CN117615777A - 包含铁蛋白或其同源物的重组宿主 - Google Patents

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Abstract

本文公开了包含至少第一染色体组和第二染色体组的重组宿主，其中第一染色体组和第二染色体组中的至少一个包含编码铁蛋白或其同源物的重组基因。本文还公开了包含原养型微生物的重组宿主，该原养型微生物包含编码铁蛋白或其同源物的重组基因。重组宿主可以包括在组合物、可摄入物品、膳食补充剂或药物组合物中。本文还公开了向受试者施用本发明的组合物的方法。

Description

包含铁蛋白或其同源物的重组宿主
技术领域
本公开涉及包含铁蛋白或其同源物的重组宿主。
背景技术
铁吸收不足或铁损失过多导致非最佳的血液和/或组织铁水平并伴随多种症状。目前铁替代疗法的行业标准是硫酸铁补充剂的口服施用。然而，此类补充剂具有有限的功效，因为铁吸收不良或者补充剂依赖于环境条件来产生稳定水平的铁。硫酸铁补充剂的使用也会导致胃肠道不适。
发明概述
本文公开了重组宿主，其包含：至少第一染色体组和第二染色体组，其中第一染色体组和第二染色体组中的至少一个包含编码铁蛋白或其同源物的重组基因。
本文还公开了重组宿主，其包含：包含编码铁蛋白或其同源物的重组基因的原养型微生物。
本文还公开了包含本发明的重组宿主的组合物。
本文还公开了包含本发明的组合物的可摄入物品。
本文还公开了包含本发明的组合物的膳食补充剂。
本文还公开了包含本发明的组合物的药物组合物。
本文还公开了向受试者施用本发明的组合物的方法。
附图说明
图1显示了人H-铁蛋白的氨基酸序列(SEQ ID NO:1)。
图2显示了人H-铁蛋白的核酸序列(SEQ ID NO:2)。
图3是显示了含有人H-铁蛋白基因FTH1和可选择的URA3基因的铁蛋白表达盒的结构的示意图。使用寡核苷酸引物O-730和O-731通过PCR从质粒RLK/pL5659扩增铁蛋白表达盒。双水平线表示3.2kbp铁蛋白表达盒；空心箭头表示引物的位置，其中箭头指示DNA合成的方向(5’至3’)；阴影线箭头表示开放阅读框(ORF)，其中箭头点指示基因的3’末端(所编码蛋白质的羧基末端)；空心箭头指示组成型、高表达的酵母TDH3启动子的位置，其中箭头指示转录方向(5’至3’)；空心块表示酵母CYC1终止子。
图4显示了图3中所示的表达盒的核酸和氨基酸序列(SEQ ID NO:3)。
图5是示出了含有TDH3启动子的铁蛋白表达盒的染色体整合的示意图。双水平线表示3.2kbp铁蛋白表达盒；交叉阴影箭头表示引物的位置，其中箭头指示DNA合成的方向(5’至3’)；阴影线箭头表示开放阅读框(ORF)，其中箭头点指示基因的3’末端(所编码蛋白质的羧基末端)；空心箭头表示组成型、高表达的酵母TDH3启动子的位置，其中箭头指示转录方向(5’至3’)；空心块表示酵母CYC1终止子。
图6显示了图5中所示的TDH3处染色体整合的铁蛋白表达盒的核酸序列(SEQ IDNO:4)。
图7比较了实施例1中与用单倍体酵母-铁蛋白络合物处理的大鼠相比，用二倍体酵母-铁蛋白络合物处理的大鼠的血红蛋白恢复。
图8显示了实施例1中与用单倍体酵母-铁蛋白络合物处理的大鼠相比，用二倍体酵母-铁蛋白络合物处理的大鼠的血细胞比容恢复。
图9A显示了基于1g酵母样品的重量百分比的单倍体酵母样品和二倍体酵母样品的铁含量。
图9B显示了单倍体酵母样品和二倍体酵母样品的H-铁蛋白含量。
发明详述
为了以下详细描述的目的，应当理解，本发明可以假定各种替代变型和步骤顺序，除非明确地指出相反的情况。此外，除了在任何操作实例中或另外指出的情况外，所有数字，例如表达值、量、百分比、范围、子范围和分数的那些数字，都可以被理解为好像以词语“约”开头，即使该术语没有明确出现。因此，除非有相反的指示，否则在以下说明书和所附权利要求中阐述的数值参数是近似值，其可以根据本发明要获得的期望结果而变化。至少，并且不试图将等同原则的应用限制于权利要求的范围，每个数值参数应当至少根据所报告的有效数字的数量并通过应用普通的舍入技术来解释。当本文描述封闭或开放式数值范围时，该数值范围内或由该数值范围涵盖的所有数字、值、量、百分比、子范围和分数均应被视为具体包括在并属于本申请的原始公开内容，就好像这些数字、值、量、百分比、子范围和分数已被完整地明确写出。
尽管阐述本发明的广泛范围的数值范围和参数是近似值，但是尽可能精确地报告了具体实例中阐述的数值。然而，任何数值本质上都含有一定的误差，这些误差必然是由其各自的测试测量中存在的标准偏差引起的。
如本文所使用的，除非另外指出，否则复数术语可以涵盖其单数对应物，反之亦然，除非另外指出。例如，虽然本文提及“一种”酵母物种或“一组”染色体，但可以使用这些组分的组合(即，多个)。另外，在本申请中，除非另外具体说明，否则“或”的使用意味着“和/或”，尽管在某些情况下可以明确地使用“和/或”。
如本文所使用的，“包括”、“含有”和类似术语在本申请的上下文中应理解为与“包含”同义，因此是开放式的并且不排除额外的未描述的和/或未叙述的元素、材料、成分和/或方法步骤的存在。
如本文所用，“由......组成”在本申请的上下文中被理解为排除任何未指定的元素、成分和/或方法步骤的存在。
如本文所用，“基本上由...组成”在本申请的上下文中被理解为包括指定的元素、材料、成分和/或方法步骤“以及那些不实质上影响所描述的内容的一种或多种基本和新颖特性的元素、材料、成分和/或方法步骤”。
如本文所用，“重组宿主”是指其基因组被至少一种重组基因扩张或引入的宿主。“扩张”或“引入”是指由人为干预引起的扩张或引入。示例性重组宿主包括但不限于植物、真菌(例如酵母)、细菌或动物(例如犬、猪或牛)。
如本文所用，“重组基因”是其中已插入一个或多个基因或基因片段从而产生新的遗传组合的核酸序列。重组基因通常是在其使用环境中并非天然存在的基因。重组基因可以是在该序列天然不存在的整合位点处整合到重组宿主染色体中的基因。重组基因可以是来自重组宿主以外的物种的DNA序列。重组基因可以是天然存在于重组宿主中的基因的一个或多个附加拷贝，其插入重组宿主基因组的附加位置以允许该DNA序列的基因产物的过表达或改变的表达。
如本文所用，“单倍体”是指含有一个染色体组的细胞。
如本文所用，“一个染色体组”是指单倍体的基因组。
如本文所用，“二倍体”是指含有两个同源染色体组的细胞。
如本文所用，“多倍体”是指含有多于两个同源染色体组的细胞。
如本文所用，“非整倍体”是指含有异常数量的染色体的细胞。“染色体数量异常”是指与给定生物体中正常染色体数量不同的染色体数量。例如，酿酒酵母(S.cerevisiae)细胞包含16条染色体。非整倍体酿酒酵母细胞可包含例如15条染色体或17条染色体(即，除16之外的任何数量)。
