CN117511827A - 一种用于头皮护理与控油去屑的侧柏叶发酵产物及其制备方法和应用 - Google Patents
一种用于头皮护理与控油去屑的侧柏叶发酵产物及其制备方法和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种用于头皮护理与控油去屑的侧柏叶发酵产物及其制备方法和应用。该方法首先将酿酒酵母与枯草芽孢杆菌按4.7～5.3：0.7～1.3的质量比接种于发酵培养基中，发酵后灭菌，再接种特定乳酸菌菌群进行厌氧发酵，即得所述侧柏叶发酵产物。本发明侧柏叶发酵产物具有优异的头皮护理与控油去屑功效，适合作为和/或制备化妆品或医学用组合物。
Description
技术领域
本发明属于微生物发酵技术领域。更具体地，涉及一种用于头皮护理与控油去屑的侧柏叶发酵产物及其制备方法和应用。
背景技术
人们头皮上富含的甘油三酯饱和脂肪酸易被马拉色菌代谢为促炎的不饱和脂肪酸，导致头屑、出油等一系列问题，不利于人们的健康与形象管理，因此头皮的清洁与护理显得格外重要。
然而，由于现有头皮洗护产品中化学成分居多，或多或少带有刺激性成分，不适合长期使用，因此，研究者们逐渐将研究重心转移向成分安全友好的植物发酵产物上，且侧柏叶因本身带有控油的挥发油成分而成为研究热点之一，但不同微生物、不同发酵方式得到的侧柏叶发酵产物具有明显差异，功效相差较大。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，提供一种用于头皮护理与控油去屑的侧柏叶发酵产物及其制备方法和应用，通过将酿酒酵母、枯草芽孢杆菌、特定乳酸菌菌群按特定顺序进行混合发酵，得到的侧柏叶发酵产物与其它方式发酵得到的产物相比，具有更为优异的头皮护理与控油去屑的功效，十分适合作为和/或制备化妆品或医学用组合物。
本发明的第一目的是提供一种侧柏叶发酵产物的制备方法。
本发明的第二目的是提供上述方法制备得到的侧柏叶发酵产物。
本发明的第三目的是提供上述侧柏叶发酵产物在制备化妆品或医学用组合物中的应用。
本发明的第四目的是提供一种化妆品或医学用组合物。
本发明上述目的通过以下技术方案实现：
本发明提供了一种侧柏叶发酵产物的制备方法，包括如下步骤：
S1. 将酿酒酵母与枯草芽孢杆菌按4.7～5.3：0.7～1.3的质量比接种于发酵培养基中，发酵后灭菌；
S2. 将乳酸菌菌群接种于S1所得产物中，厌氧发酵即得所述侧柏叶发酵产物；
其中，S2所述乳酸菌菌群为：干酪乳杆菌1.7～2.3重量份、长双歧杆菌0.7～1.3重量份、青春双歧杆菌0.7～1.3重量份、植物乳杆菌1.7～2.3重量份、鼠李糖乳杆菌0.7～1.3重量份。
优选地，S1所述发酵培养基包括：侧柏叶提取物80～90重量份、野大豆籽提取物（GLYCINE SOJA (SOYBEAN) SEED EXTRACT）0.7～1.3重量份、山药粉1.8～2.3重量份、苦参粉0.7～1.3重量份、当归根粉0.7～1.3重量份、碳源0.5～2.5重量份、氮源0.5～2.5重量份、无机盐0.05～0.2重量份，水70～80重量份。其中，野大豆籽提取物与山药粉发酵后能协同增强产物的控油止痒活性，更好地滋润头皮，使头发更加柔顺亮泽；碳源、氮源、无机盐采用本领域常规的碳源、氮源、无机盐即可。
进一步优选地，所述侧柏叶提取物由粉碎的侧柏叶依次经酶解、加热得到。
更优选地，所述粉碎的侧柏叶的粒径为40～80目。
更优选地，所述酶解在含水的环境中进行。
更优选地，所述侧柏叶与水的质量比为4～8：60～120。
