CN117562830A - 一种包载烟酰胺的纳米微囊及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种包载烟酰胺的纳米微囊及其制备方法和应用，属于化妆品技术领域。该纳米微囊的制备方法，包括如下步骤：将聚谷氨酸与银离子溶液的混合水溶液逐滴加入到壳聚糖和烟酰胺的混合水溶液中，混合搅拌进行交联反应，即得。由此制备得到的包载烟酰胺的纳米微囊中，烟酰胺的装载量为5～12％，烟酰胺的包封率为55～75％。本发明制备的纳米微囊具有良好的保湿补水、抑菌抗炎、抗氧化活性的效果，而且产品的保质期长，同时制备方法简单，使用的原料安全易降解，生物相容性好；纳米微囊对烟酰胺具有高包封率和合适的装载量，既能有效发挥美白作用，又能确保对皮肤的刺激性低。

Description

一种包载烟酰胺的纳米微囊及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及化妆品技术领域，尤其涉及一种包载烟酰胺的纳米微囊及其制备方法和应用。
背景技术
本发明背景技术中公开的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
烟酰胺(nicotinamide,NA)是维生素B3(烟酸)的一种酰胺，它可以通过限制黑素体(黑色素)从黑素细胞向周围角质层细胞转移来达到皮肤美白的效果，有文献报道NA还具有抗炎、抗老化等护肤多重功效，因其相对其他美白产品成分更为安全，在化妆品领域获得广泛关注。然而烟酰胺在发挥功效的同时对皮肤也有一定的刺激性，所以需要严格控制其在产品中的含量。研究显示，产品中烟酰胺含量低于2％，对皮肤刺激性不强但是美白效果不好，当烟酰胺的含量高于2％美白效果好，但是对皮肤的刺激性明显增强。因此，亟需一种方式对烟酰胺进行修饰以减少刺激性，增强渗透性和稳定性，同时保证其本身能发挥正常的活性。
论文《油酸(钠)-羧甲基纤维素钠复合囊泡的制备及其在包封烟酰胺中的应用》一文中报道了采用油酸(钠)和羧甲基纤维素钠形成的复合囊泡对烟酰胺进行包覆，其所制备的复合囊泡对烟酰胺的装载量达到15％以上，甚至高达近30％。烟酰胺的装载量过多，即使该复合囊泡具有缓释功能，初始的烟酰胺释放浓度很可能高于2％，从而造成对皮肤的刺激，同时，装载量过高、缓释时间过长也会造成烟酰胺的浪费。此外，其制备的复合囊泡对烟酰胺的包封率小于55％，这意味着较多烟酰胺在后续纯化的过程中被去除，从而造成浪费。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种包载烟酰胺的纳米微囊及其制备方法和应用，该纳米微囊通过缓释烟酰胺达到降低皮肤刺激性的效果，具有良好的保湿补水、抑菌抗炎、抗氧化活性、美白不刺激等多重功效，同时，该纳米微囊对烟酰胺的包封率高、装载量合适，有利于实际应用。
第一方面，本发明提供了一种包载烟酰胺的纳米微囊的制备方法，包括如下步骤：
将聚谷氨酸与银离子溶液的混合水溶液逐滴加入到壳聚糖和烟酰胺的混合水溶液中，混合搅拌进行交联反应，即得；所述交联反应的反应体系中，壳聚糖的浓度为0.3～1mg/mL，聚谷氨酸的浓度为0.1～0.3mg/mL。
优选的，所述交联反应的反应体系中，银离子的浓度为0.1～0.3mg/mL。
优选的，所述聚谷氨酸与银离子溶液的混合水溶液与所述壳聚糖和烟酰胺的混合水溶液的体积比为5～10:1。
优选的，所述聚谷氨酸和壳聚糖的质量比为1:2～5。
优选的，所述烟酰胺的质量与壳聚糖和聚谷氨酸的总质量之比为1:5～15。
优选的，所述银离子溶液的制备方法为：将硝酸银溶解于水中，然后加入聚乙烯吡咯烷酮，搅拌溶解，即得。
