CN117604145A - 与VI型烟草蔗糖酯基因qBMVSE513紧密连锁的共显性SSR标记及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种与VI型烟草蔗糖酯基因qBMVSE513紧密连锁的共显性SSR标记及应用，所述的与VI型烟草蔗糖酯基因qBMVSE513紧密连锁的共显性SSR标记的编号为TMc43049和TMc42528，其PCR扩增产物核苷酸序列分别为SEQ ID No.1和SEQ ID No.2、SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示。所述的应用为所述的与VI型烟草蔗糖酯基因qBMVSE513紧密连锁的共显性SSR标记在检测烟草基因组DNA中是否存在VI型烟草蔗糖酯基因qBMVSE513中的应用。与现有技术方法相比，本发明所述的共显性SSR标记具有精准、高效、稳定、便捷、低成本和不限检测时机的特点，因此该分子标记可以作为烟草高香气品质育种中VI型蔗糖酯基因qBMVSE513分子标记辅助选择的应用。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种与VI型烟草蔗糖酯基因qBMVSE513紧密连锁的共显性SSR标记及应用。
背景技术
烟草蔗糖酯是其叶片表面化学主要成分之一，也是烟草中重要的潜在致香前体物质，其中，栽培烟草中含量较高的为蔗糖四酯(Severson R F,Arrendale R F,Chortyk OT,Quantitation of the major cuticular components from green leaf of differenttobacco types.Journal of Agricultural and Food Chemistry,1984,(32):566-570.)，其降解可产生小分子挥发性脂肪酸并可极大地提高烟叶的香气品质(Severson R F,Arrendale R F,Chortyk O T,Isolation and characterization of the sucroseesters of the cuticular waxes of green tobacco leaf.Journal of Agriculturaland Food Chemistry,1985,(33):870-875.Leffingwell J C,Chemical constituents oftobacco leaf and differences among tobacco types.Social Science ElectronicPublishing,2001,1:38-44.)。研究表明，栽培烟草中的蔗糖四酯依据分子量的大小不同，可分为6个类型，即，I型烟草蔗糖酯～VI型烟草蔗糖酯，其中，III型～VI型烟草蔗糖酯中因含有3-甲基戊酰而被称为BMVSE(Vontimitta V,Danehower D A,Steede T,Moon H S,Lewis R S,Analysis of a Nicotiana tabacum L.genomic region controlling twoleaf surface chemistry traits.Journal of Agricultural and Food Chemistry,2010,58:294-300.)。BMVSE经硅烷化气相色谱质谱(GC-MS)进一步解析后，依据葡萄糖环部分特征碎片离子大小又可分为BMVSE471(III型烟草蔗糖酯)、BMVSE485(IV型烟草蔗糖酯)、BMVSE499(V型烟草蔗糖酯)和BMVSE513(VI型烟草蔗糖酯)，此4种类型烟草蔗糖酯是培育含高蔗糖酯而具有高香气品质烤烟新品种的核心关注点。其中，4种类型BMVSE中的前3种已有发明专利报道，即，III型烟草蔗糖酯BMVSE471(ZL 2021 1 1346741.1)、IV型烟草蔗糖酯BMVSE485(ZL 2021 1 1363676.3)和V型烟草蔗糖酯BMVSE499(申请号202111394234.5)3种类型烟草糖脂基因已被分别遗传与定位分析并获得可用于指导烟草高香气品质育种的两侧紧密连锁标记。
