12D、KRas G12V、KRasG12A、KRas G12R、KRas G12S或KRas G13D、或KRas Q61H突变，及KRAS扩增介导的疾病如上文对于本发明方法和用途所定义。
对于上述本发明化合物、药物组合物、方法、用途、药物组合及药盒而言，优选本文实施例的化合物。
本发明化合物的制备方法
另一方面，本发明还提供了本发明所定义化合物的制备方法。
本发明的化合物可以通过多种方法、包括下文给出的通用方法、实施例中公开的方法或与之类似的方法制备。
用于制备有机化合物和官能团转化和操作的标准合成方法和操作是本领域已知的并且可以在标准教科书中找到，例如Smith M.B.,“March’s Advanced OrganicChemistry:Reactions,Mechanisms,and Structure”,第7版,Wiley,2013)。对于各通用合成方案的各个反应步骤而言，适当的反应条件是本领域技术人员已知的或可以常规确定的。用于合成本发明化合物的方法步骤可以在本身已知的反应条件(包括具体提及的那些条件)下、在不存在或通常在存在溶剂或稀释剂(包括例如对所用试剂而言是惰性的且可溶解所用试剂的溶剂或稀释剂)的情况下、在不存在或存在催化剂、缩合剂或中和剂(例如离子交换剂，如阳离子交换剂，例如H+形式)的情况下、根据反应和/或反应物的性质在降低的、正常的或升高的温度(例如约-100℃至约190℃，包括例如约-78℃至约150℃，例如约0℃至约125℃、室温、-20至40℃或回流温度)下、在大气压力下或在密闭容器中、当适宜时在加压下、和/或在惰性气氛例如氩气或氮气气氛下进行。
如果没有特别说明，在制备化合物中使用的原料和试剂是商购可获得的，或文献中已知的化合物，或者可以通过下文的方法、与下文给出的方法类似的方法或本领域已知的标准方法由本领域技术人员制得。除非在方法描述中另有说明，否则可以适用的溶剂是本领域技术人员熟知的适用于所涉及具体反应类型的那些常规溶剂，例如水、酯类、醚类、液体芳族烃类、醇类、腈类、卤化烃类、酰胺类、碱类、羧酸酐类、环状、直链或支链烃类，或这些溶剂的混合物。该类溶剂混合物也可用于后处理，例如通过色谱法或分配进行的后处理。
如果需要，合成反应流程中的原料和中间体可以采用常规技术进行分离和纯化，所述技术包括但不限于过滤、蒸馏、结晶、色谱法等。如果中间体和终产物以固体形式获得，则纯化也可以通过重结晶或陈化来进行。所述材料可以采用包括物理常数和波谱数据在内的常规方法表征。反应混合物以常规方式后处理，例如通过与水混合，分离各相，并在适当时通过色谱法纯化粗产物来进行。
本领域技术人员能认识到本发明化合物中是否存在立体中心。在反应的所有阶段，所形成的异构体的混合物可被分离成单个异构体，例如非对映异构体或对映异构体，或者分离成任何所需的异构体混合物，例如外消旋物或非对映异构体的混合物，参见例如E.L.Eliel,S.H.Wilen和L.N.Mander的“Stereochemistry of Organic Compounds”(Wiley-Interscience,1994)。
在制备本发明化合物的过程中产生立体异构体混合物的情况下，本发明化合物的单个立体异构体可以通过拆分获得，例如，通过从作为立体异构体混合物获得的本发明化合物开始，使用众所周知的方法，例如形成非对映体对，通过与旋光酸成盐，然后分级结晶和再生游离碱，或通过手性制备型色谱法；或者，可以使用具有既定立体化学的原料或中间体、或者可以使用任何已知的手性拆分方法获得光学纯的或对映体富集的合成中间体，然后可以在上述合成过程的各个阶段将其原样用于后续步骤。
在某些特定情况下，可能有必要使用适当的保护基团保护特定的反应基团，以避免干扰其他反应性基团的反应。适合的保护基和采用这样的适合保护基进行保护和脱保护的方法是本领域技术人员众所周知的；其实例可以见于T.Greene和P.Wuts,ProtectiveGroups in Organic Synthesis(第3版),John Wiley&Sons,NY(1999)中。
下文仅举例说明合成本发明化合物的通用合成方案。本领域普通技术人员已知的其他路线以及其他反应物和中间体也可以用于得到本发明的化合物。
为了清楚起见，在以下所述的示例性合成方案中，如无特别说明，各个中间体化合物结构式中出现的R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、X、Y、Z、n、m和t如上文对本发明化合物所定义，其中PG代表可由本领域技术人员基于有机化学知识确定的适合保护基。
合成方案A
本发明化合物的合成可以根据以下方案或其适当的变体制备。
在步骤A中，化合物1商购可得、或可以按照本文实施例所使用的方法或与其类似的方法得到。使化合物1通过芳香亲核取代反应引入片段B-(R8)t，得到化合物2。典型的芳香亲核取代条件为本领域熟知，例如DIEA/THF等。
在步骤B中，使化合物2与相应的胺类化合物、在例如DIEA/二氧六环等条件下反应，得到化合物3或者4。其中相应的胺类化合物商购可得，或可以按照本文实施例所使用的方法或与其类似的方法得到，还可以按照有机化学领域相关文献方法得到。后者在步骤C中通过Suzuki-Miyaura偶联反应引入萘或者苯并噻吩类化合物，得到化合物5或者6或者7或者8。在步骤D中，将化合物5～8脱除所带保护基，得到通式I-A-1、I-B-1、I-A-4和I-B-4的化合物。
典型的Suzuki-Miyaura偶联条件为本领域众所周知的，且本领域技术人员了解用于促进这类交叉偶联反应的多种条件，典型条件例如Pd(dtbpf)Cl2/K3PO4/二氧六环/水，或者Pd(OAc)2/rac-BIDIME/K2CO3/甲苯；适合的钯催化剂还包括XantPhos Pd G2、APd G3、氯化双(三苯膦)钯(II)、Pd(dppf)Cl2、Pd2dba3、四苯膦钯和乙酸钯(II)等；如果需要，适合的配体可以包括三环己膦和三苯膦等；适合的碱还包括氟化钾、碳酸铯、碳酸钠、叔丁醇钾和磷酸钾一水合物等。
需要说明的是，步骤D中保护基的脱除，可以根据分子所携带的保护基进行调整，可以是一步反应，也可以是多步反应。例如，当化合物W为OH，所携带保护基PG为TIPS时，可通过例如CsF等试剂进行脱除。
本发明的通式为I-A-2、I-B-2、I-A-3、I-B-3的化合物的合成可由本领域技术人员参照上述方案类似地进行。
合成方案B
本发明的通式I-A和I-B化合物的合成还可以根据以下方案或其适当的变体制备。
在步骤A中，化合物2可以按照合成方案A所述的方法步骤得到。使化合物2通过卤素交换反应、在例如KF/DMSO或KF/MsOH/DABCO/DMSO等条件下进行氟代，得到化合物9。化合物9再依次经过步骤B的Suzuki-Miyaura偶联反应、步骤C的芳香亲核取代反应及步骤D的保护基脱除反应，得到最终化合物I-A-1、I-B-1、I-A-4和I-B-4。此方案中涉及的Suzuki-Miyaura偶联反应、亲核取代反应及保护基脱除反应的典型条件为本领域熟知，且可参照合成方案A中所述相关反应条件类似进行。
本发明的通式为I-A-2、I-B-2、I-A-3、I-B-3的化合物的合成可由本领域技术人员参照上述方案进行。
本发明的通式为I-C和I-D的化合物的合成可由本领域技术人员采用适合的原料、参照上述方案进行，或通过以下方案C所示进行。
合成方案C
本发明的通式I-C和I-D化合物的合成根据以下方案或其适当的变体制备。
化合物9可以商业化购得、可参照文献报道或本发明提供合成方案及适当变体获得。在步骤A中，化合物9在例如缩合剂BOP等条件下，通过缩合反应引入片段B-(R8)t，得到化合物10。在步骤B中，化合物10通过Suzuki-Miyaura偶联反应引入萘或者苯并噻吩类化合物，得到化合物11或者12。在步骤C中，化合物11或者12中硫醚经氧化得到亚砜或砜、或亚砜和砜的混合物，得到化合13或者14。后在在步骤D中通过芳香亲核取代反应引入Y-Q基团得到化合物15或者16。在步骤E中，化合物15或者16脱除可能带有的保护基得到通式为I-C或者I-D的化合物。此方案中涉及的Suzuki-Miyaura偶联反应、亲核取代反应及保护基脱除反应的典型条件为本领域熟知，且可参照合成方案A中所述相关反应条件类似进行。
合成实施例
以下结合实施例对本发明作进一步的说明。需要说明的是，下述实施例是示例性的，不应视为对本发明保护范围的限制。
本文在对实施方案和随后的具体实施例的描述中，使用了以下缩写：
ACN(乙腈)；Boc(叔丁氧基羰基)；BOP(六氟磷酸苯并三唑-1-氧基三(二甲氨基)磷)；CDCl3(氘代氯仿)；cataCXium A Pd G3(甲磺酸[正丁基二(1-金刚烷基)膦](2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II))；DABCO(1,4-二氮杂二环[2.2.2]辛烷)；DCM(二氯甲烷)；DIEA或者DIPEA(N,N-二异丙基乙胺)；DMF(N,N-二甲基甲酰胺)；DMSO(二甲亚砜)；DMSO-d6(六氘代二甲亚砜)；EA或EtOAc(乙酸乙酯)；EDTA-K2(乙二胺四乙酸二钾盐)；EtOH(乙醇)；FCC(快速柱层析)；g(克)；h(小时)；HCl(氯化氢)；HCl-MeOH或者HCl/MeOH(氯化氢甲醇溶液)；HLM(人肝微粒体)；H2O(水)；H2SO4(硫酸)；IV(静脉给药)；K2CO3(碳酸钾)；LCMS(液质联机)；LC-MS/MS(液谱-质谱-质谱联机)；MeOH(甲醇)；Methanol-d4(四氘代甲醇)；mg(毫克)；MHz(兆赫兹)；min(分钟)；mL(毫升)；mmol(毫摩尔)；MOM(甲氧基甲基醚)；MsOH(甲磺酸)；MTBE(甲基叔丁基醚)；m/z(质荷比)；N2(氮气)；NaCl(氯化钠)；NaH(氢化钠)；NaHCO3(碳酸氢钠)；Na2SO3(亚硫酸钠)；Na2SO4(硫酸钠)；NCS(氯代丁二酰亚胺)；NH4Cl(氯化铵)；NMR(核磁共振)；PdCl2(dtbpf)或者Pd(dtbpf)Cl2(1,1'-二(二叔丁基膦)二茂铁二氯化钯)；PdCl2(dppf)或者Pd(dppf)Cl2(1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯)；Pd(OAc)(醋酸钯)；Pd(PPh3)4(四三苯基膦钯)；PE(石油醚)；PO或po(口服给药)；POCl3(三氯氧磷)；r.t.(室温)；Selectfluor(1-氯甲基-4-氟-1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷二(四氟硼酸)盐)；SiO2(硅胶)；TEA(三乙胺)；TFA(三氟乙酸)；THF(四氢呋喃)；TIPS(三异丙基甲硅烷基)；TLC(薄层色谱)；TsOH(对甲苯磺酸)；TsOH·H2O(对甲苯磺酸一水合物)；μL(微升)；μM(微摩尔浓度)；μmol(微摩尔)。
在如下实施例中，给出了所合成目标化合物的名称及其结构。名称与结构之间出现任何偏差并非有意，在这种情况下，结构为决定性的。
下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照这类反应的常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。除非另外说明，否则液体的比为体积比。
以下实施例中所用的实验材料和试剂如无特别说明均可从市售渠道获得、依据现有技术的方法制得或根据与本申请公开的类似的方法制得。
在下列实施例中，1H-NMR谱是用Bruker(400MHz)记录，化学位移以相对于氘代溶剂峰(CDCl3:δ＝7.26ppm；CD3OD:δ＝3.31ppm；DMSO-d6:δ＝2.50ppm)的δ(ppm)表示；液质联用是用Aglient 1260液相色谱+Aglient G6125B质谱LCMS液质联用仪记录。气相色谱质谱联用仪使用Shimadzu GCMS-QP2010SE进行检测。
中间体A
7-溴-2,4-二氯-8-氟喹唑啉
步骤A：7-溴-8-氟喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮
在室温条件下，将2-氨基-4-溴-3-氟苯甲酸(10.0g,42.7mmol)和尿素(25.7g,427.3mmol)混合在一起，升温到200℃，搅拌2h。反应逐渐由固态转变为液态，然后再继续转变为固态，LCMS监测反应结束后，用热水(250mL)洗涤，过滤收集固体，得到7-溴-8-氟喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(12g,粗品)。LCMS(ESI,m/z):258.9(M+H)。
步骤B：7-溴-2,4-二氯-8-氟喹唑啉
在室温条件下，将DIPEA(13.5mL,77.2mmol)加入到7-溴-8-氟喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(4.0g,15.4mmol)和POCl3(35.9mL,386.0mmol)的混合液中，升温到100℃搅拌5h。LCMS监测反应结束后，浓缩除去大部分溶剂和碱，加入ACN(10mL)稀释。室温搅拌下，将所得稀释液慢慢滴加到水中，析出固体，过滤，烘干后，得到黄色固体7-溴-2,4-二氯-8-氟喹唑啉(3.8g,收率83％)。LCMS(ESI,m/z):296.8(M+H)。
中间体B
7-溴-2,4-二氯-6,8-二氟喹唑啉
步骤A：4-溴-3,5-二氟-2-(3-(2,2,2-三氯乙酰基)脲基)苯甲酸甲酯
室温下，在置有搅拌子的圆底烧瓶中加入2-氨基-4-溴-3,5-二氟苯甲酸甲酯(10g,37.6mmol)和THF(100mL)。室温搅拌下向体系中滴加2,2,2-三氯乙酰异氰酸酯(8.5g,45.1mmol)。所得混合物室温搅拌2小时，减压浓缩，得到棕色固体4-溴-3,5-二氟-2-(3-(2,2,2-三氯乙酰基)脲基)苯甲酸甲酯(粗品)，直接用于下一步。LCMS(ESI,m/z):452.8(M+H)。
步骤B：7-溴-6,8-二氟喹唑啉-2,4-二醇
室温下，将上步所得4-溴-3,5-二氟-2-(3-(2,2,2-三氯乙酰基)脲基)苯甲酸甲酯加入置有搅拌子的圆底烧瓶中加入，再加入NH3(100mL,7M MeOH溶液)。将所得混合物在室温搅拌2小时，LCMS监测反应完全。减压浓缩，将所得固体用甲基叔丁基醚打浆，过滤，得到淡黄色固体7-溴-6,8-二氟喹唑啉-2,4-二醇(14g,粗品)，无需进一步纯化，直接用于下一步。LCMS(ESI,m/z):277.0(M+H)。
步骤C：7-溴-2,4-二氯-6,8-二氟喹唑啉
在置有搅拌子的圆底烧瓶中加入7-溴-6,8-二氟喹唑啉-2,4-二醇(14g,粗品)、POCl3(112mL)。室温下搅拌下，向体系中滴加DIEA(28mL)。滴加完毕后，将体系升温至110℃搅拌反应过夜。将反应液减压浓缩至约30mL，倒入水(600mL)中，析出沉淀过滤收集，干燥后，得到黄色固体7-溴-2,4-二氯-6,8-二氟喹唑啉(11g,粗品)，直接用于后续反应。LCMS(ESI,m/z):312.9(M+H)。
根据上述合成方法制备以下中间体：
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中间体G
7-氯-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-醇
步骤A：4,6-二氯-5-氟烟酰氯
在室温搅拌下，将氯化亚砜(2.25mL,31mmol)缓慢加入到4,6-二氯-5-氟烟酸(5.0g,23.4mmol)的DCM(100mL)溶液中，后加入DMF(175mg,2.4mmol)。将所得反应液在50℃下搅拌2h。TLC监测反应完全后，浓缩，加入少量甲苯带蒸后，得到黄色固体4,6-二氯-5-氟烟酰氯(4.5g,收率83％)，直接用于后续反应。
步骤B：(4,6-二氯-5-氟烟酰基)氨基甲酰亚胺硫代甲酯
在0℃搅拌下，将4,6-二氯-5-氟烟碱酰氯(4.5g,19.8mmol)与乙二醇二甲醚(20ml)的混合溶液缓慢滴加入2-甲基异硫脲硫酸(15g,49.5mmol)与1M NaOH水溶液(70ml)的混合溶液中，保持温度搅拌1h。将析出的固体沉淀物过滤、干燥，得到产物(4,6-二氯-5-氟烟酰基)氨基甲酰亚胺硫代甲酯(5.0g,收率90％)。LCMS(m/z):282.1(M+H)。
步骤C：7-氯-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-醇
将(4,6-二氯-5-氟烟酰基)氨基甲酰亚胺硫代甲酯(5.0g,17.8mmol)溶于DMF(40mL)中，加热至120℃搅拌反应3h。LCMS监测反应完全后，冷至室温，加入水(200mL)。将析出的固体过滤、干燥，得到产物7-氯-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-醇(3.6g,收率82％)。LCMS(m/z):245.6(M+H)。
中间体I
7-氯-8-氟-5-甲氧基-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-醇
步骤A：2,6-二氯-3-氟吡啶-4-胺
在室温下，将Selectfluor(68g,180mmol)加入到2,6-二氯吡啶-4-胺(25g,154mmol)的甲醇/水(V/V＝5:1,300mL)溶液中。所得混合物在50℃下搅拌48h，减压浓缩，乙酸乙酯稀释，依次用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤浓缩，所得粗品经FCC(SiO2，EA/PE＝0-10％)纯化，得到白色固体2,6-二氯-3-氟吡啶-4-胺(10g)。LCMS(m/z):180.9(M+H)。
步骤B：(叔丁氧基羰基)(2,6-二氯-3-氟吡啶-4-基)氨基甲酸叔丁基酯
室温搅拌下，将4-二甲氨基吡啶(307mg,2.75mmol)、二碳酸二叔丁酯(30g,138mmol)加入到2,6-二氯-3-氟吡啶-4-胺(10g,55mmol)的四氢呋喃(100mL)溶液中。所得混合物加热至60℃搅拌16h，TLC监测反应完成，浓缩，得粗品，经甲醇打浆，得到白色固体(叔丁氧基羰基)(2,6-二氯-3-氟吡啶-4-基)氨基甲酸叔丁基酯(16g)。LCMS(m/z):381.2(M+H)。
步骤C：4-((叔丁氧基羰基)氨基)-2,6-二氯-5-氟烟酸叔丁酯
干冰乙醇浴下，将LDA(2.0M，63mL，126mmol)缓慢加入到(叔丁氧基羰基)(2,6-二氯-3-氟吡啶-4-基)氨基甲酸叔丁基酯(16g,42mmol)的THF(200mL)溶液中，所得混合物保持温度搅拌1h。TLC监测反应完成，加入适量醋酸淬灭反应，用EA稀释，水洗，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩后所得粗品经FCC(SiO2,EA/PE＝0-20％)纯化，得到4-((叔丁氧基羰基)氨基)-2,6-二氯-5-氟烟酸叔丁酯(13g)。
步骤D：4-氨基-2,6-二氯-5-氟烟酸·盐酸盐
室温条件下将浓盐酸(30ml)加入到4-((叔丁氧基羰基)氨基)-2,6-二氯-5-氟烟酸叔丁酯(13g,34mmol)的二氧六环(90mL)溶液中。所得混合物在室温下搅拌3h。LCMS监测反应完成后，浓缩得到4-氨基-2,6-二氯-5-氟烟酸·盐酸盐(8g)。LCMS(m/z):224.9(M+H)。
步骤E：5,7-二氯-8-氟-2-巯基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-醇
将4-氨基-2,6-二氯-5-氟烟酸(8g,30.8mmol)与氯化亚砜(200mL)的混合溶液在50℃下搅拌3h。然后浓缩，将残留物溶解在丙酮中(50mL)得到溶液1。在室温下将硫氰酸铵(7g,92mmol)与丙酮溶液(160mL)的混合溶液滴入溶液1中，所得反应液在室温下继续搅拌1h。LCMS监测反应完成后，将反应液倒入水中，过滤，滤饼干燥后，得到5,7-二氯-8-氟-2-巯基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4(3H)-酮(5g)。LCMS(m/z):265.9(M+H)。
步骤F：5,7-二氯-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-醇
在室温下,将5,7-二氯-8-氟-2-巯基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-醇(5g,18.8mmol)、甲醇(380mL)、氢氧化钠水溶液(0.1M,380mL,380mmol)及碘甲烷(5.3g,380mmol)的混合溶液搅拌2h。LCMS监测反应完成后，将反应液倒入1000ml水中，用浓盐酸酸化至pH～6。将溶液过滤，滤饼干燥后，得到产物5,7-二氯-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-醇(4g).LCMS(m/z):279.9(M+H)。
步骤G：7-氯-8-氟-5-甲氧基-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-醇
将5,7-二氯-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-醇(6.0g,22mmol)、甲醇钠(10.3g,330mmol)、DMA(100mL)与甲醇(10mL)的混合物在50℃搅拌16h。LCMS监测反应完成后，加水稀释，用浓盐酸调节到pH～3，过滤，收集滤饼，干燥后，得产品7-氯-8-氟-5-甲氧基-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-醇(5.5g)。LCMS(m/z):276.0(M+H)。
中间体J
5-溴-7-氯-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-醇
步骤A：2-氯-3-氟-5-碘吡啶-4-胺
室温条件下，将2-氯-3-氟-4-氨基吡啶(25.0g,171mmol)溶解到250mL乙腈中。然后把NIS(35.4g,205mmol)和对甲苯磺酸一水合物(3.24g,17.1mmol)分别加入上面体系中。所得混合物加热到70℃，搅拌反应过夜。LCMS监测反应结束，冷却到室温，将反应液倒入水(500mL)中淬灭，乙酸乙酯萃取(800mL×3)。合并有机相，分别用饱和NaHCO3水洗，饱和Na2S2O3水洗，食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得到的粗产品经FCC(SiO2，EA/PE＝0-50％)纯化，得到白色固体2-氯-3-氟-5-碘吡啶-4-胺(42g,收率90％)。LCMS(m/z):272.9(M+H)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.10(s,1H),6.69(s,2H)。19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ-138.90。步骤B：4-氨基-6-氯-5-氟烟酸乙酯
室温条件下，将2-氯-3-氟-5-碘吡啶-4-胺(40g,147mmol)溶解到400mL无水乙醇中。用CO置换体系，反复三次。后将Pd(PPh3)2Cl2(10.3g,14.7mmol)和TEA(95.0g,735mmol)加入反应瓶中，置换CO气体三次。所得混合物在CO气体氛围中，加热到80℃反应过夜。LCMS监测反应结束，冷却到室温，将反应液用硅藻土过滤。滤液浓缩至干，得到得粗品经FCC(SiO2，EA/PE＝0-50％)纯化，得到白色固体4-氨基-6-氯-5-氟烟酸乙酯(30g,收率93％)。LCMS(m/z):219.0(M+H)。
步骤C：4-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-6-氯-5-氟烟酸乙酯
室温搅拌下，将Boc2O(65.9g,302mmol)滴加到4-氨基-6-氯-5-氟烟酸乙酯(30.0g,137mmol)和DMAP(3.4g,27.5mmol)的无水二氯甲烷(600mL)溶液中。滴加完成后加热到45℃反应过夜。向体系中加入咪唑(9.33g,137mmol)，搅拌半小时后，加入饱和氯化铵溶液洗涤(300mL×3)，分液，有机相再用饱和食盐水(300mL×2)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩至干，得得到黄色固体4-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-6-氯-5-氟烟酸乙酯(45.9g,收率80％)。LCMS(m/z):419.1(M+H)。
步骤D：4-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-溴-6-氯-5-氟烟酸乙酯
将4-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-6-氯-5-氟烟酸乙酯(45.0g,107mmol)的无水THF(450mL)溶液用干冰乙腈浴冷却到-40℃。此温度下搅拌滴加TMPMgCl-LiCl的THF溶液(161mL,161mmol,1M)。加毕后，保持此温度继续搅拌4h，再滴加二溴四氯乙烷(42.0g，129mmol)的THF(100mL)溶液。在-40℃下继续搅拌4h。加入500mL饱和氯化铵溶液淬灭，再用EtOAc萃取(500mL×3)。合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得到的粗产品经FCC(SiO2，EA/DCM＝0-50％)纯化，得到白色固体4-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-溴-6-氯-5-氟烟酸乙酯(17.0g，收率32％)。LCMS(m/z):497.0(M+H)。
步骤E：4-氨基-2-溴-6-氯-5-氟烟酸乙酯·HCl
室温条件下，将4-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-溴-6-氯-5-氟烟酸乙酯(28.0g,56.3mmol)溶解到4M盐酸-二氧六环(500mL)中。室温下搅拌1h,LCMS监测反应完成，体系浓缩干，得到的粗产品白色固体4-氨基-2-溴-6-氯-5-氟烟酸乙酯·HCl(19.1g,粗品)。LCMS(m/z):296.9(M+H)。步骤F：4-氨基-2-溴-6-氯-5-氟烟酸
室温条件下，把1N NaOH(45.0mL,45.0mmol)加入到4-氨基-2-溴-6-氯-5-氟烟酸乙酯·HCl(5.00g,15.0mmol)的MeOH/THF(V:V＝1:1,100mL)溶液中。所得混合物室温下搅拌1h，TLC监测反应结束，将反应液浓缩除去有机溶剂，残留物用1M HCl调pH＝5-6，用EA萃取(80mL×3)。合并有机相后用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得到白色固体产物4-氨基-2-溴-6-氯-5-氟烟酸(1.90g,收率47％)。LCMS(m/z):269.0(M+H)。
步骤G：5-溴-7-氯-8-氟-2-巯基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-醇
室温条件下，把4-氨基-2-溴-6-氯-5-氟烟酸(1.90g,7.05mmol)溶解到二氯亚砜(40mL,551mmol)。催化量DMF(2滴)加入反应体系后，升温到80℃搅拌反应4h。反应液直接浓缩干得中间体酰氯。室温下，将所得酰氯用无水丙酮(50mL)搅拌溶解，缓慢加入硫氰酸铵(2.15g,28.2mmol)。所得混合物室温搅拌反应3h，大量固体产生。反应结束后，反应液慢慢倒入搅拌的水(400mL)中，析出固体，搅拌15min后过滤，滤饼烘干得5-溴-7-氯-8-氟-2-巯基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-醇(1.55g,收率71％)。LCMS(m/z):309.8(M+H)。
步骤H：5-溴-7-氯-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-醇
室温条件下，将0.1M NaOH(100mL,10.0mmol)和碘甲烷(1.42g,9.98mmol)依次加入到5-溴-7-氯-8-氟-2-巯基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-醇(1.55g,4.99mmol)的甲醇(50mL)溶液中。所得混合物室温搅拌反应2h。反应结束后，将反应液慢慢倒入搅拌的水(400mL)中。再用1M HCl调pH中性，析出白色固体，搅拌约15min后过滤，滤饼烘干得5-溴-7-氯-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-醇(1.5g,收率93％)。LCMS(m/z):323.8(M+H)。
中间体K
7-氯-8-氟-2-(甲硫基)-5-((三异丙基硅基)乙炔基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-醇
步骤A：7-氯-8-氟-2-(甲硫基)-5-((三异丙基硅基)乙炔基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-醇
室温条件下，将5-溴-7-氯-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-醇(500mg,1.54mmol)，Pd(PPh3)2Cl2(216mg，0.31mmol)和CuI(147mg，0.77mmol)溶解到10mL无水THF中。体系氮气置换三次，加入三异丙基硅基乙炔(562mg,3.08mmol)和TEA(779mg,7.70mmol)，再次氮气置换三次。所得混合物，加热到50℃反应16h。LCMS监测反应结束，冷却到室温，将反应液用硅藻土过滤。滤液浓缩干得到得粗品经FCC(SiO2，EA/PE＝0-50％)纯化，得到白色固体7-氯-8-氟-2-(甲硫基)-5-((三异丙基硅基)乙炔基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-醇(330mg，收率46％)。LCMS(m/z):426.0(M+H)。
中间体A-I
1-(7-溴-2-氯-8-氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
步骤A：1-(7-溴-2-氯-8-氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
将7-溴-2,4-二氯-8-氟喹唑啉(1.40g，4.73mmol)、DIEA(6.6mL，37.8mmol)的DCM(20mL)溶液冷至0℃。搅拌下，将3-甲基哌啶-3-醇·盐酸盐(789mg，5.20mmol)分批加入到上述体系中。所得体系继续搅拌2h，缓慢升至室温，LCMS监测反应完成。加入DCM(20mL)稀释，饱和氯化铵水溶液(30mL)洗涤，饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，减压浓缩，FCC(SiO2,EA/PE＝0-100％)纯化得到淡黄色固体1-(7-溴-2-氯-8-氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(1.42g，收率80％)。LCMS(m/z):374.0,375.9(M+H).
