CN117597364A - 抗ccr8抗体、其抗原结合片段、以及试剂和组合物及其制备和使用方法 - Google Patents

抗ccr8抗体、其抗原结合片段、以及试剂和组合物及其制备和使用方法 Download PDF

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Abstract

描述了用于制备且使用抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂例如单克隆抗体、CCR8结合抗体片段和衍生物的组合物和方法，以及试剂盒，编码此类分子的核酸，包括抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的诊断试剂和试剂盒，以及其制备和使用方法。

Description

抗CCR8抗体、其抗原结合片段、以及试剂和组合物及其制备和 使用方法
相关申请的交叉引用
本申请要求于2021年5月12日提交的、名称为“抗CCR8试剂和用于制备和使用此试剂的组合物和方法”的美国临时申请号63/187,839的优先权，所述美国临时申请的内容在此通过引用以其整体并入用于所有目的。
通过序列表的引用并入
本申请连同以电子格式的序列表一起提交。序列表作为于2022年5月4日创建、名称为BLD017WO1SeqList.TXT的文件提供，所述文件的大小为93,439字节。以序列表的电子格式的信息通过引用以其整体并入本文。
技术领域
该技术部分涉及在生理和/或体外条件下结合趋化因子(C-C基序)受体8即CCR8及其变体的试剂，特别是与CCR8特异性反应的单克隆抗体、抗体片段和抗体衍生物。此类试剂可以用于实验室/研究目的(例如，流式细胞术)，并且可以用于通过递送含有此类试剂的药物或其它组合物来治疗和/或预防各种疾病或病症。
背景技术
下述说明书包括可以用于理解本技术的信息。并不承认本文提供的任何信息或者本文具体或隐含引用的任何出版物是现有技术，或者甚至与本文请求保护的技术特别相关。
趋化因子(C-C基序)受体8或CCR8是趋化因子(C-C基序)配体1(CCL1)的受体。本文描述了与其它报道的抗CCR8抗体相比，提供优异的靶特异性、信噪比等等的针对CCR8的特定单克隆抗体，以及还结合CCR8的此类抗体的抗原结合片段。
发明内容
在一个方面，本公开内容提供了特异性结合CCR8的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述分离的抗体包含：a)重链可变区，其包含：(i)具有X1X2X3X4X5(SEQ ID NO:2)的序列的重链互补决定区1(CDRH1)，其中X1是S、G、Y、N、D、T或A，X2是Y、A或N，X3是H、A或V，X4是I、V或M，且X5是S、Y或N；(ii)具有X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14X15X16X17KX19(SEQ ID NO:6)的序列的CDRH2，其中X1是V、R或E，X2是I或L，X3是W、R或Y，X4是G、T、P或S，X5是D、G或K，X6是G、P或S，X7是S、K、R、N或D，X8是N、T、K或无氨基酸，X9是Y、T或无氨基酸，X10是A、Y或无氨基酸，X11是K、T或Y，X12是T、Y或N，X13是Y或E，X14是N、A、I、K或V，X15是S、D或F，X16是A、L、S或K，X17是L、V或G，且X19是S、G或D；并且(iii)具有X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12YY(SEQ ID NO:15)的序列的CDRH3，其中X1是G、M或D，X2是G、S或R，X3是T、I、L、E、A或D，X4是V、T、G、L或无氨基酸，X5是V、R、G、M、L或无氨基酸，X6是K、G、A、F、P、T或无氨基酸，X7是S、G、Y、F、T或P，X8是G、Y或D，X9是F、V、Y、A、R或S，X10是A、D或M，X11是Y、M或D，且X12是D或Y；以及b)轻链可变区，其包含：(iv)具有X1X2SX4X5X6X7X8X9X10X11NTYLY(SEQ ID NO:18)的序列的轻链互补决定区1(CDRL1)，其中X1是Q、K或R，X2是A或S，X4是Q、E或K，X5是D、N或S，X6是I或L，X7是G、N、Y或L，X8是N、R、S或H，X9是W、R、Y或S，X10是L或N，且X11是S、N、A或G；(v)具有X1X2X3X4X5X6X7(SEQ ID NO:19)的序列的CDRL2，其中X1是G、N或R，X2是T、A或M，X3是T、N、K或S，X4是N、S或T，X5是L或V，X6是A、Q或I，且X7是D、T、E或S；以及(vi)具有X1QX3X4X5X6PX8T(SEQ ID NO:22)的序列的CDRL3，其中X1是L、Q或M，X3是A或H，X4是Y、N或L，X5是S、D或E，X6是V、W、S或Y，且X8是L、W、F或Y。
在一些实施方案中，抗体包含：(1)CDRH1，其具有SEQ ID NO:33、39、45、51、57、63、68、71和74中任一个的序列，或者与SEQ ID NO:33、39、45、51、57、63、68、71和74中任一个具有80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的序列；(2)CDRH2，其具有SEQ ID NO:34、40、46、52、58、64、69、72、75、77和78中任一个的序列，或者与SEQ ID NO:34、40、46、52、58、64、69、72、75、77和78中任一个具有80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的序列；以及(3)CDRH3，其具有SEQ ID NO:35、41、47、53、59、65、70、73、76和79中任一个的序列，或者与SEQ ID NO:35、41、47、53、59、65、70、73、76和79中任一个具有80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的序列。
在一些实施方案中，抗体包含：(1)CDRL1，其具有SEQ ID NO:36、42、48、54和60中任一个的序列，或者与SEQ ID NO:36、42、48、54和60中任一个具有80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的序列；(2)CDRL2，其具有SEQ ID NO:37、43、49、55、61和66中任一个的序列，或者与SEQ ID NO:37、43、49、55、61和66中任一个具有80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的序列；以及(3)CDRL3，其具有SEQ ID NO:38、44、50、56、62和67中任一个的序列，或者与SEQ ID NO:38、44、50、56、62和67中任一个具有80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的序列。
在一些实施方案中，抗体包含：(1)CDRH1，其具有SEQ ID NO:33、39、45、51、57、63、68、71和74中任一个的序列，或者与SEQ ID NO:33、39、45、51、57、63、68、71和74中任一个具有80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的序列；(2)CDRH2，其具有SEQ ID NO:34、40、46、52、58、64、69、72、75、77和78中任一个的序列，或者与SEQ ID NO:34、40、46、52、58、64、69、72、75、77和78中任一个具有80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的序列；(3)CDRH3，其具有SEQ ID NO:35、41、47、53、59、65、70、73、76和79中任一个的序列，或者与SEQ ID NO:35、41、47、53、59、65、70、73、76和79中任一个具有80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的序列；(4)CDRL1，其具有SEQ ID NO:36、42、48、54和60中任一个的序列，或者与SEQ ID NO:36、42、48、54和60中任一个具有80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的序列；(5)CDRL2，其具有SEQ ID NO:37、43、49、55、61和66中任一个的序列，或者与SEQ ID NO:37、43、49、55、61和66中任一个具有80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的序列；以及(6)CDRL3，其具有SEQ ID NO:38、44、50、56、62和67中任一个的序列，或者与SEQ ID NO:38、44、50、56、62和67中任一个具有80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的序列。
在特定实施方案中，抗体包含具有SEQ ID NO:57的序列的CDRH1、具有SEQ ID NO:64的序列的CDRH2、以及具有SEQ ID NO:53的序列的CDRH3、具有SEQ ID NO:48的序列的CDRL1、具有SEQ ID NO:55的序列的CDRL2、以及具有SEQ ID NO:50的序列的CDRL3。
在特定实施方案中，抗体包含具有SEQ ID NO:71的序列的CDRH1、具有SEQ ID NO:75的序列的CDRH2、以及具有SEQ ID NO:70的序列的CDRH3、具有SEQ ID NO:60的序列的CDRL1、具有SEQ ID NO:66的序列的CDRL2、以及具有SEQ ID NO:67的序列的CDRL3。
在特定实施方案中，抗体包含具有SEQ ID NO:71的序列的CDRH1、具有SEQ ID NO:77的序列的CDRH2、以及具有SEQ ID NO:79的序列的CDRH3、具有SEQ ID NO:60的序列的CDRL1、具有SEQ ID NO:66的序列的CDRL2、以及具有SEQ ID NO:62的序列的CDRL3。
在一些实施方案中，重链可变区包含与SEQ ID NO:1、3-5、7-14和16中任一个所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。在特定实施方案中，重链可变区包含与SEQ ID NO:8的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。在特定实施方案中，重链可变区包含与SEQ ID NO:12的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。在特定实施方案中，重链可变区包含与SEQ ID NO:16的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
在一些实施方案中，轻链可变区包含与SEQ ID NO:17、20-21、23-30和32中任一个所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。在特定实施方案中，轻链可变区包含与SEQ ID NO:24中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。在特定实施方案中，轻链可变区包含与SEQ ID NO:28中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。在特定实施方案中，轻链可变区包含与SEQ ID NO:32中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
在一些实施方案中，重链可变区包含与SEQ ID NO:1、3-5、7-14和16中任一个所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，并且其中轻链可变区包含与SEQ ID NO:17、20-21、23-30和32中任一个所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。在特定实施方案中，重链可变区包含与SEQ ID NO:8中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，并且其中轻链可变区包含与SEQ ID NO:24中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。在特定实施方案中，重链可变区包含与SEQID NO:12中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，并且其中轻链可变区包含与SEQ ID NO:28中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。在特定实施方案中，重链可变区包含与SEQ ID NO:16中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，并且其中轻链可变区包含与SEQ ID NO:32中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
在一些实施方案中，抗体包含与SEQ ID NO:80的序列具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的Fc多肽。
在另一个方面，本公开内容提供了与CCR8特异性结合的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述分离的抗体与本文描述的抗体竞争结合CCR8受体。在一些实施方案中，抗体与本文描述的抗体结合相同的表位。
在本文描述的方面的一些实施方案中，抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，抗体是人源化抗体。在一些实施方案中，抗体包含一个或多个人构架区。
在一些实施方案中，抗体缀合至可检测标记物或标记。
在一些实施方案中，抗体非扩散地固定到固体支持物上。
在另一个方面，本公开内容的特征在于编码本文描述的分离的抗体或其抗原结合片段的分离的核酸。
在另一个方面，本公开内容的特征在于包含核苷酸序列的分离的核酸，所述核苷酸序列编码包含与SEQ ID NO:81-96中任一个所示的序列至少90％的序列同一性的重链可变区。
在另一个方面，本公开内容的特征在于包含核苷酸序列的分离的核酸，所述核苷酸序列编码包含与SEQ ID NO:97-112中任一个所示的序列至少90％的序列同一性的轻链可变区。
在另一个方面，本公开内容的特征在于包含本文描述的核酸的表达载体。
在另一个方面，本公开内容的特征在于包含本文描述的表达载体的分离的宿主细胞。
在另一个方面，本公开内容的特征在于包含本文描述的分离的抗体或其抗原结合片段和药学上可接受的载体的药物组合物。
在另一个方面，本公开内容的特征在于包含本文描述的分离的抗体或其抗原结合片段的诊断试剂。
在另一个方面，本公开内容的特征在于包含本文描述的分离的抗体或其抗原结合片段或者本文描述的诊断试剂的试剂盒。
在另一个方面，本公开内容的特征在于检测CCR8的方法，其包括使已知或疑似含有CCR8的样品与本文描述的分离的抗体或其抗原结合片段接触。
在另一个方面，本公开内容的特征在于检测CCR8的方法，其包括a)在所述抗体与所述样品上的CCR8结合的条件下，使样品与本文描述的分离的抗体或其抗原结合片段接触，其中所述结合导致受体/抗体复合物的产生；并且b)检测受体/抗体复合物的存在；其中所述检测包括所述样品上CCR8的存在或不存在。
在另一个方面，本公开内容的特征在于治疗或预防受试者中与CCR8相关的疾病或病症的方法，其包括：a)使已知或疑似含有CCR8的样品与本文描述的分离的抗体或其抗原结合片段接触；b)检测包含CCR8和抗体的复合物的存在；其中所述复合物的存在指示疾病或病症的存在；并且c)向受试者施用本文描述的分离的抗体或其抗原结合片段。
在另一个方面，本公开内容的特征在于诊断疾病或病症的方法，其包括：a)从受试者中分离样品；b)使样品与本文描述的分离的抗体或其抗原结合片段一起温育足以生成CCR8:抗CCR8复合物的时间段；c)检测来自分离的组织的CCR8:抗CCR8复合物的存在或不存在；并且d)将CCR8的存在或丰度与组织样品的感兴趣位置相关联。
在一些实施方案中，方法在体内进行。
在一些实施方案中，检测包括可检测部分与抗体或其抗原结合片段的杂交。
在一些实施方案中，可检测部分包含寡核苷酸。在一些实施方案中，可检测部分包含荧光标记。
在本文描述的方法的一些实施方案中，测量包括测序。
在本文描述的方法的一些实施方案中，样品包含细胞。在特定实施方案中，样品包含组织样品。
在一些方面，本文提供的是结合趋化因子(C-C基序)受体8(CCR8)的抗CCR8抗体、其抗原结合片段和试剂，包括抗CCR8抗体、CCR8结合抗体片段、衍生物以及此类抗体和抗体片段的变体(包括免疫缀合物、标记的抗体和抗原结合抗体片段等等)，包含此类试剂的诊断试剂，包括本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的容器和试剂盒，以及其制备和使用方法。
在某些方面，本文提供的是在实验室或生理条件下结合的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述抗体、其抗原结合片段或试剂包含至少一个免疫球蛋白重链可变结构域和至少一个免疫球蛋白轻链可变结构域，其中a)抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的每个免疫球蛋白重链可变结构域包含第一重链互补决定区(CDR)、第二重链互补决定区(CDR)和第三重链互补决定区(CDR)，其中所述第一重链CDR(CDRH1)包含与氨基酸序列X1X2X3X4X5(SEQ ID NO:2)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的氨基酸序列，其中X1是S、G、Y、N、D、T或A，X2是Y、A或N，X3是H、A或V，X4是I、V或M，且X5是S、Y或N；所述第二重链CDR(CDRH2)包含与氨基酸序列X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14X15X16X17KX19(SEQ ID NO:6)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的氨基酸序列，其中X1是V、R或E，X2是I或L，X3是W、R或Y，X4是G、T、P或S，X5是D、G或K，X6是G、P或S，X7是S、K、R、N或D，X8是N、T、K或无氨基酸，X9是Y、T或无氨基酸，X10是A、Y或无氨基酸，X11是K、T或Y，X12是T、Y或N，X13是Y或E，X14是N、A、I、K或V，X15是S、D或F，X16是A、L、S或K，X17是L、V或G，且X19是S、G或D；并且所述第三重链CDR(CDRH3)包含与氨基酸序列X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12YY(SEQ ID NO:15)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的氨基酸序列，其中X1是G、M或D，X2是G、S或R，X3是T、I、L、E、A或D，X4是V、T、G、L或无氨基酸，X5是V、R、G、M、L或无氨基酸，X6是K、G、A、F、P、T或无氨基酸，X7是S、G、Y、F、T或P，X8是G、Y或D，X9是F、V、Y、A、R或S，X10是A、D或M，X11是Y、M或D，且X12是D或Y；并且b)抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的每个免疫球蛋白轻链可变结构域包含第一轻链CDR、第二轻链CDR和第三轻链CDR，其中所述第一轻链CDR(CDRL1)包含与氨基酸序列X1X2SX4X5X6X7X8X9X10X11NTYLY(SEQ ID NO:18)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的氨基酸序列，其中X1是Q、K或R，X2是A或S，X4是Q、E或K，X5是D、N或S，X6是I或L，X7是G、N、Y或L，X8是N、R、S或H，X9是W、R、Y或S，X10是L或N，且X11是S、N、A或G；第二轻链CDR(CDRL2)包含与氨基酸序列X1X2X3X4X5X6X7(SEQ ID NO:19)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的氨基酸序列，其中X1是G、N或R，X2是T、A或M，X3是T、N、K或S，X4是N、S或T，X5是L或V，X6是A、Q或I，且X7是D、T、E或S；第三轻链CDR(CDRL3)包含氨基酸序列X1QX3X4X5X6PX8T(SEQ ID NO:22)，其中X1是L、Q或M，X3是A或H，X4是Y、N或L，X5是S、D或E，X6是V、W、S或Y，且X8是L、W、F或Y。
在某些方面，还提供的是在实验室或生理条件下结合CCR8的第一抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述第一抗体、其抗原结合片段或试剂与第二抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂竞争性结合，所述第二抗体、其抗原结合片段或试剂包含至少一个免疫球蛋白重链可变结构域和至少一个免疫球蛋白轻链可变结构域，其中a)抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的每个免疫球蛋白重链可变结构域包含第一重链互补决定区(CDR)、第二重链互补决定区(CDR)和第三重链互补决定区(CDR)，其中所述第一重链CDR(CDRH1)包含与氨基酸序列X1X2X3X4X5(SEQ ID NO:2)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的氨基酸序列，其中X1是S、G、Y、N、D、T或A，X2是Y、A或N，X3是H、A或V，X4是I、V或M，且X5是S、Y或N；所述第二重链CDR(CDRH2)包含与氨基酸序列X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14X15X16X17KX19(SEQ ID NO:6)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的氨基酸序列，其中X1是V、R或E，X2是I或L，X3是W、R或Y，X4是G、T、P或S，X5是D、G或K，X6是G、P或S，X7是S、K、R、N或D，X8是N、T、K或无氨基酸，X9是Y、T或无氨基酸，X10是A、Y或无氨基酸，X11是K、T或Y，X12是T、Y或N，X13是Y或E，X14是N、A、I、K或V，X15是S、D或F，X16是A、L、S或K，X17是L、V或G，且X19是S、G或D；并且所述第三重链CDR(CDRH3)包含与氨基酸序列X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12YY(SEQ ID NO:15)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的氨基酸序列，其中X1是G、M或D，X2是G、S或R，X3是T、I、L、E、A或D，X4是V、T、G、L或无氨基酸，X5是V、R、G、M、L或无氨基酸，X6是K、G、A、F、P、T或无氨基酸，X7是S、G、Y、F、T或P，X8是G、Y或D，X9是F、V、Y、A、R或S，X10是A、D或M，X11是Y、M或D，且X12是D或Y；并且b)抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的每个免疫球蛋白轻链可变结构域包含第一轻链CDR、第二轻链CDR和第三轻链CDR，其中所述第一轻链CDR(CDRL1)包含与氨基酸序列X1X2SX4X5X6X7X8X9X10X11NTYLY(SEQ ID NO:18)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的氨基酸序列，其中X1是Q、K或R，X2是A或S，X4是Q、E或K，X5是D、N或S，X6是I或L，X7是G、N、Y或L，X8是N、R、S或H，X9是W、R、Y或S，X10是L或N，且X11是S、N、A或G；第二轻链CDR(CDRL2)包含与氨基酸序列X1X2X3X4X5X6X7(SEQ ID NO:19)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的氨基酸序列，其中X1是G、N或R，X2是T、A或M，X3是T、N、K或S，X4是N、S或T，X5是L或V，X6是A、Q或I，且X7是D、T、E或S；第三轻链CDR(CDRL3)包含氨基酸序列X1QX3X4X5X6PX8T(SEQ ID NO:22)，其中X1是L、Q或M，X3是A或H，X4是Y、N或L，X5是S、D或E，X6是V、W、S或Y，且X8是L、W、F或Y。
在某些方面，还提供的是在实验室或生理条件下结合CCR8的第一抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述第一抗体、其抗原结合片段或试剂结合与第二抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂相同的表位，所述第二抗体、其抗原结合片段或试剂包含至少一个免疫球蛋白重链可变结构域和至少一个免疫球蛋白轻链可变结构域，其中a)抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的每个免疫球蛋白重链可变结构域包含第一重链互补决定区(CDR)、第二重链互补决定区(CDR)和第三重链互补决定区(CDR)，其中所述第一重链CDR(CDRH1)包含与氨基酸序列X1X2X3X4X5(SEQ ID NO:2)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的氨基酸序列，其中X1是S、G、Y、N、D、T或A，X2是Y、A或N，X3是H、A或V，X4是I、V或M，且X5是S、Y或N；所述第二重链CDR(CDRH2)包含与氨基酸序列X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14X15X16X17KX19(SEQ ID NO:6)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的氨基酸序列，其中X1是V、R或E，X2是I或L，X3是W、R或Y，X4是G、T、P或S，X5是D、G或K，X6是G、P或S，X7是S、K、R、N或D，X8是N、T、K或无氨基酸，X9是Y、T或无氨基酸，X10是A、Y或无氨基酸，X11是K、T或Y，X12是T、Y或N，X13是Y或E，X14是N、A、I、K或V，X15是S、D或F，X16是A、L、S或K，X17是L、V或G，且X19是S、G或D；并且所述第三重链CDR(CDRH3)包含与氨基酸序列X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12YY(SEQ ID NO:15)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的氨基酸序列，其中X1是G、M或D，X2是G、S或R，X3是T、I、L、E、A或D，X4是V、T、G、L或无氨基酸，X5是V、R、G、M、L或无氨基酸，X6是K、G、A、F、P、T或无氨基酸，X7是S、G、Y、F、T或P，X8是G、Y或D，X9是F、V、Y、A、R或S，X10是A、D或M，X11是Y、M或D，且X12是D或Y；并且b)抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的每个免疫球蛋白轻链可变结构域包含第一轻链CDR、第二轻链CDR和第三轻链CDR，其中所述第一轻链CDR(CDRL1)包含与氨基酸序列X1X2SX4X5X6X7X8X9X10X11NTYLY(SEQ ID NO:18)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的氨基酸序列，其中X1是Q、K或R，X2是A或S，X4是Q、E或K，X5是D、N或S，X6是I或L，X7是G、N、Y或L，X8是N、R、S或H，X9是W、R、Y或S，X10是L或N，且X11是S、N、A或G；第二轻链CDR(CDRL2)包含与氨基酸序列X1X2X3X4X5X6X7(SEQ ID NO:19)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的氨基酸序列，其中X1是G、N或R，X2是T、A或M，X3是T、N、K或S，X4是N、S或T，X5是L或V，X6是A、Q或I，且X7是D、T、E或S；第三轻链CDR(CDRL3)包含氨基酸序列X1QX3X4X5X6PX8T(SEQ ID NO:22)，其中X1是L、Q或M，X3是A或H，X4是Y、N或L，X5是S、D或E，X6是V、W、S或Y，且X8是L、W、F或Y。
在某些方面，还提供的是用于检测异质细胞群体中的CCR8的抗CCR8抗体、其抗原结合片段和试剂，其中CCR8在免疫细胞(例如，淋巴细胞)中以显著水平检测到。
在某些方面，还提供的是检测异质细胞群体中的CCR8的方法，其包括使该群体与本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂接触，其中CCR8在群体中的其它细胞中并未显著检测到。
在一个方面，本文提供的是在生理条件下结合CCR8的分离的、非天然存在的抗CCR8抗体、其抗原结合片段和试剂，特别是抗体或其抗原结合片段或衍生物。在抗CCR8抗体或抗原结合片段的背景下，此类分子一般包含两个免疫球蛋白重链可变结构域和两个免疫球蛋白轻链可变结构域。在此类分子中，免疫球蛋白重链和轻链可变结构域各自包含如下排列的第一链互补决定区(CDR)、第二链互补决定区(CDR)和第三链互补决定区(CDR)：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。
在重链可变结构域部分中，第一重链CDR(CDRH1)包含的氨基酸序列与氨基酸序列SYHIS、GYHVS、SYHVS、YAAMY、NAAMY、DYVIS、TNAMN、TYAMN或AYAMN(分别为SEQ ID NO:33、39、45、51、57、63、68、71、74)具有至少65％的序列同一性，任选地至少80％、至少90％、至少95％和100％同一性的序列同一性，第二重链CDR(CDRH2)包含的氨基酸序列与氨基酸序列VIWGDGSKTYNSALKS、VIWGDGKTTYNSALKS、VIWGDGRTTYNSALKS、VIWTGGSTTYNSLLKS、RIRTKPNNYATYYADSVKG、RIRTKPKNYATYYIDSVKG、EIYPGSDTTYYNEKFKG、RIRSKSNKYATYYADSVKD、RLRSKSNFYATYYADSVKD、RIRTKSNNYATYYADSVKD或RIRSKSNNYATYYVDSVKD(分别为SEQ ID NO:34、40、46、52、58、64、69、72、75、77、78)具有至少65％的序列同一性，任选地至少80％、至少90％、至少95％和100％同一性的序列同一性，第三重链CDR(CDRH3)包含的氨基酸序列与氨基酸序列GGDSGFAY、GGTVVKGGFAY、MGITRGYYFDY、MGLTRAYYFDY、GGLGGFFDV、GSEMGYYYAMDY、GRELGPSYAMDY、DRATVTTGRAMDY、GRELGPYSAMDY或GGRGNLGKEYYFDY(分别为SEQ ID NO:35、41、47、53、59、65、70、73、76、79)具有至少65％的序列同一性，任选地至少80％、至少90％、至少95％和100％同一性的序列同一性。
在轻链可变结构域部分中，第一轻链CDR(CDRL1)包含的氨基酸序列与氨基酸序列QASQDIGNWLS、QASQDIGNRLS、KASQNINRYLN、RASENIYSYLA或RSSKSLLHSNGNTYLY(分别为SEQID NO:36、42、48、54、60)具有至少65％的序列同一性，任选地至少80％、至少90％、至少95％和100％同一性的序列同一性，第二轻链CDR(CDRL2)包含的氨基酸序列与氨基酸序列GTTNLAD、GATSLAD、NANNLQT、NANSLQT、NAKTVIE或RMSNLAS(分别为SEQ ID NO:37、43、49、55、61、66)具有至少65％的序列同一性，任选地至少80％、至少90％、至少95％和100％同一性的序列同一性，并且第三轻链CDR(CDDRL3)包含的氨基酸序列与氨基酸序列LQAYSVPLT、LQAYIVPLT、LQHNSWPWT、QHHYDSPWT、MQHLEYPFT或MQHLEYPYT(分别为SEQ ID NO:38、44、50、56、62、67)具有至少65％的序列同一性，任选地至少80％、至少90％、至少95％和100％同一性的序列同一性。
在一些实施方案中，分离的、非天然存在的抗CCR8抗体或其CCR8结合片段包括具有氨基酸序列NAAMY(SEQ ID NO:57)的第一重链CDR、具有氨基酸序列RIRTKPKNYATYYIDSVKG(SEQ ID NO:64)的第二重链CDR、具有氨基酸序列MGLTRAYYFDY(SEQID NO:53)的第三重链CDR、具有氨基酸序列KASQNINRYLN(SEQ ID NO:48)的第一轻链CDR、具有氨基酸序列NANSLQT(SEQ ID NO:55)的第二轻链CDR、以及具有氨基酸序列LQHNSWPWT(SEQ ID NO:50)的第三轻链CDR。
在一些实施方案中，分离的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂包含非天然存在的抗CCR8抗体(mAb)，其包括包含第一重链互补决定区、第二重链互补决定区和第三重链互补决定区(分别为CDRH1-3)的两个免疫球蛋白重链可变结构域，以及包含第一轻链互补决定区、第二轻链互补决定区和第三轻链互补决定区(分别为CDRL1-3)的两个免疫球蛋白轻链可变结构域，其中所述抗体包含具有选自以下的CDRH1-3和CDRL1-3集合的免疫球蛋白重链可变结构域和免疫球蛋白轻链可变结构域：
表1.抗CCR8抗体的CDR序列(Kabat编号方案)
在一些实施方案中，分离的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂包含非天然存在的抗CCR8抗体(mAb)，其包含两个免疫球蛋白重链可变结构域和两个免疫球蛋白轻链可变结构域，其中所述免疫球蛋白重链可变结构域具有选自SEQ ID NO:1、3-5、7-14和16的氨基酸序列，或者与任何此类重链可变结构域序列具有至少65％-95％或更多序列同一性的氨基酸序列，并且所述免疫球蛋白轻链可变结构域选自SEQ ID NO:17、20-21、23-30和32，与任何此类轻链可变结构域序列具有至少65％-95％或更多序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，当抗CCR8试剂是抗体或其抗原结合抗体片段时，抗体(或其片段)是单克隆抗体，并且可以是骆驼、人、人源化、小鼠、兔或其它哺乳动物抗体或抗原结合抗体片段。在一些实施方案中，抗体(抗原结合抗体片段)是IgG。在其它实施方案中，IgG是IgG1、IgG2a或IgG2b、或IgG3、或IgG4。
在除全人抗体(即，从能够产生人抗体储库的全部或一部分的哺乳动物产生或衍生的抗体)外的抗CCR8抗体和抗原结合抗体片段的某些实施方案中，分子是嵌合或人源化抗CCR8抗体和抗原结合抗体片段。
在一些实施方案中，抗CCR8抗体、抗原结合抗体片段、或其衍生物或变体包括可检测标记。
在一些实施方案中，抗CCR8试剂，例如抗CCR8抗体、抗原结合抗体片段、或其衍生物或变体是免疫缀合物的部分，所述免疫缀合物进一步包括细胞毒素剂，例如核酸、肽、多肽、小分子或适体。
本文描述的技术的相关方面涉及组合物，其包括抗CCR8抗体，其抗原结合片段，或者其为根据本文描述的技术的分离的、非天然存在的抗CCR8抗体或抗原结合抗体片段的试剂。除含有本文描述的抗CCR8抗体或抗原结合抗体片段之外，此类组合物通常还包括载体，例如药学上可接受的载体。此类组合物可以包装在容器中，在一些实施方案中，所述容器进一步包装在还包括使用说明书的试剂盒内。在药物组合物的背景下，此类试剂盒说明书是包装插页，其不仅含有说明书或用途，还含有关于药物活性成分(例如，抗CCR8抗体、抗原结合抗体片段、或其衍生物或变体)的信息。
另一个相关方面涉及配置为检测生物样品(经常为取自受试者的生物样品)中的CCR8的诊断学。此类试剂盒包括诊断试剂，其包括本文描述的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，例如与可检测试剂例如荧光团或酶底物缀合和/或固定到固体支持物上的抗CCR8抗体、抗原结合抗体片段、或其衍生物或变体。
本文提供的技术的另外其它方面涉及本文描述的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的制造。在抗CCR8抗体(或其抗原结合抗体片段或衍生物或变体)的背景下，一个此类方面涉及编码本文提供的多肽的分离的核酸分子。在一些实施方案中，此类核酸编码具有第一重链CDR(CDRH1)的免疫球蛋白重链可变结构域，其包括与SEQ ID NO:33、39、45、51、57、63、68、71和74中任一个的氨基酸序列具有至少65％的序列同一性，任选地至少80％、至少90％、至少95％和100％同一性的序列同一性的氨基酸序列，第二重链CDR(CDRH2)包含的氨基酸序列与SEQ ID NO:34、40、46、52、58、64、69、72、75、77和78中任一个的氨基酸序列具有至少65％的序列同一性，任选地至少80％、至少90％、至少95％和100％同一性的序列同一性，并且第三重链CDR(CDRH3)包含的氨基酸序列与SEQ ID NO:35、41、47、53、59、65、70、73、76和79中任一个的氨基酸序列具有至少65％的序列同一性，任选地至少80％、至少90％、至少95％和100％同一性的序列同一性。此类核酸还可以编码免疫球蛋白轻链可变结构域，其中第一轻链CDR(CDRL1)包括的氨基酸序列与SEQ ID NO:36、42、48、54和60中任一个的氨基酸序列具有至少65％的序列同一性，任选地至少80％、至少90％、至少95％和100％同一性的序列同一性，第二轻链CDR(CDRL2)包含的氨基酸序列与SEQ ID NO:37、43、49、55、61和66中任一个的氨基酸序列具有至少65％的序列同一性，任选地至少80％、至少90％、至少95％和100％同一性的序列同一性，并且第三轻链CDR(CDRL3)包含的氨基酸序列与SEQ ID NO:38、44、50、56、62和67中任一个的氨基酸序列具有至少65％的序列同一性，任选地至少80％、至少90％、至少95％和100％同一性的序列同一性。
在某些实施方案中，本文提供的核酸分子编码免疫球蛋白重链可变结构域和免疫球蛋白轻链可变结构域，所述免疫球蛋白重链可变结构域具有选自SEQ ID NO:1、3-5、7-14和16的氨基酸序列，或者与任何此类重链可变结构域序列具有至少65％-95％或更多序列同一性的氨基酸序列，所述免疫球蛋白轻链可变结构域具有选自SEQ ID NO:17、20-21、23-30和32的氨基酸序列，或者与任何此类轻链可变结构域序列具有至少65％-95％或更多序列同一性的氨基酸序列。
相关方面涉及携带本文提供的核酸的质粒和表达盒和载体，以及用此类核酸分子转染的重组宿主细胞。
本文提供的技术的另外其它方面涉及治疗或预防与CCR8的异常水平相关的疾病或病症的方法。此类方法包括向需要此类治疗的受试者施用本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂(例如，抗CCR8抗体或其抗原结合片段、衍生物或变体)，可以用作佐剂或与佐剂结合使用(例如，用于疫苗)。
本文提供的技术的进一步方面涉及使用本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的诊断方法，例如体外或体内诊断测定，以检测CCR8的存在。
在下述说明书、实施例、权利要求和附图中进一步描述了某些实施方案。
附图说明
附图示出了技术的某些实施方案并且不是限制性的。为了清楚和易于说明，附图并未按比例绘制，并且在一些情况下，各个方面可以夸大或放大地显示，以促进特定实施方案的理解。
图1显示了代表性全长人CCR8的氨基酸序列(SEQ ID NO:31)。
图2A和2B显示了本文提供的16种不同抗CCR8抗体(AB 1-16)的免疫球蛋白重链(SEQ ID NO:1、3-5、7-14和16)和轻链(SEQ ID NO:17、20-21、23-30和32)的可变结构域的氨基酸序列。重链和轻链各自的CDR区以粗体显示并加下划线。在每个比对中，使用三种字符(“*”、“:”和“.”)：“*”指示具有单个完全保守残基的位置，“:”指示完全保守的下述“强”残基组之一：STA；NEQK；NHQK；NDEQ；QHRK；MILV；MILF；HY；和FYW；并且“.”指示完全保守的下述“较弱”残基组之一：CSA；ATV；SAG；STNK；STPA；SGND；SNDEQK；NDEQHK；NEQHRK；FVLIM；和HFY。这些是Gonnet Pam250矩阵中出现的所有正评分的残基组。“强”和“弱”残基组分别定义为“强”评分>0.5和“弱”评分<0.5。
图3列出了关于下文实施例中描述的实验中使用的抗CCR8抗体的信息。
图4A-4Q显示了基于流式细胞术的与人外周血上的CCR8结合的抗CCR8单克隆抗体的检测。
图5A和5B显示了克隆AB8并不杀死细胞系Ba/F3(图5A)，但当它用人CCR8转染时几乎完全杀死相同的细胞系(图5B)。
图5C和5D显示了当不存在抗体时，单独的补体并不杀死亲本细胞系或人CCR8转染的细胞，因为来自亲本细胞系Ba/F3的活细胞(对照细胞，47％)和CCR8转染的细胞(靶细胞，51.7％)的百分比是非常相似的(图5C)。当细胞在克隆AB11加上补体的存在下时，由于CCR8转染的细胞的选择性杀死(活对照细胞：88.96％相对于活靶细胞9.12％)，百分比急剧改变，导致0.103的比率(图.5D)。
图5E显示了在与不同浓度的不同抗体一起温育后，活转染细胞/亲本细胞的比率。通过补体结合在杀死方面更有效的克隆来自同种型大鼠IgG2b和小鼠IgG2a，并且在该组内，克隆AB7、AB8、AB11和AB12在此类杀死方面最有效。
图6A-6HH显示了与用相应的同种型对照调理的靶细胞(未显示)或调理的mFCRLS-Ba/F3对照细胞相比，在与THP-1细胞一起温育后，用抗人CCR8抗体调理hCCR8-Ba/F3靶细胞导致更高百分比的GFP+Tag-It Violet+双阳性细胞。
具体实施方式
本文提供的是结合CCR8的抗体、其抗原结合片段和试剂。在一些方面，本文提供了与CCR8结合的抗体及其片段。例如，本文描述了与其它报道的抗CCR8抗体相比提供优异的靶特异性、信噪比等等的针对CCR8的特定单克隆抗体，以及结合CCR8的此类抗体的抗原结合片段。本文还提供的是用于产生具有期望性质(包括对于CCR8和/或其变体的亲和力和/或特异性)的抗CCR8抗体、其抗原结合片段和试剂的方法。
抗体生成和表征
本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段和试剂(例如，抗CCR8抗体)可以对于CCR8具有强结合亲和力和/或特异性。在一些实施方案中，抗CCR8抗体、其抗原结合片段和试剂可以是嵌合抗体。在一些实施方案中，抗CCR8抗体、其抗原结合片段和试剂可以是人源化抗体。在一些实施方案中，抗CCR8抗体、其抗原结合片段和试剂可以是变体抗体。例如，从治疗的角度来看，抗体可能具有有益的性质。用于确定本文提供的抗CCR8抗体的活性的测定包括例如基于细胞的ELISA(例如，以测量抗体的细胞特异性)和细胞毒性(例如，以测量介导表达CCR8的靶细胞的直接或间接杀死的潜力)。在某些情况下，人源化抗体或变体抗体在向人患者施用治疗有效量的抗体后未能引发免疫原性应答。在某些情况下，如果引发免疫原性应答，则应答可以是这样的，使得抗体仍向用其治疗的患者提供治疗益处。
在一些实施方案中，本文的抗CCR8抗体、其抗原结合片段和试剂(例如，抗CCR8抗体、人源化的抗CCR8抗体)结合相同的表位。为了筛选与由目的抗体结合的CCR8上的表位结合的抗体(例如，阻断抗体与CCR8的结合的那些抗体)，可以进行交叉阻断测定，例如Antibodies，A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory，Ed Harlow和DavidLane(1988)中描述的测定。在某些情况下，例如，如Champe等人，J.Biol.Chem.270:1388-1394(1995)，Cunningham和Wells，Science 244:1081-1085(1989)或Davidson和Doranz，Immunology 143:13-20(2014)中描述的，可以进行表位作图，以确定抗体是否结合感兴趣的表位。
本文的抗体一般具有包含由下式表示的氨基酸序列的重链可变结构域：FRH1-CDRH1-FRH2-CDRH2-FRH3-CDRH3-FRH4，其中“FRH1-4”表示抗CCR8抗体可变重结构域的四个重链构架区，并且“CDRH1-3”表示三个高变区。FRH1-4可以衍生自共有序列(例如人免疫球蛋白的重链或轻链的种类、亚类或亚组的最常见氨基酸)，或者可以衍生自个别人抗体构架区或不同构架区序列的组合。许多人抗体的构架区或来自不同构架区序列的组合。许多人抗体构架区序列在例如Kabat等人(1992)序列S OF PROTEINS OF IMMUNOLOGICALINTEREST，美国国立卫生研究院(National Institutes of Health)出版号91-3242中进行汇编。在一个实施方案中，可变重FR由如通过Kabat等人，同上汇编的人免疫球蛋白亚组的共有序列提供。
