CN117603947A - 一株桥粘液乳杆菌jt3及其在制备抗过敏和抗衰食品药品中的应用 - Google Patents

一株桥粘液乳杆菌jt3及其在制备抗过敏和抗衰食品药品中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于益生菌及其应用技术领域，具体涉及一株桥粘液乳杆菌JT3及其在制备抗过敏和抗衰食品药品中的应用。为进一步开发利用桥粘液乳杆菌的益生功能，本发明从广东地区一名健康成年人的粪便样品中分离纯化得到一株桥粘液乳杆菌(Limosilactobacillus pontis)JT3菌株，该菌株具有优越的蛋白酶活性和纤维素酶活性，并且可产生和分泌3‑羟基丁酸，可产生和分泌γ‑氨基丁酸，可产生和分泌谷胱甘肽，因而具有促进对蛋白食物的消化吸收，改善蛋白过敏，促进对纤维素的吸收进而改善便秘，可抗炎和改善肠道菌群，可抗抑郁和解酒，可抗氧化美白、延缓衰老、抗炎和抗过敏等多种功能，具有重要的应用价值和经济价值。

Description

一株桥粘液乳杆菌JT3及其在制备抗过敏和抗衰食品药品中 的应用
技术领域
本发明属于益生菌及其应用技术领域，具体涉及一株桥粘液乳杆菌JT3及其在制备抗过敏和抗衰食品药品中的应用。
背景技术
桥粘液乳杆菌(Limosilactobacillus pontis)，又名桥乳杆菌，厌氧、兼性均可生长，MRS琼脂培养基上生长的菌落极小，污白色，圆形，湿润，表面光滑，细胞短杆状，单个，成对或短链。革兰氏阳性，不生芽孢。不液化明胶，接触酶和氧化酶阴性，产生乳酸。
桥粘液乳杆菌最初是在开菲尔粒中被发现的，是典型的异型乳酸发酵菌株，能发酵己糖产生乳酸、乙醇和二氧化碳。有研究在芝麻香型白酒大曲和江苏白酒大曲中检测到桥乳杆菌。也有研究在发酵酸面团和发酵豆乳清等其它发酵食品中检测到桥乳杆菌。
当前，桥粘液乳杆菌的主要用途为酿造白酒，产乳酸。比如，桥乳杆菌L-09和罗伊氏乳杆菌L-05共同使用能够显著增加米醋中的乳酸含量。虽然桥粘液乳杆菌目前主要是在酿酒和酿醋等发酵食品中被发现，然而，桥粘液乳杆菌的来源具有多样性，比如，也在鸡的肠道中被检出，导致其具有基因多样性和功能多样性。目前，针对桥粘液乳杆菌的分离鉴定、益生特性和代谢机制的研究依然较少，这在一定程度上也影响了对桥粘液乳杆菌的开发利用。因此，应根据桥粘液乳杆菌的不同来源挖掘不同的益生功能，使其更好地发挥作用，如根据菌株的功能或者益生代谢产物确定其功效，明确其应用前景。综上所述，桥粘液乳杆菌的研究及应用有很广阔的发展空间。
发明内容
为了克服上述现有技术的不足，本发明从中国广东地区一名健康成年人的粪便样品中分离纯化得到一株桥粘液乳杆菌(Limosilactobacillus pontis)JT3菌株，该菌株具有优越的蛋白酶活性和优越的纤维素酶活性，并且可产生和分泌3-羟基丁酸，可产生和分泌γ-氨基丁酸，可产生和分泌谷胱甘肽，在抗过敏和抗衰等领域具有重要的潜在应用价值。
为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：
本发明第一方面提供了一株桥粘液乳杆菌(Limosilactobacillus pontis)JT3菌株，所述桥粘液乳杆菌JT3菌株于2023年7月3日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCCNO:M 20231169；所述桥粘液乳杆菌JT3菌株的16S rDNA全序列如SEQ ID No：1所示。
本发明第二方面提供了第一方面所述的桥粘液乳杆菌(Limosilactobacilluspontis)JT3菌株在产降解牛奶蛋白的蛋白酶中的应用。
经研究发现，益生菌桥粘液乳杆菌JT3菌株可产蛋白酶，提示桥粘液乳杆菌JT3菌株可用于生产蛋白酶，并通过产蛋白酶这一特性用于降解病原真菌的细胞壁，控制病害；分解堆肥中的纤维素；制备畜禽养殖饲料等领域。