进一步的，所述壳聚糖和烟酰胺的混合水溶液的制备过程为：在壳聚糖溶液中加入烟酰胺溶液，即得；所述壳聚糖溶液的制备过程为：将壳聚糖粉末搅拌溶于水中，加入乙酸，搅拌至溶液澄清透明，静置至气泡完全消失，用氢氧化钠溶液调节pH至5.5～6.5，定容，即得。
优选的，所述聚谷氨酸的分子量为100～1400kDa；或，所述聚谷氨酸的分子量为1000～1400kDa。
优选的，所述混合搅拌时间为3-5h，转速为200～300rpm；所述交联反应的温度为25～33℃。
优选的，所述混合搅拌进行交联反应过程中，调节反应体系的pH为5.5～6.5。
优选的，还包括对交联反应后的溶液进行透析的步骤，所述透析过程对游离烟酰胺的含量进行监测，直到透析袋外的溶液中游离烟酰胺的含量降至0.01％以下。
第二方面，本发明提供了上述制备方法制备得到的包载烟酰胺的纳米微囊；其中，烟酰胺的装载量为5～12％，烟酰胺的包封率为55～75％。
第三方面，本发明提供了上述包载烟酰胺的纳米微囊在制备化妆品中的应用。
与现有技术相比，本发明取得了以下有益效果：
(1)本发明制备的纳米微囊具有良好的保湿补水、抑菌抗炎、抗氧化活性的效果，而且产品的保质期长，同时制备方法简单，使用的原料安全易降解，生物相容性好；
(2)本发明提供的纳米微囊，烟酰胺的包封率和装载量易调控，本领域技术人员可依据应用目的和需求对所述微囊中烟酰胺的含量进行调整，灵活性高。此外，本发明提供的纳米微囊对烟酰胺具有高包封率和合适的装载量，既能有效发挥美白作用，又能确保对皮肤的刺激性低，非常适合应用于化妆品。
附图说明
构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。显而易见地，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明实施例2制备的空白γ-PGA/Ag+/CS纳米微囊溶液的粒径分布图；
图2是本发明实施例2制备的空白γ-PGA/Ag+/CS纳米微囊溶液的扫描电镜图；
图3是本发明实施例4制备的γ-PGA/Ag+/CS-NA2纳米微囊溶液的粒径分布图；
图4是本发明实施例4制备的γ-PGA/Ag+/CS-NA2纳米微囊溶液的扫描电镜图；
图5是本发明烟酰胺的标准曲线；
图6是本发明实施例3～5制备的γ-PGA/Ag+/CS-NA纳米微囊溶液的保湿性测试图；
图7是本发明实施例3～5制备的γ-PGA/Ag+/CS-NA纳米微囊溶液的美白活性测试；
图8是本发明实施例4制备的γ-PGA/Ag+/CS-NA纳米微囊溶液的缓释实验测试图，其中，NA曲线的测试温度为25℃。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
本发明提供了一种包载烟酰胺的纳米微囊溶液的制备方法，包括如下步骤：
将聚谷氨酸与银离子溶液的混合水溶液逐滴加入到壳聚糖和烟酰胺的混合水溶液中，混合搅拌进行交联反应，即得；所述交联反应的反应体系中，壳聚糖的浓度为0.3～1mg/mL，聚谷氨酸的浓度为0.1～0.3mg/mL。
聚谷氨酸是一种天然的阴离子聚合物，对Ag+离子具有吸附作用，银离子对人体无毒且具有抑菌、抗炎、防腐的功效；同时，发明人发现，添加银离子能够能显著延长产品的保存时间以及保持产品的活性成分不发生改变。