人可变重FR序列可以具有在其中的取代，例如，其中人FR残基被相应的非人残基替换(“相应的非人残基”意指当人序列和非人序列进行比对时，具有与感兴趣的人残基相同的Kabat位置编号的非人残基)，但用非人残基的替换是不必要的。例如，可以通过噬菌体展示来选择除相应的非人残基外的替换FR残基。
本文的抗体可以具有包含由下式表示的氨基酸序列的轻链可变结构域：FRL1-CDRL1-FRL2-CDRL2-FRL3-CDRL3-FRL4，其中“FRL1-4”表示抗CCR8抗体可变轻结构域的四个构架区，并且“CDRL1-3”表示三个高变区。FRL1-4可以衍生自共有序列(例如人免疫球蛋白的重链或轻链的种类、亚类或亚组的最常见氨基酸)，或者可以衍生自个别人抗体构架区或不同构架区序列的组合。在一个实施方案中，可变轻FR由如通过Kabat等人，同上汇编的人免疫球蛋白亚组的共有序列提供。
人可变轻FR序列可以具有在其中的取代，例如，其中人FR残基被相应的小鼠残基替换，但用非人残基的替换是不必要的。例如，可以通过噬菌体展示来选择除相应的非人残基外的替换残基。下文更详细地阐述了用于生成本文感兴趣的人源化抗CCR8抗体的方法。
抗CCR8抗体、其抗原结合片段和试剂
本文提供的是结合趋化因子(C-C基序)受体8(CCR8)的抗体、其抗原结合片段和试剂。此类抗体、其抗原结合片段和试剂可以被称为抗CCR8抗体、其抗原结合片段和试剂，并且可以包括抗CCR8抗体、抗CCR8抗体片段(例如抗原结合片段)和抗CCR8抗体衍生物。在一些实施方案中，抗体、其抗原结合片段或试剂是分离的(例如，与其天然环境(例如，动物、生物样品)的组分分开)。在一些实施方案中，抗体、其抗原结合片段或试剂是人源化抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，抗体、其抗原结合片段或试剂是结合CCR8的人源化抗体的衍生物。在一些实施方案中，抗体、其抗原结合片段或试剂在实验室条件下结合CCR8(例如，在体外结合CCR8，在流式细胞术测定中结合CCR8，在ELISA中结合CCR8)。在一些实施方案中，抗体、其抗原结合片段或试剂在生理条件下结合CCR8(例如，结合受试者的细胞中的CCR8)。
一般地，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂包含至少一个免疫球蛋白重链可变结构域和至少一个免疫球蛋白轻链可变结构域。在一些实施方案中，本文的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂包含两个免疫球蛋白重链可变结构域和两个免疫球蛋白轻链可变结构域。通常，抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的每个免疫球蛋白重链可变结构域包含第一重链互补决定区、第二重链互补决定区和第三重链互补决定区(CDR；CDRH1、CDRH2、CDRH3)，并且抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的每个免疫球蛋白轻链可变结构域包含第一轻链CDR、第二轻链CDR和第三轻链CDR(CDRL1、CDRL2、CDRL3)。
CDRH1
在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的CDRH1包含选自SYHIS(SEQ ID NO:33)、GYHVS(SEQ ID NO:39)、SYHVS(SEQ ID NO:45)、YAAMY(SEQ IDNO:51)、NAAMY(SEQ ID NO:57)、DYVIS(SEQ ID NO:63)、TNAMN(SEQ ID NO:68)、TYAMN(SEQID NO:71)和AYAMN(SEQ ID NO:74)的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的CDRH1包含X1X2X3X4X5(SEQ ID NO:2)的氨基酸序列，其中X1＝S、G、Y、N、D、T或A；X2＝Y、A或N；X3＝H、A或V；X4＝I、V或M；并且X5＝S、Y或N。
CDRH2
在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的CDRH2包含选自VIWGDGSKTYNSALKS(SEQ ID NO:34)、VIWGDGKTTYNSALKS(SEQ ID NO:40)、VIWGDGRTTYNSALKS(SEQ ID NO:46)、VIWTGGSTTYNSLLKS(SEQ ID NO:52)、RIRTKPNNYATYYADSVKG(SEQ ID NO:58)、RIRTKPKNYATYYIDSVKG(SEQ ID NO:64)、EIYPGSDTTYYNEKFKG(SEQ ID NO:69)、RIRSKSNKYATYYADSVKD(SEQ ID NO:72)、RLRSKSNFYATYYADSVKD(SEQ ID NO:75)、RIRTKSNNYATYYADSVKD(SEQ ID NO:77)和RIRSKSNNYATYYVDSVKD(SEQ ID NO:78)的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的CDRH2包含X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14X15X16X17KX19(SEQ ID NO:6)的氨基酸序列，其中X1＝V、R或E；X2＝I或L；X3＝W、R或Y；X4＝G、T、P或S；X5＝D、G或K；X6＝G、P或S；X7＝S、K、R、N或D；X8＝N、T、K或无氨基酸；X9＝Y、T或无氨基酸；X10＝A、Y或无氨基酸；X11＝K、T或Y；X12＝T、Y或N；X13＝Y或E；X14＝N、A、I、K或V；X15＝S、D或F；X16＝A、L、S或K；X17＝L、V或G，并且X19＝S、G或D。
CDRH3
在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的CDRH3包含选自GGDSGFAY(SEQ ID NO:35)、GGTVVKGGFAY(SEQ ID NO:41)、MGITRGYYFDY(SEQ ID NO:47)、MGLTRAYYFDY(SEQ ID NO:53)、GGLGGFFDV(SEQ ID NO:59)、GSEMGYYYAMDY(SEQ ID NO:65)、GRELGPSYAMDY(SEQ ID NO:70)、DRATVTTGRAMDY(SEQ ID NO:73)、GRELGPYSAMDY(SEQID NO:76)和GGRGNLGKEYYFDY(SEQ ID NO:79)的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的CDRH3包含X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12YY(SEQ ID NO:15)的氨基酸序列，其中X1＝G、M或D；X2＝G、S或R；X3＝T、I、L、E、A或D；X4＝V、T、G、L或无氨基酸；X5＝V、R、G、M、L或无氨基酸；X6＝K、G、A、F、P、T或无氨基酸；X7＝S、G、Y、F、T或P；X8＝G、Y或D；X9＝F、V、Y、A、R或S；X10＝A、D或M；X11＝Y、M或D；并且X12＝D或Y。
CDRL1
在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的CDRL1包含选自QASQDIGNWLS(SEQ ID NO:36)、QASQDIGNRLS(SEQ ID NO:42)、KASQNINRYLN(SEQ IDNO:48)、RASENIYSYLA(SEQ ID NO:54)和RSSKSLLHSNGNTYLY(SEQ ID NO:60)的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的CDRL1包含X1X2SX4X5X6X7X8X9X10X11NTYLY(SEQ ID NO:18)的氨基酸序列，其中X1＝Q、K或R；X2＝A或S；X4＝Q、E或K；X5＝D、N或S；X6＝I或L；X7＝G、N、Y或L；X8＝N、R、S或H；X9＝W、R、Y或S；X10＝L或N；并且X11＝S、N、A或G。
CDRL2
在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的CDRL2包含选自GTTNLAD(SEQ ID NO:37)、GATSLAD(SEQ ID NO:43)、NANNLQT(SEQ ID NO:49)、NANSLQT(SEQ ID NO:55)、NAKTVIE(SEQ ID NO:61)和RMSNLAS(SEQ ID NO:66)的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的CDRL2包含X1X2X3X4X5X6X7(SEQ ID NO:19)的氨基酸序列，其中X1＝G、N或R；X2＝T、A或M；X3＝T、N、K或S；X4＝N、S或T；X5＝L或V；X6＝A、Q或I；并且X7＝D、T、E或S。
CDRL3
在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的CDRL3包含选自LQAYSVPLT(SEQ ID NO:38)、LQAYIVPLT(SEQ ID NO:44)、LQHNSWPWT(SEQ ID NO:50)、QHHYDSPWT(SEQ ID NO:56)、MQHLEYPFT(SEQ ID NO:62)和MQHLEYPYT(SEQ ID NO:67)的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的CDRL2包含X1QX3X4X5X6PX8T(SEQ ID NO:22)的氨基酸序列，其中X1＝L、Q或M；X3＝A或H；X4＝Y、N或L；X5＝S、D或E；X6＝V、W、S或Y；并且X8＝L、W、F或Y。
CDR集合
在一些实施方案中，抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂包括包含CDR集合(即，CDRH1、CDRH2、CDRH3)的免疫球蛋白重链可变结构域；以及包含CDR集合(即，CDRL1、CDRL2、CDRL3)的免疫球蛋白轻链可变结构域。在一些实施方案中，本文的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂包括各自包含CDR集合(即，CDRH1、CDRH2、CDRH3)的两个免疫球蛋白重链可变结构域；以及各自包含CDR集合(即，CDRL1、CDRL2、CDRL3)的两个免疫球蛋白轻链可变结构域。CDR集合可以包含本文提供的CDR氨基酸序列(即，CDRH1、CDRH2、CDRH3；和CDRL1、CDRL2、CDRL3)的任何组合。在一些实施方案中，免疫球蛋白重链可变结构域包含选自下表中提供的集合1-16的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列的集合，并且免疫球蛋白轻链可变结构域包含CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列的集合。
表2.CDR集合
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在一些实施方案中，所有CDR都来自同一集合。例如，对于包含两个免疫球蛋白重链可变结构域和两个免疫球蛋白轻链可变结构域的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，每个免疫球蛋白重链可变结构域可以包含来自集合1的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列的集合，并且每个免疫球蛋白轻链可变结构域可以包含来自集合1的CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列的集合。
在一些实施方案中，CDR来自不同的集合。例如，对于包含两个免疫球蛋白重链可变结构域和两个免疫球蛋白轻链可变结构域的抗CCR8，每个免疫球蛋白重链可变结构域可以包含来自集合1的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列的集合，并且每个免疫球蛋白轻链可变结构域可以包含来自集合2的CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列的集合。在另一个实例中，对于包含两个免疫球蛋白重链可变结构域和两个免疫球蛋白轻链可变结构域的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，一个免疫球蛋白重链可变结构域可以包含来自集合2的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列的集合；并且一个免疫球蛋白轻链可变结构域可以包含来自集合1的CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列的集合，并且其它免疫球蛋白轻链可变结构域可以包含来自集合2的CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列的集合。
VH
本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以包含重链可变结构域(VH)。在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的重链可变结构域(VH)包含这样的多肽，其与氨基酸序列QVQLKESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLTSYHISWVRQPPGKGLEWMGVIWGDGSK TYNSALKSRLSISRDTSKSQVFLKMRSLKTEDTATYYCARGGDSGFAYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:1)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，例如与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有80％或更多、81％或更多、82％或更多、83％或更多、84％或更多、85％或更多、86％或更多、87％或更多、88％或更多、89％或更多、90％或更多、91％或更多、92％或更多、93％或更多、94％或更多、95％或更多、96％或更多、97％或更多、98％或更多、或者99％或更多的同一性。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少90％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少95％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少100％的同一性的多肽。
本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以包含重链可变结构域(VH)。在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的重链可变结构域(VH)包含这样的多肽，其与氨基酸序列QVQLKESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLTSYHISWVRQPPGKGLEWMGVIWGDGSK TYNSALKSRLSISRDTSKSQVFLKMRSLKTEDTATYYCARGGDSGFAYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:2)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，例如与SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有80％或更多、81％或更多、82％或更多、83％或更多、84％或更多、85％或更多、86％或更多、87％或更多、88％或更多、89％或更多、90％或更多、91％或更多、92％或更多、93％或更多、94％或更多、95％或更多、96％或更多、97％或更多、98％或更多、或者99％或更多的同一性。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少90％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少95％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少100％的同一性的多肽。
本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以包含重链可变结构域(VH)。在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的重链可变结构域(VH)包含这样的多肽，其与氨基酸序列QVQLKESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLTSYHISWVRQPPGKGLEWMGVIWGDGKT TYNSALKSRLSISRDTSKSQVFLKMNSLKTEDTATYYCARGGDSGFAYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:3)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，例如与SEQ ID NO:3的氨基酸序列具有80％或更多、81％或更多、82％或更多、83％或更多、84％或更多、85％或更多、86％或更多、87％或更多、88％或更多、89％或更多、90％或更多、91％或更多、92％或更多、93％或更多、94％或更多、95％或更多、96％或更多、97％或更多、98％或更多、或者99％或更多的同一性。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:3的氨基酸序列具有至少90％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:3的氨基酸序列具有至少95％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:3的氨基酸序列具有至少100％的同一性的多肽。
本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以包含重链可变结构域(VH)。在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的重链可变结构域(VH)包含这样的多肽，其与氨基酸序列QVQLKESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLTGYHVSWVRQPPGKGLEWMGVIWGDGRTTYNSALKS RLSISRDTSKSQVFLKMSSLKTEDTATYYCARGGDSGFAYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:4)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，例如与SEQ ID NO:4的氨基酸序列具有80％或更多、81％或更多、82％或更多、83％或更多、84％或更多、85％或更多、86％或更多、87％或更多、88％或更多、89％或更多、90％或更多、91％或更多、92％或更多、93％或更多、94％或更多、95％或更多、96％或更多、97％或更多、98％或更多、或者99％或更多的同一性。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:4的氨基酸序列具有至少90％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:4的氨基酸序列具有至少95％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:4的氨基酸序列具有至少100％的同一性的多肽。
本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以包含重链可变结构域(VH)。在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的重链可变结构域(VH)包含这样的多肽，其与氨基酸序列QVQLKESGPGLVQPSQTLSLTCTVSGFSLTSYHVSWVRQPPGKGLEWMGVIWTGGSTTYNSLLKS RLSISRDISKSQVFLKMNSLQTEDTATYYCARGGTVVKGGFAYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:5)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，例如与SEQ ID NO:5的氨基酸序列具有80％或更多、81％或更多、82％或更多、83％或更多、84％或更多、85％或更多、86％或更多、87％或更多、88％或更多、89％或更多、90％或更多、91％或更多、92％或更多、93％或更多、94％或更多、95％或更多、96％或更多、97％或更多、98％或更多、或者99％或更多的同一性。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列具有至少90％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列具有至少95％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列具有至少100％的同一性的多肽。
本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以包含重链可变结构域(VH)。在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的重链可变结构域(VH)包含这样的多肽，其与氨基酸序列QVQLKESGPGLVQPSQTLSLTCTVSGFSLTSYHVSWVRQPPGKGLEWMGVIWTGGSTTYNSLLKS RLSISRDISKSQVFLKMNSLQTEDTATYYCARGGTVVKGGFAYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:6)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，例如与SEQ ID NO:6的氨基酸序列具有80％或更多、81％或更多、82％或更多、83％或更多、84％或更多、85％或更多、86％或更多、87％或更多、88％或更多、89％或更多、90％或更多、91％或更多、92％或更多、93％或更多、94％或更多、95％或更多、96％或更多、97％或更多、98％或更多、或者99％或更多的同一性。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:6的氨基酸序列具有至少90％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:6的氨基酸序列具有至少95％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:6的氨基酸序列具有至少100％的同一性的多肽。
本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以包含重链可变结构域(VH)。在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的重链可变结构域(VH)包含这样的多肽，其与氨基酸序列AVQLVESGGGLVQPKESLKISCAASGFTFSYAAMYWVRQTPGKGLEWVARIRTKPNNYATYYADS VKGRFTISRDDSKSMVYLQMDNLKSEDTAMYYCNIMGITRGYYFDYWGQGVMVTVSS(SEQ ID NO:7)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，例如与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有80％或更多、81％或更多、82％或更多、83％或更多、84％或更多、85％或更多、86％或更多、87％或更多、88％或更多、89％或更多、90％或更多、91％或更多、92％或更多、93％或更多、94％或更多、95％或更多、96％或更多、97％或更多、98％或更多、或者99％或更多的同一性。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少90％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少95％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少100％的同一性的多肽。
本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以包含重链可变结构域(VH)。在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的重链可变结构域(VH)包含这样的多肽，其与氨基酸序列AVQLVESGGGLVQPKESLKISCAASGFIFSNAAMYWVRQAPGKGLQWVARIRTKPKNYATYYIDS VKGRFTISRDDSKSMVYLQMDNLKTEDTAMYYCNTMGLTRAYYFDYWGQGVMVTVS(SEQ ID NO:8)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，例如与SEQ ID NO:8的氨基酸序列具有80％或更多、81％或更多、82％或更多、83％或更多、84％或更多、85％或更多、86％或更多、87％或更多、88％或更多、89％或更多、90％或更多、91％或更多、92％或更多、93％或更多、94％或更多、95％或更多、96％或更多、97％或更多、98％或更多、或者99％或更多的同一性。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:8的氨基酸序列具有至少90％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:8的氨基酸序列具有至少95％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:8的氨基酸序列具有至少100％的同一性的多肽。
本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以包含重链可变结构域(VH)。在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的重链可变结构域(VH)包含这样的多肽，其与氨基酸序列QVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTDYVISWVKQRTGQGLEWIGEIYPGSDTTYYNEKFK GKATLTADKSSNTAYMQLSSLTSEDSAVYFCARGGLGGFFDVWGAGTTVTVSS(SEQ ID NO:9)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，例如与SEQ ID NO:9的氨基酸序列具有80％或更多、81％或更多、82％或更多、83％或更多、84％或更多、85％或更多、86％或更多、87％或更多、88％或更多、89％或更多、90％或更多、91％或更多、92％或更多、93％或更多、94％或更多、95％或更多、96％或更多、97％或更多、98％或更多、或者99％或更多的同一性。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:9的氨基酸序列具有至少90％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:9的氨基酸序列具有至少95％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:9的氨基酸序列具有至少100％的同一性的多肽。
本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以包含重链可变结构域(VH)。在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的重链可变结构域(VH)包含这样的多肽，其与氨基酸序列EVQLVETGGGLVQPKGSLKLSCAVSGFTFKTNAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKSNKYATYYAD SVKDRFTISRDDSQSMLYLQMNNLKTEDTAMYYCVRGSEMGYYYAMDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO:10)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，例如与SEQ ID NO:10的氨基酸序列具有80％或更多、81％或更多、82％或更多、83％或更多、84％或更多、85％或更多、86％或更多、87％或更多、88％或更多、89％或更多、90％或更多、91％或更多、92％或更多、93％或更多、94％或更多、95％或更多、96％或更多、97％或更多、98％或更多、或者99％或更多的同一性。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:10的氨基酸序列具有至少90％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:10的氨基酸序列具有至少95％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:10的氨基酸序列具有至少100％的同一性的多肽。
本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以包含重链可变结构域(VH)。在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的重链可变结构域(VH)包含这样的多肽，其与氨基酸序列EVQLVESGGGLVQPKGSLKLSCAASGFAFNTYAMNWVRQAPGKGLEWIARLRSKSNFYATYYAD SVKDRFTISRDDSQSMLYLQMNNLKTEDTAVYYCVRGRELGPSYAMDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO:11)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，例如与SEQ ID NO:11的氨基酸序列具有80％或更多、81％或更多、82％或更多、83％或更多、84％或更多、85％或更多、86％或更多、87％或更多、88％或更多、89％或更多、90％或更多、91％或更多、92％或更多、93％或更多、94％或更多、95％或更多、96％或更多、97％或更多、98％或更多、或者99％或更多的同一性。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:11的氨基酸序列具有至少90％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:11的氨基酸序列具有至少95％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:11的氨基酸序列具有至少100％的同一性的多肽。
本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以包含重链可变结构域(VH)。在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的重链可变结构域(VH)包含这样的多肽，其与氨基酸序列EVQLVESGGGLVQPKGSLKLSCAASGFAFNTYAMNWVRQAPGKGLEWIARLRSKSNFYATYYAD SVKDRFTISRDDSQSMLYLQMNNLKTEDTAVYYCVRGRELGPSYAMDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO:12)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，例如与SEQ ID NO:12的氨基酸序列具有80％或更多、81％或更多、82％或更多、83％或更多、84％或更多、85％或更多、86％或更多、87％或更多、88％或更多、89％或更多、90％或更多、91％或更多、92％或更多、93％或更多、94％或更多、95％或更多、96％或更多、97％或更多、98％或更多、或者99％或更多的同一性。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:12的氨基酸序列具有至少90％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:12的氨基酸序列具有至少95％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:12的氨基酸序列具有至少100％的同一性的多肽。
本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以包含重链可变结构域(VH)。在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的重链可变结构域(VH)包含这样的多肽，其与氨基酸序列EVQLVETGGGLVQPKGSLKLSCAASGFTFNAYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRTKSNNYATYYAD SVKDRFTISRDDSQTMLYLQMNNLKTEDTAMYYCVRDRATVTTGRAMDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO:13)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，例如与SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有80％或更多、81％或更多、82％或更多、83％或更多、84％或更多、85％或更多、86％或更多、87％或更多、88％或更多、89％或更多、90％或更多、91％或更多、92％或更多、93％或更多、94％或更多、95％或更多、96％或更多、97％或更多、98％或更多、或者99％或更多的同一性。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有至少90％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有至少95％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有至少100％的同一性的多肽。
本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以包含重链可变结构域(VH)。在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的重链可变结构域(VH)包含这样的多肽，其与氨基酸序列EVQLVESGGGLVQPKGSLKLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKSNNYATYYVD SVKDRFTISRDDSQSMLYLQINNLKTEDTAMYYCVRGRELGPYSAMDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO:14)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，例如与SEQ ID NO:14的氨基酸序列具有80％或更多、81％或更多、82％或更多、83％或更多、84％或更多、85％或更多、86％或更多、87％或更多、88％或更多、89％或更多、90％或更多、91％或更多、92％或更多、93％或更多、94％或更多、95％或更多、96％或更多、97％或更多、98％或更多、或者99％或更多的同一性。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:14的氨基酸序列具有至少90％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:14的氨基酸序列具有至少95％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:14的氨基酸序列具有至少100％的同一性的多肽。
本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以包含重链可变结构域(VH)。在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的重链可变结构域(VH)包含这样的多肽，其与如下的氨基酸序列：
EVQLVESGGGLVQPKGSLKLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRTKSNNYATY YADSVKDRFTISRDDSKRRVYLQMNNLKTEDTAMYYCVRGGRGNLGKEYYFDYWGQGTTLTVS S(SEQ ID NO:16)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，例如与SEQ ID NO:16的氨基酸序列具有80％或更多、81％或更多、82％或更多、83％或更多、84％或更多、85％或更多、86％或更多、87％或更多、88％或更多、89％或更多、90％或更多、91％或更多、92％或更多、93％或更多、94％或更多、95％或更多、96％或更多、97％或更多、98％或更多、或者99％或更多的同一性。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:16的氨基酸序列具有至少90％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:16的氨基酸序列具有至少95％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:16的氨基酸序列具有至少100％的同一性的多肽。
在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的VH包含选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ IDNO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16的多肽。
VL
本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以包含轻链可变结构域(VL)。在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的轻链可变结构域(VL)包含这样的多肽，其与氨基酸序列DIQMTQSPASLSASLEEIVTITCQASQDIGNWLSWYQQKPGKSPQLLIYGTTNLADGVPSRFSGSRS GTQYSLKISRLQVEDIGIYYCLQAYSVPLTFGSGTKLEIK(SEQ ID NO:17)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，例如与SEQ ID NO:17的氨基酸序列具有80％或更多、81％或更多、82％或更多、83％或更多、84％或更多、85％或更多、86％或更多、87％或更多、88％或更多、89％或更多、90％或更多、91％或更多、92％或更多、93％或更多、94％或更多、95％或更多、96％或更多、97％或更多、98％或更多、或者99％或更多的同一性。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:17的氨基酸序列具有至少90％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:17的氨基酸序列具有至少95％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:17的氨基酸序列具有至少100％的同一性的多肽。
本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以包含轻链可变结构域(VL)。在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的轻链可变结构域(VL)包含这样的多肽，其与氨基酸序列DIQMTQSPASLSASLEEIVTITCQASQDIGNWLSWYQQKPGKSPQLLIYGTTNLADGVPSRFSGSRS GTQYSLKISRLQVEDIGIYYCLQAYSVPLTFGSGTKLEIK(SEQ ID NO:18)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，例如与SEQ ID NO:18的氨基酸序列具有80％或更多、81％或更多、82％或更多、83％或更多、84％或更多、85％或更多、86％或更多、87％或更多、88％或更多、89％或更多、90％或更多、91％或更多、92％或更多、93％或更多、94％或更多、95％或更多、96％或更多、97％或更多、98％或更多、或者99％或更多的同一性。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:18的氨基酸序列具有至少90％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:18的氨基酸序列具有至少95％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:18的氨基酸序列具有至少100％的同一性的多肽。
本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以包含轻链可变结构域(VL)。在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的轻链可变结构域(VL)包含这样的多肽，其与氨基酸序列DIQMTQSPASLSASLEEIVTITCQASQDIGNWLSWYQQKPGKSPQLLIYGTTNLADGVPSRFSGSRS GTQYSLKISRLQVEDIGIYYCLQAYSVPLTFGSGTKLEIK(SEQ ID NO:19)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，例如与SEQ ID NO:19的氨基酸序列具有80％或更多、81％或更多、82％或更多、83％或更多、84％或更多、85％或更多、86％或更多、87％或更多、88％或更多、89％或更多、90％或更多、91％或更多、92％或更多、93％或更多、94％或更多、95％或更多、96％或更多、97％或更多、98％或更多、或者99％或更多的同一性。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:19的氨基酸序列具有至少90％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:19的氨基酸序列具有至少95％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:19的氨基酸序列具有至少100％的同一性的多肽。