本发明第三方面提供了第一方面所述的桥粘液乳杆菌(Limosilactobacilluspontis)JT3菌株在产纤维素酶中的应用。
经研究发现，益生菌桥粘液乳杆菌JT3菌株可产纤维素酶，提示桥粘液乳杆菌JT3菌株可用于生产纤维素酶，并通过产纤维素酶这一特性用于促进人体对食物中蛋白质的消化吸收，提高对小肽和氨基酸的吸收，抗过敏等领域。
本发明第四方面提供了第一方面所述的桥粘液乳杆菌(Limosilactobacilluspontis)JT3菌株在产3-羟基丁酸中的应用。
经研究发现，益生菌桥粘液乳杆菌JT3菌株可产3-羟基丁酸(3-HB)，提示桥粘液乳杆菌JT3菌株可用于生产3-HB，并通过产3-HB这一特性用于为身体各种活动提供能量，抗骨质疏松，预防及治疗慢性综合征，改善脑部认知功能，改善脂代谢等领域。
本发明第五方面提供了第一方面所述的桥粘液乳杆菌(Limosilactobacilluspontis)JT3菌株在产γ-氨基丁酸中的应用。
经研究发现，益生菌桥粘液乳杆菌JT3菌株可产γ-氨基丁酸(GABA)，提示桥粘液乳杆菌JT3菌株可用于生产GABA，并通过产GABA这一特性用于改善机体睡眠质量、抗抑郁、抗焦虑、降血压、改善脂质代谢等领域。
本发明第六方面提供了第一方面所述的桥粘液乳杆菌(Limosilactobacilluspontis)JT3菌株在产还原型谷胱甘肽中的应用。
经研究发现，益生菌桥粘液乳杆菌JT3菌株可产还原型谷胱甘肽(GSH)，提示桥粘液乳杆菌JT3菌株可用于生产GSH，并通过产GSH这一特性用于抗氧化美白、延缓衰老、增强免疫力、抗肿瘤和抗过敏等领域。
本发明第七方面提供了一种制备蛋白酶的方法，具体为：将第一方面所述的桥粘液乳杆菌(Limosilactobacillus pontis)JT3菌株接种于MRS液体培养基中，培养至稳定期后收取菌悬液，最后分离纯化菌悬液中的蛋白酶即得。
当然，也可以用相同的方法，经过不同的分离纯化步骤后，分别用于制备纤维素酶、3-羟基丁酸、γ-氨基丁酸和谷胱甘肽。
优选地，培养的条件为：37℃恒温厌氧。
优选地，先用MRS液体培养基将桥粘液乳杆菌(Limosilactobacillus pontis)JT3菌株培养至稳定期，再以1:20-1000的稀释倍数扩培至新的MRS液体培养基中。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明从中国广东地区一名健康成年人的粪便样品中分离纯化得到一株桥粘液乳杆菌(Limosilactobacillus pontis)JT3菌株，菌株JT3具有的多种益生功效，包括具有优越的蛋白酶活性，具有优越的纤维素酶活性，可产生和分泌3-羟基丁酸，可产生和分泌γ-氨基丁酸，可产生和分泌谷胱甘肽。因此，桥粘液乳杆菌JT3菌株具有促进对蛋白食物的消化吸收，改善蛋白过敏；促进对纤维素的吸收，改善便秘；可抗炎和改善肠道菌群；可抗抑郁和解酒；可抗氧化美白、延缓衰老、抗炎和抗过敏等多种功能。可见，本发明新分离得到的桥粘液乳杆菌JT3菌株具有多种益生功效，可用于抗过敏和抗衰等领域，比如，制作成抗过敏和抗衰药品，具有重要的应用价值和经济价值。
附图说明
图1为桥粘液乳杆菌JT3菌株的系统进化树(建树菌株来源于NCBI的Genome数据库)；
图2为桥粘液乳杆菌JT3菌株对牛奶平板的降解实验(左边，空白对照组；右边，实验组)；
图3为桥粘液乳杆菌JT3菌株对纤维素平板的降解实验(左边，空白对照组；右边，实验组)；
图4为桥粘液乳杆菌JT3菌株可以产生和分泌3-羟基丁酸；
图5为桥粘液乳杆菌JT3菌株可以产生和分泌γ-氨基丁酸；
图6为桥粘液乳杆菌JT3菌株可以产生和分泌GSH。
具体实施方式
下面对本发明的具体实施方式作进一步说明。在此需要说明的是，对于这些实施方式的说明用于帮助理解本发明，但并不构成对本发明的限定。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为可通过常规的商业途径购买得到。
下列实施例涉及的实验材料如下：