聚谷氨酸和壳聚糖之间通过聚电解质作用自组装形成空白微囊进而包载烟酰胺(其结构式如上式所示)，一方面，烟酰胺经聚谷氨酸和壳聚糖形成的纳米微囊包载过后能控制烟酰胺的释放，达到缓释的效果，可以很好避免较高浓度的烟酰胺在短时间内与人体皮肤接触产生的强烈刺激感，使其更好的发挥美白效果；另一方面，可以增强烟酰胺在不同温度、pH、光照等条件下的稳定性，保持其原有的活性。此外，聚谷氨酸和壳聚糖作为纳米微囊的主要原料，聚谷氨酸是天然的阴离子聚合物，壳聚糖是天然的阳离子聚合物，都具有良好的生物相容性、生物可降解性以及天然无毒，对皮肤均无任何刺激性，复合而成的纳米微囊还具有优越的保湿补水的功效。
因此，本发明通过上述方法制备得到的纳米微囊具有良好的保湿补水、抑菌抗炎、抗氧化活性、美白不刺激等多重功效。
发明人发现，当壳聚糖的浓度为0.3～1mg/mL，聚谷氨酸的浓度为0.1～0.3mg/mL时，上述物质浓度的混合溶液呈透明状态，而当聚谷氨酸的浓度超过0.3mg/mL和/或壳聚糖的浓度超过1mg/mL时，混合溶液有白色沉淀生成，且浓度越大，生成的白色沉淀越多。
本发明所述交联反应的反应体系中，银离子的浓度为0.1～0.3mg/mL。适量浓度的银离子，既对人体没有毒性，又能够发挥其抑菌、消炎等功效。本发明银离子溶液的制备方法为：将硝酸银溶解于水中，然后加入聚乙烯吡咯烷酮，搅拌溶解，即得。聚乙烯吡咯烷酮具有很好的稳定性和分散性，它可以提高银离子的稳定性，防止其沉淀或团聚，加入银离子同时加入一定量的聚乙烯吡咯烷酮(PVP)可以有效可以提高聚谷氨酸与银离子的吸附效果，增强稳定性。
本发明中，所述聚谷氨酸与银离子溶液的混合水溶液与所述壳聚糖和烟酰胺的混合水溶液的体积比为5～10:1。
本发明中，所述聚谷氨酸和壳聚糖的质量比为1:2～5。
本发明中，所述烟酰胺的质量与壳聚糖和聚谷氨酸的总质量之比为1:5～15。烟酰胺的用量影响其在纳米微囊中的装载量和包封率，进一步优选为1:10。
本发明壳聚糖和烟酰胺的混合水溶液的制备过程为：在壳聚糖溶液中加入烟酰胺溶液，即得；所述壳聚糖溶液的制备过程为：将壳聚糖粉末搅拌溶于水中，加入乙酸，搅拌至溶液澄清透明，静置至气泡完全消失，用氢氧化钠溶液调节pH至5.5～6.5，定容，即得。壳聚糖溶于水后，体系呈现半透明状态粘度较大，加入醋酸(pH＝2～3)后使壳聚糖分子更易溶解，体系逐渐变为澄清状态，然后加入氢氧化钠溶液调节pH至弱酸环境(pH＝5.5～6.5)，在此条件下交联形成的微囊的稳定性更好。
本发明所述聚谷氨酸与银离子溶液的混合水溶液中，聚谷氨酸的浓度为4～5mg/mL。
本发明对所述聚谷氨酸的分子量不作特殊限制，聚谷氨酸是由D-谷氨酸和L-谷氨酸通过γ-谷氨酰键聚合而成，进而形成一种多肽大分子，一般分子量为10～2000kDa。上述分子量的聚谷氨酸均能够形成满足本申请技术效果的结合物，聚谷氨酸的保湿功效与分子量无明显线性关系，甚至会随着分子量及添加量的增加，反而下降，因此本发明聚谷氨酸的分子量优选为100～1400kDa，进一步优选为1000～1400kDa，最优选为1200kDa。
本发明中，混合搅拌时间为3-5h，转速为200～300rpm；所述交联反应的温度为25～33℃。本发明纳米微囊的制备过程在室温下进行，能耗低。
本发明所述混合搅拌进行交联反应过程中，调节反应体系的pH为5.5～6.5。在这个pH条件下，两种物质的分子结构最为稳定，有利于它们之间的交联反应。同时，这个pH值有利于保持微囊的完整性，提高其载药能力和缓释性能。
本发明还包括对交联反应后的溶液进行透析的步骤，这是为了去除未包封的游离烟酰胺，对获得的纳米微囊溶液进行纯化。本发明对透析的步骤不作特殊限制，采用本领域常用的透析方法即可，透析袋的规格根据分子量的大小而定。所述透析过程对游离烟酰胺的含量进行监测，具体为：每隔3-4h取透析袋外溶液，用紫外分光光度计测吸光度，由标准曲线计算游离烟酰胺的含量降至0.01％及以下。
