CN117603210A - 靶向抑制RNA m6A甲基转移酶活性的抑制剂及其在制备抗新冠病毒药物中的应用 - Google Patents
靶向抑制RNA m6A甲基转移酶活性的抑制剂及其在制备抗新冠病毒药物中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN117603210A CN117603210A CN202311212745.XA CN202311212745A CN117603210A CN 117603210 A CN117603210 A CN 117603210A CN 202311212745 A CN202311212745 A CN 202311212745A CN 117603210 A CN117603210 A CN 117603210A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- vilazodone
- onvansertib
- cells
- mettl3
- methyltransferase activity
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims abstract description 54
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 35
- 108060004795 Methyltransferase Proteins 0.000 title claims abstract description 25
- 102000016397 Methyltransferase Human genes 0.000 title claims abstract description 25
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title claims abstract description 22
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 title claims abstract description 22
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 title claims abstract description 20
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 title claims abstract description 18
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 8
- SGEGOXDYSFKCPT-UHFFFAOYSA-N vilazodone Chemical compound C1=C(C#N)C=C2C(CCCCN3CCN(CC3)C=3C=C4C=C(OC4=CC=3)C(=O)N)=CNC2=C1 SGEGOXDYSFKCPT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 69
- 229960003740 vilazodone Drugs 0.000 claims abstract description 69
- QHLVBNKYJGBCQJ-UHFFFAOYSA-N 1-(2-hydroxyethyl)-8-[5-(4-methylpiperazin-1-yl)-2-(trifluoromethoxy)anilino]-4,5-dihydropyrazolo[4,3-h]quinazoline-3-carboxamide Chemical compound C1CN(C)CCN1C1=CC=C(OC(F)(F)F)C(NC=2N=C3C=4N(CCO)N=C(C=4CCC3=CN=2)C(N)=O)=C1 QHLVBNKYJGBCQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 68
- 229940015915 onvansertib Drugs 0.000 claims abstract description 66
- 101000967135 Homo sapiens N6-adenosine-methyltransferase catalytic subunit Proteins 0.000 claims abstract description 62
- 102100040619 N6-adenosine-methyltransferase catalytic subunit Human genes 0.000 claims abstract description 44
- 230000008685 targeting Effects 0.000 claims abstract description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 22
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 125000000954 2-hydroxyethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 claims description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims 1
- RPZBRGFNBNQSOP-UHFFFAOYSA-N vilazodone hydrochloride Chemical group Cl.C1=C(C#N)C=C2C(CCCCN3CCN(CC3)C=3C=C4C=C(OC4=CC=3)C(=O)N)=CNC2=C1 RPZBRGFNBNQSOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 241001678559 COVID-19 virus Species 0.000 abstract description 34
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 abstract description 22
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 abstract description 17
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 abstract description 14
- 230000010076 replication Effects 0.000 abstract description 12
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 abstract description 6
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 abstract description 6
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 abstract description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 2
- 238000013537 high throughput screening Methods 0.000 abstract description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 89