如本文所用，“同源”是指具有相似着丝粒位置、基因组成和长度的染色体对。
如本文所用，“两个染色体组”是指二倍体的基因组。
如本文所用，“同源物”是指同源对的一个染色体。
如本文所用，“原养型微生物”或“原养型的”是指可以从无机材料合成其营养物的微生物。
如本文所用，“交配”是相反交配类型的两个细胞(典型地是单倍体)融合，通常形成二倍体的过程。
如本文所用，“铁蛋白”是在大多数生物体(包括原核生物和真核生物)中充当主要细胞内铁储存蛋白的球状蛋白。铁蛋白是一种大型(近480kDa)多亚基络合物，其包含24个多肽亚基，在水合氧化铁核心内能够含有多达4,500个铁离子(Fe2+或Fe3+)的原子。
如本文所用，“可摄入”是指能够经口服摄入体内。
如本文所用，“医疗食品”是指被设计为经肠消耗或施用用于治疗具有仅通过正常饮食无法满足的独特营养需求的疾病的食品。
如本文所用，“膳食补充剂”或“营养补充剂”是指除了膳食之外为了补充受试者的饮食而消耗的物品。
如本文所用，“组合物”是指溶液、分散体或固体，例如粉末。
如本文所用，“药物组合物”是指当正确施用于受试者时能够诱导治疗或代谢效果的任何化学或生物组合物、材料、试剂等，包括组合物、材料、试剂等的无活性形式及其活性代谢物，其中此类活性代谢物可以在体内形成。
如本文所用，“受试者”或“患者”是指动物，包括哺乳动物，包括人、犬、猫、牛、马、猪、灵长类动物和/或啮齿类动物。
如本文所用，“施用”一定量(例如，一剂)的组合物可以由受试者他/她自己或另一受试者(例如，医学专业人员、看护者、家庭成员)来完成。组合物可以由受试者或受试者的施用者连同组合物施用的说明(例如，含有组合物的容器的标签上的书面说明)一起提供。
如本文所用，“治疗”或“处理”是指向患者或受试者提供的治疗性、预防性或防止性的措施，其目的在于防止病理学或症状发展或改变患者或受试者所经历的病理学或症状，例如，由病症(该病症可包括缺铁病症或肠道微生物组病症)引起的病理学或症状。施用于患者或受试者的“治疗”可以使患者或受试者所治疗的病况达到并包括完全消除的任何临床或定量可测量的减轻。“治疗”是指治疗性治疗和预防性或防止性措施。“治疗”也可以指定为姑息疗法。“治疗”还可以包括施用组合物作为膳食铁源。需要治疗的对象包括那些已经患有一种或多种缺铁性病症的对象、那些需要预防该病症的对象，以及那些可能受益于铁补充剂的对象。
如本文所用，“膳食管理”是指通过施用医疗食品、食品成分或膳食补充剂来治疗病况。
如本文所用，“盐”是指由金属阳离子和非金属阴离子组成且总电荷为零的离子化合物。盐可以是水合的或无水的。
如本文所用，关于本发明的组合物，“干物质”是指基于组合物的总重量，该组合物具有不超过10重量％的水。
如本文所用，“干物质基础”是指通过以干物质含量表示组分的浓度来表示组合物中组分的浓度的方法。
如本文所用，“铁络合物”或“有机铁络合物”是含有与有机物络合或以其他方式键合(例如，离子键)的处于(II)或(III)氧化态的铁的化合物。合适的有机铁络合物的实例包括但不限于铁聚合物络合物、铁碳水化合物络合物和铁氨基聚糖络合物。
如本文所用，“紧密连锁”是指第一基因位于第二基因的五厘摩之内。
如本文所用，“厘摩”是指一种测量单位，其等于由于在单代中的交换而使染色体上的第一标记与同一染色体上的第二标记分离的1％机会。
如本文所用，“铁”是指元素铁，其可以是盐的形式，例如但不限于氧化铁、硫酸铁和氢化铁。
如本文所用，“铁缺乏”或“缺铁”是指受试者具有≤25％的TSAT和≤100ng/mL的血清铁蛋白浓度的病况。
如本文所用，“贫血”是指受试者的血红蛋白浓度低于13g/dL的病况；基于对健康相关生活质量问卷的答复，受试者可能表现出通常与涉及缺铁、铁摄取和/或铁代谢的病症或疾病相关的症状。如本文所用，“缺铁性贫血”是指受试者具有小于20％的TSAT、小于50ng/mL的血清铁蛋白浓度和小于13g/dL的血红蛋白浓度的病况。基于对健康相关生活质量问卷的答复，受试者可能表现出通常与涉及缺铁、铁摄取和/或铁代谢的病症或疾病相关的症状。缺铁性病症的实例包括由铁的膳食摄入或吸收不足引起的缺铁。缺铁性病症可能与例如营养不良、妊娠(包括产后期)、严重子宫出血、慢性疾病(包括慢性肾病)、癌症、肾透析、胃旁路手术、多发性硬化症、不安腿综合征、糖尿病(例如I型或II型糖尿病)、胰岛素抵抗和注意力缺陷障碍有关。
如本文所用，“转铁蛋白饱和度(TSAT)”是指血清铁与总铁结合能力(TIBC)的比率。
如本文所用，“总铁结合能力(TIBC)”是指可以与血清蛋白结合的铁的总量。
如本文所用，“功能性选择标记”或“功能性选择标记基因”是指在某些条件下为重组宿主的繁殖提供生长优势的遗传元件。
如本文所用，“生长优势”是指重组宿主的90％或更多的后代包含遗传盒。
如本文所用，“遗传盒”包含功能性选择标记基因和编码铁蛋白的基因。
如本文所用，“突变体”是指非功能性基因。如本文所用，“非突变体”是指功能性基因。
本文公开了重组宿主，其包含、或基本上组成为、或组成为编码铁蛋白或其同源物的重组基因。
本文还公开了重组宿主，其包含、或基本上组成为、或组成为至少第一染色体组和第二染色体组，其中第一染色体组和第二染色体组中的至少一个包含编码铁蛋白或其同源物的重组基因。
本文还公开了包含原养型微生物的重组宿主，该原养型微生物包含、或基本上组成为、或组成为编码铁蛋白或其同源物的重组基因。
如上所述，重组宿主可以表达铁蛋白(例如，重组宿主可以包含编码铁蛋白或其同源物的基因)。编码铁蛋白或其同源物的基因允许重组宿主通过铁蛋白基因的表达来产生铁蛋白。合适的铁蛋白可包含哺乳动物或植物H-铁蛋白亚基和/或L-铁蛋白亚基。可以使用来自任何物种的任何H-铁蛋白亚基，只要它编码H-铁蛋白即可。H-铁蛋白亚基可以是哺乳动物H-铁蛋白亚基，例如，人、犬、猫、牛、马、猪、灵长类动物和/或啮齿类动物。H-铁蛋白亚基可以是人H-铁蛋白(FTH1)(SEQ.ID.NO.1；参见图1；还参见图2)。H-铁蛋白还可以是人H-铁蛋白的天然存在的或合成的同源物或变体。H-铁蛋白同源物可以与人H-铁蛋白具有80％至100％的序列同一性，例如与人H-铁蛋白具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性，并保留结合铁并形成多亚基铁蛋白-铁络合物的能力(如下所述)，但可以突变以提供铁和铁蛋白之间不同的结合和解离强度。任选地，铁蛋白可以是或包括L-铁蛋白。例如，与L-铁蛋白相比，铁蛋白亚基可包含至少20％H-铁蛋白，例如与L-铁蛋白相比，包含至少20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％ H-铁蛋白。任选地，所有铁蛋白亚基(即，100％的铁蛋白亚基)可以是H-铁蛋白，或者所有铁蛋白亚基(即，100％的铁蛋白亚基)可以是L-铁蛋白。