更优选地，所述酶解使用的酶由质量比1.7～2.3：0.7～1.3：0.7～1.3：0.7～1.3的纤维素酶、果胶酶、水解蛋白酶与中性蛋白酶组成，最优选为2：1：1：1。
更优选地，所述酶在水中的终浓度为0.1wt%～0.2wt%。
更优选地，所述酶解的温度为40～50 ℃。
更优选地，所述酶解的时间为4～10 h。
更优选地，所述加热为在78～82 ℃下加热20～30 min。
进一步优选地，所述山药粉的粒径为40～80目。
进一步优选地，所述苦参粉的粒径为40～80目。
进一步优选地，所述当归根粉的粒径为40～80目。
优选地，S1所述发酵培养基在接种酿酒酵母与枯草芽孢杆菌前，先进行灭菌，如在115～125 ℃下灭菌15～25 min，最优选为121 ℃下灭菌20 min。
优选地，S1所述酿酒酵母与枯草芽孢杆菌在发酵培养基中的接种总浓度为2wt%～5wt%。
优选地，S1所述发酵的温度为30～32 ℃。
优选地，S1所述发酵的时间为8～16 h。
优选地，S1所述发酵的同时还进行振荡，振荡的转速为120～200 r/min。
优选地，S1所述灭菌为在80～85 ℃下灭菌18～22 min。
优选地，S2所述乳酸菌菌群在S1所得产物中的接种浓度为2wt%～5wt%。
优选地，S2所述厌氧发酵的温度为33～37 ℃。
优选地，S2所述厌氧发酵的时间为18～48 h。
优选地，S2所述厌氧发酵的pH为5.0～6.5。
优选地，S2所述厌氧发酵的同时还进行振荡，振荡的转速为200～250 r/min。
优选地，S2所述厌氧发酵后，还进行后处理，如依次进行离心、过滤、浓缩、复配。
进一步优选地，所述离心为在7000～9000 r/min下离心8～12 min。
进一步优选地，所述浓缩的终点为将过滤所得液体浓缩至体积的45%～55%。
进一步优选地，所述浓缩为在78～83 ℃下进行旋干。在该温度下进行旋干，还能同时达到灭菌的效果。
进一步优选地，所述复配为：将90～95重量份的浓缩所得产物、4～6重量份的1,3-丁二醇、1.7～2.3重量份的1,2-己二醇混匀。目的是进一步增强产物的溶解性与稳定性，且避免了乙醇等刺激性物质的使用，使复配产物对头皮更加友好。
上述方法制得的侧柏叶发酵产物中总黄酮、多糖、氨基酸与有机酸等活性成分含量较高，具有优异的抑菌、头皮护理与控油去屑的功效，且其控油起效快、时间长、效果好，协同改善了头皮的生态平衡，给头发带来了年轻健康的修复效果。因此，上述方法制备得到的侧柏叶发酵产物，上述侧柏叶发酵产物在制备化妆品或医学用组合物中的应用，以及包含上述侧柏叶发酵产物和化妆品或医学上可接受的辅料的一种化妆品或医学用组合物均应在本发明的保护范围之内。
本发明具有以下有益效果：
本发明通过将酿酒酵母、枯草芽孢杆菌、特定乳酸菌菌群按特定顺序进行混合发酵，得到的侧柏叶发酵产物与其它方式发酵得到的产物相比，具有更为优异的头皮护理与控油去屑的功效，能显著改善头皮的生态平衡，十分适合作为和/或制备化妆品或医学用组合物。
具体实施方式
以下结合具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
纤维素酶：食品级，购自夏盛。
果胶酶：食品级，购自夏盛。
水解蛋白酶：食品级，购自诺维信。
中性蛋白酶：食品级，购自夏盛。
实施例1 侧柏叶发酵产物的制备
S1. 将酿酒酵母与枯草芽孢杆菌按5：1的质量比接种于发酵培养基中（使酿酒酵母与枯草芽孢杆菌在发酵培养基中的接种总浓度为3wt%），于31 ℃、160 r/min下发酵12 h后，在80 ℃下灭菌20 min；