本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以包含轻链可变结构域(VL)。在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的轻链可变结构域(VL)包含这样的多肽，其与氨基酸序列DIQMTQSPASLSASLEEIVTITCQASQDIGNWLSWYQQKPGKSPQLLIYGATSLADGVPSRFSGSRS GTQFSLKISRLQVEDIGIYYCLQAYIVPLTFGSGTKLESK(SEQ ID NO:20)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，例如与SEQ ID NO:20的氨基酸序列具有80％或更多、81％或更多、82％或更多、83％或更多、84％或更多、85％或更多、86％或更多、87％或更多、88％或更多、89％或更多、90％或更多、91％或更多、92％或更多、93％或更多、94％或更多、95％或更多、96％或更多、97％或更多、98％或更多、或者99％或更多的同一性。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:20的氨基酸序列具有至少90％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:20的氨基酸序列具有至少95％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:20的氨基酸序列具有至少100％的同一性的多肽。
本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以包含轻链可变结构域(VL)。在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的轻链可变结构域(VL)包含这样的多肽，其与氨基酸序列DIQMTQSPASLSASLEEIVTITCQASQDIGNRLSWYQQKPGKSPQLLIYGATSLADGVPSRFSGSRSG TQYSLKISRLQVEDIGIYYCLQAYSTPLTFGSGTKLEIK(SEQ ID NO:21)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，例如与SEQ ID NO:21的氨基酸序列具有80％或更多、81％或更多、82％或更多、83％或更多、84％或更多、85％或更多、86％或更多、87％或更多、88％或更多、89％或更多、90％或更多、91％或更多、92％或更多、93％或更多、94％或更多、95％或更多、96％或更多、97％或更多、98％或更多、或者99％或更多的同一性。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:21的氨基酸序列具有至少90％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:21的氨基酸序列具有至少95％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:21的氨基酸序列具有至少100％的同一性的多肽。
本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以包含轻链可变结构域(VL)。在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的轻链可变结构域(VL)包含这样的多肽，其与氨基酸序列DIQMTQSPASLSASLEEIVTITCQASQDIGNRLSWYQQKPGKSPQLLIYGATSLADGVPSRFSGSRSG TQYSLKISRLQVEDIGIYYCLQAYSTPLTFGSGTKLEIK(SEQ ID NO:22)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，例如与SEQ ID NO:22的氨基酸序列具有80％或更多、81％或更多、82％或更多、83％或更多、84％或更多、85％或更多、86％或更多、87％或更多、88％或更多、89％或更多、90％或更多、91％或更多、92％或更多、93％或更多、94％或更多、95％或更多、96％或更多、97％或更多、98％或更多、或者99％或更多的同一性。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:22的氨基酸序列具有至少90％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:22的氨基酸序列具有至少95％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:22的氨基酸序列具有至少100％的同一性的多肽。
本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以包含轻链可变结构域(VL)。在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的轻链可变结构域(VL)包含这样的多肽，其与氨基酸序列DIQMTQSPSFLSASVGDRVTINCKASQNINRYLNWYQQQLGEAPKLLIYNANNLQTGIPSRFSGSRS GTDFTLTISSLQPEDVATYFCLQHNSWPWTFGGGTKLELK(SEQ ID NO:23)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，例如与SEQ ID NO:23的氨基酸序列具有80％或更多、81％或更多、82％或更多、83％或更多、84％或更多、85％或更多、86％或更多、87％或更多、88％或更多、89％或更多、90％或更多、91％或更多、92％或更多、93％或更多、94％或更多、95％或更多、96％或更多、97％或更多、98％或更多、或者99％或更多的同一性。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:23的氨基酸序列具有至少90％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:23的氨基酸序列具有至少95％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:23的氨基酸序列具有至少100％的同一性的多肽。
本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以包含轻链可变结构域(VL)。在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的轻链可变结构域(VL)包含这样的多肽，其与氨基酸序列DIQMTQSPSFLSASVGDRVTINCKASQNINRYLNWYQQKLGEAPKLLIYNANSLQTGIPSRFSGSGS GTDFTLTIRSLQPEDVATYFCLQHNSWPWTFGGGTKLELK(SEQ ID NO:24)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，例如与SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有80％或更多、81％或更多、82％或更多、83％或更多、84％或更多、85％或更多、86％或更多、87％或更多、88％或更多、89％或更多、90％或更多、91％或更多、92％或更多、93％或更多、94％或更多、95％或更多、96％或更多、97％或更多、98％或更多、或者99％或更多的同一性。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少90％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少95％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少100％的同一性的多肽。
本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以包含轻链可变结构域(VL)。在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的轻链可变结构域(VL)包含这样的多肽，其与氨基酸序列DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASENIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVHNAKTVIEGVPSRFSGSGS GTQFSLKINSLQPEDFGSYYCQHHYDSPWTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:25)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，例如与SEQ ID NO:25的氨基酸序列具有80％或更多、81％或更多、82％或更多、83％或更多、84％或更多、85％或更多、86％或更多、87％或更多、88％或更多、89％或更多、90％或更多、91％或更多、92％或更多、93％或更多、94％或更多、95％或更多、96％或更多、97％或更多、98％或更多、或者99％或更多的同一性。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:25的氨基酸序列具有至少90％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:25的氨基酸序列具有至少95％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:25的氨基酸序列具有至少100％的同一性的多肽。
本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以包含轻链可变结构域(VL)。在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的轻链可变结构域(VL)包含这样的多肽，其与氨基酸序列DIVMTQAAPSVPVTPGESVSISCRSSKSLLHSNGNTYLYWFLQRPGQSPQLLIYRMSNLASGVPDR FSGSGSGTAFTLRISRVEAEDVGVYYCMQHLEYPFTFGGGTKLEIK(SEQ IDNO:26)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，例如与SEQ ID NO:26的氨基酸序列具有80％或更多、81％或更多、82％或更多、83％或更多、84％或更多、85％或更多、86％或更多、87％或更多、88％或更多、89％或更多、90％或更多、91％或更多、92％或更多、93％或更多、94％或更多、95％或更多、96％或更多、97％或更多、98％或更多、或者99％或更多的同一性。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:26的氨基酸序列具有至少90％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:26的氨基酸序列具有至少95％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:26的氨基酸序列具有至少100％的同一性的多肽。
本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以包含轻链可变结构域(VL)。在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的轻链可变结构域(VL)包含这样的多肽，其与氨基酸序列DIVMTQAAPSVPVTPGESVSISCRSSKSLLHSNGNTYLYWFLQRPGQSPQLLIYRMSNLASGVPDR FSGSGSGTAFTLRISRVEAEDVGVYYCMQHLEYPYTFGGGTKLEIK(SEQ IDNO:27)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，例如与SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有80％或更多、81％或更多、82％或更多、83％或更多、84％或更多、85％或更多、86％或更多、87％或更多、88％或更多、89％或更多、90％或更多、91％或更多、92％或更多、93％或更多、94％或更多、95％或更多、96％或更多、97％或更多、98％或更多、或者99％或更多的同一性。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至少90％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至少95％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至少100％的同一性的多肽。
本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以包含轻链可变结构域(VL)。在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的轻链可变结构域(VL)包含这样的多肽，其与氨基酸序列DIVMTQAAPSVPVTPGESVSISCRSSKSLLHSNGNTYLYWFLQRPGQSPQLLIYRMSNLASGVPDR FSGSGSGTAFTLRISRVEAEDVGVYYCMQHLEYPYTFGGGTKLEIK(SEQ IDNO:28)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，例如与SEQ ID NO:28的氨基酸序列具有80％或更多、81％或更多、82％或更多、83％或更多、84％或更多、85％或更多、86％或更多、87％或更多、88％或更多、89％或更多、90％或更多、91％或更多、92％或更多、93％或更多、94％或更多、95％或更多、96％或更多、97％或更多、98％或更多、或者99％或更多的同一性。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:28的氨基酸序列具有至少90％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:28的氨基酸序列具有至少95％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:28的氨基酸序列具有至少100％的同一性的多肽。
本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以包含轻链可变结构域(VL)。在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的轻链可变结构域(VL)包含这样的多肽，其与氨基酸序列DIVMTQAAPSLPVTPGESVSISCRSSKSLLHSNGNTYLYWFLQRAGQSPQLLIYRMSNLASGVPDR FSGSGSGTAFTLRISRVEAEDVGVYYCMQHLEYPFTFGSGTKLEIK(SEQ IDNO:29)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，例如与SEQ ID NO:29的氨基酸序列具有80％或更多、81％或更多、82％或更多、83％或更多、84％或更多、85％或更多、86％或更多、87％或更多、88％或更多、89％或更多、90％或更多、91％或更多、92％或更多、93％或更多、94％或更多、95％或更多、96％或更多、97％或更多、98％或更多、或者99％或更多的同一性。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:29的氨基酸序列具有至少90％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:29的氨基酸序列具有至少95％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:29的氨基酸序列具有至少100％的同一性的多肽。
本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以包含轻链可变结构域(VL)。在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的轻链可变结构域(VL)包含这样的多肽，其与氨基酸序列DIVMTQAAPSVPVTPGESVSISCRSSKSLLHSNGNTYLYWFLQRPGQSPQLLIYRMSNLASGVPDR FSGSGSGTAFTLRISRVEAEDVGLYYCMQHLEYPFTFGGGTKLEIK(SEQ IDNO:30)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，例如与SEQ ID NO:30的氨基酸序列具有80％或更多、81％或更多、82％或更多、83％或更多、84％或更多、85％或更多、86％或更多、87％或更多、88％或更多、89％或更多、90％或更多、91％或更多、92％或更多、93％或更多、94％或更多、95％或更多、96％或更多、97％或更多、98％或更多、或者99％或更多的同一性。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:30的氨基酸序列具有至少90％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:30的氨基酸序列具有至少95％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:30的氨基酸序列具有至少100％的同一性的多肽。
本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以包含轻链可变结构域(VL)。在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的轻链可变结构域(VL)包含这样的多肽，其与如下的氨基酸序列：
DIVMTQAAPSVPVTPGESVSISCRSSKSLLHSNGNTYLYWFLQRPGQSPQLLIYRMSNLASGVPDRFSGSGSGT AFTLRISRVEAEDVGVYYCMQHLEYPFTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:32)具有至少80％(例如，80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，例如与SEQ ID NO:32的氨基酸序列具有80％或更多、81％或更多、82％或更多、83％或更多、84％或更多、85％或更多、86％或更多、87％或更多、88％或更多、89％或更多、90％或更多、91％或更多、92％或更多、93％或更多、94％或更多、95％或更多、96％或更多、97％或更多、98％或更多、或者99％或更多的同一性。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:32的氨基酸序列具有至少90％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:32的氨基酸序列具有至少95％的同一性的多肽。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:32的氨基酸序列具有至少100％的同一性的多肽。
在一些实施方案中，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的VL包含选自SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ IDNO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30和SEQ ID NO:32的多肽。
核酸序列
下文提供了与本文描述的抗体相关的VH核苷酸(NT)序列的实例。
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下文提供了与本文描述的抗体相关的VL核苷酸(NT)序列的实例。
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在另一个方面，本公开内容的特征在于包含核苷酸序列的分离的核酸，所述核苷酸序列编码本文描述的抗体或其抗原结合片段的免疫球蛋白重链可变结构域。在某些实施方案中，编码免疫球蛋白重链可变结构域的核苷酸序列包含SEQ ID NO:81-96中任一个所示的序列。
在另一个方面，本公开内容的特征在于包含核苷酸序列的分离的核酸，所述核苷酸序列编码本文描述的抗体或其抗原结合片段的免疫球蛋白轻链可变结构域。在某些实施方案中，编码免疫球蛋白轻链可变结构域的核苷酸序列包含SEQ ID NO:97-112中任一个所示的序列。
在另一个方面，本公开内容的特征在于分离的核酸，其包含编码本文描述的抗体或其抗原结合片段的免疫球蛋白重链可变结构域的核苷酸序列和编码免疫球蛋白轻链可变结构域的核苷酸序列。在某些实施方案中，编码免疫球蛋白重链可变结构域的核苷酸序列包含SEQ ID NO:81-96中任一个所示的序列；并且编码免疫球蛋白轻链可变结构域的核苷酸序列包含SEQ ID NO:97-112中任一个所示的序列。
Fc
本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以包含片段可结晶区(Fc区)。Fc区通常形成抗体的尾部，并且可以与某些细胞表面受体和补体系统的某些组分相互作用。Fc区可以包括例如各自衍生自抗体重链的第二恒定结构域(CH2)和第三恒定结构域(CH3)的两个多肽。
下文提供了Fc区的野生型CH2-CH3部分的氨基酸序列(定位如Kabat等人(1992)SEQUENCES OF PROTEINS OF IMMUNOLOGICAL INTEREST，美国国立卫生研究院出版号91-3242中的EU索引)(SEQ ID NO:80)。CH2部分来自SEQ ID NO:80的氨基酸1-110，并且CH3部分来自SEQ ID NO:80的氨基酸111-217。
在一些实施方案中，Fc区包括一种或多种修饰(例如，相对于可比较的野生型Fc区的一种或多种氨基酸取代、插入或缺失)。包含修饰的Fc区的抗体、其抗原结合片段和试剂(变体试剂)通常具有相对于包含野生型Fc区的试剂改变的表型。变体试剂表型可以表达为改变的血清半衰期、改变的稳定性、对细胞酶改变的敏感性或改变的效应子功能(例如，如在NK依赖性或巨噬细胞依赖性测定中测定的)。改变效应子功能的Fc区修饰可以包括这样的修饰，其增加与激活受体(例如，FcγRIIA(CD16A))的结合，并且降低与抑制受体(例如，FcγRIIB(CD32B))的结合(参见例如，Stavenhagen，J.B.等人(2007)Cancer Res.57(18):8882-8890)。具有与CD32B降低的结合和/或与CD16A增加的结合的人IgG1 Fc区的变体的实例含有F243L、R292P、Y300L、V305I和/或P396L取代。氨基酸位置对应于上文提供的CH2-CH3结构域的氨基酸编号。
在一些实施方案中，Fc区包括降低或消除Fc与Fc受体的结合的一种或多种修饰。此类修饰可以包括在位置234、235、265和297处的氨基酸取代(参见例如美国专利号5,624,821，其通过引用并入本文)。示例性取代包括L234A、L235A、D265A和N297Q中的一种或多种。氨基酸位置对应于上文提供的CH2-CH3结构域的氨基酸编号。
在一些实施方案中，Fc区包括一种或多种修饰，其改变(相对于野生型Fc区)修饰的Fc区对于激活性FcγR(例如FcγRIIA或FcγRIIIA)相对于抑制性FcγR(例如FcγRIIB)的亲和力比率：
亲和力的比率＝在对于FcγR激活的亲和力方面野生型/变体的变化/在对于FcγR抑制的亲和力方面野生型/变体的变化，
当修饰的Fc区具有大于1的亲和力比率时，本文的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以特别用于提供疾病、病症或感染(例如癌症或传染病)的治疗性或预防性治疗，或者其症状的改善，其中需要由FcγR介导的效应细胞功能(例如，ADCC)的增强功效。当修饰的Fc区具有小于1的亲和力比率时，本文的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以特别用于提供疾病或病症(例如自身免疫性或炎性病症)的治疗性或预防性治疗，或者其症状的改善，其中需要由FcγR介导的效应细胞功能的减少功效。表3列出了亲和力比率大于1或小于1的示例性单一、双重、三重、四重和五重氨基酸取代(参见例如，各自通过引用并入本文的PCT公开号WO 04/063351；WO 06/088494；WO 07/024249；WO 06/113665；WO 07/021841；WO07/106707；WO 2008/140603)。氨基酸位置对应于上文提供的CH2-CH3结构域的氨基酸编号。
表3：按亲和力比率列出的示例性单一和多重取代
与本文提供的抗CCR8抗体、抗原结合片段和试剂竞争性结合的抗体、抗原结合片段和试剂
本文提供的是抗CCR8抗体、其抗原结合片段和试剂，其与本文描述的一种或多种抗CCR8抗体、其抗原结合片段和试剂竞争性结合或能够竞争性结合。特别地，本文提供的是抗CCR8抗体、其抗原结合片段和试剂，其与本文描述的一种或多种抗CCR8抗体、其抗原结合片段和试剂竞争或能够竞争结合CCR8。与本文描述的抗CCR8竞争或能够竞争的此类抗体、其抗原结合片段和试剂可以被称为竞争者抗体、其抗原结合片段和试剂。在某些情况下，当竞争者结合与本文描述的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂相同的CCR8的一般区域(即，细胞外区域或富含亮氨酸的结合结构域)时，抗体、其抗原结合片段或试剂(即，竞争者抗体、其抗原结合片段或试剂)可以被视为竞争结合CCR8。在某些情况下，当竞争者结合与本文描述的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂确切相同的CCR8区域(例如，确切相同的肽(线性表位)或确切相同的表面氨基酸(构象表位))时，抗体、其抗原结合片段或试剂(即，竞争者抗体、其抗原结合片段或试剂)可以被视为竞争结合CCR8。在某些情况下，当竞争者在合适的测定条件下结合与本文描述的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂相同的CCR8的一般区域(即，细胞外区域或富含亮氨酸的结合结构域)时，抗体、其抗原结合片段或试剂(即，竞争者抗体、其抗原结合片段或试剂)可以被视为能够竞争结合CCR8。在某些情况下，当竞争者在合适的测定条件下结合与本文描述的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂确切相同的CCR8区域(例如，确切相同的肽(线性表位)或确切相同的表面氨基酸(构象表位))时，抗体、其抗原结合片段或试剂(即，竞争者抗体、其抗原结合片段或试剂)可以被视为能够竞争结合CCR8。
在某些情况下，当竞争者阻断本文描述的一种或多种抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂与CCR8的结合时，抗体、其抗原结合片段或试剂(即，竞争者抗体、其抗原结合片段或试剂)可以被视为竞争结合CCR8。在某些情况下，当竞争者在合适的测定条件下阻断本文描述的一种或多种抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂与CCR8的结合时，抗体、其抗原结合片段或试剂(即，竞争者抗体、其抗原结合片段或试剂)可以被视为能够竞争结合CCR8。竞争者是否阻断本文描述的一种或多种抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂与CCR8的结合可以使用合适的竞争测定或阻断测定，例如如本文实施例中所述的阻断测定来确定。竞争者抗体、其抗原结合片段或试剂可以在竞争或阻断测定中，将本文描述的一种或多种抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂与CCR8的结合阻断50％或更多，并且相反地，本文描述的一种或多种抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以在竞争或阻断测定中，将竞争者抗体、其抗原结合片段或试剂与CCR8的结合阻断约50％或更多。例如，抗体、其抗原结合片段或试剂(即，竞争者抗体、其抗原结合片段或试剂)可以在竞争或阻断测定中，将本文描述的一种或多种抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂与CCR8的结合阻断约55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％，并且相反地，本文描述的一种或多种抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以在竞争或阻断测定中，将竞争者抗体、其抗原结合片段或试剂与CCR8的结合阻断约55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。
在某些情况下，当竞争者以与本文描述的一种或多种抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂相似的亲和力结合CCR8时，抗体、其抗原结合片段或试剂(即，竞争者抗体、其抗原结合片段或试剂)可以被视为竞争结合CCR8。在某些情况下，当竞争者在合适的测定条件下以与本文描述的一种或多种抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂相似的亲和力结合CCR8时，抗体、其抗原结合片段或试剂(即，竞争者抗体、其抗原结合片段或试剂)可以被视为能够竞争结合CCR8。在一些实施方案中，当竞争者以其为本文描述的一种或多种抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂至少约50％的亲和力结合CCR8时，抗体、其抗原结合片段或试剂(即，竞争者抗体、其抗原结合片段或试剂)被视为竞争结合CCR8。例如，当竞争者以其为本文描述的一种或多种抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂至少约55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％的亲和力结合CCR8时，抗体、其抗原结合片段或试剂(即，竞争者抗体、其抗原结合片段或试剂)可以被视为竞争结合CCR8。竞争者抗体、其抗原结合片段或试剂可以包含本文对于抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂描述的任何特征。
本文还提供的是抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其结合或能够结合与本文描述的一种或多种抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂相同的表位。特别地，本文提供的是抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其与本文描述的一种或多种抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂竞争结合CCR8上的相同表位。结合相同表位的此类抗体、其抗原结合片段或试剂可以被称为表位竞争者。在某些情况下，表位竞争者可以结合与本文描述的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂确切相同的CCR8区域(例如，确切相同的肽(线性表位)或确切相同的表面氨基酸(构象表位))。在某些情况下，表位竞争者阻断本文描述的一种或多种抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂与CCR8的结合。表位竞争者可以在竞争测定中将本文描述的一种或多种抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂与CCR8的结合阻断约50％或更多，并且相反地，本文描述的一种或多种抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以在竞争测定中将表位竞争者与CCR8的结合阻断50％或更多。在某些情况下，表位竞争者以与本文描述的一种或多种抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂类似的亲和力结合CCR8。在一些实施方案中，表位竞争者以其为本文描述的一种或多种抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂至少约50％的亲和力结合CCR8。例如，表位竞争者可以以其为本文描述的一种或多种抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂至少约55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％的亲和力结合CCR8。表位竞争者可以包含本文对于抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂描述的任何特征。
抗体制备
在一些实施方案中，抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂是抗体。用于生成抗CCR8抗体和抗CCR8抗体变体的方法在下文实施例中进行描述。在一些实施方案中，抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂是人源化抗体或其抗原结合片段。人源化抗CCR8抗体可以例如在遗传改造(即，转基因)小鼠(例如来自Medarex)中进行制备，当呈递免疫原时，所述小鼠可以产生不一定需要CDR移植的人抗体。这些抗体是来自动物例如小鼠的全人抗体(100％人蛋白质序列)，其中非人抗体基因被压制并且由人抗体基因表达替换。当呈现给可以产生关于相关CDR的人构架的这些遗传改造的小鼠或其它动物时，可能生成针对CCR8的抗体。
当生成变体时，制备亲本抗体。用于生成此类非人抗体和亲本抗体的示例性技术在下述节段中进行描述。
抗原制备
用于产生抗体的抗原可以是例如特别是在细胞中表达的完整的CCR8，或CCR8的一部分(例如，N末端结构域、C末端结构域、细胞质结构域、细胞器内结构域、跨膜结构域、细胞外结构域、胞外结构域、TIR结构域、富含亮氨酸结构域或包含所需表位的CCR8片段)。可用于生成抗体的其它形式的抗原对于本领域技术人员将是显而易见的。
多克隆抗体
多克隆抗体可以通过相关抗原和佐剂的多重皮下(sc)或腹膜内(ip)注射，在动物(脊椎动物或无脊椎动物，包括哺乳动物、鸟类和鱼类，包括软骨鱼)中产生。它可以用于使用双功能剂或衍生剂，例如马来酰亚胺苯甲酰基磺基琥珀酰亚胺酯(通过半胱氨酸残基缀合)、N-羟基琥珀酰亚胺(通过赖氨酸残基)、戊二醛、琥珀酸酐、SOCl2或其中R和R1是不同烷基的R1N＝C＝NR，将相关抗原缀合至在待免疫物种中是免疫原性的蛋白质或其它载体，例如匙孔血蓝蛋白、血清白蛋白、牛甲状腺球蛋白或大豆胰蛋白酶抑制剂。非蛋白质载体(例如胶体金)也可以用于抗体生产。
通过将例如100μg或5μg蛋白质或缀合物(分别用于兔或小鼠)与三体积的弗氏完全佐剂组合，并且在多重部位处皮内注射溶液，针对抗原、免疫原性缀合物或衍生物，对动物进行免疫。一个月后，通过在多重部位处的皮下注射，用在弗氏完全佐剂中的肽或缀合物的原始量的五分之一至十分之一，对动物进行加强免疫。7至14天后，对动物放血并测定血清的抗体滴度。对动物进行加强免疫，直至滴度达到平台。经常地，用相同抗原但与不同的蛋白质缀合和/或通过不同的交联试剂缀合的缀合物，对动物进行加强免疫。缀合物也可以在重组细胞培养物中作为蛋白质融合物进行制备。另外，聚集剂例如明矾也适当地用于增强免疫应答。
单克隆抗体
单克隆抗体可以使用首先由Kohler等人，Nature，256:495(1975)描述的杂交瘤方法进行制备，或者可以通过其它方法例如重组DNA方法(美国专利号4,816,567)进行制备。在杂交瘤方法中，如上所述对小鼠或其它适当的宿主动物，例如仓鼠或猕猴进行免疫，以引发产生或能够产生特异性结合用于免疫的蛋白质的抗体的淋巴细胞。可替代地，可以在体外对淋巴细胞进行免疫。然后使用合适的融合剂例如聚乙二醇，将淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，以形成杂交瘤细胞(Goding，Monoclonal Antibodies:Principles and Practice，第59-103页(Academic Press，1986))。
因此制备的杂交瘤细胞在合适的培养基中接种并生长，所述培养基可以含有抑制未融合的亲本骨髓瘤细胞的生长或存活的一种或多种物质。例如，如果亲本骨髓瘤细胞缺乏次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(HGPRT或HPRT)，则用于杂交瘤的培养基通常将包括次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸苷(HAT培养基)，所述物质阻止HGPRT缺陷细胞的生长。
优选的骨髓瘤细胞是有效融合，支持通过所选抗体产生细胞的稳定高水平的抗体产生，并且对培养基例如HAT培养基敏感的那些骨髓瘤细胞。在这些中，优选的骨髓瘤细胞系是鼠骨髓瘤系，例如可得自美国典型培养物保藏中心(American Type CultureCollection)，Rockville，Md.USA的SP-2或X63-Ag8-653细胞。人骨髓瘤和小鼠-人异源骨髓瘤细胞系也已对于人单克隆抗体的生产进行描述(Kozbor，J.Immunol.，133:3001(1984)；Brodeur等人，Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications，第51-63页)(Marcel Dekker，Inc.，New York，1987))。
就针对抗原的单克隆抗体的产生测定杂交瘤细胞在其中生长的培养基。可以通过免疫沉淀，通过体外结合测定例如放射性免疫测定(RIA)或酶联免疫吸附测定(ELISA)，或通过表达膜抗原的细胞的流式细胞术分析，来确定通过杂交瘤细胞产生的单克隆抗体的结合特异性。可以例如通过Munson等人，Anal.Biochem.，107:220(1980)的Scatchard分析来确定单克隆抗体的结合亲和力。
在鉴定产生具有所需特异性、亲和力和/或活性的抗体的杂交瘤细胞后，克隆可以通过有限稀释程序进行亚克隆并通过标准方法进行生长(Goding，MonoclonalAntibodies:Principles and Practice，第59页-103(Academic Press，1986))。用于此目的的合适培养基包括例如D-MEM或RPMI-1640培养基。另外，杂交瘤细胞可以在动物体内作为腹水肿瘤生长。通过常规免疫球蛋白纯化程序，例如蛋白A-琼脂糖、羟磷灰石层析、凝胶电泳、透析或亲和层析，将通过亚克隆分泌的单克隆抗体与培养基、腹水或血清适当地分开。
编码单克隆抗体的DNA很容易使用常规程序(例如，通过使用能够特异性结合编码单克隆抗体的重链和轻链的基因的寡核苷酸探针)进行分离且测序。可替代地，可以由mRNA制备cDNA，然后使cDNA经受DNA测序。杂交瘤细胞充当用于cDNA制备的此类基因组DNA或RNA的优选来源。一旦分离，DNA就可以置于本领域众所周知的表达载体内，然后将所述表达载体转染到宿主细胞，例如大肠杆菌(E coli)细胞、猿猴COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或骨髓瘤细胞内，所述细胞否则并不产生免疫球蛋白，以在重组宿主细胞中获得单克隆抗体的合成。下文将更详细地描述抗体的重组生产。
人源化和氨基酸序列变体
用于抗体的人源化的一般方法例如在美国专利号5861155、6479284、6407213、6639055、6500931、5530101、5585089、5693761、5693762、6180370、5714350、6350861、5777085、5834597、5882644、5932448、6013256、6129914、6210671、6329511、5225539、6548640和5624821中进行描述，所述美国专利各自通过引用并入本文。在某些实施方案中，可能期望生成这些人源化抗体的氨基酸序列变体，特别是当这些变体改善抗体的结合亲和力或其它生物学性质时。
抗CCR8抗体的氨基酸序列变体通过将适当的核苷酸变化引入抗CCR8抗体DNA内或通过肽合成来制备。此类变体包括例如在用于本文实例的抗CCR8抗体的氨基酸序列内的残基的缺失、和/或插入和/或取代。制备缺失、插入和取代的任何组合，以获得最终构建体，条件是最终构建体具有所需特性。氨基酸变化还可以改变人源化或变体抗CCR8抗体的翻译后过程，例如改变糖基化位点的数目或位置。
用于鉴定其为用于诱变的优选位置的抗CCR8抗体的某些残基或区域的一种方法称为“丙氨酸扫描诱变”，如通过Cunningham和Wells Science，244:1081-1085(1989)描述的。此处，鉴定一个残基或一组靶残基(例如荷电残基，例如arg、asp、his、lys和glu)，并且通过中性或带负电荷的氨基酸(最优选地丙氨酸或多聚丙氨酸)替换，以影响氨基酸与CCR8抗原的相互作用。然后，通过在取代位点处或对于取代位点引入进一步或其它变体，来改善证实对取代的功能敏感性的那些氨基酸位置。因此，虽然用于引入氨基酸序列变异的位点是预先确定的，但突变本身的性质无需是预先确定的。例如，为了分析在给定位点处的突变的性能，在靶密码子或区域处进行丙氨酸扫描或随机诱变，并且就所需活性筛选所表达的抗CCR8抗体变体。氨基酸序列插入包括长度范围从一个残基到含有一百个或更多个残基的多肽的氨基和/或羧基末端融合物，以及单个或多重氨基酸残基的序列内插入。末端插入的实例包括N末端甲硫氨酰残基或与表位标签融合的抗体。其它插入变体包括增加抗体的血清半衰期的酶或多肽与抗体的N-或C-末端的融合物。
另一种类型的变体是氨基酸取代变体。这些变体具有从抗体分子中去除的至少一个氨基酸残基，并且在其位置中插入不同的残基。对于取代诱变最感兴趣的位点包括高变区，但也考虑了FR改变。保守取代是优选的，但可以引入更基本的改变并且可以筛选产物。下文列出了取代的实例：
氨基酸残基取代的实例
Ala(A)val；leu；ile；val
Arg(R)lys；gln；asn；lys
Asn(N)gln；his；asp，lys；gln；arg
Asp(D)glu；asn
Cys(C)ser；ala
Gln(Q)asn；glu
Glu(E)asp；gln
Gly(G)ala
His(H)asn；gln；lys；arg
Ile(I)leu；val；met；ala；leu；phe；正亮氨酸
Leu(L)正亮氨酸；ile；val；ile；met；ala；phe
Lys(K)arg；gln；asn
Met(M)leu；phe；ile
Phe(F)leu；val；ile；ala；tyr
Pro(P)ala
Ser(S)thr
Thr(T)ser
Trp(W)tyr；phe
Tyr(Y)trp；phe；thr；ser
Val(V)ile；leu；met；phe；ala；正亮氨酸
通过选择在其维持以下的效应方面显著不同的取代来完成抗体的生物学性质的重要修饰：(a)在取代区域中的多肽主链的结构，例如作为片层或螺旋构象，(b)分子在靶位点处的电荷或疏水性，或(c)侧链的体积。天然存在的残基基于共同的侧链性质进行分组：
(1)疏水性：正亮氨酸、met、ala、val、leu、ile；
(2)中性亲水性：cys、ser、thr；
(3)酸性：asp、glu；
(4)碱性：asn、gln、his、lys、arg；
(5)影响链取向的残基：gly、pro；和
(6)芳香族：trp、tyr、phe
非保守取代需要将这些类别之一交换另一个类别的成员。
并不涉及维持抗体的正确构象的任何半胱氨酸残基也可以被取代，以改善分子的氧化稳定性并防止异常交联。相反地，可以将半胱氨酸键加入抗体中，以改善其稳定性(特别是当抗体是抗体片段例如Fv片段时)。
一种类型的取代变体涉及取代亲本抗体(例如，人源化抗体或人抗体)的一个或多个高变区残基。一般地，选择用于进一步开发的所得到的变体相对于它们由其生成的亲本抗体将具有改善的生物学性质。用于生成此类取代变体的方便方式是使用噬菌体展示的亲和力成熟。简言之，几个高变区位点(例如，6-7个位点)被突变，以在每个位点处生成所有可能的氨基酸取代。
因此生成的抗体变体以来自丝状噬菌体颗粒的单价方式展示为与在每个颗粒内包装的M13的基因III产物的融合物。然后如本文公开的，就其生物活性(例如，结合亲和力)筛选噬菌体展示的变体。为了鉴定用于修饰的候选高变区位点，可以进行丙氨酸扫描诱变，以鉴定显著促成抗原结合的高变区残基。可替代地或另外，分析抗原-抗体复合物的晶体结构以鉴定抗体与抗原之间的接触点可能是有益的。此类接触残基和邻近残基是根据本文详述的技术用于取代的候选物。一旦生成这样的变体，就使变体实验对象组经受如本文描述的筛选，并且可以选择在一个或多个相关测定中具有优异性质的抗体用于进一步开发。
另一种类型的抗体的氨基酸变体改变了抗体的原始糖基化模式。改变意指缺失抗体中发现的多个碳水化合物部分之一，和/或添加抗体中并不存在的一个或多个糖基化位点。抗体的糖基化通常是N-联和/或O-联的。N-联的指碳水化合物部分与天冬酰胺残基的侧链的附着。三肽序列天冬酰胺-X-丝氨酸和天冬酰胺-X-苏氨酸(其中X是除了脯氨酸之外的任何氨基酸)是用于碳水化合物部分与天冬酰胺侧链的酶促附着的最常见的识别序列。因此，多肽中的这些三肽序列中任一的存在产生了潜在的糖基化位点。O-联糖基化指糖N-乙酰半乳糖胺、半乳糖或木糖之一与羟基氨基酸，最常见的是丝氨酸或苏氨酸的附着，尽管也可以使用5-羟基脯氨酸或5-羟基赖氨酸。