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 36
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 28
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 19
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 15
- 201000003176 Severe Acute Respiratory Syndrome Diseases 0.000 description 13
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 11
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 11
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 11
- 238000003762 quantitative reverse transcription PCR Methods 0.000 description 11
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 11
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 10
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 9
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 8
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 8
- 101001013582 Homo sapiens N6-adenosine-methyltransferase non-catalytic subunit Proteins 0.000 description 7
- 102100031578 N6-adenosine-methyltransferase non-catalytic subunit Human genes 0.000 description 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 7
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 7
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 7
- 102400000888 Cholecystokinin-8 Human genes 0.000 description 6
- 101800005151 Cholecystokinin-8 Proteins 0.000 description 6
- 229940125531 STM-2457 Drugs 0.000 description 6
- OBERVORNENYOLE-UHFFFAOYSA-N STM2457 Chemical compound C1(CCCCC1)CNCC=1C=CC=2N(C=1)C=C(N=2)CNC(=O)C=1N=C2N(C(C=1)=O)C=CC=C2 OBERVORNENYOLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 101100065749 Salmonella typhimurium (strain LT2 / SGSC1412 / ATCC 700720) eutC gene Proteins 0.000 description 6
- 108091027967 Small hairpin RNA Proteins 0.000 description 6
- 239000003684 drug solvent Substances 0.000 description 6
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 6
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 6
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 5
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 5
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 4
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 4
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 4
- 238000003032 molecular docking Methods 0.000 description 4
- RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N puromycin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C[C@H](N)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N2C3=NC=NC(=C3N=C2)N(C)C)O[C@@H]1CO RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N 0.000 description 4
- 108090001074 Nucleocapsid Proteins Proteins 0.000 description 3
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 3
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 3
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 3
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- LIENCHBZNNMNKG-OJFNHCPVSA-N nirmatrelvir Chemical compound CC1([C@@H]2[C@H]1[C@H](N(C2)C(=O)[C@H](C(C)(C)C)NC(=O)C(F)(F)F)C(=O)N[C@@H](C[C@@H]3CCNC3=O)C#N)C LIENCHBZNNMNKG-OJFNHCPVSA-N 0.000 description 3
- 229940125674 nirmatrelvir Drugs 0.000 description 3
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 3
- RWWYLEGWBNMMLJ-MEUHYHILSA-N remdesivir Drugs C([C@@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@@](C#N)(O1)C=1N2N=CN=C(N)C2=CC=1)O)OP(=O)(N[C@@H](C)C(=O)OCC(CC)CC)OC1=CC=CC=C1 RWWYLEGWBNMMLJ-MEUHYHILSA-N 0.000 description 3