S2. 用10wt%柠檬酸溶液与10wt%磷酸氢二钠溶液调节S1所得产物的pH至5.5，再将乳酸菌菌群接种于S1所得产物中（使乳酸菌菌群在S1所得产物中的接种浓度为3wt%），于35 ℃、230 r/min下厌氧发酵33 h，并在8000 r/min下离心10 min后进行过滤，然后在80℃下旋干至体系体积的50%，最后将旋干所得产物、1,3-丁二醇、1,2-己二醇按93：5：2的质量比混匀，即得所述侧柏叶发酵产物；
其中，S1所述发酵培养基的制备方法为：将85重量份的侧柏叶提取物、1重量份的野大豆籽提取物、2重量份粒径60目的山药粉、1重量份粒径60目的苦参粉、1重量份粒径60目的当归根粉、1.5重量份的蔗糖、1.5重量份的蛋白胨、0.1重量份的磷酸二氢钾加入75重量份的水中，于121 ℃下灭菌20 min；所述侧柏叶提取物的制备方法为：将粒径60目的侧柏叶加入水中（使侧柏叶与水的质量比为6：90），再加入质量比2：1：1：1的纤维素酶、果胶酶、水解蛋白酶与中性蛋白酶（使酶在水中的终浓度为0.15wt%）后，于45 ℃下酶解7 h，再在80℃下加热25 min；
S2所述乳酸菌菌群为：干酪乳杆菌2重量份、长双歧杆菌1重量份、青春双歧杆菌1重量份、植物乳杆菌2重量份、鼠李糖乳杆菌1重量份。
实施例2 侧柏叶发酵产物的制备
S1. 将酿酒酵母与枯草芽孢杆菌按4.7：1.3的质量比接种于发酵培养基中（使酿酒酵母与枯草芽孢杆菌在发酵培养基中的接种总浓度为2wt%），于30 ℃、200 r/min下发酵16 h后，在80 ℃下灭菌22 min；
S2. 用10wt%柠檬酸溶液与10wt%磷酸氢二钠溶液调节S1所得产物的pH至6.5，再将乳酸菌菌群接种于S1所得产物中（使乳酸菌菌群在S1所得产物中的接种浓度为2wt%），于37 ℃、200 r/min下厌氧发酵18 h，并在7000 r/min下离心12 min后进行过滤，然后在83℃下旋干至体系体积的45%，最后将旋干所得产物、1,3-丁二醇、1,2-己二醇按90：6：1.7的质量比混匀，即得所述侧柏叶发酵产物；
其中，S1所述发酵培养基的制备方法为：将80重量份的侧柏叶提取物、0.7重量份的野大豆籽提取物、2.3重量份粒径80目的山药粉、0.7重量份粒径80目的苦参粉、0.7重量份粒径80目的当归根粉、2.5重量份的蔗糖、0.5重量份的蛋白胨、0.2重量份的磷酸二氢钾加入70重量份的水中，于115 ℃下灭菌25 min；所述侧柏叶提取物的制备方法为：将粒径80目的侧柏叶加入水中（使侧柏叶与水的质量比为4：120），再加入质量比2.3：0.7：0.7：0.7的纤维素酶、果胶酶、水解蛋白酶与中性蛋白酶（使酶在水中的终浓度为0.2wt%）后，于40 ℃下酶解10 h，再在78 ℃下加热30 min；
S2所述乳酸菌菌群为：干酪乳杆菌2.3重量份、长双歧杆菌0.7重量份、青春双歧杆菌0.7重量份、植物乳杆菌2.3重量份、鼠李糖乳杆菌0.7重量份。
实施例3 侧柏叶发酵产物的制备
S1. 将酿酒酵母与枯草芽孢杆菌按5.3：0.7的质量比接种于发酵培养基中（使酿酒酵母与枯草芽孢杆菌在发酵培养基中的接种总浓度为5wt%），于32 ℃、120 r/min下发酵8 h后，在85 ℃下灭菌18 min；
S2. 用10wt%柠檬酸溶液与10wt%磷酸氢二钠溶液调节S1所得产物的pH至5.0，再将乳酸菌菌群接种于S1所得产物中（使乳酸菌菌群在S1所得产物中的接种浓度为5wt%），于33 ℃、250 r/min下厌氧发酵48 h，并在9000 r/min下离心8 min后进行过滤，然后在78 ℃下旋干至体系体积的55%，最后将旋干所得产物、1,3-丁二醇、1,2-己二醇按95：4：2.3的质量比混匀，即得所述侧柏叶发酵产物；