向抗体添加糖基化位点方便地通过这样改变氨基酸序列来实现，使得它含有上述三肽序列(对于N-联糖基化位点)中的一个或多个。还可以通过向原始抗体的序列添加或取代一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基(对于O-联糖基化位点)来进行改变。
编码本文的抗CCR8抗体的氨基酸序列变体的核酸分子通过本领域已知的各种方法进行制备。这些方法包括但不限于从天然来源中分离(在天然存在的氨基酸序列变体的情况下)，或者通过较早制备的抗CCR8抗体的变体或非变体形式的寡核苷酸介导的(或定点)诱变、PCR诱变和盒式诱变来制备。
人抗体
作为替代人源化，可以生成人抗体。例如，可以生成转基因动物(例如小鼠)，其在内源性免疫球蛋白生产的不存在下，在免疫后能够产生人抗体的完整储库。例如，嵌合和种系突变小鼠中的抗体重链连接区(JH)基因的纯合缺失导致内源抗体产生的完全抑制。将人种系免疫球蛋白基因阵列转移到此类种系突变小鼠内可以导致在抗原攻击后人抗体的产生(参见例如Jakobovits等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，90:2551(1993)；Jakobovits等人，Nature，362:255-258(1993)；Bruggermann等人，Year in Immuno.，7:33(1993)；以及美国专利号5,591,669、5,589,369和5,545,807)。人抗体也可以衍生自噬菌体展示文库(Hoogenboom等人，J.Mol.Biol.，227:381(1991)；Marks等人，J.Mol.Biol.，222:581-597(1991))；以及美国专利号5,565,332和5,573,905)。人抗体也可以通过体外激活的B细胞生成(参见美国专利号5,567,610和5,229,275)。
抗原结合抗体片段
在某些实施方案中，抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂是保留至少一种所需活性包括抗原结合的抗体片段。已开发了各种技术用于抗体片段的生产。在一些情况下，这些片段经由完整抗体的蛋白酶解消化而衍生(参见例如，Morimoto等人，Journal ofBiochemical and Biophysical Methods24:107-117(1992)和Brennan等人，Science 229:81(1985))。在一些情况下，这些片段由重组宿主细胞直接产生。例如，Fab'-SH片段可以直接从大肠杆菌中回收并且进行化学偶联，以形成F(ab')2片段(Carter等人，Bio/Technology 10:163-167(1992))。在一些情况下，F(ab')2使用亮氨酸拉链GCN4形成，以促进F(ab')2分子的组装。根据另一种方法，可以直接从重组宿主细胞培养物中分离Fv、Fab或F(ab')2片段。用于产生抗体片段的其它技术对于技术人员将是显而易见的。
多特异性抗体、其抗原结合片段和试剂
在一些实施方案中，抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂包含第一结合部分和第二结合部分，其中所述第一结合部分与其为CCR8的第一分子特异性反应，并且所述第二结合部分与第二分子特异性反应，所述第二分子是与第一分子不同的分子种类。此类抗体、其抗原结合片段或试剂可以包含多个第一结合部分、多个第二结合部分、或多个第一结合部分和多个第二结合部分。优选地，第一结合部分与第二结合部分的比率为约1:1，尽管它的范围可以为约1000:1至约1:1000，其中所述比率可以按照效价进行测量。
在其中第一部分是抗体的那些实施方案中，第二结合部分也可以是抗体。在一些实施方案中，第一部分和第二部分经由接头部分进行连接，所述接头部分可以具有二至数百或甚至数千效价，用于第一结合部分和第二结合部分通过一种或不同的化学作用的附着。双特异性抗体的实例包括针对两个不同表位反应性的那些双特异性抗体；在一些情况下，一个表位是CCR8表位，并且第二个表位在无关的可溶性分子上。在一些实施方案中，双特异性抗体针对CCR8上的表位以及针对不同细胞的表面上发现的不同分子上的表位是反应性的。
本文的组合物还可以包含第一抗体、其抗原结合片段或试剂和第二抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述第一抗体、其抗原结合片段或试剂包含与第一分子(例如，CCR8)特异性反应的第一结合部分，并且所述第二抗体、其抗原结合片段或试剂包含与第二分子特异性反应的第二结合部分，所述第二分子是与第一分子不同的分子种类。第一抗体、其抗原结合片段或试剂和/或第二抗体、其抗原结合片段或试剂可以是抗体。第一抗体、其抗原结合片段或试剂与第二抗体、其抗原结合片段或试剂的比率的范围可以为约1,000:1至1:1,000，但优选比率为约1:1。在一些实施方案中，可能期望生成对于至少两个不同表位具有结合特异性的多特异性(例如，双特异性)抗CCR8抗体。某些双特异性抗体可以结合CCR8的两个不同表位。双特异性抗体可以制备为全长抗体或抗体片段(例如，F(ab’)2双特异性抗体)。
根据用于制备双特异性抗体的一种方法，一对抗体分子之间的界面可以进行改造，以使从重组细胞培养物中回收的异二聚体的百分比达到最大。优选的界面包含抗体恒定结构域的CH3结构域的至少一部分。在此方法中，来自第一抗体分子的界面的一个或多个小氨基酸侧链被较大侧链(例如酪氨酸或色氨酸)替换。通过用较小的氨基酸侧链(例如丙氨酸或苏氨酸)替换大氨基酸侧链，在第二抗体分子的界面上创建与大侧链相同或相似大小的补偿“空腔”。这提供了用于增加异二聚体超过其它不需要的终产物例如同二聚体的产率的机制(参见例如1996年9月6日公开的WO96/27011)。
双特异性抗体包括交联或“异源缀合物”抗体。例如，异源缀合物中的抗体之一可以与抗生物素蛋白偶联，另一种与生物素偶联。异源缀合物抗体可以使用任何方便的交联方法进行制备。合适的交联剂是本领域众所周知的，并且连同许多交联技术一起公开于美国专利号4,678,980中。
任何合适的技术可以用于从抗体片段生成双特异性抗体。例如，可以使用化学键合来制备双特异性抗体。在某些方法中，完整抗体进行蛋白酶解切割，以生成F(ab’)2片段(参见例如，Brennan等人，Science 229:81(1985)，其通过引用并入本文)。这些片段在二硫醇络合剂亚砷酸钠的存在下被还原，以稳定邻位二硫醇并防止分子间二硫键的形成。所生成的Fab’片段随后被转换为硫代硝基苯甲酸酯(TNB)衍生物。然后，通过用巯基乙胺还原，将Fab'-TNB衍生物之一重新转换为Fab'-硫醇，并且与等摩尔量的另一种Fab'-硫醇衍生物混合，以形成双特异性抗体。在又一个进一步的实施方案中，直接从大肠杆菌中回收的Fab'-SH片段可以在体外进行化学偶联，以形成双特异性抗体(参见例如，Shalaby等人，J.Exp.Med.175:217-225(1992)，其通过引用并入本文)。
可以使用用于直接从重组细胞培养物制备且分离双特异性抗体片段的任何合适的技术。例如，已使用亮氨酸拉链产生双特异性抗体(参见例如，Kostelny等人，J.Immunol.148(5)：1547-1553(1992)，其通过引用并入本文)。来自Fos和Jun蛋白的亮氨酸拉链肽通过基因融合与两种不同抗体的Fab'部分连接。抗体同二聚体在铰链区处被还原以形成单体，然后重新氧化以形成抗体异二聚体。该方法也可以用于抗体同二聚体的生产。通过Hollinger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448(1993)描述的“双抗体”技术已提供了用于制备双特异性抗体片段的替代机制。片段包含通过接头与轻链可变结构域(VL)连接的重链可变结构域(VH)，所述接头太短而不允许同一链上的两个结构域之间的配对。相应地，一个片段的VH和VL结构域被迫与另一个片段的VL和VH结构域配对，从而形成两个抗原结合位点。通过使用单链Fv(scFv)二聚体用于制备双特异性抗体片段的另一种策略(参见例如，Gruber等人，J.Immunol.152:5368(1994)，其通过引用并入本文)。在某些情况下，双特异性抗体可以是如Zapata等人Protein Eng.8(10):1057-1062(1995)中所述产生的“线性抗体”，所述参考文献通过引用并入本文。
本文考虑了具有二价或更多价的抗体。本文中包含一个或多个结合位点/臂或其片段的抗体(或聚合物或多肽)在本文中将被称为“多价”抗体。例如，本文中的“二价”抗体包含两个结合位点/Fab或其片段，而本文中的“三价”多肽包含三个结合位点/Fab或其片段。在本文的多价聚合物中，两个或更多个结合位点/Fab可以结合相同或不同的抗原。例如，本文的多价多肽中的两个或更多个结合位点可以针对相同抗原，例如针对所述抗原的相同部分或表位或者针对所述抗原的两个或更多个相同或不同的部分或表位；和/或可以针对不同的抗原；或其组合。因此，本文的二价多肽例如可以包含两个相同的结合位点，可以包含针对抗原的第一部分或表位的第一结合位点和针对所述抗原的相同部分或表位或者针对所述抗原的另一个部分或表位的第二结合位点；或者可以包含针对抗原的第一部分或表位的第一结合位点和针对不同抗原的第二结合位点。然而，如根据上文的描述将明确的是，在本文的多价多肽可以包含任何数目的针对相同或不同抗原的结合位点的意义上，本文的技术并不限于此。在一个实施方案中，多价多肽包含至少两个配体结合元件，其中之一含有本文显示的一个或多个CDR肽序列。在另一个实施方案中，多价多肽包含三个配体结合位点，其各自独立地选自本文公开的CDR序列。
在某些实施方案中，至少一种配体结合元件结合CCR8。在一个实施方案中，至少一种配体结合元件结合另一种靶。在一个实施方案中，在多价结合分子中存在多达10,000种结合元件，并且配体结合元件可以连接至支架。
本文中含有至少两个结合位点/Fab或其片段(其中至少一个结合位点针对第一抗原，并且第二结合位点针对不同于第一抗原的第二抗原)的抗体(或聚合物或多肽)也可以被称为“多特异性的”。因此，“双特异性”聚合物包含针对第一抗原的至少一个位点和针对第二抗原的至少一个第二位点，而“三特异性的”是这样的聚合物，其包含针对第一抗原的至少一个结合位点、针对第二抗原的至少一个进一步的结合位点、以及针对第三抗原的至少一个进一步的结合位点：等等。相应地，以其最简单的形式，本文中的双特异性多肽是本文提供的技术的二价多肽(每个Fab)。然而，如根据上文的描述将明确的是，在本文的多特异性多肽可以包含任何数目的针对两种或更多种不同抗原的结合位点的意义上，本文的技术并不限于此。
其它修饰
考虑了抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的其它修饰。例如，本文中的技术还涉及免疫缀合物，其包含与以下缀合的本文描述的抗体(例如抗CCR8抗体)：细胞毒素剂例如毒素(例如，细菌、真菌、植物或动物起源的酶促活性毒素，或其片段)、或放射性同位素(例如，放射性缀合物)、或细胞毒性药物。此类缀合物有时被称为“试剂-药物缀合物”或“ADC”。使用各种双功能蛋白质偶联剂制备缀合物，所述偶联剂例如N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫醇)丙酸酯(SPDP)、亚氨基硫烷(IT)、酰亚胺酯(例如己二亚胺二甲酯HCL)的双功能衍生物、活性酯(例如双琥珀酰亚胺辛二酸酯)、醛类(例如戊二醛)、双叠氮化合物(例如双-(对叠氮基苯甲酰基)己二胺)、双重氮衍生物(如双-(对重氮基苯甲酰基)乙二胺)、二异氰酸酯(例如甲苯2,6-二异氰酸酯)和双活性氟化合物(例如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。
本文公开的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以配制为免疫脂质体。含有抗体的脂质体通过本领域已知的方法进行制备，所述方法例如Epstein等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82:3688(1985)；Hwang等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4030(1980)；以及美国专利号4,485,045和4,544,545中描述的。具有增强的循环时间的脂质体公开于美国专利号5,013,556中。例如，可以通过反相蒸发法，用包含磷脂酰胆碱、胆固醇和PEG衍生的磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)的脂质组合物生成脂质体。脂质体通过限定孔径的过滤器挤出，以产生具有所需直径的脂质体。本文提供的抗体的Fab'片段可以如Martin等人，J.Biol.Chem.257:286-288(1982)中所述的，经由二硫互换反应缀合至脂质体。另一种活性成分任选地包含在脂质体内。
酶或其它多肽可以通过本领域众所周知的技术，例如上文讨论的异双功能交联试剂的使用，与抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂共价结合。在一些实施方案中，可以使用本领域众所周知的重组DNA技术(参见例如，Neuberger等人，Nature 312:604-608(1984))来构建融合蛋白，其至少包含与酶的至少功能活性部分连接的本文提供的抗体的抗原结合区域。
在某些实施方案中，可能期望使用抗体片段而不是完整抗体，以增加例如靶组织和细胞的渗透。在此类情况下，可能期望修饰抗体片段，以便增加其血清半衰期。这可以例如通过将挽救受体结合表位掺入抗体片段内来实现(例如，通过抗体片段中的适当区域的突变或通过将表位掺入肽标签内，所述肽标签然后例如通过DNA或肽合成在任一端处或在中间融合至抗体片段；参见例如1996年10月17日公开的WO96/32478)。
抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的共价修饰也包括在该技术的范围内。例如，可以通过化学合成或者通过抗CCR8抗体的酶促或化学切割来进行修饰。通过使抗体的靶向氨基酸残基与有机衍生剂(其能够与所选择的侧链或者N-或C-末端残基反应)反应，将抗体的其它类型的共价修饰引入分子内。多肽的示例性共价修饰在特别通过引用并入本文的美国专利号5,534,615中进行描述。抗体的共价修饰的优选类型包含以美国专利号4,640,835；4,496,689；4,301,144；4,670,417；4,791,192或4,179,337中所述的方式，将抗体连接至各种非蛋白质聚合物之一，例如聚乙二醇、聚丙二醇或聚氧烷基烯(polyoxyalkylenes)。
在一些实施方案中，本文公开的任何抗体或其抗原片段与寡核苷酸标记缀合或杂交。在一些实施方案中，寡核苷酸标记包括样品条形码序列、引物的结合位点和锚。在一些实施方案中，寡核苷酸标记可以与本文公开的任何可检测标记物或标记缀合或杂交。在一些实施方案中，寡核苷酸标记是聚合序列。在一些实施方案中，术语“寡核苷酸”和“多核苷酸”可互换使用，以指长度为约2至约500个核苷酸的单链核苷酸多聚体。在一些实施方案中，本文描述的任何寡核苷酸标记可以是合成的、酶促(例如，经由聚合)或使用“拆分-合并(split-pool)”方法制备的。在一些实施方案中，本文描述的任何寡核苷酸标记可以包括核糖核苷酸单体(即，可以是寡核糖核苷酸)和/或脱氧核糖核苷酸单体(即，寡脱氧核糖核苷酸)。在一些实施方案中，本文描述的任何寡核苷酸标记可以包括寡核苷酸中的脱氧核糖核苷酸单体和核糖核苷酸单体两者的组合(例如，脱氧核糖核苷酸单体和核糖核苷酸单体的随机或有序组合)。在一些实施方案中，寡核苷酸标记的长度可以为4至10、10至20、21至30、31至40、41至50、51至60、61至70、71至80、80至100、100至150、150至200、200至250、250至300、300至350、350至400或400-500个核苷酸。在一些实施方案中，本文描述的任何寡核苷酸标记可以包括(例如，共价地或非共价地)附着至另一个结构的一个或多个功能部分。在一些实施方案中，本文描述的任何寡核苷酸标记可以包括一种或多种可检测标记(例如，放射性同位素或荧光团)。在一些实施方案中，锚是限定的聚合物，例如多核苷酸或寡核苷酸序列，其设计为与互补寡核苷酸序列杂交。在一些实施方案中，锚设计用于生成双链构建体寡核苷酸序列的目的。在一些实施方案中，锚定位于构建体寡核苷酸序列的3'端处。在其它实施方案中，锚定位于构建体寡核苷酸序列的5’端处。每个锚对于其预期的互补序列是特异性的。
在一些实施方案中，样品条形码序列是聚合物，例如多核苷酸，当它是功能元件时，其对于单个配体是特异性的。在一些实施方案中，样品条形码序列可以用于鉴定特定细胞或底物，例如Drop-seq微珠。在一些实施方案中，样品条形码序列可以由DNA、RNA、修饰的碱基或这些碱基的组合以及上文定义的任何其它聚合物的限定序列形成。在一些实施方案中，样品条形码序列的长度为约2至4个单体组分，例如核苷酸碱基。在其它实施方案中，条形码的长度为至少约1至100个单体组分，例如核苷酸。因此，在各个实施方案中，条形码由至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、80、91、92、93、94、95、96、97、98、99或至多100个单体组分，例如核酸的序列形成。在一些实施方案中，样本条形码序列是相对于其它条形码可以是唯一的特定条形码。
在任何实施方案的一些中，样品条形码序列可以具有各种不同的格式。例如，样品条形码序列可以包括多核苷酸条形码、随机核酸和/或氨基酸序列、以及合成核酸和/或氨基酸序列。样品条形码序列可以以可逆或不可逆的方式附着至分析物或者另一个部分或结构。可以在样品的测序之前或期间，将样品条形码序列添加到例如脱氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)样品的片段中。样品条形码序列可以允许各个测序读数的鉴定和/或定量(例如，条形码可以是或可以包括唯一分子标识符或“UMI”)。
样品条形码序列可以例如以单细胞分辨率在空间上分辨生物样品中发现的分子组分(例如，条形码可以是或可以包括“空间条形码”)。在一些实施方案中，条形码包括UMI和空间条形码两者。在一些实施方案中，条形码包括一起充当单个条形码的两个或更多个子条形码。例如，多核苷酸条形码可以包括由一个或多个非条形码序列分开的两个或更多个多核苷酸序列(例如，子条形码)。
在一些实施方案中，关于引物的结合位点是寡核苷酸的功能组分，其本身是提供用于寡核苷酸扩增的退火位点的寡核苷酸或多核苷酸序列。关于引物的结合位点可以由DNA、RNA、PNA、修饰的碱基或这些碱基的组合、或聚酰胺等的聚合物形成。在一些实施方案中，关于引物的结合位点是长度约10个此类单体组分，例如核苷酸碱基。在其它实施方案中，关于引物的结合位点的长度为至少约5至100个单体组分，例如核苷酸。因此，在各个实施方案中，关于引物的结合位点由至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、80、91、92、93、94、95、96、97、98、99或至多100个单体组分，例如核酸的序列形成。在某些实施方案中，关于引物的结合位点可以是适合作为用于各种扩增技术的退火位点的通用序列。扩增技术包括但不限于基于DNA聚合酶的扩增系统，例如聚合酶链反应(PCR)、实时PCR、环介导的等温扩增(LAMP、MALBAC)、链置换扩增(SDA)、多重置换扩增(MDA)、重组酶聚合酶扩增(RPA)和通过任何数目的DNA聚合酶(例如，T4 DNA聚合酶、Sulfulobus DNA聚合酶、Klenow DNA聚合酶、Bst聚合酶、Phi29聚合酶)和基于RNA聚合酶的扩增系统(例如T7-、T3-和SP6-RNA聚合酶扩增)的扩增、基于核酸序列的扩增(NASBA)、自主序列复制(3SR)、滚环扩增(RCA)、连接酶链反应(LCR)、解旋酶依赖性扩增(I)、分支扩增方法和RNA-seq。用于缀合或杂交寡核苷酸标记的方法可以以WO/2018/144813、WO/2016/018960、WO/2018/089438、WO/2014/182528、WO/2018/026873、WO/2021/188838中所述的方式进行。
核酸、载体、宿主细胞和重组方法
本文描述的技术还提供了编码抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的分离的核酸，包含核酸的载体和宿主细胞，以及用于产生抗体、其抗原结合片段或试剂的重组技术。本文中的核酸可以包括各自被称为多核苷酸的一个或多个子序列。
本文提供的是包含编码抗CCR8试剂或抗体或其片段的核苷酸序列的核酸(例如，分离的核酸)。在一些实施方案中，核酸编码本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的免疫球蛋白重链可变结构域。在一些实施方案中，核酸编码本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的免疫球蛋白轻链可变结构域。在一些实施方案中，核酸编码本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的免疫球蛋白重链可变结构域和免疫球蛋白轻链可变结构域。在一些实施方案中，核酸包含编码SEQ ID NO:1-32中任一个的氨基酸序列的核苷酸序列。核酸可以包含编码SEQ ID NO:1、3-5、7-14和16中任一个的免疫球蛋白重链可变结构域氨基酸序列的核苷酸序列。核酸可以包含编码SEQ ID NO:17、20-21、23-30和32中任一个的免疫球蛋白轻链可变结构域氨基酸序列的核苷酸序列。
本文提供的是包含核苷酸序列的分离的核酸，所述核苷酸序列编码本文描述的任何抗CCR8试剂、抗体或其抗原结合片段的免疫球蛋白重链可变结构域，其中所述核苷酸序列与SEQ ID NO:81-96中任一个具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
本文提供的是包含核苷酸序列的分离的核酸，所述核苷酸序列编码本文描述的任何抗CCR8试剂、抗体或其抗原结合片段的免疫球蛋白轻链可变结构域，其中所述核苷酸序列与SEQ ID NO:97-112中任一个具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
本文提供的是包含核苷酸序列的分离的核酸，所述核苷酸序列编码本文描述的任何抗CCR8试剂、抗体或其抗原结合片段的免疫球蛋白重链可变结构域和免疫球蛋白轻链可变结构域，其中编码免疫球蛋白重链可变结构域的核苷酸序列与SEQ ID NO:81-96中任一个具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，并且编码免疫球蛋白轻链可变结构域的核苷酸序列与SEQ ID NO:97-112中任一个具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
在一些实施方案中，本文提供的任何核酸包含信号序列。在一些实施方案中，本文描述的任何核酸并不包含信号序列。
对于抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的重组产生，可以分离编码抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的核酸，并且插入可复制载体内，用于进一步克隆(DNA的扩增)或表达。在某些情况下，抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以通过同源重组来产生，例如，如特别通过引用并入本文的美国专利号5,204,244中描述的。编码抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的DNA可以使用常规程序容易地分离且测序(例如，通过使用能够特异性结合编码抗体重链和轻链的基因的寡核苷酸探针)。许多载体是可用的。载体组分一般包括但不限于下述中的一种或多种：信号序列和复制起点、一种或多种标记物基因、增强子元件、启动子和转录终止序列，例如如1996年7月9日发布且特别通过引用并入本文的美国专利号5,534,615中描述的。
用于克隆或表达本文载体中的DNA的合适宿主细胞是原核细胞、酵母细胞或高等真核细胞。用于该目的的合适的原核生物包括真细菌，例如革兰氏阴性或革兰氏阳性生物，例如肠杆菌科(Enterobacteriaceae)，例如埃希氏菌属(Escherichia)如大肠杆菌、肠杆菌属(Enterobacter)、欧文氏菌属(Erwinia)、克雷伯氏菌属(Klebsiella)、变形杆菌属(Proteus)、沙门氏菌属(Salmonella)如鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)、沙雷氏菌属(Serratia)如粘质沙雷氏菌(Serratia marcescans)和志贺氏菌属(Shigella)、以及芽孢杆菌属(Bacilli)如枯草芽孢杆菌(B.subtilis)和地衣芽孢杆菌(例如1989年4月12日出版的DD 266,710中公开的地衣芽孢杆菌41P)、假单胞菌属(Pseudomonas)如铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)和链霉菌属(Streptomyces)。一种优选的大肠杆菌克隆宿主是大肠杆菌294(ATCC 31,446)，尽管其它菌株例如大肠杆菌B、大肠杆菌X1776(ATCC 31,537)和大肠杆菌W3110(ATCC 27,325)也是合适的。这些实例是说明性而不是限制性的。
除原核生物之外，真核微生物例如丝状真菌或酵母也是编码抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的载体的合适克隆或表达宿主。酿酒酵母(Saccharomy cescerevisiae)或普通面包酵母是低等真核宿主微生物中最常用的。许多其它属、种和菌株是通常可用的并且在本文中有用的，例如粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)；克鲁维酵母属(Kluyveromyces)宿主例如乳酸克鲁维酵母(K.lactis)、脆弱克鲁维酵母(K.fragilis)(ATCC 12,424)、保加利亚克鲁维酵母(K.bulgaricus)(ATCC 16,045)、威克汉姆克鲁维酵母(K.wickeramii)(ATCC 24,178)、K.waltii(ATCC 56,500)、K.drosophilarum(ATCC 36,906)、耐热克鲁维酵母(K.thermotolerans)和马克斯克鲁维酵母(K.marxianus)；耶氏酵母属(yarrowia)(EP 402,226)；巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)(EP 183,070)；假丝酵母属(Candida)；里氏木霉(Trichoderma reesia)(EP 244,234)；粗糙脉孢菌(Neurosporacrassa)；许旺酵母属(Schwanniomyces)例如西方许旺酵母(Schwanniomycesoccidentalis)；以及丝状真菌例如脉孢菌属(Neurospora)、青霉属(Penicillium)、弯颈霉属(Tolypocladium)和曲霉属(Aspergillus)宿主，例如构巢曲霉(A.nidulans)和黑曲霉(A.niger)。
用于表达抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂(例如，糖基化的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂)的合适宿主细胞衍生自多细胞生物。无脊椎动物细胞的实例包括植物和昆虫细胞。已鉴定了众多杆状病毒株和变体以及来自宿主的相应许可的昆虫宿主细胞，所述宿主例如草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)(毛虫)、埃及伊蚊(Aedes aegypti)(蚊子)、白纹伊蚊(Aedes albopictus)(蚊子)、黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)(果蝇)和家蚕(Bombyx mori)(蚕蛾)。用于转染的各种病毒株是可公开获得的，例如苜蓿银纹夜蛾(Autographa californica)NPV的L-1变体和家蚕NPV的Bm-5株，并且此类病毒可以用作根据本技术的本文的病毒，特别是用于转染草地贪夜蛾细胞。棉花、玉米、马铃薯、大豆、矮牵牛、番茄和烟草的植物细胞培养物也可以用作宿主。
用于表达抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的合适宿主细胞还可以包括脊椎动物细胞(例如，哺乳动物细胞)。脊椎动物细胞可以在培养物(组织培养物)中进行繁殖。有用的哺乳动物宿主细胞系的实例包括由SV40(COS-7，ATCC CRL 1651)转化的猴肾CV1系；人胚肾系(亚克隆用于悬浮培养中生长的293或293细胞，Graham等人，J.Gen Virol.36:59(1977))；幼仓鼠肾细胞(BHK，ATCC CCL 10)；中国仓鼠卵巢细胞/-DHFR(CHO，Urlaub等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216(1980))；小鼠支持细胞(TM4，Mather，Biol.Reprod.23:243-251(1980))；猴肾细胞(CV1 ATCC CCL 70)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76，ATCC CRL-1587)；人宫颈癌细胞(HELA，ATCC CCL 2)；犬肾细胞(MDCK，ATCC CCL 34)；水牛鼠肝细胞(BRL 3A，ATCC CRL 1442)；人肺细胞(W138，ATCC CCL 75)；人肝细胞(Hep G2，HB 8065)；小鼠乳腺肿瘤(MMT 060562，ATCC CCL51)；TRI细胞(Mather等人，Annals N.Y.Acad.Sci.383:44-68(1982))；MRC 5细胞；FS4细胞；和人肝癌细胞系(Hep G2)。
宿主细胞可以用上述用于抗体生产的表达或克隆载体进行转化，并且在适当修饰的常规营养培养基中进行培养，用于诱导启动子、选择转化体或扩增编码所需序列的基因。
用于产生本文的抗体、其抗原结合片段或试剂的宿主细胞可以在各种培养基中进行培养。商购可得的培养基例如Ham's F10(Sigma)、最低必需培养基((MEM)(Sigma)、RPMI-1640(Sigma)和达尔贝科改良伊格尔培养基((DMEM)，Sigma)适合于培养宿主细胞。另外，Ham等人，Meth.Enz.58:44(1979)，Barnes等人，Anal.Biochem.102:255(1980)，美国专利号4,767,704；4,657,866；4,927,762；4,560,655；或5,122,469；WO 90/03430；WO 87/00195；或美国专利Re.30,985中描述的任何培养基可以用作用于宿主细胞的培养基。这些培养基中的任一种都可以根据需要补充有激素和/或其它生长因子(例如胰岛素、转铁蛋白或表皮生长因子)、盐(例如氯化钠、钙、镁和磷酸盐)、缓冲液(例如HEPES))、核苷酸(例如腺苷和胸苷)、抗生素(例如GENTAMYCINTM)、微量元素(定义为通常以在微摩尔范围内的最终浓度存在的无机化合物)和葡萄糖或等价能源。还可以包括本领域技术人员已知的以适当浓度的任何其它必需的补充剂。培养条件例如温度、pH等等是先前与选择用于表达的宿主细胞一起使用的那些条件，并且对于普通技术人员将是显而易见的。
当使用重组技术时，抗体、其抗原结合片段或试剂可以在细胞内、在周质空间中产生，或直接分泌到培养基内。如果抗体在细胞内产生，则作为第一步，例如通过离心或超滤去除颗粒碎片，宿主细胞或裂解片段。Carter等人，Bio/Technology 10:163-167(1992)描述了用于分离分泌至大肠杆菌的周质空间的抗体的程序。简言之，在乙酸钠(pH 3.5)、EDTA和苯甲基磺酰氟(PMSF)的存在下，在约30分钟内解冻细胞糊。细胞碎片可以通过离心去除。当抗体分泌到培养基内时，一般首先使用商购可得的蛋白质浓缩过滤器，例如Amicon或Millipore Pellicon超滤装置浓缩来自此类表达系统的上清液。蛋白酶抑制剂例如PMSF可以包括在任何前述步骤中，以抑制蛋白酶解，并且可以包括抗生素以预防外来污染物的生长。
由细胞制备的抗体、其抗原结合片段或试剂组合物可以使用例如羟磷灰石层析、凝胶电泳、透析和亲和层析来纯化，其中亲和层析是优选的纯化技术。蛋白A作为亲和配体的适用性取决于抗体中存在的任何免疫球蛋白Fc结构域的种类和同种型。蛋白A可以用于纯化基于人重链的抗体(Lindmark等人，J.Immunol.Meth.62:1-13(1983))。推荐蛋白G用于所有小鼠同种型和人γ3(Guss等人，EMBO J.5:15671575(1986))。亲和配体与之附着的基质最经常是琼脂糖，但其它基质也是可用的。与用琼脂糖可以实现的相比，机械上稳定的基质例如可控孔度玻璃或聚(苯乙烯二乙烯基)苯允许更快的流速和更短的处理时间。当抗体包含CH3结构域时，Bakerbond ABX.TM.树脂(J.T.Baker，Phillipsburg，N.J.)可用于纯化。取决于待回收的抗体，用于蛋白质纯化的其它技术也是可用的，所述技术例如在离子交换柱上的分级、乙醇沉淀、反相HPLC、在硅石上的色谱、在肝素SEPHAROSETM上的色谱、在阴离子或阳离子交换树脂上的色谱(例如聚天冬氨酸柱)、色谱聚焦、SDS-PAGE和硫酸铵沉淀。
在任何初步纯化步骤之后，包含感兴趣的抗体、其抗原结合片段或试剂和污染物的混合物可以经受使用pH为约2.5-4.5的洗脱缓冲液的低pH疏水性相互作用层析，并且可以在低盐浓度(例如，约0-0.25M盐)下进行。
药物制剂、给药和施用途径
本技术提供了抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂和相关组合物，其可以用于例如从体内消除表达CCR8的细胞，以及例如用于鉴定和定量组织样品中表达CCR8的细胞的数目。
本技术的治疗方法和组合物可以被称为“基于CCR8的”，以便指示这些疗法可以改变不期望的或有毒的表达CCR8的细胞例如淋巴瘤或自身免疫B淋巴细胞的相对或绝对数目。
控制患者中不期望的表达CCR8的细胞的量的一种方法是通过提供包含一种或多种抗CCR8抗体的组合物，以例如引起针对表达CCR8的细胞的细胞毒性活性。
抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以在药物组合物中进行配制，所述药物组合物可用于各种目的，包括治疗疾病、病症或身体创伤。包含本文的一种或多种抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的药物组合物可以用于向有此需要的患者施用本文的药物组合物，并且根据技术的一个实施方案，提供了包括此类装置的试剂盒。此类装置和试剂盒可以设计用于本文的药物组合物的常规施用，包括自我施用。
抗体、其抗原结合片段或试剂的治疗制剂可以通过如下以冻干制剂或水溶液的形式制备用于贮存：将具有所需纯度的抗体、其抗原结合片段或试剂与任选地生理学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂混合(Remington’s Pharmaceutical Sciences第16版，Osol，A.编辑(1980))。可接受的载体、赋形剂或稳定剂在所采用的剂量和浓度下对接受者是无毒的，并且包括缓冲剂例如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(例如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六甲双铵；苯扎氯铵、苄索氯铵；苯酚、丁醇或苯甲醇；对羟基苯甲酸烷基酯，例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，例如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，例如EDTA；糖，例如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐抗衡离子，例如钠；金属络合物(例如，Zn-蛋白质络合物)；和/或非离子型表面活性剂例如TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。
本文的制剂还可以含有如对于待治疗的特定适应症必需的多于一种的活性化合物，优选具有并非彼此不利地影响的互补活性的那些活性化合物。此类分子适当地以对于预期目的有效的量以组合存在。
活性成分还可以被包埋在例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶囊中，例如分别在胶体药物递送系统(例如，脂质体、白蛋白微球体、微乳状液、纳米颗粒和纳米胶囊)或粗乳状液中的羟甲基纤维素或明胶-微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊。此类技术公开于Remington’s Pharmaceutical Sciences第16版，Osol，A.编辑(1980)中。
用于体内施用的制剂一般是无菌的。例如，这可以例如通过经由无菌过滤膜的过滤来完成。
可以制备缓释制剂。缓释制剂的合适实例包括含有抗体、其抗原结合片段或试剂的固体疏水性聚合物的半透性基质，所述基质是成形制品的形式，例如薄膜或微胶囊。持续释放基质的实例包括聚酯、水凝胶(例如，聚(2-羟乙基-甲基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇))、聚丙交酯(美国专利号3,773,919)、L-谷氨酸和γ乙基-L-谷氨酸酯的共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物例如Lupron(由乳酸-乙醇酸共聚物和乙酸亮丙瑞林构成的可注射微球体)和聚-D-(-)-3-羟基丁酸。虽然聚合物例如乙烯-乙酸乙烯酯和乳酸-乙醇酸允许超过100天的分子释放，但某些水凝胶释放蛋白质较短的时间段。当封装的抗体、其抗原结合片段或试剂长时间保留在体内时，它们可能由于暴露于在37℃下的湿度而变性或聚集，导致生物活性的丧失和免疫原性的可能改变。取决于所涉及的机制，可以设计用于稳定的合理策略。例如，如果发现聚集机制是通过巯基-二硫键互换的分子间S-S键形成，则可以通过修饰巯基残基、由酸性溶液冻干、控制含水量、使用适当的添加剂以及开发特异性聚合物基质组合物来实现稳定化。
对于治疗应用，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂以药学上可接受的剂型施用于哺乳动物例如人，所述剂型例如上文讨论的那些剂型，包括可以作为推注或通过在一段时间内的连续输注静脉内，或者通过肌内、腹膜内、脑脊髓内、皮下、关节内、滑膜内、鞘内、口服、局部或吸入途径施用于人。
对于疾病的预防或治疗，抗体、其抗原结合片段或试剂的适当剂量将取决于待治疗的疾病类型(如上文定义的)、疾病的严重程度和过程、施用抗体是用于预防还是治疗目的、先前的疗法、患者的临床病史和对抗体的应答以及主治医师的判断。抗体适当地一次或在一系列治疗中施用于患者。
取决于疾病的类型和严重程度，约1μg/kg至约50mg/kg(例如，0.1-20mg/kg)的抗体可以是用于施用于患者的初始候选剂量，无论是例如通过一次或多次分开施用还是通过连续输注。典型的每日或每周一次剂量的范围可以为约1μg/kg至约20mg/kg或更多，取决于上文提到的因素。对于在几天或更长时间内的重复施用，取决于状况，重复治疗直至出现疾病症状的所需压制。然而，其它剂量方案可能是有用的。这种疗法的进展很容易通过常规技术和测定包括例如放射照相成像进行监测。可以使用使用抗体来确定体液或组织中的CCR8水平的检测方法，以便优化患者对治疗性抗体的暴露。
在一些实施方案中，包含本文的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂(例如，干扰CCR8活性的mAb)的组合物作为单一疗法进行施用，并且在一些实施方案中，包含抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的组合物作为组合疗法的部分进行施用。在一些情况下，抗体、其抗原结合片段或试剂预防或治疗疾病的有效性可以通过以下得到改善：连续地或者与对于那些目的有效的另一种抗体、其抗原结合片段或试剂，例如用于治疗癌症或微生物感染的化学治疗药物组合施用抗体、其抗原结合片段或试剂。在其它情况下，抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以作用于增强细胞或使细胞对化学治疗性治疗敏感，因此允许在较低剂量下和伴随较低毒性的功效。除包含降低表达CCR8的细胞数目的抗体、其抗原结合片段或试剂的组合物施用之外，某些组合疗法还包括递送选自施用化学治疗剂、放射疗法、手术以及前述任何的组合的第二治疗方案。
此类其它试剂可以存在于待施用的组合物中或可以分开施用。另外，抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以适当地连续或者与其它药剂或模式组合施用，所述其它药剂或模式例如用于治疗癌症、感染等等的化学治疗药物或放射，或免疫抑制药物。
关于本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的研究和诊断，包括临床诊断用途
本文提供的是包含本文描述的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的诊断试剂。例如，本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以用于检测和/或纯化例如来自体液的CCR8或者在体液或组织中的细胞上表达的CCR8。本文还提供的是用于检测CCR8的方法。例如，方法可以包括使样品(例如，已知或疑似含有CCR8的生物样品)与本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂接触，并且如果样品含有CCR8，则检测到CCR8:抗CCR8复合物。本文还提供的是包含本文描述的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的试剂以及用于检测CCR8用于研究目的的方法。
抗CCR8抗体例如可以用于CCR8的诊断测定中，例如检测其在特定细胞、组织或体液中的存在。此类诊断方法可以用于例如过度增殖性疾病或病症的诊断中。因此，本文涵盖了临床诊断用途以及研究用途。
在一些实施方案中，抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂包含可检测标记物或标记。在一些实施方案中，抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂缀合至可检测标记物或标记。例如，对于研究和诊断应用，抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以用可检测部分进行标记。众多标记是可用的，其一般分组成下述范畴：
(a)放射性同位素，例如35S、14C、125I、3H和131I。可以使用例如Current Protocolsin Immunology，第1和2卷，Coligen等人，编辑Wiley-Interscience，New York，N.Y.，Pubs.(1991)中描述的技术，用放射性同位素标记抗体，并且可以使用闪烁计数来测量放射性。
(b)荧光标记例如稀土螯合物(铕螯合物)或荧光素及其衍生物、罗丹明及其衍生物、丹磺酰、丽丝胺、藻红蛋白、德克萨斯红和Brilliant VioletTM是可用的。例如，可以使用Current Protocols in Immunology，同上中公开的技术，将荧光标记缀合至抗体。荧光可以使用流式细胞仪、成像显微镜或荧光计进行定量。
(c)各种酶底物标签是可用的，并且美国专利号4,275,149提供了其中一些的综述。酶一般催化显色底物的化学改变，其可以使用各种技术进行测量。例如，酶可以催化底物的颜色变化，其可以通过分光光度法进行测量。可替代地，酶可以改变底物的荧光或化学发光。用于定量荧光变化的技术在上文进行描述。化学发光底物通过化学反应变得电子激发，然后可以发射可以测量(例如，使用chemilluminometer)的光或向荧光受体提供能量。酶促标记的实例包括萤光素酶(例如，萤火虫萤光素酶和细菌萤光素酶；美国专利号4,737,456)、萤光素、2,3-二氢酞嗪二酮、苹果酸脱氢酶、脲酶、过氧化物酶例如辣根过氧化物酶(HRPO)、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、溶菌酶、糖氧化酶(例如，葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶)、杂环氧化酶(例如尿酸酶和黄嘌呤氧化酶)、乳过氧化物酶、微过氧化物酶等等。用于将酶与抗体缀合的技术在O'Sullivan等人，Methodsfor the Preparation of Enzyme-Antibody Conjugates for use in EnzymeImmunoassay，in Methods in Enzym.(编辑J.Langone&H.Van Vunakis)，Academic press，New York，73:147-166(1981)中进行描述。
酶-底物组合的实例包括例如：
(i)具有过氧化氢酶作为底物的辣根过氧化物酶(HRP)，其中过氧化氢酶氧化染料前体(例如邻苯二胺(OPD)或3,3',5,5'-四甲基联苯胺盐酸盐(TMB))；
(ii)具有对硝基苯磷酸盐作为显色底物的碱性磷酸酶(AP)；以及(iii)具有显色底物的β-D-半乳糖苷酶(β-D-Gal)(例如，对硝基苯基-β-D-半乳糖苷酶)或荧光底物4-甲基伞形酮-β-D-半乳糖苷酶。