- RWWYLEGWBNMMLJ-YSOARWBDSA-N remdesivir Chemical compound NC1=NC=NN2C1=CC=C2[C@]1([C@@H]([C@@H]([C@H](O1)CO[P@](=O)(OC1=CC=CC=C1)N[C@H](C(=O)OCC(CC)CC)C)O)O)C#N RWWYLEGWBNMMLJ-YSOARWBDSA-N 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000013215 result calculation Methods 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 229940126586 small molecule drug Drugs 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 238000003041 virtual screening Methods 0.000 description 3
- 208000025721 COVID-19 Diseases 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 2
- 208000000172 Medulloblastoma Diseases 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MEFKEPWMEQBLKI-AIRLBKTGSA-N S-adenosyl-L-methioninate Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](C[S+](CC[C@H](N)C([O-])=O)C)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 MEFKEPWMEQBLKI-AIRLBKTGSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 238000000329 molecular dynamics simulation Methods 0.000 description 2
- HTNPEHXGEKVIHG-ZJTJHKMLSA-N molnupiravir Chemical compound CC(C)C(=O)OC[C@H]1O[C@H](C(O)C1O)N1C=C\C(NC1=O)=N\O HTNPEHXGEKVIHG-ZJTJHKMLSA-N 0.000 description 2
- 229940075124 molnupiravir Drugs 0.000 description 2
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 2
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 2
- 229950010131 puromycin Drugs 0.000 description 2
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000008844 regulatory mechanism Effects 0.000 description 2
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 2
- -1 small molecule compound Chemical class 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SBDOSRWGEWIYEP-UHFFFAOYSA-N 1-benzofuran-2-carboxamide;hydrochloride Chemical compound Cl.C1=CC=C2OC(C(=O)N)=CC2=C1 SBDOSRWGEWIYEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100037435 Antiviral innate immune response receptor RIG-I Human genes 0.000 description 1
- 101710127675 Antiviral innate immune response receptor RIG-I Proteins 0.000 description 1
- 206010052358 Colorectal cancer metastatic Diseases 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 101000600434 Homo sapiens Putative uncharacterized protein encoded by MIR7-3HG Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108700040121 Protein Methyltransferases Proteins 0.000 description 1
- 102000055027 Protein Methyltransferases Human genes 0.000 description 1
- 102100037401 Putative uncharacterized protein encoded by MIR7-3HG Human genes 0.000 description 1
- 208000037847 SARS-CoV-2-infection Diseases 0.000 description 1
- 102100031463 Serine/threonine-protein kinase PLK1 Human genes 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000019259 Succinate Dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108010012901 Succinate Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000007321 biological mechanism Effects 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 230000014155 detection of activity Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 238000009509 drug development Methods 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000000556 factor analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000008073 immune recognition Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 208000024714 major depressive disease Diseases 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 125000004194 piperazin-1-yl group Chemical group [H]N1C([H])([H])C([H])([H])N(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 108010056274 polo-like kinase 1 Proteins 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 230000036647 reaction Effects 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 238000011519 second-line treatment Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002849 thermal shift Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000006656 viral protein synthesis Effects 0.000 description 1