(1)桥粘液乳杆菌(Limosilactobacillus pontis)JT3菌株，由肠道微生物组研究润泽实验室分离自中国广东广州地区一名健康成年人(BMI＝19.5)的肠道粪便样品中，于甘油管内置于-80℃低温冷冻保藏。一般情况下，将该菌株接种于MRS固体培养基平板表面并在37℃恒温厌氧培养箱中倒置培养24h可获得菌落，或在37℃恒温厌氧培养箱内于MRS液体培养基中振荡培养24-48h可获得发酵液。
(2)试剂盒：3-羟基丁酸(3-HB)检测试剂盒(Cloud-Clone Corp.,Cat:CEB022Ge)，γ-氨基丁酸(GABA)检测试剂盒(Cloud-Clone Corp.,Cat:CEA900Ge)，微量还原型谷胱甘肽(GSH)测定试剂盒(南京建成,Cat:A006-2-1)。
(3)MRS平板：牛肉膏10g,蛋白胨10g,酵母膏5g,柠檬酸三铵2g,乙酸钠5g,葡萄糖20g,磷酸氢二钾2g,吐温80 1mL,硫酸镁0.58g,硫酸锰0.25g,琼脂15g,ddH2O补齐至1L，调pH至6.2-6.6，121℃高压灭菌20min，配置成MRS平板。
(4)MRS液体培养基：牛肉膏10g,蛋白胨10g,酵母膏5g,柠檬酸三铵2g,乙酸钠5g,葡萄糖20g,磷酸氢二钾2g,吐温80 1mL,硫酸镁0.58g,硫酸锰0.25g,ddH2O补齐至1L，调pH至6.2-6.6，121℃高压灭菌20min，配置成MRS液体培养基。
(5)MP平板：脱脂奶粉10g,氯化钠1g,牛肉膏10g,蛋白胨10g,酵母膏5g,葡萄糖20g,柠檬酸三铵2g,乙酸钠5g,磷酸氢二钾2g,吐温80 0.5mL,硫酸镁0.58g,硫酸锰0.25g,琼脂15g,ddH2O补齐至1L，调pH至6.2-6.6，121℃高压灭菌20min，配置成MP平板。
(6)CMC平板：羧甲基纤维素钠10g,硫酸铵1.5g,硫酸锰0.3g,氯化钙0.2g,氯化钠5g,尿素0.3g,牛肉膏10g,蛋白胨10g,酵母膏5g,葡萄糖20g,柠檬酸三铵2g,乙酸钠5g,磷酸氢二钾2g,吐温80 0.5mL,硫酸镁0.58g,硫酸锰0.25g,琼脂15g,ddH2O补齐至1L，调pH至6.2-6.6，121℃高压灭菌20min，配置成CMC平板。
实施例1桥粘液乳杆菌(Limosilactobacillus pontis)JT3菌株的分离鉴定
桥粘液乳杆菌(Limosilactobacillus pontis)JT3菌株从中国广东省一名健康成年人的粪便中分离得到，具体如下：
用无菌水将粪便样品反复清洗3次，置于研钵中，每100mg粪便加入500uL无菌水，彻底研磨匀浆，用移液器吸取适量研磨液，涂布于MRS平板上，室温培养3天。然后，用记号笔对分离实验平板中待划线纯化的菌落进行编号，并相应地在平板上标明菌株编号。标记后，挑取菌落接种到MRS平板上，用平板划线法纯化菌株。若此法不能将菌株分离则需要从富集平板上挑取菌落，经MRS液体培养基梯度稀释后，涂布于培养基上。最后，参考《伯杰细菌鉴定手册》(第八版)和《真菌分类鉴定手册》，首先分辨属于细菌的菌株，然后观察菌落的生长状况。初步分离得到一株纯化菌株，菌株编号为JT3，培养24小时后观察到菌株的菌落呈乳白色，表面光滑、平整。
接着，通过16S rDNA通用引物(27F：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG，1492R：TACGGCTACCTTGTTACGACTT)对分离得到的JT3菌株进行分子鉴定后，由北京百迈客生物科技有限公司对JT3菌株进行全基因组测序。将到的序列16S rDNA sequence(SEQ IDNo：1)在NCBI的Genome数据库进行BLAST比对。结果显示，菌株JT3与已知的桥粘液乳杆菌(Limosilactobacillus pontis)16S rDNA序列的同源性>99％，并与同源菌株进行进化分析(图1)，确认JT3是同种不同株的桥粘液乳杆菌。