针对栽培烟草叶片中BMVSE含量的遗传研究表明，雪茄烟Beinhart1000-1中的BMVSE基因被定位于SSR标记PT30354和PT52061、PT61362之间约5.2cM区域内，且与SSR标记PT30209和PT20315呈共分离(Vontimitta V,Danehower D A,Steede T,Moon H S,Lewis RS,Analysis of a Nicotiana tabacum L.genomic region controlling two leafsurface chemistry traits.Journal of Agricultural and Food Chemistry,2010,58:294-300.)。利用上述5个SSR标记对不同遗传背景的烟草材料及192份重组自交系群体进行BMVSE筛选验证，结果表明仅2个标记(PT20135和PT30354)有效，但标记的基因型与BMVSE表型的一致率仅约92.165％(陈彪，陈铭，李洋洋，屈亚芳，程立锐，杨爱国，胡日生，刘旦，罗成刚，向世鹏，冯全福，常爱霞，烟草蔗糖酯SSR分子标记筛选及辅助育种应用.中国烟草科学,2019,40(3):8-15.)。BMVSE基因型与其表型的一致率远未达到分子标记辅助选择(MAS)的100％精准度要求，主要原因是：文献的作者错误的将原本分别属于BMVSE471(III型)、BMVSE485(IV型)、BMVSE499(V型)和BMVSE513(VI型)4个不同独立基因视作一个基因(命名为BMVSE)进行遗传定位研究，故此，获得的定位结果是不准确的。本项目组的研究表明，III～VI型BMVSE属于典型的数量性状，且受Beinhart1000-1基因组内不同染色体或同一染色体上不同位置的QTLs控制，这些基因/QTLs被暂时命名为qBMVSE471、qBMVSE513、qBMVSE499和qBMVSE513。进一步研究表明，文献针对III～VI型烟草蔗糖酯作为一个基因(BMVSE)进行定位的结果是不准确的，该定位结果仅是4种类型BMVSE中的一种，故此，在后续的实验验证中出现了5个紧密连锁标记仅有2个可用且无法精准实现标记基因型与BMVSE表型一致的情况。此外，目前虽已有针对BMVSE中包含的4种类型基因/QTL进行区分并遗传定位的研究，但也仅局限于其中的前3种类型BMVSE基因/QTL，即，分别对BMVSE471(Ⅲ型)、BMVSE485(IV型)和BMVSE499(V型)3种类型烟草蔗糖酯进行了QTL分析并将此3种类型BMVSE基因/QTL两侧紧密连锁标记进行了专利。上述错误(不足)及对BMVSE513(VI型)遗传与定位分析的缺乏，严重地制约了利用与VI型烟草蔗糖酯基因qBMVSE513紧密连锁标记开展高香气烟草新品种的选育进程。
鉴于此，本发明首次针对BMVSE中包含的VI型烟草糖脂BMVSE513进行遗传定位研究，利用数量性状连锁分析(QTL)法和硅烷化气相色谱质谱(GC-MS)法，在烟草全基因组范围内筛选获得与VI型烟草蔗糖酯基因qBMVSE513紧密连锁的共显性SSR标记，以弥补现有技术和已报道文献的不足、加速分子标记辅助选择(MAS)在烟草高香气品种选育中的精准、高效利用。
发明内容
本发明正是为了解决上述问题缺陷，提供一种与VI型烟草蔗糖酯基因qBMVSE513紧密连锁的共显性SSR标记及应用。
本发明采用如下技术方案实现。
一种与VI型烟草蔗糖酯基因qBMVSE513紧密连锁的共显性SSR标记，本发明所述的与VI型烟草蔗糖酯基因qBMVSE513紧密连锁的共显性SSR标记的编号为TMc43049和TMc42528，其PCR扩增产物核苷酸序列分别为SEQ ID No.1和SEQ ID No.2、SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示。
SEQ ID No.1：