中间体A-II
5-(7-溴-2-氯-8-氟喹唑啉-4-基)-N,N-二甲基-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂-2-甲酰胺
中间体A-II的合成参照中间体A-I合成所述，在步骤A中使用N,N-二甲基-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂-2-甲酰胺(参照文献WO2022132200进行制备)代替3-甲基哌啶-3-醇·盐酸盐。LCMS(m/z):467.0(M+H)
中间体B-I
1-(7-溴-2-氯-6,8-二氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
中间体B-I的合成参照中间体A-I合成所述，在步骤A中使用7-溴-2,4-二氯-6,8-二氟喹唑啉(中间体B)代替7-溴-2,4-二氯-8-氟喹唑啉(中间体A)。LCMS(m/z):392.0(M+H).
根据上述合成方案制备以下中间体
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中间体B-I-AF
(R)-1-(7-溴-2,6,8-三氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
步骤A：(R)-1-(7-溴-2-氯-6,8-二氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
室温条件下，将DIPEA(39.9mL,229mmol)加入到7-溴-2,4-二氯-6,8-二氟喹唑啉(18.0g,57mmol)、(R)-3-甲基哌啶-3-醇·盐酸盐(8.69g,57mmol)和THF(200mL)的混合液中，室温条件下搅拌反应2h。TLC和LCMS监测反应结束，浓缩除去THF，加入乙腈(15mL)，将乙腈和化合物的混合液慢慢倒入搅拌的水(600mL)中，产生絮状不溶物，过滤并将滤饼烘干后得到黄色固体(R)-1-(7-溴-2-氯-6,8-二氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(21.7g,收率96％)。LCMS(m/z):393.9(M+H)。
步骤B：(R)-1-(7-溴-2,6,8-三氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
室温条件下，依次将(R)-1-(7-溴-2-氯-6,8-二氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(12.0g,30.6mmol)、KF(17.8g,306mmol)、DABCO(137mg,1.22mmol)、MsOH(117mg,1.22mmol)加入到DMSO(60mL)中，并升温至65℃搅拌10h。LCMS监测反应结束后，反应液恢复至室温。然后慢慢倒入搅拌的水(600mL)中，产生絮状不溶物，过滤并将滤饼烘干得到黄色固体(R)-1-(7-溴-2,6,8-三氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(11.3g,收率98％)。LCMS(m/z):378.0(M+H)。
中间体B-III-AF
(S)-4-(7-溴-2,6,8-三氟喹唑啉-4-基)-6-甲基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-醇
步骤A：(S)-4-(7-溴-2-氯-6,8-二氟喹唑啉-4-基)-6-甲基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-醇
室温条件下，将DIPEA(1.55mL,8.92mmol)加入到7-溴-2,4-二氯-6,8-二氟喹唑啉(700mg,2.23mmol)，(S)-6-甲基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-醇·盐酸盐(374mg,2.23mmol)和THF(12mL)的混合液中，所得混合物室温条件下搅拌反应2h。TLC和LCMS监测反应结束，浓缩除去THF，加入乙腈(2mL)，慢慢倒入搅拌的水(50mL)中，絮状不溶物产生，过滤并将滤饼烘干后得到棕黄色固体(S)-4-(7-溴-2-氯-6,8-二氟喹唑啉-4-基)-6-甲基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-醇(720mg,收率79％)。LCMS(m/z):409.9(M+H)。
步骤B：(S)-4-(7-溴-2,6,8-三氟喹唑啉-4-基)-6-甲基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-醇
室温条件下，依次将(S)-4-(7-溴-2-氯-6,8-二氟喹唑啉-4-基)-6-甲基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-醇(700mg,1.71mmol)，KF(995mg,17.1mmol)，MsOH(16mg,171umol),DABCO(19mg,171umol)，加入到DMSO(10mL)中，并升温至65℃搅拌18h。LCMS监测反应结束，反应液恢复至室温。然后慢慢倒入搅拌的水(60mL)中，黄色絮状不溶物产生，过滤并将滤饼烘干得到黄色固体(S)-4-(7-溴-2,6,8-三氟喹唑啉-4-基)-6-甲基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-醇(600mg,收率89％)。LCMS(m/z):392.0(M+H)。
中间体E-I-AF
(R)-1-(7-溴-6-氯-2,8-二氟-4-喹唑啉基)-3-甲基-3-哌啶醇
步骤A：(R)-1-(7-溴-2,6-二氯-8-氟-4-喹唑啉基)-3-甲基-3-哌啶醇
在0℃下，将DIEA(4.5mL,27.24mmol)加入到7-溴-2,4,6-三氯-8-氟喹唑啉(3.0g,3.03mmol)、(R)-3-甲基-3-哌啶醇·盐酸盐(1.38g,9.08mmol)和THF(50mL)的混合溶液中，所得混合物室温搅拌2h。TLC监测反应完成，反应液浓缩后得到油状物，加入乙腈(5mL)溶解。将此溶液倒入H2O(300mL)中，棕黄色固体析出，过滤，H2O(100mL)洗滤饼。烘干滤饼得到棕色固体(R)-1-(7-溴-2,6-二氯-8-氟-4-喹唑啉基)-3-甲基-3-哌啶醇(3.7g，9.04mmol,收率99％)。
步骤B：(R)-1-(7-溴-6-氯-2,8-二氟-4-喹唑啉基)-3-甲基-3-哌啶醇
室温条件下，将(R)-1-(7-溴-2,6-二氯-8-氟-4-喹唑啉基)-3-甲基-3-哌啶醇(3.7g,9.04mmol)加入到DABCO(102mg,904μmol)、KF(5.25g,90.45mmol)、MsOH(87mg,904μmol)和DMSO(50mL)的混合溶液中，所得混合物加热至65℃搅拌16h。LCMS监测反应完成，冷却后将反应液倒入H2O(400mL)中，棕黄色固体析出，过滤，H2O(100mL)洗滤饼。烘干滤饼，得到棕色固体(R)-1-(7-溴-6-氯-2,8-二氟-4-喹唑啉基)-3-甲基-3-哌啶醇(3.0g,收率84％)。LCMS(m/z):393.9(M+H)。
中间体E-III-AF
(S)-4-(7-溴-6-氯-2,8-二氟-4-喹唑啉基)-6-甲基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-醇
步骤A：(S)-6-甲基-1,4-氧杂环己烷-6-醇盐酸盐
室温条件下，将HCl-二噁烷(4M)(10mL,10V)加入到(S)-6-羟基-6-甲基-1,4-氧杂环戊烯-4-羧酸叔丁酯(1.00g,4.32mmol)中并在室温下搅拌1h。LCMS监测反应结束，反应液浓缩后得到白色固体(S)-6-甲基-1,4-氧杂环己烷-6-醇盐酸盐(840mg,粗品)。LCMS(m/z):132.1(M+H)。步骤B：(S)-4-(7-溴-2,6-二氯-8-氟-4-喹唑啉基)-6-甲基-1,4-氧杂环己烷-6-醇
室温条件下，将DIPEA(1.56g,12.1mmol)加入到7-溴-2,4,6-三氯-8-氟喹唑啉(1.00g,3.03mmol)、(S)-6-甲基-1,4-氧杂环己烷-6-醇盐酸盐(655mg,12.1mmol)和THF(20mL)的混合液并在室温条件下搅拌1h。LCMS监测反应结束，将反应液倒入饱和NH4Cl水溶液(50mL)中，EA(30mL×3)萃取。收集有机相，饱和NaCl水溶液(70mL)洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩得到白色固体(S)-4-(7-溴-2,6-二氯-8-氟-4-喹唑啉基)-6-甲基-1,4-氧杂环己烷-6-醇(1.2g,收率93％)。LCMS(m/z):425.9(M+H)。
步骤C:(S)-4-(7-溴-6-氯-2,8-二氟-4-喹唑啉基)-6-甲基-1,4-氧杂环己烷-6-醇
室温条件下，将MsOH(27.0mg,0.282mmol)加入到(S)-4-(7-溴-2,6-二氯-8-氟-4-喹唑啉基)-6-甲基-1,4-氧杂环己烷-6-醇(1.20g,2.82mmol)、KF(1.64g,28.2mmol)、DABCO(31.7mg,0.282mmol)和DMSO(30mL)的混合溶液中，将反应液升温至100℃并搅拌1h。LCMS监测反应结束，将反应液缓慢滴加入水(150mL)中析出固体，过滤，滤饼用EA(100mL)溶解后用无水Na2SO4干燥，过滤，有机液浓缩得到黄色固体(S)-4-(7-溴-6-氯-2,8-二氟-4-喹唑啉基)-6-甲基-1,4-氧杂环己烷-6-醇(1.0g,收率87％)。LCMS(m/z):409.9(M+H)。
中间体G-I-A
(3R)-1-(7-氯-8-氟-2-(甲硫基)-3,4-二氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
步骤A：(3R)-1-(7-氯-8-氟-2-(甲硫基)-3,4-二氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
室温条件下，将DIPEA(2.37g,18.3mmol)加入到7-氯-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-醇(1.50g,6.11mmol)、(R)-3-甲基哌啶-3-醇·盐酸盐(1.06g,7.02mmol)、BOP(5.40g,12.2mmol)和DMF(20mL)的混合液中。将反应体系升温至45℃搅拌18h。TLC监测反应结束，反应液恢复至室温后缓慢倒入搅拌着的H2O(200mL)中，固体析出，过滤，H2O(100mL)洗滤饼，烘干滤饼，得到棕色固体(3R)-1-(7-氯-8-氟-2-(甲硫基)-3,4-二氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(2.0g,收率98％)。
中间体G-II
4-(7-氯-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇
步骤A：4-(7-氯-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-6-甲基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-醇
室温搅拌下，向溶有7-氯-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-醇(0.57g,2.33mmol)的DMF(8.0mL)中依次加入6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇盐酸盐(0.55g,3.2mmol)、DIPEA(1.4mL,8.16mmol)、苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲氨基)磷鎓六氟磷酸盐(3.14g,7.00mmol)。所得混合物加热至45℃搅拌6h，反应结束后，向反应体系中加水(30mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(30.0mL×3)萃取。合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物经过FCC(SiO2，EA/PE～0-50％)纯化，得到淡黄色固体4-(7-氯-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-6-甲基-1,4-氧杂环己烷-6-醇(0.77g,收率92％)，LCMS(m/z)＝359.0(M+H)。
中间体G-II-A
(S)-4-(7-氯-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇
中间体G-II-A的合成参照中间体G-II所述方案进行，在步骤A中使用(S)-6-甲基-1,4-氧杂环庚烷-6-醇·盐酸盐代替6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇·盐酸盐。
中间体I-I-A
(S)-4-(7-氯-8-氟-5-甲氧基-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇
步骤A：(S)-4-(7-氯-8-氟-5-甲氧基-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇
室温条件下，将DIEA(1.4g,11mmol)加入到7-氯-8-氟-5-甲氧基-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-醇(1.0g,3.6mmol)、(S)-6-甲基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-醇·盐酸盐(770mg,4.64mmol)、BOP(2.4g,5.4mmol)和DMF(15mL)的混合溶液中。将反应体系升温至50℃搅拌2h。LCMS监测反应结束，反应液恢复至室温后缓慢倒入搅拌着的H2O(100mL)中，固体析出，过滤并将滤饼烘干后，得到棕黄色固体(S)-4-(7-氯-8-氟-5-甲氧基-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇(900mg,收率64％)。LCMS(m/z):389.0(M+H)。
中间体I-II-A
(R)-1-(7-氯-8-氟-5-甲氧基-2-甲硫基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
中间体I-II-A的合成参照中间体I-I-A所述方案进行，在步骤A中使用(R)-6-甲基哌啶-3-醇·盐酸盐代替(S)-6-甲基-1,4-氧杂环庚烷-6-醇·盐酸盐。
中间体K-I-A
(R)-1-(7-氯-8-氟-2-(甲硫基)-5-((三异丙基硅基)乙炔基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
步骤A：(R)-1-(7-氯-8-氟-2-(甲硫基)-5-((三异丙基硅基)乙炔基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
室温条件下，将7-氯-8-氟-2-(甲硫基)-5-((三异丙基硅基)乙炔基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-醇(200mg,0.47mmol)溶于POCl3(2mL)，加入DIPEA(360mg,2.35mmol)。所得体系加热至100℃反应3h，减压浓缩干。冷至室温，加入5mL无水THF，后加入(R)-3-甲基-3-羟基哌啶·盐酸盐(107mg,0.704mmol)和DIPEA(360mg,2.35mmol)。所得混合物室温搅拌反应2h，LCMS监测反应完。反应液浓缩干，得到的粗产品经FCC(SiO2，EA/PE＝0-50％)纯化，得到白色固体(R)-1-(7-氯-8-氟-2-(甲硫基)-5-((三异丙基硅基)乙炔基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(200mg，收率81％)。LCMS(m/z):523.2(M+H)。
中间体K-II-A
(S)-4-(7-氯-8-氟-2-(甲硫基)-5-((三异丙基硅基)乙炔基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇
中间体K-II-A的合成参照中间体K-I-A所述方案进行，在步骤A中使用(S)-6-甲基-1,4-氧杂环庚烷-6-醇·盐酸盐代替(R)-3-甲基-3-羟基哌啶·盐酸盐。
中间体a
(3-甲氧基-1,2-二甲基吡咯烷-2-基)甲醇
步骤A：1-(叔丁基)2-乙基2-甲基-3-氧吡咯烷-1,2-二甲酸酯
冰浴条件下，将CH3I(5.52g,38.87mmol)滴加到1-(叔丁基)2-乙基3-氧吡咯烷-1,2-二甲酸酯(5.0g,19.43mmol)，K2CO3(8.06g,58.30mmol)和无水ACN(50mL)的混合溶液中。滴加完成后，反应液升温至40℃并搅拌过夜。TLC(PE:EA＝5:1,Rf＝0.6)监测反应结束后，把反应液倒入饱和NH4Cl水溶液(200mL)中，EA(100mL×3)萃取。有机相用饱和NaCl水溶液(50mL)洗涤，收集有机相浓缩后经FCC(SiO2，EA/PE＝0-15％)得到无色油状液体(1-(叔丁基)2-乙基2-甲基-3-氧吡咯烷-1,2-二甲酸酯(3.8g,收率72％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.29–4.08(m,2H),3.95–3.78(m,1H),3.77–3.66(m,1H),2.83–2.71(m,1H),2.70–2.57(m,1H),1.66–1.57(m,3H),1.51–1.41(m,9H),1.30–1.20(m,3H).LCMS(m/z):294.0(M+Na)。
步骤B：1-(叔丁基)2-乙基3-羟基-2-甲基吡咯烷-1,2-二甲酸酯
冰浴搅拌下，向1-(叔丁基)2-乙基2-甲基-3-氧吡咯烷-1,2-二甲酸酯(1.0g，3.69mmol)的MeOH(10mL)溶液中加人NaBH4(150mg，4.06mmol),所得混合物在室温下继续搅拌0.5h。反应结束后向体系中加入过量的氯化铵饱和水溶液，用乙酸乙酯EA(50mL×3)萃取。合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩，所得粗品经FCC(SiO2，EA/PE＝0-20％)纯化，得到无色液体1-(叔丁基)2-乙基3-羟基-2-甲基吡咯烷-1,2-二甲酸酯(926mg，收率92％)。LCMS(m/z):296.0(M+Na)。
步骤C：1-(叔丁基)2-乙基3-甲氧基-2-甲基吡咯烷-1,2-二甲酸酯
室温条件下，向1-(叔丁基)2-乙基3-羟基-2-甲基吡咯烷-1,2-二甲酸酯(580mg，2.12mmol)的THF(3mL)溶液中加人NaH(255mg，60％w/w，6.37mmol),将所得混合物在室温下继续搅拌0.5h。之后向反应体系中加入CH3I(904mg，6.36mmol)，继续反应3h。反应结束后向体系中加入过量的氯化铵饱和水溶液，用乙酸乙酯EA(15mL×3)萃取。合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩，所得粗品经FCC(SiO2，EA/PE＝0-30％)纯化，得到无色液体1-(叔丁基)2-乙基3-甲氧基-2-甲基吡咯烷-1,2-二甲酸酯(200mg,收率34％)。LCMS(m/z):310.0(M+Na)。
步骤D：(3-甲氧基-1,2-二甲基吡咯烷-2-基)甲醇
向配有磁力搅拌子的反应管中加入1-(叔丁基)2-乙基3-甲氧基-2-甲基吡咯烷-1,2-二甲酸酯(200mg，0.70mmol)，再向反应体系中加入LiAlH4(3.5mL，1M THF溶液，3.5mmol)。所得混合物加热至70℃回流搅拌3h，反应结束后用十水合硫酸钠淬灭反应，再用无水硫酸钠干燥反应体系。过滤除去不溶物，滤液减压浓缩，得无色液体(3-甲氧基-1,2-二甲基吡咯烷-2-基)甲醇(110mg，收率99％)，无需纯化直接用于后续反应。LCMS(m/z):160.1(M+H)。
中间体b
化合物3-甲基-4-氧代哌啶-1,3-二羧酸1-(叔丁基)酯3-甲基酯(120g)经SFC(SFC150,Waters)拆分(分离柱：DAICEL IG,250*50mm,10μm；流动相：CO2/MeOH＝90/10；流速：120mL/min),得到首先洗脱出来的异构体1，为化合物b(52.8g,相对保留时间较小)。手性分析方法-b(Waters UPCC,分析柱：Daicel />IG，100*3mm3μm；流动相A：CO2，流动相B：MeOH；流速：1.5mL/min；柱温：35℃；反压：1800psi；梯度：0-8.0minA/B＝90/10)，Rt＝0.682min。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ4.59–4.42(m,1H),4.26–3.98(m,1H),3.73(s,3H),3.42–3.24(m,1H),3.16–3.01(m,1H),2.93–2.63(m,1H),2.58–2.40(m,1H),1.49(s,9H),1.31(s,3H)。LCMS(m/z):216.1(M-56+H)。随后洗脱出来的异构体2，为化合物b-1(52.4g,相对保留时间较大)。手性分析方法-b，Rt＝1.035min。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ4.60–4.41(m,1H),4.24–3.94(m,1H),3.73(s,3H),3.42–3.24(m,1H),3.17–3.00(m,1H),2.93–2.64(m,1H),2.56–2.40(m,1H),1.49(s,9H),1.31(s,3H)。
中间体c
(3S)-(1,3,4-三甲基哌啶-3-基)甲醇
步骤A：(S)-3-甲基-4-亚甲基哌啶-1,3-二羧酸-1-(叔丁基)酯-3-甲基酯
冰浴条件下，将叔丁醇钾的THF溶液(5.25mL,1M,5.25mmol)滴加到甲基三苯基溴化磷(1.89g,5.25mmol)的甲苯(10mL)溶液中，所得体系在冰浴下搅拌0.5h。将(R)-3-甲基-4-氧代哌啶-1,3-二羧酸1-(叔丁基)酯3-甲基酯(1.00g,3.50mmol)的甲苯(5mL)溶液滴加到上述体系中，保持温度反应1h。后缓慢升至110℃后保持温度搅拌反应过夜。TLC监测反应完成，冷却至室温，减压浓缩至干，得到粗产品，通过FCC(SiO2，EA/PE＝0-100％)纯化，得到无色油状产物(S)-3-甲基-4-亚甲基哌啶-1,3-二羧酸-1-(叔丁基)酯-3-甲基酯(750mg,收率75％)。LCMS(m/z):214.1(M-56+H),292.1(M+Na)。
步骤B：(3S)-3,4-二甲基哌啶-1,3-二羧酸-1-(叔丁基)酯-3-甲基酯
室温氮气保护下，将Pd/C(500mg,10％w/w,0.47mmol)加入到(S)-3-甲基-4-亚甲基哌啶-1,3-二羧酸-1-(叔丁基)酯-3-甲基酯(750mg,2.78mmol)的甲醇(20mL)溶液中。用氢气球置换体系，后在氢气氛围中搅拌反应过夜。TLC监测反应结束后，用硅藻土过滤，滤液浓缩得到粗产品，通过FCC(SiO2，EA/PE＝0-50％)纯化，得到无色油状产物(3S)-3,4-二甲基哌啶-1,3-二羧酸-1-(叔丁基)酯-3-甲基酯(600mg,收率79％)。LCMS(m/z):216.1(M-56+H),294.1(M+Na)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ4.08–4.02(m,0.23H),3.98(dd,J＝13.7,1.5Hz,1H),3.91–3.78(m,1.23H),3.72(s,0.69H),3.67(s,3H),3.21–2.76(m,2.46H),2.20–2.06(m,0.23H),1.81–1.29(m,14.9H),1.20(s,3H),1.07(s,0.69H),1.02(d,J＝6.6Hz,3H),0.86(d,J＝6.8Hz,0.69H)。
步骤C：(3S)-(1,3,4-三甲基哌啶-3-基)甲醇
室温下，将LiAlH4-THF(1M,5.26mmol,5.26mL)滴加入(3S)-3,4-二甲基哌啶-1,3-二羧酸-1-(叔丁基)酯-3-甲基酯(500mg,1.75mmol)的THF(5mL)溶液中，所得体系加热到70℃搅拌3h。LCMS监测反应结束后，加入Na2SO4·10H2O淬灭反应直到没有气体产生为止，反应液通过硅藻土过滤，得到的滤液低温(35℃)减压浓缩，得到无色液体(3S)-(1,3,4-三甲基哌啶-3-基)甲醇(250mg,收率91％)。LC-MS(m/z):158.2(M+H)。
中间体d
(3S)-(4-氟-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲醇
步骤A：(S)-4-氟-3-甲基-3,6-二氢吡啶-1,3(2H)-二羧酸-1-(叔丁基)酯-3-甲基酯
冰浴条件下，将BAST(19.57g,16.3mL,88.46mmol)滴入到(R)-3-甲基-4-氧代哌啶-1,3-二羧酸1-(叔丁基)酯3-甲基酯(8.0g,29.49mmol)和DCM(40mL)的混合溶液中，滴加完毕后恢复室温搅拌过夜。TLC监测反应结束后，将反应液缓慢倒入半饱和的NaHCO3(100mL)溶液中，用DCM(100mL×3)萃取。合并有机相浓缩后通过FCC(SiO2,EA/PE＝0-10％)纯化，得到无色油状物(S)-4-氟-3-甲基-3,6-二氢吡啶-1,3(2H)-二羧酸-1-(叔丁基)酯-3-甲基酯(1.0g,收率12％)。LCMS(m/z):218.1(M-56+H)。
步骤B：(S)-(4-氟-1,3-二甲基-1,2,3,6-四氢吡啶-3-基)甲醇
室温条件下，将LiAH4(4.02mL,4.02mmol,1MTHF溶液)加到(S)-4-氟-3-甲基-3,6-二氢吡啶-1,3(2H)-二羧酸-1-(叔丁基)酯-3-甲基酯(500mg,1.83mmol)中并升温至70℃搅拌1h。LCMS监测反应结束后，在冰浴条件下，缓慢将Na2SO4·10H2O加入反应液中淬灭LiAH4，直到反应不再生成气体为止，再加入无水硫酸钠干燥溶液，过滤，收集母液浓缩，得到无色油状液体(S)-(4-氟-1,3-二甲基-1,2,3,6-四氢吡啶-3-基)甲醇(284mg,收率98％)。LCMS(m/z):160.1(M+H)。
步骤C：(3S)-(4-氟-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲醇
室温氮气保护下，将Pd/C(5％w/w,374mg,0.176mmol)加入到(S)-(4-氟-1,3-二甲基-1,2,3,6-四氢吡啶-3-基)甲醇(280mg,1.76mmol)和EA:MeOH＝1:1(20mL)的混合溶液中，所的混合物氢气置换，后在60psi H2压力下室温反应2h。TLC监测反应结束后，反应液经硅藻土过滤，EA(50ml)洗涤，有机相浓缩，得到无色油状液体(3S)-(4-氟-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲醇(220mg,收率78％)。LCMS(m/z):162(M+H)。
中间体e
(S,E)–(4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲醇
步骤A：(S,E)-4-(氟亚甲基)-3-甲基哌啶-1,3-二羧酸-1-叔丁基酯-3-甲基酯及(S,Z)-4-(氟亚甲基)-3-甲基哌啶-1,3-二羧酸-1-叔丁基酯-3-甲基酯
将(氟亚甲基)三苯基膦四氟硼酸盐(10.56g,27.64mmol)溶解到无水THF(50mL)中,氮气置换三次。在干冰乙醇条件下，把反应液的温度降至-70℃，将叔丁醇钾-四氢呋喃(27.64mL,1M,27.64mmol)溶液逐滴地滴加到反应体系中。保持温度继续搅拌1h。后将(R)-3-甲基-4-氧代哌啶-1,3-二羧酸-1-(叔丁基)-3-甲基酯(5.0g,18.43mmol)的无水四氢呋喃(15mL)溶液滴加到反应体系中。滴加完成后，所得混合物缓慢升至室温搅拌过夜。TLC监测反应结束后，将反应液缓慢倒入水(100mL)中，用乙酸乙酯萃取3次。有机相合并后，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩干，得到粗产品。粗产物通过FCC(SiO2，EA/PE＝0-15％)纯化，得到无色油状产物(S,E)-4-(氟亚甲基)-3-甲基哌啶-1,3-二羧酸-1-叔丁基酯-3-甲基酯(1.98g,收率37％)。LCMS(m/z):232.1(M-56+H)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ6.55(d,J＝84.7,1H),4.35(d,J＝13.2Hz,1H),4.10–3.82(m,1H),3.69(s,3H),3.00–2.85(m,1H),2.76(d,J＝13.1Hz,1H),2.71–2.60(m,1H),2.31–2.08(m,1H),1.46(s,9H),1.29(s,3H)；及无色油状产物(S,Z)-4-(氟亚甲基)-3-甲基哌啶-1,3-二羧酸-1-叔丁基酯-3-甲基酯(600mg,收率11％)。LCMS(m/z):232.1(M-56+H)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ6.43(d,J＝83.7,1H),3.86–3.75(m,1H),3.71(s,3H),3.62–3.47(m,1H),3.42–3.29(m,2H),2.24–2.06(m,2H),1.46(s,9H),1.43–1.39(m,3H)。
步骤B：(S,E)-4-(氟亚甲基)-3-甲基哌啶-3-羧酸甲酯·盐酸盐
室温条件下，将4M HCl-二氧六环(10mL)加入到(S,E)-4-(氟亚甲基)-3-甲基哌啶-1,3-二羧酸-1-叔丁基酯-3-甲基酯(600mg,2.09mmol)中，保持室温搅拌1h。浓缩除去酸溶液，得到白色固体(S,E)-4-(氟亚甲基)-3-甲基哌啶-3-羧酸甲酯·盐酸盐(572mg,收率100％)。LCMS(m/z):188.1(M+H)。
步骤C：(S,E)-4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-羧酸甲酯
室温条件下，将(S,E)-4-(氟亚甲基)-3-甲基哌啶-3-羧酸甲酯·盐酸盐(370mg,1.98mmol)溶解至甲醇(5mL)中，滴加三乙胺至反应液pH～10,搅拌10分钟，后滴加冰醋酸至反应液pH～4。将甲醛水溶液(481.15mg,5.93mmol)加入反应液中，在室温下搅拌30min。将氰基硼氢化钠(136.62mg,2.17mmol)加入反应液中，在室温下搅拌2h。LCMS监测反应结束后，减压浓缩除去溶剂，无水四氢呋喃带蒸两遍后，得到白色固体(S,E)-4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-羧酸甲酯(380mg,收率96％)。LCMS(m/z):202.1(M+H)。
步骤D：(S,E)–(4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲醇
在冰浴条件下，将1M的LiAlH4-THF溶液(2.83mL,107.5mg,2.83mmol)滴加到(E)-4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-羧酸甲酯(380mg,1.89mmol)的无水四氢呋喃(5mL)溶液中。所得混合物在室温下搅拌20min。LCMS监测反应结束后，反应液用十水合硫酸钠淬灭，直到没有气泡产生。加入约5g无水硫酸钠除水。反应液用硅藻土过滤，滤饼用无水四氢呋喃洗涤三遍。收集滤液，浓缩至干，得无色油状产物(S,E)–(4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲醇(300mg,收率92％)。LCMS(m/z):174.1(M+H)。
中间体f
((3S,4S)-4-(氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲醇
步骤A：(S,E)-4-(氟亚甲基)-3-甲基哌啶-1,3-二羧酸-1-叔丁基酯-3-甲基酯及(S,Z)-4-(氟亚甲基)-3-甲基哌啶-1,3-二羧酸-1-叔丁基酯-3-甲基酯
步骤A的合成参照中间体e步骤A合成所述进行。
步骤B：(3S,4S)-4-(氟甲基)-3-甲基哌啶-1,3-二羧酸酯-1-(叔丁基)-3-甲基酯
室温氮气保护下，将湿Pd/C(400mg,10％w/w)加入到(S,E)-4-(氟亚甲基)-3-甲基哌啶-1,3-二羧酸-1-叔丁基酯-3-甲基酯及(S,Z)-4-(氟亚甲基)-3-甲基哌啶-1,3-二羧酸-1-叔丁基酯-3-甲基酯混合物(850mg,2.96mmol)的甲醇(10mL)溶液中。用氢气球置换体系，在氢气氛围中搅拌反应过夜。TLC监测反应结束后，用硅藻土过滤，滤液浓缩至干，得到粗产品，通过FCC(SiO2，EA/PE＝0-10％)纯化，得到无色油状产物(3S,4S)-4-(氟甲基)-3-甲基哌啶-1,3-二羧酸酯-1-(叔丁基)-3-甲基酯(600mg,收率70％)。LCMS(m/z):234.1(M-56+H),312.1(M+Na)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ4.76–4.70(m,0.5H),4.64–4.52(m,1H),4.46–4.41(m,0.5H),4.23(d,J＝13.7Hz,1H),4.08–3.99(m,1H),3.67(s,3H),3.06–2.86(m,1H),2.86–2.70(m,1H),1.95–1.81(m,1H),1.80–1.68(m,2H),1.46(s,9H),1.27(s,3H).19F NMR(376MHz,甲醇-d4)δ221.80.步骤C：(3S,4S)-4-(氟甲基)-3-甲基哌啶-3-羧酸甲酯·盐酸盐