最后，对菌株JT3进行保藏，保藏信息如下：保藏时间：2023年7月3日；保藏单位名称：中国典型培养物保藏中心(CCTCC)；保藏号：CCTCC NO:M 20231169；保藏单位地址：中国.武汉.武汉大学；分类命名：Limosilactobacillus pontis。
桥粘液乳杆菌主要用于发酵食品中，但不同来源的菌株功效不同，说明本发明从人体粪便分离得到的一株新的桥粘液乳杆菌JT3可能具有新的功效和功能。
Limosilactobacillus pontis JT3 16S rDNA sequence(1445bp，SEQ ID No：1)：
TTAGGCGGCTCCCTCCAAATGGTTAGGCCACCGACTTTGGGCGTTACAAACTTCCATGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGGCATGCTGATCCGCGATTACTAGCGATTCCGACTTCGTGTAGGCGAGTTGCAGCCTACAGTCCGAACTGAGATCGGCTTTAAGAGATTAGCTTGCCCTCGCGGGTTAGCGACTCGTTGTACCGACCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAGGTCATAAGGGGCATGATGATCTGACGTCGTCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCTCACTAGAGTGCCCAACTGAATGCTGGCAACTAGTAACAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACGACCATGCACCACCTGTCATTGCGTCCCCGAAGGGAACGCCTAATCTCTTAGGTTAGCGCAAGATGTCAAGACCTGGTAAGGTTCTTCGCGTAGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAACCTTGCGGTCGTACTCCCCAGGCGGAGTGCTTAATGCGTTAGCTCCGGCACTGAAGGGCGGAAACCCTCCAACACCTAGCACTCATCGTTTACGGCATGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTCGCTACCCATGCTTTCGAGCCTCAGCGTCAGTTGCAGACCAGACAGCCGCCTTCGCCACTGGTGTTCTTCCATATATCTACGCATTCCACCGCTACACATGGAGTTCCACTGTCCTCTTCTGCACTCAAGTCACCCAGTTTCCGATGCACTTCTTCGGTTAAGCCGAAGGCTTTCACATCAGACTTAAGTAACCGCCTGCGCTCGCTTTACGCCCAATAAATCCGGATAACGCTTGCCACCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGTGACTTTCTGGTTGAATACCGTCACTGCATGAACAGTTACTCTCACGCACGTTCTTCTTCAACAACAGAGTTTTACGAGCCGAAACCCTTCTTCACTCACGCGGTGTTGCTCCATCAGGCTTGCGCCCATTGTGGAAGATTCCCTACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTATGGACCGTGTCTCAGTTCCATTGTGGCCGATCAGTCTCTCAACTCGGCTATGCATCATCGCCTTGGTAAGCCGTTACCTTACCAACTAGCTAATGCACCGCGGGCCCATCCTGGAGTGATAGCCGAAGCCATCTTTGAAATCAAAACCATGTGGTTTTGATTATTATGCGGTATTAGCATCTGTTTCCAAATGTTATCCCCCGCTCCAGGGCAGGTTGCCCACGTGTTACTCACCCGTCCGCCGCTCACTGGTAATCCATCGTCAAATCAGTGCAAGCACGTCATATCAGTTGGGCCAGTGCGCTCGACTGC。