可以使用众多其它酶-底物组合(例如，美国专利号4,275,149和4,318,980，其各自通过引用并入本文)。
在某些情况下，标记与抗体、其抗原结合片段或试剂间接缀合。技术人员将知道用于实现这点的各种技术。例如，抗体可以与生物素缀合，并且上文提到的三大广泛范畴的标记中的任一种可以与抗生物素蛋白缀合，或反之亦然。生物素选择性结合抗生物素蛋白，并且因此标记可以以这种间接方式与抗体缀合。可替代地，为了实现标记与抗体的间接缀合，将抗体与小的半抗原(例如，地高辛)缀合，并且将上文提到的不同类型的标记之一与抗半抗原抗体(例如，抗地高辛抗体)缀合。因此，可以实现标记与抗体的间接缀合。
在一些实施方案中，抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂无需是标记的，并且可以例如使用与抗CCR8抗体结合的标记抗体来检测其存在。
在一些实施方案中，本文的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂固定到固体支持物或基底上。在一些实施方案中，本文的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂非扩散地固定到固体支持物上(例如，抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂并不脱离固体支持物)。固体支持物或基底可以是抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以与之直接或间接附着的任何物理上可分离的固体，包括但不限于通过微阵列和孔提供的表面，以及颗粒例如珠(例如，顺磁珠、磁珠、微珠、纳米珠)、微粒和纳米颗粒。固体支持物还可以包括例如芯片、柱、光学纤维、擦拭物、过滤器(例如，平坦表面过滤器)、一种或多种毛细管、玻璃和改性或功能化玻璃(例如，可控孔度玻璃(CPG))、石英、云母、重氮化膜(纸或尼龙)、聚甲醛、纤维素、乙酸纤维素、纸、陶瓷、金属、准金属、半导体材料、量子点、涂层珠或颗粒、其它色谱材料、磁性颗粒；塑料(包括丙烯酸树脂、聚苯乙烯、苯乙烯或其它材料的共聚物、聚丁烯、聚氨酯、TEFLONTM、聚乙烯、聚丙烯、聚酰胺、聚酯、聚偏二氟乙烯(PVDF)等等)，多糖，尼龙或硝酸纤维素，树脂，硅石或基于硅石的材料包括硅、硅胶和改性硅， 碳，金属(例如，钢、金、银、铝、硅和铜)，无机玻璃，导电聚合物(包括聚合物例如聚吡咯和聚吲哚)；微米或纳米结构表面，例如核酸平铺阵列、纳米管、纳米线或纳米颗粒装饰表面；或者多孔表面或凝胶，例如甲基丙烯酸酯、丙烯酰胺、糖聚合物、纤维素、硅酸盐或者其它纤维状或线状聚合物。在一些实施方案中，固体支持物或基底可以使用具有任何数目的材料的被动或化学衍生涂层进行涂布，所述材料包括聚合物，例如右旋糖酐、丙烯酰胺、明胶或琼脂糖。珠和/或颗粒可以是自由的或彼此连接的(例如，烧结的)。在一些实施方案中，固体支持物或基底可以是颗粒的集合。在一些实施方案中，颗粒可以包含硅石，且硅石可以包含二氧化硅。在一些实施方案中，硅石可以是多孔的，并且在某些实施方案中，硅石可以是无孔的。在一些实施方案中，颗粒进一步包含对颗粒赋予顺磁性质的试剂。在某些实施方案中，试剂包含金属，并且在某些实施方案中，试剂是金属氧化物(例如，铁或氧化铁，其中氧化铁含有Fe2+和Fe3+的混合物)。抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以通过共价键或通过非共价相互作用连接至固体支持物，并且可以直接或间接(例如，经由中间试剂，例如间隔物分子或生物素)连接至固体支持物。
本文提供的抗体、其抗原结合片段或试剂可以用于任何已知的测定方法，例如流式细胞术、免疫组织化学、免疫荧光、质谱流式细胞术(例如，Cytof仪器)、竞争性结合测定、直接和间接夹心法测定和免疫沉淀测定。Zola，Monoclonal Antibodies:A Manual ofTechniques，第147-158页(CRC Press，Inc.1987)。
流式细胞术和质谱流式细胞术测定一般涉及单一第一抗体的使用，以特异性鉴定在个别细胞的分散悬浮液的表面上表达的靶分子的存在。分散的细胞通常得自生物流体样品例如血液，但也可以得自由固体组织样品例如脾或肿瘤活组织检查制备的单细胞分散体。第一抗体可以直接缀合至可检测部分例如荧光团，例如用于流式细胞术的藻红蛋白或用于质谱流式细胞术的重金属螯合物。可替代地，第一抗体可以是未标记的或用不可检测的标签如生物素标记的，然后通过特异性识别第一抗体本身或第一抗体上的标签的可检测标记的第二抗体来检测第一抗体。然后在能够进行单细胞检测的仪器(例如流式细胞仪、质谱流式细胞仪、荧光显微镜或明视野光学显微镜)中，对标记的细胞进行分析，以在分散的群体或组织样品中鉴定表达由第一抗体识别的靶的那些个别细胞。流式细胞术原理的技术基础和实际应用的详细描述可以在例如Shapiro，Practical Flow Cytometry，第4版，Wiley，2003中找到。
夹心测定涉及两种抗体的使用，所述抗体各自能够结合所检测的蛋白质的不同免疫原性部分或表位。在夹心测定中，测试样品分析物由固定到固体支持物上的第一抗体结合，并且其后第二抗体与分析物结合，因此形成不溶性的三部分复合物。参见例如，美国专利号4,376,110。第二抗体本身可以用可检测部分进行标记(直接夹心测定)，或者可以使用由可检测部分标记的抗免疫球蛋白抗体进行测量(间接夹心测定)。例如，一种类型的夹心测定是ELISA测定，在这种情况下，可检测部分是酶。在细胞ELISA中，可以使用首先附着到支持物并识别不同细胞表面蛋白的抗体，将靶细胞群体附着到固体支持物。这些第一抗体将细胞捕获到支持物。然后可以通过将抗CCR8抗体加入捕获的细胞中，并且检测附着至细胞的CCR8抗体的量，来检测在细胞的表面上的CCR8。在某些情况下，可以使用固定且渗透化的细胞，并且在此类情况下，可以检测表面CCR8和细胞内CCR8。
对于免疫组织化学，血液或组织样品可以是新鲜的或冷冻的，或者可以包埋在石蜡中并例如用防腐剂例如福尔马林固定。
本文的抗体、其抗原结合片段或试剂也可以用于体内诊断测定。一般地，抗体用放射性核素(例如111In、99Tc、14C、131I、125I、3H、32P或35S)进行标记，使得可以使用免疫闪烁照相术定位结合的靶分子。
免疫细胞中CCR8的检测
本文提供的是用于检测免疫细胞中的CCR8的抗体、其抗原结合片段、或试剂和方法。免疫细胞中CCR8的检测可以指免疫细胞的表面上的检测(例如，通过表面染色)和/或免疫细胞内部的检测(例如，通过细胞内染色)。在一些实施方案中，提供了用于检测免疫细胞的异质群体中的CCR8的抗体、其抗原结合片段或试剂和方法。免疫细胞的异质群体可以包含两种或更多种类型的免疫细胞。例如，免疫细胞的异质群体可以包含两种或更多种B细胞、浆细胞样树突状细胞(pDC)、淋巴细胞、白细胞、T细胞、单核细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、髓样树突状细胞(mDC)、先天淋巴样细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、天然杀伤细胞等等。在一些实施方案中，免疫细胞的异质群体包含外周血单核细胞(PBMC)，其可以包括例如T细胞、B细胞、天然杀伤细胞和单核细胞。
一般地，使细胞与本文描述的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂接触(例如，在如实施例中描述的流式细胞术测定中；或者任何合适的蛋白质或细胞检测测定)。在一些实施方案中，CCR8通过本文描述的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，在某些免疫细胞中以显著水平检测到。CCR8可以通过本文描述的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，在某些免疫细胞中以显著水平检测到，而在其它免疫细胞中并未显著检测到。某些免疫细胞中的CCR8检测水平可以根据某些因素而变，所述因素例如检测测定的类型、检测试剂的类型(例如染料的类型)、抗体浓度、供体细胞变异性等等。
在任何实施方案的一些中，本文提供的任何抗体或其抗原结合片段可以用于通过测量基因表达水平和细胞蛋白的单细胞表征中。在此类已知的适合于与本文描述的抗体或其抗原结合片段整合的单细胞测序平台中有Drop-seq方法，包括但不限于微流体、基于板的或微孔、Seq-WellTM方法和基本方案的适应和InDropTM方法。
在另一个实施方案中，适合于与本文描述的抗体或其抗原结合片段整合的单细胞测序平台是在Chromium控制器或专用Chromium单细胞控制器上运行的10x基因组学单细胞3’溶液或单细胞V(D)J溶液。其它合适的测序方法包括Wafergen iCell8TM方法、Microwell-seq方法、Fluidigm CITM方法和等价的单细胞产品。与本文描述的抗体或其抗原结合片段一起使用的另外其它已知的测序方案包括BD ResolveTM单细胞分析平台和ddSeq(来自用于ddSEQTM系统的Bio-/>SureCellTM WTA 3'Library Prep Kit，2017，出版号1070-2016-014-B，Illumina Inc.，Bio-Rad Laboratories，Inc.)。在另外其它实施方案中，本文描述的抗体或其抗原结合片段可与基于组合索引的方法(sci-RNA-seqTM方法或SPLiT-seqTM方法)和空间转录组学或可比较的空间分辨测序方法一起使用。本文描述的方法和组合物还可以用作关于标准索引分选(FACS)和基于mRNA测序的方法的附加信息层。
在任何实施方案的一些中，本文描述的任何抗体或其抗原结合片段可以用于检测本文描述的各种核酸、蛋白质、靶、寡核苷酸、扩增产物和条形码的存在、不存在或量。
在任何实施方案的一些中，检测包括可检测部分与抗体或其抗原结合片段的杂交。在任何实施方案的一些中，使样品与第二抗体接触。在任何实施方案的一些中，第二抗体是包含可检测部分的抗体。在任何实施方案的一些中，可检测部分包含寡核苷酸。在任何实施方案的一些中，可检测部分包含荧光标记。在任何实施方案的一些中，测量包括测序。在任何实施方案的一些中，可检测部分包含免疫荧光。在任何实施方案的一些中，样品是福尔马林固定的石蜡包埋的样品。在任何实施方案的一些中，样品包含细胞。在任何实施方案的一些中，样品包含组织样品。
以显著水平的CCR8的检测可以指在流式细胞术测定中测量的特定信噪(S:N)比(例如，阈值或范围)。
在一些实施方案中，CCR8在免疫细胞(例如，淋巴细胞)中以显著水平检测到。
掺入本文提供的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的试剂盒
本文的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以在试剂盒中提供，所述试剂盒例如以预定量的试剂与使用说明书(例如，用于进行诊断测定的说明书；用于进行实验室测定的说明书)的包装组合。在一些实施方案中，试剂盒是配置为检测样品(例如，生物样品)中的CCR8的诊断试剂盒。当抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂用荧光团进行标记时，试剂盒可以包括相同的同种型阴性对照无关抗体，以控制抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的非特异性结合。当抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂用酶进行标记时，试剂盒可以包括由酶所需的底物和辅因子(例如，提供可检测的发色团或荧光团的底物前体)。可以包括另外的添加剂，例如稳定剂、缓冲液(例如，阻断缓冲液或裂解缓冲液)等等。各种试剂的相对量可以广泛地变化，以提供基本上优化测定灵敏度的试剂溶液中的浓度。在某些情况下，试剂可以作为干粉(例如，冻干粉末)提供，包括在溶解时将提供具有适当浓度的试剂溶液的赋形剂。
制造物品
在本技术的另一个方面，提供了含有可用于治疗或诊断本文描述的病症的材料的制造物品。制造物品可以包括容器和标签。合适的容器包括例如瓶子、小瓶、注射器和试管。容器可以由各种材料例如玻璃或塑料形成。容器可以容纳有效治疗状况的组合物，并且可以具有无菌访问口(例如容器可以是静脉内溶液袋或具有可被皮下注射针刺穿的塞子的小瓶)。组合物中的活性抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂可以是抗CCR8抗体。在容器上或与容器相关的标签指示了组合物用于治疗或诊断选择的状况。制造物品可以进一步包括第二容器，其包含药学上可接受的缓冲液，例如磷酸盐缓冲盐水、林格氏溶液和右旋糖溶液；并且可以进一步包括从商业和用户的角度来看期望的其它材料，包括其它缓冲剂、稀释剂、过滤器、针、注射器和包装插页连同使用说明书。
本文使用的某些术语
“受体人构架”一般指包含衍生自人免疫球蛋白构架或人共有构架的重链可变结构域(VH)构架或轻链可变结构域(VL)构架的氨基酸序列的构架，如本文定义的。“衍生自”人免疫球蛋白构架或人共有构架的受体人构架可以包含其相同的氨基酸序列，或者它可以含有氨基酸序列变化。在一些实施方案中，构架氨基酸变化的数目为10个或更少、9个或更少、8个或更少、7个或更少、6个或更少、5个或更少、4个或更少、3个或更少、或者2个或更少。在一些实施方案中，VH和/或VL受体人构架在序列中与VH和/或VL人免疫球蛋白构架氨基酸序列或人共有构架氨基酸序列相同。
“构架”或“FR”一般指除高变区(HVR)残基外的可变结构域残基。可变结构域的FR一般由四个FR结构域组成：FR1；FR2；FR3；和FR4。相应地，HVR和FR序列一般以下述顺序在VH(或VL)中出现：FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。
“人共有构架”一般指代表人免疫球蛋白VL或VH构架序列的选择中最常出现的氨基酸残基的构架。一般地，人免疫球蛋白VL或VH序列的选择来自可变结构域序列的亚组。一般地，序列亚组是如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第五版，NIH Publication 91-3242，Bethesda Md.(1991)，第1-3卷中的亚组。在一些实施方案中，对于VL，亚组是如Kabat等人，同上中的亚组κI。在一些实施方案中，对于VH，亚组是如Kabat等人，同上中的亚组III。
术语“高变区”或“HVR”一般指抗体可变结构域中的每个区域，其在序列中是高变的和/或形成结构上限定的环(“高变环”)。一般地，天然四链抗体包含六个HVR；VH中的3个(H1、H2、H3)和VL中的3个(L1、L2、L3)。HVR一般包含来自高变环和/或“互补决定区”(CDR)的氨基酸残基，后者具有最高的序列变异性和/或涉及抗原识别。
给定CDR或FR的精确氨基酸序列边界可以使用许多众所周知的方案容易地确定，所述方案包括以下中描述的那些方案：Kabat等人(1991)，“Sequences of Proteins ofImmunological Interest”，第5版Public Health Service，National Institutes ofHealth，Bethesda，MD(“Kabat”编号方案)，Al-Lazikani等人，(1997)JMB 273,927-948(“Chothia”编号方案)，MacCallum等人，J.Mol.Biol.262:732-745(1996)，“Antibody-antigen interactions:Contact analysis and binding site topography,”J.Mol.Biol.262，732-745,”(“接触”编号方案)，Martin等人，Proc.Natl.Acad.Sci.，86:9268-9272(1989)(“AbM”编号方案)，Lefranc MP等人，“IMGT unique numbering forimmunoglobulin and T cell receptor variabledomains and Ig superfamily V-likedomains,”Dev Comp Immunol，2003年1月；27(1):55-77(“IMGT”编号方案)，以及HoneggerA和Plückthun A，“Yet another numbering scheme for immunoglobulinvariabledomains:an automatic modeling and analysis tool,”J Mol Biol，2001年6月8日；309(3):657-70,(“Aho”编号方案)。
给定CDR或FR的边界可以取决于用于鉴定的方案而变。例如，Kabat方案基于结构比对，而Chothia方案基于结构信息。关于Kabat和Chothia方案两者的编号均基于最常见的抗体区域序列长度，其中插入由插入字母例如“30a”容纳，并且缺失在一些抗体中出现。两种方案将某些插入和缺失(“indels”)置于不同的位置处，导致不同的编号。接触方案基于复杂晶体结构的分析，并且在许多方面与Chothia编号方案相似。
下表4列出了如分别通过Kabat、Chothia和接触方案鉴定的CDRH1、CDRH2、CDRH3以及CDRL1、CDRL2和CDRL3的示例性位置边界。对于CDRH1，使用Kabat和Chothia编号方案列出残基编号。FR定位于CDR之间，例如，其中FRH1定位于CDRH1和CDRH2之间，等等。应注意，因为所示的Kabat编号方案将插入置于H35A和H35B处，所以当使用所示的Kabat编号约定进行编号时，取决于环的长度，Chothia CDRH1环的端部在H32和H34之间变化。
表4
CDR Kabat Chothia AbM 接触
CDRH1(Kabat编号1) H31--H35B H26--H32..34 H26--H35B H30--H35B
CDRH1(Chothia编号2) H31--H35 H26--H32 H26--H35 H30--H35
CDRH2 H50--H65 H52--H56 H50--H58 H47--H58
CDRH3 H95--H102 H95--H102 H95--H102 H93--H101
CDRL1 L24--L34 L24--L34 L24--L34 L30--L36
CDRL2 L50--L56 L50--L56 L50--L56 L46--L55
CDRL3 L89--L97 L89--L97 L89--L97 L89--L96
1-Kabat等人(1991)，“Sequences of Proteins of Immunological Interest”，第5版Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD
2-Al-Lazikani等人，(1997)JMB 273,927-948
CDR还包含“特异性决定残基”或“SDR”，其是接触特定抗原的残基。除非另有说明，否则HVR残基和可变结构域中的其它残基(例如，FR残基)在本文中根据Kabat等人，同上进行编号。
术语“可变区”或“可变结构域”一般指涉及抗体与抗原结合的抗体重链或轻链的结构域。天然抗体的重链和轻链的可变结构域(分别为VH和VL)一般具有相似的结构，其中每个结构域包含四个保守构架区(FR)和三个高变区(HVR)。参见例如，Kindt等人KubyImmunology，第6版，W.H.Freeman and Co.，第91页(2007)。单个VH或VL结构域可能足以赋予抗原结合特异性。此外，可以分别使用来自结合抗原的抗体的VH或VL结构域筛选互补的VL或VH结构域的文库，来分离结合特定抗原的抗体。参见例如，Portolano等人，J.Immunol.150:880-887(1993)；Clarkson等人，Nature 352:624-628(1991)。
“亲和力”一般指分子(例如，抗体)的单个结合位点与其结合配偶体(例如，抗原)之间的非共价相互作用的合计强度。除非另有说明，否则“结合亲和力”指固有结合亲和力，其反映了结合对成员(例如抗体和抗原)之间的1:1相互作用。分子X对于其配偶体Y的亲和力一般可以由解离常数(Kd)表示。亲和力可以通过本领域已知的常见方法，包括本文描述的那些方法来测量。用于测量结合亲和力的具体说明性和示例性实施方案在本文其它地方进行描述。在一些情况下，本文的抗体以高亲和力，例如不多于约1x10-7M；优选不多于约1x10-8M；以及优选不多于约5x10-9M的Kd值结合靶(例如CCR8)。
“亲和力成熟的”抗体一般指与不具有此类改变的亲本抗体相比，在一个或多个高变区(HVR)中具有一种或多种改变的抗体。优选地，此类改变导致抗体对于其靶抗原改善的亲和力。
术语“抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂”一般指这样的分子，其是或包含一种或多种抗CCR8抗体、CCR8结合抗体片段、或CCR8结合抗体衍生物。
术语“抗CCR8抗体”和“结合CCR8的抗体”一般指这样的抗体，其能够以足够的亲和力和/或特异性结合CCR8，使得该抗体可用作在靶向CCR8方面的研究工具、诊断试剂和/或治疗剂。在一些实施方案中，抗CCR8抗体(或其抗原结合片段)与无关的非CCR8蛋白的结合程度是抗体与CCR8的结合的小于约10％，如例如通过放射性免疫测定(RIA)或通过Scatchard分析或通过表面等离子体共振如例如Biacore测量的。在某些实施方案中，结合CCR8的抗体具有0.1μM、100nM、10nM、1nM、0.1nM、0.01nM或0.001nM(例如10-7M或更少，例如10-7M至10-13M)的解离常数(kD)。在某些实施方案中，抗CCR8抗体结合在来自不同物种的CCR8中保守的CCR8表位。
本文中的术语“抗体”以最广泛的含义使用，并且包括多克隆和单克隆抗体，包括完整抗体和功能性(抗原结合)抗体片段，包括片段抗原结合(Fab)片段、F(ab')2片段、Fab'片段、Fv片段、重组IgG(rIgG)片段、能够特异性结合抗原的可变重链(VH)区、单链抗体片段包括单链可变片段(scFv)和单结构域抗体(例如，sdAb、sdFv、纳米抗体)片段。该术语涵盖了免疫球蛋白的遗传改造和/或在其它方面修饰的形式，例如细胞内抗体、肽体、嵌合抗体、全人抗体、人源化抗体和异源缀合物抗体、多特异性抗体例如双特异性抗体、双抗体、三抗体和四抗体、串联双SCFv、串联三SCFV。除非另有说明，否则术语“抗体”应该理解为涵盖其功能性抗体片段。该术语还涵盖完整或全长抗体，包括任何类别或亚类的抗体，包括IgG及其亚类、IgM、IgE、IgA和IgD。
“抗体衍生物”一般指除完整抗体外的分子，其包含衍生自完整抗体(或其抗原结合片段)的一部分，并且结合完整抗体(或其抗原结合片段)与之结合的抗原。抗体衍生物的实例包括但不限于单链可变片段(scFv)、双抗体、三抗体等等，包含多重抗原结合抗体片段、单链可变片段、双抗体、三抗体等等的适体。
“抗体片段”或“抗原结合抗体片段”一般指除完整抗体外的分子，其包含完整抗体的一部分，其结合完整抗体与之结合的抗原。抗体片段的实例包括但不限于Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2和由抗体片段形成的多特异性抗体。
术语“全长抗体”、“完整抗体”和“全抗体”在本文中可互换使用，以指具有与天然抗体结构基本上相似的结构或具有含有如本文定义的Fc区的重链的抗体。
术语“Fc区”一般指含有恒定区的至少一部分的免疫球蛋白重链的C末端区域。该术语包括天然序列Fc区和变体Fc区。在一个实施方案中，人IgG重链Fc区从Cys226或Pro230延伸到重链的羧基末端。然而，Fc区的C末端赖氨酸(Lys447)可能存在或可能不存在。除非本文另有说明，否则Fc区或恒定区中的氨基酸残基的编号是根据EU编号系统，也称为EU索引，如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版PublicHealth Service，National Institutes of Health，Bethesda，Md.，1991中描述的。
结合与参考抗体(例如，结合CCR8的抗体)“相同的表位的抗体”一般指在竞争测定中将参考抗体与其抗原的结合阻断50％或更多的抗体，并且相反地，参考抗体在竞争测定中将抗体与其抗原的结合阻断50％或更多。
术语“嵌合”抗体一般指这样的抗体，其中重链和/或轻链的一部分衍生自特定来源或物种，而重链和/或轻链的剩余部分衍生自不同来源或物种。
“人抗体”一般指这样的抗体，其具有与通过人或人细胞产生的或者衍生自利用人抗体储库或其它人抗体编码序列的非人来源的抗体相对应的氨基酸序列。人抗体的这一定义明确排除包含非人抗原结合残基的“人源化”抗体。
“人源化”抗体一般指包含来自非人HVR的氨基酸残基和来自人FR的氨基酸残基的嵌合抗体。在某些实施方案中，人源化抗体将包含至少一个、且通常为两个可变结构域的基本上全部，其中HVR(例如，CDR)的全部或基本上全部对应于非人抗体的那些，并且FR的全部或基本上全部对应于人抗体的那些。人源化抗体任选地可以包含衍生自人抗体的抗体恒定区的至少一部分。在一些实施方案中，当与受体构架区由其衍生的抗体比对时，人源化抗体(或其抗原结合片段或衍生物)包括在所需位置处的一个或多个氨基酸取代(或缺失或插入)。在一些此类实施方案中，在人(或其它)或其它FR中的特定位置处取代(或插入或缺失)的氨基酸残基对应于在亲本抗体(即，CDR或HVR由其衍生的非人抗体)中的相应位置处的氨基酸残基。抗体例如非人抗体的“人源化形式”指已经历人源化的抗体。
术语“抗体药物缀合物”(ADC)或“免疫缀合物”一般指特定种类的试剂-药物缀合物。此处，“试剂-药物缀合物”是缀合至一种或多种异源分子包括但不限于细胞毒素剂的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂(例如，抗CCR8抗体或其CCR8结合片段或衍生物)。
术语“细胞毒素剂”一般指抑制或阻止细胞功能和/或引起细胞死亡或破坏的物质。细胞毒素剂包括但不限于放射性同位素(例如，At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212和Lu的放射性同位素)；化学治疗剂或药物(例如，氨甲蝶呤、阿霉素、长春花生物碱(长春新碱、长春碱、依托泊苷)、多柔比星、美法仑、丝裂霉素C、苯丁酸氮芥、柔红霉素或其它嵌入剂)；生长抑制剂；酶及其片段，例如核酸分解酶；抗生素；毒素例如细菌、真菌、植物或动物起源的小分子毒素或酶促活性毒素，包括其片段和/或变体；以及下文公开的各种抗肿瘤剂或抗癌剂。
“诊断试剂”一般指用于进行诊断测定的化合物，例如靶特异性抗体(或其抗原结合)。
“效应子功能”一般指可归于抗体的Fc区的那些生物活性，其随抗体同种型而变。抗体效应子功能的实例包括：C1q结合和补体依赖性细胞毒性(CDC)；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)；吞噬作用；细胞表面受体(例如B细胞受体)的下调；和B细胞激活。
试剂例如药物制剂的“有效量”一般指在必要的剂量和时间段下有效实现所需的治疗或预防结果的量。
术语“表位”一般指抗原分子上抗体与之结合的特定位点。
术语“宿主细胞”、“宿主细胞系”和“宿主细胞培养物”可互换使用，并且一般指外源核酸已引入其内的细胞，包括此类细胞的后代。宿主细胞包括“转化体”和“转化的细胞”，其包括初级转化的细胞和由其衍生的后代，而不考虑传代次数。后代在核酸含量方面可能与亲本细胞并不完全相同，但可能含有突变。本文中包括具有与最初转化的细胞中筛选或选择的相同功能或生物活性的突变体后代。
“兔抗体”一般指具有对应于由兔或兔细胞产生的抗体的氨基酸序列的抗体，或者衍生自利用兔抗体储库或其它兔抗体编码序列的非兔来源的抗体。
“免疫缀合物”一般指缀合至一种或多种异源分子包括但不限于细胞毒素剂的抗体(或其抗原结合片段或衍生物)。免疫缀合物等价于术语“抗体药物缀合物”(ADC)。
“个体”或“患者”或“受试者”一般是哺乳动物。哺乳动物包括但不限于家养动物(例如牛、羊、猫、犬和马)、灵长类动物(例如人和非人灵长类动物如猴)、兔和啮齿类动物(例如小鼠和大鼠)。在某些实施方案中，个体或受试者是人。
“分离的”分子(例如，核酸、抗体)一般指这样的分子，其已与其原始环境(例如，如果它是天然存在的，则为天然环境，或者如果是外源表达的，则为宿主细胞)的组分分开，并且因此通过人为干预(例如“通过人工”)与其原始环境改变。在一些实施方案中，例如，将抗体纯化至大于95％或99％的纯度，如通过例如电泳(例如，SDS-PAGE、等电聚焦(IEF)、毛细管电泳)或色谱(例如，离子交换或反相HPLC)确定的。分离的核酸可以指通常含有核酸分子的细胞中含有的核酸分子，但该核酸分子在染色体外或在不同于其天然染色体位置的染色体位置处存在。在一些实施方案中，分离的核酸可以提供有比来源样品中存在的组分的量更少的非核酸组分(例如，蛋白质、脂质)。包含分离的核酸的组合物可以约50％至大于99％不含非核酸组分。包含分离的核酸的组合物可以约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或大于99％不含非核酸组分。
“编码抗CCR8抗体的分离的核酸”或“编码抗CCR8抗体的分离的多核苷酸”一般指编码抗体重链和轻链(或其片段)的一种或多种核酸分子，包括单一载体或分开载体中的此类核酸分子，以及在重组宿主细胞中的一个或多个位置处存在的此类核酸分子。
术语“CCR8”一般指起因于细胞中的CCR8前体蛋白加工的任何天然的、成熟的CCR8。除非另有说明，否则该术语包括来自任何脊椎动物来源，包括哺乳动物例如灵长类动物(例如人和食蟹猴或恒河猴)和啮齿类动物(例如小鼠和大鼠)的CCR8。该术语还包括天然存在的CCR8变体，例如剪接变体或等位基因变体。示例性人CCR8蛋白的氨基酸序列显示于图1中(SEQ ID NO:31)。
术语“CCR8阳性细胞”一般指在其表面或细胞内膜或细胞器(例如，内体、ER、高尔基体、溶酶体等等)上表达CCR8的任何细胞。一些细胞，例如免疫细胞(例如淋巴细胞)，显示出CCR8表达的上调。
术语“单克隆抗体”一般指从基本上同质的抗体群体中获得的抗体，即，构成该群体的各个抗体是相同的(如在Ig重链和/或轻链氨基酸序列水平下评价的)和/或结合相同的表位，除了例如含有天然发生的突变或在单克隆抗体制剂的生产过程中出现的突变的可能变体抗体之外，此类变体一般以少量存在。与通常包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂形成对比，单克隆抗体制剂的每种单克隆抗体针对抗原上的单个决定簇。因此，修饰语“单克隆的”指示抗体的特征是从基本上同质的抗体群体中获得，并且不应被解释为需要通过任何特定方法的抗体产生。例如，待按照本技术使用的单克隆抗体可以通过各种技术进行制备，所述技术包括但不限于杂交瘤方法、重组DNA方法、噬菌体展示方法和利用含有人免疫球蛋白基因座的全部或部分的转基因动物的方法，本文描述了用于制备单克隆抗体的此类方法和其它示例方法。
术语“包装插页”一般指照例包括在治疗产品的商业包装中的说明书，其含有关于适应症、用法、剂量、施用、组合疗法、禁忌症和/或关于此类治疗产品的使用的警告的信息。
关于参考多肽序列的“百分比(％)氨基酸序列同一性”一般指在比对序列并在必要时引入缺口，以实现最大百分比的序列同一性，并且不考虑任何保守取代作为序列同一性的部分后，在候选序列中与参考多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比。用于确定百分比氨基酸序列同一性的目的的比对可以以在本领域的技术范围内的各种方式来实现，例如使用可公开获得的计算机软件如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可以确定用于比对序列的适当参数，包括在待比较的序列的全长上实现最大比对所需的任何算法。
术语“药物组合物”一般指这样的制剂，其以这样的形式以便允许其中包含的活性成分的生物活性是有效的，并且不含有对制剂将施用于其的受试者具有不可接受的毒性的另外组分。
“药学上可接受的载体”一般指药物制剂中除活性成分外的对受试者无毒的成分。药学上可接受的载体包括但不限于缓冲剂、赋形剂、稳定剂或防腐剂。
如本文使用的，“治疗(treatment)”(及其语法变体，例如“治疗(treat)”或“治疗(treating)”)一般指在改变待治疗的个体的自然过程的尝试中的临床干预，并且可以对于预防或在临床病理学的过程期间进行。期望的治疗效应包括但不限于预防疾病的发生或复发、症状的减轻、疾病的任何直接或间接病理后果的缩减、预防转移、减少疾病进展速率、疾病状态的改善或缓和、以及缓解或改善的预后。在一些实施方案中，本文的抗体用于延迟疾病的发展或减缓疾病的进展。
术语“载体”一般指能够增殖它与之连接的另一种核酸的核酸分子。该术语包括作为自我复制核酸结构的载体以及掺入它已引入其内的宿主细胞的基因组内的载体。某些载体能够指导它们与之可操作地连接的核酸的表达。此类载体在本文中被称为“表达载体”。
示例性实施方案
按照本文公开的主题提供的示例性实施方案包括但不限于权利要求和下述实施方案：
1.一种特异性结合CCR8的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述分离的抗体包含：
a)重链可变区，其包含：
(i)具有X1X2X3X4X5(SEQ ID NO:2)的序列的重链互补决定区1(CDRH1)，其中X1是S、G、Y、N、D、T或A，X2是Y、A或N，X3是H、A或V，X4是I、V或M，且X5是S、Y或N；
(ii)具有X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14X15X16X17KX19(SEQ ID NO:6)的序列的CDRH2，其中X1是V、R或E，X2是I或L，X3是W、R或Y，X4是G、T、P或S，X5是D、G或K，X6是G、P或S，X7是S、K、R、N或D，X8是N、T、K或无氨基酸，X9是Y、T或无氨基酸，X10是A、Y或无氨基酸，X11是K、T或Y，X12是T、Y或N，X13是Y或E，X14是N、A、I、K或V，X15是S、D或F，X16是A、L、S或K，X17是L、V或G，且X19是S、G或D；
(iii)具有X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12YY(SEQ ID NO:15)的序列的CDRH3，其中X1是G、M或D，X2是G、S或R，X3是T、I、L、E、A或D，X4是V、T、G、L或无氨基酸，X5是V、R、G、M、L或无氨基酸，X6是K、G、A、F、P、T或无氨基酸，X7是S、G、Y、F、T或P，X8是G、Y或D，X9是F、V、Y、A、R或S，X10是A、D或M，X11是Y、M或D，且X12是D或Y；和
b)轻链可变区，其包含：
(iv)具有X1X2SX4X5X6X7X8X9X10X11NTYLY(SEQ ID NO:18)的序列的轻链互补决定区1(CDRL1)，其中X1是Q、K或R，X2是A或S，X4是Q、E或K，X5是D、N或S，X6是I或L，X7是G、N、Y或L，X8是N、R、S或H，X9是W、R、Y或S，X10是L或N，且X11是S、N、A或G；
(v)具有X1X2X3X4X5X6X7(SEQ ID NO:19)的序列的CDRL2，其中X1是G、N或R，X2是T、A或M，X3是T、N、K或S，X4是N、S或T，X5是L或V，X6是A、Q或I，且X7是D、T、E或S；和
(vi)具有X1QX3X4X5X6PX8T(SEQ ID NO:22)的序列的CDRL3，其中X1是L、Q或M，X3是A或H，X4是Y、N或L，X5是S、D或E，X6是V、W、S或Y，且X8是L、W、F或Y。
2.实施方案1的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含：
(1)CDRH1，其具有SEQ ID NO:33、39、45、51、57、63、68、71和74中任一个的序列，或者与SEQ ID NO:33、39、45、51、57、63、68、71和74中任一个具有80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的序列；
(2)CDRH2，其具有SEQ ID NO:34、40、46、52、58、64、69、72、75、77和78中任一个的序列，或者与SEQ ID NO:34、40、46、52、58、64、69、72、75、77和78中任一个具有80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的序列；和
(3)CDRH3，其具有SEQ ID NO:35、41、47、53、59、65、70、73、76和79中任一个的序列，或者与SEQ ID NO:35、41、47、53、59、65、70、73、76和79中任一个具有80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的序列。
3.实施方案1或2的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含：
(1)CDRH1，其具有SEQ ID NO:33、39、45、51、57、63、68、71和74中任一个的序列，或者相对于SEQ ID NO:33、39、45、51、57、63、68、71和74中任一个的序列具有一个氨基酸取代的序列；
(2)CDRH2，其具有SEQ ID NO:34、40、46、52、58、64、69、72、75、77和78中任一个的序列，或者相对于SEQ ID NO:34、40、46、52、58、64、69、72、75、77和78中任一个的序列具有一个、两个或三个氨基酸取代的序列；和
(3)CDRH3，其具有SEQ ID NO:35、41、47、53、59、65、70、73、76和79中任一个的序列，或者相对于SEQ ID NO:35、41、47、53、59、65、70、73、76和79中任一个的序列具有一个或两个氨基酸取代的序列。
4.实施方案1至3中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其包含：
(1)具有SEQ ID NO:33、39、45、51、57、63、68、71和74中任一个的序列的CDRH1；
(2)具有SEQ ID NO:34、40、46、52、58、64、69、72、75、77和78中任一个的序列的CDRH2；和
(3)具有SEQ ID NO:35、41、47、53、59、65、70、73、76和79中任一个的序列的CDRH3。
5.实施方案1至4中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:33的序列的CDRH1、具有SEQ ID NO:34的序列的CDRH2和具有SEQ ID NO:35的序列的CDRH3。
6.实施方案1至4中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:33的序列的CDRH1、具有SEQ ID NO:40的序列的CDRH2和具有SEQ ID NO:35的序列的CDRH3。
7.实施方案1至4中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:39的序列的CDRH1、具有SEQ ID NO:46的序列的CDRH2和具有SEQ ID NO:35的序列的CDRH3。
8.实施方案1至4中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:45的序列的CDRH1、具有SEQ ID NO:52的序列的CDRH2和具有SEQ ID NO:41的序列的CDRH3。
9.实施方案1至4中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:51的序列的CDRH1、具有SEQ ID NO:58的序列的CDRH2和具有SEQ ID NO:47的序列的CDRH3。
10.实施方案1至4中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:57的序列的CDRH1、具有SEQ ID NO:64的序列的CDRH2和具有SEQ ID NO:53的序列的CDRH3。
11.实施方案1至4中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:63的序列的CDRH1、具有SEQ ID NO:69的序列的CDRH2和具有SEQ ID NO:59的序列的CDRH3。
12.实施方案1至4中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:68的序列的CDRH1、具有SEQ ID NO:72的序列的CDRH2和具有SEQ ID NO:65的序列的CDRH3。
13.实施方案1至4中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:71的序列的CDRH1、具有SEQ ID NO:75的序列的CDRH2和具有SEQ ID NO:70的序列的CDRH3。
14.实施方案1至4中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:74的序列的CDRH1、具有SEQ ID NO:77的序列的CDRH2和具有SEQ ID NO:73的序列的CDRH3。
15.实施方案1至4中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:71的序列的CDRH1、具有SEQ ID NO:78的序列的CDRH2和具有SEQ ID NO:76的序列的CDRH3。
16.实施方案1至4中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:71的序列的CDRH1、具有SEQ ID NO:77的序列的CDRH2和具有SEQ ID NO:79的序列的CDRH3。
17.实施方案1至16中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含：
(1)CDRL1，其具有SEQ ID NO:36、42、48、54和60中任一个的序列，或者与SEQ IDNO:36、42、48、54和60中任一个具有80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的序列；
(2)CDRL2，其具有SEQ ID NO:37、43、49、55、61和66中任一个的序列，或者与SEQID NO:37、43、49、55、61和66中任一个具有80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的序列；和
(3)CDRL3，其具有SEQ ID NO:38、44、50、56、62和67中任一个的序列，或者与SEQID NO:38、44、50、56、62和67中任一个具有80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的序列。
18.实施方案1或17的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含：
(1)CDRL1，其具有SEQ ID NO:36、42、48、54和60中任一个的序列，或者相对于SEQID NO:36、42、48、54和60中任一个的序列具有一个或两个氨基酸取代的序列；
(2)CDRL2，其具有SEQ ID NO:37、43、49、55、61和66中任一个的序列，或者相对于SEQ ID NO:37、43、49、55、61和66中任一个的序列具有一个氨基酸取代的序列；和
(3)CDRL3，其具有SEQ ID NO:38、44、50、56、62和67中任一个的序列，或者相对于SEQ ID NO:38、44、50、56、62和67中任一个的序列具有一个或两个氨基酸取代的序列。
19.实施方案1至18中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含：
(1)具有SEQ ID NO:36、42、48、54和60中任一个的序列的CDRL1；
(2)具有SEQ ID NO:37、43、49、55、61和66中任一个的序列的CDRL2；和
(3)具有SEQ ID NO:38、44、50、56、62和67中任一个的序列的CDRL3。
20.实施方案1至19中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:36的序列的CDRL1、具有SEQ ID NO:37的序列的CDRL2和具有SEQ ID NO:38的序列的CDRL3。
21.实施方案1至19中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:36的序列的CDRL1、具有SEQ ID NO:43的序列的CDRL2和具有SEQ ID NO:44的序列的CDRL3。
22.实施方案1至19中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:42的序列的CDRL1、具有SEQ ID NO:43的序列的CDRL2和具有SEQ ID NO:38的序列的CDRL3。
23.实施方案1至19中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:48的序列的CDRL1、具有SEQ ID NO:49的序列的CDRL2和具有SEQ ID NO:50的序列的CDRL3。
24.实施方案1至19中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:48的序列的CDRL1、具有SEQ ID NO:55的序列的CDRL2和具有SEQ ID NO:50的序列的CDRL3。