室温下，将3M盐酸-二氧六环(10mL,30mmol)滴加到(3S,4S)-4-(氟甲基)-3-甲基哌啶-1,3-二羧酸酯-1-(叔丁基)-3-甲基酯(600mg,2.07mmol)的乙酸乙酯(10mL)溶液中，所得混合物在室温搅拌反应1h。LCMS监测反应完成，减压浓缩，得到白色固体(3S,4S)-4-(氟甲基)-3-甲基哌啶-3-羧酸甲酯·盐酸盐(500mg,粗品)。LCMS(m/z):190.1(M+H)。
步骤D：(3S,4S)-4-(氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-羧酸甲酯
室温下，将(3S,4S)-4-(氟甲基)-3-甲基哌啶-3-羧酸甲酯盐酸盐(500mg,上步粗品)溶于甲醇(10mL)，加入甲醛水溶液(2mL,35～40％w/w,～24mmol)，室温搅拌2h。分批加入氰基硼氢化钠(696mg,11.1mmol)，所得混合物室温搅拌反应2h。LCMS监测反应结束，饱和NH4Cl水溶液加入反应液中，用乙酸乙酯提取产物三次，合并有机相浓缩得到粗产品，通过FCC(SiO2，EA/PE＝0-100％)纯化，得到无色油状产物(3S,4S)-4-(氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-羧酸甲酯(200mg，收率44％)。LCMS(m/z):204.1(M+H)。
步骤E：((3S,4S)-4-(氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲醇
在室温条件下，将LiAlH4-THF(1.7mL,1M,1.7mmol)慢慢滴加到(3S,4S)-4-(氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-羧酸甲酯(200mg,0.869mmol)的无水THF(2mL)溶液中，所得混合物室温搅拌反应0.5小时。TLC监测反应结束，冰浴冷却，加入十水硫酸钠淬灭反应直至无气泡产生。补加适量的乙酸乙酯，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩至干，得到无色油状粗产物((3S,4S)-4-(氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲醇(100mg,收率58％)。LCMS(m/z):176.1(M+H)。
中间体g
(S)-(1,3-二甲基-4-亚甲基哌啶-3-基)甲醇
步骤A：(S)-(1,3-二甲基-4-亚甲基哌啶-3-基)甲醇
室温下,将LiAlH4(0.7mL,2.5M THF溶液，1.75mmol)滴加到(S)-3-甲基-4-亚甲基哌啶-1,3-二羧酸-1-(叔丁基)酯-3-甲基酯(150mg,0.56mmol)和THF(2mL)的混合体系中，滴加完毕后，加热至70℃搅拌3h。TLC监测反应结束后,加入Na2SO4·10H2O淬灭反应，再加入无水硫酸钠干燥，乙酸乙酯稀释，反应液过滤硅藻土除去固体，滤液浓缩后得到无色油状液体(S)-(1,3-二甲基-4-亚甲基哌啶-3-基)甲醇(120mg,收率80％)，直接用于后续反应。
中间体h
((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲醇
步骤A：(S)-4-(二氟亚甲基)-3-甲基哌啶-1,3-二羧酸-1-(叔丁基)-3-甲基酯
将(R)-3-甲基-4-氧哌啶-1,3-二羧酸-1-(叔丁基)-3-甲基酯(10.0g,36.86mmol)和2-((二氟甲基)磺酰基)吡啶(10.68g,55.29mmol)溶解到无水DMF(100mL)中,氮气置换三次。将体系用干冰乙醇浴冷却，滴加1摩尔的叔丁醇钾四氢呋喃溶液(66.34mL,66.34mmol)。所得混合液保持温度搅拌2h，后缓慢升至室温后继续搅拌3h。LCMS监测反应结束后，用饱和氯化铵水溶液(50mL)淬灭反应，加入水(200mL)、DCM/MeOH(100mL,v/v＝10/1)萃取5次。LiCl水溶液(100mL,4％w/w)洗涤3次，饱和食盐水(100mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩干。所得粗品经FCC(SiO2,EA/PE＝0-20％)纯化后，得到淡黄色油状产物(5.2g,收率46％)。LCMS(m/z):250.1(M-56+H)。
步骤B：(3S,4S)-4-(二氟甲基)-3-甲基哌啶-1,3-二羧酸-1-(叔丁基)-3-甲基酯
室温条件下，将(S)-4-(二氟亚甲基)-3-甲基哌啶-1,3-二羧酸-1-(叔丁基)-3-甲基酯(6.20g,20.31mmol)溶解到甲醇(150mL)中，用氮气置换三次。加入钯碳(2.16g,10％w/w)，用氢气置换三次。在15Psi的氢气氛围下30℃搅拌4h。LCMS监测反应结束后，反应液用硅藻土过滤，滤饼用甲醇洗涤三遍。收集滤液，浓缩干,得到无色油状产物(3S,4S)-4-(二氟甲基)-3-甲基哌啶-1,3-二羧酸-1-(叔丁基)-3-甲基酯(5.53g,收率89％)。LCMS(m/z):252.1(M-56+H)。
步骤C：(3S,4S)-4-(二氟甲基)-3-甲基哌啶-3-羧酸甲酯·盐酸盐
室温条件下，将(3S,4S)-4-(二氟甲基)-3-甲基哌啶-1,3-二羧酸-1-(叔丁基)-3-甲基酯(5.53g,17.99mmol)溶解于4M HCl/dioxane(60mL)中，所得混合液室温搅拌1h，浓缩除去酸溶液，得到白色固体(3S,4S)-4-(二氟甲基)-3-甲基哌啶-3-羧酸甲酯·盐酸盐(4.38g,收率100％)。LCMS(m/z):208.1(M+H)。
步骤D：(3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-羧酸甲酯
室温下，将(3S,4S)-4-(二氟甲基)-3-甲基哌啶-3-羧酸甲酯·盐酸盐(3.58g,14.69mmol),溶解至甲醇(40mL)中，加入甲醛水溶液(3.58g,37％w/w，44.07mmol)。所得混合物在室温下搅拌30min。加入氰基硼氢化钠(1.11g,17.63mmol)，所得混合液在室温下搅拌1.5h。LCMS监测反应结束后，将体系浓缩干，加入乙酸乙酯溶解粗产物，硅藻土过滤。所得滤液经FCC(SiO2,MeOH/DCM(含0.3％ DIEA)＝0-4％)纯化后，得到无色油状产物(3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-羧酸甲酯(3.0g,收率92％)。LCMS(m/z):222.1(M+H)。
步骤E：(3S,4S)-(4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲醇
在冰浴条件下，将1M的LiAlH4-THF(17.63mL,17.63mmol)滴加到(3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-羧酸甲酯(3.0g,13.56mmol)的无水THF(30mL)溶液中。所得混合液在0℃搅拌15min。LCMS监测反应结束后，加入十水合的硫酸钠淬灭反应，直到没有气泡产生。加入约8g无水硫酸钠。硅藻土过滤，滤饼用无水四氢呋喃洗涤3次。收集滤液，浓缩干，得到无色固体产物(3S,4S)-(4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲醇(2.6g,收率99％)。LCMS(m/z):194.1(M+H)。
中间体i
(3S)-(4-甲氧基-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲醇
步骤A：(3R)-4-羟基-3-甲基哌啶-1,3-二羧酸1-(叔丁基)酯3-甲基酯
冰浴条件下，将NaBH4(279mg,7.37mmol)分批加入到(R)-3-甲基-4-氧哌啶-1-羧酸叔丁酯-3-羧酸甲酯(2.0g，7.37mmol)和MeOH(50mL)的混合溶液中，冰浴条件下搅拌10min，TLC显示原料消失。然后把反应液倒入NH4Cl(100mL)中，EA(100mL×3)萃取，收集的有机相用饱和NaCl水溶液(30mL)洗涤，有机相浓缩后，得到的粗品经FCC(SiO2，EA/PE＝0％～40％)纯化，得到无色油状液体(3R)-4-羟基-3-甲基哌啶-1,3-二羧酸1-(叔丁基)酯3-甲基酯(1.7g,收率85％)。LCMS(m/z):218.1(M+H-56)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ4.05–3.93(m,1H),3.78–3.70(m,3H),3.69–3.59(m,2H),3.35–3.22(m,1H),3.20–3.10(m,1H),1.97–1.82(m,1H),1.77–1.63(m,1H),1.54–1.40(m,9H),1.29–1.18(m,3H)。
步骤B：(3R)-4-甲氧基-3-甲基哌啶-1,3-二羧酸1-(叔丁基)酯3-甲基酯
冰浴条件下，将NaH(439mg,10.94mmol,60％)加入到(3R)-4-羟基-3-甲基哌啶-1,3-二羧酸1-(叔丁基)酯3-甲基酯(1.0g,3.66mmol)和DMF(10mL)的混合溶液中，并搅拌20分钟。后将CH3I(1.56g,10.94mmol)加入到上述反应液中，在冰浴条件下继续搅拌3h。TLC监测反应结束后，把反应液倒入饱和NH4Cl水溶液(80mL)中，加入EA(50mL×3)萃取，收集的有机相用饱和NaCl水溶液(20mL)洗涤，浓缩后的粗品经FCC(SiO2，EA/PE＝0～40％)纯化，得到白色固体(3R)-4-甲氧基-3-甲基哌啶-1,3-二羧酸1-(叔丁基)酯3-甲基酯(1.0g,收率95％)。LCMS(m/z):232.1(M+H-56)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d3)δ3.98–3.78(m,1H),3.75–3.61(m,4H),3.56–3.47(m,1H),3.46–3.36(m,1H),3.34(s,1H),3.30(s,2H),3.19–2.86(m,1H),1.89–1.56(m,2H),1.45(s,9H),1.16(s,3H)。
步骤C：(3S)-(4-甲氧基-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲醇
室温条件下，将LiAH4(2.04mL,2.04mmol,1M in THF)加到(3R)-4-甲氧基-3-甲基哌啶-1,3-二羧酸1-(叔丁基)酯3-甲基酯(200mg,0.696mmol)中并升温至70℃搅拌2h。LCMS监测反应结束后，在冰浴条件下，缓慢将Na2SO4·10H2O加入反应液中淬灭LiAH4，直到反应不再生成气体为止，加入少量EA稀释，再加入无水硫酸钠干燥，过滤，收集母液浓缩，得到无色液体(3S)-(4-甲氧基-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲醇(120mg,收率99％)。LCMS(m/z):174.1(M+H)。1HNMR(400MHz,Chloroform-d3)δ3.95–3.53(m,4H),3.30(s,2H),3.27(s,1H),3.13–2.55(m,2H),2.16(s,1H),2.13(s,2H),2.04–1.81(m,3H),0.89(s,1H),0.83(s,2H)。
中间体j
(S)-(4,6-二甲基-6-氮杂螺[2.5]辛-4-基)甲醇
步骤A：(4S)-1,1-二氯-4-甲基-6-氮杂螺[2.5]辛烷-4,6-二羧酸-6-叔丁基-4-甲基酯
室温下，将TEBAC(25.4mg,0.11mmol)加入到(S)-3-甲基-4-亚甲基哌啶-1,3-二羧酸-1-(叔丁基)酯-3-甲基酯(250mg,0.93mmol)，氢氧化钠(7.5mL,50％wt)和CHCl3(25mL)的混合溶液中，加完后加热到80℃搅拌过夜。LCMS监测反应结束后，加入水(50mL)、DCM(50mL×3)萃取。有机相用饱和食盐水洗涤,收集有机相浓缩并进一步FCC(SiO2，EA/PE＝0-25％)纯化，得到无色液体(4S)-1,1-二氯-4-甲基-6-氮杂螺[2.5]辛烷-4,6-二羧酸-6-叔丁基-4-甲基酯(320mg,收率98％)。LC-MS(m/z):296.0(M-56)。
步骤B：(S)-(4,6-二甲基-6-氮杂螺[2.5]辛-4-基)甲醇
室温下，将LiAlH4(1M,2.2mmol,2.2mL)滴入(4S)-1,1-二氯-4-甲基-6-氮杂螺[2.5]辛烷-4,6-二羧酸-6-叔丁基-4-甲基酯(130mg,0.37mmol)和THF(2mL)的混合溶液中，滴加完成后将体系加热到70℃搅拌过夜。LCMS监测反应结束后，加入Na2SO4·10H2O淬灭反应直到没有气体产生为止，反应液通过硅藻土过滤，得到的滤液低温(35℃)浓缩，得到无色液体(S)-(4,6-二甲基-6-氮杂螺[2.5]辛-4-基)甲醇(40mg,收率62％)。LC-MS(m/z):170.1(M+H)。
参照上述合成方案或者适当变体制备了以下中间体：
中间体e-d3
(S,E)-(4-(氟亚甲基)-3-甲基-1-(甲基-d3)哌啶-3-基)甲醇
步骤A：(S,E)-4-(氟亚甲基)-3-甲基-1-(甲基-d3)哌啶-3-甲酸甲酯
室温下，将碳酸钾(5.55g，40.2mmol)加入到(S,E)-4-(氟亚甲基)-3-甲基哌啶-3-羧酸甲酯盐酸盐(3.00g,13.4mmol)、氘代碘甲烷(2.33g,16.1mmol)和ACN(100mL)的混合溶液中，加完后加热至90℃搅拌过夜。LCMS监测反应结束后，过滤,用EA(50mL)淋洗滤饼。收集滤液浓缩并进一步FCC(SiO2，EA/PE＝0-20％)纯化，得到无色液体(S,E)-4-(氟亚甲基)-3-甲基-1-(甲基-d3)哌啶-3-甲酸甲酯(1.9g,收率69％)。LC-MS(m/z):205.1(M+H)。
步骤B：(S,E)-(4-(氟亚甲基)-3-甲基-1-(甲基-d3)哌啶-3-基)甲醇
冰浴下，将LiAlH4(1M-THF,9.3mmol,9.3mL)滴入(S,E)-4-(氟亚甲基)-3-甲基-1-(甲基-d3)哌啶-3-甲酸甲酯(1.9g,9.3mmol)和THF(50mL)的混合溶液中，加完后在0℃冰浴搅拌0.5h。LCMS监测反应结束后，用Na2SO4·10H2O淬灭反应直到没有气体产生为止，反应液通过硅藻土过滤，得到的滤液低温(35℃)浓缩，得到无色液体4-氟亚甲基-3-甲基-1-甲基-D3-哌啶-3-甲醇(1.3g,79％收率)。LC-MS(m/z):177.1(M+H)。
中间体e-d5
(S,E)-(4-(氟亚甲基)-3-甲基-1-(甲基-d3)哌啶-3-基)亚甲基-d2-醇
步骤A：(S,E)-(4-(氟亚甲基)-3-甲基-1-(甲基-d3)哌啶-3-基)亚甲基-d2-醇
在冰浴条件下，将LiAlD4粉末(271.28mg,6.46mmol)加入到(S,E)-4-(氟亚甲基)-3-甲基-1-(甲基-d3)哌啶-3-甲酸甲酯(1.10g,5.39mmol)的无水四氢呋喃(15mL)溶液中。所得混合物在室温下搅拌15min。LCMS监测反应结束后，反应液用十水合硫酸钠淬灭，直到没有气泡产生。再向反应液中加入约5克的无水硫酸钠除水。反应液用硅藻土过滤，滤饼用无水四氢呋喃洗涤三遍。收集滤液，浓缩至干，得到无色油状产物(S,E)-(4-(氟亚甲基)-3-甲基-1-(甲基-d3)哌啶-3-基)亚甲基-d2-醇(951mg,收率99％)。该产品没有经过纯化直接用于下一步反应。LCMS(m/z):179.1(M+H)。
参照上述方法合成下列中间体h-d3及h-d5。
中间体h-d3
((3S,4S)-4-(二氟甲基)-3-甲基-1-(甲基-d3)哌啶-3-基)甲醇
中间体h-d5
((3S,4S)-4-(二氟甲基)-3-甲基-1-(甲基-d3)哌啶-3-基)甲-d2-醇
实施例1
1-(7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯里嗪-7a(5H)-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
步骤A：1-(7-溴-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯里嗪-7a(5H)-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
将((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯里嗪-7a(5H)-基)甲醇(191mg，1.20mmol)和氢化钠(64mg,60％w/w,1.60mmol)的THF(10mL)溶液在0℃下搅拌15min，然后一次性加入1-(7-溴-2-氯-8-氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(300mg，0.80mmol)。所得体系继续搅拌1.5h，缓慢升至室温。LCMS监测反应完成，体系中加入饱和氯化铵水溶液(20mL)，乙酸乙酯萃取(15mL×2)。合并有机相，饱和食盐水洗涤(20mL)，无水硫酸钠干燥。过滤，减压浓缩，粗品经FCC(SiO2，MeOH/DCM＝0-20％)纯化，得到黄色固体1-(7-溴-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯里嗪-7a(5H)-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(283mg，收率71％)。LCMS(m/z):497.0,499.1(M+H)。
步骤B：1-(8-氟-7-(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯里嗪-7a(5H)-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
氮气保护下，将1-(7-溴-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯里嗪-7a(5H)-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(200mg，0.40mmol)、(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)硼酸(349mg，0.64mmol)、Pd(dtbpf)Cl2(26mg，0.04mmol)、K3PO4(256mg，1.21mmol)的1,4-二氧六环/水(V/V＝4:1,6mL)溶液加热至100℃，搅拌反应1.5h。LCMS监测反应完成，体系冷至室温，经硅藻土过滤，滤液减压浓缩。所得粗品经FCC(SiO2，EA/PE＝0-100％)纯化，得到棕色固体1-(8-氟-7-(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯里嗪-7a(5H)-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(243mg，收率66％)。LCMS(m/z):915.4(M+H)。
步骤C：1-(7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯里嗪-7a(5H)-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
将1-(8-氟-7-(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯里嗪-7a(5H)-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(240mg，0.26mmol)和氟化铯(398mg，2.6mmol)的DMF(2mL)溶液，加热至50℃，搅拌反应1.5h。LCMS监测反应完成，过滤除去氟化铯固体，滤液经Pre-HPLC(C18E,ACN/(0.1％NH4HCO3/H2O)＝45-95％)纯化，得到白色固体1-(7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯里嗪-7a(5H)-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(97mg，收率61％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.91–7.72(m,2H),7.44–7.34(m,1H),7.30–7.23(m,1H),7.21–7.15(m,1H),7.10–7.02(m,1H),5.28(d,J＝54.1Hz,1H),4.14–3.93(m,3H),3.91–3.71(m,2H),3.16–3.06(m,2H),3.04–2.98(m,1H),2.88–2.78(m,1H),2.18–1.95(m,4H),1.87–1.57(m,6H),1.15(d,J＝6.2Hz,3H),1.02–0.96(m,3H).19FNMR(376MHz,DMSO-d6)δ-111.75,-129.31,-172.02.LCMS(m/z):603.1(M+H)。
实施例2
1-(7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-2-((((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯里嗪-7a(5H)-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
步骤A：1-(7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-2-((((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯里嗪-7a(5H)-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
向化合物1-(7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯里嗪-7a(5H)-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(17mg,0.028mmol)中加入甲醇(1mL)。在N2条件下，将Pd/C(6.0mg,0.003mmol)加入到反应体系中，用H2(15psi)将反应液置换三次，保持H2氛围室温度搅拌3小时。LCMS监测反应完全。反应液通过硅藻土过滤，滤液再经过滤头过滤，浓缩，冻干后得到白色固体1-(7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-2-((((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯里嗪-7a(5H)-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(7.0mg，收率41％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.91(dd,J＝8.5,6.6Hz,1H),7.73(dd,J＝9.1,6.0Hz,1H),7.38–7.24(m,3H),6.96–6.89(m,1H),5.27(d,J＝54.5Hz,1H),4.80–4.53(m,1H),4.13–4.07(m,1H),4.05–3.95(m,2H),3.90–3.78(m,1H),3.52(d,J＝13.0Hz,1H),3.12–3.05(m,2H),3.03–2.99(m,1H),2.88–2.76(m,1H),2.41–2.29(m,2H),2.15–1.98(m,4H),1.85–1.61(m,6H),1.15(d,J＝14.4Hz,3H),1.05–0.92(m,1H),0.76–0.67(m,3H).19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ-128.38,-172.12.LCMS(m/z):607.3(M+H)。
实施例3
1-(2-((R)-1,2-二甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇·甲酸盐
步骤A：1-(7-溴-2-(((R)-1,2-二甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-8-氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
在冰浴条件下，将(R)-(1,2-二甲基吡咯烷-2-基)甲醇(100mg,0.8mmol)溶解到无水四氢呋喃(5mL)中，缓慢加入钠氢(40mg,60％w/w,1.0mmol)到反应体系中，保持温度搅拌反应半小时。将1-(7-溴-2-氯-8-氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(200mg,0.53mmol)加入到反应体系中，所得混合物在室温条件下继续搅拌反应2小时。LCMS监测反应结束后，将体系倒入冰水(50mL)中淬灭反应，再用乙酸乙酯萃取3次。合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩干，所得的粗产品经过FCC(SiO2，MeOH/DCM＝10-30％)纯化，得黄色油状产物1-(7-溴-2-(((R)-1,2-二甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-8-氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(170mg,收率68％)。LCMS(m/z):469.0(M+H)。
步骤B：1-(2-(((R)-1,2-二甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-8-氟-7-(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-(三异丙基硅氧烷基)萘-1-基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
在N2保护下，将化合物1-(7-溴-2-(((R)-1,2-二甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-8-氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(140mg,0.28mmol)和(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)硼酸(238mg,0.42mmol)溶于1,4-二氧六环/水(V/V＝4:1,6mL)中。然后在N2条件下加入Pd(dtbpf)Cl2(34mg,0.028mmol)和磷酸钾(126mg,0.56mmol)。所得混合物在110℃下搅拌反应2小时。LCMS监测反应完成，将体系减压浓缩干，所得粗产品通过FCC(MeOH/DCM＝0-10％)纯化，得到黄色固体1-(2-(((R)-1,2-二甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-8-氟-7-(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-(三异丙基硅氧烷基)萘-1-基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(150mg,收率56％)。LCMS(m/z):885.5(M+H)。
步骤C：1-(2-((R)-1,2-二甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇·甲酸盐
室温搅拌下，将1-(2-(((R)-1,2-二甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-8-氟-7-(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-(三异丙基硅氧烷基)萘-1-基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(130mg,0.15mmol)溶解到无水DMF(2mL)中，加入氟化铯(223mg,1.5mmol)。升温至50℃搅拌反应2小时，LCMS监测反应完成。过滤除去不溶物，滤液经过pre-HPLC(C18E,ACN/(0.1％FA/H2O)＝45-95％)纯化，得到白色固体1-(2-((R)-1,2-二甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇·甲酸盐(41mg,收率48％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.19(s,1H),7.96(dd,J＝9.2,5.9Hz,1H),7.83(dd,J＝32.3,8.6Hz,1H),7.51–7.41(m,1H),7.36(d,J＝2.6Hz,1H),7.26–7.16(m,1H),7.09(dd,J＝11.7,2.6Hz,1H),4.27–4.15(m,2H),4.13–3.96(m,1H),3.93–3.75(m,3H),3.54–3.26(m,2H),2.97–2.88(m,1H),2.71–2.61(m,1H),2.33(s,3H),2.15–1.90(m,2H),1.76–1.58(m,6H),1.16(d,J＝7.2Hz,3H),1.07(d,J＝1.5Hz,3H).19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ-110.52,-128.59～-129.23.LCMS(m/z):573.2(M+H)。
实施例4
1-(7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-2-(3-甲氧基-1,2-二甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇·甲酸盐
步骤A：1-(7-溴-8-氟-2-((3-甲氧基-1,2-二甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
将(3-甲氧基-1,2-二甲基吡咯烷-2-基)甲醇(110mg，0.7mmol)溶入THF(1mL)中，再向反应体系中加入NaH(46.3mg，1.2mmol)。室温条件下搅拌30分钟，向反应体系中加入1-(7-溴-2-氯-8-氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(173mg，0.46mmol)，室温继续搅拌3h。LCMS监测反应结束后，用饱和氯化铵水溶液淬灭反应，DCM(15mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥有机相，过滤、浓缩。所得粗品经FCC纯化(SiO2，MeOH/DCM＝0-30％)，得到淡黄色固体1-(7-溴-8-氟-2-((3-甲氧基-1,2-二甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(60mg，收率26％)。LCMS(m/z):497.0(M+H)。
步骤B：1-(8-氟-7-(7-氟-8-(三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-(三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)-2-(3-甲氧基-1,2-二甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
氮气保护下，向1-(7-溴-8-氟-2-((3-甲氧基-1,2-二甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(60mg，0.12mmol)的1,4-二氧六环/H2O(V/V＝4:1，1.0mL)溶液中依次加入(7-氟-8-(三异丙基硅基)乙炔基)-3-(三异甲基硅基)氧基)萘-1-基)硼酸(131mg，0.24mmol)，PdCl2(dtbpf)(7.8mg,0.012mmol),K3PO4(76.8mg,0.36mmol)之后110℃条件下反应3h。减压浓缩后粗品经FCC纯化(SiO2，MeOH/DCM＝0-30％)，得到淡黄色固体1-(8-氟-7-(7-氟-8-(三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-(三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)-2-(3-甲氧基-1,2-二甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(80mg，收率73％)。LCMS(m/z):916.4(M+H)。
步骤C：1-(7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-2-(3-甲氧基-1,2-二甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇·甲酸盐