根据本发明，H-铁蛋白可以是重组H-铁蛋白。例如，H-铁蛋白可以是人H-铁蛋白或其同源物，其在微生物菌株中产生，该微生物菌株包含在适当启动子控制下的编码H-铁蛋白的多核苷酸序列(参见SEQ ID NO:3；还参见图3和4)。编码铁蛋白的重组基因可以是染色体外的(游离基因)或者可以是染色体整合的(参见SEQ ID NO:4；还参见图5和6)。
重组宿主可以是原养型的。原养型重组宿主可以是二倍体、多倍体或非整倍体。可用于本发明的合适的二倍体重组宿主的实例包括但不限于真菌、藻类、原生动物、微小蠕虫、微生物或其组合。可用于本发明的合适的多倍体或非整倍体重组宿主的实例包括但不限于真菌、植物或其组合。例如，适合于铁的营养补充的重组微生物菌株可以以对包括人类在内的哺乳动物具有高生物利用度的形式(例如满足人类食用的一般公认安全(GRAS)要求的那些)储存铁。可用于生产治疗化合物的方法中的其他微生物也可用于本发明的组合物中。真菌可以是例如酵母。酵母的非限制性实例包括以下属的各种物种：酵母属(Saccharomyces)、裂殖酵母属(Schizosaccharomyces)、克鲁维酵母菌属(Kluyveromyces)或毕赤酵母属(Pichia)。藻类的非限制性实例包括衣藻属(Chlamydomonas)的各种物种。重组宿主可以含有可能对本发明的组合物的重量有贡献的杂质，但这些重量不包括在组合物的总干物质重量中。
如上所述，重组宿主可以是二倍体和原养型的。当重组宿主是二倍体和原养型时，每个基因的非突变拷贝存在于两个染色体组中的至少一个上。这使得二倍体重组宿主能够从无机材料中产生自我维持所需的所有营养物质，从而使其成为原养型。
如图3和图5所示，在实例中，H-铁蛋白基因可以稳定地整合到单倍体重组宿主的染色体组中。在其他实例中，二倍体、多倍体或非整倍体重组宿主的第一染色体组可包含稳定整合的H-铁蛋白基因。出于本申请的目的，术语“第一染色体组”和“第二染色体组”是为了方便起见而使用的，并不表示特定的顺序或对染色体数量的限制(即，可以有两个、或三个、或更完整或部分的染色体组，为了方便起见，本文将其称为“第二染色体组”)。在其他实例中，二倍体重组宿主的两个染色体组或者多倍体或非整倍体的至少两条染色体可包含稳定整合的H-铁蛋白基因。H-铁蛋白基因可以与任何功能性选择标记基因紧密连锁，构成遗传盒。合适的功能性选择标记基因是本领域技术人员已知的，例如URA3、LEU2、TRP1、HIS3或MET15。例如，H-铁蛋白基因可以与URA3基因紧密连锁。存在于重组宿主染色体中的功能性选择标记基因的拷贝可以是功能性选择标记基因的突变体，从而使其无功能。如本领域技术人员将理解的，这促进了对包含第一单倍体的遗传盒的单倍体的选择，并且第二单倍体可以是突变的URA3基因。为了清楚起见，除了H-铁蛋白基因和功能性选择标记基因之外，遗传盒还可以包含本领域技术人员已知的其他组件，包括例如启动子和终止子。
包含H-铁蛋白基因的重组宿主可包含至少一种二倍体细胞、多倍体细胞或非整倍体细胞。单倍体包含一整套染色体。当重组宿主是二倍体时，相反交配类型的两个单倍体交配形成二倍体重组宿主。重组二倍体宿主的第一染色体组中的一条染色体可以包含重组H-铁蛋白基因。重组H-铁蛋白基因可以是染色体整合遗传盒的一部分。重组H-铁蛋白基因编码用于产生H-铁蛋白的氨基酸序列。H-铁蛋白编码序列可置于遗传盒中适当启动子的控制下，以产生足够高水平的铁储存蛋白，以便重组宿主作为铁补充的合适载体。合适的启动子是本领域已知的，并且包括诱导高水平组成型表达的启动子和可以通过环境条件调节其表达的启动子。例如，在酵母重组宿主中，合适的组成型启动子可以是酵母TDH3转录启动子。例如，在酵母重组宿主中，合适的可调节启动子可以是酵母GAL1启动子。此外，可以进一步操纵重组宿主的遗传组成以实现多种潜在的有利结果。例如，可以操纵蛋白水解来增强铁储存蛋白的稳定性。可以操纵铁转运机制来实现期望的结果，例如改变特定细胞区室中的铁浓度，包括但不限于细胞表面、液泡或线粒体的铁浓度。重组宿主的铁含量可以通过向重组宿主生长的培养基中添加已知量的铁化合物来调节。使用重组宿主，可以通过包括但不限于以下方式的多种方式中的任一种来完成对人和其他动物的铁补充：吸收或摄入重组宿主。重组宿主可以专门出于补充铁的目的而生长，或者可以是另一个过程(例如发酵)的副产品。在实例中，二倍体、多倍体或非整倍体重组宿主可能仅具有原养型酵母的典型营养需求。也就是说，由于遗传突变而导致的一个编码铁蛋白的染色体组的营养缺陷型需求由第二染色体组中基因的非突变拷贝的存在来补充。类似地，由于遗传突变而导致的第二染色体组的营养缺陷型需求由第一染色体组中基因的非突变拷贝的存在来补充。
在实例中，第二染色体组可以不表达铁蛋白。另外，第二染色体组可以不表达功能性选择标记。即，第二染色体组可以不包含遗传盒。例如，第一染色体组可以包含突变的LEU2基因，其参与亮氨酸(一种产生蛋白质所必需的氨基酸)的合成。第二染色体组可包含非突变的LEU2基因，使得包含至少第一染色体组和第二染色体组的二倍体、多倍体或非整倍体能够合成亮氨酸。第二染色体组合成亮氨酸的能力弥补了第一染色体组无法合成氨基酸的缺陷。结果，二倍体、多倍体或非整倍体重组宿主能够产生原养型酵母合成的所有正常营养物质(即，重组宿主是原养型微生物)。也就是说，每个基因的非突变拷贝存在于二倍体重组宿主中的两个同源染色体中的至少一个中、多倍体重组宿主中的三个或更多个同源染色体中的至少一个中、或者非整倍体或非整倍体重组宿主中至少两个染色体组中的至少一个中。
例如，第一染色体组可以包含突变的URA3基因，其参与尿嘧啶(一种合成核糖核酸(RNA)所必需的碱基)的合成。第二染色体组可以包含非突变的URA3基因，从而允许第二染色体组能够合成尿嘧啶。第二染色体组合成尿嘧啶的能力弥补了第一染色体组无法合成碱基的缺陷。结果，二倍体或多倍体重组宿主可以产生原养型酵母合成的所有正常物质(即，重组宿主是原养型微生物)。
在其他实例中，第一染色体组和第二染色体组可以编码铁蛋白。两个染色体组均可以另外编码功能性选择标记基因。即，两个染色体组均包含遗传盒。当两个染色体组都表达遗传盒时，该遗传盒可以位于不同的基因座，使得每个染色体组具有不同的突变。例如，第一染色体组可以包含突变的LEU2基因和非突变的URA3基因，而第二染色体组包含非突变的LEU2基因和突变的URA3基因。
