CN117442720A - 抗硬化蛋白抗体在治疗成骨不全症中的用途 - Google Patents

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Abstract

本申请公开了用于治疗患有成骨不全症的患者的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的抗硬化蛋白抗体。还公开了通过向成骨不全症患者施用治疗有效量的抗硬化蛋白抗体来在所述患者中增加骨形成和减少骨吸收的方法。还公开了用于在成骨不全症患者中提升骨形成和减少骨吸收的组合物。所述组合物包含治疗有效量的抗硬化蛋白抗体。本发明还提供了用于治疗成骨不全症的抗硬化蛋白抗体。

Description

抗硬化蛋白抗体在治疗成骨不全症中的用途
本申请是申请号为201780087087.2、申请日为2017年12月21日、发明名称为“抗硬化蛋白抗体在治疗成骨不全症中的用途”的中国发明专利申请的分案申请，原申请为国际申请号为PCT/GB2017/053850的国家阶段申请，该国际申请要求申请日为2016年12月21日，申请号为62/437,353的美国申请的优先权。
技术领域
本发明涉及抗体及其作为药物组合物的用途，更具体地涉及抗硬化蛋白抗体在治疗成骨不全症中的用途。
序列表
本申请包含序列表，所述序列表已经通过EFS-Web以ASCII格式提交，并且其全部内容通过引用并入本文。2016年12月21日创建的ASCII拷贝命名为P069492US_SeqListing.txt，大小为153千字节。
背景技术
成骨不全症(OI)是一种罕见的结缔组织遗传疾病，以骨脆性和骨量减少为特征。OI包括一组主要(但并非总是)由编码I型胶原的基因的突变引起的遗传性疾病。大约85％的病例与编码I型胶原的两个基因(COL1A1和COL1A2)中一个发生突变有关。临床上，OI的特征是脆弱的骨容易在没有任何创伤的情况下发生骨折。此外，患有OI的患者通常饱受肌肉无力、听力丧失、疲劳、关节松弛、弯曲的骨骼、脊柱侧凸、蓝色巩膜、牙本质发育不全和身材矮小的影响。
临床分类系统将OI分为I-V型。I型OI患者通常患有轻微的非变形疾病，其通常与COL1A1中的过早终止的密码子相关。该缺陷导致I型胶原的生产速度降低，并且骨中胶原的量减少。II型OI的患者通常在围产期死亡，这是由包括肋骨在内的多个严重骨折引起的呼吸衰竭所造成的。III型和IV型OI通常与COL1A1和COL1A2中的甘氨酸取代相关，这是一种定性缺陷，其阻止I型胶原的3条多肽链适当地缠绕以形成正常的三重α螺旋结构。III型OI是在婴儿期存活的患儿中最严重的OI形式，而IV型患者具有轻度至中度的骨畸形。V型OI不常见。
仍然需要用于治疗OI的治疗方法和试剂。
发明内容
发明人惊奇地发现，如实施例所确定的，患有成骨不全症(OI)的人患者可以成功地用抗硬化蛋白抗体进行治疗，这证实抗硬化蛋白抗体可以在OI患者中增加骨形成并减少骨的再吸收。在我们的美国专利号7,879,322、8,246,953和8,486,661中，我们公开了具有高亲和力的、中和性的抗硬化蛋白的全人单克隆抗体(统称为“人抗硬化蛋白单克隆抗体”)及其强大的体外活性和体内活性，所述美国专利的全部内容在此通过引用并入本文。
在一个方面，本发明是用于治疗患有成骨不全症的患者的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的抗硬化蛋白抗体。在一个实施方案中，本发明是通过向成骨不全症患者施用治疗有效量的抗硬化蛋白抗体来在所述患者中增加骨形成和减少骨吸收的方法。在另一个方面，本发明提供了用于治疗成骨不全症的抗硬化蛋白抗体。在一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体增加骨形成和/或减少骨吸收。以下实施方案适用于所述两个方面。在一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体包含：a)至少一个免疫球蛋白重链可变结构域(VH)，其在序列高变区中包含重链可变区CDR1、重链可变区CDR2和重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR1包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列，且所述重链可变区CDR3包含氨基酸SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列；和b)至少一个免疫球蛋白轻链可变结构域(VL)，其在序列高变区中包含轻链可变区CDR1、轻链可变区CDR2和轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列，所述轻链可变区CDR2包含SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列，且所述轻链可变区CDR3包含氨基酸SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列。在另一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体包含至少一种或多种选自下组的互补决定区(CDR)序列：(a)重链可变区CDR1，其包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；(b)重链可变区CDR2，其包含SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列；(c)重链可变区CDR3，其包含SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列；(d)轻链可变区CDR1，其包含SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列；(e)轻链可变区CDR2，其包含SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列；和(f)轻链可变区CDR3，其包含SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列。在一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体至少包含所述重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列。在一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体包含所有6个上述CDR。
在另一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体包含：(a)重链可变区CDR1，其包含SEQID NO:4所示的氨基酸序列；(b)重链可变区CDR2，其包含SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列；(c)重链可变区CDR3，其包含SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列；(d)轻链可变区CDR1，其包含SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列；(e)轻链可变区CDR2，其包含SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列；和(f)轻链可变区CDR3，其包含SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列；或者抗硬化蛋白抗体，其结合的表位与包含以下的抗硬化蛋白抗体结合的表位相同：(a)重链可变区CDR1，其包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；(b)重链可变区CDR2，其包含SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列；(c)重链可变区CDR3，其包含SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列；(d)轻链可变区CDR1，其包含SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列；(e)轻链可变区CDR2，其包含SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列；和(f)轻链可变区CDR3，其包含SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列。在相关的实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体结合的表位与包含VL多肽序列和VH多肽序列的抗硬化蛋白抗体结合的表位相同，所述VL多肽序列具有SEQ ID NO:81所示的氨基酸序列以及所述VH多肽序列具有SEQ ID NO:70所示的氨基酸序列。在另一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体结合的表位与包含全长轻链氨基酸序列和全长重链氨基酸序列的抗硬化蛋白抗体结合的表位相同，所述全长轻链氨基酸序列具有SEQ ID NO:125所示的氨基酸序列以及所述全长重链氨基酸序列具有SEQ ID NO:114所示的氨基酸序列。在一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体结合的表位与包含全长轻链氨基酸序列和全长重链氨基酸序列的抗硬化蛋白抗体结合的表位相同，所述全长轻链氨基酸序列具有SEQ ID NO:173所示的氨基酸序列以及所述全长重链氨基酸序列具有SEQ ID NO:172所示的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体结合以下人硬化蛋白序列内的表位：CGPARLLPNAIGRGKWWRPSGPDFRC(“环2表位”；SEQ ID NO:174)和/或DVSEYCRELHFTRSAKPVTELVCSGQCGPAR WWRPSGPDFRCIPDRYR LVASCKCKRLTR(“T20.6表位”SEQ ID NO:175)。因此，在一个实施方案中，本发明所述抗硬化蛋白抗体结合所述环2表位或其内部。在另一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体结合所述T20.6表位或其内部。结合所述环2和T20.6表位区域或其内部的所述抗硬化蛋白抗体是本领域已知的-参见，例如，WO00/32773、WO2005/003158、WO2005/014650、WO2006/119107、WO2006/119062、WO2009/039175和WO2008/061013。WO2006/119062中公开的‘Ab-A’、‘Ab-B‘、‘Ab-C’、‘Ab-D’和Ab-1抗体通过引用明确地并入本公开内容，明确地包括这些抗体的所述6个CDR，重链和轻链可变序列以及全长重链和轻链序列。在一个实施方案中，本发明所述抗硬化蛋白抗体结合的表位与包含VL多肽序列和VH多肽序列的抗硬化蛋白抗体结合的表位相同，所述VL多肽序列具有SEQ ID NO:176所示的氨基酸序列以及所述VH多肽序列具有SEQ ID NO:177所示的氨基酸序列。在另一个实施方案中，本发明所述抗硬化蛋白抗体与WO2006/119062中公开的Ab-A、Ab-B、Ab-C或Ab-D结合相同的表位。
在一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体选自blosozumab。
在另一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体包含VH，所述VH与SEQ ID NO:70所示的氨基酸序列具有至少90％(例如至少95％、98％或99％或100％)的同一性。在又一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体包含VL，所述VL与SEQ ID NO:81所示的氨基酸序列具有至少90％(例如至少95％、98％或99％或100％)的同一性。在又一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体包含VH和VL，所述VH与SEQ ID NO:70所示的氨基酸序列具有至少90％(例如至少95％、98％或99％或100％)的同一性，以及所述VL与SEQ ID NO:81所示的氨基酸序列具有至少90％(例如至少95％、98％或99％或100％)的同一性。在又一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体包含VH和VL，所述VH具有SEQ ID NO:70所示的氨基酸序列，以及所述VL具有SEQID NO:81所示的氨基酸序列。在又一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体包含重链，所述重链与SEQ ID NO:114或172所示的氨基酸序列具有至少90％(例如至少95％、98％或99％或100％)的同一性，和/或与具有SEQ ID NO:125或173所示的氨基酸序列的轻链具有至少90％(例如至少95％、98％或99％或100％)的同一性。在一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体包含重链和轻链，所述重链具有SEQ ID NO:172所示的氨基酸序列，所述轻链具有SEQID NO:173所示的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体的治疗有效量为约1-50mg所述抗体/kg所述人患者体重。