向1-(8-氟-7-(7-氟-8-(三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-(三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)-2-(3-甲氧基-1,2-二甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(80.0mg,0.087mmol)的DMF(1mL)溶液中加入CsF(134mg,0.88mmol)。所得混合物在50℃下加热搅拌2h,冷至室温，过滤除去不溶物，滤液用Pre-HPLC(C18E,ACN/(0.1％FA/H2O)＝45-95％)纯化，得淡黄色固体1-(7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-2-(3-甲氧基-1,2-二甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇·甲酸盐(30mg,收率57％)LCMS(m/z):603.0(M+H)。
参照上述化合物的合成方法，还制备并表征了以下实施例：
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实施例32-A-1和32-A-2
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(3R)-1-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-7-((Sa)-8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇和(3R)-1-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-7-((Ra)-8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
步骤A：(R)-3-甲基-1-(2,6,8-三氟-7-(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌啶-3-醇
室温条件下，依次将(R)-1-(7-溴-2,6,8-三氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(12.0g,31.9mmol)、(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)硼酸(22.5g,41.5mmol)、Pd(OAc)2(716mg,3.19mmol)、BIDIME(2.11g,6.38mmol)、K3PO4(27.1g,128mmol)加入到无水甲苯(150mL)中，N2置换三次后，升温至110℃搅拌过夜。LCMS和TLC监测反应结束，将反应液恢复至室温，硅藻土过滤除去钯催化剂，收集母液，加入水(100mL)，EA(150mL×3)萃取，收集的有机相用饱和NaCl(50mL)洗涤，浓缩有机液得到的粗品经FCC(SiO2，EA/PE＝0-20％)纯化，得到黄色固体(3R)-3-甲基-1-(2,6,8-三氟-7-(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌啶-3-醇(16.0g,收率64％)。LCMS(m/z):794.3(M+H)。
步骤B：(R)-3-甲基-1-(2,6,8-三氟-7-((Sa)-7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌啶-3-醇和(R)-3-甲基-1-(2,6,8-三氟-7-((Ra)-7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌啶-3-醇
上述化合物(R)-3-甲基-1-(2,6,8-三氟-7-(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌啶-3-醇(16.0g)经SFC拆分(Waters SFC 150，分离柱IC 250*50mm 10μm；流动相：CO2/MeOH(+0.1％7.0mol/l NH3/MeOH)＝75/25；流速：140mL/min)，得到首先洗脱出来的异构体1为中间体32-A-P1，(R)-3-甲基-1-(2,6,8-三氟-7-((Sa)-7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌啶-3-醇(7.0g，相对保留时间较小)。手性分析方法SFC-32A，Rt＝2.539。随后洗脱出来的异构体2为中间体32-A-P2，(R)-3-甲基-1-(2,6,8-三氟-7-((Ra)-7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌啶-3-醇(7.0g,相对保留时间较大)。手性分析方法SFC-32A，Rt＝3.978。
手性分析方法SFC-32A：Waters UPCC(CA-352)，分析柱：IC，100*3mm3μm；流动相A：CO2，流动相B：MeOH(+0.1％ DEA)；流速：1.5mL/min；柱温：35℃；反压：1800psi；梯度：0-8.0min A/B＝80/20。
步骤C：(R)-1-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-6,8-二氟-7-((Sa)-7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
室温条件下，将NaH(30mg,60％,756umol)加入到(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲醇(58mg,302umol)和THF(10mL)的混合溶液中并搅拌30min，再将((R)-3-甲基-1-(2,6,8-三氟-7-((Sa)-7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌啶-3-醇(32-A-P1,200mg,252umol)一次加入到上述反应液中并搅拌2h，LCMS监测反应结束，将反应液倒入半饱和的NH4Cl溶液(30mL)中，EA(30mL×3)萃取，收集有机相，饱和NaCl溶液洗涤，无水Na2SO4干燥，浓缩有机相经FCC(SiO2，EA/PE＝0-80％)纯化，得到黄色固体(R)-1-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-6,8-二氟-7-((Sa)-7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(150mg,收率62％)。LCMS(m/z):484.2(M/2+H)。
步骤D：(R)-1-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-7-((Sa)-8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
室温条件下，将CsF(236mg,1.55mmol)加入到((R)-1-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-6,8-二氟-7-((Sa)-7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(150mg,155umol)和DMF(3mL)的混合溶液中，升温至50℃反应1h，LCMS和TLC监测反应结束，经pre-HPLC(C18,CAN/(10mmol NH4HCO3/H2O)＝55-75％)纯化，得到白色固体(R)-1-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-7-((Sa)-8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(60mg,收率59％)。LCMS(m/z):655.3(M+H).1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.97–7.78(m,1H),7.65(d,J＝9.8Hz,1H),7.40–7.23(m,2H),7.17–7.05(m,1H),6.39–5.93(m,1H),4.62–4.42(m,3H),4.32–4.18(m,1H),4.13–3.92(m,1H),3.57–3.46(m,1H),3.43–3.33(m,1H),3.26(s,1H),3.17–3.06(m,1H),3.02–2.89(m,1H),2.24(s,3H),2.19–2.09(m,1H),2.07–1.92(m,1H),1.87–1.69(m,6H),1.27(s,3H),1.21(s,3H).19F NMR(376MHz,甲醇-d4)δ-111.60,-118.56,-119.53,-121.59,-125.79。
步骤E：(3R)-1-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-6,8-二氟-7-((Ra)-7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
室温条件下，将NaH(30mg,60％,756umol)加入到(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲醇(58mg,302umol)和THF(10mL)的混合溶液中并搅拌30min，再将(3R)-3-甲基-1-(2,6,8-三氟-7-((Ra)-7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌啶-3-醇(32-A-P2，200mg，252umol)一次加入到上述反应液中并搅拌2h，LCMS监测反应结束后，将反应液倒入半饱和的NH4Cl溶液(30mL)中，EA(30mL×3)萃取，收集有机相，饱和NaCl溶液洗涤，无水Na2SO4干燥，浓缩有机相经FCC(SiO2，EA/PE＝0-80％)纯化，得到黄色固体(3R)-1-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-6,8-二氟-7-((Ra)-7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(150mg,收率62％)。LCMS(m/z):484.2(M/2+H)。
步骤F：(3R)-1-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-7-((Ra)-8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
室温条件下，将CsF(236mg,1.55mmol)加入到(3R)-1-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-6,8-二氟-7-((Ra)-7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(150mg,155umol)和DMF(3mL)的混合溶液中，升温至50℃反应1h，LCMS和TLC监测反应结束，经pre-HPLC(C18,CAN/(10mmol NH4HCO3/H2O)＝55-75％)纯化，得到白色固体(3R)-1-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-7-((Ra)-8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(60mg,59％)。LCMS(m/z):655.3(M+H).1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.91–7.78(m,1H),7.62(d,J＝9.8Hz,1H),7.36–7.25(m,2H),7.18–7.09(m,1H),6.45–6.00(m,1H),4.62–4.48(m,3H),4.36–4.23(m,1H),4.14–4.04(m,1H),3.53–3.45(m,1H),3.41–3.34(m,1H),3.24(s,1H),3.14–3.06(m,1H),3.02–2.90(m,1H),2.23(s,3H),2.20–2.10(m,1H),2.05–1.92(m,1H),1.87–1.66(m,6H),1.25(s,3H),1.21(s,3H).19F NMR(376MHz,甲醇-d4)δ-111.63,-118.54,-119.85,-121.49,-126.12。
实施例32-1
(R)-1-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-7-((Sa)-8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
/>
室温下，将(R)-1-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-7-((Sa)-8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(45mg,69umol)溶于甲醇(20mL)，加入Pd/C(15mg,10wt％),H2气球置换两次并在室温搅拌4h，LCMS监测反应结束，反应液过滤头得到澄清的有机相，浓缩完全后，加入乙腈(2mL),再加入去离子水(20mL)，冻干得到白色固体(R)-1-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-7-((S)-8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(34mg,收率75％)。LCMS(m/z):659.3(M+H)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.75(d,J＝9.8Hz,1H),7.70–7.60(m,1H),7.27(d,J＝2.5Hz,1H),7.26–7.19(m,1H),7.01–6.94(m,1H),6.38–5.97(m,1H),4.62–4.46(m,2H),4.33–4.21(m,1H),4.12–4.01(m,1H),3.58–3.34(m,2H),3.14–3.03(m,1H),2.98–2.89(m,1H),2.63–2.34(m,2H),2.22(s,3H),2.19–2.13(m,1H),2.01–1.93(m,1H),1.87–1.69(m,7H),1.25(s,3H),1.21(s,3H),0.79(t,J＝7.4Hz,3H).19F NMR(376MHz,甲醇-d4)δ-118.19,-118.87,-118.95,-121.17,-121.30,-121.92,-124.72。
实施例32-2
(R)-1-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-7-((Ra)-8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
室温下，将(3R)-1-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-7-((Ra)-8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(45mg,69umol)溶于甲醇(20mL)，加入Pd/C(15mg,10％,14umol)，H2气球置换两次并在室温搅拌4h，LCMS监测反应结束，反应液过滤头得到澄清的有机相，浓缩完全后，加入乙腈(2mL),再加入去离子水(20mL)，冻干得到白色固体(3R)-1-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-7-((Ra)-8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(39mg,收率86％)。LCMS(m/z):659.3(M+H)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.79(dd,J＝9.9,1.8Hz,1H),7.70–7.59(m,1H),7.27(d,J＝2.7Hz,1H),7.26–7.19(m,1H),6.97(d,J＝2.6Hz,1H),6.40–6.02(m,1H),4.63–4.46(m,2H),4.29–4.17(m,1H),4.13–3.99(m,1H),3.54–3.36(m,2H),3.14–3.03(m,1H),3.00–2.88(m,1H),2.64–2.34(m,2H),2.22(s,3H),2.18–1.91(m,2H),1.90–1.68(m,7H),1.28(s,3H),1.21(s,3H),0.81(t,3H).19F NMR(376MHz,甲醇-d4)δ-118.09,-118.75,-118.85,-121.16,-121.27,-121.92,-124.72。
/>
/>
/>
实施例49
(R)-1-(7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-2-(((3S,4S)-4-(氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
步骤A：(R)-1-(2,7-二氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
室温下，将DIPEA(717mg,5.55mmol)加入到2,4,7-三氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶(350mg,1.39mmol)和(R)-3-甲基哌啶-3-醇盐酸盐(210mg,1.39mmol)的THF(10mL)溶液中，并在室温搅拌1h。LCMS监测反应结束后，低温(35℃)浓缩除去THF。后加入EA(50mL)和水(20mL)，分液，水相用EA(50mL×3)萃取。合并有机相，饱和NaCl溶液洗涤，无水Na2SO4干燥，浓缩，得黄色固体(R)-1-(2,7-二氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(450mg,收率98％)。LCMS(m/z):331.0(M+H)。
步骤B：(R)-1-(7-氯-8-氟-2-(((3S,4S)-4-(氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
冰浴条件下，将NaH(130mg,60％,3.26mmol)加入到(3S,4S)-4-(氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲醇(200mg,1.14mmol)的THF(10mL)溶液中并搅拌30min。保持冰浴，将(R)-1-(2,7-二氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(360mg,1.09mmol)一次加入到上述反应液中并搅拌5h。LCMS监测反应结束后，将反应液倒入饱和NH4Cl溶液(50mL)中，EA(50mL×3)萃取。合并有机相，饱和NaCl溶液洗涤、无水Na2SO4干燥、过滤、浓缩，所得粗品经FCC(SiO2，(EtOH:EA＝1:3)/PE＝0-20％)纯化，得黄色固体(R)-1-(7-氯-8-氟-2-(((3S,4S)-4-(氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(180mg,收率35％)。LCMS(m/z):470.1(M+H)。
步骤C：(R)-1-(8-氟-7-(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)-2-(((3S,4S)-4-(氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
氮气保护下，将(R)-1-(7-氯-8-氟-2-(((3S,4S)-4-(氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(80mg,0.17mmol)、(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)硼酸(185mg,0.34mmol)、Pd(dtbpf)Cl2(11mg,0.017mmol)和K3PO4(108mg,0.51mmol)的1,4-二氧六环/H2O(5.5mL,V/V＝4:1)溶液升温至100℃搅拌2h。TLC监测反应结束后，将反应液倒入水中(50mL)，EA(50mL×3)萃取，合并有机相用饱和NaCl(20mL)洗涤。有机相减压浓缩，所得粗品经FCC(SiO2，(EtOH:EA＝1:3)/PE＝0-20％)纯化，得到黄色固体(R)-1-(8-氟-7-(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)-2-(((3S,4S)-4-(氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(60mg,收率38％)。
步骤D：(R)-1-(7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-2-(((3S,4S)-4-(氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
室温条件下，将CsF(98mg,0.64mmol)加入到(R)-1-(8-氟-7-(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)-2-(((3S,4S)-4-(氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(60mg,0.064mmol)的DMF(3mL)溶液中。所得混合物升温至50℃反应1h，LCMS和TLC监测反应结束后，反应液经FCC(SiO2，(EtOH:EA＝1:3)/PE＝0-60％)纯化，得到淡黄色固体(R)-1-(7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-2-(((3S,4S)-4-(氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(35mg,收率88％)。LCMS(m/z):620.3(M+H)。
实施例50
(R)-1-(7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-2-(((3S,4S)-4-(氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
步骤A：(R)-1-(7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-2-(((3S,4S)-4-(氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-4-醇
室温氮气保护下，将Pd/C(5mg,10％)加入到(R)-1-(7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-2-(((3S,4S)-4-(氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(30mg,0.048mmol)的甲醇(20mL)溶液中。体系用H2气球置换三次，并在H2气球条件下室温搅拌过夜。LCMS监测反应结束，反应液过滤除去Pd/C后经Pre.HPLC，制备得到白色固体(R)-1-(7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-2-(((3S,4S)-4-(氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-4-醇(10mg，收率33％)。LCMS(m/z):624.3(M+H)。1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.55(dd,J＝9.0,5.8Hz,1H),7.19–7.09(m,2H),6.96(dd,J＝9.0,2.6Hz,1H),4.69–4.31(m,4H),4.14–3.78(m,4H),3.70–3.37(m,3H),3.10–2.82(m,2H),2.56–2.34(m,1H),2.32–2.10(m,4H),2.06–1.89(m,2H),1.80–1.47(m,7H),1.30–1.21(m,1H),1.14–1.01(m,6H),0.84–0.69(m,3H).1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δ-76.94,-121.59,-149.95,-150.32。
实施例51
(R)-1-(7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-2-(((3S,4S)-4-(氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-5-甲氧基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
步骤A：(3R)-1-(7-氯-8-氟-5-甲氧基-2-(甲硫基)-3,4-二氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
室温条件下，将DIPEA(2.11g,16.32mmol)加入到(R)-3-甲基哌啶-3-醇盐酸盐(949mg,6.26mmol)、7-氯-8-氟-5-甲氧基-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4(3H)-酮(1.5g,5.44mmol)、BOP(4.81g,10.88mmol)和DMF(20mL)的混合液中。所得反应体系升温至45℃搅拌5h。LCMS监测反应结束后，反应液恢复至室温，缓慢倒入搅拌着的H2O(300mL)中。过滤，滤饼用水(100mL)洗，收集烘干，得到棕色固体(3R)-1-(7-氯-8-氟-5-甲氧基-2-(甲硫基)-3,4-二氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(2.0g,收率99％)。LCMS(m/z):373.0(M+H)。
步骤B：(R)-1-(8-氟-7-(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)-5-甲氧基-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
氮气保护下，将(3R)-1-(7-氯-8-氟-5-甲氧基-2-(甲硫基)-3,4-二氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(300mg,0.60mmol)、(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)硼酸(391mg,0.72mmol)、cataCXium APd G3(43.7mg,0.06mmol)、K3PO4(382mg,1.8mmol)和1,4-二氧六环/H2O(10mL，V/V＝4:1)的混合溶液升温至110℃搅拌2h。LCMS监测反应结束后，将反应液倒入水中(50mL)，EA(60mL×3)萃取，合并有机相用饱和NaCl(20mL)洗涤。有机相浓缩，所得粗品经FCC(SiO2，(EtOH:EA＝1:3)/PE＝0-20％)纯化，得到黄色固体(R)-1-(8-氟-7-(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)-5-甲氧基-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(450mg,收率78％)。LCMS(m/z):835.4(M+H)。
步骤C：(R)-1-(8-氟-7-(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅基)氧基)萘-1-基)-5-甲氧基-2-(甲基磺酰基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
室温条件下，将m-CPBA(129mg,0.75mmol)加入到(R)-1-(8-氟-7-(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)-5-甲氧基-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(250mg,0.30mmol)的DCM(15mL)溶液中并在室温搅拌2h。TLC和LCMS监测反应结束后，依次加入DCM(50mL)及半饱和NaHCO3水溶液(20mL)洗涤。分液，水相再用DCM(60mL×3)萃取。合并有机相用饱和NaCl(30mL)洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩后，得到棕黄色固体(R)-1-(8-氟-7-(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅基)氧基)萘-1-基)-5-甲氧基-2-(甲基磺酰基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(250mg,收率96％)。LCMS(m/z):867.3(M+H)。
步骤D：(R)-1-(8-氟-7-(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)-2-(((3S,4S)-4-(氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-5-甲氧基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
室温条件下，将NaH(17mg,60％,0.41mmol)加入到((3S,4S)-4-(氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲醇(29mg,0.17mmol)和THF(3mL)的混合溶液中并搅拌30min。再将(R)-1-(8-氟-7-(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅基)氧基)萘-1-基)-5-甲氧基-2-(甲基磺酰基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(120mg,0.14mmol)一次加入到上述反应液中并搅拌3h。LCMS监测反应结束后，将反应液倒入饱和NH4Cl溶液(50mL)中。EA(50mL×3)萃取，合并有机相用饱和NaCl溶液洗涤，无水Na2SO4干燥，浓缩，所得粗品经FCC(SiO2，(EtOH:EA＝1:3)/PE＝0-40％)纯化，得到黄色固体(R)-1-(8-氟-7-(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)-2-(((3S,4S)-4-(氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-5-甲氧基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(100mg,收率75％)。LCMS(m/z):962.5(M+H)。
步骤E：(R)-1-(7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-2-(((3S,4S)-4-(氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-5-甲氧基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
室温条件下，将CsF(158mg,1.04mmol)加入到(R)-1-(8-氟-7-(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)-2-(((3S,4S)-4-(氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-5-甲氧基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(100mg,0.10mmol)的DMF(3mL)溶液中，所得混合物升温至50℃反应1h，LCMS监测反应结束。反应液经Pre-HPLC，制备得到得到淡黄色固体(R)-1-(7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-2-(((3S,4S)-4-(氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-5-甲氧基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(30mg,收率44％)。LCMS(m/z):650.3(M+H)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.93–7.78(m,1H),7.39–7.19(m,3H),4.79–4.43(m,5H),4.10–3.95(m,3H),3.89–3.82(m,1H),3.79–3.67(m,1H),3.58–3.47(m,1H),3.27–3.16(m,1H),3.13–3.06(m,1H),3.04–2.95(m,1H),2.38–2.24(m,3H),2.24–2.15(m,1H),2.12–2.01(m,1H),1.91–1.57(m,7H),1.38–1.28(m,1H),1.22–1.14(m,5H).1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δ-112.10，-150.97，-151.99，-223.17。