本发明还公开了包含本文公开的重组宿主之一的组合物。在一个实例中，组合物可包含、或基本上组成为、或组成为包含至少第一染色体组和第二染色体组的重组宿主，其中第一染色体组和第二染色体组中的至少一个包含编码铁蛋白或其同源物的重组基因。在另一个实例中，组合物可以包含、或基本上组成为、或组成为包含含有编码铁蛋白或其同源物的重组基因的原养型微生物的重组宿主。组合物还可包含铁。重组宿主表达的铁蛋白和铁可以形成铁蛋白-铁络合物。铁源可以是铁盐、有机铁络合物、元素铁纳米颗粒、或其组合。合适的铁盐的实例包括但不限于硫酸铁。合适的铁络合物的实例包括但不限于铁聚合物络合物、铁碳水化合物络合物和铁氨基聚糖络合物。这些有机铁络合物可以是市售的和/或可以通过本领域已知的方法合成。铁碳水化合物络合物的合适的非限制性实例包括铁糖络合物、铁寡糖络合物和铁多糖络合物，例如羧基麦芽糖铁、蔗糖铁、聚异麦芽糖铁(葡聚糖铁)、聚麦芽糖铁(糊精铁)、葡萄糖酸铁、山梨醇铁和氢化葡聚糖铁，其可以进一步与其他化合物例如山梨醇、柠檬酸和葡萄糖酸络合(例如糊精铁-山梨醇-柠檬酸络合物和蔗糖铁-葡萄糖酸络合物)及其混合物。铁氨基聚糖络合物的合适的非限制性实例包括硫酸软骨素铁、硫酸皮肤素铁和/或硫酸角质素铁，它们各自可以进一步与其他化合物及其混合物络合。铁氨基聚糖络合物的实例包括但不限于透明质酸铁、铁蛋白络合物、以及它们的混合物。
铁可以以基于表达铁蛋白和铁的重组宿主的干物质的至少1％的重量的量存在于组合物中，例如至少3％的重量，例如至少5％的重量，例如至少5.5％的重量。铁可以以基于表达铁蛋白和铁的重组宿主的干物质的不超过15％的重量的量存在，例如不超过10％的重量，例如不超过9.5％的重量，例如不超过8％的重量。铁可以以基于表达铁蛋白和铁的重组宿主的干物质的1％的重量至15％的重量的量存在于组合物中，例如3％至12％的重量，例如3％至8％的重量，例如5％至10％的重量，例如5.5％至9.5％的重量。
组合物可包含不与铁蛋白或其同源物络合的细胞内和/或细胞外铁。
根据本发明，在一些情况下，至少5％的铁可以与铁蛋白络合，例如至少10％的铁可以与铁蛋白络合，例如至少15％、例如至少20％、例如至少30％、例如至少40％、例如至少50％、例如至少60％、例如至少70％、例如至少80％、例如至少90％、例如100％的铁可以与铁蛋白络合。根据本发明，在一些情况下，不超过95％的铁可以与铁蛋白络合，例如不超过90％的铁可以与铁蛋白络合。根据本发明，5％至100％的铁可以与铁蛋白络合，例如10％至100％，例如30％至95％，例如50％至90％，例如60％至90％，例如75％至90％的铁可以与铁蛋白络合。
本发明的组合物还可任选地包含第二重组宿主。如本文所用，关于重组宿主的术语“第二”是指单独且不同的重组宿主，并且不一定意味着仅存在两个重组宿主。第二重组宿主可包含上文讨论的任何重组宿主。第二重组宿主可包含表达铁蛋白的重组宿主、不表达铁蛋白的重组宿主或其组合。第二重组宿主可以另外或替代地包含益生菌、益生元或其组合。
本文描述的任何组合物可以包含在可摄入物品中。在实例中，表达铁蛋白的重组宿主可以包含在可摄入物品中。例如，可摄入物品可以是医疗食品、食品、食品成分、膳食补充剂、药物组合物或其组合。在其他实例中，本文描述的任何组合物可以是栓剂的形式。在其他实例中，本文描述的任何组合物可以是膳食或营养补充剂。在实例中，表达铁蛋白的重组宿主可以包含在膳食补充剂或营养补充剂中。
在其他实例中，本文所述的任何组合物可包含在药物组合物中。可以施用药物组合物来治疗例如缺铁性病症，例如贫血。每当高剂量的铁有利于治疗铁缺时，就可以施用药物组合物。
本文所述的组合物可以是干粉、液体中干粉的分散体、液体中干粉的混悬剂、栓剂、泡沫灌肠剂、液体灌肠剂等形式，并且可以配制成以口服或直肠施用的方式施用。本发明的组合物可包含药学上可接受的载体或稀释剂(本文所述)以形成溶液、分散体、乳剂、微乳剂、混悬剂、糖浆、酏剂等，使得材料可被吞咽。可包括pH调节剂(即，酸或碱)以将pH调节至适当水平，和/或可包括细菌和抗真菌剂以防止微生物的作用。药物组合物还可以包括控制或减缓药剂在体内释放的制剂。在一些情况下，药物组合物可以包括在分配器中，例如注射器、剂量瓶等。
可摄取稀释剂或载体的实例是糖，例如单糖、二糖等；赋形剂，例如可可脂和蜡；油类，例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；二醇类，例如丙二醇；酯类，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，例如氢氧化镁和氢氧化铝；海藻酸；无热原水；等渗盐水；林格氏溶液；乙醇；磷酸盐缓冲溶液；其他无毒兼容润滑剂，例如月桂醇硫酸钠和硬脂酸镁；着色剂；脱模剂；包衣剂；根据配方判断的防腐剂和抗氧化剂。
本文描述的组合物可以从加压容器中排出，或者可以是粉末、颗粒或锭剂的形式。组合物还可包含至少一种粘合剂和/或至少一种填充剂。合适的粘合剂和填充剂的实例包括但不限于硬脂酸镁、微晶纤维素、纤维素凝胶、纤维素胶、羧甲基纤维素、木浆、大豆卵磷脂、甘氨酸、谷氨酸钠、植物蛋白、海藻或提取物、角叉菜胶、或其组合。
如本文所用，术语“药学上可接受的”意指在制药和兽医领域中使用是可接受的、与制剂的其他成分相容、并且无毒或以其他方式不可接受并且与合理的效益/风险比相称。本文所用的“药学上可接受的载体”包括任何和所有溶剂、稀释剂或其他液体媒介物、分散或悬浮助剂、表面活性剂、等渗剂、增稠剂和乳化剂、稳定剂、防腐剂、固体粘合剂、润滑剂等，适合于所需的特定剂型。Remington’s Pharmaceutical Sciences 19th Ed.byGennaro,Mack Publishing,Easton,PA 1995提供了用于配制药物组合物的各种载体及其制备的已知技术。
本领域技术人员理解，多种因素影响有效治疗患者所需的剂量，并且相应地，剂量和施用可以由主治医师根据待治疗的患者来选择，并且可以进行调整以用于一种或多种活性剂或维持所需效果的足够水平。可以考虑的另外的因素包括疾病状态的严重程度，例如疾病的中期或晚期；患者的年龄、体重、性别和整体健康状况；饮食、施用时间和频率；缺铁的形式；施用途径；药物组合；反应敏感性；先前治疗；和对治疗的耐受性/反应。药物组合物可以例如每30分钟、每小时或每天；每天多次；每周，每周多次；每两周一次；每月；等等施用。
本发明的活性剂可用于治疗本文公开的任何疾病、病症等，并且可以以适合于待治疗的患者或受试者的有效剂量施用。如上所述，本发明组合物的有效剂量可由主治医师在合理的医学判断和经验的范围内决定。对于活性剂，最初可以在细胞培养测定中或在动物模型例如小鼠、大鼠、兔、狗或猪中估计有效剂量。动物细胞模型可用于实现或确定所需浓度和总剂量范围以及施用途径，其可用于确定用于人类施用的可用剂量范围和途径。此外，临床研究和个体患者的反应可以确定推荐的有效剂量。