25.实施方案1至19中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:54的序列的CDRL1、具有SEQ ID NO:61的序列的CDRL2和具有SEQ ID NO:56的序列的CDRL3。
26.实施方案1至19中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:60的序列的CDRL1、具有SEQ ID NO:66的序列的CDRL2和具有SEQ ID NO:62的序列的CDRL3。
27.实施方案1至19中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:60的序列的CDRL1、具有SEQ ID NO:66的序列的CDRL2和具有SEQ ID NO:67的序列的CDRL3。
28.实施方案1至27中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含：
(1)CDRH1，其具有SEQ ID NO:33、39、45、51、57、63、68、71和74中任一个的序列，或者与SEQ ID NO:33、39、45、51、57、63、68、71和74中任一个具有80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的序列；
(2)CDRH2，其具有SEQ ID NO:34、40、46、52、58、64、69、72、75、77和78中任一个的序列，或者与SEQ ID NO:34、40、46、52、58、64、69、72、75、77和78中任一个具有80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的序列；
(3)CDRH3，其具有SEQ ID NO:35、41、47、53、59、65、70、73、76和79中任一个的序列，或者与SEQ ID NO:35、41、47、53、59、65、70、73、76和79中任一个具有80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的序列；
(4)CDRL1，其具有SEQ ID NO:36、42、48、54和60中任一个的序列，或者与SEQ IDNO:36、42、48、54和60中任一个具有80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的序列；
(5)CDRL2，其具有SEQ ID NO:37、43、49、55、61和66中任一个的序列，或者与SEQID NO:37、43、49、55、61和66中任一个具有80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的序列；和
(6)CDRL3，其具有SEQ ID NO:38、44、50、56、62和67中任一个的序列，或者与SEQID NO:38、44、50、56、62和67中任一个具有80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的序列。
29.实施方案1至28的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含：
(1)CDRH1，其具有SEQ ID NO:33、39、45、51、57、63、68、71和74中任一个的序列，或者相对于SEQ ID NO:33、39、45、51、57、63、68、71和74中任一个的序列具有一个氨基酸取代的序列；
(2)CDRH2，其具有SEQ ID NO:34、40、46、52、58、64、69、72、75、77和78中任一个的序列，或者相对于SEQ ID NO:34、40、46、52、58、64、69、72、75、77和78中任一个的序列具有一个、两个或三个氨基酸取代的序列；
(3)CDRH3，其具有SEQ ID NO:35、41、47、53、59、65、70、73、76和79中任一个的序列，或者相对于SEQ ID NO:35、41、47、53、59、65、70、73、76和79中任一个的序列具有一个或两个氨基酸取代的序列；
(4)CDRL1，其具有SEQ ID NO:36、42、48、54和60中任一个的序列，或者相对于SEQID NO:36、42、48、54和60中任一个的序列具有一个或两个氨基酸取代的序列；
(5)CDRL2，其具有SEQ ID NO:37、43、49、55、61和66中任一个的序列，或者相对于SEQ ID NO:37、43、49、55、61和66中任一个的序列具有一个氨基酸取代的序列；和
(6)CDRL3，其具有SEQ ID NO:38、44、50、56、62和67中任一个的序列，或者相对于SEQ ID NO:38、44、50、56、62和67中任一个的序列具有一个或两个氨基酸取代的序列。
30.实施方案1至29中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含：
(1)具有SEQ ID NO:33、39、45、51、57、63、68、71和74中任一个的序列的CDRH1；
(2)具有SEQ ID NO:34、40、46、52、58、64、69、72、75、77和78中任一个的序列的CDRH2；
(3)具有SEQ ID NO:35、41、47、53、59、65、70、73、76和79中任一个的序列的CDRH3；
(4)具有SEQ ID NO:36、42、48、54和60中任一个的序列的CDRL1；
(5)具有SEQ ID NO:37、43、49、55、61和66中任一个的序列的CDRL2；和
(6)具有SEQ ID NO:38、44、50、56、62和67中任一个的序列的CDRL3。
31.实施方案1至30中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:33的序列的CDRH1、具有SEQ ID NO:34的序列的CDRH2和具有SEQ ID NO:35的序列的CDRH3，具有SEQ ID NO:36的序列的CDRL1、具有SEQ ID NO:37的序列的CDRL2和具有SEQ ID NO:38的序列的CDRL3。
32.实施方案1至30中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:33的序列的CDRH1、具有SEQ ID NO:40的序列的CDRH2和具有SEQ ID NO:35的序列的CDRH3，具有SEQ ID NO:36的序列的CDRL1、具有SEQ ID NO:37的序列的CDRL2和具有SEQ ID NO:38的序列的CDRL3。
33.实施方案1至30中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO39的序列的CDRH1、具有SEQ ID NO:46的序列的CDRH2和具有SEQ ID NO:35的序列的CDRH3，具有SEQ ID NO:36的序列的CDRL1、具有SEQ ID NO:43的序列的CDRL2和具有SEQ ID NO:44的序列的CDRL3。
34.实施方案1至30中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:45的序列的CDRH1、具有SEQ ID NO:52的序列的CDRH2和具有SEQ ID NO:41的序列的CDRH3，具有SEQ ID NO:42的序列的CDRL1、具有SEQ ID NO:43的序列的CDRL2和具有SEQ ID NO:38的序列的CDRL3。
35.实施方案1至30中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:51的序列的CDRH1、具有SEQ ID NO:58的序列的CDRH2和具有SEQ ID NO:47的序列的CDRH3，具有SEQ ID NO:48的序列的CDRL1、具有SEQ ID NO:49的序列的CDRL2和具有SEQ ID NO:50的序列的CDRL3。
36.实施方案1至30中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:57的序列的CDRH1、具有SEQ ID NO:64的序列的CDRH2和具有SEQ ID NO:53的序列的CDRH3，具有SEQ ID NO:48的序列的CDRL1、具有SEQ ID NO:55的序列的CDRL2和具有SEQ ID NO:50的序列的CDRL3。
37.实施方案1至30中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:63的序列的CDRH1、具有SEQ ID NO69的序列的CDRH2和具有SEQ ID NO:59的序列的CDRH3，具有SEQ ID NO:54的序列的CDRL1、具有SEQ ID NO:61的序列的CDRL2和具有SEQ ID NO:56的序列的CDRL3。
38.实施方案1至30中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:68的序列的CDRH1、具有SEQ ID NO:72的序列的CDRH2和具有SEQ ID NO:65的序列的CDRH3，具有SEQ ID NO:60的序列的CDRL1、具有SEQ ID NO:66的序列的CDRL2和具有SEQ ID NO:62的序列的CDRL3。
39.实施方案1至30中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:71的序列的CDRH1、具有SEQ ID NO:75的序列的CDRH2和具有SEQ ID NO:70的序列的CDRH3，具有SEQ ID NO:60的序列的CDRL1、具有SEQ ID NO:66的序列的CDRL2和具有SEQ ID NO:67的序列的CDRL3。
40.实施方案1至30中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:74的序列的CDRH1、具有SEQ ID NO:77的序列的CDRH2和具有SEQ ID NO:73的序列的CDRH3，具有SEQ ID NO:60的序列的CDRL1、具有SEQ ID NO:66的序列的CDRL2和具有SEQ ID NO:62的序列的CDRL3。
41.实施方案1至30中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:71的序列的CDRH1、具有SEQ ID NO:78的序列的CDRH2和具有SEQ ID NO:76的序列的CDRH3，具有SEQ ID NO:60的序列的CDRL1、具有SEQ ID NO:66的序列的CDRL2和具有SEQ ID NO:62的序列的CDRL3。
42.实施方案1至30中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:71的序列的CDRH1、具有SEQ ID NO:77的序列的CDRH2和具有SEQ ID NO:79的序列的CDRH3，具有SEQ ID NO:60的序列的CDRL1、具有SEQ ID NO:66的序列的CDRL2和具有SEQ ID NO:62的序列的CDRL3。
43.实施方案1至43中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:1、3-5、7-14和16中任一个所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
44.实施方案1-43中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:1中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
45.实施方案1-43中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:3的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
46.实施方案1-43中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:4的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
47.实施方案1-43中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:5的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
48.实施方案1-43中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:7的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
49.实施方案1-43中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:8的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
50.实施方案1-43中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:9的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
51.实施方案1-43中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:10的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
52.实施方案1-43中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:11的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
53.实施方案1-43中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:12的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
54.实施方案1-43中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:13的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
55.实施方案1-43中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:14的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
56.实施方案1-43中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:16的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
57.实施方案1至56中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:1、3-5、7-14和16中任一个的序列。
58.实施方案57的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含SEQID NO:1中所示的序列。
59.实施方案57的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含SEQID NO:3的序列。
60.实施方案57的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含SEQID NO:4的序列。
61.实施方案57的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含SEQID NO:5的序列。
62.实施方案57的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含SEQID NO:7的序列。
63.实施方案57的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含SEQID NO:8的序列。
64.实施方案57的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含SEQID NO:9的序列。
65.实施方案57的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含SEQID NO:10的序列。
66.实施方案57的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含SEQID NO:11的序列。
67.实施方案57的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含SEQID NO:12的序列。
68.实施方案57的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含SEQID NO:13的序列。
69.实施方案57的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含SEQID NO:14的序列。
70.实施方案57的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含SEQID NO:16的序列。
71.实施方案1至70中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:17、20-21、23-30和32中任一个所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
72.实施方案71的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区包含与SEQID NO:17中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
73.实施方案71的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区包含与SEQID NO:20中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
74.实施方案71的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区包含与SEQID NO:21中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
75.实施方案71的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区包含与SEQID NO:23中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
76.实施方案71的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区包含与SEQID NO:24中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
77.实施方案71的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区包含与SEQID NO:25中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
78.实施方案71的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区包含与SEQID NO:26中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
79.实施方案71的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区包含与SEQID NO:27中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
80.实施方案71的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区包含与SEQID NO:28中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
81.实施方案71的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区包含与SEQID NO:29中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
82.实施方案71的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区包含与SEQID NO:30中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
83.实施方案71的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区包含与SEQID NO:32中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
84.实施方案1至70中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO:17、20-21、23-30和32中任一个所示的序列。
85.实施方案84的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区包含SEQID NO:17中所示的序列。
86.实施方案84的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区包含SEQID NO:20中所示的序列。
87.实施方案84的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区包含SEQID NO:21中所示的序列。
88.实施方案84的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区包含SEQID NO:23中所示的序列。
89.实施方案84的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区包含SEQID NO:24中所示的序列。
90.实施方案84的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区包含SEQID NO:25中所示的序列。
91.实施方案84的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区包含SEQID NO:26中所示的序列。
92.实施方案84的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区包含SEQID NO:27中所示的序列。
93.实施方案84的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区包含SEQID NO:28中所示的序列。
94.实施方案84的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区包含SEQID NO:29中所示的序列。
95.实施方案84的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区包含SEQID NO:30中所示的序列。
96.实施方案84的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区包含SEQID NO:32中所示的序列。
97.实施方案1至96中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:1、3-5、7-14和16中任一个所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，并且其中所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:17、20-21、23-30和32中任一个所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
98.实施方案1至97中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:1中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，并且其中所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:17中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
99.实施方案1至97中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:3中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，并且其中所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:17中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
100.实施方案1至97中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:4中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，并且其中所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:20中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
101.实施方案1至97中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:5中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，并且其中所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:21中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
102.实施方案1至97中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:7中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，并且其中所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:23中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
103.实施方案1至97中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:8中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，并且其中所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:24中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
104.实施方案1至97中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:9中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，并且其中所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:25中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
105.实施方案1至97中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:10中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，并且其中所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:26中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
106.实施方案1至97中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:11中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，并且其中所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:27中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
107.实施方案1至97中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:12中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，并且其中所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:28中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
108.实施方案1至97中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:13中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，并且其中所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:29中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
109.实施方案1至97中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:14中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，并且其中所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:30中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
110.实施方案1至97中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:16中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性，并且其中所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:32中所示的序列至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。
111.实施方案1至96中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:1、3-5、7-14和16中任一个所示的序列，并且其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO:17、20-21、23-30和32中任一个所示的序列。
112.实施方案1至111中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:1中所示的序列，并且其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO:17中所示的序列。
113.实施方案1至111中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:3中所示的序列，并且其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO:17中所示的序列。
114.实施方案1至111中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:4中所示的序列，并且其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO:20中所示的序列。
115.实施方案1至111中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:5中所示的序列，并且其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO:21中所示的序列。
116.实施方案1至111中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:7中所示的序列，并且其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO:23中所示的序列。
117.实施方案1至111中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:8中所示的序列，并且其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO:24中所示的序列。
118.实施方案1至111中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含ID NO:9中所示的序列，并且其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO:25中所示的序列。
119.实施方案1至111中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含ID NO:10中所示的序列，并且其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO:26中所示的序列。
120.实施方案1至111中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含ID NO:11中所示的序列，并且其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO:27中所示的序列。
121.实施方案1至111中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含ID NO:12中所示的序列，并且其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO:28中所示的序列。
122.实施方案1至111中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含ID NO:13中所示的序列，并且其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO:29中所示的序列。
123.实施方案1至111中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含ID NO:14中所示的序列，并且其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO:30中所示的序列。
124.实施方案1至111中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含ID NO:16中所示的序列，并且其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO:32中所示的序列。
125.实施方案1至124中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含与SEQ ID NO:80的序列具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性的Fc多肽。
126.一种特异性结合CCR8的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述分离的抗体与实施方案1至125中任一个的抗体竞争结合CCR8受体。
127.实施方案126的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体结合与实施方案1至125中任一个的抗体相同的表位。
128.实施方案1至127中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体是单克隆抗体。
129.实施方案1至128中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体是人源化抗体。
130.实施方案1至129中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含一个或多个人构架区。
131.实施方案1至130中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体缀合至可检测标记物或标记。
132.实施方案1至131中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体非扩散地固定到固体支持物上。
133.一种分离的核酸，其编码实施方案1至132中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段。
134.一种分离的核酸，其包含编码重链可变区的核苷酸序列，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:81-96中任一个所示的序列至少90％的序列同一性。
135.实施方案134的分离的核酸，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:81中所示的序列至少90％的序列同一性。
136.实施方案134的分离的核酸，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:82中所示的序列至少90％的序列同一性。
137.实施方案134的分离的核酸，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:83中所示的序列至少90％的序列同一性。
138.实施方案134的分离的核酸，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:84中所示的序列至少90％的序列同一性。
139.实施方案134的分离的核酸，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:85中所示的序列至少90％的序列同一性。
140.实施方案134的分离的核酸，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:86中所示的序列至少90％的序列同一性。
141.实施方案134的分离的核酸，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:87中所示的序列至少90％的序列同一性。
142.实施方案134的分离的核酸，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:88中所示的序列至少90％的序列同一性。
143.实施方案134的分离的核酸，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:89中所示的序列至少90％的序列同一性。
144.实施方案134的分离的核酸，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:90中所示的序列至少90％的序列同一性。
145.实施方案134的分离的核酸，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:91中所示的序列至少90％的序列同一性。
146.实施方案134的分离的核酸，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:92中所示的序列至少90％的序列同一性。
147.实施方案134的分离的核酸，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:93中所示的序列至少90％的序列同一性。
148.实施方案134的分离的核酸，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:94中所示的序列至少90％的序列同一性。
149.实施方案134的分离的核酸，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:95中所示的序列至少90％的序列同一性。
150.实施方案134的分离的核酸，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:96中所示的序列至少90％的序列同一性。
151.一种分离的核酸，其包含编码重链可变区的核苷酸序列，所述重链可变区包含SEQ ID NO:81-96中任一个所示的序列。
152.实施方案151的分离的核酸，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:81中所示的序列
153.实施方案151的分离的核酸，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:82中所示的序列。
154.实施方案151的分离的核酸，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:83中所示的序列。
155.实施方案151的分离的核酸，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:84中所示的序列。
156.实施方案151的分离的核酸，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:85中所示的序列。
157.实施方案151的分离的核酸，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:86中所示的序列。
158.实施方案151的分离的核酸，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:87中所示的序列。
159.实施方案151的分离的核酸，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:88中所示的序列。
160.实施方案151的分离的核酸，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:89中所示的序列。
161.实施方案151的分离的核酸，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:90中所示的序列。
162.实施方案151的分离的核酸，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:91中所示的序列。
163.实施方案151的分离的核酸，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:92中所示的序列。
164.实施方案151的分离的核酸，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:93中所示的序列。
165.实施方案151的分离的核酸，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:94中所示的序列。
166.实施方案151的分离的核酸，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:95中所示的序列。
167.实施方案151的分离的核酸，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:96中所示的序列。
168.一种分离的核酸，其包含编码轻链可变区的核苷酸序列，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:97-112中任一个所示的序列至少90％的序列同一性。
169.实施方案168的分离的核酸，其中所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:97中所示的序列至少90％的序列同一性。
170.实施方案168的分离的核酸，其中所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:98中所示的序列至少90％的序列同一性。