实施例52
(R)-1-(7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-2-(((3S,4S)-4-(氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-5-甲氧基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
步骤A：(R)-1-(7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-2-(((3S,4S)-4-(氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-4-醇
室温氮气保护下，将Pd/C(9.8mg,10％wt)加入到(R)-1-(7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-2-(((3S,4S)-4-(氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-5-甲氧基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(20mg,0.031mmol)的甲醇(10mL)溶液中。所得体系用H2气球置换三次，并在H2气球条件下室温搅拌过夜。LCMS监测反应结束后，反应液过滤除去Pd/C，滤液浓缩后冻干，得到白色固体(R)-1-(7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-2-(((3S,4S)-4-(氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-4-醇(9.3mg，收率46％)。LCMS(m/z):654.3(M+H)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.55(dd,J＝9.0,5.8Hz,1H),7.19–7.09(m,2H),6.96(dd,J＝9.0,2.6Hz,1H),4.69–4.31(m,4H),4.14–3.78(m,4H),3.70–3.37(m,3H),3.10–2.82(m,2H),2.56–2.34(m,1H),2.32–2.10(m,4H),2.06–1.89(m,2H),1.80–1.47(m,7H),1.30–1.21(m,1H),1.14–1.01(m,6H),0.84–0.69(m,3H).1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ-76.94,-121.59,-149.95,-150.32。
实施例53
(R)-1-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
步骤A：(R)-1-(7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
室温条件下，将(3R)-1-(7-氯-8-氟-2-(甲硫基)-3,4-二氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(1.20g,3.48mmol)、2-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(1.38g,3.83mmol)、cataCXium APd G3(507mg,696μmol)、K3PO4(2.22g,10.4mmol)和1,4-二氧六环/H2O(V/V＝4/1,15mL)的混合溶液N2置换三次后，升温至110℃搅拌2h。LCMS监测反应结束，将反应液恢复至室温，硅藻土过滤除去钯催化剂，收集母液，加入水(50mL)，EA(80mL×3)萃取。合并有机相用饱和NaCl水溶液(20mL)洗涤，浓缩后得到的粗品经FCC(SiO2,EA/PE＝0-40％)纯化，得到黄色固体(R)-1-(7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(1.1g,收率61％)。LCMS(m/z):541.0(M+H)。
步骤B：(3R)-1-(7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(甲基亚磺酰基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
室温条件下，将mCPBA(375mg,1.85mmol)加入到(R)-1-(7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(500mg,925umol)和DCM(20mL)的溶液中并室温搅拌2h。TLC和LCMS监测反应结束，将反应液用DCM(100mL)稀释，加入半饱和NaHCO3水溶液(20mL)洗涤，DCM(60mL×3)萃取水相，合并有机相用饱和NaCl水溶液(30mL)洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，有机液浓缩，得到棕黄色固体(3R)-1-(7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(甲基亚磺酰基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(510mg,收率99％)。LCMS(m/z):557.2(M+H)。
步骤C：(R)-1-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
在-40℃条件下，将NaHMDS(1.31mL,1M THF溶液,1.31mmol)滴加到(3R)-1-(7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(甲基亚磺酰基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(250mg,436umol)、((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲醇(101mg,524umol)和THF(10mL)的混合溶液中并搅拌2h，LCMS监测反应结束，将反应液倒入半饱和NH4Cl水溶液(50mL)中，EA(50mL×3)萃取。收集有机相，饱和NaCl水溶液(20mL)洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩有机相经FCC(SiO2，(EtOH/EA＝1/3)/PE＝0-40％)纯化，得到黄色固体(R)-1-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(80mg,收率26％)。LCMS(m/z):686.3(M+H)。步骤D：(R)-1-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
室温下，将CF3COOH(15mL)加入到(R)-1-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(80mg,117umol)中，并在室温下搅拌1h。LCMS监测反应结束，浓缩反应液除去酸液，EA(30mL)稀释，加入半饱和的NaHCO3水溶液(30mL)使pH调至碱性，EA(30mL×3)萃取，收集有机相，浓缩后经pre-HPLC(C18,CAN/(10mmol NH4HCO3/H2O)＝55-75％)，得到白色固体(R)-1-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(19mg,收率25％)。LCMS(m/z):642.3(M+H)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ9.20(s,1H),7.67(dd,J＝9.1,5.8Hz,1H),7.33–7.28(m,1H),7.27–7.20(m,1H),7.13–7.00(m,1H),6.42–6.05(m,1H),4.59–4.51(m,3H),4.35–4.23(m,2H),3.73–3.56(m,1H),3.53–3.43(m,1H),3.13–3.04(m,1H),3.00–2.92(m,1H),2.55–2.43(m,1H),2.23(s,3H),2.19–2.11(m,2H),2.04–1.94(m,1H),1.87–1.76(m,6H),1.35–1.26(m,3H),1.22(s,3H),0.88–0.75(m,3H).19FNMR(376MHz,甲醇-d4)δ-118.98,-121.17,-121.72,-139.21。
参照上述化合物的合成方法，还制备并表征了以下实施例：
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实施例93-A
(6S)-4-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟喹唑啉-4-基)-6-甲基-1,4-氧杂环-6-醇
步骤A：(6S)-6-甲基-4-(2,6,8-三氟-7-(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)喹唑啉-4-基)-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-醇
室温条件下，依次将(S)-4-(7-溴-2,6,8-三氟喹唑啉-4-基)-6-甲基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-醇(500mg,1.27mmol),(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)硼酸(1.04g,1.91mmol)、Pd(OAc)2(29mg,127umol)、BIDIME(84mg,255umol)、K3PO4(812mg,3.82mmol)加入到无水甲苯(15mL)中，N2置换三次后，升温至110℃搅拌过夜。LCMS和TLC监测反应结束，将反应液恢复至室温，硅藻土过滤除去钯催化剂和碱，浓缩有机液得到的粗品经FCC(SiO2,EA/PE＝0-20％)纯化，得到黄色固体(6S)-6-甲基-4-(2,6,8-三氟-7-(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)喹唑啉-4-基)-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-醇(780mg,收率76％)。LCMS(m/z):810.2(M+H)。
步骤B：(6S)-4-(2-(((3S,4S)-4-((二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-6,8-二氟-7-(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)喹唑啉-4-基)-6-甲基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-醇
室温条件下，将NaH(59mg,60wt％,1.48mmol)加入到((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲醇(86mg,444umol)和THF(15mL)的混合溶液中并搅拌30分钟，再将(6S)-6-甲基-4-(2,6,8-三氟-7-(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)喹唑啉-4-基)-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-醇(300mg,370umol)一次加入到上述反应液中并搅拌1.5h，TLC和LCMS监测反应结束，将反应液倒入半饱和的NH4Cl(50mL)溶液中，EA(30mL×3)萃取，收集有机相后，饱和NaCl溶液洗涤，无水Na2SO4干燥，浓缩有机相经FCC(EA/PE＝0-90％)纯化，得到黄色固体(6S)-4-(2-(((3S,4S)-4-((二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-6,8-二氟-7-(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)喹唑啉-4-基)-6-甲基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-醇(270mg,收率74％)。LCMS(m/z):964.3(M+H)。
步骤C：(6S)-4-(2-((((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟喹唑啉-4-基)-6-甲基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-醇
室温条件下，将CsF(417mg,2.75mmol)加入到(6S)-4-(2-(((3S,4S)-4-((二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-6,8-二氟-7-(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)喹唑啉-4-基)-6-甲基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-醇(270mg,275umol)和DMF(5mL)的混合溶液中，升温至50℃反应1h，LCMS和TLC监测反应结束，经pre-HPLC(C18,ACN/(10mmol NH4HCO3/H2O)＝50-70％)纯化，得到白色固体(6S)-4-(2-((((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟喹唑啉-4-基)-6-甲基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-醇(85mg,收率46％)。LCMS(m/z):964.3(M+H).1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.21(s,1H),8.19–7.94(m,2H),7.55–7.45(m,1H),7.42(d,J＝2.6Hz,1H),7.21–7.10(m,1H),6.50–6.12(m,1H),5.38–5.18(m,1H),4.52–4.19(m,4H),4.11–3.86(m,4H),3.81–3.66(m,1H),3.62–3.45(m,2H),2.94–2.71(m,2H),2.11(s,3H),2.03–1.53(m,5H),1.20–1.13(m,3H),1.11(s,3H).19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ-110.19,-114.75–-116.33(m),-118.17–-119.09(m),-119.12–-119.84(m),-124.21–-125.19(m)。
实施例93
(6S)-4-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟喹唑啉-4-基)-6-甲基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-醇
步骤A：(6S)-4-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟喹唑啉-4-基)-6-甲基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-醇
室温下，将(6S)-4-(2-((((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟喹唑啉-4-基)-6-甲基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-醇(15mg,22umol)溶于甲醇(10mL)，加入Pd/C(5mg,10％,4.5umol),H2气球置换两次并在室温搅拌2h，LCMS监测反应结束，反应液过滤头得到澄清的有机相，浓缩完全后，加入乙腈(2mL),再加入去离子水(20mL)，冻干，得到白色固体(6S)-4-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟喹唑啉-4-基)-6-甲基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-醇(12mg,收率80％)。LCMS(m/z):675.2(M+H)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.36–8.18(m,1H),7.78(dd,J＝9.1,6.0Hz,1H),7.45–7.29(m,2H),7.10–6.95(m,1H),6.53–6.10(m,1H),5.37–5.19(m,1H),4.56–4.08(m,4H),4.04–3.68(m,4H),3.65–3.48(m,2H),2.92–2.74(m,2H),2.43–2.30(m,1H),2.10(s,3H),1.92–1.52(m,6H),1.17–1.08(m,6H),0.89–0.70(m,3H).19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ-115.01–-116.01(m),-118.28–-119.20(m).-118.57–-118.80(m),-119.36,-123.83。
实施例93-1及实施例93-2
实施例93，(6S)-4-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟喹唑啉-4-基)-6-甲基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-醇(25mg)经Pre-HPLC(C18,ACN/(10mmol NH4HCO3/H2O)＝60-80％)分离，得到首先洗脱出来的异构体1为实施例93-1(4.8mg，保留时间11.5min)，LCMS(m/z):675.2(M+H)；随后洗脱出来的异构体2为实施例93-2(8.4mg，保留时间12.8min)，LCMS(m/z):675.2(M+H)。
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实施例98-1和98-2
(6S)-4-(7-((Ra)-8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟-2-(((S,E)-4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-6-甲基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-醇·三氟乙酸盐和(6S)-4-(7-((Sa)-8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟-2-(((S,E)-4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-6-甲基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-醇·三氟乙酸盐
步骤A：(6S)-4-(7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-2,6,8-三氟喹唑啉-4-基)-6-甲基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-醇
室温条件下，依次将(S)-4-(7-溴-2,6,8-三氟喹唑啉-4-基)-6-甲基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-醇(100mg,255umol)、2-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(138mg,382umol),Pd(OAc)2(6mg,26umol)、BIDIME(17mg,51umol)、K3PO4(162mg,765mmol)加入到无水甲苯(8mL)中，N2置换三次后，升温至105℃搅拌过夜。LCMS和TLC监测反应结束，将反应液恢复至室温，硅藻土过滤除去钯催化剂，收集母液浓缩，得到的粗品经FCC(SiO2,EA/PE＝0-60％)纯化，得到黄色固体(6S)-4-(7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-2,6,8-三氟喹唑啉-4-基)-6-甲基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-醇(40mg,收率29％)。LCMS(m/z):546.1(M+H)。
步骤B：(6S)-4-(7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-6,8-二氟-2-(((S,E)-4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-6-甲基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-醇
室温条件下，将NaH(12mg,60％,293umol)加入到(S,E)-(4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲醇(15mg,88umol)和THF(5mL)的混合溶液中并搅拌30分钟，再将(6S)-4-(7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-2,6,8-三氟喹唑啉-4-基)-6-甲基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-醇(40mg,73umol)一次加入到上述反应液中并搅拌1h，TLC监测反应结束，将反应液倒入半饱和的NH4Cl(30mL)溶液中，EA(30mL×3)萃取，收集有机相，饱和NaCl水溶液(30mL)洗涤，无水Na2SO4干燥，浓缩有机相经FCC(SiO2,EA/PE＝0-90％)纯化，得到黄色固体(6S)-4-(7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-6,8-二氟-2-(((S,E)-4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-6-甲基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-醇(30mg,收率59％)。
步骤C：(6S)-4-(7-((Ra)-8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟-2-(((S,E)-4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-6-甲基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-醇·三氟乙酸盐和(6S)-4-(7-((Sa)-8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟-2-(((S,E)-4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-6-甲基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-醇·三氟乙酸盐
室温下，将CF3COOH(10mL)加入到(6S)-4-(7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-6,8-二氟-2-(((S,E)-4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-6-甲基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-醇(30mg,43umol)中，并在室温下搅拌1h。LCMS监测反应结束，浓缩反应液除去酸液，EA(20mL)稀释，加入半饱和的NaHCO3溶液15mL，pH调至碱性，EA(20mL×3)萃取，收集有机相，浓缩后经pre-HPLC(C18,ACN/(0.1％ TFA/H2O)＝35-45％)纯化，首先洗脱出来的异构体1为98-1(3mg,收率21％，保留时间8.20min)；随后洗脱出来的异构体2为98-2(2mg,收率14％，保留时间9.23min)。LCMS(m/z):655.2(M+H)。
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/>
实施例106
(R)-1-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-3-甲基-1-(甲基-d3)哌啶-3-基)甲氧基-d2)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-5-乙炔基-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
步骤A：(R)-1-(7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(甲硫基)-5-((三异丙基硅基)乙炔基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
室温条件下，将(R)-1-(7-氯-8-氟-2-(甲硫基)-5-((三异丙基硅基)乙炔基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(200mg,0.38mmol)，2-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(207mg,0.58mmol)、磷酸钾(243mg,1.14mmol)和Pd(dtbpf)Cl2(25mg,0.038mmol)加到置有磁子的反应瓶中，氮气置换三次，再加入二氧六环(4mL)和水(1mL)，加热至100℃搅拌过夜。LCMS监测反应结束，冷却到室温，加入30mL饱和氯化铵水溶液淬灭，再用EtOAc(30mL×3)萃取。合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩干，得到的粗产品经FCC(SiO2,EA/PE＝0-100％)纯化，得到白色固体(R)-1-(7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(甲硫基)-5-((三异丙基硅基)乙炔基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(50mg,收率18％)。LCMS(m/z):721.0(M+H)。
步骤B：(R)-1-(7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(甲基亚磺酰基)-5-((三异丙基硅基)乙炔基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
室温条件下，将m-CBPA(21mg,85％含量,0.10mmol)加入到(R)-1-(7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(甲硫基)-5-((三异丙基硅基)乙炔基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(50mg,0.069mmol)的DCM(5mL)溶液中并室温搅拌反应1h。TLC监测反应结束，补加适量DCM后，分别用饱和NaHCO3和NaCl水溶液洗，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得到粗产品白色固体(R)-1-(7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(甲基亚磺酰基)-5-((三异丙基硅基)乙炔基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(51mg,粗品)。LCMS(m/z):737.0(M+H)。
步骤C：(R)-1-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-3-甲基-1-(甲基-d3)哌啶-3-基)甲氧基-d2)-7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-5-((三异丙基硅基)乙炔基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
室温条件下，将(R)-1-(7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(甲基亚磺酰基)-5-((三异丙基硅基)乙炔基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(50mg)和((3S,4S)-4-(二氟甲基)-3-甲基-1-(甲基-d3)哌啶-3-基)甲-d2-醇(20mg,0.10mmol)溶解到2mL无水THF中。氮气保护下，冷却到-70℃，滴加入t-BuONa(0.1mL,2M inTHF,0.2mmol)。所得混合物-70℃搅拌1h。加入饱和氯化铵水溶液(10mL)淬灭反应，用EtOAc(15mL×3)萃取，有机相合并，干燥浓缩，得粗产品白色固体(R)-1-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-3-甲基-1-(甲基-d3)哌啶-3-基)甲氧基-d2)-7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-5-((三异丙基硅基)乙炔基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(60mg，粗品)。LCMS(m/z):871.0(M+H)。
步骤D：(R)-1-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-3-甲基-1-(甲基-d3)哌啶-3-基)甲氧基-d2)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-5-((三异丙基硅基)乙炔基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
室温条件下，将(R)-1-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-3-甲基-1-(甲基-d3)哌啶-3-基)甲氧基-d2)-7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-5-((三异丙基硅基)乙炔基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(60mg)溶解到4M HCl-Dioxane(5mL)中。室温搅拌1h，LCMS监测反应完成，停止反应，浓缩干，残留物用20mL饱和碳酸氢钠溶液中和，再用EtOAc萃取(20mL×3)。合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得到粗产品白色固体(R)-1-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-3-甲基-1-(甲基-d3)哌啶-3-基)甲氧基-d2)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-5-((三异丙基硅基)乙炔基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(57mg,粗品)。LCMS(m/z):827.3(M+H)。
步骤E：(R)-1-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-3-甲基-1-(甲基-d3)哌啶-3-基)甲氧基-d2)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-5-乙炔基-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
