CN117430619A - 吡唑并吡啶类化合物及其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种式(I)所示的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，与现有技术中的RET抑制剂相比，本发明化合物对于RET激酶表现出更为优异的抑制活性。因此，本发明化合物对于由RET异常表达介导的疾病具有更优异的治疗效果。

Description

吡唑并吡啶类化合物及其制备方法与应用
技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及可用作RET抑制剂的吡唑并吡啶类化合物、该类化合物的制备方法、含有该类化合物的药物组合物以及该类化合物或其药物组合物在预防和/或治疗由RET异常表达介导的疾病中的应用。
背景技术
转染重排基因即RET(rearranged during transfection)基因为原癌基因，位于10号染色体。RET基因所编码的RET蛋白是一种跨膜的受体酪氨酸激酶。RET的配体是胶质源性神经营养因子家族，包括glial cell line-derived neurotrophic factor(GDNF)、neurturin(NRTN)、artemin(ARTN)和persephin(PSPN)。当配体与RET的胞外区域结合后，会导致RET二聚化和胞内激酶域自身磷酸化，从而激活RET，然后启动多条下游信号通路如RAS/MAPK/ERK、PI3K/AKT、JAK/STAT等发挥细胞增殖、迁移与分化的作用。
RET基因的异常(包括融合和点突变)会导致RET信号通路过度激活和不受控制的细胞增长，与多种肿瘤的发生和进展密切相关。RET基因融合在非小细胞肺癌(NSCLC)患者中的发生率约为1％～2％，在甲状腺乳头状癌(PTC)患者中的发生率为10％～20％；最常见的融合伴侣包括KIF5B、TRIM33、CCDC6和NCOA4。RET基因点突变在甲状腺髓样癌(MTC)患者中的发生率为60％左右；常见的突变位点包括C634R、M918T、V804L、V804M、G810R等。此外，在结直肠癌、乳腺癌、胰腺癌和其他癌症中，也观察到低频率的RET融合；在携带EGFR突变的NSCLC患者中也观察到RET融合。此外，在胃肠道病症如肠易激综合征(irritable bowelsyndrome，IBS)中，也证实了RET的异常表达和/或活性。
目前针对RET基因的靶向药，包括(1)靶向多个靶点的多激酶抑制剂类药物，如卡博替尼(Cabozantinib)、凡德他尼(Vandetanib)、乐伐替尼(Lenvatinib)等，虽能够抑制RET的活性，但由于选择性不高，通常会发生由脱靶效应导致的特别是VEGFR抑制相关的严重毒副作用，限制了临床应用；(2)选择性靶向RET基因的药物，如BLU-667、LOXO-292，其对野生型和突变型(如M918T、V804L/M等)的RET、以及常见的KIF5B-RET融合和CCDC6-RET融合等都有很好的抑制活性，且毒性相对较小。
BLU-667于WO2017079140A1中公开，由Blueprint Medicines公司开发，其结构如下所示，相关药物已于2020年9月由美国FDA批准上市。LOXO-292于WO2018071447A1中公开，由Loxo Oncology开发，其结构如下，相关药物已于2020年5月获FDA批准上市；但文献(Journal of Thoracic Oncology，Volume 15，Issue 4，April 2020，Pages 541-549)中报道有RET融合NSCLC患者产生了RET G810R耐药突变，导致对LOXO-292耐受。
因此，开发新的活性更高、且低毒性的选择性RET小分子抑制剂，用于预防和/或治疗由RET异常表达介导的疾病，是亟须解决的问题。
发明内容
本发明提供了一种结构新颖的吡唑并吡啶类化合物(以下，有时也称为“本发明化合物”)、其立体异构体或其药学上可接受的盐，本发明的吡唑并吡啶类化合物是一类选择性RET抑制剂，其能够抑制RET激酶的异常表达，因此，可用于预防和/或治疗由RET异常表达介导的疾病，例如癌症和肠易激综合征。
具体而言，本发明提供了下述式(I)所示的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，
其中：
X1、X2、X3、X4、X5、X6各自独立地选自CR6或N；
R1选自氢、氘、氰基、羧基、卤素原子、-NR7R8、硝基或任选取代的C1-6烷基；
R2选自任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-12元杂芳基、任选取代的3-8元杂环基、任选取代的C1-6烷基、任选取代的C1-6烷氧基、任选取代的C1-6烷硫基、任选取代的C2-6烯基、任选取代的C2-6炔基或-NR7R8；
R3和R4各自独立地选自氢、氘、羟基、氰基、卤素原子、硝基、任选取代的C1-6烷基、任选取代的C1-6烷氧基、任选取代的C1-6烷硫基、任选取代的C2-6烯基、任选取代的C2-6炔基、-NR7R8、-C(O)-NR7R8、任选取代的3-6元环烷基、任选取代的3-8元杂环基、任选取代的C1-6烷基-SOn-、任选取代的C1-6烷基-OC(O)-、任选取代的C1-6烷基-C(O)O-或任选取代的C1-6烷基-C(O)-；或者R3和R4与所相连的原子一起形成任选取代的3-8元杂环基、任选取代的3-6元环烷基或R3和R4一起形成氧代基；n表示1或2；