本文所述的组合物之一的有效剂量可以以每剂至少13mg铁的剂量水平施用，例如每剂至少50mg，例如每剂至少75mg，例如每剂至少100mg或更多。本文所述的组合物之一的有效剂量可以以每剂不超过1000mg、例如每剂不超过700mg、例如每剂不超过300mg的剂量水平施用。本文所述的组合物之一的有效剂量可以以每剂13mg至1000mg铁的剂量水平施用，例如每剂50mg至700mg，例如每剂75mg至300mg，例如每剂100mg至300mg。如本文所述，剂量水平可以作为向受试者或患者施用的单次剂量来施用，或者通过在一天的过程中达到剂量水平的多次施用来施用。剂量水平还可以是每周、每周、每两周一次或每月多次施用的铁的总量除以施用之间的天数，其中，该剂量的铁以上述剂量水平平均每天施用。
如上所述，本文所述的方法通常包括向受试者施用本文所述的任何组合物。该方法可以包括、或基本上组成为、或组成为:施用组合物，该组合物包含、或基本上组成为、或组成为:(a)表达铁蛋白的重组宿主和(b)含量为至少1％的基于表达铁蛋白和铁的重组宿主的干物质重量的铁；其中至少60％的铁与铁蛋白络合。例如，公开了用于治疗受试者的方法，该方法包括向受试者施用本文所述的任何组合物。该施用可以包括向受试者施用有效量的至少一种本文所述的组合物。如本文所用，术语“有效量”或“有效剂量”是指用于治疗(即，调节、改善或预防缺铁症状或病况)同时不超过可能引起副作用的任何量的组合物的量。有效剂量可以在治疗过程中增加或减少。用于评价有效治疗的有效性或毒性的方法是本领域技术人员已知的，例如ED50(对50％的人群有效的剂量)和LD50(对50％的人群致死的剂量)。毒性作用与有效作用的剂量比是治疗指数，表示为LD50/ED50的比值。值得注意的是，ED50和LD50可随着受试者的年龄或状况而变化。
组合物可以作为单剂量或多剂量(即，第一、第二、第三等剂量)同时或顺序施用，使得在施用组合物的第一剂量之后施用组合物的第二剂量，或反之亦然。当顺序施用第一剂量和第二剂量时，该方法可以包括在施用剂量之间等待一段时间。第一、第二、第三等剂量可包含相同或不同量的铁。如本文所用，术语“顺序”是指其中在施用本发明的组合物的第二剂量之后施用本发明的组合物的第一剂量的治疗方案。如本文所用，术语“同时”是指施用本发明的组合物的第一剂量和施用本发明的组合物的第二剂量，其中第一剂量和第二剂量是分开的并且基本上是同时施用的。
根据本发明，可以通过向受试者施用本文所述的任何组合物，例如施用有效量的本文所述的任何组合物来治疗受试者的缺铁。例如，治疗受试者的方法可以包括、或基本上组成为、或组成为:向受试者施用组合物，该组合物包含(a)表达铁蛋白的重组宿主和(b)含量为至少1％的基于表达铁蛋白和铁的重组宿主的干重的重量的铁。施用可以包括口服施用或直肠施用。在施用之前可以确定受试者具有以下至少一种：功能性缺铁；缺铁；贫血；缺铁性贫血；或肠道微生物群失调。受试者可能不缺铁。合适的受试者可以是将从服用组合物中受益的任何受试者。治疗可包括膳食管理。
尽管已经详细描述了本发明的具体方面，但是本领域技术人员将理解，根据本公开的总体教导可以开发对这些细节的各种修改和替代。因此，所公开的具体布置仅是说明性的，而不是限制本发明的范围，本发明的范围由所附权利要求和方面及其任何和所有等同物的全部广度给出。
本领域技术人员将理解，根据上述公开内容多种修改和变化是可能的，而不背离本文描述和例示的广泛发明概念。因此，应当理解，前述公开内容仅说明本申请的各个示例性方面，并且本领域技术人员可以容易地做出在本申请和所附权利要求的精神和范围内的多种修改和变化。
实施例
实施例1
将20天大的雄性Sprague Dawley大鼠(Envigo)在悬挂的金属网笼中每笼饲养1只，在温度(23±2℃)和湿度(40％)控制的房间内，保持12:12小时光照/黑暗周期(0600至1800灯亮)。给大鼠喂食2ppm铁的缺铁饮食(“ID饮食”)或按指示随意补充饮食。ID饮食是按照美国营养研究所(AIN)-93G饮食的配方制备的，以玉米淀粉作为碳水化合物的唯一来源，并且不添加铁。所有饮食中的铁含量均在硝酸(Perkin Elmer)湿消化后使用原子吸收光谱法进行验证。所有实验方案均符合美国国立卫生研究院动物护理指南，并得到宾夕法尼亚州立大学机构动物护理和使用委员会的批准。
饲喂大鼠ID饮食26天(P21-P47)，这产生了贫血(平均血细胞比容和血红蛋白水平分别为5.3±0.2和16.2±0.1％)。在P47，将大鼠按体重平衡分为2个膳食组(n＝3-5/组)。膳食组1饲喂包含单倍体酵母-铁蛋白络合物的饮食(53μg铁/g饮食；n＝4)。单倍体酵母-铁蛋白络合物包含单个染色体，其包含图5中染色体整合的铁蛋白表达盒。单倍体酵母-铁蛋白络合物是营养缺陷型的。膳食组2饲喂包含如本申请所述的二倍体酵母-铁蛋白络合物的饮食(49μg铁/g饮食；n＝3)。二倍体酵母-铁蛋白络合物包含两条染色体——第一条染色体包含图5中的染色体整合的铁蛋白表达盒，第二条染色体缺少染色体整合的铁蛋白表达盒。二倍体酵母-铁蛋白络合物是原养型的。饲喂大鼠指定饮食14天，并在整个研究过程中监测食物消耗。
结果如图7和图8所示，二倍体酵母-铁蛋白络合物分别提供与单倍体酵母-铁蛋白络合物相当的血红蛋白恢复和血细胞比容恢复。
实施例2
单倍体酿酒酵母的制备
单倍体酿酒酵母在缺乏尿嘧啶的合成完全(SC)培养基中与6mM FeSO4于30℃摇动生长两天。通过离心收集细胞并用无菌水洗涤一次。重悬后，将细胞在65℃下孵育30分钟。巴氏灭菌。然后用无菌水将细胞另外洗涤两次以除去未掺入的铁并冻干。
二倍体酿酒酵母的制备
二倍体酿酒酵母在缺乏尿嘧啶的合成完全(SC)培养基中与6mM FeSO4于30℃摇动生长两天。通过离心收集细胞并用无菌水洗涤一次。重悬后，将细胞在65℃下孵育30分钟。巴氏灭菌。然后用无菌水将细胞另外洗涤两次以除去未掺入的铁并冻干。
单倍体和二倍体酵母样品的分析
为了分析单倍体和二倍体酵母样品的铁蛋白，用电子显微镜观察酵母制剂的试样。为了进一步证明FHT1的存在，对酵母裂解物进行了蛋白质印迹分析。样品在4-20％Tri-Glycine SDS凝胶上进行电泳。随后，将其转移到PVDF膜上，首先用针对H-铁蛋白的抗体(1:500，Cell signaling)进行探测，然后用二抗(1:5000，GE医疗保健)进行探测。为了确定酵母中的铁蛋白是否含有铁，将25μl酵母裂解物在4-20％ Tris-Glycine SDS凝胶(BioRad)上进行电泳，并使用Perls菌株来评估铁。简而言之，用去离子水冲洗凝胶一次，然后与由两份铁氰化钾(Sigma Aldrich，目录号702587)和一份10％ HCl溶液组成的溶液一起孵育30分钟。随后用去离子水洗涤凝胶数次以去除背景并观察蓝色Perls反应。
为了分析酵母样品的铁含量，在硝酸中消化酵母并使用原子吸收分光光度法测定铁含量。