本发明的另一方面是用于在骨不全症患者中增加骨形成和减少骨吸收的药物组合物。在一些实施方案中，所述组合物含有抗硬化蛋白抗体，所述抗硬化蛋白抗体包含：a)至少一个免疫球蛋白重链可变结构域(VH)，其在序列高变区中包含重链可变区CDR1、重链可变区CDR2和重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR1包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列，并且所述重链可变区CDR3包含SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列；和b)至少一个免疫球蛋白轻链可变结构域(VL)，其在序列高变区中包含轻链可变区CDR1、轻链可变区CDR2和轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列，所述轻链可变区CDR2包含SEQ ID NO：48所示的氨基酸序列，并且所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列。
在另一个实施方案中，所述药物组合物中的所述抗硬化蛋白抗体包含VH，所述VH与SEQ ID NO:70所示的氨基酸序列具有至少95％的同一性。在又一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体包含VL，所述VL与SEQ ID NO:81所示的氨基酸序列具有至少95％的同一性。
在另一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体包含VH和VL，所述VH与SEQ ID NO:70所示的氨基酸序列具有至少95％的同一性，以及所述VL与SEQ ID NO:81所示的氨基酸序列具有至少95％的同一性。在又一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体包含VH和VL，所述VH具有SEQ ID NO:70所示的氨基酸序列，以及所述VL具有SEQ ID NO:81所示的氨基酸序列。在又一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体包含具有SEQ ID NO:114或172所示的氨基酸序列的重链，和/或具有SEQ ID NO:125或173所示的氨基酸序列的轻链。
在一个方面，本发明提供了药物组合物，所述药物组合物包含本文公开的抗硬化蛋白抗体。在一个实施方案中，所述药物组合物可用于本文所述的方法/用途。
附图说明
图1显示了骨代谢生物标志物的单样本t-检验分析结果表。
图2显示了骨代谢生物标志物的双样品t-检验分析结果表。
图3显示了PINP的几何平均值(±SD)与基线的比率图。
图4显示了PICP的几何平均值(±SD)与基线的比率图。
图5显示了BSAP的几何平均值(±SD)与基线的比率图。
图6显示了OC的几何平均值(±SD)与基线的比率图。
图7显示了腰椎BMD(通过DXA测得)数据与基线的比率的贝叶斯后验概率图。
图8显示了CTX-1的几何平均值(±SD)与基线的比率图。
具体实施方式
本发明基于以下意外且令人惊讶的发现：即具有成骨不全症(OI)的人患者可以用抗硬化蛋白抗体成功地进行治疗。如实施例中所示，向人OI患者施用抗硬化蛋白抗体能增加骨形成并减少骨吸收。
背景方面，硬化蛋白是天然存在的蛋白质，其在人类中由SOST基因编码。硬化蛋白是一种分泌型糖蛋白，具有C末端半胱氨酸结样(CTCK)结构域，并且与骨形态发生蛋白(BMP)拮抗因子的DAN(神经母细胞瘤中的差异筛选的选择基因异常)家族具有序列相似性。
如本发明人首次所示，用抗硬化蛋白抗体抑制硬化蛋白可增强骨的形成和密度，并为治疗人OI提供有益效果。与过去使用能提升骨转换的GH或PTH的合成代谢(anabolic)治疗不同，在OI患者中用抗硬化蛋白抗体进行治疗具有刺激骨形成同时抑制骨吸收的优点。因此，抗硬化蛋白抗体的临床应用包括治疗人的成骨不全症，其中骨形成在对于以显著缺乏骨基质为特征的疾病中具有治疗益处。
因此，本发明涉及在治疗OI中使用抗硬化蛋白抗体的方法，以及包含用于治疗OI的抗硬化蛋白抗体的组合物。在一个方面，本发明涉及I、III或IV型成骨不全症的治疗。因此，本发明提供了抗硬化蛋白抗体和用于治疗OI(优选I、III或IV型OI)的包含所述抗体的药物组合物。在一个实施方案中，本发明所述抗硬化蛋白抗体是单克隆抗硬化蛋白抗体。在一个实施方案中，本发明所述抗硬化蛋白抗体是人或人源化单克隆抗硬化蛋白抗体。或者，所述抗体可以是，例如，嵌合抗体。
本发明中所述抗硬化蛋白抗体的方法和用途是出乎意料并且令人惊讶的，因为OI患者中的所述抗体治疗导致了骨形成的增加和骨吸收的减少。
为了更易于理解本发明，首先定义某些术语。在整个详细描述中示出了其他的定义。
术语“包含”涵盖“包括”以及“由......组成”，例如“包含”X的组合物可以仅由X组成，或者可以包括其他的成分，如X+Y。
与数值x相关的术语“约”表示，例如，x±10％。
术语硬化蛋白是指SEQ ID NO:155中所定义的人硬化蛋白。重组人硬化蛋白可以从R&D Systems(Minneapolis,Minn.,USA；2006目录号1406-ST-025)获得。另外，重组的小鼠硬化蛋白/SOST可从R&D Systems(Minneapolis,Minn.,USA；2006目录号1589-ST-025)商购获得。美国专利号6,395,511和6,803,453以及美国专利公开物20040009535和20050106683通常涉及抗硬化蛋白抗体。
本文提及的术语“抗体”包括完整抗体和其任何抗原结合片段(即“抗原结合部分”)或单链。天然存在的“抗体”是包含通过二硫键相互连接的至少两条重(H)链和两条轻(L)链的糖蛋白。每条重链包含的部分是重链可变区(本文中缩写为VH)和重链恒定区。所述重链恒定区包含的部分是三个结构域(CH1、CH2和CH3)。每条轻链包含的部分是轻链可变区(本文中缩写为VL)和轻链恒定区。所述轻链恒定区包含的部分是一个结构域，CL。所述VH和VL区可以进一步细分为高变区，其被称为互补决定区(CDR)，穿插(interpersed)了更保守的被称为框架区(FR)的区域。每个VH和VL的组成有三个CDR和四个FR，它们按以下列顺序从氨基末端到羧基末端进行排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。所述抗体的恒定区可以介导所述免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，所述宿主组织或因子包括免疫系统的各种细胞(例如效应细胞)和经典补体系统的第一组分(C1q)。在一个实施方案中，本文提及的抗体包括分离的、单克隆的、人的和人源化的单克隆抗体。
本文所用的抗体术语“抗原结合部分”(或简称“抗原部分”)是指抗体的全长或一个或多个片段，所述一个或多个片段保留了特异性结合抗原(例如，硬化蛋白)的能力。已经显示，抗体的抗原结合功能可以通过全长抗体的片段执行。包含在抗体的术语“抗原结合部分”内的结合片段的实例包括Fab片段，其是由VL，VH，CL和CH1结构域组成的单价片段；F(ab)2片段，其是包含两个Fab片段的二价片段，所述Fab片段通过铰链区的二硫键连接；由VH和CH1结构域组成的Fd片段；由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段；dAb片段(Wardet al.,1989Nature 341:544-546)，其由VH结构域组成；以及分离的互补决定区(CDR)。
此外，虽然Fv片段的两个结构域VL和VH由不同的基因编码，但它们可以通过使用重组方法由合成的接头进行连接，使得它们能够被制成为单个蛋白链，在所述单个蛋白链中所述VL和VH区配对形成单价分子(称为单链Fv(scFv)；参见例如Bird et al.,1988Science 242:423-426；and Huston et al.,1988Proc.Natl.Acad.Sci.85:5879-5883)。此类单链抗体也应包括在术语抗体的“抗原结合区”内。使用本领域技术人员已知的常规技术可以获得这些抗体片段，并且可以以与完整抗体相同的方式筛选片段的效用。
本文所用的“分离的抗体”是指这样的抗体：其基本上不含具有不同抗原特异性的其他抗体(例如，特异性结合硬化蛋白的分离的抗体基本上不含特异性结合除硬化蛋白之外的抗原的抗体)。然而，特异性结合硬化蛋白的分离的抗体可能与其他抗原(例如来自其他物种的硬化蛋白分子)具有交叉反应性。此外，分离的抗体可以基本上不含其他细胞物质和/或化学物质。在一个实施方案中，本文提及的抗体是指分离的抗体。
本文所用的术语“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”是指单一分子种类的抗体分子的组合物的制剂。单克隆抗体组合物显示出对特定表位的单一结合特异性和亲和力。
本文所用的术语“人抗体”旨在包括具有可变区的抗体，在所述可变区中框架区和CDR区均衍生自人源序列。此外，如果所述抗体含有恒定区，则所述恒定区也衍生自这种人序列(例如人种系序列)或人种系序列的突变形式或含有共有框架序列的抗体，所述共有框架衍生自人框架序列分析，如Knappik,et al.(2000.J Mol Biol 296,57-86)中所述的分析。
所述人抗体可以包括不由人序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或位点特异性诱变或通过体内体细胞突变引入的突变)。然而，本文所用的术语“人抗体”不应包括这样的抗体：其中衍生自另一哺乳动物物种(例如小鼠)种系的CDR序列已经移植到了人框架序列上。
术语“人单克隆抗体”是指展示单一结合特异性的抗体，所述抗体具有可变区，在所述可变区中，构架区和CDR区均衍生自人序列。在一个实施方案中，所述人单克隆抗体由杂交瘤产生，所述杂交瘤包括与永生化细胞融合的B细胞，所述B细胞获自转基因非人动物(例如转基因小鼠)，且具有的基因组包含人重链转基因和轻链转基因。
本文所用的术语“重组人抗体”包括通过重组方法制备、表达、产生或分离出的所有人抗体，例如从对于人免疫球蛋白基因来说是转基因或转染色体的动物(例如小鼠)或由其制得的杂交瘤中分离出的抗体，从被转化成表达人抗体的宿主细胞中(例如从转染瘤中)分离出的抗体，从重组的组合人抗体文库分离出的抗体，以及通过涉及将全部或部分人免疫球蛋白基因序列剪接至其他DNA序列的任何其他方式制备、表达、产生或分离出的抗体。此类重组人抗体具有可变区，在所述可变区中框架区和CDR区衍生自人种系免疫球蛋白序列。然而，在某些实施方案中，可以对这种重组人抗体进行体外诱变(或者，当使用转基因有人Ig序列的动物时，进行体内体细胞诱变)，因此所述重组抗体VH和VL区的氨基酸序列是这样的序列：虽然衍生自人种系VH和VL序列并与之相关，但其可能不会天然存在于所述体内人抗体种系库中。
在一个实施方案中，并且如本文所用，结合硬化蛋白的抗体(例如抗硬化蛋白抗体)是指其特异性结合硬化蛋白多肽。“特异性结合硬化蛋白多肽”是指以1x 10-8M或更小、1x 10-9M或更小、1x 10-10M或更小的KD结合硬化蛋白多肽的抗体。本文所用的术语“KD”应指解离常数，其从Kd与Ka的比率(即Kd/Ka)获得，并被表示成摩尔浓度(M)。可以使用本领域中的成熟方法测定抗体的KD值。用于确定抗体的KD的方法是通过使用表面等离振子共振，或使用生物传感器系统如系统进行的。
用于评估抗体与各种物种的硬化蛋白的结合能力的标准测定法是本领域已知的，包括例如ELISA、蛋白质印迹和RIA。合适的测定法在WO2009/047356中有详细描述。抗体的结合动力学(例如，结合亲和力)也可以通过本领域已知的标准测定法(例如通过Biacore分析)来评估。用于评估抗体对硬化蛋白功能特性(例如，受体结合、预防或改善骨质溶解)的效应的测定法在WO2009/047356中有进一步的详细描述。
如在本申请中所用，两个序列之间的同一性百分比是指，在考虑了对两个序列进行最佳比对所需引入的空位数和每个空位的长度后，所述序列共有的相同位置数的函数(即，同一性％＝相同位置数/位置总数×100)。如下面的非限制性实施例中所述，可以通过使用数学算法完成序列的比较以及对两个序列之间同一性百分比的确定。
可以使用E.Meyers和W.Miller(Comput.Appl.Biosci.,4:11-17,1988)的算法确定两个氨基酸序列之间的同一性百分比，所述算法已被整合到了ALIGN程序(2.0版本)中(使用PAM120残基权重表，空位长度罚分为12以及空位罚分为4)。此外，可以使用Needleman和Wunsch(J.Mol,Biol.48:444-453,1970)的算法测定两个氨基酸序列之间的同一性百分比，所述算法已被整合到了GCG软件包(可从http://www.gcg.com获得)的GAP程序中，(使用Blossom 62矩阵或PAM250矩阵，以及空位权重为16、14、12、10、8、6或4，长度权重为1、2、3、4、5或6)。
另外或者可替代地，本发明所述蛋白质序列可以进一步用作“查询序列”来对公共数据库进行搜索，从而例如鉴定相关序列。可以使用Altschul,et al.,1990J.Mol.Biol.215:403-10的XBLAST程序(2.0版本)执行这样的搜索。可以用XBLAST程序(得分＝50，字长＝3)执行BLAST蛋白质搜索，以获得与本发明所述抗体分子同源的氨基酸序列。为了获得用于比较目的的空位比对(gapped alignment)，可以如Altschul etal.,1997Nucleic Acids Res.25(17):3389-3402中所述使用空位BLAST。当使用BLAST和空位BLAST程序时，可以使用各个程序(例如，XBLAST和NBLAST)的默认参数。参见http:www.ncbi.nhn.nih.gov。
在以下小节中更详细地描述了本发明的各个方面。
抗硬化蛋白抗体在OI治疗中的用途和治疗方法
在一个方面，本发明涉及用抗硬化蛋白抗体治疗OI患者的方法或在OI治疗中抗硬化蛋白抗体的用途。用抗硬化蛋白抗体的治疗可以在OI患者中增加骨形成并减少骨吸收。在一个方面，本发明提供了用于治疗OI的抗硬化蛋白抗体。本文公开了用于治疗OI的合适的抗硬化蛋白抗体。
在一些实施方案中，本发明是用于在OI患者中增加骨形成和减少骨吸收的方法，并且所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的抗硬化蛋白抗体。在一个实施方案中，用本发明所述的抗硬化蛋白抗体治疗OI患者，能在所述OI患者中增加骨形成和/或减少骨吸收。