GCTTCAAGACTGGTACACACACACATACACACACACACACACACACACACACACACATATATATATATATATATATATATATATATATATATATATAAATATAAAATCTGTGAGGCTTTCTTGTCTCTTGATTGACGTGAATCTTGAGATATTGCAAACACAAGGGAGTTGATCCTTGAAAGGAATCGTAGAGTGATTCTTTCCAAGAATAAGATGTTACTTCTGTTGATTTGCCTCAACTTGTGG。
SEQ ID No.2：
GCTTCAAGACTGGTACACACACACATACACACACACACACACACACACACACACATATATATATATATATATATATAAAATCTGTGAGGCTTTCTTGTCTCTTGATTGACGTGAATCTTGAGATATTGCAAACACAAGGGAGTTGATCCTTGAAAGGAATCGTAGAGTGATTCTTTCCAAGAATAAGATGTTACTTCTGTTGATTTGCCTCAACTTGTGG。
SEQ ID No.3：
GCGGTTCATGGCGATTTACGTATATTTAAGTTGTATTCTATCGTACTTGTATTAATTTTGTATGAATATTATACAAAATTTATAAATAAGTTCTAAATGAGTGTATGTTGTATGAATTTATATTGAAGTTATAAATACTCTTTTTTAAATAAAATTATATATATATATATATATATATATATATATATATGTATGTATCAAAATTATATTAAAGTTGTATTATAGTTGTATGGGATTTGTATGAAAATTGTATTTCAAATGTATTTGCCATGATCCACAAAAGGGCCGTCATGAGATT。
SEQ ID No.4：
GCGGTTCATGGCGATTTACGTATATTTAAGTTGTATTCTATCGTACTTGTATTAATTTTGTATGAATATTATACAAAATTTATAAATAAGTTCTAAATGAGTGTATGTTGTATGAATTTATATTGAAGTTATAAATACTCTTTTTTAAATAAAATTATATATATATATATATATATATATATATATATATATATATATATATATATATATATATATATATATATATATATATATATATATATGTATGTATCAAAATTATATTAAAGTTGTATTATAGTTGTATGGGATTTGTATGAAAATTGTATTTCAAATGTATTTGCCATGATCCACAAAAGGGCCGTCATGAGATT。
本发明所述共显性标记TMc43049和TMc42528位于目的基因qBMVSE513两侧。
本发明所述的分子标记所对应的2个位点的引物序列分别为：
扩增TMc43049的引物序列为：
TMc43049F：5’-GCTTCAAGACTGGTACACACACA-3’(SEQ ID NO.5)，
TMc43049R：5’-CCACAAGTTGAGGCAAATCA-3’(SEQ ID NO.6)；
扩增TMc42528的引物序列为：
TMc42528F：5’-GCGGTTCATGGCGATTTA-3’(SEQ ID NO.7)，
TMc42528R：5’-AATCTCATGACGGCCCTTTT-3’(SEQ ID NO.8)。
上述的与VI型烟草蔗糖酯基因qBMVSE513紧密连锁的共显性SSR标记的应用在于检测烟草基因组DNA中是否存在VI型烟草蔗糖酯基因qBMVSE513。
本发明上述的应用，该应用的方法为，以TMc43049和TMc42528序列的引物分别扩增待检测烟草基因组DNA，检测PCR扩增产物。
本发明PCR扩增产物中同时含有如SEQ ID No.1和SEQ ID No.3所示序列则表明该待测烟草植株含有高香气品质的VI型烟草蔗糖酯的纯合等位基因，基因型为BMVSE513BMVSE513。
本发明PCR扩增产物中同时含有如SEQ ID No.2和SEQ ID No.4所示序列则为待测烟草植株不具有高香气品质的VI型烟草蔗糖酯的纯合等位基因，基因型为bmvse513bmvse513。