室温条件下，将(R)-1-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-3-甲基-1-(甲基-d3)哌啶-3-基)甲氧基-d2)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-5-((三异丙基硅基)乙炔基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(57mg)和氟化铯(52mg,0.34mmol)溶于DMF(2mL)中，在60℃下搅拌1h。LCMS监测反应结束后，反应液过滤后，经pre-HPLC(C18,ACN/(0.1％NH4HCO3/H2O)＝40-60％)纯化，得到白色固体(R)-1-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-3-甲基-1-(甲基-d3)哌啶-3-基)甲氧基-d2)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-5-乙炔基-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(5.0mg)。LCMS(m/z):671.4(M+H)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.96(s,1H),7.81–7.74(m,1H),7.40–7.31(m,2H),7.17–7.04(m,1H),6.46–6.11(m,1H),4.81–4.71(m,1H),4.64–4.23(m,1H),3.76–3.46(m,3H),3.25–3.18(m,1H),2.89–2.75(m,2H),2.24–1.40(m,10H),1.26–0.99(m,6H),0.82–0.71(m,3H).19FNMR(376MHz,DMSO-d6)δ-116.07,-119.07,-119.23,-138.45。
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实施例110
(6S)-4-(7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟-2-(((S,E)-4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-6-甲基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-醇
步骤A：(6S)-4-(6,8-二氟-7-(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)-2-((S,E)-4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-6-甲基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-醇
室温条件下，将NaH(40mg,60％,987umol)加入到(S,E)-(4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲醇(51mg,296umol)和THF(10mL)的混合溶液中并搅拌30分钟，再将(6S)-6-甲基-4-(2,6,8-三氟-7-(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)喹唑啉-4-基)-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-醇(200mg,247umol)一次加入到上述反应液中并搅拌1.5h，TLC监测反应结束，将反应液倒入半饱和的NH4Cl溶液(30mL)中，EA(30mL×3)萃取，收集有机相后，饱和NaCl溶液(30mL)洗涤，无水Na2SO4干燥，浓缩有机相，经FCC(SiO2,EA/PE＝0-90％)纯化，得到黄色固体(6S)-4-(6,8-二氟-7-(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)-2-((S,E)-4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-6-甲基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-醇(110mg,收率46％)。LCMS(m/z):482.3(M/2+H)。
步骤B：(6S)-4-(7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟-2-(((S,E)-4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-6-甲基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-醇
室温条件下，将CsF(173mg,1.14mmol)加入到(6S)-4-(6,8-二氟-7-(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)-2-((S,E)-4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-6-甲基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-醇(110mg,114umol)和DMF(3mL)的混合溶液中，升温至50℃反应1h。LCMS和TLC监测反应结束，经pre-HPLC(C18,ACN/(10mmol NH4HCO3/H2O)＝50-70％)纯化，得到白色固体(6S)-4-(7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟-2-(((S,E)-4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-6-甲基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-醇(35mg,收率47％)。LCMS(m/z):651.2(M+H).1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.23(s,1H),8.23–7.88(m,2H),7.60–7.35(m,2H),7.26–7.09(m,1H),6.97–6.44(m,1H),5.46–5.17(m,1H),4.70–4.50(m,1H),4.42–4.16(m,3H),4.14–3.86(m,4H),3.80–3.50(m,4H),2.79–2.62(m,2H),2.35–2.09(m,4H),2.04–1.76(m,2H),1.21–1.13(m,3H),1.11(s,3H).19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ-110.17,-117.83–-120.05(m),-124.89,-138.89。
实施例110-1及实施例110-2
实施例110，(6S)-4-(7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-6,8-二氟-2-(((S,E)-4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-6-甲基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-醇(34mg)经SFC拆分(Waters SFC 150，分离柱：IG 250*25mm10μm；流动相：CO2/IPA(+0.1％7.0mol/l NH3/MeOH)＝45/55；流速：120mL/min)，得到首先洗脱出来的异构体1为实施例110-1(19mg，相对保留时间较小)。手性分析方法110，Rt＝0.801，LCMS(m/z):651.2(M+H)；随后洗脱出来的异构体2为实施例110-2(27mg，相对保留时间交大)。手性分析方法110，Rt＝2.672，LCMS(m/z):651.2(M+H)。
手性分析方法110：Waters UPCC(CA-352)，分析柱：IG，100*3mm 3μm；流动相A：CO2，流动相B：IPA(+0.1％ DEA)；流速：1.5mL/min；柱温：35℃；反压：1800psi；梯度：0-5.5min A/B＝60/40。/>
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/>
实施例120
(S)-4-(7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-2-(((S,E)-4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-5-甲氧基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇
步骤A：(S)-4-(7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-5-甲氧基-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇
室温条件下，依次将4-(7-氯-8-氟-5-甲氧基-2-(甲硫基)-1,3,6-三氮杂-4-萘基)-6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇(175mg,0.452mmol)、2-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(326mg,0.904mmol)、Pd(dtppf)2Cl(52mg,0.045mmol)、K3PO4(289mg,1.36mmol)加入到二氧六环(4mL)与水(1mL)的混合溶液中，N2置换三次后，升温至100℃搅拌2h。LCMS监测反应结束，将反应液恢复至室温，硅藻土过滤除去钯催化剂和碱，浓缩有机液，得到的粗品经FCC(SiO2,EA/PE＝0-60％)纯化，得到黄色固体(S)-4-(7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-5-甲氧基-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇(200mg,收率75％)。LCMS(m/z):587.1(M+H)。
步骤B：(6S)-4-(7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-5-甲氧基-2-(甲基亚磺酰基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇
室温条件下，将m-CPBA(88mg,0.51mmol)加入到(S)-4-(7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-5-甲氧基-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇(200mg,0.341mol)和DCM(5mL)的溶液中并室温搅拌1h。TLC和LCMS监测反应结束，将反应液DCM(15mL)稀释，加入半饱和aq.NaHCO3(20mL)洗涤，DCM(20mL×2)萃取，收集的有机相用饱和NaCl(20mL)洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，有机液浓缩后，得到黄色固体(6S)-4-(7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-5-甲氧基-2-(甲基亚磺酰基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇(200mg,收率97％)。LCMS(m/z):603.1(M+H)。
步骤C：(S)-4-(7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(((S,E)-4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-5-甲氧基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇
在-78℃干冰乙醇浴条件下，将t-BuONa(0.5mL,2M THF溶液,1mmol)滴加到(6S)-4-(7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-5-甲氧基-2-(甲基亚磺酰基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇(200mg,0.332mmol)、((S)-(E)-4-氟亚甲基-1-甲基-3-甲基哌啶-3-基)甲醇(86mg,0.50mmol)和THF(2mL)的混合溶液中并搅拌1h，LCMS监测反应结束，将反应液倒入半饱和NH4Cl水溶液(10mL)中，EA(20mL×2)萃取。收集有机相，饱和NaCl溶液洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩有机相，得到黄色固体(S)-4-(7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(((S,E)-4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-5-甲氧基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇(150mg,收率64％)。LCMS(m/z):712.2(M+1)。
步骤D：(S)-4-(7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-2-(((S,E)-4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-5-甲氧基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇
室温条件下，将TFA(2mL)加入到(S)-4-(7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(((S,E)-4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-5-甲氧基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇(150mg,0.211mol)和DCM(2mL)的混合溶液中并搅拌1h。LCMS和TLC监测反应结束,经pre-HPLC(C18,ACN/(10mmol NH4HCO3/H2O)＝40-60％)纯化，得到白色固体(S)-4-(7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-2-(((S,E)-4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-5-甲氧基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇(8.4mg,收率6％)。LCMS(m/z):668.3(M+H).1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.97–9.90(m,1H),7.79–7.54(m,1H),7.38–7.18(m,2H),7.11–6.96(m,1H),6.83–6.54(m,1H),4.69–4.59(m,1H),4.32–4.23(m,1H),4.01–3.86(m,6H),3.84–3.67(m,2H),3.53–3.38(m,2H),2.70–2.62(m,2H),2.46–2.35(m,1H),2.29–2.17(m,2H),2.17–2.08(m,3H),1.93–1.79(m,2H),1.31–1.19(m,2H),1.14–0.93(m,6H),0.88–0.69(m,3H).19FNMR(376MHz,DMSO-d6)δ-119.13–-120.20(m),-138.07–-139.06(m),-148.45–-149.26(m)。
实施例121
(S)-4-(7-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-2-(((S,E)-4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-5-甲氧基吡啶[4,3-d]嘧啶-4-基)-6-甲基-1,4-氧杂卓-6-醇
步骤A：(S)-4-(8-氟-7-(7-氟-8-(三异丙基硅基)乙炔基)-3-((三异丙基硅基)氧基)萘-1-基)-5-甲氧基-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇
室温条件下，依次将4-(7-氯-8-氟-5-甲氧基-2-(甲硫基)-1,3,6-三氮杂萘-4-基)-6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇(530mg,1.37mmol)、(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)硼酸(1.5g,2.8mmol)、Pd(dtppf)2Cl(100mg,0.0870mmol)、K3PO4(871mg,4.11mmol)加入到二氧六环(8mL)与水(2mL)的混合溶液中，N2置换三次后，升温至100℃搅拌2h。LCMS监测反应结束，将反应液恢复至室温，硅藻土过滤除去钯催化剂和碱，浓缩有机液，得到的粗品经FCC(SiO2,EA/PE＝0-30％)纯化，得到黄色固体(S)-4-(8-氟-7-(7-氟-8-(三异丙基硅基)乙炔基)-3-((三异丙基硅基)氧基)萘-1-基)-5-甲氧基-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇(720mg,收率62％)。LCMS(m/z):851.2(M+H)。
步骤B：(6S)-4-(8-氟-7-(7-氟-8-(三异丙基硅基)乙炔基)-3-((三异丙基硅基)氧基)萘-1-基)-5-甲氧基-2-(甲基亚磺酰基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇
室温条件下，将m-CPBA(259mg,1.50mmol)加入到(S)-4-(8-氟-7-(7-氟-8-(三异丙基硅基)乙炔基)-3-((三异丙基硅基)氧基)萘-1-基)-5-甲氧基-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇(720mg,0.847mol)和DCM(10mL)的溶液中并室温搅拌1h。TLC和LCMS监测反应结束，将反应液DCM(50mL)稀释，加入半饱和aq.NaHCO3(50mL)洗涤，DCM(50mL×2)萃取，收集的有机相用饱和NaCl(30mL)洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，有机液浓缩后，得到黄色固体(6S)-4-(8-氟-7-(7-氟-8-(三异丙基硅基)乙炔基)-3-((三异丙基硅基)氧基)萘-1-基)-5-甲氧基-2-(甲基亚磺酰基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇(680mg,收率93％)。LCMS(m/z):866.5(M+H)。
步骤C：(S)-4-(8-氟-7-(7-氟-8-((三异丙基硅基)乙炔基)-3-((三异丙基硅基)氧基)萘-1-基)-2-(((S,E)-4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-5-甲氧基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇
在-78℃干冰乙醇浴条件下，将t-BuONa(0.4mL,2M THF溶液,0.8mmol)滴加到(6S)-4-(8-氟-7-(7-氟-8-(三异丙基硅基)乙炔基)-3-((三异丙基硅基)氧基)萘-1-基)-5-甲氧基-2-(甲基亚磺酰基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇(220mg,0.254mmol)、((S)-(E)-4-氟亚甲基-1-甲基-3-甲基-3-哌啶基)甲醇(53mg,0.31mmol)和THF(5mL)的混合溶液中并搅拌1h，LCMS监测反应结束后，将反应液倒入半饱和NH4Cl水溶液(10mL)中，EA(20mL×2)萃取。收集有机相，饱和NaCl溶液洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩有机相，得到黄色固体(S)-4-(8-氟-7-(7-氟-8-((三异丙基硅基)乙炔基)-3-((三异丙基硅基)氧基)萘-1-基)-2-(((S,E)-4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-5-甲氧基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇(180mg,收率73％)。LCMS(m/z):488.8(M/2+1)。
步骤D：(S)-4-(8-氟-7-(7-氟-8-(三异丙基硅基)乙炔基)-3-((三异丙基硅基)氧基)萘-1-基)-5-甲氧基-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇
室温条件下，将CsF(180mg,1.18mmol)加入到(S)-4-(8-氟-7-(7-氟-8-((三异丙基硅基)乙炔基)-3-((三异丙基硅基)氧基)萘-1-基)-2-(((S,E)-4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-5-甲氧基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇(180mg,0.185mmol)和DMF(2mL)的混合溶液中，升温至50℃反应1h。LCMS和TLC监测反应结束,经pre-HPLC(C18,ACN/(10mmol NH4HCO3/H2O)＝40-70％)纯化，得到白色固体(S)-4-(8-氟-7-(7-氟-8-(三异丙基硅基)乙炔基)-3-((三异丙基硅基)氧基)萘-1-基)-5-甲氧基-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇(24mg,收率20％)。LCMS(m/z):664.3(M+H).1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.15(s,1H),8.02–7.93(m,1H),7.51–7.43(m,1H),7.39(d,J＝2.6Hz,1H),7.27–7.20(m,1H),6.83–6.56(m,1H),5.09(d,J＝84.0Hz,1H),4.64–4.54(m,1H),4.32–4.25(m,1H),4.16–4.02(m,2H),4.00–3.81(m,6H),3.79–3.38(m,5H),2.70–2.64(m,2H),2.25–2.10(m,4H),1.95–1.78(m,2H),1.14–0.97(m,6H).19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ-110.27–-111.23(m),-138.17–-139.30(m),-149.09–-151.00(m)。
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实施例125
(6S)-4-(6-氯-7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-2-(((S,E)-4-氟亚甲基-1，3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇
步骤D:(S)-4-(6-氯-2,8-二氟-7-(7-氟-3-(三(异丙基)甲氧基)-8-(2-(三(异丙基)甲硅烷基)乙炔基)-1-萘基)-4-喹唑啉基)-6-甲基-1,4-氧杂环己烷-6-醇
室温条件下，依次将(S)-4-(7-溴-6-氯-2,8-二氟-4-喹唑啉基)-6-甲基-1,4-氧杂环己烷-6-醇(500mg,1.22mmol)、(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)硼酸(996mg,1.84mmol)、Pd(OAc)2(27.5mg,0.122mmol)、BIDIME(80.8mg,0.245mmol)、K3PO4(779mg,3.67mmol)加入到无水甲苯(10mL)中，N2置换三次后，升温至110℃搅拌16h。LCMS监测反应结束，将反应液恢复至室温，硅藻土过滤除去钯催化剂，收集母液浓缩后，得到的粗品经FCC(SiO2，THF/PE＝0-30％)，得到黄色固体(S)-4-(6-氯-2,8-二氟-7-(7-氟-3-(三(异丙基)甲氧基)-8-(2-(三(异丙基)甲硅烷基)乙炔基)-1-萘基)-4-喹唑啉基)-6-甲基-1,4-氧杂环己烷-6-醇(570mg,收率56％)。LCMS(m/z):826.2(M+H)。
步骤E：(S)-4-(2-(((S)-(E)-4-氟亚甲基-1-甲基-3-甲基-3-哌啶基)甲氧基)-6-氯-8-氟-7-(7-氟-3-(三(异丙基)甲氧基)-8-(2-(三(异丙基)甲硅烷基)乙炔基)-1-萘基)-4-喹唑啉基)-6-甲基-1,4-氧杂环丙烷-6-醇
室温条件下，将NaH(18.9mg,60％,0.472mmol)加入到((S)-(E)-4-氟亚甲基-1-甲基-3-甲基-3-哌啶基)甲醇(40.9mg,0.236mmol)和THF(5mL)的混合溶液中并搅拌20分钟，再将(S)-4-(6-氯-2,8-二氟-7-(7-氟-3-(三(异丙基)甲氧基)-8-(2-(三(异丙基)甲硅烷基)乙炔基)-1-萘基)-4-喹唑啉基)-6-甲基-1,4-氧杂环己烷-6-醇(130mg,0.157mmol)加入到上述反应液中,将反应液在室温下搅拌1h，TLC(EA/PE＝1/2)监测反应结束，将反应液倒入饱和的NH4Cl(30mL)溶液中，EA(30mL×3)萃取，收集有机相用饱和NaCl溶液(70mL)洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤后浓缩，得到棕色固体(S)-4-(2-(((S)-(E)-4-氟亚甲基-1-甲基-3-甲基-3-哌啶基)甲氧基)-6-氯-8-氟-7-(7-氟-3-(三(异丙基)甲氧基)-8-(2-(三(异丙基)甲硅烷基)乙炔基)-1-萘基)-4-喹唑啉基)-6-甲基-1,4-氧杂环丙烷-6-醇(150mg,收率97％)。LCMS(m/z):490.3(1/2M+H)。
步骤F：(S)-4-(2-(((S)-(E)-4-氟亚甲基-1-甲基-3-甲基-3-哌啶基)甲氧基)-6-氯-7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基-1-萘基)-8-氟-4-喹唑啉基)-6-甲基-1,4-氧杂环丙烷-6-醇
室温条件下，将CsF(116mg,0.765mmol)加入到(S)-4-(2-(((S)-(E)-4-氟亚甲基-1-甲基-3-甲基-3-哌啶基)甲氧基)-6-氯-8-氟-7-(7-氟-3-(三(异丙基)甲氧基)-8-(2-(三(异丙基)甲硅烷基)乙炔基)-1-萘基)-4-喹唑啉基)-6-甲基-1,4-氧杂环丙烷-6-醇(150mg,0.153mmol)和DMF(3mL)的混合溶液中，升温至50℃反应1h，LCMS监测反应结束，反应液过滤后经pre-HPLC(C18,ACN/(10mmol NH4HCO3/H2O)＝55-75％纯化，得到白色固体(S)-4-(2-(((S)-(E)-4-氟亚甲基-1-甲基-3-甲基-3-哌啶基)甲氧基)-6-氯-7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基-1-萘基)-8-氟-4-喹唑啉基)-6-甲基-1,4-氧杂环丙烷-6-醇(14.7mg,收率14％)。LCMS(m/z):667.3(M+H).1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.21(s,1H),8.52–8.27(m,1H),8.05–7.90(m,1H),7.52–7.43(m,1H),7.40(d,J＝2.6Hz,1H),7.14–6.99(m,1H),6.89–6.51(m,1H),5.37–5.20(m,1H),4.63–4.53(m,1H),4.33–4.19(m,3H),4.06–3.90(m,3H),3.89–3.64(m,2H),3.61–3.50(m,3H),2.73–2.64(m,2H),2.30–2.18(m,1H),2.14(s,3H),1.95–1.78(m,2H),1.22–1.14(m,3H),1.11(s,3H).19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ-110.36,-122.93,138.84。
/>
实施例132
(S)-4-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-3-甲基-1-(甲基-d3)哌啶-3-基)甲氧基-d2)-7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-5-甲氧基吡啶[4,3-d]嘧啶-4-基)-6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇
步骤A：(S)-4-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-3-甲基-1-(甲基-d3)哌啶-3-基)甲氧基-d2)-8-氟-7-(7-氟-8-((三异丙基硅基)乙炔基)-3-((三异丙基硅基)氧基)萘-1-基)-5-甲氧基吡啶[4,3-d]嘧啶-4-基)-6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇
在-78℃干冰乙醇浴条件下，将t-BuONa(0.78mL,2M THF溶液,1.56mmol)滴加到(6S)-4-(8-氟-7-(7-氟-8-(三异丙基硅基)乙炔基)-3-((三异丙基硅基)氧基)萘-1-基)-5-甲氧基-2-(甲基亚磺酰基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇(450mg,0.520mmol)、((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1-((2H)3)甲基)-3-甲基-3-哌啶基)(2H2)甲醇(124mg,0.626mmol)和THF(5mL)的混合溶液中并搅拌1h，LCMS监测反应结束，将反应液倒入半饱和NH4Cl水溶液(10mL)中，EA(20mL×2)萃取。收集有机相，饱和NaCl溶液洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩有机相，得到黄色固体(S)-4-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-3-甲基-1-(甲基-d3)哌啶-3-基)甲氧基-d2)-8-氟-7-(7-氟-8-((三异丙基硅基)乙炔基)-3-((三异丙基硅基)氧基)萘-1-基)-5-甲氧基吡啶[4,3-d]嘧啶-4-基)-6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇(300mg,收率57％)。LCMS(m/z):501.3(M/2+1)。
步骤B：(S)-4-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-3-甲基-1-(甲基-d3)哌啶-3-基)甲氧基-d2)-7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-5-甲氧基吡啶[4,3-d]嘧啶-4-基)-6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇
室温条件下，将CsF(300mg,1.93mmol)加入到(S)-4-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-3-甲基-1-(甲基-d3)哌啶-3-基)甲氧基-d2)-8-氟-7-(7-氟-8-((三异丙基硅基)乙炔基)-3-((三异丙基硅基)氧基)萘-1-基)-5-甲氧基吡啶[4,3-d]嘧啶-4-基)-6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇(300mg,0.347mol)和DMF(3mL)的混合溶液中，升温至50℃反应1h。LCMS和TLC监测反应结束,经pre-HPLC(C18,ACN/(10mmol NH4HCO3/H2O)＝50-70％)纯化，得到白色固体(S)-4-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-3-甲基-1-(甲基-d3)哌啶-3-基)甲氧基-d2)-7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-5-甲氧基吡啶[4,3-d]嘧啶-4-基)-6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇(35mg,收率15％)。LCMS(m/z):689.3(M+H).1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.15(s,1H),8.03–7.91(m,1H),7.52–7.43(m,1H),7.39(d,J＝2.6Hz,1H),7.29–7.22(m,1H),6.48–6.12(m,1H),5.25–4.98(m,1H),4.17–4.04(m,2H),3.97–3.83(m,5H),3.81–3.37(m,5H),2.90–2.76(m,2H),1.91–1.55(m,5H),1.14–0.99(m,6H).19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ-110.14–-110.90(m),-115.36–-119.56(m),-149.38–-150.27(m).