其中，S1所述发酵培养基的制备方法为：将90重量份的侧柏叶提取物、1.3重量份的野大豆籽提取物、1.8重量份粒径40目的山药粉、1.3重量份粒径40目的苦参粉、1.3重量份粒径40目的当归根粉、0.5重量份的蔗糖、2.5重量份的蛋白胨、0.05重量份的磷酸二氢钾加入80重量份的水中，于125 ℃下灭菌15 min；所述侧柏叶提取物的制备方法为：将粒径40目的侧柏叶加入水中（使侧柏叶与水的质量比为8：60），再加入质量比1.7：1.3：1.3：1.3的纤维素酶、果胶酶、水解蛋白酶与中性蛋白酶（使酶在水中的终浓度为0.1wt%）后，于50 ℃下酶解4 h，再在82 ℃下加热20 min；
S2所述乳酸菌菌群为：干酪乳杆菌1.7重量份、长双歧杆菌1.3重量份、青春双歧杆菌1.3重量份、植物乳杆菌1.7重量份、鼠李糖乳杆菌1.3重量份。
实施例4 侧柏叶发酵产物的制备
同实施例1，区别在于，旋干所得产物即为最终的侧柏叶发酵产物，不将其与1,3-丁二醇、1,2-己二醇混匀。即S2具体如下：
S2. 用10wt%柠檬酸溶液与10wt%磷酸氢二钠溶液调节S1所得产物的pH至5.5，再将乳酸菌菌群接种于S1所得产物中（使乳酸菌菌群在S1所得产物中的接种浓度为3wt%），于35 ℃、230 r/min下厌氧发酵33 h，并在8000 r/min下离心10 min后进行过滤，然后在80℃下旋干至体系体积的50%，即得所述侧柏叶发酵产物。
对比例1
同实施例1，区别在于，不进行S1。即S1和S2直接替换为：
用10wt%柠檬酸溶液与10wt%磷酸氢二钠溶液调节发酵培养基的pH至5.5，再将乳酸菌菌群接种于发酵培养基中（使乳酸菌菌群在发酵培养基中的接种浓度为3wt%），于35℃、230 r/min下厌氧发酵33 h，并在8000 r/min下离心10 min后进行过滤，然后在80 ℃下旋干至体系体积的50%，最后将旋干所得产物、1,3-丁二醇、1,2-己二醇按93：5：2的质量比混匀，即得所述侧柏叶发酵产物。
对比例2
同实施例1，区别在于，S2所述乳酸菌菌群中的长双歧杆菌替换为短双歧杆菌。
对比例3
同实施例1，区别在于，S2所述乳酸菌菌群中的青春双歧杆菌替换为两歧双歧杆菌。
对比例4
同实施例1，区别在于，S2所述乳酸菌菌群中的鼠李糖乳杆菌替换为瑞士乳杆菌。
对比例5
同实施例1，区别在于，先接种乳酸菌菌群进行厌氧发酵，再接种酿酒酵母与枯草芽孢杆菌进行发酵。即S1和S2具体如下：
S1. 用10wt%柠檬酸溶液与10wt%磷酸氢二钠溶液调节发酵培养基的pH至5.5，再将乳酸菌菌群接种于发酵培养基中（使乳酸菌菌群在发酵培养基中的接种浓度为3wt%），于35 ℃、230 r/min下厌氧发酵33 h，并在8000 r/min下离心10 min后进行过滤；
S2. 用10wt%柠檬酸溶液与10wt%磷酸氢二钠溶液调节S1所得产物的pH至6.0，再接种质量比为5：1的酿酒酵母与枯草芽孢杆菌（使酿酒酵母与枯草芽孢杆菌在S1所得产物中的接种总浓度为3wt%），于31 ℃、160 r/min下发酵12 h后，在80 ℃下灭菌20 min，然后在80 ℃下旋干至体系体积的50%，最后将旋干所得产物、1,3-丁二醇、1,2-己二醇按93：5：2的质量比混匀，即得所述侧柏叶发酵产物。
对比例6