本发明中，所述水优选为双蒸水或三蒸水。
本发明还提供了上述制备方法制备得到的包载烟酰胺的纳米微囊；其中，烟酰胺的装载量为5～12％，烟酰胺的包封率为55～75％。该纳米微囊溶液具有缓释烟酰胺的效果，装载量合适，确保不会对皮肤产生刺激作用，并且包封率高，使更多的烟酰胺被有效地包裹在纳米微囊中，可以提高纳米微囊的稳定性，更有利于实现药物的缓释和定量释放。
本发明还提供了上述包载烟酰胺的纳米微囊在制备化妆品中的应用。本领域技术人员可依据应用目的和需求对所述微囊中烟酰胺的含量进行调整，能够灵活满足一系列美白产品中的多种应用目的。
在本发明中，所述包载烟酰胺的纳米微囊在化妆品中的质量含量优选为5～10％，更优选为10％。
在本发明中，所述化妆品优选具有美白不刺激、保湿补水、抑菌抗炎、抗氧化活性等功效。
在本发明中，所述化妆品的形式包括但不限于化妆水、膏霜、膏霜、乳液、面膜和凝胶。
本发明对所述化妆品的制备方法没有特殊的限制，可直接将所述包载烟酰胺的纳米微囊添加于各类美白不刺激、保湿补水、抑菌抗炎、抗氧化活性等化妆品的基质中，使用方便。
下面结合具体实施例对本发明技术方案做进一步阐述。
实施例1聚谷氨酸溶液、壳聚糖溶液、硝酸银溶液以及烟酰胺溶液的配制
(1)聚谷氨酸(γ-PGA)溶液
称取250mg聚谷氨酸粉末溶于10mL双蒸水中，磁力搅拌器250rpm，常温下搅拌45min至溶液澄清透明，转移至50mL容量瓶，加双蒸水定容，摇匀得到5mg/mL的聚谷氨酸溶液。
(2)壳聚糖(CS)溶液
称取250mg壳聚糖粉末溶于10mL双蒸水中，磁力搅拌器250rpm，常温下搅拌20min后加入1mL乙酸，常温搅拌45min至溶液澄清透明，放置一定时间至气泡完全消失，用1moL/L的NaOH溶液调节pH，搅拌均匀后转移至50mL容量瓶，加双蒸水定容，摇匀得到5mg/mL的壳聚糖溶液。
(3)硝酸银溶液(Ag+)
常温避光条件下，称取12.5mg的硝酸银固体溶于10mL双蒸水中，震荡使固体全部溶解，然后加入0.5mg聚乙烯吡咯烷酮粉末，搅拌均匀。转移至25mL容量瓶中，加双蒸水定容，摇匀得到500μg/mL的银离子溶液。
(4)烟酰胺溶液(NA)
称取25mg烟酰胺溶于5mL双蒸水中，磁力搅拌器250rpm，常温下搅拌45min至溶液澄清透明，转移至25mL容量瓶，加双蒸水定容，摇匀得到1mg/mL的烟酰胺溶液。
实施例2空白纳米微囊的制备
聚谷氨酸的分子量为1200kDa，室温搅拌下，将提前聚谷氨酸溶液与硝酸银溶液按一定比例混合，搅拌均匀，在壳聚糖溶液中加入双蒸水，将聚谷氨酸和银离子溶液缓慢逐滴滴加到壳聚糖溶液中，控制体系中银离子的浓度为0.25mg/mL，聚谷氨酸与壳聚糖的投料质量比为1:3，壳聚糖的浓度为0.5mg/mL，常温搅拌4h制备得到空白γ-PGA/Ag+/CS纳米微囊溶液。
图1为本实施例制备的空白γ-PGA/Ag+/CS纳米微囊溶液的粒径分布图，从图中可以看出，空白纳米微囊粒径集中分布在100～200nm之间，且PDI值小于30％，所形成的空白纳米微囊大小均匀。
图2为本实施例制备的空白γ-PGA/Ag+/CS纳米微囊溶液的扫描电镜图，从图中可以看出，空白纳米微囊在溶液中外貌呈球形，且分散均一稳定。
实施例3
本实施例提供了一种包载烟酰胺的纳米微囊(γ-PGA/Ag+/CS-NA1)溶液的制备方法，包括如下步骤：