在一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体的VH氨基酸序列示于SEQ ID NO:69-77中。所述抗硬化蛋白抗体的VL氨基酸序列分别示于SEQ ID NO:80-88中。所述抗硬化蛋白抗体相应的抗体全长重链氨基酸序列示于SEQ ID NO:113-121中。所述抗硬化蛋白抗体相应的抗体全长轻链氨基酸序列分别示于SEQ ID NO:124-132中。在另一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体包括已经突变但在CDR区与上述序列中描述的CDR区具有至少60％、70％、80％、90％或95％或更高的同一性的氨基酸。在另一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体包括突变的氨基酸序列，与上述序列中描述的CDR区相比，在所述突变的氨基酸序列中，CDR区突变的氨基酸不超过1、2、3、4或5个。
在一些实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体的可变重链亲本核苷酸序列示于SEQ IDNO 89-90中。所述抗硬化蛋白抗体的可变重链亲本核苷酸序列示于SEQ ID NO 100-101中。为用于哺乳动物细胞表达而优化的全长轻链核苷酸序列示于SEQ ID NO 146-154中。为用于哺乳动物细胞表达而优化的全长重链核苷酸序列示于SEQ ID NO 135-143中。由优化的轻链核苷酸序列编码的全长轻链氨基酸序列示于SEQ ID NO 124-132中。由优化的重链核苷酸序列编码的全长重链氨基酸序列示于SEQ ID NO 113-121中。在其他实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体包括已经突变了的但是与上述序列具有至少60％、70％、80％、90％或95％或更高的同一性的氨基酸或核酸。在一些实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体包括突变的氨基酸序列，与上述序列中描述的可变区相比，在所述突变的氨基酸序列中，所述可变区突变的氨基酸不超过1、2、3、4或5个，但同时保留了基本相同的治疗活性。
在其他实施方案中，上述VH、VL、全长轻链和全长重链序列(核苷酸序列和氨基酸序列)可以“混合和匹配”。可以使用上文和实施例中描述的结合测定法(例如，ELISA)测试硬化蛋白与这种“混合和匹配的”抗体的结合。当这些链混合并匹配时，来自特定VH/VL配对的VH序列应当用结构上相似的VH序列进行替换。同样地，来自特定全长重链/全长轻链配对的全长重链序列应当用结构上相似的全长重链序列进行替换。同样，来自特定VH/VL配对的VL序列应当用结构上相似的VL序列进行替换。同样地，来自特定全长重链/全长轻链配对的全长轻链序列应当用结构上类似的全长轻链序列进行替换。因此，在一个方面，本发明提供了分离的单克隆抗体或其抗原结合区域，其具有：重链可变区，所述重链可变区包含选自由SEQ ID NO:69-77组成的组的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含选自由SEQID NO:80-88组成的组的氨基酸序列；其中所述抗体特异性结合硬化蛋白。
在一些实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体是(i)分离的单克隆抗体，其具有：全长重链，所述全长重链包含选自由SEQ ID NO:113-121组成的组的已经为用于哺乳动物细胞表达而优化的氨基酸序列；和全长轻链，所述全长轻链包含选自由SEQ ID NO:124-132组成的组的为用于哺乳动物细胞表达而优化的氨基酸序列；或(ii)包含其抗原结合部分的功能性蛋白。
在其他实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体是(i)分离的单克隆抗体，其具有：全长重链，所述全长重链包含选自由SEQ ID NO:135-143组成的组的已经为用于哺乳动物细胞表达而优化的核苷酸序列；和全长轻链，所述全长轻链包含选自由SEQ ID NO:146-154组成的组的已经为用于哺乳动物细胞表达而优化的核苷酸序列；或(ii)包含其抗原结合部分的功能性蛋白质。
在另一个方面，所述抗硬化蛋白抗体包含所述抗体的重链和轻链CDR1、CDR2和CDR3，或其组合。所述抗体的所述VH CDR1的氨基酸序列示于SEQ ID NO:1-11中。所述抗体的所述VH CDR2的氨基酸序列示于SEQ ID NO:12-22中。所述抗体的所述VH CDR3的氨基酸序列示于SEQ ID NO:23-33中。所述抗体的所述VL CDR1的氨基酸序列示于SEQ ID NO:34-44中。所述抗体的所述VL CDR2的氨基酸序列示于SEQ ID NO:45-55中。所述抗体的所述VLCDR3的氨基酸序列示于SEQ ID NO:56-66中。所述CDR区用Kabat系统进行划界(Kabat,E.A.,et al.,1991Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,U.S.Department of Health and Human Services,NIH公开号91-3242)。
在一些实施方案中，在VH CDR1、2和3序列和VL CDR1、2和3序列“混合和匹配”(即，来自不同抗体的CDR可以混合并匹配)之后产生所述抗硬化蛋白抗体。可以使用上文和实施例中描述的结合测定法(例如，ELISA)测试这种“混合和匹配的”抗体与硬化蛋白的结合。当VH CDR序列混合并匹配时，来自特定VH序列的CDR1、CDR2和/或CDR3序列应当用结构上相似的CDR序列进行替换。同样地，当VL CDR序列混合并匹配时，来自特定VL序列的CDR1、CDR2和/或CDR3序列应当用结构上相似的CDR序列进行替换。对于普通技术人员来说显而易见的是，通过用本发明所述单克隆抗体的CDR序列里的结构相似的序列，替换一个或多个VH和/或VL CDR区域序列，可以产生新的VH和VL序列。
例如，所述抗硬化蛋白抗体可以具有重链可变区CDR1，其包含选自由SEQ IDNO:1-11组成的组的氨基酸序列；重链可变区CDR2，其包含选自由SEQ ID NO:12-22组成的组的氨基酸序列；重链可变区CDR3，其包含选自由SEQ ID NO:23-33组成的组的氨基酸序列；轻链可变区CDR1，其包含选自由SEQ ID NOs:34-44组成的组的氨基酸序列；轻链可变区CDR2，其包含选自由SEQ ID NO:45-55组成的组的氨基酸序列；和轻链可变区CDR3，其包含选自由SEQ ID NOs:56-66组成的组的氨基酸序列；其中所述抗体特异性结合硬化蛋白。
在某个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体包含：SEQ ID NO:3所示的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:14所示的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:25所示的重链可变区CDR3；SEQ IDNO:36所示的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:47所示的轻链可变区CDR2；以及SEQ ID NO:58所示的轻链可变区CDR3。
在某个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体包含：SEQ ID NO:4所示的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:15所示的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:26所示的重链可变区CDR3；SEQ IDNO:37所示的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:48所示的轻链可变区CDR2；以及SEQ ID NO:59所示的轻链可变区CDR3。
在某个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体包含：SEQ ID NO:5所示的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:16所示的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:27所示的重链可变区CDR3；SEQ IDNO:38所示的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:49所示的轻链可变区CDR2；以及SEQ ID NO:60所示的轻链可变区CDR3。
在某个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体包含：SEQ ID NO:6所示的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:17所示的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:28所示的重链可变区CDR3；SEQ IDNO:39所示的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:50所示的轻链可变区CDR2；以及SEQ ID NO:61所示的轻链可变区CDR3。
在某个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体包含：SEQ ID NO:7所示的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:18所示的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:29所示的重链可变区CDR3；SEQ IDNO:40所示的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:51所示的轻链可变区CDR2；以及SEQ ID NO:62所示的轻链可变区CDR3。
在某个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体包含：SEQ ID NO:8所示的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:19所示的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:30所示的重链可变区CDR3；SEQ IDNO:41所示的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:52所示的轻链可变区CDR2；以及SEQ ID NO:63所示的轻链可变区CDR3。
在某个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体包含：SEQ ID NO:9所示的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:20所示的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:31所示的重链可变区CDR3；SEQ IDNO:42所示的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:53所示的轻链可变区CDR2；以及SEQ ID NO:64所示的轻链可变区CDR3。
在某个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体包含：SEQ ID NO:10所示的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:21所示的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:32所示的重链可变区CDR3；SEQ IDNO:43所示的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:54所示的轻链可变区CDR2；以及SEQ ID NO:65所示的轻链可变区CDR3。
在某个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体包含：SEQ ID NO:11所示的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:22所示的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:33所示的重链可变区CDR3；SEQ IDNO:44所示的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:55所示的轻链可变区CDR2；以及SEQ ID NO:66所示的轻链可变区CDR3。
在某个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体包含：VH多肽氨基酸序列，其与SEQ IDNO:70所示的氨基酸序列具有至少95％的同一性。
在某个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体包含：VL多肽氨基酸序列，其与SEQ IDNO:81所示的氨基酸序列具有至少95％的同一性。
在某个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体包含：VH多肽氨基酸序列和VL多肽氨基酸序列，所述VH多肽氨基酸序列与SEQ ID NO:70所示的氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述VL多肽氨基酸序列与SEQ ID NO:81所示的氨基酸序列具有至少95％的同一性。
在某个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体包含：SEQ ID NO:70所示的VH多肽氨基酸序列和SEQ ID NO:81所示的VL多肽氨基酸序列。