171.实施方案168的分离的核酸，其中所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:99中所示的序列至少90％的序列同一性。
172.实施方案168的分离的核酸，其中所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:100中所示的序列至少90％的序列同一性。
173.实施方案168的分离的核酸，其中所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:101中所示的序列至少90％的序列同一性。
174.实施方案168的分离的核酸，其中所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:102中所示的序列至少90％的序列同一性
175.实施方案168的分离的核酸，其中所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:103中所示的序列至少90％的序列同一性。
176.实施方案168的分离的核酸，其中所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:104中所示的序列至少90％的序列同一性。
177.实施方案168的分离的核酸，其中所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:105中所示的序列至少90％的序列同一性。
178.实施方案168的分离的核酸，其中所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:106中所示的序列至少90％的序列同一性。
179.实施方案168的分离的核酸，其中所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:107中所示的序列至少90％的序列同一性。
180.实施方案168的分离的核酸，其中所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:108中所示的序列至少90％的序列同一性。
181.实施方案168的分离的核酸，其中所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:109中所示的序列至少90％的序列同一性。
182.实施方案168的分离的核酸，其中所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:110中所示的序列至少90％的序列同一性。
183.实施方案168的分离的核酸，其中所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:111中所示的序列至少90％的序列同一性。
184.实施方案168的分离的核酸，其中所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:112中所示的序列至少90％的序列同一性。
185.一种分离的核酸，其包含编码轻链可变区的核苷酸序列，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:97-112中任一个所示的序列。
186.实施方案185的分离的核酸，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO:97中所示的序列。
187.实施方案185的分离的核酸，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO:98中所示的序列。
188.实施方案185的分离的核酸，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO:99中所示的序列。
189.实施方案185的分离的核酸，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO:100中所示的序列。
190.实施方案185的分离的核酸，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO:101中所示的序列。
191.实施方案185的分离的核酸，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO:102中所示的序列。
192.实施方案185的分离的核酸，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO:103中所示的序列。
193.实施方案185的分离的核酸，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO:104中所示的序列。
194.实施方案185的分离的核酸，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO:105中所示的序列。
195.实施方案185的分离的核酸，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO:106中所示的序列。
196.实施方案185的分离的核酸，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO:107中所示的序列。
197.实施方案185的分离的核酸，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO:108中所示的序列。
198.实施方案185的分离的核酸，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO:109中所示的序列。
199.实施方案185的分离的核酸，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO:110中所示的序列。
200.实施方案185的分离的核酸，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO:111中所示的序列。
201.实施方案185的分离的核酸，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO:112中所示的序列。
202.一种表达载体，其包含实施方案133至201中任一个的核酸。
203.一种分离的宿主细胞，其包含实施方案202的表达载体。
204.一种药物组合物，其包含实施方案1至132中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段和药学上可接受的载体。
205.一种诊断试剂，其包含实施方案1至132中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段。
206.一种试剂盒，其包含实施方案1至132中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段或者实施方案204的诊断试剂。
207.一种检测CCR8的方法，其包括使已知或疑似含有CCR8的样品与实施方案1至132中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段接触。
208.一种检测CCR8的方法，其包括
a)在所述抗体与所述样品上的CCR8结合的条件下，使样品与实施方案1至132中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段接触，其中所述结合导致受体/抗体复合物的产生；和
b)检测所述受体/抗体复合物的存在，
其中所述检测包括所述样品上CCR8的存在或不存在。
209.一种治疗或预防受试者中与CCR8相关的疾病或病症的方法，其包括：
a)使已知或疑似含有CCR8的样品与实施方案1至132中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段接触；
b)检测包含CCR8和抗体的复合物的存在；其中所述复合物的存在指示疾病或病症的存在；和
c)向受试者施用实施方案1至132中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段。
210.一种诊断疾病或病症的方法，其包括：
a)从受试者中分离样品；
b)使样品与实施方案1至132中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段一起温育足以生成CCR8:抗CCR8复合物的时间段；
c)检测来自分离的组织的CCR8:抗CCR8复合物的存在或不存在；和
d)将CCR8的存在或丰度与组织样品的感兴趣位置相关联。
211.实施方案210的方法，其中在组织样品的感兴趣位置中的CCR8超过对照水平的增加指示受试者中的疾病或病症。
212.实施方案208至211中任一个的方法，其中所述方法在体外进行。
213.实施方案208至211中任一个的方法，其中所述方法在体内进行。
214.实施方案208至213中任一个的方法，其中所述检测包括细胞内检测。
215.实施方案208至214中任一个的方法，其中所述检测包括在细胞的表面上的检测。
216.实施方案208至215中任一个的方法，其中所述检测包括可检测部分与抗体或其抗原结合片段的杂交。
217.实施方案208至216中任一个的方法，其中使所述样品与第二抗体接触。
218.实施方案208至217中任一个的方法，其中所述第二抗体是包含可检测部分的抗体。
219.实施方案208至218中任一个的方法，其中所述可检测部分包含寡核苷酸。
220.实施方案208至219中任一个的方法，其中所述可检测部分包含荧光标记。
221.实施方案208至220中任一个的方法，其中所述测量包括测序。
222.实施方案208至221中任一个的方法，其中所述可检测部分包含免疫荧光。
223.实施方案208至222中任一个的方法，其中所述样品是福尔马林固定的石蜡包埋的样品。
224.实施方案208至223中任一个的方法，其中所述样品包含细胞。
225.实施方案208至224中任一个的方法，其中所述样品包含组织样品。
226.实施方案208至225中任一个的方法，其中所述样品包含免疫细胞。
227.实施方案226的方法，其中所述免疫细胞选自B细胞、浆细胞样树突状细胞(pDC)、淋巴细胞、白细胞、T细胞、单核细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、髓样树突状细胞(mDC)、先天淋巴样细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、天然杀伤细胞和外周血单核细胞(PBMC)。
228.实施方案208至227中任一个的方法，其中所述样品包含与疾病或病症相关的组织或细胞。
229.实施方案208至228中任一个的方法，其中所述疾病或病症是癌症、自身免疫性病症、炎性病症或感染。
230.实施方案228或229的方法，其中所述疾病或病症选自非病毒癌症、病毒相关癌症、与HBV感染相关的癌症、与EB病毒(EBV)感染相关的癌症、与多瘤病毒感染相关的癌症、麻风结节性红斑(ENL)、自身免疫性疾病、自身免疫性炎症、自身免疫性甲状腺疾病、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、急性髓样白血病、霍奇金氏病、急性粒细胞性白血病、急性粒单核细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、慢性粒细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、B细胞大细胞淋巴瘤、恶性淋巴瘤、急性白血病、淋巴肉瘤细胞性白血病、B细胞白血病、骨髓增生异常综合征、固相癌、疱疹病毒感染和/或移植组织或器官的排斥。
231.实施方案1至132中任一个的抗体或其抗原结合片段，其用于将CCR8的存在或丰度与组织样品的感兴趣位置相关联的方法中。
232.实施方案1至132中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其用于检测组织样品中的CCR8的方法中。
233.实施方案231或232的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述方法包括生成包含寡核苷酸或其互补体的序列的全部或一部分的核酸分子
234.实施方案1至132中任一个的分离的抗体或其抗原结合片段，其用于蛋白质文库的构建中235.实施方案234的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述蛋白质文库的构建包括测序。
236.实施方案234的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述蛋白质文库的构建包括流式细胞术的使用。
实施例
下文阐述的实施例说明了某些实施方案并且不限制该技术。
实施例1：抗CCR8杂交瘤的创建和表征
如该实施例中所述的制备分泌与体内表达的CCR8反应的单克隆抗体的杂交瘤。所得到的抗CCR8抗体用于各种目的，包括诊断测定中，其实例在下文的实施例中提供。
实验室小鼠例如BALB/c或C57/Bl6或大鼠例如Sprague Dawley的常见品系用于由CCR8免疫原的免疫。在小鼠的成功免疫之后，使用标准方案将骨髓瘤细胞与从动物中收获的脾和引流淋巴结细胞融合，形成杂交瘤。在HAT培养基中选择成功融合物并在微量滴定板中克隆至大约一个细胞/孔之后，通过流式细胞术针对表达CCR8的细胞转染子例如HEK 293或RBL测试培养物上清液。然后将具有成功染色概况的孔传代培养到更大的容器内，直到存在足够的细胞以允许亚克隆。通过使用CCR8转染的细胞的流式细胞术，对杂交瘤亚克隆候选物进行进一步表征。通过流式细胞术针对分成不同亚群(例如淋巴细胞、单核细胞等等)的人血细胞以及针对由患病和/或感染的人细胞生成的一种或多种细胞系进一步筛选作为最佳候选物选择的克隆。与同种型对照相比，定量每个血细胞亚群中的阳性细胞的百分比。
所选择的示例性候选克隆呈现针对表达CCR8的免疫细胞(例如淋巴细胞)的强反应性，但针对其它血细胞群体没有明显的反应性。在某些情况下，示例性候选克隆能够检测免疫细胞(例如，淋巴细胞)的细胞表面上的CCR8、细胞内CCR8、或免疫细胞(例如，淋巴细胞)中的细胞内CCR8。
实施例2：抗CCR8抗体可变区的测序
来自表现良好的抗CCR8杂交瘤细胞系(上文实施例1中描述)的细胞在标准哺乳动物组织培养基中生长。使用基于RNeasy Mini Kit(Qiagen)的程序，从来自表达抗CCR8单克隆抗体的各种克隆的杂交瘤细胞中分离总RNA。RNA用于生成第一链cDNA。轻链和重链可变结构域cDNA两者均通过5’-RACE技术进行扩增。通过PCR制备阳性克隆，然后经受多重克隆的DNA测序。
图2A和2B中显示了关于指定为AB 1-16(在本文中也被称为抗体1-16和克隆1-16)的十六种不同抗体(克隆)的重链和轻链的各个可变结构域(CDR和构架区)，包括CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列。各种重链和轻链CDR序列显示于下表5中。
表5：关于代表性抗CCR8单克隆抗体的VH和VL结构域的CDR序列和序列ID号
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实施例3：表达CCR8的细胞的检测
该实施例描述了使用某些抗CCR8单克隆抗体，人外周血基于流式细胞术的检测。
材料和方法
使用通过滴定抗体缀合物获得的先前确定的最佳浓度，100μL来自健康志愿者供体的外周血用抗人CD3 APC(克隆SK7)和指示的PE缀合抗体染色15分钟；然后使样品与2mL1X红细胞裂解缓冲液(目录号420301)一起温育15分钟，裂解红细胞；将细胞离心并用细胞染色缓冲液(目录号420201)洗涤1次，用FluoroFixTM缓冲液(目录号422101)固定，然后在FACSCanto II流式细胞仪(BD Biosciences)中获得。使用FCS Express(De NovoSoftware)分析数据，并且在淋巴细胞群体中对数据进行门控。除非另有说明，否则使用的所有试剂都来自BioLegend。
结果
除了AB9之外的所有抗体通过以与商业克隆ABI和ABII相似的百分比和相似的概况结合T细胞亚群而给出了预计的染色概况(图4A-4Q)。由于所有抗体给出了约1的F/P比，因此所检测到的细胞百分比中的差异很可能是由于不同克隆的亲和力中的差异。值得注意的是，尽管AB9能够对人CCR8转染的细胞进行染色(未显示)，但并未给出关于PBMC的阳性信号。综上所述，数据提示了AB9对于CCR8具有低亲和力。
实施例4：功能测定和补体依赖性细胞毒性(CDC)
该实施例描述了基于细胞表面中的CCR8的抗体检测和经典补体途径的激活的功能测定。
材料和方法
人CCR8 GFP转染的Ba/F3细胞(hCCR8-Ba/F3，靶细胞)和亲本Ba/F3细胞(对照细胞)在细胞培养基(补充有10％胎牛血清加上以50ng/mL的小鼠IL-3的RPMI 1640培养基)中生长。
根据随染料提供的方案，用Tag-it VioletTM(目录号425101)标记Ba/F3对照细胞。对每个细胞系进行计数，并且用细胞培养基将细胞调整为2x106个细胞/mL的密度。将1体积的靶细胞和1体积的对照细胞混合，以制备1:1的靶/对照细胞混合物。
在细胞培养基中对于每种抗体(AB1、AB2、AB3、AB4、AB5、AB6、AB7、AB8、AB9、AB10、AB11、AB12、AB13、AB14和AB15)制备以10μg/mL的储备溶液。储备溶液用于制备4x系列稀释物，抗体的最终浓度为10、2.5、0.6和0.15μg/mL。
在96孔板中，每孔添加50μL每种Ab的稀释物加上50μL靶/对照细胞混合物，将抗体和细胞混合并使板在4℃下温育20分钟。然后将100μl低毒性的兔补体(Cedarlane目录号CL3310)加入每个孔中，与细胞混合，并且使板在37℃、5％ CO2下温育90分钟。
板用细胞染色缓冲液洗涤2次并且添加7-AAD以标记死细胞。在LSRFortessa流式细胞仪(BD Biosciences)中获得样品，使用FCS Express(De Novo Software)分析数据。从分析中排除死细胞，并且用每孔中的活hCCR8-Ba/F3的百分比除以Ba/F3的百分比，来计算靶/对照细胞比率。
结果
为了评价通过抗人CCR8抗体激活补体的能力，首先我们确认了抗体仅在补体的存在下杀死靶细胞、人CCR8转染的Ba/F3细胞，但在相同条件下并未杀死亲本细胞系Ba/F3。作为代表性实验的实例，我们显示了克隆AB8并未杀死细胞系Ba/F3(图5A)，但当它用人CCR8转染时，几乎完全杀死相同的细胞系(图5B)。细胞杀死由抗体特异性介导，因为单独的补体并未杀死转染的细胞(数据未显示)。
为了使补体介导的杀死标准化，将对照细胞和转染的靶细胞以1:1的比率混合，并且与抗人CCR8抗体一起温育；然后使具有抗体的细胞与补体一起温育，并且确定活靶细胞和活对照细胞的百分比。作为代表性实验的实例，我们显示了当不存在抗体时，单独的补体并未杀死亲本细胞系或人CCR8转染的细胞，因为来自亲本细胞系Ba/F3(对照细胞，47％)和CCR8转染的细胞(靶细胞，51.7％)的活细胞百分比是非常相似的。这给出了1.098的靶/对照细胞的比率(图5C)。然而，当细胞在克隆AB11加上补体的存在下时，由于CCR8转染的细胞的选择性杀死(活对照细胞：88.96％相对于活靶细胞9.12％)，百分比急剧改变，导致0.103的比率(图5D)。注意到较低的比率指示了转染细胞的较高杀死。
图5E显示了在与不同浓度的不同抗体一起温育后，活转染细胞/亲本细胞的比率。通过补体结合在杀死方面更有效的克隆来自同种型大鼠IgG2b和小鼠IgG2a，并且在该组内，克隆AB7、AB8、AB11和AB12在此类杀死方面最有效。图5E中的虚线表示仅与补体一起温育的活靶细胞和活对照细胞的比率。
实施例5：功能测定和抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)
该实施例描述了基于细胞表面中的CCR8的抗体检测，以及作为靶细胞和吞噬细胞的附着测量的单核细胞系THP-1中的吞噬作用诱导的功能测定。
材料和方法
人CCR8 GFP转染的Ba/F3细胞(hCCR8-Ba/F3，靶细胞)和用无关基因转染的Ba/F3细胞，在这种情况下是小鼠FCRLS GFP转染的Ba/F3细胞(mFCRLS-Ba/F3，对照细胞)在细胞培养基(补充有10％胎牛血清加上以50ng/mL的小鼠IL-3的RPMI 1640培养基)中生长。THP-1细胞(效应细胞)也在细胞培养基中生长。
根据随染料提供的方案，用Tag-it VioletTM(目录号425101)标记THP-1细胞。对THP-1细胞进行计数，并且用细胞培养基调整为2.5x105个细胞/mL的密度；对hCCR8-Ba/F3和mFCRLS-Ba/F3细胞进行计数，并且用细胞培养基调整为1x106个细胞/mL的密度。
在细胞培养基中对于每种抗体(AB1、AB2、AB3、AB4、AB5、AB6、AB7、AB8、AB9、AB10、AB11、AB12、AB13、AB14和AB15)及其分别的同种型对照制备以10μg/mL的储备溶液。将50μL储备溶液与50μL靶细胞或对照细胞在96孔板中混合，并且使板在4℃下温育30分钟。
细胞用细胞培养基洗涤3次，并且将200μL THP-1细胞悬浮液加入每个孔中。使板在37℃、5％CO2下温育90分钟。然后在FACSCanto II流式细胞仪(BD Biosciences)中获取来自每个孔的细胞；使用FCS Express(De Novo Software)分析数据。吞噬作用的百分比定义为GFP+Tag-It Violet+双阳性细胞的百分比。
结果
与用相应的同种型对照调理的靶细胞(未显示)或调理的mFCRLS-Ba/F3对照细胞(图6A-6HH)相比，用抗人CCR8抗体调理的hCCR8-Ba/F3靶细胞在与THP-1细胞一起温育后导致更高百分比的GFP+Tag-It Violet+双阳性细胞。此外，诱导靶细胞和吞噬细胞附着的更有效抗体来自同种型大鼠IgG2b和小鼠IgG2a，以及在该组内的克隆AB5、AB6、AB7、AB14。
表6显示了来自不同吞噬实验的数据。注意到结果显示了相同的趋势，其中大鼠IgG2b和小鼠IgG2a抗体在CCR8转染的细胞和THP-1细胞中诱导最高数目的靶/效应复合物，并且一般而言，当使用由无关基因(mFCRLS)转染的细胞时，所有克隆都诱导了相似数目的非特异性靶/效应子复合物。
表6
实施例6：阻断测定
该实施例描述了使用本文描述的抗CCR8抗体进行的阻断测定。
PBMC分离
根据制造商说明书，通过Ficoll-Paque PLUS(GE Healthcare)的梯度分离人外周血单核细胞(PBMC)；进行计数并且在细胞染色缓冲液(目录#420201)中调整至0.7-1x107个细胞/mL的细胞密度。
阻断测定
对于阻断研究，使100μL细胞悬浮液与10μg作为阻断剂的纯化的同种型对照、AB1、AB2、AB3、AB4、AB5、AB8、AB9、AB10、AB11、AB12、AB13、AB14、AB15和商业ABI抗体或同种型对照一起温育。
在与阻断剂一起温育后，使细胞与0.25μg所指示的PE缀合的抗体加上抗人CD4APC或抗人CD3一起在黑暗中再温育15分钟，然后用细胞染色缓冲液洗涤2次，并且在FACSCanto II流式细胞仪(BD Biosciences)中获得；使用FCS Express(De NovoSoftware)分析数据；MFI对应于CCR8+CD4+淋巴细胞或CCR8+CD3+淋巴细胞。
除非另有说明，否则使用的所有试剂都来自BioLegend。
关于百分比(％)阻断的计算
通过用AB1、AB2、AB3、AB4、AB5、AB6、AB7、AB8、AB9、AB10、AB11、AB12、AB13、AB14、AB15和商业ABI抗体阻断的样品的MFI除以用相应同种型对照阻断的样品的MFI，来计算百分比原始MFI。从100中减去该值以得到阻断百分比。公式显示于下文：
％阻断＝100-([MFI阻断]/[MFI无阻断]*100)
结果
表7A：MFI和％阻断-CCR8+CD4+细胞
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表7B：MFI和％阻断-CCR8+CD3+细胞
/>
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表7C：MFI和％阻断-％双阳性，CCR8+CD4+细胞
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表7D：MFI和％阻断-％双阳性，CCR8+CD3+细胞
/>
值得注意的是，一般而言，抗体AB1至AB8各自阻断自身，并且抗体AB9至AB15各自也阻断自身，提示了来自每个集合的抗体识别相似的表位。仅克隆AB7和AB8阻断了来自AB9至AB15的Ab以及本文中使用的2种商业mAb抗人CCR8。
实施例7：序列的实例
下文提供了与本文描述的技术相关的氨基酸序列的实例。
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实施例8：实施方案的示例
下文阐述的实施例说明了某些实施方案并且不限制该技术。
A1.一种在实验室或生理条件下结合趋化因子(C-C基序)受体8(CCR8)的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述抗体、其抗原结合片段或试剂包含至少一个免疫球蛋白重链可变结构域和/或至少一个免疫球蛋白轻链可变结构域，其中：
a)所述抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的每个免疫球蛋白重链可变结构域包含第一重链互补决定区(CDR)、第二重链互补决定区(CDR)和第三重链互补决定区(CDR)，其中
所述第一重链CDR(CDRH1)包含与氨基酸序列X1X2X3X4X5(SEQ ID NO:2)具有至少80％同一性的氨基酸序列，其中
X1＝S、G、Y、N、D、T或A，
X2＝Y、A或N，
X3＝H、A或V，
X4＝I、V或M，和
X5＝S、Y或N；
所述第二重链CDR(CDRH2)包含与氨基酸序列X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14X15X1 6X17KX19(SEQ ID NO:6)具有至少80％同一性的氨基酸序列，其中
X1＝V、R或E，
X2＝I或L，
X3＝W、R或Y，
X4＝G、T、P或S，
X5＝D、G或K，
X6＝G、P或S，
X7＝S、K、R、N或D，
X8＝N、T、K或无氨基酸，
X9＝Y、T或无氨基酸，
X10＝A、Y或无氨基酸，
X11＝K、T或Y，
X12＝T、Y或N，
X13＝Y或E，
X14＝N、A、I、K或V，
X15＝S、D或F，
X16＝A、L、S或K，
X17＝L、V或G，和
X19＝S、G或D；和
所述第三重链CDR(CDRH3)包含与氨基酸序列X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12YY(SEQ IDNO:15)具有至少80％同一性的氨基酸序列，其中
X1＝G、M或D，
X2＝G、S或R，
X3＝T、I、L、E、A或D，
X4＝V、T、G、L或无氨基酸，
X5＝V、R、G、M、L或无氨基酸，
X6＝K、G、A、F、P、T或无氨基酸，
X7＝S、G、Y、F、T或P，
X8＝G、Y或D，
X9＝F、V、Y、A、R或S，
X10＝A、D或M，
X11＝Y、M或D，和
X12＝D或Y；和/或
b)所述抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的每个免疫球蛋白轻链可变结构域包含第一轻链CDR、第二轻链CDR和第三轻链CDR，其中
所述第一轻链CDR(CDRL1)包含与氨基酸序列X1X2SX4X5X6X7X8X9X10X11NTYLY(SEQ IDNO:18)具有至少80％同一性的氨基酸序列，其中
X1＝Q、K或R，
X2＝A或S，
X4＝Q、E或K，
X5＝D、N或S，
X6＝I或L，
X7＝G、N、Y或L，
X8＝N、R、S或H，
X9＝W、R、Y或S，
X10＝L或N，
X11＝S、N、A或G；
所述第二轻链(CDRL2)包含与氨基酸序列X1X2X3X4X5X6X7(SEQ ID NO:19)具有至少80％同一性的氨基酸序列，其中
X1＝G、N或R，
X2＝T、A或M，
X3＝T、N、K或S，
X4＝N、S或T，
X5＝L或V，
X6＝A、Q或I，和
X7＝D、T、E或S；和
所述第三轻链CDR(CDRL3)包含与氨基酸序列X1QX3X4X5X6PX8T(SEQ ID NO:22)具有至少80％同一性的氨基酸序列，其中
X1＝L、Q或M，
X3＝A或H，
X4＝Y、N或L，
X5＝S、D或E，
X6＝V、W、S或Y，和
X8＝L、W、F或Y。
A2.实施方案A1的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRH1包含与SEQID NO:2的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列。
A3.实施方案A1的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRH1包含与SEQID NO:2的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
A4.实施方案A1的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRH1包含与SEQID NO:2的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列。
A5.实施方案A1的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRH1包含与SEQID NO:2的氨基酸序列具有100％同一性的氨基酸序列。
A6.实施方案A1至A5中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRH2包含与SEQ ID NO:6的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列。
A7.实施方案A1至A5中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRH2包含与SEQ ID NO:6的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
A8.实施方案A1至A5中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRH2包含与SEQ ID NO:6的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列。
A9.实施方案A1至A5中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRH2包含与SEQ ID NO:6的氨基酸序列具有100％同一性的氨基酸序列。
A10.实施方案A1至A9中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRH3包含与SEQ ID NO:15的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列。
A11.实施方案A1至A9中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRH3包含与SEQ ID NO:15的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
A12.实施方案A1至A9中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRH3包含与SEQ ID NO:15的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列。
A13.实施方案A1至A9中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRH3包含与SEQ ID NO:15的氨基酸序列具有100％同一性的氨基酸序列。
A14.实施方案A1至A13中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRL1包含与SEQ ID NO:18的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列。
A15.实施方案A1至A13中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRL1包含与SEQ ID NO:18的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
A16.实施方案A1至A13中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRL1包含与SEQ ID NO:18的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列。
A17.实施方案A1至A13中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRL1包含与SEQ ID NO:18的氨基酸序列具有100％同一性的氨基酸序列。
A18.实施方案A1至A17中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRL2包含与SEQ ID NO:19的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列。
A19.实施方案A1至A17中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRL2包含与SEQ ID NO:19的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
A20.实施方案A1至A17中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRL2包含与SEQ ID NO:19的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列。
A21.实施方案A1至A17中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRL2包含与SEQ ID NO:19的氨基酸序列具有100％同一性的氨基酸序列。
A22.实施方案A1至A21中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRL3包含与SEQ ID NO:22的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列。
A23.实施方案A1至A21中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRL3包含与SEQ ID NO:22的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
A24.实施方案A1至A21中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRL3包含与SEQ ID NO:22的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列。
A25.实施方案A1至A21中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRL3包含与SEQ ID NO:22的氨基酸序列具有100％同一性的氨基酸序列。
A26.实施方案A1至A25中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRH1包含选自SYHIS(SEQ ID NO:33)、GYHVS(SEQ ID NO:39)、SYHVS(SEQ ID NO:45)、YAAMY(SEQ ID NO:51)、NAAMY(SEQ ID NO:57)、DYVIS(SEQ ID NO:63)、TNAMN(SEQ ID NO:68)、TYAMN(SEQ ID NO:71)和AYAMN(SEQ ID NO:74)的氨基酸序列。
A27.实施方案A1至A26中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRH2包含选自VIWGDGSKTYNSALKS(SEQ ID NO:34)、VIWGDGKTTYNSALKS(SEQ ID NO:40)、VIWGDGRTTYNSALKS(SEQ ID NO:46)、VIWTGGSTTYNSLLKS(SEQ ID NO:52)、RIRTKPNNYATYYADSVKG(SEQ ID NO:58)、RIRTKPKNYATYYIDSVKG(SEQ ID NO:64)、EIYPGSDTTYYNEKFKG(SEQ ID NO:69)、RIRSKSNKYATYYADSVKD(SEQ ID NO:72)、SEQ ID NO:RLRSKSNFYATYYADSVKD(SEQ ID NO:75)、RIRTKSNNYATYYADSVKD(SEQ ID NO:77)和RIRSKSNNYATYYVDSVKD(SEQ ID NO:78)的氨基酸序列。
A28.实施方案A1至A27中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRH3包含选自GGDSGFAY(SEQ ID NO:35)、GGTVVKGGFAY(SEQ ID NO:41)、MGITRGYYFDY(SEQID NO:47)、MGLTRAYYFDY(SEQ ID NO:53)、GGLGGFFDV(SEQ ID NO:59)、GSEMGYYYAMDY(SEQID NO:65)、GRELGPSYAMDY(SEQ ID NO:70)、DRATVTTGRAMDY(SEQ ID NO:73)、GRELGPYSAMDY(SEQ ID NO:76)和GGRGNLGKEYYFDY(SEQ ID NO:79)的氨基酸序列。
A29.实施方案A1至A28中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRL1包含选自QASQDIGNWLS(SEQ ID NO:36)、QASQDIGNRLS(SEQ ID NO:42)、KASQNINRYLN(SEQ ID NO:48)、RASENIYSYLA(SEQ ID NO:54)和RSSKSLLHSNGNTYLY(SEQ ID NO:60)的氨基酸序列。
A30.实施方案A1至A29中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRL2包含选自GTTNLAD(SEQ ID NO:37)、GATSLAD(SEQ ID NO:43)、NANNLQT(SEQ ID NO:49)、NANSLQT(SEQ ID NO:55)、NAKTVIE(SEQ ID NO:61)和RMSNLAS(SEQ ID NO:66)的氨基酸序列。
A31.实施方案A1至A30中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRL3包含选自LQAYSVPLT(SEQ ID NO:38)、LQAYIVPLT(SEQ ID NO:44)、LQHNSWPWT(SEQ IDNO:50)、QHHYDSPWT(SEQ ID NO:56)、MQHLEYPFT(SEQ ID NO:62)和MQHLEYPYT(SEQ ID NO:67)的氨基酸序列。
A32.实施方案A1至A31中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其包含两个免疫球蛋白重链可变结构域和两个免疫球蛋白轻链可变结构域。
A33.实施方案A32的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述两个免疫球蛋白重链可变结构域各自包含CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列的集合。
A34.实施方案A32和A33的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述两个免疫球蛋白轻链可变结构域各自包含CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列的集合。
A35.实施方案A1至A34中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中每个免疫球蛋白重链可变结构域包含选自集合1-16的CDRH1、CDRH2、CDRH3氨基酸序列的集合，并且每个免疫球蛋白轻链可变结构域包含CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列的集合：
A36.实施方案A35的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所有CDR序列来自同一集合。
A37.实施方案A1至A36中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述抗体、其抗原结合片段或试剂是分离的。
A38.实施方案A1至A37中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述抗体、其抗原结合片段或试剂是非天然存在的。
A39.实施方案A1至A38中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述抗体、其抗原结合片段或试剂是抗体或其抗原结合片段。
A40.实施方案A1至A38中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述抗体、其抗原结合片段或试剂是抗体或其衍生物。
A41.实施方案A1至A40中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述抗体、其抗原结合片段或试剂是人源化抗体或其抗原结合片段。
A42.实施方案A1至A40中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述抗体、其抗原结合片段或试剂是结合CCR8的人源化抗体的衍生物。
A43.实施方案A1至A42中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述抗体、其抗原结合片段或试剂包含可检测标记物或标记。
A44.实施方案A1至A43中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述抗体、其抗原结合片段或试剂缀合至可检测标记物或标记。
A45.实施方案A1至A44中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述抗体、其抗原结合片段或试剂非扩散地固定到固体支持物上。
A46.一种诊断试剂，其包含实施方案A1至A45中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂。
A47.一种试剂盒，其包含实施方案A1至A45中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂或者实施方案A46的诊断试剂。
A48.一种配置为检测生物样品中的趋化因子(C-C基序)受体8(CCR8)的诊断试剂盒，其中所述试剂盒包含实施方案A1至A45中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂或者实施方案A46的诊断试剂。
A49.一种分离的核酸分子，其包含编码实施方案A1至A45中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的免疫球蛋白重链可变结构域的核苷酸序列。
A50.一种分离的核酸分子，其包含编码实施方案A1至A45中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的免疫球蛋白轻链可变结构域的核苷酸序列。
A51.一种重组表达载体，其包含第一表达盒和第二表达盒，其中所述第一表达盒包含启动子和核酸分子，所述核酸分子包含编码实施方案A1至A45中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的免疫球蛋白重链可变结构域的核苷酸序列，并且所述第二表达盒包含启动子和核酸分子，所述核酸分子包含编码实施方案A1至A45中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的免疫球蛋白轻链可变结构域的核苷酸序列。
A52.一种重组宿主细胞，其用实施方案A51的重组表达载体进行转染。
A53.一种检测CCR8的方法，其包括使已知或疑似含有CCR8的样品与实施方案A1至A45中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂接触，并且如果样品含有CCR8，则检测到CCR8:抗CCR8复合物。