同实施例1，区别在于，S1仅接种枯草芽孢杆菌。即S1具体如下：
S1. 将枯草芽孢杆菌接种于发酵培养基中（使枯草芽孢杆菌在发酵培养基中的接种浓度为3wt%），于31 ℃、160 r/min下发酵12 h后，在80 ℃下灭菌20 min。
对比例7
同实施例1，区别在于，S1仅接种酿酒酵母。即S1具体如下：
S1. 将酿酒酵母接种于发酵培养基中（使酿酒酵母在发酵培养基中的接种浓度为3wt%），于31 ℃、160 r/min下发酵12 h后，在80 ℃下灭菌20 min。
对比例8
同实施例1，区别在于，不接种乳酸菌菌群。即S1和S2直接替换为：
将酿酒酵母与枯草芽孢杆菌按5：1的质量比接种于发酵培养基中（使酿酒酵母与枯草芽孢杆菌在发酵培养基中的接种总浓度为3wt%），于31 ℃、160 r/min下发酵12 h后，在80 ℃下灭菌20 min，然后在80 ℃下旋干至体系体积的50%，最后将旋干所得产物、1,3-丁二醇、1,2-己二醇按93：5：2的质量比混匀，即得所述侧柏叶发酵产物。
测试例1 侧柏叶发酵产物的控油功效测试
一、测试方法
（1）试剂的配制：
睾酮（T）溶液：将睾酮溶解于无水乙醇中，得到浓度5 mmol/L的睾酮溶液；
NADPH溶液：将NADPH四钠盐溶解于水中，得到浓度2 mmol/L的NADPH溶液；
反应液：将DTT、磷酸钠共同溶于水，使DTT、磷酸钠的终浓度分别为1 mmol/L、20mmo/L，得到反应液。
（2）5α-还原酶活力的测定：
将反应成分按先后顺序（反应液155 μL，37 ℃恒温；睾酮溶液10 μL；NADPH溶液10μL；5α-还原酶20 μL）混合，连续监测4 min内340 nm处反应体系吸光值的变化，以变化的速度反映5α-还原酶的活力（在温度为37 ℃的反应体系中，使NADPH浓度每分钟下降1 μmol/L的酶量为一个酶活力单位），记为初始酶活力。
（3）侧柏叶发酵产物的5α-还原酶抑制率测定：
将反应成分按先后顺序（反应液155 μL，37 ℃恒温；睾酮溶液10 μL；NADPH溶液10μL；分别取实施例1～4和对比例1～8的侧柏叶发酵产物15 μL；5α-还原酶20 μL）混合，连续监测4 min内340 nm处反应体系吸光值的变化，参考NADPH标准曲线计算5α-还原酶失活的酶活力，再根据“5α-还原酶抑制率=失活的酶活力/初始酶活力×100%”计算出侧柏叶发酵产物的5α-还原酶抑制率。
二、测试结果
结果如表1所示。
表1 5α-还原酶抑制率统计结果（单位：%）
可见，实施例1～4所得侧柏叶发酵产物的5α-还原酶抑制率显著高于对比例1～8，表明正是本发明通过将酿酒酵母、枯草芽孢杆菌、特定乳酸菌菌群按特定顺序进行混合发酵，才能显著提升侧柏叶发酵产物的控油功效。
测试例2 侧柏叶发酵产物的抑菌功效测试
一、测试方法
首先用无菌生理盐水将金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、糠秕马拉色菌制成1.0×105cfu/mL的菌悬液，并分别取1 mL均匀涂抹于营养琼脂培养基表面。再用无菌水将实施例1～4和对比例1～8所得侧柏叶发酵产物调配成20 mg/mL的溶液，并分别取20μL滴加于无菌干燥滤纸片（直径5 mm）上。最后将滴加有侧柏叶发酵产物溶液的滤纸片分别置于前述涂抹有菌悬液的营养琼脂培养基表面，并以滴加有等体积无菌水的滤纸片作为阴性对照组，均置于36 ℃恒温培养箱中培养18 h后，用游标卡尺测量抑菌环的直径三次，结果取平均值。
二、测试结果