- 230000006490 viral transcription Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
- C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
- C07D487/04—Ortho-condensed systems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
- C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
- C07D405/12—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公布了靶向抑制RNAm6A甲基转移酶活性的抑制剂及其在制备抗新冠病毒药物中的用途。本发明通过计算机辅助高通量筛选技术成功找到靶向抑制RNAm6A甲基转移酶活性的小分子，并用实验证明Onvansertib和Vilazodone能抑制SARS‑CoV‑2病毒的复制，通过靶向结合METTL3蛋白从而抑制其甲基转移酶活性，且具有较低的细胞毒性和较好的抗病毒活性。本发明证明Onvansertib和Vilazodone是靶向抑制RNAm6A甲基转移酶活性的抑制剂且可以作为抗新冠病毒的候选药物。Onvansertib和Vilazodone属于老药新用，安全可靠，也为抗击新冠病毒提供了新的策略和思路。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药领域，具体地涉及靶向抑制RNA m6A甲基转移酶活性的抑制剂及其在制备抗新冠病毒药物中的应用。
背景技术
目前，一些针对新型冠状病毒自身蛋白的抗病毒药物研发取得了重要进展，但病毒可能通过缺失或突变以拮抗上述药物的抗病毒作用。随着临床实验的不断扩展，越来越多研究指出，目前用于临床治疗的药物存在作用机制不明、抗病毒活性不强、药代动力学性质不佳等问题。此外，不断出现的SARS-CoV-2变异株不但给有效化合物的疗效和安全性等带来了挑战，同时也为新药研发带来了困难。
SARS-CoV-2属于RNA病毒，其基因组稳定性差，突变率高。自2019年以来，已经演化出多种突变体，是导致抗病毒药物、疫苗和中和抗体保护效果减弱的主要原因。因此，针对病毒蛋白或RNA序列的抗病毒药物研发面临着巨大挑战。与病毒相比，宿主基因组稳定性高，突变率低；并且在漫长的进化过程中，宿主细胞已经形成了一套保守且广谱的抗病毒分子调控机制，其中RNA m6A修饰及其相关蛋白酶在调节SARS-CoV-2介导的感染和COVID-19疾病进展中发挥着关键性调节作用。研究表明，RNA m6A修饰允许SARS-CoV-2病毒逃逸宿主的天然免疫反应，从而在感染个体的肺部创造一个隐蔽地带，以促进疾病恶化。METTL3作为核心的RNA m6A修饰甲基转移酶，参与催化多种病毒RNA分子的m6A修饰生成，从而调节病毒基因组复制、转录和翻译等。近期研究发现，METTL3作为催化SARS-CoV-2 RNA m6A修饰形成的关键酶，对SARS-CoV-2的生命周期调控及宿主细胞反应至关重要。在SARS-CoV-2感染的早期阶段，病毒进入宿主细胞后生成5'-磷酸化的病毒RNA，随后METTL3催化其生成m6A修饰以减少RIG-I对其的识别，从而降低炎症基因的激活和下游天然免疫信号通路响应。病毒基因组利用宿主细胞成分逃避天然免疫反应，并且病毒RNA m6A修饰在病毒逃避宿主天然免疫识别和反应中发挥着重要作用，该机制的发现可为抗病毒治疗提供新的靶点和治疗策略。
METTL3已被证明是SARS-CoV-2病毒复制的关键酶，在抗病毒治疗中发挥重要作用，因此，将其作为目的蛋白，建立高通量药物小分子筛选平台，以获得新的抗冠状病毒药物具有重要意义，同时可为后续联合用药研究提供完善的分子调控机制和理论依据。
奥文色替，英文别名Onvansertib(PCM-075)和
1-(2-hydroxyethyl)-8-((5-(4-methylpiperazin-1-yl)-2-(trifluoromethoxy)phenyl)amino)-4,5-dihydro-1H-pyrazolo[4,3-h]quinazoline-3-carboxamide，是一款新型PLK1抑制剂。研究者在2021年ASCO胃肠道研讨会(GI)上公开了其二线治疗KRAS阳性的转移性结直肠癌患者的疗效。此外，Onvansertib具有抑制MYC扩增的G3型髓母细胞瘤增殖并增强其放疗敏感性的作用；因此Onvansertib可作为单药和/或联合放疗，用于治疗该亚型髓母细胞瘤。Onvansertib是一类小分子化合物，相对分子质量为532.52，分子式C24H27F3N8O3，结构式如下
维拉佐酮，英文别名Vilazodone、UNII-S239O2OOV3和5-[4-[4-(5-Cyano-1H-indol-3-yl)butyl]-1-piperazinyl]-2-benzofurancarboxamidehydrochloride，被用于治疗重度抑郁症。Vilazodone是一类小分子化合物，相对分子质量为441.52，分子式C26H27N5O2，结构式如下
经检索，在现有技术中，化合物Onvansertib、Vilazodone均没有被报道过有抗新冠病毒的作用，也没有报道过其可靶向抑制RNA m6A甲基转移酶活性。
发明内容
鉴于此，本发明提供靶向抑制RNA m6A甲基转移酶活性的抑制剂及其在制备抗新冠病毒药物中的应用。
靶向抑制RNA m6A甲基转移酶活性的抑制剂，其特征在于：所述的靶向抑制RNA m6A甲基转移酶活性的抑制剂为化合物Onvansertib和/或Vilazodone，所述的Onvansertib为4,5-二氢-1-(2-羟基乙基)-8-[[5-(4-甲基-1-哌嗪基)-2-(三氟甲氧基)苯基]氨基]-1H-吡唑并[4,3-H]喹唑啉-3-甲酰胺，所述的Vilazodone的为5-(4-[4-(5-氰基-1H-吲哚-3-基)丁基]哌嗪-1-基)苯并呋喃-2-甲酰胺盐酸盐。
本发明还保护所述的靶向抑制RNA m6A甲基转移酶活性的抑制剂在制备抗新冠病毒药物中的应用。
进一步地，所述的抗新冠病毒药物通过靶向结合METTL3蛋白从而抑制RNA m6A甲基转移酶活性。
优选地，所述的药物为包含靶向抑制RNA m6A甲基转移酶活性的抑制剂。
进一步地，所述的药物为在其药效上可接受的。
本发明首先在Huh-7、Caco-2、Calu-3细胞系中验证敲低METTL3基因确实能够显著抑制SARS-CoV-2原始病毒株的复制；随后通过分子对接和分子动力学拟合分析发现Onvansertib和Vilazodone具备靶向结合METTL3蛋白的能力；进一步联合镍柱亲和层析蛋白纯化技术、表面等离子共振实验和细胞热位移实验，本发明证实了Onvansertib和Vilazodone在分子和细胞水平均可靶向结合METTL3蛋白；最后利用抗甲基转移酶活性实验，本发明证实它们均可抑制甲基转移酶METTL3与底物SAM的结合，从而削弱其甲基转移酶活性。证明化合物Onvansertib或Vilazodone可靶向抑制RNA m6A甲基转移酶活性。