如图9A所示的结果，基于1g酵母样品的重量百分比，比较了单倍体酵母样品和二倍体酵母样品的铁含量。如图9A所示，与单倍体酵母样品的铁含量(5％)相比，二倍体酵母样品的铁含量(9％)更高。如图9B所示的结果比较了单倍体酵母样品和二倍体酵母样品的H-铁蛋白含量。如图9B所示，与二倍体酵母样品的H-铁蛋白含量(2.76％)相比，单倍体酵母样品具有更高的H-铁蛋白含量(4.12％)。
因此，尽管事实上二倍体酵母样品中存在更少的H-铁蛋白，但与单倍体酵母样品相比存在更多的铁。此外，尽管存在差异，单倍体酵母和二倍体酵母在体内研究中表现同样出色。这表明二倍体酵母在吸收铁方面更有效，同时仍保持性能。
序列表
<110> 赛德罗生物科学有限责任公司
<120> 包含铁蛋白或其同源物的重组宿主
<130> SBIO-2V1
<160> 4
<170> PatentIn 版本 3.5
<210> 1
<211> 183
<212> PRT
<213> 智人
<400> 1
Met Thr Thr Ala Ser Thr Ser Gln Val Arg Gln Asn Tyr His Gln Asp
1 5 10 15
Ser Glu Ala Ala Ile Asn Arg Gln Ile Asn Leu Glu Leu Tyr Ala Ser
20 25 30
Tyr Val Tyr Leu Ser Met Ser Tyr Tyr Phe Asp Arg Asp Asp Val Ala
35 40 45
Leu Lys Asn Phe Ala Lys Tyr Phe Leu His Gln Ser His Glu Glu Arg
50 55 60
Glu His Ala Glu Lys Leu Met Lys Leu Gln Asn Gln Arg Gly Gly Arg
65 70 75 80
Ile Phe Leu Gln Asp Ile Lys Lys Pro Asp Cys Asp Asp Trp Glu Ser
85 90 95
Gly Leu Asn Ala Met Glu Cys Ala Leu His Leu Glu Lys Asn Val Asn
100 105 110
Gln Ser Leu Leu Glu Leu His Lys Leu Ala Thr Asp Lys Asn Asp Pro
115 120 125
His Leu Cys Asp Phe Ile Glu Thr His Tyr Leu Asn Glu Gln Val Lys
130 135 140
Ala Ile Lys Glu Leu Gly Asp His Val Thr Asn Leu Arg Lys Met Gly
145 150 155 160
Ala Pro Glu Ser Gly Leu Ala Glu Tyr Leu Phe Asp Lys His Thr Leu
165 170 175
Gly Asp Ser Asp Asn Glu Ser
180
<210> 2
<211> 591
<212> DNA
<213> 智人
<400> 2
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taccaccagg actcagaggc cgccatcaac cgccagatca acctggagct ctacgcctcc 120
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<210> 3
<211> 3216
<212> DNA
<213> 智人
<400> 3
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<210> 4
<211> 4379
<212> DNA
<213> 智人
<400> 4
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gccatcaacc gccagatcaa cctggagctc tacgcctcct acgtttacct gtccatgtct 1080
tactactttg accgcgatga tgtggctttg aagaactttg ccaaatactt tcttcaccaa 1140
tctcatgagg agagggaaca tgctgagaaa ctgatgaagc tgcagaacca acgaggtggc 1200
cgaatcttcc ttcaggatat caagaaacca gactgtgatg actgggagag cgggctgaat 1260
gcaatggagt gtgcattaca tttggaaaaa aatgtgaatc agtcactact ggaactgcac 1320
aaactggcca ctgacaaaaa tgacccccat ttgtgtgact tcattgagac acattacctg 1380
aatgagcagg tgaaagccat caaagaattg ggtgaccacg tgaccaactt gcgcaagatg 1440
ggagcgcccg aatctggctt ggcggaatat ctctttgaca agcacaccct gggagacagt 1500
gataatgaaa gctaacctag gcacctcgag atatctagac ccagctttct tgtacaaagt 1560
ggtgatgggc tgcaggaatt cgatatcaag cttatcgata ccgtcgacct cgagtcatgt 1620
aattagttat gtcacgctta cattcacgcc ctccccccac atccgctcta accgaaaagg 1680
aaggagttag acaacctgaa gtctaggtcc ctatttattt ttttatagtt atgttagtat 1740
taagaacgtt atttatattt caaatttttc ttttttttct gtacagacgc gtgtacgcat 1800
gtaacattat actgaaaacc ttgcttgaga aggttttggg acgctcgaag gctttaattt 1860
gcggccgcat aggccactag tggatctgat atcacctaat aacttcgtat agcatacatt 1920
atacgaagtt atattaaggg ttctcgagag ctcgttttat ttaggttcta tcgaggagaa 1980
aaagcgacaa gaagagatag accatggata aatgattatg ttctaaacac tcctcagaag 2040