阴性对照组无抑菌圈产生，其它组的抑菌圈测试结果如表2所示。
表2 抑菌圈测试结果（单位：mm）
可见，实施例1～4所得侧柏叶发酵产物对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、糠秕马拉色菌的抑制效果显著高于对比例1～8，表明正是本发明通过将酿酒酵母、枯草芽孢杆菌、特定乳酸菌菌群按特定顺序进行混合发酵，才能显著提升侧柏叶发酵产物去屑抑菌的功效。
测试例3 含侧柏叶发酵产物的精华液的控油功效测试
一、精华液1～12的制备
根据如表3所示的用量，首先将甘油、对羟基苯乙酮、卡波姆940混匀后，静置0.5h，再加入A相中的去离子水，加热至90 ℃，得到A相；再将B相所有原料混匀，加入A相中，于1000 bar下均质10 min（此时体系均匀，无颗粒）后，将温度降至50 ℃，再于1000 bar下均质5 min，搅拌降温至25 ℃，即得到精华液1～12（其中，精华液1～4为含有实施例1～4所得侧柏叶发酵产物的精华液，精华液5～12为含有对比例1～8所得侧柏叶发酵产物的精华液）。
表3 精华液1～12的组成
二、精华液1～12控油功效的测试方法
选取120名头皮较油腻且油腻程度接近的受试者，年龄在40～55岁之间，受试者自愿参加测试并签署知情同意书，测试期间受试者禁止使用指定洗发水（市售的不具备控油功效的洗发水）和测试精华液之外的任何发用产品。测试环境温度23～25 ℃，湿度40％～60％。
将上述120名受试者随机分为12组，每组10名，受试者测试前24小时不洗头，采用Antsci Skin-SP皮肤测试仪（皮肤油脂测试探头）测试头皮油脂含量的初始值。现场使用指定市售洗发水后，吹干头发，立刻用Antsci Skin-SP皮肤测试仪（皮肤油脂测试探头）测试头皮的油脂含量，记为0 h的数据。然后每组分别在头皮上涂抹精华液1～12（确保每个测试区域真正接触到精华液的实际含量没有明显差异），按摩10 min后，无需用水清洗，再在该测试环境中静坐8 h，于4 h和8 h时测定受试者头皮同一区域的头皮油脂含量。每次重复测定三次，结果取平均值。
三、精华液1～12控油功效的测试结果
头皮油脂含量测试结果如表4所示。
表4 头皮油脂含量的测试结果（单位：μg/cm2）
可见，含有实施例1～4所得侧柏叶发酵产物的精华液对头皮油脂的抑制作用显著高于含对比例1～8所得侧柏叶发酵产物的精华液，表明正是本发明通过将酿酒酵母、枯草芽孢杆菌、特定乳酸菌菌群按特定顺序进行混合发酵，得到的侧柏叶发酵产物在用于头皮时才能发挥优异的控油功效。
测试例4 含侧柏叶发酵产物的精华液的头皮护理功效测试
一、体外称重法测定原理
吸湿、保湿能力的差异会带来样品对水分子作用的差异，进而带来吸收水分和保持水分能力的差异。样品的吸湿能力越强，其对水分子的结合力就越强，吸收和保持水分的量也就越大；样品的保湿能力越强，其封闭性就越好，散失水分的量也就越少。利用胶带模仿角质层、表皮等生物材料，在胶带上涂布样品，模拟样品的实际应用状况。在恒温恒湿（20℃，湿度40%）的环境中放置一定时间后，称量样品放置前后的质量差，求出样品的质量损失，即可直观反映出样品的保湿能力，进而反映出样品的头皮护理功效。
二、精华液1～12的制备
同测试例3。
三、测试方法
（1）精华液1～12组：
S1. 将醋酸钾饱和溶液、硫酸铵饱和溶液分别置于20 ℃的密闭箱内，直至密闭箱内部的湿度达到40%；
S2. 用分析天平称量12块贴有3 cm胶布的玻璃板质量M0（12块玻璃板和胶布的质量均保持一致）；