B1.在实验室或生理条件下结合CCR8的第一抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述第一抗体、其抗原结合片段或试剂与第二抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂竞争性结合或能够竞争性结合，所述第二抗体、其抗原结合片段或试剂是实施方案A1至A36中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂。
B2.在实验室或生理条件下结合CCR8的第一抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述第一抗体、其抗原结合片段或试剂结合或能够结合与第二抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂相同的表位，所述第二抗体、其抗原结合片段或试剂是实施方案A1至A36中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂。
B3.实施方案B1或B2的第一抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述第一抗体、其抗原结合片段或试剂和/或所述第二抗体、其抗原结合片段或试剂是分离的。
B4.实施方案B1至B3中任一个的第一抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述第一抗体、其抗原结合片段或试剂和/或所述第二抗体、其抗原结合片段或试剂是非天然存在的。
B5.实施方案B1至B4中任一个的第一抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述第一抗体、其抗原结合片段或试剂和/或所述第二抗体、其抗原结合片段或试剂是抗体或衍生物。
B6.实施方案B1至B4中任一个的第一抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述第一抗体、其抗原结合片段或试剂和/或所述第二抗体、其抗原结合片段或试剂是抗体或其衍生物。
B7.实施方案B1至B6中任一个的第一抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述第一抗体、其抗原结合片段或试剂和/或所述第二抗体、其抗原结合片段或试剂是人源化抗体或其抗原结合片段。
B8.实施方案B1至B6中任一个的第一抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述第一抗体、其抗原结合片段或试剂和/或所述第二抗体、其抗原结合片段或试剂是结合CCR8的人源化抗体的衍生物。
B9.实施方案B1至B8中任一个的第一抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其包含可检测标记物或标记。
B10.实施方案B1至B9中任一个的第一抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述第一抗体、其抗原结合片段或试剂缀合至可检测标记物或标记。
B11.实施方案B1至B10中任一个的第一抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述第一抗体、其抗原结合片段或试剂非扩散地固定到固体支持物上。
B12.一种诊断性抗体(reantibody)、其抗原结合片段或试剂，其包含实施方案B1至B11中任一个的第一抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂。
B13.一种试剂盒，其包含实施方案B1至B11中任一个的第一抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂或者实施方案B12的诊断试剂。
B14.一种配置为检测生物样品中的趋化因子(C-C基序)受体8(CCR8)的诊断试剂盒，其中所述试剂盒包含实施方案B1至B11中任一个的第一抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂或者实施方案B12的诊断试剂。
B15.一种分离的核酸分子，其包含编码实施方案B1至B11中任一个的第一抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的免疫球蛋白重链可变结构域的核苷酸序列。
B16.一种分离的核酸分子，其包含编码实施方案B1至B11中任一个的第一抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的免疫球蛋白轻链可变结构域的核苷酸序列。
B17.一种重组表达载体，其包含第一表达盒和第二表达盒，其中所述第一表达盒包含启动子和核酸分子，所述核酸分子包含编码实施方案B1至B11中任一个的第一抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的免疫球蛋白重链可变结构域的核苷酸序列，并且所述第二表达盒包含启动子和核酸分子，所述核酸分子包含编码实施方案B1至B11中任一个的第一抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的免疫球蛋白轻链可变结构域的核苷酸序列。
B18.一种重组宿主细胞，其用实施方案B17的重组表达载体进行转染。
B19.一种检测CCR8的方法，其包括使已知或疑似含有CCR8的样品与实施方案B1至B11中任一个的第一抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂接触，并且如果样品含有CCR8，则检测到CCR8:抗CCR8复合物。
C1.一种用于检测免疫细胞的异质群体中的CCR8的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中CCR8在所述群体中的淋巴细胞中以显著水平检测到，并且CCR8在所述群体中的其它免疫细胞中并未显著检测到。
C2.实施方案C1的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂包含至少一个免疫球蛋白重链可变结构域和至少一个免疫球蛋白轻链可变结构域，其中：
i)所述抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的每个免疫球蛋白重链可变结构域包含第一重链互补决定区(CDR)、第二重链互补决定区(CDR)和第三重链互补决定区(CDR)；和
ii)所述抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的每个免疫球蛋白轻链可变结构域包含第一轻链CDR、第二轻链CDR和第三轻链CDR。
C3.实施方案C2的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述第一重链CDR(CDRH1)包含与氨基酸序列X1X2X3X4X5(SEQ ID NO:2)具有至少80％同一性的氨基酸序列，其中
X1是S、G、Y、N、D、T或A，
X2是Y、A或N，
X3是H、A或V，
X4是I、V或M，和
X5是S、Y或N。
C4.实施方案C2或C3的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述第二重链CDR(CDRH2)包含与氨基酸序列X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14X15X16X17KX19(SEQ ID NO:6)具有至少80％同一性的氨基酸序列，其中
X1是V、R或E，
X2是I或L，
X3是W、R或Y，
X4是G、T、P或S，
X5是D、G或K，
X6是G、P或S，
X7是S、K、R、N或D，
X8是N、T、K或无氨基酸，
X9是Y、T或无氨基酸，
X10是A、Y或无氨基酸，
X11是K、T或Y，
X12是T、Y或N，
X13是Y或E，
X14是N、A、I、K或V，
X15是S、D或F，
X16是A、L、S或K，
X17是L、V或G，和
X19是S、G或D。
C5.实施方案C2、C3或C4的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述第三重链CDR(CDRH3)包含与氨基酸序列X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12YY(SEQ ID NO:15)具有至少80％同一性的氨基酸序列，其中
X1是G、M或D，
X2是G、S或R，
X3是T、I、L、E、A或D，
X4是V、T、G、L或无氨基酸，
X5是V、R、G、M、L或无氨基酸，
X6是K、G、A、F、P、T或无氨基酸，
X7是S、G、Y、F、T或P，
X8是G、Y或D，
X9是F、V、Y、A、R或S，
X10是A、D或M，
X11是Y、M或D，和
X12是D或Y。
C6.实施方案C2至C5中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述第一轻链CDR(CDRL1)包含与氨基酸序列X1X2SX4X5X6X7X8X9X10X11NTYLY(SEQ ID NO:18)具有至少80％同一性的氨基酸序列，其中
X1是Q、K或R，
X2是A或S，
X4是Q、E或K，
X5是D、N或S，
X6是I或L，
X7是G、N、Y或L，
X8是N、R、S或H，
X9是W、R、Y或S，
X10是L或N，和
X11是S、N、A或G。
C7.实施方案C2至C6中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述第二轻链CDR(CDRL2)包含与氨基酸序列X1X2X3X4X5X6X7(SEQ ID NO:19)具有至少80％同一性的氨基酸序列，其中
X1是G、N或R，
X2是T、A或M，
X3是T、N、K或S，
X4是N、S或T，
X5是L或V，
X6是A、Q或I，和
X7是D、T、E或S。
C8.实施方案C2至C7中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述第三轻链CDR(CDRL3)包含与氨基酸序列X1QX3X4X5X6PX8T(SEQ ID NO:22)具有至少80％同一性的氨基酸序列，其中
X1是L、Q或M，
X3是A或H，
X4是Y、N或L，
X5是S、D或E，
X6是V、W、S或Y，和
X8是L、W、F或Y。
C9.实施方案C2至C8中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRH1包含与SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列。
C10.实施方案C2至C8中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRH1包含与SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
C11.实施方案C2至C8中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRH1包含与SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列。
C12.实施方案C2至C8中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRH1包含与SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有100％同一性的氨基酸序列。
C13.实施方案C2至C12中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRH2包含与SEQ ID NO:6的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列。
C14.实施方案C2至C12中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRH2包含与SEQ ID NO:6的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
C15.实施方案C2至C12中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRH2包含与SEQ ID NO:6的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列。
C16.实施方案C2至C12中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRH2包含与SEQ ID NO:6的氨基酸序列具有100％同一性的氨基酸序列。
C17.实施方案C2至C16中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRH3包含与SEQ ID NO:15的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列。
C18.实施方案C2至C16中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRH3包含与SEQ ID NO:15的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
C19.实施方案C2至C16中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRH3包含与SEQ ID NO:15的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列。
C20.实施方案C2至C16中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRH3包含与SEQ ID NO:15的氨基酸序列具有100％同一性的氨基酸序列。
C21.实施方案C2至C20中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRL1包含与SEQ ID NO:18的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列。
C22.实施方案C2至C20中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRL1包含与SEQ ID NO:18的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
C23.实施方案C2至C20中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRL1包含与SEQ ID NO:18的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列。
C24.实施方案C2至C20中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRL1包含与SEQ ID NO:18的氨基酸序列具有100％同一性的氨基酸序列。
C25.实施方案C2至C24中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRL2包含与SEQ ID NO:19的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列。
C26.实施方案C2至C24中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRL2包含与SEQ ID NO:19的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
C27.实施方案C2至C24中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRL2包含与SEQ ID NO:19的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列。
C28.实施方案C2至C24中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRL2包含与SEQ ID NO:19的氨基酸序列具有100％同一性的氨基酸序列。
C29.实施方案C2至C28中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRL3包含与SEQ ID NO:22的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列。
C30.实施方案C2至C28中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRL3包含与SEQ ID NO:22的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
C31.实施方案C2至C28中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRL3包含与SEQ ID NO:22的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列。
C32.实施方案C2至C28中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRL3包含与SEQ ID NO:22的氨基酸序列具有100％同一性的氨基酸序列。
C33.实施方案C2至C32中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRH1包含选自SYHIS(SEQ ID NO:33)、GYHVS(SEQ ID NO:39)、SYHVS(SEQ ID NO:45)、YAAMY(SEQ ID NO:51)、NAAMY(SEQ ID NO:57)、DYVIS(SEQ ID NO:63)、TNAMN(SEQ ID NO:68)、TYAMN(SEQ ID NO:71)和AYAMN(SEQ ID NO:74)的氨基酸序列。
C34.实施方案C2至C33中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRH2包含选自VIWGDGSKTYNSALKS(SEQ ID NO:34)、VIWGDGKTTYNSALKS(SEQ ID NO:40)、VIWGDGRTTYNSALKS(SEQ ID NO:46)、VIWTGGSTTYNSLLKS(SEQ ID NO:52)、RIRTKPNNYATYYADSVKG(SEQ ID NO:58)、RIRTKPKNYATYYIDSVKG(SEQ ID NO:64)、EIYPGSDTTYYNEKFKG(SEQ ID NO:69)、RIRSKSNKYATYYADSVKD(SEQ ID NO:72)、SEQ ID NO:RLRSKSNFYATYYADSVKD(SEQ ID NO:75)、RIRTKSNNYATYYADSVKD(SEQ ID NO:77)和RIRSKSNNYATYYVDSVKD(SEQ ID NO:78)的氨基酸序列。
C35.实施方案C2至C34中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRH3包含选自GGDSGFAY(SEQ ID NO:35)、GGTVVKGGFAY(SEQ ID NO:41)、MGITRGYYFDY(SEQID NO:47)、MGLTRAYYFDY(SEQ ID NO:53)、GGLGGFFDV(SEQ ID NO:59)、GSEMGYYYAMDY(SEQID NO:65)、GRELGPSYAMDY(SEQ ID NO:70)、DRATVTTGRAMDY(SEQ ID NO:73)、GRELGPYSAMDY(SEQ ID NO:76)和GGRGNLGKEYYFDY(SEQ ID NO:79)的氨基酸序列。
C36.实施方案C2至C35中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRL1包含选自QASQDIGNWLS(SEQ ID NO:36)、QASQDIGNRLS(SEQ ID NO:42)、KASQNINRYLN(SEQ ID NO:48)、RASENIYSYLA(SEQ ID NO:54)和RSSKSLLHSNGNTYLY(SEQ ID NO:60)的氨基酸序列。
C37.实施方案C2至C36中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRL2包含选自GTTNLAD(SEQ ID NO:37)、GATSLAD(SEQ ID NO:43)、NANNLQT(SEQ ID NO:49)、NANSLQT(SEQ ID NO:55)、NAKTVIE(SEQ ID NO:61)和RMSNLAS(SEQ ID NO:66)的氨基酸序列。
C38.实施方案C2至C37中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述CDRL3包含选自LQAYSVPLT(SEQ ID NO:38)、LQAYIVPLT(SEQ ID NO:44)、LQHNSWPWT(SEQ IDNO:50)、QHHYDSPWT(SEQ ID NO:56)、MQHLEYPFT(SEQ ID NO:62)和MQHLEYPYT(SEQ ID NO:67)的氨基酸序列。
C39.实施方案C1至C38中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其包含两个免疫球蛋白重链可变结构域和两个免疫球蛋白轻链可变结构域。
C40.实施方案C39的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述两个免疫球蛋白重链可变结构域各自包含CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列的集合。
C41.实施方案C39或C40的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述两个免疫球蛋白轻链可变结构域各自包含CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列的集合。
C42.实施方案C2至C41中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中每个免疫球蛋白重链可变结构域包含选自集合1-16的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列的集合，并且每个免疫球蛋白轻链可变结构域包含CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列的集合：
C43.实施方案C42的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所有CDR序列来自同一集合。
C44.实施方案C1至C43中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中CCR8在淋巴细胞中以显著水平检测到。
C45.实施方案C44的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中使用流式细胞术测定在淋巴细胞中检测到CCR8。
C46.实施方案C1至C47中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中CCR8在群体中的其它免疫细胞中并未显著检测到。
C47.实施方案C1至C46中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述抗体、其抗原结合片段或试剂是分离的。
C48.实施方案C1至C47中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述抗体、其抗原结合片段或试剂是非天然存在的。
C49.实施方案C1至C48中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述抗体、其抗原结合片段或试剂是抗体或其抗原结合片段。
C50.实施方案C1至C48中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述抗体、其抗原结合片段或试剂是抗体或其衍生物。
C51.实施方案C1至C50中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述抗体、其抗原结合片段或试剂是人源化抗体或其抗原结合片段。
C52.实施方案C1至C50中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述抗体、其抗原结合片段或试剂是结合CCR8的人源化抗体的衍生物。
C53.实施方案C1至C52中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述抗体、其抗原结合片段或试剂包含可检测标记物或标记。
C54.实施方案C1至C53中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述抗体、其抗原结合片段或试剂缀合至可检测标记物或标记。
C55.实施方案C1至C54中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂，其中所述抗体、其抗原结合片段或试剂非扩散地固定到固体支持物上。
C56.一种诊断试剂，其包含实施方案C1至C55中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂。
C57.一种试剂盒，其包含实施方案C1至C55中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂或者实施方案C56的诊断试剂。
C58.一种配置为检测生物样品中的CCR8的诊断试剂盒，其中所述试剂盒包含实施方案C1至C55中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂或者实施方案C56的诊断试剂。
C59.一种分离的核酸分子，其包含编码实施方案C1至C55中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的免疫球蛋白重链可变结构域的核苷酸序列。
C60.一种分离的核酸分子，其包含编码实施方案C1至C55中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的免疫球蛋白轻链可变结构域的核苷酸序列。
C61.一种重组表达载体，其包含第一表达盒和第二表达盒，其中所述第一表达盒包含启动子和核酸分子，所述核酸分子包含编码实施方案C1至C55中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的免疫球蛋白重链可变结构域的核苷酸序列，并且所述第二表达盒包含启动子和核酸分子，所述核酸分子包含编码实施方案C1至C55中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂的免疫球蛋白轻链可变结构域的核苷酸序列。
C62.一种重组宿主细胞，其用实施方案C61的重组表达载体进行转染。
C63.一种检测CCR8的方法，其包括使已知或疑似含有CCR8的样品与实施方案C1至C55中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂接触，并且如果样品含有CCR8，则检测到CCR8:抗CCR8复合物。
C64.一种检测免疫细胞的异质群体中的CCR8的方法，其包括使所述群体与实施方案C1至C55中任一个的抗CCR8抗体、其抗原结合片段或试剂接触，并且如果所述群体含有表达CCR8的细胞，则检测到CCR8:抗CCR8复合物。
本文提及的每个专利、专利申请、出版物和文件的全部内容在此通过引用并入。上文专利、专利申请、出版物和文件的引用并非承认任何前述内容是有关现有技术，它也不构成关于这些出版物或文件的内容或日期的任何承认。它们的引用并非搜索相关公开内容的指示。关于文件日期或内容的所有声明都基于可用信息，并且不是关于其准确性或正确性的承认。
可以对前述内容进行修改，而不脱离技术的基本方面。尽管技术已参考一个或多个具体实施方案相当详细地进行描述，但本领域的普通技术人员将认识到，可以对本申请中具体公开的实施方案进行改变，但是这些修改和改善在技术的范围和精神内。
本文适当地说明性描述的技术可以在不存在本文未具体公开的任何元件的情况下进行实践。因此，例如，在本文的每个实例中，术语“包含”、“基本上由……组成”和“由……组成”中的任一个可以用其它两个术语中的任一替换。已采用的术语和表达用作描述性而非限制性的术语，并且此类术语和表达的使用并不排除所显示且描述的特征或其各部分的任何等价物，并且各种修改在请求保护的技术的范围内是可能的。术语“一个”或“一种”可以指它修饰的一个或多个元件(例如，“试剂”可以意指一种或多种试剂)，除非上下文明确的是描述了元件之一或多于一个元件。如本文使用的，术语“约”指在基础参数的10％(即，正或负10％)内的值，并且术语“约”在一串值的开头的使用修饰每个值(即，“约1、2和3”指约1、约2和约3)。例如，“约100克”的重量可以包括90克至110克之间的重量。进一步地，当本文描述了值的列表时(例如，约50％、60％、70％、80％、85％或86％)，该列表包括其所有中间值和分数值(例如，54％、85.4％)。因此，应当理解，尽管本技术已通过代表性实施方案和任选特征得到具体公开，但本领域技术人员可以采用本文公开的概念的修改和变化，并且此类修改和变化被视为在本技术的范围内。
技术的某些实施方案在随后的权利要求中阐述。

Claims (46)

1.一种特异性结合CCR8的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述分离的抗体包含：
a)重链可变区，其包含：
(i)具有X1X2X3X4X5(SEQ ID NO:2)的序列的重链互补决定区1(CDRH1)，其中X1是S、G、Y、N、D、T或A，X2是Y、A或N，X3是H、A或V，X4是I、V或M，且X5是S、Y或N；
(ii)具有X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14X15X16X17KX19(SEQ ID NO:6)的序列的CDRH2，其中X1是V、R或E，X2是I或L，X3是W、R或Y，X4是G、T、P或S，X5是D、G或K，X6是G、P或S，X7是S、K、R、N或D，X8是N、T、K或无氨基酸，X9是Y、T或无氨基酸，X10是A、Y或无氨基酸，X11是K、T或Y，X12是T、Y或N，X13是Y或E，X14是N、A、I、K或V，X15是S、D或F，X16是A、L、S或K，X17是L、V或G，且X19是S、G或D；
(iii)具有X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12YY(SEQ ID NO:15)的序列的CDRH3，其中X1是G、M或D，X2是G、S或R，X3是T、I、L、E、A或D，X4是V、T、G、L或无氨基酸，X5是V、R、G、M、L或无氨基酸，X6是K、G、A、F、P、T或无氨基酸，X7是S、G、Y、F、T或P，X8是G、Y或D，X9是F、V、Y、A、R或S，X10是A、D或M，X11是Y、M或D，且X12是D或Y；和
b)轻链可变区，其包含：
(iv)具有X1X2SX4X5X6X7X8X9X10X11NTYLY(SEQ ID NO:18)的序列的轻链互补决定区1(CDRL1)，其中X1是Q、K或R，X2是A或S，X4是Q、E或K，X5是D、N或S，X6是I或L，X7是G、N、Y或L，X8是N、R、S或H，X9是W、R、Y或S，X10是L或N，且X11是S、N、A或G；
(v)具有X1X2X3X4X5X6X7(SEQ ID NO:19)的序列的CDRL2，其中X1是G、N或R，X2是T、A或M，X3是T、N、K或S，X4是N、S或T，X5是L或V，X6是A、Q或I，且X7是D、T、E或S；和
(vi)具有X1QX3X4X5X6PX8T(SEQ ID NO:22)的序列的CDRL3，其中X1是L、Q或M，X3是A或H，X4是Y、N或L，X5是S、D或E，X6是V、W、S或Y，且X8是L、W、F或Y。
2.权利要求1的分离的抗体或其抗原结合片段，其中：
(1)所述CDRH1包含SEQ ID NO:33、39、45、51、57、63、68、71和74中任一个所示的序列，或者与SEQ ID NO:33、39、45、51、57、63、68、71和74中任一个具有80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的序列；
(2)所述CDRH2包含SEQ ID NO:34、40、46、52、58、64、69、72、75、77和78中任一个所示的序列，或者与SEQ ID NO:34、40、46、52、58、64、69、72、75、77和78中任一个具有80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的序列；和
(3)所述CDRH3包含SEQ ID NO:35、41、47、53、59、65、70、73、76和79中任一个所示的序列，或者与SEQ ID NO:35、41、47、53、59、65、70、73、76和79中任一个具有80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的序列。
3.权利要求1或权利要求2中任一项的分离的抗体或其抗原结合片段，其中：
(1)所述CDRL1包含SEQ ID NO:36、42、48、54和60中任一个所示的序列，或者与SEQ IDNO:36、42、48、54和60中任一个具有80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的序列；
(2)所述CDRL2包含SEQ ID NO:37、43、49、55、61和66中任一个所示的序列，或者与SEQID NO:37、43、49、55、61和66中任一个具有80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的序列；和
(3)所述CDRL3包含SEQ ID NO:38、44、50、56、62和67中任一个所示的序列，或者与SEQID NO:38、44、50、56、62和67中任一个具有80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的序列。
4.权利要求1至3中任一项的分离的抗体或其抗原结合片段，其中：
(1)所述CDRH1包含SEQ ID NO:33、39、45、51、57、63、68、71和74中任一个所示的序列，或者与SEQ ID NO:33、39、45、51、57、63、68、71和74中任一个具有80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的序列；
(2)所述CDRH2包含SEQ ID NO:34、40、46、52、58、64、69、72、75、77和78中任一个所示的序列，或者与SEQ ID NO:34、40、46、52、58、64、69、72、75、77和78中任一个具有80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的序列；
(3)所述CDRH3包含SEQ ID NO:35、41、47、53、59、65、70、73、76和79中任一个所示的序列，或者与SEQ ID NO:35、41、47、53、59、65、70、73、76和79中任一个具有80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的序列；
(4)所述CDRL1包含SEQ ID NO:36、42、48、54和60中任一个所示的序列，或者与SEQ IDNO:36、42、48、54和60中任一个具有80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的序列；
(5)所述CDRL2包含SEQ ID NO:37、43、49、55、61和66中任一个所示的序列，或者与SEQID NO:37、43、49、55、61和66中任一个具有80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的序列；和
(6)所述CDRL3包含SEQ ID NO:38、44、50、56、62和67中任一个所示的序列，或者与SEQID NO:38、44、50、56、62和67中任一个具有80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的序列。
5.权利要求1至4中任一项的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述CDRH1包含SEQID NO:57中所示的序列，所述CDRH2包含SEQ ID NO:64中所示的序列，所述CDRH3包含SEQID NO:53中所示的序列，所述CDRL1包含SEQ ID NO:48中所示的序列，所述CDRL2包含SEQID NO:55中所示的序列，并且所述CDRL3包含SEQ ID NO:50中所示的序列。
6.权利要求1至4中任一项的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述CDRH1包含SEQID NO:71中所示的序列，所述CDRH2包含SEQ ID NO:75中所示的序列，所述CDRH3包含SEQID NO:70中所示的序列，所述CDRL1包含SEQ ID NO:60中所示的序列，所述CDRL2包含SEQID NO:66中所示的序列，并且所述CDRL3包含SEQ ID NO:67中所示的序列。
7.权利要求1至6中任一项的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述CDRH1包含SEQID NO:71中所示的序列，所述CDRH2包含SEQ ID NO:77中所示的序列，所述CDRH3包含SEQID NO:79中所示的序列，所述CDRL1包含SEQ ID NO:60中所示的序列，所述CDRL2包含SEQID NO:66中所示的序列，并且所述CDRL3包含SEQ ID NO:62中所示的序列。
8.权利要求1至7中任一项的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:1、3-5、7-14和16中任一个所示的序列至少90％的同一性。
9.权利要求1至8中任一项的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:8的序列至少90％的同一性。
10.权利要求1至8中任一项的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:12的序列至少90％的同一性。
11.权利要求1至8中任一项的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:16的序列至少90％的同一性。
12.权利要求1至11中任一项的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:17、20-21、23-30和32中任一个所示的序列至少90％的同一性。
13.权利要求12的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:24中所示的序列至少90％的同一性。
14.权利要求12的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:28中所示的序列至少90％的同一性。
15.权利要求12的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:32中所示的序列至少90％的同一性。
16.权利要求1至15中任一项的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:1、3-5、7-14和16中任一个所示的序列至少90％的同一性，并且其中所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:17、20-21、23-30和32中任一个所示的序列至少90％的同一性。
17.权利要求1至16中任一项的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:8中所示的序列至少90％的同一性，并且其中所述轻链可变区包含与SEQID NO:24中所示的序列至少90％的同一性。
18.权利要求1至16中任一项的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:12中所示的序列至少90％的同一性，并且其中所述轻链可变区包含与SEQID NO:28中所示的序列至少90％的同一性。
19.权利要求1至16中任一项的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:16中所示的序列至少90％的同一性，并且其中所述轻链可变区包含与SEQID NO:32中所示的序列至少90％的同一性。
20.权利要求1至19中任一项的分离的抗体或其抗原结合片段，其进一步包含与SEQ IDNO:80的序列具有至少90％的同一性的Fc多肽。
21.一种特异性结合CCR8的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述分离的抗体或其抗原结合片段与权利要求1至20中任一项的抗体竞争结合CCR8受体。
22.权利要求21的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段结合与权利要求1至21中任一项的抗体相同的表位。
23.权利要求1至22中任一项的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段是单克隆的。
24.权利要求1至23中任一项的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段是人源化的。
25.权利要求1至24中任一项的分离的抗体或其抗原结合片段，其进一步包含一个或多个人构架区。
26.权利要求1至25中任一项的分离的抗体或其抗原结合片段，其进一步包含与可检测标记物或标记的缀合。
27.权利要求1至26中任一项的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段非扩散地固定到固体支持物上。
28.一种分离的核酸，其编码权利要求1至27中任一项的分离的抗体或其抗原结合片段。
29.一种分离的核酸，其包含编码重链可变区的核苷酸序列，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:81-96中任一个所示的序列至少90％的序列同一性。
30.一种分离的核酸，其包含编码轻链可变区的核苷酸序列，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:97-112中任一个所示的序列至少90％的序列同一性。
31.一种表达载体，其包含权利要求28至30中任一项的核酸。
32.一种分离的宿主细胞，其包含权利要求31的表达载体。
33.一种药物组合物，其包含权利要求1至27中任一项的分离的抗体或其抗原结合片段和药学上可接受的载体。
34.一种诊断试剂，其包含权利要求1至27中任一项的分离的抗体或其抗原结合片段。
35.一种试剂盒，其包含权利要求1至27中任一项的分离的抗体或其抗原结合片段或者权利要求34的诊断试剂。
36.一种检测CCR8的方法，其包括使已知或疑似含有CCR8的样品与权利要求1至27中任一项的分离的抗体或其抗原结合片段接触。
37.一种检测CCR8的方法，其包括
a)在所述抗体与样品上的CCR8结合的条件下，使所述样品与权利要求1至27中任一项的分离的抗体或其抗原结合片段接触，其中所述结合导致受体/抗体复合物的产生；和
b)检测所述受体/抗体复合物的存在，
其中所述检测包括所述样品上CCR8的存在或不存在。
38.一种治疗或预防受试者中与CCR8相关的疾病或病症的方法，其包括：
a)使已知或疑似含有CCR8的样品与权利要求1至27中任一项的分离的抗体或其抗原结合片段接触；
b)检测包含CCR8和抗体的复合物的存在；其中所述复合物的存在指示疾病或病症的存在；和
c)向受试者施用权利要求1至27中任一项的分离的抗体或其抗原结合片段。
39.一种诊断疾病或病症的方法，其包括：
a)从受试者中分离样品；
b)使所述样品与权利要求1至27中任一项的分离的抗体或其抗原结合片段一起温育足以生成CCR8:抗CCR8复合物的时间段；
c)检测来自分离的组织的CCR8:抗CCR8复合物的存在或不存在；和
d)将CCR8的存在或丰度与组织样品的感兴趣位置相关联。
40.权利要求36至39中任一项的方法，其中所述方法在体外进行。
41.权利要求36至40中任一项的方法，其中所述检测包括可检测部分与所述抗体或其抗原结合片段的杂交。
42.权利要求36至41中任一项的方法，其中所述可检测部分包含寡核苷酸。
43.权利要求36至42中任一项的方法，其中所述可检测部分包含荧光标记。
44.权利要求36至43中任一项的方法，其中所述测量包括测序。
45.权利要求36至44中任一项的方法，其中所述样品包含细胞。
46.权利要求36至45中任一项的方法，其中所述样品包含组织样品。
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