本发明PCR扩增产物中同时含有如SEQ ID No.1和SEQ ID No.4所示序列，或同时含有如SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示序列则为待测烟草植株含有高香气品质的VI型烟草蔗糖酯的杂合等位基因，基因型为BMVSE513bmvse513。
本发明的有益效果为，本发明提供了一种用于检测VI型烟草蔗糖酯基因qBMVSE513的分子标记，既有效填补了目前针对VI型烟草糖脂基因qBMVSE513研究的空白，也可精准的确定待测烟草中是否含有VI型烟草蔗糖酯，且相较于文献报道的标记具有更高的检测准确度，其有效纠正并弥补了文献中将4种不同类型BMVSE视作一个基因的错误与不足，同时也可精准的鉴别具有VI型烟草蔗糖酯的基因型；与现有的采用低通量、高成本、耗时费力的GC-MS法检测成熟期烟草蔗糖酯含量相比，本发明所述的共显性SSR标记具有高效、稳定、可靠、简捷和低成本的特点，且可在烟草生长的任何时期进行检测，极大的缩短了实验周期，进而加速了选育高香气品质烤烟新品种进程。
下面结合附图和具体实施方式本发明做进一步解释。
附图说明
图1是基于烟草重组自交系群体(RIL_F8:9；红花大金元×Beinhart1000-1)的第15号连锁群上VI型烟草蔗糖酯QTL分析曲线图。
其中，利用软件为：QTL IciMapping v4.2；参数设置：定位方法为ICIM-ADD：Inclusive Composite Interval Mapping of ADDitive(and dominant)QTL，迭代次数为1000(Permutation times＝1000)，显著性为0.01(Significance＝0.01)，步长为0.5cM(Walk speed＝0.5cM)。横坐标为遗传距离(单位：厘摩cM)；纵坐标为LOD值。图中的横向虚线是在0.01显著性阈值下的LOD值＝3.3806；第15号连锁群的63.50cM处LOD曲线最高点为VI型烟草糖脂的主效基因(qBMVSE513)。
具体实施方式
本发明的第一目的在于提供一种与VI型烟草蔗糖酯基因qBMVSE513紧密连锁的共显性SSR标记；第二目的在于提供所述的与VI型烟草蔗糖酯基因qBMVSE513紧密连锁的共显性SSR标记的应用。
本发明的第一目的是这样实现的，所述的与VI型烟草蔗糖酯基因qBMVSE513紧密连锁的共显性SSR标记的编号为TMc43049和TMc42528，其PCR扩增产物核苷酸序列分别为SEQ IDNo.1和SEQ ID No.2、SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示。
本发明的第二目的是这样实现的，所述的与VI型烟草蔗糖酯基因qBMVSE513紧密连锁的共显性SSR标记在检测烟草基因组DNA中是否存在VI型烟草蔗糖酯基因qBMVSE513中的应用。
为了简捷、精准、高效选择具有高香气品质潜力的VI型烟草蔗糖酯烟草品种，有针对性和特异性的选择含VI型烟草蔗糖酯基因qBMVSE513的后代材料，本发明提供一种用于检测VI型烟草蔗糖酯基因qBMVSE513的分子标记TMc43049和TMc42528，该分子标记采用数量性状连锁分析(QTL)法和硅烷化气相色谱质谱(GC-MS)法，在烟草全基因组范围内筛选获得与VI型烟草蔗糖酯基因qBMVSE513连锁的共显性SSR标记，可用于VI型烟草蔗糖酯基因qBMVSE513的辅助选择，以提高分子标记辅助选择的效率及高香气烟草品种培育的效率。
本发明以优质多抗雪茄烟品种Beinhart1000-1(其叶片中的高香气品质由BMVSE控制，而BMVSE受数量性状基因qBMVSE471(Ⅲ型)、qBMVSE513(IV型)、qBMVSE499(V型)和qBMVSE513(VI型)控制)和烤烟品种红花大金元(综合性状优良但不含BMVSE)为亲本，通过杂交、连续套袋自交，构建的烟草重组自交系(RILs_F8:9)为作图群体，采用数量性状连锁分析(QTL)法和硅烷化气相色谱质谱(GC-MS)法，在烟草全基因组范围内筛选获得与VI型烟草蔗糖酯基因qBMVSE513紧密连锁的共显性SSR标记，以弥补现有技术和已报道文献的不足、加速分子标记辅助选择(MAS)在烟草高香气品种选育中的精准、高效利用。