S3. 用玻璃棒将精华液1～12分别均匀涂抹在前述玻璃板上，用分析天平称量此时的玻璃板质量M1（保证12块玻璃板质量M1一致），再置于前述密封箱内；
S4. 分别于放置0.5 h、4 h时，取出玻璃板，用分析天平称量此时玻璃板的质量M2（0.5 h取出称量后立即放回前述密封箱中）。
（2）阴性对照组：
同精华液1～12组，区别在于，将精华液中的侧柏叶发酵产物替换为等质量的去离子水。
四、测试结果
根据“保湿率=（M2-M0）/（M1-M0）×100%”计算得到精华液1～12组与阴性对照组的保湿率，结果如表5所示。
表5 保湿率的测试结果（单位：%）
可见，含有实施例1～4所得侧柏叶发酵产物的精华液的保湿率显著高于含对比例1～8所得侧柏叶发酵产物的精华液，即含有实施例1～4所得侧柏叶发酵产物的精华液具有优异的头皮护理功效。表明正是本发明通过将酿酒酵母、枯草芽孢杆菌、特定乳酸菌菌群按特定顺序进行混合发酵，得到的侧柏叶发酵产物才能发挥优异的头皮护理功效。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种侧柏叶发酵产物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1. 将酿酒酵母与枯草芽孢杆菌按4.7～5.3：0.7～1.3的质量比接种于发酵培养基中，发酵后灭菌；
S2. 将乳酸菌菌群接种于S1所得产物中，厌氧发酵即得所述侧柏叶发酵产物；
其中，S2所述乳酸菌菌群为：干酪乳杆菌1.7～2.3重量份、长双歧杆菌0.7～1.3重量份、青春双歧杆菌0.7～1.3重量份、植物乳杆菌1.7～2.3重量份、鼠李糖乳杆菌0.7～1.3重量份。
2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，S1所述发酵培养基包括：侧柏叶提取物80～90重量份、野大豆籽提取物0.7～1.3重量份、山药粉1.8～2.3重量份、苦参粉0.7～1.3重量份、当归根粉0.7～1.3重量份、碳源0.5～2.5重量份、氮源0.5～2.5重量份、无机盐0.05～0.2重量份，水70～80重量份。
3.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于，所述侧柏叶提取物由粉碎的侧柏叶依次经酶解、加热得到。
4.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，S1所述酿酒酵母与枯草芽孢杆菌在发酵培养基中的接种总浓度为2wt%～5wt%。
5. 根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，S1所述发酵的温度为30～32 ℃。
6.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，S2所述乳酸菌菌群在S1所得产物中的接种浓度为2wt%～5wt%。
7. 根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，S2所述厌氧发酵的温度为33～37 ℃。
8.权利要求1～7任一所述方法制备得到的侧柏叶发酵产物。
9.权利要求8所述侧柏叶发酵产物在制备化妆品或医学用组合物中的应用。
10.一种化妆品或医学用组合物，其特征在于，包含权利要求8所述侧柏叶发酵产物，以及化妆品或医学上可接受的辅料。
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