聚谷氨酸的分子量为1200kDa，室温搅拌下，将提前聚谷氨酸溶液与硝酸银溶液按一定比例混合，搅拌均匀，在壳聚糖溶液中加入双蒸水和烟酰胺溶液，将聚谷氨酸和银离子溶液缓慢逐滴滴加到壳聚糖和烟酰胺的混合溶液中，控制体系中银离子的浓度为0.25mg/mL，聚谷氨酸与壳聚糖的投料质量比为1:3，壳聚糖的浓度为0.5mg/mL，控制体系中聚谷氨酸和壳聚糖总质量与烟酰胺质量的质量比为15:1，常温搅拌4h制备得到γ-PGA/Ag+/CS-NA1纳米微囊溶液，通过透析进行纯化直到透析袋外的溶液中游离烟酰胺的含量低于0.01％。
实施例4
本实施例提供了一种包载烟酰胺的纳米微囊(γ-PGA/Ag+/CS-NA2)溶液的制备方法，包括如下步骤：
聚谷氨酸的分子量为1200kDa，室温搅拌下，将提前聚谷氨酸溶液与硝酸银溶液按一定比例混合，搅拌均匀，在壳聚糖溶液中加入双蒸水和烟酰胺溶液，将聚谷氨酸和银离子溶液缓慢逐滴滴加到壳聚糖和烟酰胺的混合溶液中，控制体系中银离子的浓度为0.25mg/mL，聚谷氨酸与壳聚糖的投料质量比为1:3，壳聚糖的浓度为0.5mg/mL，控制体系中聚谷氨酸和壳聚糖总质量与烟酰胺质量的质量比为10:1，常温搅拌4h制备得到γ-PGA/Ag+/CS-NA2纳米微囊溶液，通过透析进行纯化直到透析袋外的溶液中游离烟酰胺的含量低于0.01％。
图3为本实施例制备的γ-PGA/Ag+/CS-NA2纳米微囊溶液的粒径分布图，从图中可以看出，γ-PGA/Ag+/CS-NA2纳米微囊粒径集中分布在100～200nm之间，且PDI值小于30％，所形成的空白纳米微囊大小均匀。
图4为本实施例制备的γ-PGA/Ag+/CS-NA2纳米微囊溶液的扫描电镜图，从图中可以看出，γ-PGA/Ag+/CS-NA2纳米微囊在溶液中外貌呈球形，且分散均一稳定。
实施例5
本实施例提供了一种包载烟酰胺的纳米微囊(γ-PGA/Ag+/CS-NA3)溶液的制备方法，包括如下步骤：
聚谷氨酸的分子量为1200kDa，室温搅拌下，将提前聚谷氨酸溶液与硝酸银溶液按一定比例混合，搅拌均匀，在壳聚糖溶液中加入双蒸水和烟酰胺溶液，将聚谷氨酸和银离子溶液缓慢逐滴滴加到壳聚糖和烟酰胺的混合溶液中，控制体系中银离子的浓度为0.25mg/mL，聚谷氨酸与壳聚糖的投料质量比为1:3，壳聚糖的浓度为0.5mg/mL，控制体系中聚谷氨酸和壳聚糖总质量与烟酰胺质量的质量比为5:1，常温搅拌3h制备得到γ-PGA/Ag+/CS-NA3纳米微囊溶液，通过透析进行纯化直到透析袋外的溶液中游离烟酰胺的含量低于0.01％。
试验例
1、包封率与装载量的测定：
采用紫外分光光度计在波长200～400nm范围内对烟酰胺标样进行扫描，找出烟酰胺的最大吸收波长，并选用该波长为测定波长。已知烟酰胺在216nm和260nm左右各有一个吸收峰。根据文献，选择260nm处的特异性吸收峰。准确称取1g烟酰胺固体溶于1mL双蒸水中，以此为基础分别配置2、4、8、16、32、64、128、256、300μg/mL的标准贮备液，用紫外分光光度法测定在260nm处不同浓度的吸光度，并绘制吸光度与浓度的标准曲线(图5)。
所述γ-PGA/Ag+/CS-NA纳米微囊溶液高速(12000rpm)离心30min，收集上清液，稀释一定倍数，用紫外分光光度计在λ＝260nm测定吸光度值，代入烟酰胺的标准曲线，计算出游离烟酰胺的质量。烟酰胺的装载量(drug loading capacity，DLC)和包封率(encapsulation efficiency，EE)采用如下公式计算：
其中，M1为烟酰胺的总加入量，M2为未包载在纳米微囊中烟酰胺的量，M为纳米微囊的总质量。
表1实施例1～3的包封率(EE)和装载量(DLC)数据
包封率(EE)/％ 装载量(DLC)/％
实施例2 59.27 6.67
实施例3 70.24 10.33
实施例4 60.41 11.35