在某个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体包含：SEQ ID NO:114或172所示的重链多肽氨基酸序列和SEQ ID NO:125或173所示的轻链多肽氨基酸序列。
在优选的实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体是抗体BPS804，其为人抗硬化蛋白单克隆抗体。BPS804包含以下CDR:SEQ ID NO:4所示的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:15所示的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:26所示的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:37所示的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:48所示的轻链可变区CDR2；以及SEQ ID NO:59所示的轻链可变区CDR3。BPS804的VH和VL序列包含:SEQ ID NO:70所示的VH多肽氨基酸序列和SEQ ID NO:81所示的VL多肽氨基酸序列。BPS804的重链和轻链序列包含:SEQ ID NO:172所示的重链多肽氨基酸序列和SEQ ID NO:173所示的轻链多肽氨基酸序列。
本发明所述抗硬化蛋白抗体(例如BPS804)的其他特征描述于WO2009/047356中，其公开内容、讨论和数据通过引用并入本文中。仅举例来说，本发明所述抗体可以表现出以下功能特性中的至少一种：所述抗体阻断硬化蛋白在基于细胞的wnt信号传导测定中的抑制作用，所述抗体阻断硬化蛋白在基于细胞的矿化测定中的抑制作用，所述抗体阻断硬化蛋白在Smad1磷酸化测定中的抑制作用，所述抗体抑制硬化蛋白与LRP-6的结合，以及所述抗体增加骨的形成以及质量和密度。如上所述，这些性质在WO2009/047356中有详细描述。
关于“阻断硬化蛋白在基于细胞的wnt信号传导测定中的抑制作用”的抗体，这是指在基于细胞的超顶闪(super top falsh,STF)测定中，在存在硬化蛋白的条件下以小于1mM、100nM、20nM、10nM或更低的IC50恢复wnt诱导的信号传导的抗体。WO2009/047356描述了所述wnt STF测定。
关于“阻断硬化蛋白在基于细胞的矿化测定中的抑制作用”的抗体，这是指在基于细胞的测定中，在存在硬化蛋白的条件下以小于1mM、500nM、100nM、10nM、1nM或更低的IC50恢复BMP2诱导的矿化的抗体。
关于“阻断硬化蛋白在Smad1磷酸化测定中的抑制作用”的抗体，这是指在基于细胞的测定中，在存在硬化蛋白的条件下以小于1mM、500nM、100nM、10nM、1nM或更低的IC50恢复BMP6诱导的Smad1磷酸化的抗体。
关于“抑制硬化蛋白与LRP-6的结合”的抗体，这是指以1mM、500nM、100nM、10nM、5nM、3nM、1nM或更小的IC50抑制硬化蛋白与LRP-6的结合的抗体。
关于“增加骨的形成以及质量和密度”的抗体，这是指这样的抗体：在其作用下骨的形成以及质量和密度的水平能够达到用高合成代谢剂量的PTH进行每日间歇治疗(例如用100μg/kg hPTH进行每日间歇性治疗)所达到的水平。
在一个实施方案中，本发明所述抗硬化蛋白抗体能增加骨形成和/或减少骨吸收。
剂量方案
对剂量方案进行调整以提供最佳的所需应答(例如，治疗应答)。例如，可以施用单次推注，可以随时间施用几个分开的剂量，或者可以根据治疗情况的紧急程度按比例减少或增加剂量。以剂量单位形式配制肠胃外组合物特别有利于给药便利和使剂量均匀。本文所用的剂量单位形式是指作为单位剂量适用于待治疗受试者的物理上离散的单位；每个单位含有预定量的活性化合物，其经计算可与所需的药物运载体(carrier)一起产生所需的治疗效果。本发明所述剂量单位形式的规格取决于并直接依赖于所述活性化合物的独特特征和所要实现的特定治疗效应，以及在本领域中为了个人的治疗敏感度而配制这种活性化合物所固有的局限性。在一个实施方案中，本发明所述剂量单位形式包含10-5000mg抗硬化蛋白抗体，或者10-4000mg、10-3000mg、10-2000mg、10-1000mg、10-500mg、10-400mg、10-300mg、10-200mg、10-150mg、10-100mg、10-80mg、10-60mg、10-50mg、10-40mg、10-35mg、10-30mg、10-25mg、10-20mg或10-15mg。在一个实施方案中，所述剂量单位形式包含150mg的抗硬化蛋白抗体。在另一个实施方案中，所述剂量单位形式包含210mg的抗硬化蛋白抗体。
在一个实施方案中，所述剂量单位形式的所述抗硬化蛋白抗体处于冻干状态，其可以是粉末形式。在另一个实施方案中，所述剂量单位形式的所述抗硬化蛋白抗体是在溶液中。在一个实施方案中，本发明所述剂量单位形式包含在容器如小瓶中。在另一个实施方案中，所述容器是注射器。
除活性物质(即所述抗硬化蛋白抗体)外，所述剂量单位形式可以包含一种或多种其他物质和/或赋形剂。在一个实施方案中，所述剂量单位形式包含以下一种或多种：蔗糖、精氨酸盐酸盐、L-组氨酸、聚山梨醇酯80、盐酸和注射用水(wfi)。
在一个方面，本发明提供了试剂盒，所述试剂盒包含本发明所述抗硬化蛋白抗体或本发明所述药物组合物，或本发明所述冻干物，或本发明所述剂量单位形式。任选地，所述试剂盒可以进一步包含例如，患者信息页、用于重构所述冻干物的说明书和/或给药说明书。在一个实施方案中，所述试剂盒包括注射器，所述注射器包含一个或多个治疗有效剂量的所述抗硬化蛋白抗体。所述注射器中的所述抗硬化蛋白抗体可以以液体或冻干形式存在。所述试剂盒可以进一步包含用于重构所述冻干物的溶液，和/或输注溶液(例如以5％存在于无菌水中的右旋糖)。
对于施用所述抗硬化蛋白抗体，所述剂量范围为约1毫克所述抗体/千克所述患者体重(本文中，通篇申请称为“mg/kg”)至50mg/kg，更通常为约1至30mg/kg，更通常为约1至20mg/kg。例如，剂量可以是约5mg/kg体重，约10mg/kg体重，约20mg/kg体重，或在约5-20mg/kg范围内。
在本发明的另一个方面，所述抗硬化蛋白抗体以1-50mg/kg(例如2-50、3-50、5-50、8-50mg/kg)患者体重的剂量进行施用。
在一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体以2-50mg/kg(例如2-45、2-40、2-35、2-30mg/kg)患者体重的剂量进行施用。
在一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体以3-50mg/kg(例如3-45、3-40、3-35、3-30mg/kg)患者体重的剂量进行施用。
在一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体以5-50mg/kg(例如5-45、5-40、5-35、5-30mg/kg)患者体重的剂量进行施用。
在一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体以8-50mg/kg(例如8-45、8-40、8-35、8-30mg/kg)患者体重的剂量进行施用。
在一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体以10-50mg/kg(例如10-45、10-40、10-35、10-30mg/kg)患者体重的剂量进行施用。
在一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体以11-50mg/kg(例如11-45、11-40、11-35、11-30mg/kg)患者体重的剂量进行施用。
在一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体以12-50mg/kg(例如12-45、12-40、12-35、12-30mg/kg)患者体重的剂量进行施用。
在一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体以15-50mg/kg(例如15-45、15-40、15-35、15-30mg/kg)患者体重的剂量进行施用。
在一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体以18-50mg/kg(例如18-45、18-40、18-35、18-30mg/kg)患者体重的剂量进行施用。
在一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体以20-50mg/kg(例如20-45、20-40、20-35、20-30mg/kg)患者体重的剂量进行施用。
在一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体以5-20mg/kg(例如8-20、10-20、12-20、15-20mg/kg)患者体重的剂量进行施用。
在一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体以10mg/kg患者体重或以11、12、13、14、15、17、18、19mg/kg的剂量进行施用。
在一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体以20mg/kg患者体重或以11、12、13、14、15、17、18、19mg/kg的剂量进行施用。
在一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体以30mg/kg患者体重或以21、22、23、24、25、26、27、28、29mg/kg的剂量进行施用。
在一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体以10mg/kg患者体重的剂量进行施用。在相关的实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体以8-12mg/kg或以8-15mg/kg的剂量进行施用。
在一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体以20mg/kg患者体重的剂量进行施用。在相关的实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体以8-22mg/kg或以15-25mg/kg的剂量进行施用。
在本发明的另一个方面，所述抗硬化蛋白抗体以10-5000mg的剂量进行施用。在一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体以10-4000mg、10-3000mg、10-2000mg、10-1000mg、10-500mg、10-400mg、10-300mg、10-200mg、10-150mg、10-100mg、10-80mg、10-60mg、10-50mg、10-40mg、10-35mg、10-30mg、10-25mg、10-20mg或10-15mg的剂量进行施用。在一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体以10-3500mg的剂量进行施用。在一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体以10-3000mg的剂量进行施用。在一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体以10-2000mg的剂量进行施用。在一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体以10-1500mg的剂量进行施用。在一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体以10-1000mg的剂量进行施用。
示例性治疗方案需要施用多个剂量，所述多个剂量可以是相同剂量或不同剂量，范围为，例如，约5-20mg/kg，给药方案为每周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、每月一次或每月、每五周一次、每六周一次、每七周一次、每八周一次、每两个月一次(即每两个月)、每三个月一次(即每季度)、每三至六个月一次、半年或每年。在一些实施方案中，所述多个剂量可以是2-20个剂量，更通常为2-10个剂量，更通常为3-5个剂量，并且更通常为3个剂量，给药方案为每周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、每月一次或每月、每五周一次、每六周一次、每七周一次、每八周一次、每两个月一次(即每两个月)、每三个月一次、每三至六个月一次、每半年或每年。
在本发明的另一个方面，所述抗硬化蛋白抗体可以在每日、每周、每两周、每月、每两个月、每季度或每年的基础上施用于患者。
在一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体在每周基础上施用于患者。在另一个实施方案中，每2、3、4、5、6或7周进行一次给药。
在一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体在每月基础上施用于患者。在另一个实施方案中，每2、3、4、5或6个月进行一次给药。
在一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体每三个月(即在每季度的基础上)施用于患者。在更为频繁的给药方案(例如每周或每日给药)的情况下，优选允许患者自我给药的给药途径。举例来说，皮下、局部或口服的给药途径能够便于所述抗硬化蛋白抗体的自我给药并无需看医生/去医院以接受治疗。