本发明所述的与VI型烟草蔗糖酯基因qBMVSE513紧密连锁的共显性SSR标记的编号为TMc43049和TMc42528，其PCR扩增产物核苷酸序列分别为SEQ ID No.1和SEQ ID No.2、SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示。
所述的分子标记所对应的2个位点的引物序列分别为：
扩增TMc43049的引物序列为：
TMc43049F：5’-GCTTCAAGACTGGTACACACACA-3’(SEQ ID NO.5)，
TMc43049R：5’-CCACAAGTTGAGGCAAATCA-3’(SEQ ID NO.6)；
扩增TMc42528的引物序列为：
TMc42528F：5’-GCGGTTCATGGCGATTTA-3’(SEQ ID NO.7)，
TMc42528R：5’-AATCTCATGACGGCCCTTTT-3’(SEQ ID NO.8)。
本发明所述的与VI型烟草蔗糖酯基因qBMVSE513紧密连锁的共显性SSR标记的应用为所述的与VI型烟草蔗糖酯基因qBMVSE513紧密连锁的共显性SSR标记在检测烟草基因组DNA中是否存在VI型烟草蔗糖酯基因qBMVSE513中的应用。
所述的与VI型烟草蔗糖酯基因qBMVSE513紧密连锁的共显性SSR标记的应用是分别以TMc43049和TMc42528序列的引物，分别扩增待检测烟草基因组DNA，检测PCR扩增产物，如果PCR扩增产物中同时含有如SEQ ID No.1和SEQ ID No.3所示序列则表明该待测烟草植株含有高香气品质的VI型烟草蔗糖酯的纯合等位基因qBMVSE513 qBMVSE513；如果PCR扩增产物中同时含有如SEQ ID No.2和SEQ ID No.4所示序列则为待测烟草植株不含有高香气品质的IV型烟草蔗糖酯的纯合等位基因qbmvse513qbmvse513；如果PCR扩增产物中同时含有如SEQ ID No.1和SEQ ID No.4，或同时含有如SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示序列则表明该待测烟草植株含有高香气品质的VI型烟草蔗糖酯的杂合等位基因qBMVSE513qbmvse513。
实施例1
与VI型烟草蔗糖酯基因qBMVSE513连锁的共显性SSR标记的筛选
采用数量性状连锁分析(QTL)法并结合硅烷化气相色谱质谱(GC-MS)法，在烟草全基因组范围内筛选与VI型烟草蔗糖酯基因qBMVSE513连锁的共显性SSR标记
一、实验材料
以综合性状优良且不含VI型烟草蔗糖酯的烤烟品种红花大金元为母本，以含III型、IV型、V型和VI型烟草蔗糖酯的雪茄烟品种Beinhart1000-1(其III～VI型烟草蔗糖酯分别由qBMVSE471、qBMVSE513、qBMVSE499、qBMVSE513基因控制)为父本，经杂交、连续自交，获得341份株系的重组自交系(RILs_F8:9)作为遗传作图群体。
二、亲本及RILs_F8:9群体VI型烟草蔗糖酯含量数据获得
试验材料成苗后移栽至大田，待大田烟叶成熟时，每个株系随机选10株，且每株烟草选取3片中部叶片；将上述每个株系的30片中部叶片叠在一起，利用直径1cm的打孔器在叶片中部位置随机打2个孔，获得60个直径1cm的圆形叶片。将获得的60个圆形小叶片按照文献报道的方法(蔡莉莉，谢复炜，刘克建，张映，谢剑平，香料烟中蔗蔗糖酯的气相色谱/质谱分析.烟草科技,2009,3:40-44.王瑞玲，王莹莹，毛多斌，贾春晓，烟草中蔗糖四酯类化合物的GC-MS分析.化学研究与应用,2011,23(8):1030-1035.)进行烟草蔗糖酯含量检测。经GC-MS法检测获得的341份RILs_F8:9VI型烟草蔗糖酯含量作为RILs_F8:9群体的表型值，用于下一步的QTL连锁分析。
三、SSR标记分析
烟草基因组DNA提取：采用常规CTAB法或植物组织DNA提取试剂盒均可，方法可参考已有的文献或试剂盒中的说明书。
PCR扩增及电泳检测：PCR扩增体系是常规的体系可参照已发表的文献，其中，本发明所提供的标记退火温度均为60℃；PCR扩增程序信息可参照相关文献；电泳检测也是采用常规的方法，可参照已发表的相关文献。