实施例1桥粘液乳杆菌(Limosilactobacillus pontis)JT3菌株的的功能及其应用
(1)桥粘液乳杆菌JT3菌株可产降解牛奶蛋白的蛋白酶
使用脱脂牛奶平板培养基(MP平板)根据琼脂孔扩散试验测定桥粘液乳杆菌JT3分泌蛋白酶水解蛋白的能力。试验时，往实验组的MP平板中滴加3uL浓度为10Abs的桥粘液乳杆菌JT3菌液，对照组则滴加3uL空白MRS培养基。并在37℃恒温厌氧培养箱中倒置培养3天。结果表明，与滴加空白培养基的对照相比，菌株JT3可以显著的降解蛋白，形成明显的降解圈(图2)，说明桥粘液乳杆菌JT3菌株可产降解牛奶蛋白的蛋白酶。
桥粘液乳杆菌JT3可产蛋白酶，其作为益生菌菌株使用可以促进人体对食物中蛋白质的消化吸收，提高对小肽和氨基酸的吸收。同时，也可用于抗过敏(改善蛋白消化不良或不吸收导致的食物过敏)。此外，也可以用于蛋白酶的提取，应用于食品工业或洗涤工业等蛋白酶的生产中；也可用于微生物饲料中以帮助动物消化吸收营养，提高对饲料的利用率。
(2)桥粘液乳杆菌JT3菌株可产纤维素酶
使用纤维素板培养基(MP平板)根据琼脂孔扩散法测定桥粘液乳杆菌JT3对纤维素的降解能力。试验时，往实验组的MP平板中滴加3uL浓度为10Abs的桥粘液乳杆菌JT3菌液，对照组则滴加3uL空白MRS培养基。并在37℃恒温厌氧培养箱中倒置培养3天后进行刚果红染色。结果表明，与滴加空白培养基的对照相比，菌株JT3可以显著的降解纤维素，形成明显的降解圈(图3)，说明桥粘液乳杆菌JT3菌株可产纤维素酶。
由于桥粘液乳杆菌JT3菌株可产纤维素酶，因此益生菌桥粘液乳杆菌JT3菌株可通过产生纤维素酶的功效发挥以下多个用途：(1)用于促进对膳食成分的消化吸收；(2)改善便秘，益生菌在肠道内分解纤维素产生一定的水分，具有软化大便的作用；(3)降低胆固醇是纤维素最重要的功效，因为可溶性纤维在被人体吸收后，能抑制人体对胆固醇的吸收，并能在肠道中与胆固醇结合，加快身体内胆固醇的代谢，防止人体因胆固醇过高而诱发高血脂，并且能降低动脉硬化与冠心病的发病率；(4)纤维素这种不甜的“糖”能够减缓血液对葡萄糖的吸收，平衡血糖浓度，促进肌肉和脂肪细胞对胰岛素的敏感性，从而预防并辅助治疗糖尿病。此外，桥粘液乳杆菌JT3菌株还可以应用于纤维素酶的发酵提取；应用于降解病原真菌的细胞壁，控制病害；应用于堆肥中纤维素的分解；应用于制备畜禽养殖饲料，如猪、鸡等单胃动物饲料，以克服其不能利用纤维素的缺陷。
(3)桥粘液乳杆菌JT3菌株可产生和分泌3-羟基丁酸(3-HB)
将用MRS液体培养基培养至稳定期的桥粘液乳杆菌JT3以1:30的稀释倍数扩培至新的MRS液体培养基中，在培养至稳定期24h时收取菌悬液，10,000×g、4℃离心10min后收取发酵液上清，然后通过3-HB特定ELISA试剂盒(CEB022Ge)测定发酵液上清的3-HB浓度。结果显示，与空白培养基MRS中不存在3-HB相比，菌株JT3的上清液中3-HB的浓度为0.66μg/mL，说明桥粘液乳杆菌JT3可以在稳定期产生并分泌3-羟基丁酸(图4)。
3-HB可以为身体各种活动提供能量，是潜在的能量/功能型食物，已被添加到运动员饮料中，因此益生菌桥粘液乳杆菌JT3可作为能量型食品的添加剂。同时，鉴于3-HB可以有效的抗骨质疏松，预防及治疗慢性综合征(高血压，酒精性脂肪肝，肠炎，肠癌)，改善脑部认知功能(提高学习记忆的能力，保护神经胶质细胞，改善阿尔兹海默症)，改善脂代谢。益生菌桥粘液乳杆菌JT3菌株可通过产生3-羟基丁酸的功效发挥以上多个用途。