实施例133
(S)-4-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-3-甲基-1-(甲基-d3)哌啶-3-基)甲氧基-d2)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-5-甲氧基吡啶[4,3-d]嘧啶-4-基)-6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇
步骤A：(S)-4-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-3-甲基-1-(甲基-d3)哌啶-3-基)甲氧基-d2)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-5-甲氧基吡啶[4,3-d]嘧啶-4-基)-6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇
室温下，将(S)-4-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-3-甲基-1-(甲基-d3)哌啶-3-基)甲氧基-d2)-7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-5-甲氧基吡啶[4,3-d]嘧啶-4-基)-6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇(25mg,37umol)溶于甲醇(10mL)，加入Pd/C(10mg,10％,9.0umol),H2气球置换两次并在室温搅拌2h。LCMS监测反应结束，反应液过滤得到澄清的有机相，浓缩完全后，加入乙腈(2mL),再加入去离子水(20mL)，冻干，得到白色固体(S)-4-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-3-甲基-1-(甲基-d3)哌啶-3-基)甲氧基-d2)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-5-甲氧基吡啶[4,3-d]嘧啶-4-基)-6-甲基-1,4-氧氮杂环庚烷-6-醇(20mg,收率79％)。LCMS(m/z):693.4(M+H)。
实施例134
(3R)-1-(6-氯-2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇·三氟乙酸
步骤A：(3R)-1-(6-氯-2,8-二氟-7-(7-氟-8-((三异丙基硅基)乙炔基)-3-((三异丙基硅基)氧基)萘-1-基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
室温条件下，将(R)-1-(7-溴-6-氯-2,8-二氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(700mg,1.78mmol)、(7-氟-8-((三异丙基硅基)乙炔基)-3-((三异丙基硅基)氧基)萘-1-基)硼酸(194mg,356μmol)、Pd(OAc)2(40mg,178μmol)、BIDIME(118mg,356μmol)、K3PO4(1.14g,5.35mmol)和1,4-二氧六环/H2O(V/V＝4/1，15mL)的混合溶液用N2置换三次，升温至110℃搅拌16h。LCMS监测反应完成，冷却后将反应液倒入水中(100mL)，EA(50mL×3)萃取，收集的有机相用饱和NaCl(20mL)洗涤，有机液浓缩，得到的粗品经FCC(SiO2,(EtOH:EA＝1:3)/PE＝0-20％)，得到黄色固体(3R)-1-(6-氯-2,8-二氟-7-(7-氟-8-((三异丙基硅基)乙炔基)-3-((三异丙基硅基)氧基)萘-1-基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(790mg，收率55％)。LCMS(m/z):810.3(M+H)。
步骤B：(3R)-1-(6-氯-2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-8-氟-7-(7-氟-8-((三异丙基硅基)乙炔基)-3-((三异丙基硅基)氧基)萘-1-基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
在0℃条件下，将NaH(79mg,60wt％,1.97mmol)加入到(3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲醇(143mg,740μmol)和THF(3mL)的混合溶液中并搅拌30min，再将(3R)-1-(6-氯-2,8-二氟-7-(7-氟-8-((三异丙基硅基)乙炔基)-3-((三异丙基硅基)氧基)萘-1-基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(400mg,493μmol)一次加入到上述反应液中并在25℃搅拌1h，LCMS监测反应完成，将反应液倒入半饱和的NH4Cl水溶液(50mL)中，EA(50mL×3)萃取，收集有机相，饱和NaCl水溶液(20mL)洗涤，无水Na2SO4干燥。过滤，浓缩有机相，经FCC(SiO2,(EtOH:EA＝1:3)/PE＝0-40％)，得到黄色固体(3R)-1-(6-氯-2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-8-氟-7-(7-氟-8-((三异丙基硅基)乙炔基)-3-((三异丙基硅基)氧基)萘-1-基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(370mg，收率76％)。LCMS(m/z):492.2(M/2+H)。
步骤C：(3R)-1-(6-氯-2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇·三氟乙酸
室温条件下，将CsF(300mg,1.97mmol)加入到(3R)-1-(6-氯-2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-8-氟-7-(7-氟-8-((三异丙基硅基)乙炔基)-3-((三异丙基硅基)氧基)萘-1-基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(370mg,376μmol)和DMF(3mL)的溶液中，升温至45℃反应1h，LCMS监测反应结束，反应液经Pre-HPLC(CAN/(0.1％TFA/H2O)＝35-45％)，制备得到淡黄色固体(3R)-1-(6-氯-2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇·三氟乙酸(180mg，收率71％)。LCMS(m/z):671.0(M+H).1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.21–8.10(m,1H),7.86(dd,J＝9.2,5.7Hz,1H),7.38–7.27(m,2H),7.12–7.03(m,1H),6.43–6.11(m,1H),4.84–4.79(m,1H),4.69–4.55(m,1H),4.43–4.35(m,1H),4.34–4.22(m,1H),3.73–3.59(m,3H),3.48–3.32(m,2H),3.11–3.01(m,1H),3.01–2.94(m,1H),2.91–2.81(m,3H),2.36–1.99(m,4H),1.90–1.72(m,3H),1.32(s,3H),1.31–1.25(m,3H).19F NMR(376MHz,甲醇-d4)δ-77.29,-111.36,-120.83,-122.79,-126.34.实施例135及136
(3R)-1-(6-氯-2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇·三氟乙酸及(3R)-1-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇·三氟乙酸
步骤A：(3R)-1-(6-氯-2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇·三氟乙酸及(3R)-1-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇·三氟乙酸
室温下，将(3R)-1-(6-氯-2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇·三氟乙酸(60mg,89.4μmol),Pt/C(50mg,10wt％,24.15μmol)溶于甲醇(10mL),H2气球置换空气两次,并在H2气球条件下室温搅拌1h。LCMS监测反应完成,反应液过滤得到澄清的有机相,浓缩完全后经Pre-HPLC(CAN/(0.1％TFA/H2O)＝35％-45％)，制备得到淡黄色固体(3R)-1-(6-氯-2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇·三氟乙酸(实施例135，15mg，收率25％)。LCMS(m/z):675.2(M+H)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.27–8.19(m,1H),7.68(dd,J＝9.0,5.8Hz,1H),7.30(d,J＝2.7Hz,1H),7.28–7.21(m,1H),6.93–6.85(m,1H),6.42–6.09(m,1H),4.53–4.42(m,1H),4.39–4.28(m,1H),4.27–4.18(m,1H),3.77–3.55(m,3H),3.51–3.39(m,1H),3.11–2.96(m,2H),2.91(s,3H),2.69–2.52(m,1H),2.38–2.11(m,5H),2.11–1.99(m,1H),1.91–1.71(m,3H),1.31–1.24(m,6H),0.81(q,J＝7.0Hz,3H).19F NMR(376MHz,甲醇-d4)δ-77.21,-120.69,-121.15,-123.12,-124.23。以及(3R)-1-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇·三氟乙酸(实施例136，7mg，收率12％)。LCMS(m/z):641.2(M+H)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.06(dd,J＝8.6,5.2Hz,1H),7.66(dd,J＝9.1,5.8Hz,1H),7.44–7.36(m,1H),7.31–7.20(m,2H),6.95(dd,J＝4.6,2.7Hz,1H),6.45–6.10(m,1H),4.56–4.46(m,1H),4.40–4.32(m,1H),4.31–4.26(m,1H),3.73–3.59(m,3H),3.53–3.44(m,1H),3.11–3.02(m,1H),3.02–2.97(m,1H),2.90(s,3H),2.49–2.40(m,1H),2.33–2.23(m,1H),2.20–2.15(m,2H),2.08–2.00(m,2H),1.89–1.75(m,3H),1.64–1.55(m,1H),1.30–1.24(m,6H),0.79(q,J＝7.1Hz,3H).19F NMR(376MHz,甲醇-d4)δ-77.18,-121.06,-121.14,-122.96,-131.01.
实施例137
(3R)-1-(6-氯-7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-2-(((S,E)-4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇·三氟乙酸盐
步骤A：(3R)-1-(6-氯-8-氟-7-(7-氟-8-((三异丙基硅基)乙炔基)-3-((三异丙基硅基)氧基)萘-1-基)-2-(((S,E)-4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
在0℃条件下，将NaH(40mg,60wt％,987μmol)加入到((S)-(E)-4-氟亚甲基-1-甲基-3-甲基-3-哌啶基)甲醇(64mg,370μmol)和THF(5mL)的混合溶液中并搅拌30min，再将(3R)-1-(6-氯-2,8-二氟-7-(7-氟-8-((三异丙基硅基)乙炔基)-3-((三异丙基硅基)氧基)萘-1-基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(200mg,247μmol)一次性加入到上述反应液中并在25℃搅拌1h，LCMS监测反应完成，将反应液倒入半饱和的NH4Cl水溶液(20mL)中，EA(20mL×3)萃取，收集有机相后，饱和NaCl水溶液(20mL)洗涤，无水Na2SO4干燥。过滤，浓缩有机相经FCC(SiO2，(EtOH:EA＝1:3)/PE＝0-40％)，得到黄色固体(3R)-1-(6-氯-8-氟-7-(7-氟-8-((三异丙基硅基)乙炔基)-3-((三异丙基硅基)氧基)萘-1-基)-2-(((S,E)-4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(170mg，收率72％)。LCMS(m/z):474.8(M/2+H)。
步骤B：(3R)-1-(6-氯-7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-2-(((S,E)-4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇·三氟乙酸盐
室温条件下，将CsF(150mg,987μmol)加入到(3R)-1-(6-氯-8-氟-7-(7-氟-8-((三异丙基硅基)乙炔基)-3-((三异丙基硅基)氧基)萘-1-基)-2-(((S,E)-4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(170mg,176μmol)和DMF(3mL)的溶液中，升温至45℃反应1h，LCMS监测反应完成，反应液经Pre-HPLC(CAN/(0.1％TFA/H2O)＝35-45％)，制备得到淡黄色固体(3R)-1-(6-氯-7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-2-(((S,E)-4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇·三氟乙酸盐(80mg，收率70％)。LCMS(m/z):651.3(M+H).1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.12–8.04(m,1H),7.85(dd,J＝9.2,5.7Hz,1H),7.37–7.27(m,2H),7.11–7.03(m,1H),7.02(s,0.5H),6.81(s,0.5H),4.76–4.59(m,1H),4.59–4.37(m,1H),4.35–4.16(m,1H),3.72–3.51(m,3H),3.51–3.32(m,2H),3.16–2.82(m,6H),2.71–2.48(m,1H),2.26–1.97(m,2H),1.91–1.69(m,3H),1.33–1.22(m,6H).19F NMR(376MHz,甲醇-d4)δ-77.22,-111.46,-126.88,-134.15。
实施例138
(3R)-1-(6-氯-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-2-(((S,E)-4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇·三氟乙酸盐
步骤A：(3R)-1-(6-氯-7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-2,8-二氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
室温条件下，将(R)-1-(7-溴-6-氯-2,8-二氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(400mg,1.02mmol)，2-(8-乙基-7-氟-3-甲氧基甲氧基-1-萘基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(550mg,1.53mmol),Pd(PPh3)4(235mg,204μmol)、K3PO4(649mg,3.06mmol)和1,4-二氧六环/H2O(V/V＝4:1，15mL)的混合溶液N2置换三次后，升温至100℃搅拌8h。LCMS监测反应完成，将反应液倒入水中(50mL)，EA(50mL×3)萃取，收集的有机相用饱和NaCl水溶液(20mL)洗涤，有机液浓缩后得到的粗品经FCC(SiO2，(EtOH:EA＝1:3)/PE＝0-20％)，得到黄色固体(3R)-1-(6-氯-7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-2,8-二氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(60mg，收率11％)。LCMS(m/z):804.2(M+H)。
步骤B：(3R)-1-(6-氯-7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(((S,E)-4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇
在0℃条件下，将NaH(14mg,60wt％,330μmol)加入到((S)-(E)-4-氟亚甲基-1-甲基-3-甲基-3-哌啶基)甲醇(29mg,165μmol)和THF(3mL)的混合溶液中并搅拌30min，再将(3R)-1-(6-氯-7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-2,8-二氟喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(60mg,110μmol)一次加入到上述反应液中并在25℃搅拌1h，LCMS监测反应完成，将反应液倒入半饱和的NH4Cl水溶液(20mL)中，EA(20mL×3)萃取，收集有机相后，饱和NaCl水溶液(20mL)洗涤，无水Na2SO4干燥。过滤，浓缩有机相经FCC(SiO2，(EtOH:EA＝1:3)/PE＝0-40％)，得到黄色固体(3R)-1-(6-氯-7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(((S,E)-4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(50mg,收率65％)。LCMS(m/z):474.8(M/2+H)。
步骤C：(3R)-1-(6-氯-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-2-(((S,E)-4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇·三氟乙酸盐
室温条件下，将(3R)-1-(6-氯-7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(((S,E)-4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(50mg,71.5μmol)溶于TFA(2mL)并将此溶液在室温搅拌30mins，LCMS监测反应完成，将反应液浓缩去除酸液。EA(10mL)稀释，加入半饱和的NaHCO3水溶液(15mL)溶液将pH调至弱碱性，EA(10mL×3)萃取。将有机相浓缩后经Pre-HPLC(CAN/(10mM NH4HCO3)＝50-80％)，制备得到淡黄色固体(3R)-1-(6-氯-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-2-(((S,E)-4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇·三氟乙酸盐(15mg,收率32％)。LCMS(m/z):655.3(M+H).1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.10(dd,J＝15.8,1.6Hz,1H),7.65(dd,J＝9.1,5.9Hz,1H),7.27(d,J＝2.7Hz,1H),7.25–7.18(m,1H),6.89(d,J＝2.6Hz,1H),6.74(s,0.5H),6.52(s,0.5H),4.67–4.58(m,1H),4.44–4.36(m,1H),4.28–4.18(m,1H),4.09–4.02(m,1H),4.00–3.92(m,1H),3.58–3.40(m,2H),2.90–2.80(m,1H),2.80–2.70(m,1H),2.71–2.55(m,2H),2.39–2.27(m,1H),2.24(d,J＝2.0Hz,3H),2.21–2.10(m,1H),2.08–1.91(m,2H),1.88–1.72(m,2H),1.30–1.24(m,3H),1.20(s,3H),0.79(q,J＝7.7Hz,3H).19F NMR(376MHz,甲醇-d4)δ-121.32,-122.40,-139.60。
参照上述实施例合成方案或适当变体，本发明还制备了下述化合物。
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活性实施例
实施例1:本发明化合物对KRAS G12V突变的NCI-H727细胞的增殖抑制效果
本实验评估并验证了本发明代表性化合物对KRAS G12V突变细胞NCI-H727细胞的增殖抑制活性。
方法A：本实验使用如下细胞系：
细胞系 细胞类型 细胞数量/孔 培养基
NCI-H727 贴壁 3000 1640+10％FBS
将其置于37℃、5％CO2、95％湿度条件下培养。
本实验中使用如下材料、仪器和试剂：胎牛血清FBS(GIBCO,Cat#10091-148)； Luminescent Cell Viability Assay(Promega,Cat#G7573)；96孔透明平底黑壁板(/>Cat#3603)；Envision多功能能酶标仪，PE，2105；CO2培养箱，ThermoScientific，Model 371；生物安全柜，Thermo Scientific，Model 1300Series A2；倒置显微镜，Olympus，CKX53。NCI-H727细胞系购自ATCC，货号为CRL-5815。
该实验如下进行：
细胞培养和接种：收获处于对数生长期的细胞并采用血小板计数器进行细胞计数。用台盼蓝排斥法检测细胞活力，确保细胞活力在90％以上。调整细胞浓度；分别添加90μL细胞悬液至96孔板中；将96孔板中的细胞置于37℃、5％CO2条件下培养。
如下进行药物稀释和加药：单点抑制率测定药物配制：配制10倍药物溶液，在接种有细胞的96孔板中每孔加入10μL药物溶液，使得工作浓度为1μM，每个药物浓度设置三个复孔。IC50测定药物配制：配制10倍药物溶液，在接种有细胞的96孔板中每孔加入10μL药物溶液，使得工作浓度为最高10μM，3×稀释，9个浓度，每个药物浓度设置三个复孔。将已加药的96孔板中的细胞置于37℃、5％CO2条件下继续培养3天，然后进行CTG检测。
融化CTG试剂并平衡细胞板至室温30分钟，每孔加入等体积的CTG溶液，在定轨摇床上振动10分钟使细胞裂解。将细胞板放置于室温20分钟以稳定冷光信号，读取冷光值。
使用GraphPad Prism 8.0软件分析数据，利用非线性S曲线回归来拟合数据得出剂量-效应曲线，并由此计算IC50值。
细胞存活率(％)＝(Lum待测药-Lum培养液对照)/(Lum细胞对照-Lum培养液对照)×100％。
方法B：将NCI-H727细胞(南京科佰生物科技有限公司，货号为CBP60182，贴壁，培养基RPMI-1640+10％FBS(GIBCO,Cat#10091-148))置于37℃、5％CO2、95％湿度条件下培养。
3D细胞活力检测：收获处于对数生长期的细胞并采用血小板计数器进行细胞计数。用台盼蓝排斥法检测细胞活力，确保细胞活力在90％以上。配制含1％MC(甲基纤维素，Sigma,Cat#M0512)RPMI-1640培养基并加入10％ FBS配制成3D细胞培养基，用3D培养基调整细胞浓度约为14815个细胞/mL并使甲基纤维素(MC)的含量为0.65％；分别添加135μL细胞悬液至96孔透明平底黑壁板(Greiner,Cat#655096)中；将96孔板中的细胞置于37℃、5％CO2条件下过夜培养。
IC50测定药物配制：用培养基配制10倍药物溶液，在接种有细胞的96孔板中每孔加入10μL药物溶液，使得工作浓度为最高10μM，3×稀释，9个浓度，每个药物浓度设置2个复孔。将已加药的96孔板中的细胞置于37℃、5％CO2条件下继续培养7天，然后进行CTG检测(Luminescent Cell Viability Assay(Promega,Cat#G7573))。
平衡细胞板至室温30分钟并融化CTG试剂，每孔加入75微升的CTG溶液检测，在定轨摇床上振动5分钟使细胞裂解。将细胞板放置于室温25分钟以稳定冷光信号，读取冷光值(多功能酶标仪，PerkinElmer#2105)。
使用GraphPad Prism软件分析数据，利用Dose-response-inhibition方程来拟合数据得出剂量-效应曲线，并由此计算IC50值。
细胞存活率(％)＝(Lum待测药-Lum培养液对照)/(Lum细胞对照-Lum培养液对照)×100％。
代表性本发明化合物对KRAS G12V突变的NCI-H727人肺癌细胞显示出令人满意的抗增殖活性，部分活性数据见下表：
实施例 IC50(uM)/NCI-H727(方法A)
实施例1 0.178
实施例2 0.523
实施例3 0.712
实施例49 0.058
实施例50 0.051
实施例51 0.097
。
实施例2:本发明化合物对KRAS G12D突变的AGS细胞的增殖抑制效果
本实验评估并验证了本发明代表性化合物对KRAS G12D突变细胞AGS细胞的增殖抑制活性。
方法A：本实验使用如下细胞系：
细胞系 细胞类型 细胞数量/孔 培养基
AGS 贴壁 3000 RPMI-1640+10％FBS
将其置于37℃、5％CO2、95％湿度条件下培养。
本实验中使用如下材料、仪器和试剂：胎牛血清FBS(GIBCO,Cat#10099-141)； Luminescent Cell Viability Assay(Promega,Cat#G7572)；96孔透明平底黑壁板(/>Cat#3603)；Envision多功能能酶标仪，PE，2104；CO2培养箱，ThermoScientific，Model 3100Series；生物安全柜，苏净安泰，Model 1300Series A2；倒置显微镜，重庆光电，XDS-1B。AGS细胞系购自ATCC，货号为CRL-1739。
该实验如下进行：
细胞培养和接种：收获处于对数生长期的细胞并采用血小板计数器进行细胞计数。用台盼蓝排斥法检测细胞活力，确保细胞活力在90％以上。调整细胞浓度；分别添加90μL细胞悬液至96孔板中；将96孔板中的细胞置于37℃、5％CO2条件下培养。
如下进行药物稀释和加药：单点抑制率测定药物配制：配制10倍药物溶液，在接种有细胞的96孔板中每孔加入10μL药物溶液，使得工作浓度为1μM，每个药物浓度设置三个复孔。IC50测定药物配制：配制10倍药物溶液，在接种有细胞的96孔板中每孔加入10μL药物溶液，使得工作浓度为最高10μM，3.16×稀释，9个浓度，每个药物浓度设置三个复孔。将已加药的96孔板中的细胞置于37℃、5％CO2条件下继续培养3天，然后进行CTG检测。
融化CTG试剂并平衡细胞板至室温30分钟，每孔加入等体积的CTG溶液，在定轨摇床上振动5分钟使细胞裂解。将细胞板放置于室温20分钟以稳定冷光信号，读取冷光值。