利用本实验室分别基于烤烟红花大金元和雪茄烟Beinhart1000-1基因组信息开发的约50000个SSR标记，对RILs_F8:9群体的双亲(红花大金元和Beinhart1000-1)和子一代(F1)进行多态性筛选，最终，筛选获得2093个多态性SSR标记。再利用筛选获得2093个多态SSR标记，对341份RILs_F8:9样品进行基因型分析。其次，利用遗传连锁作图软件JoinMap4.0对341份RILs_F8:9样品的基因型数据进行连锁分析，绘制一张含有24条连锁群且均匀分布2000个SSR标记，覆盖烟草基因组长度为3097.319cM的高质量雪茄烟遗传连锁图谱，作为RILs_F8:9群体的基因型值，用于下一步的QTL连锁分析。
四、VI型烟草蔗糖酯(qBMVSE513)的全基因组QTL定位分析
利用QTL定位分析软件QTL IciMapping v4.2对RILs_F8:9群体的基因型数据(构建获得雪茄烟遗传连锁群图谱)和表型数据(341份RILs_F8:9群体的VI型烟草蔗糖酯含量)，对VI型烟草蔗糖酯基因qBMVSE513进行全基因组QTL扫描。其中，相关参数设置为：定位方法选ICIM-ADD：Inclusive Composite Interval Mapping of ADDitive(and dominant)QTL，迭代次数为1000(Permutation times＝1000)，显著性为0.01(Significance＝0.01)，步长为0.5cM(Walk speed＝0.5cM)。最后，在全基因组范围内的LOD＝3.3806条件下，位于第15号连锁群的63.50cM处定位获得控制VI型烟草蔗糖酯性状的1个主效QTL(暂命名为qBMVSE513)。该主效QTL可解释约46.9234％的表型变异率，LOD值约为40.4805，详见图1和表1。
表1 VI型烟草蔗糖酯QTL(qBMVSE513)信息统计
| QTL | Chromosome | Position/cM | LeftMarker | RightMarker | LOD | PVE(％) | Add |
| qBMVSE513 | 15 | 63.50 | TMc43049 | TMc42528 | 40.4805 | 46.9234 | 0.0136 |
注：PVE为QTL的效应值，即，该QTL可解释表型变异百分比；Add为加性效应。
实施例2共显性连锁标记在RILs_F9:10群体单株中的验证
利用获得的与VI型烟草蔗糖酯基因qBMVSE513两侧紧密连锁的共显性SSR标记TMc43049和TMc42528，对苗期的RILs_F9:10群体(红花大金元×Beinhart1000-1)单株进行基因型分析，获得RILs_F9:10群体各单株的基因型数据；另一方面，待RILs_F9:10群体的烟叶生长至成熟期(采烤前)，采用GC-MS法对各株系的成熟中部叶片取样，检测叶片中的IV型烟草蔗糖酯含量，即，获取RILs_F9:10群体各株系的表型值。最后，分析341份RILs_F8:9群体的基因型数据与VI型烟草蔗糖酯表型值，发现本发明公布的2个共显性SSR标记TMc43049和TMc42528的基因型值与表型值完全吻合，即，一致率达100％。
具体的分析方法为：通过GC-MS检测获得的各株系VI型烟草蔗糖酯含量高于或等于亲本Beinhart1000-1含量时，该株系的基因型中也同时呈现如SEQ ID NO.1(246bp)和SEQ ID NO.3(298bp)所示序列即为纯合基因型BMVSE513BMVSE513；
检测获得的各株系IV型烟草蔗糖酯含量等于或低于亲本红花大金元含量时，该株系的基因型中也同时呈现如ID NO.2(220bp)和SEQ ID NO.4(350bp)所示序列即为纯合基因型bmvse513 bmvse513；
检测获得的各株系IV型烟草蔗糖酯含量介于烤烟亲本红花大金元与雪茄烟亲本Beinhart1000-1之间，也即与子一代(F1)含量相近时，该株系的基因型中同时呈现如SEQID NO.1和SEQ ID NO.4，或同时呈现如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示序列即为杂合基因型BMVSE513 bmvse513。