在体外抗原始病毒株活性评估中，Onvansertib和Vilazodone在Huh-7、Caco-2和Calu-3细胞中均表现出较低的细胞毒性和较好的抗病毒效果：在Huh-7细胞中EC50分别为2.763±0.211μM、3.270±0.077μM，CC50分别为123.131±12.573μM、199.151±23.542μM；在Caco-2细胞中EC50分别为1.778±0.357μM、2.279±0.407μM，CC50均大于200μM；在Calu-3细胞中EC50分别为1.843±0.386μM、2.301±0.381μM，CC50均大于200μM。此外，在Caco-2细胞中，这两个药物对Omicron BA.2突变株同样具备较好的抗病毒效果，EC50分别为1.105±0.202μM、1.023±2.090μM。上述结果表明，Onvansertib和Vilazodone均可通过抑制METTL3甲基转移酶活性，发挥广谱的抗SARS-CoV-2病毒的作用。此外，Onvansertib和Vilazodone具备和现有抗SARS-CoV-2小分子药物(Remdesivir和Nirmatrelvir)，以及m6A甲基转移酶阳性抑制剂STM2457相当的抗病毒活性，并且对原始病毒株及Omicron BA.2的抗病毒活性显著优于现有抗SARS-CoV-2小分子药物Molnupiravir。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
1)本发明通过靶向宿主的RNA m6A修饰甲基转移酶METTL3，使用计算机辅助高通量筛选技术成功找到了一些能够竞争性抑制METTL3与底物SAM结合的小分子药物，从而有效抑制新冠病毒复制，不仅实现了“老药新用”的目的，也为抗新冠病毒提供了新的策略和思路。此外，这种方法为研究和开发其他疾病的药物提供了新的方向和途径，具有广阔的应用前景。
2)本发明为深入了解SARS-CoV-2的生物学机制和药物靶点提供了理论支持，并为寻找有效的抗病毒药物和治疗手段提供了指导，具有重要的全球公共卫生意义。
附图说明
图1为在Huh-7细胞中METTL3正向调节SARS-CoV-2原始病毒株病毒的复制。注：(A)免疫印迹：使用shRNA在Huh-7细胞中敲低METTL3后，通过特定的抗体对METTL3的表达进行了Westernblot检测；(B)CCK8实验：对敲低了METTL3基因的Huh-7细胞进行活力检测；(C)实时荧光定量PCR：使用shRNA敲低Huh-7细胞中的METTL3，从感染SARS-CoV-2原始病毒株的Huh-7细胞中提取上清RNA，使用针对N基因的特异引物，通过RT-qPCR定量检测SARS-CoV-2RNA。数据统计采用t-test分析，差异有统计学意义：P<0.0001。
图2为在Caco-2细胞中METTL3正向调节SARS-CoV-2原始病毒株病毒的复制。注：(A)免疫印迹：使用shRNA在Caco-2细胞中敲低METTL3后，通过特定的抗体对METTL3的表达进行了Westernblot检测；(B)CCK8实验：对敲低了METTL3基因的Caco-2细胞进行活力检测；(C)实时荧光定量PCR：使用shRNA敲低Huh7细胞中的METTL3，从感染SARS-CoV-2原始病毒株的Caco-2细胞中提取上清RNA，使用针对N基因的特异引物，通过RT-qPCR定量检测SARS-CoV-2RNA。数据统计采用t-test分析，差异有统计学意义：P＝0.0012。
图3为在Calu-3细胞中METTL3正向调节SARS-CoV-2原始病毒株病毒的复制。注：(A)免疫印迹：使用shRNA在Caco-2细胞中敲低METTL3后，通过特定的抗体对METTL3的表达进行了Westernblot检测；(B)CCK8实验：对敲低了METTL3基因的Calu-3细胞进行活力检测；(C)实时荧光定量PCR：使用shRNA敲低Calu-3细胞中的METTL3，从感染SARS-CoV-2原始病毒株的Calu-3细胞中提取上清RNA，使用针对N基因的特异引物，通过RT-qPCR定量检测SARS-CoV-2RNA。数据统计采用t-test分析，差异有统计学意义：P＝0.027。
图4为计算虚拟筛选获得METTL3候选抑制剂Onvansertib和Vilazodone。注：(A)计算虚拟筛选流程；(B，C)Onvansertib和Vilazodone结构式；(D,E)分子对接获得的Onvansertib和Vilazodone与METTL3的相互作用。
图5为Onvansertib、Vilazodone、SAM与METTL3/METTL14相互作用的表面等离子体共振传感图。注：(A)Onvansertib与METTL3/METTL14相互作用的表面等离子共振传感图；(B)Vilazodone与METTL3/METTL14相互作用的表面等离子共振传感图；(C)SAM与METTL3/METTL14相互作用的表面等离子共振传感图。
图6为Onvansertib和Vilazodone对METTL3蛋白热稳定性的影响。注：(A)Onvansertib和Vilazodone对METTL3蛋白热稳定性的影响的免疫印迹图；(B)Onvansertib和Vilazodone对METTL3蛋白热稳定性的影响的溶解曲线图，DMSO为溶媒对照组。
图7为Onvansertib和Vilazodone抑制METTL3甲基转移酶活性。注：数据统计采用单因素方差分析，差异有统计学意义：P<0.005。
图8为Onvansertib和Vilazodone在Huh-7细胞中的抗SARS-CoV-2原始病毒株活性。注：Onvansertib和Vilazodone在Huh-7细胞中的抗SARS-CoV-2原始病毒株活性。注：(A，B)免疫印迹：SARS-CoV-2感染Caco-2细胞后，用不同浓度的Onvansertib(A)、Vilazodone(B)处理细胞，提取胞内蛋白，用免疫印迹检测病毒的N蛋白；PC孔感染SARS-CoV-2之后加了等量的药物溶剂DMSO，NC孔只加了等量的药物溶剂DMSO；(C)Onvansertib、Vilazodone在不同的浓度下对病毒N基因的抑制情况；(D)Onvansertib和Vilazodone在不同浓度下对Caco-2细胞的毒性。
图9为Onvansertib和Vilazodone在Caco-2细胞中的抗SARS-CoV-2原始病毒株活性。注：(A，B)免疫印迹：SARS-CoV-2感染Caco-2细胞后，用不同浓度的Onvansertib(A)、Vilazodone(B)处理细胞，提取胞内蛋白，用免疫印迹检测病毒的N蛋白；PC孔感染SARS-CoV-2之后加了等量的药物溶剂DMSO，NC孔只加了等量的药物溶剂DMSO；(C)Onvansertib、Vilazodone在不同的浓度下对病毒N基因的抑制情况；(D)Onvansertib和Vilazodone在不同浓度下对Caco-2细胞的毒性。
图10为Onvansertib和Vilazodone在Calu-3细胞中的抗SARS-CoV-2原始病毒株活性。注：(A，B)免疫印迹：SARS-CoV-2感染Calu-3细胞后，用不同浓度的Onvansertib(A)、Vilazodone(B)处理细胞，提取胞内蛋白，用免疫印迹检测病毒的N蛋白；PC孔感染SARS-CoV-2之后加了等量的药物溶剂DMSO，NC孔只加了等量的药物溶剂DMSO；(C)Onvansertib、Vilazodone在不同的浓度下对病毒N基因的抑制情况；(D)Onvansertib和Vilazodone在不同浓度下对Caco-2细胞的毒性。
图11为Onvansertib和Vilazodone在Caco-2细胞中的抗Omicron BA.2病毒株活性。