另一种示例性治疗方案需要施用多个剂量，所述多个剂量可以是相同剂量或不同剂量(范围为，例如，约5-20mg/kg)，直至在所述患者中实现或达到了治疗目标。所述治疗目标在施用了一定数量的剂量后能够实现或达到。所述治疗目标可以是骨矿物质密度完全正常，骨矿物质密度部分正常，或骨折发生率的频率降低，骨形成标志物水平的升高，或骨吸收标志物水平的降低。因此，在一个实施方案中，本发明提供了用于治疗OI的抗硬化蛋白抗体，其中与对照患者/患者群体相比，所述抗硬化蛋白抗体能降低患者/患者群体中的骨折率。优选地，所述抗硬化蛋白抗体能将骨折率降低至少10％，20％，30％，35％，40％，50％，60％，70％，80％或90％。在一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体将骨折率降低至少30％。在一个实施方案中，骨折被定义为通过放射学研究证实的外周或椎骨骨折(包括所有主要、次要和椎骨临床骨折；不包括没有临床症状的仅通过研究方式检测到的骨折)。在一个实施方案中，所述骨折率与患者群体有关。所述患者群体和对照患者群体的大小优选是允许进行统计学显著意义的比较的大小。
在本发明的一个方面，治疗方案包括第一给药方案后任选地跟随第二给药方案。给药方案包括施用的剂量和施用频率。这些可以选自任何上述剂量和施用频率，并且可以根据患者的临床要求而变化。上文公开的剂量和施用频率明确地包含在本发明的这个方面内。
举例来说，在一个实施方案中，所述第一给药方案为在每月的基础上施用1-50mg/kg患者体重，或2-50mg/kg、或3-50mg/kg、或5-50mg/kg、或8-50mg/kg、或3-30mg/kg、5-30mg/kg、或8-30mg/kg、或10-30mg/kg、或12-30mg/kg、或15-30mg/kg、或12-25mg/kg、或15-25mg/kg。在另一个示例性实施方案中，所述第一给药方案为在每月的基础上施用10-5000mg。
在一个实施方案中，所述第一给药方案为在每月的基础上施用1-50mg/kg患者体重。
在一个实施方案中，所述第一给药方案为在每月的基础上施用2-50mg/kg患者体重。
在一个实施方案中，所述第一给药方案为在每月的基础上施用2-30mg/kg患者体重。
在一个实施方案中，所述第一给药方案为在每月的基础上施用3-50mg/kg患者体重。
在一个实施方案中，所述第一给药方案为在每月的基础上施用3-30mg/kg患者体重。
在一个实施方案中，所述第一给药方案为在每月的基础上施用5-30mg/kg患者体重。
在一个实施方案中，所述第一给药方案为在每月的基础上施用5-25mg/kg患者体重。
在一个实施方案中，所述第一给药方案为在每月的基础上施用12-25mg/kg患者体重。
在一个实施方案中，所述第一给药方案为在每月的基础上施用20mg/kg患者体重。
在另一个示例性实施方案中，所述第一给药方案为在每季度的基础上施用1-50mg/kg患者体重，或2-50mg/kg、或3-50mg/kg、或5-50mg/kg、或8-50mg/kg、或8-30mg/kg、10-30mg/kg、或12-30mg/kg、或15-30mg/kg、或12-25mg/kg、或15-25mg/kg。在另一个示例性实施方案中，所述第一给药方案为在每季度的基础上施用10-5000mg。
在一个实施方案中，所述第一给药方案为在每季度的基础上施用2-30mg/kg患者体重。
在一个实施方案中，所述第一给药方案为在每季度的基础上施用3-30mg/kg患者体重。
在一个实施方案中，所述第一给药方案为在每季度的基础上施用5-30mg/kg患者体重。
在一个实施方案中，所述第一给药方案为在每季度的基础上施用5-25mg/kg患者体重。
在一个实施方案中，所述第一给药方案为在每季度的基础上施用12-25mg/kg患者体重。
在一个实施方案中，所述第一给药方案为在每季度的基础上施用20mg/kg患者体重。
在一个实施方案中且仅举例来说，所述第二给药方案为在每月的基础上施用1-50mg/kg患者体重，或2-50mg/kg、或3-50mg/kg、或5-50mg/kg、或8-50mg/kg、或3-30mg/kg、5-30mg/kg、或8-30mg/kg、或10-30mg/kg、或12-30mg/kg、或12-25mg/kg、或15-30mg/kg、或15-25mg/kg。在另一个示例性实施方案中，所述第二给药方案为在每月的基础上施用10-5000mg。
在一个实施方案中，所述第二给药方案为在每月的基础上施用1-50mg/kg患者体重。
在一个实施方案中，所述第二给药方案为在每月的基础上施用2-50mg/kg患者体重。
在一个实施方案中，所述第二给药方案为在每月的基础上施用2-30mg/kg患者体重。
在一个实施方案中，所述第二给药方案为在每月的基础上施用3-50mg/kg患者体重。
在一个实施方案中，所述第二给药方案为在每月的基础上施用3-30mg/kg患者体重。
在一个实施方案中，所述第二给药方案为在每月的基础上施用5-30mg/kg患者体重。
在一个实施方案中，所述第二给药方案为在每月的基础上施用5-25mg/kg患者体重。
在一个实施方案中，所述第二给药方案为在每月的基础上施用12-25mg/kg患者体重。
在一个实施方案中，所述第二给药方案为在每月的基础上施用20mg/kg患者体重。
在另一个实施方案中，所述第二给药方案为在每两个月的基础上施用1-50mg/kg患者体重，或2-50mg/kg、或3-50mg/kg、或5-50mg/kg、或8-50mg/kg、或3-30mg/kg、5-30mg/kg、或8-30mg/kg、或10-30mg/kg、或12-30mg/kg、或12-25mg/kg、或15-30mg/kg、或15-25mg/kg。在另一个示例性实施方案中，所述第二给药方案为在每两个月的基础上施用10-5000mg。
在一个实施方案中，所述第二给药方案为在每两个月的基础上施用1-50mg/kg患者体重。
在一个实施方案中，所述第二给药方案为在每两个月的基础上施用2-50mg/kg患者体重。
在一个实施方案中，所述第二给药方案为在每两个月的基础上施用2-30mg/kg患者体重。
在一个实施方案中，所述第二给药方案为在每两个月的基础上施用3-50mg/kg患者体重。
在一个实施方案中，所述第二给药方案为在每两个月的基础上施用3-30mg/kg患者体重。
在一个实施方案中，所述第二给药方案为在每两个月的基础上施用5-30mg/kg患者体重。
在一个实施方案中，所述第二给药方案为在每两个月的基础上施用5-25mg/kg患者体重。
在一个实施方案中，所述第二给药方案为在每两个月的基础上施用12-25mg/kg患者体重。
在一个实施方案中，所述第二给药方案为在每两个月的基础上施用20mg/kg患者体重。
在另一个示例性实施方案中，所述第二给药方案为在每季度的基础上施用1-50mg/kg患者体重，或2-50mg/kg、或3-50mg/kg、或5-50mg/kg、或8-50mg/kg、或8-30mg/kg、或10-30mg/kg、或12-30mg/kg、或12-25mg/kg、或15-30mg/kg或15-25mg/kg。在另一个示例性实施方案中，所述第二给药方案为在每季度的基础上施用10-5000mg。
在一个实施方案中，所述第二给药方案为在每季度的基础上施用2-30mg/kg患者体重。
在一个实施方案中，所述第二给药方案为在每季度的基础上施用3-30mg/kg患者体重。
在一个实施方案中，所述第二给药方案为在每季度的基础上施用5-30mg/kg患者体重。
在一个实施方案中，所述第二给药方案为在每季度的基础上施用5-25mg/kg患者体重。
在一个实施方案中，所述第二给药方案为在每季度的基础上施用12-25mg/kg患者体重。
在一个实施方案中，所述第二给药方案为在每季度的基础上施用20mg/kg患者体重。
在相关的实施方案中，所述第一给药方案为在每月的基础上施用20mg/kg患者体重并且所述第二给药方案为在每两个月或每季度的基础上施用20mg/kg患者体重。
所述第一和第二给药方案的施用时间段可根据患者的临床要求而变化。因此，所述第一给药方案施用第一时间段且所述第二给药方案施用第二时间段。
因此，举例来说，所述第一和第二时间段可以是1个月、6个月、12个月或任何其他时间段。
在一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体可以最初在每月的基础上施用于患者，持续1年，然后在每两个月或每季度的基础上施用至少1年(如2年或更多年)。
因此，在一个实施方案中，所述第一给药方案可以是在每月的基础上施用20mg/kg人患者体重，持续1年，以及所述第二给药方案可以是在每两个月或每季度的基础上施用20mg/kg人患者体重，持续至少1年(如2年或更多年)。
根据患者的临床要求，本发明还考虑停药期，即不施用所述抗硬化蛋白抗体的时期。因此，在一个实施方案中，用所述抗硬化蛋白抗体进行的治疗中断一个或多个月(例如2、3、4、5、6、8、10、12或更多个月)或甚至一年或多年。
对靶点的测量是本领域中已知的。例如，骨矿物质密度可以通过双能X射线吸收测定法(DXA)、单能X射线吸收测定法(SXA)、定量计算机断层扫描(CT)和超声测得。DXA是一种X射线技术，已成为本领域测量骨密度的标准。虽然它可用于测量任何骨骼部位，但是通常在腰椎和髋部进行临床确定。已开发出了便携式DXA机器，用于测量足跟(跟骨)、前臂(桡骨和尺骨)或手指(指骨)，并且DXA也可用于测量身体成分。因此，使用T分数将结果与“正常”值进行关联已成为标准做法，所述T分数将个体结果与种族和性别相匹配的年轻人群中的结果进行比较。或者，Z分数将个体结果与种族和性别相匹配的年龄匹配人群的结果进行比较。因此，例如，Z分数为-1(比年龄的平均低1SD)的60岁女性的T分数可以是-2.5(比年轻对照组的平均值低2.5SD)。
又一个示例性治疗方案需要施用多剂(doses)，其可以是相同剂量(dosage)或不同剂量，范围为例如约5-20mg/kg，用于长期使用而没有特定时间表来停止所述施用。当需要剂量来在持续性的基础上维持改善的症状时，这可以是所要遵循的治疗方案。
在其他实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体的给药方案包括在相同剂量的三剂，例如，通过静脉内依次施用5mg/kg体重，10mg/kg体重或20mg/kg体重，并且在两个连续剂量之间间隔1-3周，优选2周。在其他实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体的给药方案包括三个不同剂量的三剂，例如，首先是5mg/kg体重，然后是10mg/kg体重，最后是20mg/kg体重，通过静脉内施用依次进行，在连续的两剂之间间隔1-3周，优选2周。在其他实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体的给药方案包括三个不同剂量的三剂，例如，首先是20mg/kg体重，然后是10mg/kg体重，最后是5mg/kg体重，通过静脉内施用依次进行，在连续的两剂之间间隔1-3周，优选2周。
在一些实施方案中，同时或依次施用所述抗硬化蛋白抗体和一种或多种具有不同结合特异性的单克隆抗体，在这种情况下，施用的每种抗体的剂量落在所示的范围内。在一个实施方案中，所述一种或多种其他的单克隆抗体也是抗硬化蛋白抗体。抗体通常在多种情形下给药。单个给药之间的间隔可以是，例如，每周、每月、每两个月(即每两月)每三个月或每年。间隔也可以是不规律的，由通过测量患者中针对靶抗原的抗体的血液水平所指示。在一些方法中，调节剂量以达到约1-1000μg/ml(在一些方法中为约25-300μg/ml)的血浆抗体浓度。在一个实施方案中，调节本发明所述抗硬化蛋白抗体的剂量以达到约1-1000μg/ml或约25-300μg/ml的血浆抗体浓度。
或者，在一些实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体可作为持续释放制剂施用于OI患者，在这种情况下需要较低频率的施用。剂量和频率根据所述抗体在患者中的半衰期而变化。通常，人抗体显示出最长的半衰期，其次是人源化抗体、嵌合抗体和非人抗体。施用的剂量和频率可以根据治疗是预防性还是治疗性而变化。在预防性应用中，在长时间段内以相对不频繁的间隔施用相对较低的剂量。一些患者在余生中继续接受治疗。在治疗性应用中，有时需要以相对短的间隔施用相对高的剂量直至疾病的进展得到减少或终止或者直至所述患者显示出疾病症状的部分或完全改善。此后，可以给所述患者施用预防性方案。
在一些实施方案中，可以改变所述抗硬化蛋白抗体的实际剂量水平，以获得所述抗硬化蛋白抗体的这样的量：对于特定的OI患者、组合物和施用方式，其能有效地实现所需的治疗应答并且对患者无毒。所选的剂量水平将取决于多种药代动力学因素，包括所用的本发明特定组合物的活性，施用途径，施用时间，所使用的特定抗硬化蛋白抗体的排泄速率，治疗的持续时间，与所用的特定组合物组合使用的其他药物、化合物和/或材料，所治疗患者的年龄、性别、体重、病症、一般健康状况和既往病史等在医学领域众所周知的因素。
所述抗硬化蛋白抗体的“治疗有效量”可以导致疾病症状的严重性降低，无疾病症状期的频率和持续时间的增加，或者预防由于疾病折磨所导致的损伤或残疾。
可以使用本领域已知的多种方法中的一种或多种，通过一种或多种施用途径施用所述抗硬化蛋白抗体的组合物。如本领域技术人员应理解，施用的途径和/或方式将根据所需结果而变化。本发明所述抗体的施用途径包括静脉内、肌肉内、皮内、腹膜内、皮下、脊柱或其它胃肠外施用途径(例如通过注射或输注)。在一个实施方案中，通过静脉内途径进行施用。在一个实施方案中，通过输注静脉内施用。在一个实施方案中，以皮下的方式施用。本文所用的短语“肠胃外施用”是指除肠内和局部施用以外的施用方式，通常通过注射进行，包括，但不限于，静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管内、皮下、表皮下、关节内、包膜下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外和胸骨内的注射和输注。
或者，所述抗硬化蛋白抗体可以通过非肠胃外途径施用，例如局部、表皮或粘膜的施用途径如鼻内、口服、阴道、直肠、舌下或局部的方式。
所述抗硬化蛋白抗体可以用能够保护化合物免于快速释放的运载体制得，例如控释制剂，包括植入物、透皮贴剂和微囊化递送系统。可以使用可生物降解的生物相容的聚合物，例如乙烯乙酸乙烯酯，聚酐，聚乙醇酸，胶原，聚原酸酯和聚乳酸。用于制备此类制剂的许多方法是拥有专利的或本领域技术人员通常已知的。参见，例如，Sustained andControlled Release Drug Delivery Systems,J.R.Robinson,ed.,Marcel Dekker,Inc.,New York,1978.