从表1中可以看出，实施例2～4的纳米微囊对烟酰胺的包封率可以达到55％以上，装载量为6～12％，其中，实施例3的包封率最优，且具有合适的装载量。
2、实施例3～5纳米微囊溶液保湿性评价：将包载烟酰胺的纳米微囊及甘油配置成5mg/mL的样品，测试温度为常温，在干燥器底部放入100g经干燥的变色硅胶，分别称取约2g溶液于直径3cm的称量皿中放置在硅胶干燥器中，进行保湿实验。每隔24h将称量皿取出称重，连续称重5次，由此测定前后试样的质量差。计算保湿率：保湿率(％)＝Hn/H0×100％(式中，Hn为放置n天后的含水质量，H0为放置前的含水质量)。
图6为实施例3～5的γ-PGA/Ag+/CS-NA纳米微囊的保湿性测试图，实验结果显示，三种微囊都具有良好的保湿效果。实验开始前两天内保湿含量高达70％及以上，四天内保湿含量略有下降，仍可达60％及以上，相对来说，保湿效果较为优越。主要原因是组成纳米微囊的原料主要为聚谷氨酸和壳聚糖，而聚谷氨酸有大量具有水合能力的三种官能团(羧基、羰基、氨基)以及氢键的存在，其保湿、锁水功效是透明质酸的500倍，同时壳聚糖本身也是玻尿酸合成的原料，有促进皮肤保湿成分玻尿酸的生成也可以起到保湿和抗皱的作用，增加皮肤水分和弹性，所以合成的三种包载烟酰胺的纳米微囊都具有良好的保湿效果。
3、实施例3～5纳米微囊溶液美白活性评价：通过在体外培养特定的细胞模型(小鼠黑素细胞-角质形成细胞共培养)，并采用CCK-8法检测美白成分对黑素细胞生长情况的抑制作用，并对待测物质的美白功效进行评价。称取一定量的纳米微囊溶于PBS溶液中并配置成不同浓度的待测样品。在96孔板中接种细胞悬液，每孔约100μL，做3个重复，将培养板放入培养箱中预培养一段时间(37℃,5％CO2)，向培养板各孔中加入不同浓度的待检测物质。向每孔中加入10μLCCK-8溶液，将培养板放入培养箱中孵育1-4h。用酶标仪测定450nm处的吸光度(OD)。设定空白组细胞存活率为100％，黑素细胞的抑制率按下式进行计算：
图7为实施例3～5的γ-PGA/Ag+/CS-NA纳米微囊的美白活性测试图，本实验研究了实例3～5合成的三种微囊和单独使用NA对小鼠黑色素瘤细胞的黑色素生成抑制实验，测试了γ-PGA/Ag+/CS-NA的美白效果。结果表明，三种微囊和NA对黑色素的生成均具有一定的抑制作用，其中包载烟酰胺的含量越高抑制效果越好。
4、实施例4纳米微囊溶液缓释实验：通过透析法研究包载烟酰胺纳米微囊在不同温度下释放行为。将1mL烟酰胺溶液和γ-PGA/Ag+/CS-NA加入透析袋中，分别放置于50mLpH为7.4的磷酸盐缓冲液中并设置三组重复试验。在120rpm的恒温培养箱中振荡，分别设置烟酰胺溶液为25℃和γ-PGA/Ag+/CS-NA溶液所处培养箱的温度为25℃、37℃、50℃，在0.5、1、3、6、12、24、48、72h的时间点取出1mL的释放介质，并同时加入1mL相同缓冲液，使用紫外分光光度计测定释放介质中烟酰胺的含量。
图8为实施例4的γ-PGA/Ag+/CS-NA2纳米微囊的缓释实验测试图，实验结果显示游离的烟酰胺溶液可以快速释放，24h后无微囊包载的烟酰胺几乎全部释放，而γ-PGA/Ag+/CS-NA纳米微囊对烟酰胺的释放具有控制和缓释作用，结果显示，当外界温度为25℃和30℃时控制缓释效果最好。