图12为阳性药STM2457在Huh-7、Caco-2和Calu-3细胞中的抗SARS-CoV-2原始病毒株活性对比。
具体实施方式
实施例1不同细胞系中的METTL3敲低抑制SARS-CoV-2原始病毒株的复制
本发明选择了Huh-7、Caco-2和Calu-3这四种细胞系。
(1)在Huh-7细胞中敲低METTL3基因抑制SARS-CoV-2原始病毒株复制
通过包装shMETTL3以及shNC慢病毒，感染Huh-7细胞，用终浓度为2μg/mL的嘌呤霉素筛选阳性细胞，最终通过Westernblot验证其敲低效率达到82％(图1A)；且通过CCK8可以看出敲低METTL3基因之后并不影响Huh-7细胞的活力(图1B)；用MOI＝0.2感染未敲低和敲低的Huh-7细胞，提取上清的RNA，通过RT-qPCR可以看到敲低METTL3基因后显著抑制了新冠病毒的复制(图1C)。
(2)在Caco-2细胞中敲低METTL3基因抑制SARS-CoV-2原始病毒株SARS-CoV-2原始病毒株复制
通过包装shMETTL3以及shNC慢病毒，感染Caco-2细胞，用终浓度为4μg/mL的嘌呤霉素筛选阳性细胞，最终通过Westernblot验证其敲低效率达到70％(图2A)；且通过CCK8可以看出敲低METTL3基因之后并不影响Caco-2细胞的活力(图2B)；用MOI＝0.2感染未敲低和敲低的Caco-2细胞，提取上清的RNA，通过RT-qPCR可以看到敲低METTL3基因后显著抑制了新冠病毒的复制(图2C)。
(3)在Calu-3细胞中敲低METTL3基因抑制SARS-CoV-2原始病毒株复制
在Calu-3细胞中用lipo 2000转染siMETTL348 h后，通过Westernblot验证其敲低效率达到37％(图3A)；且通过CCK8可以看出敲低METTL3基因之后并不影响细胞的活力(图3B)；用MOI＝0.5感染未敲低和敲低的Calu-3细胞，提取上清的RNA，通过RT-qPCR可以看到敲低METTL3基因后显著抑制了新冠病毒的复制(图3C)。
实施例2计算虚拟筛选得到候选METTL3小分子抑制剂
从RCSB蛋白数据库下载METTL3晶体结构(PDB ID:5K7W)。首先使用薛定谔软件的蛋白质准备模块对其进行结构优化。随后从Selleck、DrugBank、MEC和APExBIO数据库中收集了21,300多个化合物。经过重复数据删除和过滤(AlogP值在-3～5之间、分子量在200～600之间、可旋转键数<10)，只保留了5,498个的化合物用于后续分析。使用薛定谔软件的LigPrep模块生成三维结构。通过Glide SP模型和XP模型进行对接，要求对接化合物与METTL3的ASP377 OD1、ASP395 OD2、ILE378 H和ASN549 H形成至少两个氢键。采用Desmond软件进行分子动力学拟合(OPLS_2005力场、TIP3P水模型、立方体盒子，盒边缘与化合物原子之间的缓冲距离为0.15M NaCl中和体系、300K温度，1.013Bar大气压)(图4A)。联合化合物的可获得性及毒副作用，本发明最终选取Onvansertib和Vilazodone进行后续研究(图4B-E)。
实施例3Onvansertib和Vilazodone与METTL3/METTL14蛋白相互作用
使用表面等离子共振(SPR)技术来确认Onvansertib和Vilazodone是否能够直接与METTL3/METTL14蛋白结合。经过蛋白预富集实验，发现在稀释蛋白浓度的醋酸钠中，最适pH值为4.0，最终芯片上的蛋白浓度为70ug/mL。待芯片上连上蛋白后，配制了50μM、25μM、12.5μM、6.25μM、3.125μM、1.56μM的药物进行上样。KD值是蛋白与小分子物质之间的平衡解离常数，表示蛋白一半数量结合的浓度，KD值越小代表小分子物质对蛋白的亲和力越大，结合越紧密。图5展示了Onvansertib、Vilazodone和SAM与METTL3/METTL14相互作用的表面等离子体共振传感图。结果表明，化合物Onvansertib和Vilazodone均能够与METTL3/METTL14蛋白结合，并且结合能力大于底物SAM。因此，通过SPR实验确认了Onvansertib和Vilazodone能够与METTL3/METTL14蛋白相互作用。实施例4Onvansertib和Vilazodone靶向结合METTL3蛋白
通过细胞热位移实验确定Onvansertib和Vilazodone在细胞水平能否有效结合METTL3蛋白。此实验中，设置了7个不同的温度处理，CETSA结果显示(图6)，DMSO对照组的表观聚集温度值(Tagg)为48.64℃，而Onvansertib、Vilazodone的表观聚集温度值分别为52.25℃和52.92℃，与DMSO对照组相比，Onvansertib、Vilazodone的处理增加了表观聚集温度值，因此表明Onvansertib、Vilazodone的存在增加了METTL3的热稳定性。这进一步从细胞水平验证了Onvansertib、Vilazodone能够靶向结合METTL3蛋白。
实施例5Onvansertib和Vilazodone能抑制METTL3/METTL14的酶活
使用MTase-GLOTM试剂盒对甲基转移酶METTL3/METTL14活性进行了检测，根据预先设定的条件，检测了浓度为12.5μM的Onvansertib、Vilazodone对其活性的影响。实验结果表明，12.5μM的Onvansertib、Vilazodone均能显著抑制METTL3/METTL14的甲基转移酶活性(图7)。
实施例6Onvansertib和Vilazodone的体外抗SARS-CoV-2活性检测
6.1Onvansertib和Vilazodone的细胞毒性检测
本发明选择了Huh-7、Caco-2和Calu-3这三种细胞系。
(1)将生长状态良好的Calu-3细胞按8×105个细胞/mL，Caco-2和Huh-7按4×105个细胞/mL的密度铺于96孔板中，每孔100μL，最后在96孔板的最外圈加入每孔200μL灭菌的纯水,防止培养基挥发，待次日所有细胞生长融合到90％左右即可使用。
(2)化合物的配制：将待测化合物从储液浓度稀释至待测最高浓度，每个化合物设置6个浓度梯度，3个复孔，同时设置不加化合物的阴性对照孔以及只含有培养基的空白对照孔，将化合物按每孔100μL依次从低浓度至高浓度加至含有细胞的96孔板中，轻晃混匀后，放回37℃、5％CO2细胞培养箱内继续培养3天。
(3)3天后，将板取出每孔加入20μL 5mg/mL的MTT溶液，使得终浓度为0.5mg/mL，随后将细胞培养板放回培养箱内孵育4h(活细胞中的琥珀酸脱氢酶使MTT还原为紫蓝色的甲臜，但死细胞无此能力)；4h后，小心将孔板中上清每孔吸去100μL，加入100μL 12％SDS-50％DMF溶液，放入细胞培养箱内过夜(DMSO能溶解细胞中的甲臜)。
(4)于次日，将板取出后置于ELx800酶标仪上读取OD值(570nm，630nm)，所得OD值可间接反应活细胞数量。根据OD值与药物浓度绘制剂量反应曲线，进行化合物半数细胞毒性浓度CC50的计算。
6.2Onvansertib和Vilazodone的抗原始病毒株活性检测
将待测化合物从储液浓度稀释至待测最高浓度，每个化合物设置7个浓度梯度，同时设置感染SARS-CoV-2之后加等量DMSO的PC孔、只有细胞和等量DMSO的NC孔以及阳性化合物瑞德西韦孔(20μM)。
(1)将8×105个/mL的Calu-3细胞、4×105个/mL的Huh-7、Caco-2细胞以500μL孔铺于24孔板中，37℃、5％CO2细胞培养箱过夜，待次日细胞生长融合到90％即可使用。