使用GraphPad Prism 8.0软件分析数据，利用非线性S曲线回归来拟合数据得出剂量-效应曲线，并由此计算IC50值。
细胞存活率(％)＝(Lum待测药-Lum培养液对照)/(Lum细胞对照-Lum培养液对照)×100％。方法B：将AGS细胞(南京科佰生物科技有限公司，货号CBP60476，贴壁，培养基(F12KNutrient Mixture+10％FBS(GIBCO,Cat#10091-148))在37℃、5％CO2、95％湿度条件下培养，1500/孔，收获处于对数生长期的细胞并采用基于经典台盼蓝染色法原理的Countstar自动细胞计数仪进行细胞计数及检测细胞活力，确保细胞活力在90％以上。调整细胞浓度；分别添加80μL细胞悬液至96孔透明平底黑壁板(Greiner,Cat#655090)中，将96孔板中的细胞置于37℃、5％CO2条件下培养。
IC50测定药物配制：用培养基配制5倍药物溶液，在接种有细胞的96孔板中每孔加入20μL药物溶液，使得工作浓度为最高10μM，3×稀释，9个浓度，每个药物浓度设置2个复孔。将已加药的96孔板中的细胞置于37℃、5％CO2条件下继续培养3天，然后进行CTG检测。
平衡细胞板至室温30分钟并融化CTG试剂(Luminescent CellViability Assay(Promega,Cat#G7573))，每孔加入50微升的CTG溶液，在定轨摇床上振动2分钟使细胞裂解。将细胞板放置于室温10分钟以稳定冷光信号，读取冷光值(/>多功能酶标仪，PerkinElmer#2105)。
使用GraphPad Prism软件分析数据，利用Dose-response-inhibition方程来拟合数据得出剂量-效应曲线，并由此计算IC50值。
细胞存活率(％)＝(Lum待测药-Lum培养液对照)/(Lum细胞对照-Lum培养液对照)×100％。
代表性本发明化合物对KRAS G12D突变的AGS人胃腺癌细胞显示出令人满意的抗增殖活性，部分活性数据见下表。
实施例 IC50(uM)/AGS(方法A)
实施例1 0.200
实施例2 0.396
实施例3 0.402
实施例49 0.018
实施例50 0.013
实施例51 0.027
。
实施例3-1:本发明化合物的大鼠盒式给药(Cassette)药代动力学特性
通过大鼠Cassette药代动力学实验(Nagilla R.等人,J.Pharm.Sci.2011,100,3862–3874.)评价了本发明部分化合物的药代动力学特征。
该研究使用雄性SD大鼠，周龄：6-8周，体重220-250g,购自昭衍(苏州)新药研究中心有限公司；并使用以下试剂：甲苯磺丁脲(Tolbutamide)(阿拉丁，货号H1401054)；磺丁基β环糊精(Captisol，山东滨州智源生物,货号20191013)；丙二醇(15)硬脂酸酯(Solutol，美仑生物，货号S0206A)；DMSO(Vetec公司，货号WXBD0293V)；乙腈(Sigma-Aldrich，货号WXBD1744V)；甲醇(Sigma-Aldrich，货号WXBD2831V)。
将化合物组合配制到5％DMSO/10％Solutol/85％(20％Captisol)的溶剂中，最终每个化合物的浓度为1mg/mL,将药物制剂按照1mL/kg的注射体积尾静脉注射给SD大鼠，分别在5min,15min,30min,1h,2h,4h,8h,24h从颈外静脉穿刺采血，低温离心20分钟，收集血浆，-20℃保存待测。
如下建立化合物LC-MS/MS分析方法：
标准曲线配制：将每个化合物吸取20μL 1mg/mL DMSO储备液，转移至900μL 50％甲醇工作液中，逐级稀释，得到一条浓度为20000，10000，5000，1000，500，100，50，20，10ng/mL的标准曲线工作液，再吸取5μL标准曲线工作液与45μL大鼠空白血浆混合，得到一条浓度为2000，1000，500，100，50，10，5，2，1ng/mL的标准曲线，用于定量未知样品。
样品前处理：50μL未知血浆样品及标准曲线样品，加入250μL含有甲苯磺丁脲为内标的乙腈作为沉淀剂，沉淀血浆蛋白，萃取血浆中的待测化合物，低温离心20分钟，取上清液，将上清液与0.1％甲酸的水溶液混合，吸取5μL进样，采用LC-MS分析药物血药浓度。
用质谱分析软件Analyst 1.6.1绘制标准曲线，定量未知样品，根据未知样品各时间点药物浓度用Winnonlin 8.2计算药物动力学参数。
实验结果显示,在盒式给药药代动力学评价中，本发明化合物、例如实施例化合物显示良好的药代动力学性质。
实施例3-2：本发明化合物的小鼠药代动力学特性
通过小鼠药代动力学实验评价了本发明部分化合物的药代动力学特征。
【试验材料】雄性CD-1小鼠，周龄：6-8周，购自浙江浙江维通利华实验动物有限公司。
【实验步骤】IV给药组将化合物配制到20％ Captisol(磺丁基β环糊精)的醋酸钠缓冲液(10mM醋酸钠溶液，醋酸调pH至4.0)中，使得最终每个化合物的浓度为0.6mg/mL,将药物制剂按照5mL/kg的注射体积尾静脉注射给CD-1小鼠，给药后分别在5min,15min,30min,1h,2h,4h,6h,8h,24h从颌下静脉或其它合适方式采血，血液样品低温离心6分钟，收集血浆，-80℃保存待测。PO给药组将化合物配制到0.5％Tween80和99.5％(0.5％MC(400cp))的溶剂中，使得最终每个化合物的浓度为1mg/mL，将药物制剂按照10mL/kg的给药体积灌胃给药CD-1小鼠，给药后15min,30min,1h,2h,4h,6h,8h,24h从颌下静脉或其它合适方式采血，血液样品低温离心6分钟，收集血浆，-80℃保存待测。
【样品分析】取10μL血浆样品，加入200μL含有内标的甲醇作为沉淀剂，沉淀血浆蛋白，萃取血浆中的待测化合物，低温离心，取上清液10μL进样，采用LC-MS/MS分析药物血药浓度。
【数据处理】通过不同时间点血药浓度数据，运用Winnonlin计算药代动力学参数。
【实验结果】实验结果显示,在小鼠药代动力学评价中，本发明化合物、例如实施例化合物显示良好的药代动力学性质。
实施例4:本发明化合物对细胞色素P450抑制试验
本实验评价发明化合物对细胞色素P450的抑制作用。
本实验使用如下试剂进行：人肝微粒体(Corning公司，货号452161)；还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH，MCE公司，货号HY-F0003/CS-4998)；非那西丁，双氯酚酸，α-萘黄酮，奥美拉唑和酮康唑均购自TCI公司；S-美芬妥英和睾酮购自CAYMAN公司；咪达唑仑购自Bioreclamation IVT；奎尼丁购自Damas-beta；磺胺苯吡唑购自MCE；丁呋洛尔购自TRC。
配制0.1M磷酸钾缓冲液(K-buffer)：用磷酸二氢钾和磷酸氢二钾配制100mM磷酸钾缓冲液(K-buffer)，调节pH到7.4。
配制400×受试化合物及阳性对照抑制剂：
配制受试化合物溶液：将8μL的10mM受试化合物储备液溶于12μL乙腈中；配制CYP1A2,CYP2C9和CYP2D6抑制剂的混合溶液：将12μL 1mMα-萘黄酮，10μL 40mM磺胺苯吡唑，10μL 10mM奎尼丁和8μL DMSO溶液混合；配制CYP3A4的抑制剂溶液：将8μL 2.5mM的酮康唑DMSO溶液溶于12μL乙腈中；配制CYP2C19的抑制剂溶液：将8μL100mM的奥美拉唑DMSO溶液溶于12μL乙腈中。
配制4×NADPH磷酸钾溶液：66.7mg NADPH加入到10mL 0.1M K-buffer,pH7.4。配制4×底物磷酸钾溶液：将各个底物按照浓度要求用10mL 0.1M K-buffer配制成4倍浓度测定所需溶液。
配制0.2mg/mL人肝微粒体(HLM)溶液：将10μL 20mg/mL的人肝微粒体加入到990μLK-buffer中，冰浴保存待用。
将600μL的0.2mg/mL HLM加入到96孔板中，加入3μL 400倍受试化合物溶液；将200μL的0.2mg/mL HLM加入到96孔板中，加入1μL稀释后的阳性对照抑制剂溶液。分装30μL化合物与人的肝微粒体的混合溶液到96孔板中，然后再加入15μL的底物溶液。将上述获得的溶液和配制好的NADPH溶液于37℃预热5min。将15μL预热的NADPH溶液加入反应板，混匀，开始反应。37℃孵育反应板。3A4反应5分钟；1A2，2C9，2D6反应10分钟；2C19反应45分钟。反应结束时，加入120μL含内标的乙腈终止反应。样品涡旋振荡10min，采用5594g离心15分钟，制备样品送至LC-MS/MS分析。
【实验结果】
实验结果显示，在测试浓度下，本发明化合物、例如实施例化合物对于药物代谢关键CYP亚型没有显著抑制作用，表现出更好的药物-药物相互作用安全性。
实施例5：本发明化合物对KRAS G12C突变的NCI-H358细胞的增殖抑制效果
本实验评估并验证了本发明代表性化合物对KRAS G12C突变细胞NCI-H358细胞的增殖抑制活性。
将NCI-H358细胞(南京科佰生物科技有限公司，货号为CBP60136，贴壁，培养基RPMI-1640+10％FBS(GIBCO,Cat#10091-148))置于37℃、5％CO2、95％湿度条件下培养。
3D细胞活力检测：收获处于对数生长期的细胞并采用血小板计数器进行细胞计数。用台盼蓝排斥法检测细胞活力，确保细胞活力在90％以上。配制含1％MC(Sigma,Cat#M0512)RPMI-1640培养基并加入10％ FBS配制成3D细胞完全培养基，用3D培养基调整细胞浓度为12500个细胞/mL并使MC的含量为0.65％；分别添加80μL细胞悬液至96孔透明平底黑壁板(Greiner,Cat#655096)中；将96孔板中的细胞置于37℃、5％CO2条件下过夜培养。
IC50测定药物配制：用培养基配制5倍药物溶液，在接种有细胞的96孔板中每孔加入20μL药物溶液，使得工作浓度为最高10μM，3×稀释，9个浓度，每个药物浓度设置2个复孔；或者设置最终测试浓度分别为0.1uM及1.0uM，测试一些代表性化合物在两个浓度下的抑制率，据此推测化合物IC50范围。将已加药的96孔板中的细胞置于37℃、5％CO2条件下继续培养5天，然后进行CTG检测(Luminescent Cell Viability Assay(Promega,Cat#G7573))。
平衡细胞板至室温30分钟并融化CTG试剂，每孔加入50微升的CTG溶液检测，在定轨摇床上振动5分钟使细胞裂解。将细胞板放置于室温25分钟以稳定冷光信号，读取冷光值(多功能酶标仪，PerkinElmer#2105)。
使用GraphPad Prism软件分析数据，利用Dose-response-inhibition方程来拟合数据得出剂量-效应曲线，并由此计算IC50值。
细胞存活率(％)＝(Lum待测药-Lum培养液对照)/(Lum细胞对照-Lum培养液对照)×100％。
代表性本发明化合物对KRAS G12C突变的NCI-H358人肺癌细胞显示出令人满意的抗增殖活性，IC50范围在<1uM，优选<0.1uM。
实施例6：本发明化合物对7株肿瘤细胞的增殖抑制效果
本实验评估并验证了本发明代表性化合物对下列6株KRAS相关肿瘤细胞的增殖抑制活性。
KRAS 细胞系 细胞生长特点 完全培养基
G12V NCI-H441 贴壁 RPMI-1640+10％FBS
G12V Capan-2 贴壁 RPMI-1640+10％FBS
G12S A549 贴壁 DMEM+10％FBS
G13D HCT116 贴壁 RPMI-1640+10％FBS
Q61H NCI-H460 贴壁 RPMI-1640+10％FBS
WT,Amplification EBC-1 贴壁 RPMI-1640+10％FBS
WT A375 贴壁 DMEM+10％FBS
本实验中使用如下材料、试剂和仪器：6株细胞均来自康源博创生物科技(北京)有限公司(NCI-H441，KC-0510；Capan-2，KC-0185；A549，KC-0284；HCT116，KC-0281；NCI-H460，KC-0512；EBC-1，KC-0195；A375，KC-0158)；RPMI-1640(Hyclone,SH30809.01)；胎牛血清FBS(GIBCO,10099-141)；甲基纤维素(methylcellulose，SIGMA，9004-67-5)；磷酸盐缓冲液PBS(Solarbio,P1020-500)；CellCounting-Lite 2.0Luminescent Cell Viability Assay(南京诺唯赞，DD1101-04)；96孔透明平底黑壁板(Thermo,165305)；多功能酶标仪(BMGLABTECH，Plus)；CO2培养箱(Thermo Scientific，Model 3100Series)。
实验方法：
提前配置灭菌的1％methylcellulose 3D培养基。收获处于对数生长期的细胞并采用血小板计数器进行细胞计数。用台盼蓝排斥法检测细胞活力，确保细胞活力在90％以上。调整NCI-H441，A549，HCT116，NCI-H460，EBC-1及A375等细胞浓度，使得甲基纤维素终浓度为0.65％，混匀静置；待细胞悬液中无可见气后分别添加180μL细胞悬液至96孔板中，共2500个细胞。使用完全培养基调整capan-2细胞浓度，分别添加180μL细胞悬液至96孔板中，共3000个细胞。将96孔板中的细胞置于37℃、5％CO2、95％湿度条件下培养过夜。
IC50测定药物配制：首先配制各化合物10mM DMSO储存液。第一次以DMSO为溶剂，3.16倍稀释，9个浓度，制备各化合物不同浓度DMSO溶液。第二次1：100稀释配制10倍各化合物稀释液，以完全培养基为溶剂。最后，在接种有细胞的96孔板中每孔加入20μL各化合物稀释液，最终药物最高浓度为10μM，9个浓度，3.16倍稀释，每个浓度设置三个复孔；或者设置最终测试浓度分别为0.1uM及1.0uM，测试一些代表性化合物在两个浓度下的抑制率，据此推测化合物IC50范围。
将已加药的96孔板中的细胞置于37℃、5％ CO2条件下继续培养144小时，之后进行CTG分析。融化CTG试剂并平衡细胞板至室温30分钟。每孔加入等体积的CTG溶液。在定轨摇床上振动5分钟使细胞裂解。将细胞板放置于室温20分钟以稳定冷光信号。读取冷光值，收集数据。
使用GraphPad Prism 7.0软件分析数据，利用非线性S曲线回归来拟合数据得出剂量-效应曲线，并由此计算IC50值。
细胞存活率(％)＝(Lum待测药-Lum培养液对照)/(Lum溶剂对照-Lum培养液对照)×100％
细胞活性数据如下表所示，其中A表示IC50≤100nM；B表示100nM<IC50≤1000nM；C表示IC50>1000nM。
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参比化合物1及参比化合物2/>参照文献WO2022132200 A1中所述方法进行制备和表征。/>
实施例7：本发明化合物在KRAS-G12D突变的人结肠癌细胞GP2d皮下异种移植BALB/cnude小鼠动物模型中的抗肿瘤作用
【实验材料】：GP2d细胞购自南京科佰生物科技有限公司.BALB/c nude小鼠，雌性，购自江苏集萃药康生物科技有限公司。
【实验步骤】：GP2d细胞在含DMEM和10％FBS的培养液中进行培养，收集对数生长期的细胞，PBS重悬至合适浓度以用于小鼠皮下肿瘤接种。实验小鼠于右后侧背部皮下接种，GP2d细胞接种量为：1×107/只，细胞重悬于1:1的PBS与基质胶中(接种体积为0.1mL)。当肿瘤平均体积生长至～150mm3时，根据肿瘤大小和小鼠体重随机分组给药。分组后随即开始给药，给药当天视为第0天。每天给药2次，灌胃给药，剂量为10mg/kg、30mg/kg或溶剂对照(0.5％Tween 80+99.5％的(0.5％MC(400cp))。实验期间，每周测量2次小鼠的体重和肿瘤的大小。肿瘤大小计算公式：肿瘤体积(mm3)＝0.5×(肿瘤长径×肿瘤短径2)。相对肿瘤抑制率TGI(％)：TGI％＝[1-(某处理组给药结束时平均瘤体积-该处理组开始给药时平均瘤体积)/(溶剂对照组治疗结束时平均瘤体积-溶剂对照组开始治疗时平均瘤体积)]×100％。
【实验结果】：10mg/kg实验结果由下表显示，代表性本发明化合物能够显著抑制GP2d肿瘤生长。
组别 肿瘤体积(mm3)(第14天) TGI％
溶剂对照组 678 /
实施例55 365 60
实施例104 384 56
实施例105 308 70
实施例113 267 78
30mg/kg实验结果由下表显示，代表性本发明化合物能够显著抑制GP2d肿瘤生长。
组别 肿瘤体积(mm3)(第14天) TGI％
溶剂对照组 627 /
实施例53 156 97
。

Claims (21)

1.式(I)的化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，
其中：
M选自N或C-R7；
X选自C和S，p选自0和1，条件是p为0时X为S，p为1时X为C；
Y选自O、S和Se；
W选自OH和NH2；
B选自包含1至3个独立地选自N、O、P、Se和S的杂原子的5-7元单环杂环烷基，和包含1至4个独立地选自N、O、P、Se和S的杂原子的6-12元多环杂环烷基，条件是各自通过氮杂原子连接至分子的嘧啶环部分；
Q选自其中
Z选自N、C、O、S和Se；
k选自0或1；
m和n各自独立地选自0至2的整数；
R1选自-C1-6烷基和-(CH2)n-C3-6环烷基，各自独立地任选被卤素或C1-6烷氧基取代；
R2选自H、-C1-6烷基和-(CH2)n-C3-6环烷基，其中的C1-6烷基或C3-6环烷基各自独立地任选被卤素或C1-6烷氧基取代，
或者连接于同一碳原子上的两个R2与它们所连接的碳原子一起形成C3-4环烷基；
R3选自H、卤素、-CN、-OH、-O-C1-6烷基、-O-C3-6环烷基、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基和-(CH2)n-C3-6环烷基，其中每次出现的C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基或C3-6环烷基各自独立地任选被卤素、CN或C1-6烷氧基取代，
或者连接于同一个碳原子上的两个R3形成＝C(Rc)2、任选被卤素取代的螺C3-6环烷基或任选被卤素取代的螺4-7元杂环烷基，其中Rc各自独立地选自H、卤素和任选被卤素取代的-C1-6烷基，
或者连接于相邻环碳原子上的R1和R3或连接于相邻环碳原子上的两个R3与它们所连接的碳原子一起形成C3-4环烷基；
或者连接在非相邻环碳原子上的两个R3一起形成桥连亚甲基或亚乙基；
R4选自H、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基和-(CH2)n-C3-6环烷基，其中的C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基或C3-6环烷基各自独立地任选被卤素、CN、-C1-6烷氧基或-O-CON(C1-6烷基)2取代；
R5选自H和卤素；
R6选自H、卤素、-C1-6烷基、-O-C1-6烷基、-S-C1-6烷基、-Se-C1-6烷基和-C2-6炔基，各自独立地任选被卤素取代；
R7选自H、卤素、CN和-C1-6烷基，其中-C1-6烷基任选被卤素或CN取代；
R8选自-OH、卤素、-CN、-B(OH)2、-C1-6烷基、-O-C1-6烷基、
-CONH(C1-6烷基)、-CON(C1-6烷基)2、-CON(C1-6烷基)(C2-6烯基)、-CON(C1-6烷基)(C2-6炔基)、
-PO(C1-6烷基)2、-PO(C1-6烷基)(C2-6烯基)、-PO(C1-6烷基)(C2-6炔基)、
-SO-N(C1-6烷基)2、-SO-N(C1-6烷基)(C2-6烯基)、-SO-N(C1-6烷基)(C2-6炔基)、
-SO2-N(C1-6烷基)2、-SO2-N(C1-6烷基)(C2-6烯基)和-SO2-N(C1-6烷基)(C2-6炔基)，
其中-C1-6烷基、-C2-6烯基或-C2-6炔基任选被卤素或CN取代；
R9和R10各自独立地选自H、卤素和任选被卤素取代的C1-6烷基；
R11选自H、卤素、任选被卤素取代的-C1-6烷基、任选被卤素取代的-O-C1-6烷基和任选被卤素取代的-C2-6炔基；和
t选自1至4的整数。
2.权利要求1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中X所在的稠合双环部分为其中R5为卤素，R6选自卤素、C1-6烷基或C2-6炔基，W为-OH，且R9和R10各自独立地选自H或卤素，例如
3.权利要求1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中X所在的稠合双环部分为其中R5为H或卤素，R6选自卤素、C1-6烷基或C2-6炔基，W为-OH，且R9和R10各自独立地选自H或卤素，例如
4.权利要求1至3任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中B为被1-2个R8取代，优选/> 更优选其中R8之一为-OH且另一个为-C1-6烷基。
5.权利要求1至4任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中：
Q为其中R4为任选被-O-C1-6烷基或卤素取代的-C1-6烷基，优选-C1-3烷基；R3选自卤素、CN、任选被卤素取代的-C1-6烷基、任选被卤素取代的-C2-6炔基和任选被卤素取代的-O-C1-6烷基，或者连接于同一个碳原子上的两个R3形成＝C(Rc)2或任选被卤素取代的螺C3-6环烷基，其中Rc各自独立地选自H、卤素和任选被卤素取代的-C1-6烷基，且m选自1或2；
优选地，R3为-C1-3烷基，被卤素取代；或者连接于同一个碳原子上的两个R3形成＝C(Rc)2，其中Rc各自独立地选自H、卤素和任选被卤素取代的-C1-3烷基，例如＝CH2、＝CHF、＝CF2、＝CCl2、＝C(CH3)2、＝C(CF3)2；R4为-C1-3烷基或被一个或多个氘取代的-C1-3烷基，例如甲基、-CD3；
其中与Y连接的亚甲基的两个氢原子任选被氘代替。
6.权利要求5的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中Q为
7.权利要求1至6任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中Y为O。
8.权利要求1至7任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R7选自H、F、Cl、CN和-CF3。
9.权利要求1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其具有以下子通式：
其中各个取代基如前述任一权利要求所定义。
10.权利要求9的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中
Y为O；
Z选自C、Se和O，优选O或C；
R1为C1-6烷基，优选甲基；
R2为H，或连接在同一碳原子上的两个R2一起形成环丙基，
R3选自卤素、CN、任选被卤素取代的-C1-6烷基、任选被卤素取代的-C2-6炔基和任选被卤素取代的-O-C1-6烷基，或者连接于同一个碳原子上的两个R3形成＝C(Rc)2或任选被卤素取代的螺C3-6环烷基，其中Rc各自独立地选自H、卤素和任选被卤素取代的-C1-6烷基；优选地，R3为-C1-3烷基，被卤素取代；或者连接于同一个碳原子上的两个R3形成＝C(Rc)2，其中Rc各自独立地选自H、卤素和任选被卤素取代的-C1-3烷基；
R4选自H和C1-6烷基，优选C1-6烷基，例如甲基或乙基；更优选，R4为-C1-3烷基或被一个或多个氘取代的-C1-3烷基，例如甲基、-CD3；
R5选自H和卤素，优选卤素，例如F；
R6选自卤素、C1-6烷基和C2-6炔基，优选F、乙基或乙炔基；
R7选自H、卤素、CN和卤素取代的C1-6烷基，优选H、F、Cl、CN、CF3；
R8选自OH和C1-6烷基，优选其中之一为-OH且另一个为C1-6烷基，优选甲基；
R9为H或卤素，优选H；
R11选自H、卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基和-C2-6炔基；
m选自1或2，k选自0；
其中与Y连接的亚甲基的两个氢原子任选被氘代替。
11.权利要求10的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中对于式(I-A’-2)、(I-C’-2)、(I-A”’-2)或(I-C”’-2)，
Z为C；
R1为C1-6烷基，优选甲基；
R3为-C1-3烷基，被卤素取代；或者连接于同一个碳原子上的两个R3形成＝C(Rc)2，其中Rc各自独立地选自H、卤素和任选被卤素取代的-C1-3烷基；
R4为-C1-3烷基或被一个或多个氘取代的-C1-3烷基，例如甲基、-CD3；
R5选自H和卤素，优选卤素，例如F；
R6选自卤素、C1-6烷基和C2-6炔基，优选乙基或乙炔基；
R7选自H、卤素、CN和卤素取代的C1-6烷基，优选H、F、Cl、CN、CF3；
R8选自OH和C1-6烷基，优选其中之一为-OH且另一个为C1-6烷基，优选甲基；
R9为H；
R11选自H、卤素、C1-6烷基和C1-6烷氧基；
其中与Y连接的Q的亚甲基的两个氢原子任选被氘代替。
12.权利要求9至11任一项的化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中分别为/>
13.权利要求9至12任一项的化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中结构片段为/>
14.化合物或其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其为实施例1-185的化合物。
15.药物组合物，包含根据权利要求1-14任一项的化合物其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，以及药学上可接受的赋形剂。
16.权利要求1-14任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物或权利要求15的药物组合物，用作药物，用于治疗和/或预防由KRas突变及KRAS扩增介导的疾病。
17.权利要求1-14任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物或根据权利要求15的药物组合物在制备用于预防或治疗由KRas突变及KRAS扩增介导的疾病的用药物中的用途。
18.权利要求17的用途，其中由KRas突变及KRAS扩增介导的疾病选自：胰腺癌、肺癌、肺腺癌、骨癌、皮肤癌、头颈癌、皮肤或眼内黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛门区域癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金病、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、慢性或急性白血病、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、肾脏或输尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌、中枢神经系统肿瘤(CNS)、原发性CNS淋巴瘤、脊柱肿瘤、脑干神经胶质瘤或垂体腺瘤。
19.权利要求18的用途，其中由KRas突变及KRAS扩增介导的疾病选自胰腺癌、结肠癌、直肠癌、肺腺癌、肺癌、胆管癌、子宫内膜癌、卵巢癌、白血病；最优选选自胰腺癌、结肠癌、直肠癌、肺腺癌、胆管癌。
20.治疗和/或预防由Ras突变蛋白、尤其是KRas突变蛋白及KRAS扩增介导的疾病的方法，包括向有需要的对象施用治疗有效量的根据权利要求1-14任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物或根据权利要求15的药物组合物。
21.权利要求20的方法，其中由KRas突变及KRAS扩增介导的疾病选自胰腺癌、结肠癌、直肠癌、肺腺癌、肺癌、胆管癌、子宫内膜癌、卵巢癌、白血病；最优选选自胰腺癌、结肠癌、直肠癌、肺腺癌、胆管癌。
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