5、实施例3～5纳米微囊对皮肤的刺激性实验：以三种包载烟酰胺不同量的纳米微囊进行实验，将其分别配置成一定浓度并加入赋形剂制成乳膏，称取一定量的烟酰胺配置成一定浓度并加入赋形剂制成乳膏(烟酰胺的含量与装载量为6.67％的纳米微囊等同)。以BALB/c鼠(6-8周，18-22g)作为实验动物。实验步骤如下：选择20只健康小鼠，打上耳标，随机分为4组，每组5只，待其适应环境后将其背部去毛(沿脊柱两侧)，其中3组左侧去毛区涂抹微囊20mg右侧涂赋形剂20mg，剩余一组左侧去毛区涂抹烟酰胺20mg右侧涂赋形剂20mg，均用无菌且无刺激纱布加以覆盖。每组5只分成5个类别依次涂抹6h、12h、24h、48h、72h后用温水洗净。肉眼观察涂抹部位有无红肿和水肿等。根据下表计算每一观察时间点的皮肤反应积分的平均分值和刺激强度评价，进而观察其对皮肤的刺激性。
表2皮肤反应积分的平均分值和刺激强度评价表
表3实施例3～5纳米微囊对皮肤的刺激性实验结果
根据表3实验结果显示，相对单独的烟酰胺使用，微囊包载烟酰胺的乳膏剂对小鼠无任何刺激作用。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种包载烟酰胺的纳米微囊的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
将聚谷氨酸与银离子溶液的混合水溶液逐滴加入到壳聚糖和烟酰胺的混合水溶液中，混合搅拌进行交联反应，即得；所述交联反应的反应体系中，壳聚糖的浓度为0.3～1mg/mL，聚谷氨酸的浓度为0.1～0.3mg/mL。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述交联反应的反应体系中，银离子的浓度为0.1～0.3mg/mL，所述聚谷氨酸与银离子溶液的混合水溶液与所述壳聚糖和烟酰胺的混合水溶液的体积比为5～10:1。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述聚谷氨酸和壳聚糖的质量比为1:2～5；
所述聚谷氨酸的分子量为100～1400kDa；或，所述聚谷氨酸的分子量为1000～1400kDa。
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述烟酰胺的质量与壳聚糖和聚谷氨酸的总质量之比为1:5～15。
5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述银离子溶液的制备方法为：将硝酸银溶解于水中，然后加入聚乙烯吡咯烷酮，搅拌溶解，即得。
6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述壳聚糖和烟酰胺的混合水溶液的制备过程为：在壳聚糖溶液中加入烟酰胺溶液，即得；所述壳聚糖溶液的制备过程为：将壳聚糖粉末搅拌溶于水中，加入乙酸，搅拌至溶液澄清透明，静置至气泡完全消失，用氢氧化钠溶液调节pH至5.5～6.5，定容，即得。
7.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述混合搅拌时间为3-5h，转速为200～300rpm；所述交联反应的温度为25～33℃；所述混合搅拌进行交联反应过程中，调节反应体系的pH为5.5～6.5。
8.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，还包括对交联反应后的溶液进行透析的步骤，所述透析过程对游离烟酰胺的含量进行监测，直至烟酰胺的含量降至0.01％以下。
9.如权利要求1～8任一项所述的制备方法制备得到的包载烟酰胺的纳米微囊，其特征在于，所述包载烟酰胺的纳米微囊中，烟酰胺的装载量为5～12％，烟酰胺的包封率为55～75％。
10.如权利要求9所述的包载烟酰胺的纳米微囊在制备化妆品中的应用。
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