(2)将化合物从储液浓度稀释至待测最高浓度(Onvansertib 50μM、Vilazodone100μM)，从最高浓度依次2倍稀释，每个药物设置7个梯度，每个浓度设置两个复孔。按照Calu-3 MOI＝0.5、Caco-2 MOI＝0.2、Huh-7 MOI＝0.2的感染复数配制病毒稀释液，将药物和病毒稀释液1：1混合后，加入细胞，放入37℃、5％CO2细胞培养箱内孵育1h；1h后，使用1×PBS清洗3次，洗去游离病毒；随后，再将含有梯度稀释化合物的培养基加入细胞中，将细胞置于37℃、5％CO2细胞培养箱中培养48h，48h后收集上清并使用Roche公司的High PureViral RNAKit提取上清中总RNA，进行RT-qPCR检测(表1)。吸去剩余上清，1×PBS清洗2次，提取细胞内总蛋白，进行Westernblotting检测。本研究所有实验均独立重复三次，其数值采用均数±标准差表示(Mean±SEM)。
表1SARS-CoV-2的引物和探针
在Huh-7细胞中的细胞毒性和抗原始病毒株活性：如图8A-C所示；通过Westernblot和RT-qPCR计算得知Onvansertib的EC50为2.763±0.211μM、Vilazodone的EC50为3.270±0.077μM，如图8D所示；通过MTT实验结果计算得知Onvansertib的CC50为123.131±12.573μM、Vilazodone的CC50为199.151±23.542μM。
在Caco-2细胞中的细胞毒性和抗原始病毒株活性：如图9A-C所示；RT-qPCR计算得知Onvansertib的EC50为1.778±0.357μM、Vilazodone的EC50为2.279±0.407μM，如图9D所示；通过MTT实验结果计算得知Onvansertib的CC50>200μM、Vilazodone的CC50>200μM。
在Calu-3细胞的细胞毒性和抗原始病毒株活性：如图10A-C所示；通过Westernblot和RT-qPCR计算得知Onvansertib的EC50为1.843±0.386μM，Vilazodone的EC50为2.301±0.381μM，如图10B所示；通过MTT实验结果计算得知Onvansertib的CC50>200μM、Vilazodone的CC50>200μM。
6.3Onvansertib和Vilazodone的抗Omicron BA.2活性检测
将Caco-2细胞以4×105个/mL的密度铺于24孔板，次日待细胞生长融合到90％即可用MOI＝0.2的感染复数感染，并且同时加药，感染后1h后用PBS清洗病毒三遍，即可加入含药的3％FBS培养基培养48h，48h时提取上清RNA，通过RT-qPCR计算得知Onvansertib的EC50为1.105±0.202μM，Vilazodone的EC50为1.023±0.090μM)(图11)。
此外，与现有抗SARS-CoV-2小分子药物Remdesivir、Molnupiravir和Nirmatrelvir相比，Onvansertib和Vilazodone对原始病毒株及Omicron BA.2的抗病毒效果与Remdesivir和Nirmatrelvir相当，并且明显优于Molnupiravir。
表2现有抗SARS-CoV-2小分子药物的抗病毒活性[1]
1Cho J,Shin Y,Yang J S,et al.Evaluation of antiviral drugs againstnewly emerged SARS-CoV-2 Omicron subvariants.Antiviral Res,2023,214:105609.
实施例7m6A甲基转移酶阳性抑制剂STM2457的体外抗SARS-CoV-2原始病毒株活性检测
分别在Huh-7、Caco-2和Calu-3细胞中检测STM2457的抗SARS-CoV-2原始病毒株活性(详见实施例6.2)。通过RT-qPCR实验和计算得知STM2457在三种细胞中的EC50分别为2.333±1.052μM、2.631±0.169μM和1.203±0.331μM)(图12)。因此，Onvansertib和Vilazodone具备和m6A甲基转移酶阳性抑制剂STM2457相当的抗SARS-CoV-2活性。
Claims (5)
1.靶向抑制RNAm6A甲基转移酶活性的抑制剂，其特征在于：所述的靶向抑制RNAm6A甲基转移酶活性的抑制剂为化合物Onvansertib和/或Vilazodone，所述的Onvansertib为4,5-二氢-1-(2-羟基乙基)-8-[[5-(4-甲基-1-哌嗪基)-2-(三氟甲氧基)苯基]氨基]-1H-吡唑并[4,3-H]喹唑啉-3-甲酰胺，所述的Vilazodone的为5-(4-[4-(5-氰基-1H-吲哚-3-基)丁基]哌嗪-1-基)苯并呋喃-2-甲酰胺盐酸盐。
2.根据权利要求1所述的靶向抑制RNAm6A甲基转移酶活性的抑制剂在制备抗新冠病毒药物中的应用。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的抗新冠病毒药物通过靶向结合METTL3蛋白从而抑制RNAm6A甲基转移酶活性。
4.一种用于抗新冠病毒的药物，其特征在于：所述的药物为包含靶向抑制RNAm6A甲基转移酶活性的抑制剂。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述的药物为在其药效上可接受的盐。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311212745.XA CN117603210B (zh) | 2023-09-20 | 2023-09-20 | 靶向抑制RNA m6A甲基转移酶活性的抑制剂及其在制备抗新冠病毒药物中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311212745.XA CN117603210B (zh) | 2023-09-20 | 2023-09-20 | 靶向抑制RNA m6A甲基转移酶活性的抑制剂及其在制备抗新冠病毒药物中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN117603210A true CN117603210A (zh) | 2024-02-27 |
| CN117603210B CN117603210B (zh) | 2024-05-07 |
Family
ID=89946722
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202311212745.XA Active CN117603210B (zh) | 2023-09-20 | 2023-09-20 | 靶向抑制RNA m6A甲基转移酶活性的抑制剂及其在制备抗新冠病毒药物中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN117603210B (zh) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113262224A (zh) * | 2020-02-17 | 2021-08-17 | 中国科学院上海药物研究所 | 奈非那韦在制备防治新冠肺炎药物中的应用 |
| WO2022032113A1 (en) * | 2020-08-07 | 2022-02-10 | The University Of Chicago | Pharmaceuticals for treating or preventing nidoviruses and picornaviruses |
-
2023
- 2023-09-20 CN CN202311212745.XA patent/CN117603210B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113262224A (zh) * | 2020-02-17 | 2021-08-17 | 中国科学院上海药物研究所 | 奈非那韦在制备防治新冠肺炎药物中的应用 |