ctcatcgaac tgtcatcctg cgtgaagatt aaaatccaac ttagaaattt cgagcttacg 2100
gagacaatca tatgggagaa gcaattggaa gatagaaaaa aggtactcgg tacataaata 2160
tatgtgattc tgggtagaag atcggtctgc attggatggt ggtaacgcat ttttttacac 2220
acattacttg cctcgagcat caaatggtgg ttattcgtgg atctatatca cgtgatttgc 2280
ttaagaattg tcgttcatgg tgacactttt agctttgaca tgattaagct catctcaatt 2340
gatgttatct aaagtcattt caactatcta agatgtggtt gtgattgggc cattttgtga 2400
aagccagtac gccagcgtca atacactccc gtcaattagt tgcaccatgt ccacaaaatc 2460
atataccagt agagctgaga ctcatgcaag tccggttgca tcgaaacttt tacgtttaat 2520
ggatgaaaag aagaccaatt tgtgtgcttc tcttgacgtt cgttcgactg atgagctatt 2580
gaaacttgtt gaaacgttgg gtccatacat ttgccttttg aaaacacacg ttgatatctt 2640
ggatgatttc agttatgagg gtactgtcgt tccattgaaa gcattggcag agaaatacaa 2700
gttcttgata tttgaggaca gaaaattcgc cgatatcggt aacacagtca aattacaata 2760
tacatcgggc gtttaccgta tcgcagaatg gtctgatatc accaacgccc acggggttac 2820
tggtgctggt attgttgctg gcttgaaaca aggtgcgcaa gaggtcacca aagaaccaag 2880
gggattattg atgcttgctg aattgtcttc caagggttct ctagcacacg gtgaatatac 2940
taagggtacc gttgatattg caaagagtga taaagatttc gttattgggt tcattgctca 3000
gaacgatatg ggaggaagag aagaagggtt tgattggcta atcatgaccc caggtgtagg 3060
tttagacgac aaaggcgatg cattgggtca gcagtacaga accgtcgacg aagttgtaag 3120
tggtggatca gatatcatca ttgttggcag aggacttttc gccaagggta gagatcctaa 3180
ggttgaaggt gaaagataca gaaatgctgg atgggaagcg taccaaaaga gaatcagcgc 3240
tccccattaa ttatacagga aacttaatag aacaaatcac atatttaatc taatagccac 3300
ctgcattggc acggtgcaac actacttcaa cttcatctta caaaaagatc acgtgatctg 3360
ttgtattggg atctctagac ctaataactt cgtatagcat acattatacg aagttatatt 3420
aagggttgtc gacctgtcag atatagtcgg attgcccttt taagcaatca atagtgaagg 3480
tcgatattgg gaactgtggt ggttggcatt cgagtttatc attatcaata ctcgccattt 3540
caaagaatac gtaaataatt aatagtagtg attttcctaa ctttatttag tcaaaaaatt 3600
agccttttaa ttctgctgta acccgtacat gcccaaaata gggggcgggt tacacagaat 3660
atataacatc gtaggtgtct gggtgaacag tttattcctg gcatccacta aatataatgg 3720
agcccgcttt ttaagctggc atccagaaaa aaaaagaatc ccagcaccaa aatattgttt 3780
tcttcaccaa ccatcagttc ataggtccat tctcttagcg caactacaga gaacaggggc 3840
acaaacaggc aaaaaacggg cacaacctca atggagtgat gcaacctgcc tggagtaaat 3900
gatgacacaa ggcaattgac ccacgcatgt atctatctca ttttcttaca ccttctatta 3960
ccttctgctc tctctgattt ggaaaaagct gaaaaaaaag gttgaaacca gttccctgaa 4020
attattcccc tacttgacta ataagtatat aaagacggta ggtattgatt gtaattctgt 4080
aaatctattt cttaaacttc ttaaattcta cttttatagt tagtcttttt tttagtttta 4140
aaacaccaag aacttagttt cgaataaaca cacataaaca aacaaaatgg ttagagttgc 4200
tattaacggt ttcggtagaa tcggtagatt ggtcatgaga attgctttgt ctagaccaaa 4260
cgtcgaagtt gttgctttga acgacccatt catcaccaac gactacgctg cttacatgtt 4320
caagtacgac tccactcacg gtagatacgc tggtgaagtt tcccacgatg acaagcaca 4379

Claims (60)

1.重组宿主，其包含：
至少第一染色体组和第二染色体组，其中第一染色体组和第二染色体组中的至少一个包含编码铁蛋白或其同源物的重组基因。