上述结果表明，共显性标记TMc43049和TMc42528分别与VI型烟草蔗糖酯基因qBMVSE513紧密连锁，且该2个标记位于目的基因(qBMVSE513)两侧。
利用上述2个共显性紧密连锁SSR标记，不仅可以精准、高效、便捷且低成本的实现烟草任何生育期的VI型烟草蔗糖酯含量的检测，而且也可清晰鉴别待测植株中VI型烟草蔗糖酯的基因型状态，进而既提高了具有高香气品质烤烟新品种选育的科学性、可预测性，又加速了育种进程。
以上所述的仅是本发明的部分具体实施例，方案中公知的具体内容或常识在此未作过多描述(包括但不仅限于简写、缩写、本领域惯用的单位)。应当指出，上述实施例不以任何方式限制本发明，对于本领域的技术人员来说，凡是采用等同替换或等效变换的方式获得的技术方案均落在本发明的保护范围内。本申请要求的保护范围应当以其权利要求的内容为准，说明书中的具体实施方式等记载可以用于解释权利要求的内容。
Claims (8)
1.一种与VI型烟草蔗糖酯基因qBMVSE513紧密连锁的共显性SSR标记，其特征在于，所述的与VI型烟草蔗糖酯基因qBMVSE513紧密连锁的共显性SSR标记的编号为TMc43049和TMc42528，其PCR扩增产物核苷酸序列分别为SEQ ID No.1和SEQ ID No.2、SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示。
2.根据权利要求1所述的与VI型烟草蔗糖酯基因qBMVSE513紧密连锁的共显性SSR标记，其特征在于，所述共显性标记TMc43049和TMc42528位于目的基因qBMVSE513两侧。
3.根据权利要求1所述的与VI型烟草蔗糖酯基因qBMVSE513紧密连锁的共显性SSR标记，其特征在于，所述的分子标记所对应的2个位点的引物序列分别为：
扩增TMc43049的引物序列为：
TMc43049F：5’-GCTTCAAGACTGGTACACACACA-3’，
TMc43049R：5’-CCACAAGTTGAGGCAAATCA-3’；
扩增TMc42528的引物序列为：
TMc42528F：5’-GCGGTTCATGGCGATTTA-3’，
TMc42528R：5’-AATCTCATGACGGCCCTTTT-3’。
4.权利要求1或2或3所述的与VI型烟草蔗糖酯基因qBMVSE513紧密连锁的共显性SSR标记的应用在于检测烟草基因组DNA中是否存在VI型烟草蔗糖酯基因qBMVSE513。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，该应用的方法为，以TMc43049和TMc42528序列的引物分别扩增待检测烟草基因组DNA，检测PCR扩增产物。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，PCR扩增产物中同时含有如SEQ ID No.1和SEQ ID No.3所示序列则表明该待测烟草植株含有高香气品质的VI型烟草蔗糖酯的纯合等位基因，基因型为BMVSE513 BMVSE513。
7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，PCR扩增产物中同时含有如SEQ ID No.2和SEQ ID No.4所示序列则为待测烟草植株不含VI型烟草蔗糖酯的纯合等位基因，基因型为bmvse513bmvse513。
8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，PCR扩增产物中同时含有如SEQ ID No.1和SEQ ID No.4所示序列，或同时含有SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示序列则为待测烟草植株含有高香气品质的VI型烟草蔗糖酯的杂合等位基因，基因型为BMVSE513bmvse513。
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