患者群体
在一个实施方案中，本文所述的方法和用途用于使用本文所述的抗硬化蛋白抗体治疗成骨不全症。OI可根据疾病的遗传学和严重程度进行分类，根据Van Dijk和Sillence的分类，可分为I型OI，II型OI，III型OI，IV型OI或V型OI(2014,Am JMed Genet Part A164A:1470-1481and Van Dijk and Sillence,2014,Am J Med Genet Part A 167A:1178；其全部内容通过引用并入本文)。分类依赖于临床评估/诊断、生化分析以及分子遗传测试的组合，并且对于本领域技术人员而言是常规的。如上面的出版物中所提及的，本文使用的OI命名法/分类按Van Dijk和Sillence所提出的进行。
在80％-90％患有OI的人中，OI由编码I型胶原的α1和α2链的COL1A1和COL1A2基因(分别为17q21.33和7q22.3)的突变引起。已经连同基因型-表型相关性一起发表了包含1000多种已知突变的综合数据库(https://oi.gene.le.ac.uk/home.php；2016年12月12日获取)。其他基因(例如CRTAP、LEPRE1或PPIB)的突变也是已知的。针对COL1A1和COL1A2基因中的突变的分子遗传学测试是本领域技术人员已知的也是常规的。举例来说，Korkko等人(1998)描述了COL1A1基因和COL1A2基因的PCR扩增，然后通过构象敏感性凝胶电泳(CSGE)进行突变扫描(Am.J.Hum.Genet.62:98-110,1998)。van Dijk等人(2010)描述了通过多重连接依赖性探针扩增(MLPA)技术检测COL1A1突变(Genet Med 12(11):736-741)。最近，árvai,K.等人(2016)描述了下一代测序方法(Sci.Rep.6,28417)。这些参考文献在此通过参考并入。
在一个实施方案中，本文描述的方法和用途是用于治疗表现出I型胶原缺乏的患者，例如，I-IV型OI。由此，由胶原原纤维和羟基磷灰石晶体组成的骨正常结构发生改变并导致了脆性。在一个实施方案中，本文的方法和用途用于治疗以COL1A1和/或COL1A2中的一个或多个突变为特征的人OI患者。
在一个实施方案中，本文描述的方法和用途用于治疗I、III和/或IV型OI。在一个实施方案中，通过DNA测试(即检测COL1A1/COL1A2的突变)确认I、III和IV型OI。因此，在一个实施方案中，本文的方法和用途是用于治疗以COL1A1和/或COL1A2中的一个或多个突变为特征的I、III和/或IV型OI。
在一些实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体的方法和用途是用于治疗轻度至中度形式的OI。在所述抗硬化蛋白抗体的方法和用途的其他实施方案中，所述治疗中的患者具有I型OI、II型OI、III型OI或IV型OI。在所述抗硬化蛋白抗体的方法和用途的其他实施方案中，所述OI患者是18岁及以上的成年患者。在所述抗硬化蛋白抗体的方法和用途的其他实施方案中，所述OI患者是儿科患者。本文所定义的儿科患者包括0-17岁的儿童，例如2-17、3-17、4-17或5-17岁的儿童。本文所用的术语患者是指人类患者。
药物组合物
在另一个方面，本发明提供了一种用于在成骨不全症患者中增加骨形成和减少骨吸收的药物组合物，所述组合物含有如上所述的抗硬化蛋白抗体。所述药物组合物可以与药学上可接受的运载体一起配制。在一个方面，本发明提供了包含本文公开的抗硬化蛋白抗体的药物组合物。在一个实施方案中，包含所述抗硬化蛋白抗体的所述药物组合物用于治疗OI。
本文所用的“药学上可接受的运载体”包括生理上相容的任何以及所有的溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。所述运载体应适合于静脉内、肌肉内、皮下、肠胃外、脊柱或表皮施用(例如，通过注射或输注)。根据施用途径，可以将所述抗硬化蛋白抗体包被在材料中，所述材料能保护所述化合物免于酸和可能使所述化合物失活的其他天然条件的作用。
这些组合物还可含有佐剂如防腐剂，润湿剂，乳化剂和分散剂。通过灭菌程序，以及通过包含各种抗细菌剂和抗真菌剂如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚山梨酸等，可以确保防止微生物存在。还可能需要在所述组合物中包含等渗剂如糖、氯化钠等。此外，通过包含能够延迟吸收的试剂如单硬脂酸铝和明胶，可以延长对可注射药物形式的吸收。
药学上可接受的运载体包括无菌水溶液或分散体和用于临时制备无菌可注射溶液或分散体的无菌粉末。这种用于药物活性物质的介质和试剂的用途是本领域已知的。除非任何常规介质或试剂与所述活性化合物不相容，否则考虑将其用于本发明所述药物组合物中。补充的活性化合物也可以掺入所述组合物中。
通常，治疗组合物必须是无菌的并且在制造和储存条件下必须是稳定的。
无菌可注射溶液可以通过将所需量的所述活性化合物与上面列举的一种成分或成分组合(如果需要的话)一起掺入适当的溶剂中，然后进行无菌微滤制得。通常，通过将活性化合物掺入无菌载体(vehicle)中来制备分散体，所述无菌载体含有基础分散介质和来自上面列举的所需其他成分。对于用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末，制备方法是真空干燥和冷冻干燥(冻干)，其产生活性成分加上来自其先前无菌过滤溶液的任何其他所需成分的粉末。因此，在一个实施方案中，将本发明所述抗硬化蛋白抗体/药物组合物配制成冻干粉末。在相关的实施方案中，将所述冻干物在施用前重构。用于重构的合适的液体包括注射用水(wfi)。
可以与运载体材料组合以产生单一剂型的活性成分的量将根据所治疗的受试者和具体的施用方式而变化。可以与运载体材料组合以产生单一剂型的活性成分的量通常是产生治疗效应的组合物的量。通常，在百分之百中，该量的范围为活性成分的0.01％至约99％，活性成分与药学上可接受的运载体相组合的约0.1％至约70％，或约1％至约30％。
本发明所述药物组合物和本发明所述抗体也可以在组合疗法中进行施用，即与其他活性剂组合。例如，所述组合疗法可包括与至少一种其他抗炎或抗骨质疏松剂组合的本发明所述抗硬化蛋白抗体。可以在组合疗法中使用的治疗剂的实例包括双膦酸盐(例如阿仑膦酸盐、利塞膦酸钠、伊班膦酸、唑来膦酸、奥帕膦酸盐、奈立膦酸盐、Skelid、固令(Bonefos))、甲状旁腺激素(例如特立帕肽(rdna来源)注射剂)、钙溶解剂、拟钙剂(例如，西那卡塞)、他汀类、合成代谢类固醇、镧和锶盐、以及氟化钠。因此，在一个实施方案中，本发明所述抗硬化蛋白抗体可以与一种或多种选自下组的试剂组合施用：降钙素或其类似物或衍生物(如鲑鱼、鳗鱼或人降钙素)、钙溶解剂、拟钙剂(例如西那卡塞)、类固醇激素(例如雌激素)、部分雌激素激动剂或雌激素-孕激素组合、SERM(选择性雌激素受体调节剂)(如雷洛昔芬、拉索昔芬、巴多昔芬、阿佐昔芬、FC1271、替勃龙)、SARM(选择性雄激素受体调节剂)、RANKL抗体(如狄诺塞麦(denosumab))、组织蛋白酶K抑制剂、维生素D或其类似物或PTH、PTH片段或PTH衍生物如PTH(1-84)(例如PreosTM(甲状旁腺激素1-84))、PTH(1-34)(例如ForteoTM(特立帕肽(rdna来源)注射剂))、PTH(1-36)、PTH(1-38)、PTH(1-31)NH2或PTS893。根据另一个实施方案，本发明所述抗体可以与其他目前的骨质疏松症治疗方法组合使用，包括双膦酸盐(例如，FosamaxTM(阿仑膦酸盐)、ActonelTM(利什膦酸钠)、BonvivaTM(伊班膦酸)、ZometaTM(唑来膦酸)、AclastaTM/ReclastTM(唑来膦酸)、奥帕膦酸钠、奈立磷酸盐、Skelid、固令(Bonefos))、他汀类药物、合成代谢类固醇、镧和锶盐、以及氟化钠。
在一个实施方案中，本发明所述抗体可以与LRP4调节剂组合施用，所述LRP4调节剂即为调节LRP4的表达或活性的试剂，例如LRP4中和抗体。
在一个实施方案中，本发明所述抗体可以与LRP5调节剂组合施用，所述LRP5调节剂即为调节LRP5的表达或活性的试剂，例如LRP5中和抗体。
在另一个实施方案中，本发明所述抗体可以与DKK1调节剂组合施用，所述DKK1调节剂即为干扰或中和Dkk-1介导的对Wnt信号传导的拮抗作用的试剂，例如DKK1中和抗体。
在一个实施方案中，本发明所述抗体可以与二膦酸盐组合施用，所述二膦酸盐例如阿仑膦酸盐、利塞膦酸钠、伊班膦酸、唑来膦酸、唑来膦酸、奥帕膦酸盐、奈立膦酸盐、Skelid、固令(Bonefos)。
在一个实施方案中，本发明所述抗体可以与(i)唑来膦酸、(ii)抗DKK1抗体、(iii)阿仑膦酸盐、(iv)抗LRP4抗体、(v)hPTH和/或(vi)甲状旁腺激素释放剂(钙溶解剂)组合施用。
可以与本发明所述抗硬化蛋白抗体组合施用的其他试剂包括维生素D和/或钙。在一个实施方案中，如果患者具有维生素D和/或钙缺乏，则施用维生素D和/或钙。
在一个实施方案中，本发明所述抗体与另一种试剂(例如上述试剂)一起以依次的方式(即一个接一个地)或同时施用。在一个实施方案中，根据上述剂量和施用频率施用抗硬化蛋白抗体。所述组合治疗剂的合适的剂量可根据患者的临床要求而变化。
优选将所述组合物在生理pH下进行配制。
治疗性组合物可以与本领域已知的医疗装置一起施用。例如，在一个实施方案中，本发明所述治疗组合物可以与无针皮下注射装置一起施用，例如美国专利号5,399,163；5,383,851；5,312,335；5,064,413；4,941,880；4,790,824or 4,596,556中所示的装置。可用于本发明的众所周知的植入物和模块的实例包括：美国专利号4,487,603，其显示了用于以受控速率分配药物的可植入微输注泵；美国专利号4,486,194，其显示了用于通过皮肤施用药物的治疗装置；美国专利号4,447,233，其显示了用于以精准的输注速率输送药物的药物输注泵；美国专利号4,447,224，其显示了用于连续药物递送的可变流植入式输注装置；美国专利号4,439,196，其显示了具有多室隔室的渗透药物递送系统；和美国专利号4,475,196，其显示了渗透性药物递送系统。这些专利在此通过引用并入本文。许多其他这样的植入物、递送系统和模块是本领域技术人员已知的。在一个实施方案中，本发明所述治疗性组合物可以用注射器进行施用。
在某些实施方案中，可以将本发明所述抗体配制成确保在体内具有适当的分布。
在一个方面，本发明提供了抗硬化蛋白抗体在制备用于治疗成骨不全症的药物中的用途。本文描述的所有其他方面/实施方案同样适用于本发明的这个特定方面。
在另一个方面，本发明提供了用于治疗成骨不全症的抗硬化蛋白抗体。本文描述的所有其他方面/实施方案同样适用于本发明的这个特定方面。
在一个方面，本发明提供了用于成骨不全症的临床试验的抗硬化蛋白抗体，所述临床试验包括将在所述临床试验期间在临时时间点处所述临床试验群体中发生的骨折的数量与在所述临时时间点处所述临床试验人群预期的骨折数量进行比较。
在相关方面，本发明提供了用抗硬化蛋白抗体进行成骨不全症的临床试验的方法，所述方法包括将在所述临床试验期间在临时时间点处所述临床试验群体中发生的骨折的数量与在所述临时时间点处所述临床试验人群预期的骨折数量进行比较。在前述方面的一个实施方案中，所述方面可以进一步包括以下：如果在所述临时时间点处所述临床试验群体中的骨折数量低于所述临床试验群体的预期骨折数量的话，则向临床试验群体招募额外的患者。在一个实施方案中，如果在所述临时时间点处所述临床试验群体中的骨折数量低于所述临床试验群体的预期骨折数量的话，则延长所述临床试验期。在另一个实施方案中，如果在所述临时时间点处所述临床试验群体中的骨折数量高于所述临床试验群体的预期骨折数量的话，则缩短临床试验期。所述临床试验群体由接受所述抗硬化蛋白抗体的患者和接受安慰剂的对照组患者组成。这些方面/实施方案的优点在于其允许临床试验期间根据临床的发展而变化，这最终导致更有效且成本有效的临床试验，其也有益于患者。可以从基线骨折率计算出预期的骨折数量，所述基线骨折率可以从历史数据和/或来自临床试验期开始之前的临床试验群体的数据得出。在一个实施方案中，所述抗硬化蛋白抗体是如本文所定义的抗硬化蛋白抗体。可以根据何时可以进行统计学上显著的比较来改变和选择所述临时时间点。所述临床试验期开始于施用所述抗硬化蛋白抗体或安慰剂，并且一旦施用最终剂量的抗硬化蛋白抗体/安慰剂并收集相关数据就结束。
BPS804 H链的序列(SEQ ID NO:172)：
QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRSHWLSWVRQAPGKGLEWVSNINYDGSSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDTYLHFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
BPS804 L链的序列(SEQ ID NO:173)：
DIALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGDINDVSWYQQHPGKAPKLMIYDVNNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCQSYAGSYLSEVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
本发明提供的各个方面的实施方案也通过以下任意一个段落进行了描述。
实施方案1.治疗人患者中成骨不全症(OI)的方法，所述方法包括向所述人患者施用治疗有效量的抗硬化蛋白抗体。
实施方案2.根据实施方案1所述的方法，其中所述OI是I型OI、III型OI或IV型OI。
实施方案3.根据实施方案1或实施方案2所述的方法，其中所述人患者在COL1A1和/或COL1A2基因中具有一个或多个突变。
实施方案4.根据任何前述实施方案所述的方法，其中所述抗硬化蛋白抗体包含：
(a)重链可变区CDR1，其包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；
(b)重链可变区CDR2，其包含SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列；
(c)重链可变区CDR3，其包含SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列；
(d)轻链可变区CDR1，其包含SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列；
(e)轻链可变区CDR2，其包含SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列；和
(f)轻链可变区CDR3，其包含SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列；
或者抗硬化蛋白抗体，其结合的表位与包含以下部分的抗硬化蛋白抗体结合的表位相同：
(a)重链可变区CDR1，其包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；
(b)重链可变区CDR2，其包含SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列；
(c)重链可变区CDR3，其包含SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列；
(d)轻链可变区CDR1，其包含SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列；
(e)轻链可变区CDR2，其包含SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列；和
(f)轻链可变区CDR3，其包含SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列。
实施方案5.根据实施方案4所述的方法，其中所述抗硬化蛋白抗体结合的表位与包含VL多肽序列和VH多肽序列的抗硬化蛋白抗体结合的表位相同，所述VL多肽序列具有SEQ ID NO:81所示的氨基酸序列以及所述VH多肽序列具有SEQ ID NO:70所示的氨基酸序列。
实施方案6.根据实施方案5所述的方法，其中所述抗硬化蛋白抗体结合的表位与包含全长轻链氨基酸序列和全长重链氨基酸序列的抗硬化蛋白抗体结合的表位相同，所述全长轻链氨基酸序列具有SEQ ID NO:173所示的氨基酸序列以及所述全长重链氨基酸序列具有SEQ ID NO:172所示的氨基酸序列。
实施方案7.根据实施方案1-3中任一项所述的方法，其中所述抗硬化蛋白抗体包含至少一种选自下组的互补决定区(CDR)序列：
(a)重链可变区CDR1，其包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；
(b)重链可变区CDR2，其包含SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列；
(c)重链可变区CDR3，其包含SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列；
(d)轻链可变区CDR1，其包含SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列；
(e)轻链可变区CDR2，其包含SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列；和
(f)轻链可变区CDR3，其包含SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列。
实施方案8.根据实施方案7所述的方法，其中所述抗硬化蛋白抗体至少包含重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列。
实施方案9.根据实施方案7或实施方案8所述的方法，其中所述抗硬化蛋白抗体包含：
(a)重链可变区CDR1，其包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；
(b)重链可变区CDR2，其包含SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列；
(c)重链可变区CDR3，其包含SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列；
(d)轻链可变区CDR1，其包含SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列；
(e)轻链可变区CDR2，其包含SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列；和
(f)轻链可变区CDR3，其包含SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列。
实施方案10.根据实施方案7-9中任一项所述的方法，其中所述抗硬化蛋白抗体包含:
a)VH多肽序列，所述VH多肽序列与SEQ ID NO:70所示的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性；和/或
b)VL多肽序列，所述VL多肽序列与SEQ ID NO:81所示的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性。
实施方案11.根据实施方案10所述的方法，其中所述抗硬化蛋白抗体包含VL多肽序列和VH多肽序列，所述VL多肽序列包含SEQ ID NO:81所示的氨基酸序列，所述VH多肽序列包含SEQ ID NO:70所示的氨基酸序列。
实施方案12.根据实施方案7-11中任一项所述的方法，其中所述抗硬化蛋白抗体包含：
a)全长重链氨基酸序列，所述全长重链氨基酸序列与SEQ ID NO:172所示的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性；和/或
b)全长轻链氨基酸序列，所述全长轻链氨基酸序列与SEQ ID NO:173所示的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性。
实施方案13.根据实施方案12所述的方法，其中所述抗硬化蛋白抗体包含全长轻链氨基酸序列和全长轻链氨基酸序列，所述全长轻链氨基酸序列包含SEQ ID NO:173所示的氨基酸序列，所述全长重链氨基酸序列包含SEQ ID NO:172所示的氨基酸序列。
实施方案14.根据实施方案1-3中任一项所述的方法，其中所述抗硬化蛋白抗体结合选自SEQ ID NO:174和/或SEQ ID NO:175的序列。
实施方案15.根据实施方案1-3或14中任一项所述的方法，其中所述抗硬化蛋白抗体结合的表位与包含VL多肽序列和VH多肽序列的抗硬化蛋白抗体结合的表位相同，所述VL多肽序列具有SEQ ID NO:176所示的氨基酸序列，并且所述VH多肽序列具有SEQ ID NO:177所示的氨基酸序列。
实施方案16.根据实施方案1-3中任一项所述的方法，其中所述抗硬化蛋白抗体是blosozumab。
实施方案17.根据任何前述实施方案所述的方法，其中所述抗硬化蛋白抗体以1-50mg/kg所述人患者体重的剂量进行施用。
实施方案18.根据任何前述实施方案所述的方法，其中所述抗硬化蛋白抗体以10-30mg/kg所述人患者体重的剂量进行施用。
实施方案19.根据实施方案1-16中任一项所述的方法，其中所述抗硬化蛋白抗体以10-5000mg的剂量进行施用。
实施方案20.根据实施方案1-16或19中任一项所述的方法，其中所述抗硬化蛋白抗体以100-3000mg的剂量进行施用。
实施方案21.根据任何前述实施方案所述的方法，其中所述抗硬化蛋白抗体在每日、每周、每两周、每月、每两个月或每季度的基础上施用于所述人患者。
实施方案22.根据任何前述实施方案所述的方法，其中所述抗硬化蛋白抗体在每月的基础上施用于所述人患者。
实施方案23.根据任何前述实施方案所述的方法，其中所述抗硬化蛋白抗体在每两个月或每季度的基础上施用于所述人患者。
实施方案24.根据任何前述实施方案所述的方法，其中所述治疗方案包括第一给药方案后任选地跟随第二给药方案。
实施方案25.根据实施方案24所述的方法，其中所述第一给药方案是在每月的基础上施用1-50mg/kg所述人患者体重。
实施方案26.根据实施方案25所述的方法，其中所述第一给药方案是在每月的基础上施用20mg/kg所述人患者体重。
实施方案27.根据实施方案24-26中任一项所述的方法，其中所述第二给药方案是在每两个月或每季度的基础上施用1-50mg/kg所述人患者体重。
实施方案28.根据实施方案24-27中任一项所述的方法，其中所述第二给药方案是在每两个月或每季度的基础上施用20mg/kg所述人患者体重。
实施方案29.根据实施方案24-28中任一项所述的方法，其中所述第一给药方案是在每月的基础上施用20mg/kg所述人患者体重，并且所述第二给药方案是在每两个月或每季度的基础上施用20mg/kg所述人患者体重。
实施方案30.根据实施方案29所述的方法，其中所述第一给药方案是在每月的基础上施用20mg/kg所述人患者体重，为期1年，并且所述第二给药方案是在每两个月或每季度的基础上施用20mg/kg所述人患者体重，为期至少1年。
实施方案31.根据实施方案24所述的方法，其中所述第一给药方案是在每月的基础上施用10-5000mg。
实施方案32.根据实施方案24或实施方案31所述的方法，其中所述第二给药方案是在每两个月或每季度的基础上施用10-5000mg。
实施方案33.根据实施方案24所述的方法，其中所述第一给药方案是在每月的基础上施用10-5000mg并且所述第二给药方案是在每两个月或每季度的基础上施用10-5000mg。
实施方案34.根据实施方案33所述的方法，其中所述第一给药方案是在每月的基础上施用10-5000mg，为期1年，并且所述第二给药方案是在每两个月或每季度的基础上施用10-5000mg，为期至少1年。
实施方案35.根据任何前述实施方案所述的方法，其中以静脉内的形式施用所述抗硬化蛋白抗体。
实施方案36.根据任何前述实施方案所述的方法，所述方法包括施用额外的治疗剂，例如二膦酸盐、甲状旁腺激素、钙溶解剂、拟钙剂(例如西那卡塞)、他汀类、合成代谢类固醇、镧和锶盐、和/或氟化钠。
实施方案37.冻干物，其包含实施方案1-16中任一项所定义的抗硬化蛋白抗体。
实施方案38.根据实施方案37所述的冻干物，其还包含蔗糖、精氨酸盐酸盐、L-组氨酸、聚山梨醇酯80和盐酸。
实施方案39.剂量单位形式，其包含实施方案1-16中任一项所定义的抗硬化蛋白抗体，或者根据实施方案37或实施方案38所述的冻干物。
实施方案40.根据实施方案39所述的剂量单位形式，其包含10-5000mg的所述抗硬化蛋白抗体。
实施方案41.试剂盒，其包含实施方案1-16中任一项所定义的抗硬化蛋白抗体，根据实施方案37或实施方案38所述的冻干物，或者根据实施方案39或实施方案40所述的剂量单位形式。