此外，3-羟基丁酸是是机体天然产生的一种内源性小分子物质，对维持结肠直肠组织完整性具有重要作用，并且具有维持肠道健康、防止结肠疾病和消炎产能的作用。3-HB通过处理可以促进肠道有益菌增殖，缓解多发性硬化老鼠的症状，在调节菌群改善健康方面具有巨大的潜力。因此，益生菌桥粘液乳杆菌JT3菌株也有助于改善肠道菌群，缓解肠道炎症。
(4)桥粘液乳杆菌JT3菌株可产生和分泌γ-氨基丁酸(GABA)
将用MRS液体培养基培养至稳定期的桥粘液乳杆菌JT3以1:30的稀释倍数扩培至新的MRS液体培养基中，在培养至稳定期24h时收取菌悬液，10,000×g、4℃离心10min后收取发酵液上清，然后通过GABA特定ELISA试剂盒(CEA900Ge)测定发酵液上清的GABA浓度。结果显示，与空白培养基MRS中低浓度GABA相比，菌株JT3的发酵上清液中GABA的浓度显著性增加，可积累量为43.61pg/mL，说明桥粘液乳杆菌JT3可以在稳定期产生并分泌γ-氨基丁酸(图5)。
γ-氨基丁酸是一种重要的中枢神经系统抑制性神经递质，广泛存在于动植物、微生物体内。现已证实，作为小分子量非蛋白质氨基酸的GABA具备食用安全性，可作为食品添加剂。研究表明，摄入一定量的GABA具有改善机体睡眠质量、抗抑郁、抗焦虑、降血压、改善脂质代谢、增强记忆能力并提高脑活力、加快大脑新陈代谢、健肝利肾、促进乙醇代谢(解酒)、改善更年期综合症等生理功效。
因此，益生菌桥粘液乳杆菌JT3菌株可通过产生γ-氨基丁酸的功效发挥以上多个用途。
(5)桥粘液乳杆菌JT3菌株可产生和分泌还原型谷胱甘肽(GSH)
将用MRS液体培养基培养至稳定期的桥粘液乳杆菌JT3菌株以1:30的稀释倍数扩培至新的MRS液体培养基中，在培养至稳定期24h时收取菌悬液，10,000×g、4℃离心10min后收取发酵液上清，然后通过还原型谷胱甘肽(GSH)测定试剂盒(A006-2-1)测定发酵液上清GSH的浓度。结果显示，与空白培养基MRS中低浓度的GSH相比，菌株JT3的发酵上清液中GSH的浓度为312.9μmol/L，经JT3发酵后GSH的浓度显著增加(***P<0.001)，说明桥粘液乳杆菌JT3可以在稳定期产生并分泌谷胱甘肽(GSH)(图6)。
谷胱甘肽(glutathione，GSH)是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成，且含有γ-酰胺键和巯基的三肽，具有抗氧化作用和整合解毒作用。半胱氨酸上的巯基为谷胱甘肽活性基团(故谷胱甘肽常简写为GSH)。谷胱甘肽有助于维持正常的免疫系统功能，并具有抗氧化作用和整合解毒作用，在多种细胞生化过程中发挥重要作用，如自由基中和、解毒、半胱氨酸的运输和储存、细胞氧化还原作用的维持、抗坏血酸和维生素E的再生等。主要包括以下几个方面：
①解毒作用：与毒物或药物结合，消除其毒性作用；
②参与氧化还原反应：作为重要的还原剂，参与体内多种氧化还原反应；
③保护巯基酶的活性：使巯基酶的活性基团(-SH)维持还原状态；
④维持红细胞膜结构的稳定：消除氧化剂对红细胞膜结构的破坏作用。
由此，GSH的多种生物学功能赋予了其多种功效和用途，主要表现在：
1)抗氧化剂：清除人体内的自由基，保护许多蛋白质和酶等分子中的巯基不被有害物质氧化，从而保证蛋白质和酶等分子生理功能的正常发挥；人体红细胞中谷胱甘肽的含量很多，这对于保护红细胞膜上蛋白质的巯基处于还原状态，防止溶血具有重要意义；还可防止皮肤老化及色素沉着，减少黑色素的形成，改善皮肤抗氧化能力，并使皮肤产生光泽。
2)临床药物：利用其巯基螯合重金属、氟化物、芥子气等毒素而防止中毒；还可以在肝炎、溶血性疾病以及角膜炎、白内障和视网膜疾病等方面作为治疗或辅助治疗的药物；还可以纠正乙酰胆碱、胆碱酯酶的不平衡，起到抗过敏作用。
3)食品添加剂：强化食品营养、稳定维生素C、强化风味。
综上所述，谷胱甘肽不仅可以用于药物，而且可以作为功能性食品的基料，在抗氧化美白、延缓衰老、增强免疫力、抗肿瘤和抗过敏等功能性食品领域具有广泛的应用价值。
由此，益生菌桥粘液乳杆菌JT3菌株可以通过产生的GSH的功能，从而发挥以上多个功效。
综上可知，本发明新分离的桥粘液乳杆菌菌株JT3菌株具有的多种益生功效：(1)具有优越的蛋白酶活性；(2)具有优越的纤维素酶活性；(3)可产生和分泌3-羟基丁酸；(4)可产生和分泌γ-氨基丁酸；(5)可产生和分泌谷胱甘肽。可见，本发明新分离得到的桥粘液乳杆菌菌株JT3菌株在抗过敏和抗衰等领域具有重要的应用价值和经济价值。
以上对本发明的实施方式作了详细说明，但本发明不限于所描述的实施方式。对于本领域的技术人员而言，在不脱离本发明原理和精神的情况下，对这些实施方式进行多种变化、修改、替换和变型，仍落入本发明的保护范围内。

Claims (8)

1.桥粘液乳杆菌(Limosilactobacillus pontis)JT3菌株在产降解牛奶蛋白的蛋白酶中的应用，其特征在于，所述桥粘液乳杆菌JT3菌株于2023年7月3日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC NO:M 20231169；所述桥粘液乳杆菌JT3菌株的16S rDNA全序列如SEQ ID No：1所示。
2.桥粘液乳杆菌(Limosilactobacillus pontis)JT3菌株在产纤维素酶中的应用，其特征在于，所述桥粘液乳杆菌JT3菌株于2023年7月3日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC NO:M 20231169；所述桥粘液乳杆菌JT3菌株的16S rDNA全序列如SEQ IDNo：1所示。
3.桥粘液乳杆菌(Limosilactobacillus pontis)JT3菌株在产3-羟基丁酸中的应用，其特征在于，所述桥粘液乳杆菌JT3菌株于2023年7月3日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC NO:M 20231169；所述桥粘液乳杆菌JT3菌株的16S rDNA全序列如SEQIDNo：1所示。
4.桥粘液乳杆菌(Limosilactobacillus pontis)JT3菌株在产γ-氨基丁酸中的应用，其特征在于，所述桥粘液乳杆菌JT3菌株于2023年7月3日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC NO:M 20231169；所述桥粘液乳杆菌JT3菌株的16S rDNA全序列如SEQIDNo：1所示。
5.桥粘液乳杆菌(Limosilactobacillus pontis)JT3菌株在产还原型谷胱甘肽中的应用，其特征在于，所述桥粘液乳杆菌JT3菌株于2023年7月3日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC NO:M 20231169；所述桥粘液乳杆菌JT3菌株的16S rDNA全序列如SEQID No：1所示。
6.一种制备蛋白酶的方法，其特征在于，将桥粘液乳杆菌(Limosilactobacilluspontis)JT3菌株接种于MRS液体培养基中，培养至稳定期后收取菌悬液，最后分离纯化菌悬液中的蛋白酶即得；所述桥粘液乳杆菌JT3菌株于2023年7月3日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC NO:M 20231169；所述桥粘液乳杆菌JT3菌株的16S rDNA全序列如SEQ IDNo：1所示。
7.根据权利要求6所述的一种制备蛋白酶的方法，其特征在于，培养的条件为：37℃恒温厌氧。
8.根据权利要求6所述的一种制备蛋白酶的方法，其特征在于，先用MRS液体培养基将桥粘液乳杆菌(Limosilactobacillus pontis)JT3菌株培养至稳定期，再以1:20-1000的稀释倍数扩培至新的MRS液体培养基中。
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