2.权利要求1所述的重组宿主，其中所述第一染色体组和所述第二染色体组包含二倍体。
3.权利要求1所述的重组宿主，其中所述第一染色体组和所述第二染色体组包含多倍体。
4.权利要求1所述的重组宿主，其中所述第一染色体组和所述第二染色体组包含非整倍体。
5.上述权利要求中任一项所述的重组宿主，其中所述重组宿主是原养型的。
6.上述权利要求中任一项所述的重组宿主，其中所述重组基因包含SEQ ID NO:2、SEQID NO:3和/或SEQ ID NO:4或其同源物的核酸序列。
7.上述权利要求中任一项所述的重组宿主，其中所述重组基因编码SEQ ID NO:1或其同源物的氨基酸序列。
8.上述权利要求中任一项所述的重组宿主，其中所述第一染色体组和所述第二染色体组中的仅一个包含所述编码铁蛋白或其同源物的重组基因。
9.权利要求1至7中任一项所述的重组宿主，其中所述第一染色体组和所述第二染色体组都包含所述编码铁蛋白或其同源物的重组基因。
10.权利要求9所述的重组宿主，其中所述重组基因位于所述第一染色体组上的第一基因座和所述第二染色体组上的第二基因座。
11.权利要求10所述的重组宿主，其中所述第一基因座和所述第二基因座位于各自染色体上的相同基因座。
12.权利要求10所述的重组宿主，其中所述第一基因座和所述第二基因座位于各自染色体上的不同基因座。
13.权利要求1至8中任一项所述的重组宿主，其中所述第一染色体组和所述第二染色体组中的仅一个编码功能性选择标记基因。
14.权利要求1至7和9至12中任一项所述的重组宿主，其中所述第一染色体组和所述第二染色体组都编码功能性选择标记基因。
15.上述权利要求中任一项所述的重组宿主，其中所述编码铁蛋白或其同源物的重组基因与功能性选择标记基因紧密连锁。
16.上述权利要求中任一项所述的重组宿主，其中包含所述编码铁蛋白或其同源物的重组基因的所述第一染色体组或所述第二染色体组中的一个不包含功能性URA3基因或其同源物。
17.上述权利要求中任一项所述的重组宿主，其中每个基因的非突变拷贝存在于所述第一染色体组和/或所述第二染色体组中。
18.重组宿主，其包含含有编码铁蛋白或其同源物的重组基因的原养型微生物。
19.权利要求18所述的重组宿主，其中所述重组宿主是二倍体、多倍体或非整倍体。
20.权利要求18或权利要求19所述的重组宿主，其中所述重组基因包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和/或SEQ ID NO:4或其同源物的核酸序列。
21.权利要求18至20中任一项所述的重组宿主，其中所述重组基因编码SEQ ID NO:1或其同源物的氨基酸序列。
22.上述权利要求中任一项所述的重组宿主，其中所述编码铁蛋白的重组基因是染色体整合的。
23.上述权利要求中任一项所述的重组宿主，其中所述编码铁蛋白或其同源物的重组基因与URA3基因或其同源物和/或LEU2或其同源物紧密连锁。
24.上述权利要求中任一项所述的重组宿主，其中所述重组基因编码H-铁蛋白的氨基酸序列。
25.上述权利要求中任一项所述的重组宿主，其中所述重组宿主产生H-铁蛋白。
26.上述权利要求中任一项所述的重组宿主，其中所述重组基因包含哺乳动物H-铁蛋白基因。
27.上述权利要求中任一项所述的重组宿主，其中所述重组基因包含人H-铁蛋白基因。
28.上述权利要求中任一项所述的重组宿主，其中所述同源物与人H-铁蛋白具有至少80％的序列同一性。
29.权利要求1至25中任一项所述的重组宿主，其中所述重组基因包含植物H-铁蛋白基因。
30.上述权利要求中任一项所述的重组宿主，其中所述重组宿主产生L-铁蛋白。
31.组合物，其包含上述权利要求中任一项所述的重组宿主。
32.权利要求31所述的组合物，其中所述组合物还包含铁。
33.权利要求32所述的组合物，其中所述铁以基于所述重组宿主的干物质重量的至少1％的量存在。
34.权利要求32或权利要求33所述的组合物，其中所述铁的至少5％与铁蛋白络合。
35.权利要求32至34中任一项所述的组合物，其中所述铁的来源是铁盐、有机铁络合物、铁纳米颗粒或其组合。
36.权利要求32至35中任一项所述的组合物，其中所述铁的至少一部分与所述铁蛋白或其同源物络合。
37.权利要求32至36中任一项所述的组合物，其中所述铁的至少一部分不与所述铁蛋白或其同源物络合。
38.权利要求31至37中任一项所述的组合物，其中所述重组宿主包含细菌、病毒或其组合。
39.权利要求31至38中任一项所述的组合物，其中所述重组宿主包含真菌、藻类、原生动物、微小蠕虫、微生物或其组合。
40.权利要求31至39中任一项所述的组合物，其中所述重组宿主包含真菌。
41.权利要求39或权利要求40所述的组合物，其中所述真菌包含酵母。
42.权利要求31至41中任一项所述的组合物，其还包含至少一种填充剂。
43.权利要求31至42中任一项所述的组合物，其还包含第二重组宿主、益生菌、益生元或其组合。
44.权利要求43所述的组合物，其中所述第二重组宿主包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和/或SEQ ID NO:4或其同源物的核酸序列。
45.权利要求43或权利要求44所述的组合物，其中所述第二重组宿主包含编码SEQ IDNO:1或其同源物的氨基酸序列的重组基因。
46.权利要求43至45中任一项所述的组合物，其中所述第二重组宿主表达铁蛋白或其同源物。
47.权利要求43至46中任一项所述的组合物，其中所述第二重组宿主不表达铁蛋白或其同源物。
48.可摄入物品，其包含权利要求31至47中任一项所述的组合物。
49.权利要求48所述的可摄入物品，其中所述可摄入物品为医疗食品形式。
50.权利要求48所述的可摄入物品，其中所述可摄入物品为食品形式。
51.权利要求48所述的可摄入物品，其中所述可摄入物品为食品成分形式。
52.膳食补充剂，其包含权利要求31至47中任一项所述的组合物。
53.药物组合物，其包含权利要求31至47中任一项所述的组合物。
54.方法，其包括向受试者施用权利要求31至47中任一项所述的组合物。
55.权利要求54所述的方法，其中所述组合物包含至少13mg的铁。
56.权利要求54或权利要求55所述的方法，其中所述施用包括单一剂量。
57.权利要求54至56中任一项所述的方法，其中所述施用包括顺序施用超过一剂。
58.权利要求54至57中任一项所述的方法，其中所述施用包括膳食管理施用。
59.权利要求54至58中任一项所述的方法，其中所述受试者不缺铁。
60.权利要求54至59中任一项所述的方法，其中所述受试者将通过施用所述组合物而受益。
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