实施方案42.根据实施方案41所述的试剂盒，其包含额外的治疗剂，例如联合治疗剂如双膦酸盐、甲状旁腺激素、钙溶解剂、拟钙剂(例如、西那卡塞)、他汀类、合成代谢类固醇、镧和锶盐、和/或氟化钠。
实施方案43.根据实施方案1-16中任一项所定义的抗硬化蛋白抗体，根据实施方案37或实施方案38所述的冻干物，根据实施方案39或实施方案40所述的剂量单位形式，或根据实施方案41或实施方案42所述的试剂盒，其用于实施方案1-36中任一项所述的方法。
实施方案44.基本上如本文参考附图所描述的方法、抗硬化蛋白抗体、冻干物、剂量单位形式、试剂盒和/或用途。
发明的实施方式
实施例1
本实施例描述了用于评估抗硬化蛋白抗体在治疗患有OI的成年患者中的用途的临床试验。所述患者用三个连续的患者内递增剂量的抗硬化蛋白抗体BPS804进行治疗，给药方式为静脉内输注，每次剂量间隔2周。还招募了未治疗参照组，用于监测和观察有关骨生物标志物谱变化的自然的OI疾病进展。本试验是一项在14名患有中度OI的成年患者中具有未治疗参照组的随机的、开放标签的、患者内剂量递增的研究。患者以2:1的比例随机分配至治疗组或参照组。
每两周给患者施用递增剂量的所述抗硬化蛋白抗体：第1周：5mg/kg，第3周：10mg/kg和第5周：20mg/kg。治疗期后进行约3.6个月的随访期。在筛选时被随机分配至未治疗参照组的患者仅在第7周，研究的第43天和研究结束时进入研究地点。
表1中给出了研究药物BPS804的描述。用于输注的BPS804溶液以输注的形式以约2mL/min的流速进行施用，直到递送了所需的剂量。
在基线、第43天和第141天测定骨代谢的生物标志物，包括前胶原I N-末端前肽(PINP)、前胶原IC-末端前肽(PICP)、骨特异性碱性磷酸酶(BSAP)、骨钙蛋白(OC)和骨矿物质密度(BMD)(由DXA测得)。
表1研究药物BPS804
*小瓶含有20％的超量，以允许完全取出标记量的BPS804。
在参与该研究的14名患者中，9名患者接受了抗硬化蛋白抗体的治疗。与参照组(27.4岁)相比，抗硬化蛋白抗体组(30.7岁)的患者总体平均年龄略高。两组之间的总体平均体重和身高非常相似。患者的人口统计学总结示于表2中。抗硬化蛋白抗体组中的腰椎z-评分的总体中位数分数相对较低。考虑到每组患者数量的相对大小，不能在两组之间比较双膦酸盐的整体年数。见表3。
表2以治疗组为单位的人口统计摘要
*在对生命体征评估进行筛查时取得体重和身高。
表3研究入组时以治疗组为单位的疾病特征
*筛查时取得腰椎z-分数。
#通过计算最早开始双膦酸盐药物的日期与筛查日期之间的差，从病史页面算得双膦酸盐的年数。
该研究的骨代谢生物标志物的测定结果示于图1中。在第43天，BPS804组中的PINP、PICP、BSAP和OC的几何平均值的比率为1.84、1.53、1.59和1.44，P值为<0.001、0.003、<0.001和0.012。第141天的BMD几何平均值的比率为1.04，P值为0.038。
对于PINP，PICP和BSAP相对于基线的变化的贝叶斯分析显示，增加至少70％(PINP)或30％(PICP，BSAP)的后验概率为约90％或更高。BMD的贝叶斯分析显示，BMD增加的后验概率可能为98％，而增加至少2％的后验概率则为87％。有关PINP、PICP、BSAP、OC和BMD结果的详细信息，分别参见图3、图4、图5、图6和图7。
从第8天到第43天CTX-1的几何平均结果显示CTX-1的浓度水平降低，其与骨形成生物标志物的结果一起支持骨合成代谢效应。图8显示了基线开始值的详细信息。在第43天，BPS804组自基线的比率为基线的56％，因此减少了44％。浓度水平从第50天到第85天一直稳步增加，在第113天和第141天略有下降。
根据计划的双样本t-检验(单侧)进行比率与参照组中匹配比率的比较，该比较中P值低于0.1被认为是对功效的支持性证据。基于双样本t检验分析，PINP、PICP、BSAP和OC的P值分别为<0.001、0.014、0.006和0.015，这支持了疗效证据。治疗组的BMD比较的p值为0.1，也支持了抗硬化蛋白抗体作用下的增加比参照组更大的证据。参见图2。这些分析证实了以下证据：对于所有三种生物标志物数据和BMD数据，抗硬化蛋白抗体组中的增加比参照组中的增加更高。
在施用了抗硬化蛋白抗体后，PINP、PICP、BSAP活性和OC水平的中位在第43天分别提升了84％、53％、59％和44％，而在未经治疗的参照组中相应的生物标志物保持不变或中度下降。此外，在施用了抗硬化蛋白抗体后，在第43天CTX-1水平相对于基线降低了44％。骨形成生物标志物(PINP、PICP、BSAP和OC)水平的升高和骨吸收生物标志物(CTX-1)水平的降低，与在第141天在抗硬化蛋白抗体治疗组中观察到的腰椎BMD增加～4％相一致，从而证实了抗硬化蛋白抗体在成骨不全症患者中的骨合成代谢作用的首个临床证据。
此外，研究显示抗硬化蛋白抗体在患有OI的成年患者中是安全且耐受良好的。最常报告的AE为头痛、流感、关节痛和疲劳。所报告的AE均未被认为与研究药物有关。在参照组的一名患者中报告了一例轻度强度的SAE(甲状腺肿)。鉴于住院治疗，因此认为该AE是严重的。在研究结束前治好了该SAE。该AE不指示靶器官毒性。在研究期间报告了三个骨折(受试者5103-第47天，受试者5109-第4天，受试者5113-第4天)。也没有临床上显著的能危及患者安全的异常血液学、临床化学、尿液分析、心电图或生命体征数据。
根据临床研究结果，通过像BPS804这样的骨合成代谢治疗，可以在患有OI的患者中刺激骨形成或骨合成代谢活性。BMD的增加导致了骨质量的改善，从而导致骨折率和骨折风险的降低。可能需要基因分型来识别或预测可能从这种治疗策略中获益最多的OI患者。
实施例2
基于其他抗硬化蛋白抗体的临床试验数据和公开可用的数据的组合，开发出了BPS804的药代动力学(PK)模型以及在BPS804施用后循环硬化蛋白效应的药代动力学(PK)和药效学(PD)(PK-PD)模型。将PK-PD模型与现有系统药理学模型关联起来，用于评估BPS804的建议给药方案。模型模拟用于在典型OI患者的1-2年治疗期间为剂量选择和给药间隔提供指导。这些包括这样的场景：第一年考虑不同的给药(例如，给药剂量的比较以及QM(即每月)与Q3M(即每季度)给药的比较)以及对随后几年的考虑(例如，从QM转换至Q3M给药)。
结果：
数据证明，接近对硬化蛋白的最大(>75％)抑制的BPS804给药方案提供了在循环硬化蛋白、骨转换标志物(BTM)和腰椎骨矿物质密度(BMD)方面接近最大化的应答。为了证明这一点，模拟了在持续两年期间，以QM(即每月)和Q3M(即每季度)的间隔使用0.1mg/kg至20mg/kg的剂量范围。假设BPS804对硬化蛋白有完全的暴露效应，并且相对于最大抑制，评估了结果。总的来说，20mg/kg QM剂量接近最大的硬化蛋白应答。每月和每季度的给药方案均相似地达到了最大抑制水平，并且QM和Q3M 20mg/kg的给药方案均达到了最大抑制水平。
建模结果进一步表明，与Q3M给药相比，BPS804 20mg/kg QM剂量会提供相似的或稍微更大些的12月BMD增加，这归因于BPS804对硬化蛋白更久的持续抑制。
在用BPS804 20mg/kg QM治疗了一年后，每季度施用20mg/kg剂量也可以实现几乎相同峰的最大硬化蛋白应答。给药一年后的给药方案的这种潜在变化可以反映，在硬化蛋白抑制疗法一年后在骨重塑系统中达到明显的新稳态。因此，在给药第一年后频率降低的给药可以允许从给药的第一年起维持BMD的增加。
总之，建模数据显示，预期BPS804 20mg/kg QM给药提供接近最大化的硬化蛋白抑制，其将转化为最大BMD应答。此外，鉴于观察到的在治疗第一年后骨转换标志物的变化，延长给药间隔以进行长期给药(例如，在QM给药一年后转换成每两个月(Q2M)或Q3M给药)可能是有利的。
本文列出的专利和出版物描述了本领域的普通技术。如果引用的参考文献与本说明书之间存在任何冲突，则应以本说明书为准。在描述本申请的实施例时，为了清楚起见使用了特定术语。然而，本发明并不限于如此选择的特定术语。本说明书中的任何内容都不应被视为限制本发明的范围。所呈现的所有实例均具有代表性且是非限制性的。如本领域技术人员根据上述教导所理解的，在不脱离本发明的情况下，可以修改或改变上述实施方案。因此，应当理解，在权利要求及其等同物的范围内，本发明可以不同于具体描述的方式实施。

Claims (19)

1.人或人源化抗硬化蛋白抗体在制备用于刺激被诊断为I型、III型或IV型成骨不全症(OI)的人患者中骨形成的药物中的用途，并且其中所述人或人源化抗硬化蛋白抗体包含：
(a)如SEQ ID NO:4所示的重链可变区CDR1；
(b)如SEQ ID NO:15所示的重链可变区CDR2；
(c)如SEQ ID NO:26所示的重链可变区CDR3；
(d)如SEQ ID NO:37所示的轻链可变区CDR1；
(e)如SEQ ID NO:48所示的轻链可变区CDR2；和
(f)如SEQ ID NO:59所示的轻链可变区CDR3；以及
其中所述抗硬化蛋白抗体以15-25mg/kg所述人患者体重的剂量在每月的基础上进行施用。
2.人或人源化抗硬化蛋白抗体在制备用于改善被诊断为I型、III型或IV型成骨不全症(OI)的人患者中骨矿物质密度的药物中的用途，并且其中所述人或人源化抗硬化蛋白抗体包含：
(a)如SEQ ID NO:4所示的重链可变区CDR1；
(b)如SEQ ID NO:15所示的重链可变区CDR2；
(c)如SEQ ID NO:26所示的重链可变区CDR3；
(d)如SEQ ID NO:37所示的轻链可变区CDR1；
(e)如SEQ ID NO:48所示的轻链可变区CDR2；和
(f)如SEQ ID NO:59所示的轻链可变区CDR3；以及
其中所述抗硬化蛋白抗体以15-25mg/kg所述人患者体重的剂量在每月的基础上进行施用。
3.人或人源化抗硬化蛋白抗体在制备用于降低被诊断为I型、III型或IV型成骨不全症(OI)的人患者中骨折发生率的药物中的用途，并且其中所述人或人源化抗硬化蛋白抗体包含：
(a)如SEQ ID NO:4所示的重链可变区CDR1；
(b)如SEQ ID NO:15所示的重链可变区CDR2；
(c)如SEQ ID NO:26所示的重链可变区CDR3；
(d)如SEQ ID NO:37所示的轻链可变区CDR1；
(e)如SEQ ID NO:48所示的轻链可变区CDR2；和
(f)如SEQ ID NO:59所示的轻链可变区CDR3；以及
其中所述抗硬化蛋白抗体以15-25mg/kg所述人患者体重的剂量在每月的基础上进行施用。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的用途，其中所述人患者在COL1A1和/或COL1A2基因中具有一个或多个突变。
5.根据权利要求1-3中任一项所述的用途，其中所述抗硬化蛋白抗体包含VL多肽和VH多肽，所述VL多肽如SEQ ID NO:81所示，所述VH多肽如SEQ ID NO:70所示。
6.根据权利要求1-3中任一项所述的用途，其中所述抗硬化蛋白抗体包含全长轻链和全长重链，所述全长轻链如SEQ ID NO:173所示，所述全长重链如SEQ ID NO:172所示。
7.根据权利要求1-3中任一项所述的用途，其中所述抗硬化蛋白抗体静脉内施用。
8.根据权利要求1-3中任一项所述的用途，其包括施用选自以下的额外治疗剂：二膦酸盐、甲状旁腺激素、钙溶解剂、拟钙剂、他汀类、合成代谢类固醇、镧和锶盐、和/或氟化钠。
9.根据权利要求1-3中任一项所述的用途，其包括施用干扰或中和DKK1介导的对Wnt信号传导的拮抗作用的试剂。
10.根据权利要求9所述的用途，其中所述试剂是DKK1中和抗体。
11.根据权利要求1-3中任一项所述的用途，其中所述抗硬化蛋白抗体以20mg/kg所述人患者体重的剂量在每月的基础上进行施用。
12.根据权利要求1-3中任一项所述的用途，其中所述药物为剂量单位形式。
13.根据权利要求12所述的用途，其中所述剂量单位形式包含10-300mg所述抗硬化蛋白抗体。
14.根据权利要求12所述的用途，其中所述剂量单位形式是冻干的。
15.根据权利要求12所述的用途，其中所述剂量单位形式在小瓶或注射器中。
16.根据权利要求12所述的用途，其中所述剂量单位形式还包含一种或多种额外物质和/或赋形剂。
17.根据权利要求16所述的用途，其中所述一种或多种额外物质和/或赋形剂包含以下的一种或多种：蔗糖、精氨酸盐酸盐、L-组氨酸、聚山梨醇酯80、盐酸和注射用水(wfi)。
18.根据权利要求1-3中任一项所述的用途，其中所述患者是成年患者。
19.根据权利要求1-3中任一项所述的用途，其中所述患者是儿科患者。
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