| WO2022032113A1 (en) * | 2020-08-07 | 2022-02-10 | The University Of Chicago | Pharmaceuticals for treating or preventing nidoviruses and picornaviruses |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| LENZ H.J.等: "A phase Ib/II study of onvansertib (PCM-075) in combination with FOLFIRI and bevacizumab for second-line treatment of metastatic colorectal cancer in patients with a KRAS mutation", 《ANNALS OF ONCOLOGY》, vol. 30, 31 October 2019 (2019-10-31), pages 250 * |
| MUHAMMAD ISMAIL等: "In silico study to find a potent inhibitor, Vilazodone, to cure COVID-19 using molecular docking", 《2022 INTERNATIONAL CONFERENCE ON RECENT ADVANCES IN ELECTRICAL ENGINEERING & COMPUTER SCIENCES (RAEE & CS)》, 22 November 2022 (2022-11-22), pages 4 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN117603210B (zh) | 2024-05-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Ruggiero et al. | G-quadruplex targeting in the fight against viruses: An update | |
| Evans et al. | Immucillins in infectious diseases | |
| MacLeod et al. | Identification of a series of compounds with potent antiviral activity for the treatment of enterovirus infections | |
| Dutschman et al. | Novel 4′-substituted stavudine analog with improved anti-human immunodeficiency virus activity and decreased cytotoxicity | |
| Prichard et al. | Activity and mechanism of action of N-methanocarbathymidine against herpesvirus and orthopoxvirus infections | |
| Basta et al. | Modeling of the human rhinovirus C capsid suggests possible causes for antiviral drug resistance | |
| De Clercq | In search of a selective therapy of viral infections | |
| Gege et al. | A helicase-primase drug candidate with sufficient target tissue exposure affects latent neural herpes simplex virus infections | |
| CN111402968A (zh) | 基于分子模拟发现山柰酚在covid-19病毒中的新用途 | |
| Song et al. | Medicinal chemistry strategies towards the development of non-covalent SARS-CoV-2 Mpro inhibitors | |
| Rani et al. | Multi-target direct-acting SARS-CoV-2 antivirals against the nucleotide-binding pockets of virus-specific proteins | |
| CN117603210B (zh) | 靶向抑制RNA m6A甲基转移酶活性的抑制剂及其在制备抗新冠病毒药物中的应用 | |
| Yang et al. | The host protein CAD regulates the replication of FMDV through the function of pyrimidines’ DE Novo synthesis | |
| Jiang et al. | Repurposing therapeutics to identify novel inhibitors targeting 2'-O-Ribose Methyltransferase Nsp16 of SARS-CoV-2 | |
| CN113855677A (zh) | 奥西替尼在抗新冠病毒感染抑制剂中的应用 | |
| RA | Meeting report: 27th International conference on antiviral research, in Raleigh, NC, USA. | |
| Chan et al. | Identification of novel small-molecule inhibitors of SARS-CoV-2 by chemical genetics | |
| CN113456817A (zh) | 抗rna病毒药物的dhodh抑制剂及其应用 | |
| Ansari et al. | Network controllability analysis reveals the antiviral potential of Etravirine against Hepatitis E Virus infection | |
| CN101979556B (zh) | 一种siRNA靶向分子及其应用 | |
| CN111494388B (zh) | Ym201636及其药学上可接受的盐在制备抗肠道病毒感染药物中的应用 | |
| Inmon | Investigation of Recombinant Hepatitis B Virus Polymerase Proteins and Identification of Potential Polymerase Inhibitors | |
| Ashirmetov | Pharmacotherapeutic Treatment Strategies COVID-19: Lessons Learned and Perspectives | |
| Mashayekh et al. | Structure-based prototyping of allosteric inhibitors of human uridine/cytidine kinase 2 (UCK2) | |
| Li et al. | Investigating theobromine as a potential anti‐human coronaviral agent |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |