CN117603922A - 一种流感病毒裂解液、流感病毒抗原及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本申请涉及生物医药技术领域，具体公开了一种流感病毒裂解液、流感病毒抗原及其制备方法与应用。本申请提供一种流感病毒裂解液，包括A液；所述A液包括以下含量的组分：Triton X‑100 8‑12mL/100mL和焦磷酸钠0.1‑0.3g/100mL；进一步地，流感病毒裂解液还包括B液，所述B液包括以下含量的组分：十二烷基磷酸酯钾0.1‑0.5g/100mL、N‑正辛基‑D‑葡萄糖胺0.05‑0.25 g/100mL和氯化钠 0.6‑0.8g/100mL；本申请还提供了利用上述流感病毒裂解液制备流感病毒抗原的方法。本申请提供的流感病毒裂解液能够在短时间内实现流感病毒的高效、均匀裂解，从而能获得高纯度的流感病毒抗原。
Description
技术领域
本申请涉及生物医药技术领域，具体涉及一种流感病毒裂解液、流感病毒抗原及其制备方法与应用。
背景技术
流行性感冒病毒，简称流感病毒(Influenza virus)，是有包膜的RNA病毒，属正粘病毒科，流感病毒形态呈球形，少数呈丝状，其直径在80～12nm之间，主要通过人类谈话时的飞沫、与患有流感的病人接触或与被流感病毒污染的物品接触而传播。研究表明，流感病毒是一种很容易变异的病毒，当变异达到一定程度，从而会产生一种新的流感病毒，当人类不具备相应的抗体时，则会引发流感病毒大流行。
目前，市场上流感疫苗主要有裂解灭活苗、亚单位疫苗等，由于裂解疫苗的免疫效果较好，副作用较小，因此得到了广泛应用。现有的裂解流感病毒的裂解大体上分为：乙醚裂解、聚乙二醇叔辛基苯基醚(Triton X-100)裂解；3-M-丁基盐酸裂解；聚山梨酸酯80裂解；脱氧胆酸钠裂解；十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)裂解。然而，上述裂解方法存在以下问题：裂解时间长，裂解均匀差、易产生团聚，获得的流感病毒抗原纯度不佳等问题。
发明内容
为了缩短流感病毒的裂解时间、提高裂解均匀度与流感病毒抗原的纯度，本申请提供一种流感病毒裂解液、流感病毒抗原及其制备方法与应用。
第一方面，本申请提供一种流感病毒裂解液，采用如下的技术方案：
一种流感病毒裂解液，包括A液；所述A液包括以下含量的组分：Triton X-100 8-12mL/100mL和焦磷酸钠0.1-0.3g/100mL。
本申请提供一种由Triton X-100和感病毒裂解液组成的流感病毒裂解液，该流感病毒裂解液能够使流感病毒均匀、彻底地裂解为小分子，使流感病毒失去感染性而保留抗原，在50-100min内有效提取流感病毒中的血凝素和神经氨酸酶抗原。利用本申请提供的流感病毒裂解液制备流感病毒抗原，一方面能够缩短流感病毒的裂解时间，减少灭火所需厂房、设施和能耗，另一方面能够降低染菌风险，提高裂解的均一性与稳定性，并获得高纯度的流感病毒抗原。
流感病毒是有包膜病毒，病毒颗粒内部为核衣壳，由核蛋白、聚合酶和病毒的基因组——单股负链RNA组成；包膜由双层类脂膜、糖蛋白突起和基质蛋白组成。流感病毒糖蛋白突起主要包括血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)。HA的抗体能抑制血凝素并能中和病毒，是最主要的保护性抗体。NA的抗体虽不能中和病毒，但能抑制病毒的繁殖，减轻症状。因此，本申请提供的流感病毒裂解液能够有效裂解流感病毒，提取流感病毒中的血凝素和神经氨酸酶抗原，获得一种高纯度的、能够用于制备流感病毒裂解疫苗的流感病毒抗原。
在一些实施方案中，所述Triton X-100的重量份可以为8-10mL/100mL或10-12mL/100mL。
在一个具体的实施方案中，所述Triton X-100的重量份还可以为8mL/100mL、10mL/100mL或12mL/100mL。
可选地，所述流感病毒裂解液还包括B液，所述B液包括以下含量的组分：十二烷基磷酸酯钾0.1-0.5g/100mL、N-正辛基-D-葡萄糖胺0.05-0.25g/100mL和氯化钠0.6-0.8g/100mL。
本申请通过实验探究发现，向流感病毒裂解液加入B液能够进一步提高流感病毒的裂解效率，使流感病毒裂解地更加彻均匀与彻底，流感病毒的裂解均一性和稳定性更好，纯度更高。
可选地，所述B液包括以下含量的组分：十二烷基磷酸酯钾0.2-0.4g/100mL、N-正辛基-D-葡萄糖胺0.1-0.2g/100mL和氯化钠0.6-0.8g/100mL。
在一些实施方案中，所述十二烷基磷酸酯钾的重量份可以为0.1-0.2g/100mL、0.1-0.3g/100mL、0.1-0.4g/100mL、0.2-0.3g/100mL、0.2-0.4g/100mL、0.2-0.5g/100mL、0.3-0.4g/100mL、0.3-0.5g/100mL或0.4-0.5g/100mL。
在一个具体的实施方案中，所述十二烷基磷酸酯钾的重量份还可以为0.1g/100mL、0.2g/100mL、0.3g/100mL、0.4g/100mL或0.5g/100mL。
第二方面，本申请提供一种流感病毒裂解液在制备流感病毒抗原中的应用。
第三方面，本申请提供一种流感病毒抗原的制备方法，采用如下的技术方案：
一种流感病毒抗原的制备方法，包括以下步骤：制备流感病毒灭活液、裂解；
裂解：向流感病毒灭活液中加入流感病毒裂解液，于15-25℃下搅拌裂解50-100min，获得流感病毒裂解液。
本申请提供一种流感病毒抗原的制备方法，该制备方法采用所述流感病毒裂解液对流感病毒灭活液进行裂解，能够使流感病毒失去感染性并裂解为小分子，从而获得仅包含血凝素和神经氨酸酶抗原的流感病毒抗原。本申请提供的流感病毒抗原的制备方法与相关技术中的制备方法相比，无需在低温下裂解，大大节省了厂房与能耗，并且具有裂解时间短、裂解效率高、裂解的均一性与稳定性好等优点。
可选地，所述裂解步骤为：向流感病毒灭活液中加入A液，于15-20℃下搅拌裂解30-60min；然后再加入B液，于20-25℃下搅拌裂解20-40min，获得流感病毒裂解液。
可选地，所述流感病毒灭活液中流感病毒的浓度为500-1500μg/mL；所述流感病毒灭活液与所述A液的体积比为1：(10-15)，所述流感病毒灭活液与所述B液的体积比为1：(3-5)。
在一个具体的实施方案中，所述流感病毒灭活液中流感病毒的浓度为1000μg/mL。
可选地，所述裂解结束后，采用0.02mol/L PBS缓冲液以及截留分子量为40-70kD的膜包对流感病毒裂解液进行超滤透析，然后再进行超声、过滤，获得流感病毒抗原。
第四方面，本申请提供一种利用流感病毒抗原的制备方法制得的流感病毒抗原。
第五方面，本申请提供一种包含流感病毒抗原的流感病毒裂解疫苗。
综上所述，本申请具有以下有益效果：
1.本申请提供一种流感病毒裂解液，该流感病毒裂解液能够将全流感病毒颗粒裂解为小分子，从而使病毒失去感染性，仅保留血凝素和神经氨酸酶抗原，获得高纯度的流感病毒抗原，利用上述流感病毒抗原能够制备流感病毒裂解疫苗，实现流感流行的有效预防。
2.本申请提供的流感病毒抗原的制备方法一方面解决了传统流感病毒裂解方法中存在的流感病毒裂解时间长的问题，使流感病毒裂解得更加均匀和彻底，提高了流感病毒的裂解效果；另一方面提高了流感病毒的裂解效率，使获得的流感病毒抗原的纯度更高。
附图说明
图1是H1N1型流感病毒2万倍的电镜图；
图2为实施例2裂解后的H1N1型流感病毒2万倍的电镜图；
图3为对比例4裂解后的H1N1型流感病毒2万倍的电镜图；
图4为BVR-26型流感病毒2万倍的电镜图；
图5为实施例18裂解后的BVR-26型流感病毒2万倍的电镜图；
图6为对比例5裂解后的BVR-26型流感病毒2万倍的电镜图。
具体实施方式
第一方面，本申请提供一种流感病毒裂解液，包括A液，A液包括以下含量的组分：Triton X-100 8-12mL/100mL和焦磷酸钠0.1-0.3g/100mL；进一步地，所述流感病毒裂解液还包括B液，所述B液包括以下含量的组分：十二烷基磷酸酯钾0.1-0.5g/100mL、N-正辛基-D-葡萄糖胺0.05-0.25g/100mL和氯化钠0.6-0.8g/100mL；再进一步地，所述B液包括以下含量的组分：十二烷基磷酸酯钾0.2-0.4g/100mL、N-正辛基-D-葡萄糖胺0.1-0.2g/100mL和氯化钠0.6-0.8g/100mL。
第二方面，本申请提供一种流感病毒抗原的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备流感病毒灭活液：
(1-1)取9～11日龄无畸形、血管清晰、活动的鸡胚。
(1-2)接种与培养：用0.02mol/L PBS缓冲液(pH7.4)将流感病毒工作种子稀释至3.9lg EID50/mL，然后接种鸡胚尿囊腔，每胚接种0.20mL，于33～35℃条件下培养48小时。
(1-3)病毒收获：筛选活鸡胚，置于2～8℃冷胚12～18h后，收获尿囊液。
(1-4)浓缩与纯化：将尿囊液放入离心机，并在5000rpm下离心，然后采用750kD中空纤维进行超滤浓缩，获得流感病毒浓缩液；将流感病毒浓缩液经蔗糖密度区带离心纯化、超滤，获得流感病病毒液。
(1-5)灭活：向流感病病毒液中加入甲醛溶液，获得终浓度为500-1500μg/mL的流感病毒灭活液。
(2)裂解：向流感病毒灭活液中加入A液，于15-20℃下搅拌裂解30-60min；然后再加入B液，于20-25℃下搅拌裂解20-40min，获得流感病毒裂解液。其中，流感病毒灭活液与A液的体积比为1：(10-15)，流感病毒灭活液与B液的体积比为1：(3-5)。
(3)裂解后纯化：采用0.02mol/L PBS缓冲液以及截留分子量为40-70kD的膜包对步骤(2)获得的流感病毒裂解液进行超滤透析，获得流感病毒裂解后纯化液；
(4)超声除菌过滤：将步骤(5)获得的流感病毒裂解后纯化液进行超声，并用0.2μm囊式滤器除菌过滤，获得流感病毒原液。
本申请中，毒种传代和制备用鸡胚来自无外源性禽白血病病毒、无外源性禽腺病毒I型和III型的SPF鸡群，选用9～11日龄无畸形、血管清晰、活动的健康鸡胚；流感病毒工作种子为世界卫生组织(WHO)推荐北半球季节性人用流感疫苗生产用毒株，来自英国NIBSC，具体如下表1所示；Triton X-100的CAS号为9002-93-1；焦磷酸钠的CAS号为7722-88-5；十二烷基磷酸酯钾的CAS号为39322-78-6；N-正辛基-D-葡萄糖胺的CAS号为23323-37-7；本申请的采用其他原料、试剂、溶剂等均可通过商购获得。
表1本申请实施例采用的病毒株
以下结合制备例、实施例、性能检测试验及附图说明对本申请作进一步详细说明。
制备例1-5
制备例1-5分别提供一种流感病毒裂解液。
上述制备例的不同之处在于：流感病毒裂解液的组分及添加量，具体如下表2所示。
制备例1-5提供的流感病毒裂解液的制备方法，包括以下步骤：
(1)配制0.02mol/L PBS缓冲液：称取5.80g Na2HPO4·12H2O、0.59g NaH2PO4·2H2O和8.50g NaCl，用注射用水稀释至1L，然后用2％氢氧化钠溶液调节溶液的pH值至7.4，获得0.02mol/L PBS缓冲液。
(2)制备流感病毒裂解液(A液)：按照表2所示量取Triton X-100、称取焦磷酸钠，溶于100mL的0.02mol/L PBS缓冲液中，获得A液。
对比制备例1-3
对比制备例1-3分别提供一种流感病毒裂解液。
上述对比制备例与制备例2的不同之处在于：流感病毒裂解液的组分及添加量，具体如下表2所示。
表2制备例1-5、对比制备例1-3提供的流感病毒裂解液的组分及添加量
制备例6-16
制备例6-16分别提供一种流感病毒裂解液。
上述制备例与制备例2的不同之处在于：流感病毒裂解液还包括B液，所述B液的组分及添加量如下表3所示。
制备例6-16提供的流感病毒裂解液的制备方法，包括以下步骤：
(1)配制0.02mol/L PBS缓冲液：同制备例1
(2)制备流感病毒裂解液(A液)：同制备例1
(3)制备流感病毒裂解液(B液)：按照表3所示称取十二烷基磷酸酯钾、N-正辛基-D-葡萄糖胺和氯化钠，溶于100mL的0.02mol/L PBS缓冲液中，获得B液。
表3制备例6-16提供的流感病毒裂解液的组分及添加量
制备例17
制备例17提供一种H1N1流感病毒灭活液。
上述H1N1流感病毒灭活液的制备方法包括以下步骤：
(1-1)取9～11日龄无畸形、血管清晰、活动的鸡胚。
(1-2)接种与培养：用0.02mol/L PBS缓冲液(pH7.4)将流感病毒工作种子(H1N1型流感病毒)稀释至3.9lg EID50/mL，然后接种鸡胚尿囊腔，每胚接种0.20mL，于35℃条件下培养48小时。
(1-3)病毒收获：筛选活鸡胚，置于2～8℃冷胚16h后，收获尿囊液。
(1-4)浓缩与纯化：将尿囊液放入离心机，在8400g的离心力下离心，然后采用750kD中空纤维进行超滤浓缩，获得流感病毒浓缩液；将流感病毒浓缩液经蔗糖密度区带离心纯化、超滤，获得流感病病毒液。
(1-5)灭活：向流感病病毒液中加入甲醛溶液，获得终浓度为1000μg/mL的H1N1流感病毒灭活液。
制备例18
制备例18提供一种BVR-26流感病毒灭活液。
按照制备例17的方法进行制备例18，不同之处在于：流感病毒工作种子为BVR-26型流感病毒。
实施例1-5
实施例1-5分别提供一种H1N1流感病毒抗原。
上述实施例的不同之处在于：H1N1流感病毒抗原的制备方法中采用的流感病毒裂解液分别来源于制备例1-5。
上述H1N1流感病毒抗原的制备方法包括以下步骤：
(1)按照制备例17的方法制备H1N1流感病毒灭活液。
(2)裂解：向H1N1流感病毒灭活液中加入A液，于15-20℃下搅拌裂解40min。其中，H1N1流感病毒灭活液与A液的体积比为1：10。
(3)裂解后纯化：采用0.02mol/L PBS缓冲液以及截留分子量为50kD的膜包对步骤(2)获得的流感病毒裂解液进行超滤透析，获得流感病毒裂解后纯化液；
(4)超声除菌过滤：将步骤(3)获得的流感病毒裂解后纯化液进行超声，并用0.2μm囊式滤器除菌过滤，获得H1N1流感病毒抗原。
实施例6-16
实施例6-16分别提供一种H1N1流感病毒抗原。
上述实施例的不同之处在于：H1N1流感病毒抗原的制备方法中采用的流感病毒裂解液分别来源于制备例6-16。
上述H1N1流感病毒抗原的制备方法包括以下步骤：
(1)按照制备例17的方法制备H1N1流感病毒灭活液。
(2)裂解：向H1N1流感病毒灭活液中加入A液，于18℃下搅拌裂解40min；然后再加入B液，于23℃下搅拌裂解30min，获得流感病毒裂解液。其中，H1N1流感病毒灭活液与A液的体积比为1：10，H1N1流感病毒灭活液与所述B液的体积比为1：4。
(3)裂解后纯化：采用0.02mol/L PBS缓冲液以及截留分子量为50kD的膜包对步骤(2)获得的流感病毒裂解液进行超滤透析，获得流感病毒裂解后纯化液；
(4)超声除菌过滤：将步骤(3)获得的流感病毒裂解后纯化液进行超声，并用0.2μm囊式滤器除菌过滤，获得H1N1流感病毒抗原。
实施例17
实施例17提供一种H1N1流感病毒抗原。
上述实施例与实施例9的不同之处在于：A液和B液同时添加。具体步骤如下：
上述H1N1流感病毒抗原的制备方法包括以下步骤：
(1)按照制备例17的方法制备H1N1流感病毒灭活液。
(2)裂解：向H1N1流感病毒灭活液中同时加入A液和B液，于23℃下搅拌裂解60min，获得流感病毒裂解液。其中，H1N1流感病毒灭活液与A液的体积比为1：10，H1N1流感病毒灭活液与所述B液的体积比为1：4。
(3)裂解后纯化：采用0.02mol/L PBS缓冲液以及截留分子量为50kD的膜包对步骤(2)获得的流感病毒裂解液进行超滤透析，获得流感病毒裂解后纯化液；
(4)超声除菌过滤：将步骤(3)获得的流感病毒裂解后纯化液进行超声，并用0.2μm囊式滤器除菌过滤，获得H1N1流感病毒抗原。
实施例18
实施例18提供一种BVR-26流感病毒抗原。
按照实施例2的方法进行实施例18，不同之处在于：实施例18的BVR-26流感病毒灭活液来源于制备例18。
对比例1-3
对比例1-3分别提供一种H1N1流感病毒抗原。
上述对比例与实施例2的不同之处在于：H1N1流感病毒抗原的制备方法中采用的流感病毒裂解液分别来源于对比制备例1-3。
对比例4
对比例4提供一种H1N1流感病毒抗原。
上述对比例与实施例2的不同之处在于：H1N1流感病毒抗原的制备方法中，裂解温度为2～8℃，时间为15h。
对比例5
对比例5提供一种BVR-26流感病毒抗原。
上述对比例与实施例18的不同之处在于：BVR-26流感病毒抗原的制备方法中，裂解温度为2～8℃，时间为15h。
对比例6
对比例6提供一种H1N1流感病毒抗原。
上述对比例与实施例2的不同之处在于：(2)裂解，具体如下：
(2)裂解：向H1N1流感病毒灭活液中加入0.3％TritonX-100和0.3％的去氧胆酸钠，于15-20℃下搅拌裂解40min。其中，H1N1流感病毒灭活液、0.5％TritonX-100和0.5％的去氧胆酸钠的体积比为1：5：5。
性能检测试验
病毒形态观察对H1N1型流感病毒、BVR-26型流感病毒以及实施例2、实施例18、对比例4-5裂解后的病毒形态进行观察，结果如图1-6所示。
图1为H1N1型流感病毒2万倍的电镜图；图2为实施例2裂解后的H1N1型流感病毒2万倍的电镜图；图3为对比例4裂解后的H1N1型流感病毒2万倍的电镜图；图4为BVR-26型流感病毒2万倍的电镜图；图5为实施例18裂解后的BVR-26型流感病毒2万倍的电镜图；图6为对比例5裂解后的BVR-26型流感病毒2万倍的电镜图。
含量检测
对实施例1-18及对比例1-6获得的流感病毒抗原的蛋白质含量以及血凝素含量进行检测，结果如下表4所示。
蛋白质含量检测方法：参考《中国药典》(2020版)三部通则0731第二法检测总蛋白质含量。
血凝素含量检测方法：参考《中国药典》(2020版)三部“流感病毒裂解疫苗”各论单向免疫扩散试验检测血凝素含量。
活性比：活性比是指总蛋白质含量与血凝素含量的比值，反应样品纯度，活性低越低，表明流感病毒抗原的纯度越高。
表4实施例1-18及对比例1-6的检测结果
表4的检测结果可知，本申请实施例1-17获得的H1N1流感病毒抗原的裂解效果优异，均匀且无团聚现象，并且总蛋白含量为466-638μg/mL，血凝素含量为176-265μg/mL，活性比为2.3-2.7；而对比例6获得的H1N1流感病毒抗原中的总蛋白含量为431μg/mL，血凝素含量仅为143μg/mL，活性比高达3.014。因此，说明本申请提供的流感病毒裂解液能够有效裂解流感病毒，提取流感病毒中的蛋白，尤其是血凝素，进而获得高纯度的流感病毒抗原。
实施例1-5、对比例1-3的检测结果可知，A液中Triton X-100与焦磷酸钠的添加量均会对流感病毒抗原的总蛋白含量与血凝素含量造成影响。对比例1将Triton X-100的添加量控制为5份时，获得的H1N1流感病毒抗原的总蛋白含量仅为377μg/mL，并且活性比高达3.59；对比例2将Triton X-100的添加量控制为25份时，获得的H1N1流感病毒抗原的活性比高达3.15；对比例3不添加焦磷酸钠时，获得的H1N1流感病毒抗原的活性比高达3.297；而实施例1-5将获得的H1N1流感病毒抗原的总蛋白含量与血凝素含量较高，且活性比能够低至2.7以下。因此，说明本申请将A液中Triton X-100的添加量控制在8-12份之间，焦磷酸钠的添加量控制在0.1-0.3份之间，能够获得纯度较高的H1N1流感病毒抗原。
实施例2、实施例6-11的检测结果可知，实施例6-11依次采用A液、B液对H1N1流感病毒进行裂解，获得的H1N1流感病毒抗原中的总蛋白含量与血凝素含量更高；尤其是实施例8-10获得的H1N1流感病毒抗原中的总蛋白含量高达623-638μg/mL，血凝素含量为257-266μg/mL，活性比低至2.45以下。因此，说明本申请采用A液、B液依次对病毒裂解，并将B液中十二烷基磷酸酯钾的添加量控制在0.2-0.4份之间，获得的H1N1流感病毒抗原的蛋白含量及纯度更高。
实施例2、实施例12-16的检测结果可知，随着B液中N-正辛基-D-葡萄糖胺添加量的增加，H1N1流感病毒抗原中的总蛋白含量与血凝素含量均呈现先升高后降低的趋势；进一步对比发现，实施例2、实施例14-15获得的H1N1流感病毒抗原中的总蛋白含量高达624-638μg/mL，血凝素含量为261-266μg/mL，活性比低至2.45以下。因此，说明采用A液、B液依次对H1N1流感病毒裂解，并将B液中N-正辛基-D-葡萄糖胺添加量控制在0.1-0.2份
之间时，获得的H1N1流感病毒抗原的蛋白含量及纯度更高。
实施例9、实施例17的检测结果可知，实施例17获得的H1N1流感病毒抗原中的总蛋白含量稍低于实施例9获得的H1N1流感病毒抗原中的总蛋白含量；实施例17获得的H1N1流感病毒抗原中的活性比略高于实施例9获得的H1N1流感病毒抗原中的总蛋白含量。因此，说明将采用A液与B液依次添加的顺序，能够进一步提高H1N1流感病毒抗原的蛋白含量与纯度。
实施例2、对比例4的检测结果可知，对比例4将H1N1流感病毒在2～8℃下裂解15h，获得的病毒裂解效果不佳，存在团聚现象，并且最终获得的H1N1流感病毒抗原的总蛋白含量仅为324μg/mL，血凝素含量仅为106μg/mL。而实施例2在15-20℃下仅裂解40min，病毒裂解均匀、没有团聚现象，并且获得的H1N1流感病毒抗原的总蛋白含量为513μg/mL，血凝素含量为203μg/mL。因此，说明本申请提供的流感病毒裂解液在15-20℃下即可实现H1N1流感病毒裂解，并且裂解时间短，裂解效率高。
实施例18、对比例5的检测结果可知，对比例5将BVR-26流感病毒在2～8℃下裂解15h，其裂解效果不佳，存在团聚现象，并且获得的BVR-26流感病毒抗原的总蛋白含量仅为482μg/mL，血凝素含量仅为127μg/mL，活性比高达3.795；而实施例8将BVR-26流感病毒在15-20℃下裂解40min，裂解效果好，均匀、无团聚现象，并且获得的BVR-26流感病毒抗原的总蛋白含量为842μg/mL，血凝素含量为266μg/mL，活性比为3.165。因此，说明本申请提供的流感病毒裂解液在15-20℃下即可实现BVR-26流感病毒裂解，并且裂解时间短，裂解效率高。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (10)
1.一种流感病毒裂解液，其特征在于，所述流感病毒裂解液包括A液；所述A液包括以下含量的组分：Triton X-100 8-12mL/100mL和焦磷酸钠0.1-0.3g/100mL。
2.根据权利要求1所述的流感病毒裂解液，其特征在于，所述流感病毒裂解液还包括B液，所述B液包括以下含量的组分：十二烷基磷酸酯钾0.1-0.5g/100mL、N-正辛基-D-葡萄糖胺0.05-0.25 g/100mL和氯化钠 0.6-0.8g/100mL。
3.根据权利要求2所述的流感病毒裂解液，其特征在于，所述B液包括以下含量的组分：十二烷基磷酸酯钾0.2-0.4g/100mL、N-正辛基-D-葡萄糖胺0.1-0.2 g/100mL和氯化钠0.6-0.8g/100mL。
4.如权利要求1-3中任一项所述的流感病毒裂解液在制备流感病毒抗原中的应用。
5.一种流感病毒抗原的制备方法，其特征在于，所述包括以下步骤：制备流感病毒灭活液、裂解；
裂解：向流感病毒灭活液中加入流感病毒裂解液，于15-25℃下搅拌裂解50-100min，获得流感病毒裂解液。
6.根据权利要求5所述的流感病毒抗原的制备方法，其特征在于，所述裂解步骤为：向流感病毒灭活液中加入A液，于15-20℃下搅拌裂解30-60min；然后再加入B液，于20-25℃下搅拌裂解20-40min，获得流感病毒裂解液。
7.根据权利要求6所述的流感病毒抗原的制备方法，其特征在于，所述流感病毒灭活液中流感病毒的浓度为500-1500μg/mL；所述流感病毒灭活液与所述A液的体积比为1：（10-15），所述流感病毒灭活液与所述B液的体积比为1：（3-5）。
8.根据权利要求5所述的流感病毒抗原的制备方法，其特征在于，所述裂解结束后，采用0.02mol/L PBS缓冲液以及截留分子量为40-70kD的膜包对流感病毒裂解液进行超滤透析，然后再进行超声、过滤，获得流感病毒抗原。
9.一种流感病毒抗原，其特征在于，利用权利要求4-8中任一项所述的流感病毒抗原的制备方法制得。
10.一种流感病毒裂解疫苗，其特征在于，包含权利要求9所述的流感病毒抗原。
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| CN202311574657.4A CN117603922A (zh) | 2023-11-23 | 2023-11-23 | 一种流感病毒裂解液、流感病毒抗原及其制备方法与应用 |
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Family Applications (1)
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| CN202311574657.4A Pending CN117603922A (zh) | 2023-11-23 | 2023-11-23 | 一种流感病毒裂解液、流感病毒抗原及其制备方法与应用 |
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2023
- 2023-11-23 CN CN202311574657.4A patent/CN117603922A/zh active Pending
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