R5选自氢、氘、羟基、氰基、卤素原子、硝基、任选取代的C1-6烷基、任选取代的C1-6烷氧基、任选取代的C1-6烷硫基、任选取代的C2-6烯基、任选取代的C2-6炔基、任选取代的3-6元环烷基、任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-12元杂芳基或任选取代的3-10元杂环基；
L1选自O、S、NR7、-NR7-C(O)-、-C(O)-NR7-或-(CR9R10)m-，m表示0-3的整数；
每个R6独立地选自氢、氘、卤素原子、任选取代的C1-6烷基或任选取代的C1-6烷氧基；
每个R7独立地选自氢、氘或任选取代的C1-6烷基；
每个R8独立地选自氢、氘或任选取代的C1-6烷基；
每个R9独立地选自氢、氘、卤素原子、羟基、氰基、任选取代的C1-6烷基或任选取代的C1-6烷氧基；
每个R10独立地选自氢、氘、卤素原子、羟基、氰基、任选取代的C1-6烷基或任选取代的C1-6烷氧基；
作为上述“任选取代”中的取代基，为选自以下的至少一个基团：氘、卤素原子、羟基、氰基、氨基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、氘代C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基氨基-、(C1-6烷基)2氨基-、3-8元的杂环基、5-10元杂芳基、C1-6烷基-C(O)-、任选被C1-6烷基取代的3-6元环烷基-C(O)-、任选被C1-6烷基取代的3-8元杂环基-C(O)-、被1-5个独立地选自卤素原子、羟基、氰基、C2-6烯基、C2-6炔基、任选被C1-4烷基取代的3-8元的杂环基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的C1-6烷基、被1-5个独立地选自卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的C1-6烷氧基、被1-5个独立地选自C1-4烷基、卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的3-6元环烷基、被1-5个独立地选自C1-4烷基、卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的3-8元杂环基、被1-5个独立地选自C1-4烷基、卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的苯基、被1-5个独立地选自C1-4烷基、卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的5-10元杂芳基。
本发明还提供下述式(II)所示的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，
本发明进一步提供下述式(III)所示的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，
本发明进一步提供下述式(IV)所示的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，
本发明进一步提供一种药物组合物，其含有本发明上述式(I)所示的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，和任选的药学上可接受的载体。
本发明进一步提供本发明上述式(I)所示的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐；或者上述本发明的药物组合物在制备用于预防和/或治疗由RET异常表达介导的疾病的药物中的应用。
发明效果
本发明提供一种式(I)所示的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，与现有技术中的RET抑制剂相比，本发明化合物对于RET激酶表现出更为优异的抑制活性。因此，本发明化合物对于由RET异常表达介导的疾病具有更优异的预防和治疗效果。
具体实施方式
下面将结合具体实施方式对本发明的实施方案进行更为详细的说明，但是本领域的技术人员将会理解，下列描述的具体实施方式仅用于说明本发明，而不应视为对本发明的保护范围的限定。相反，本发明意图涵盖可被包括在由权利要求所限定的本发明范围之内的所有替代、修改和等同的方式。在没有特别说明的情况下，本发明的各实施方案可以以任意地方式进行组合，由此而得的技术方案的转换、变形、改变也包括在本发明的范围之中。
定义
本发明中，“任选”、“任选的”或“任选地”是指随后描述的事件或状况可以发生或不发生，该描述同时包括该事件或状况发生和不发生的情况。例如，“任选(地)被R取代”是指可以被R取代，也可以不被R取代，且该描述同时包括被R取代和不被R取代的情况。同样地，“任选取代”是指可以被某一基团取代，也可以不被某一基团取代；该某一基团在本发明说明书中有详述。
本发明中，“被(......)取代的”或“被(......)取代”是指基团中的一个或多个氢原子(以能被取代的氢原子的总数目为上限)，优选为1-5个氢原子，更优选为1、2、3或4个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代，只要取代后的化合物是稳定的即可。此时，存在多个取代基团时，各取代基团可以相同，也可以彼此不同。另外，取代基可以键合于所被取代的基团的相同原子上，也可以键合于基团的不同原子上，只要取代后的化合物是稳定的即可。
本发明中，“独立地”或“独立的”指其中多于一个基团选自大量可能的取代基，而那些取代基彼此可以相同或不同。例如，“Rx选自-OR或-N(R)2；每个R独立地选自H或C1-C4烷基”，其中R基团每次出现时都是独立的，它们彼此可以相同也可以不同。
本发明中，“基”和“基团”表示一价基团或者根据需要的符合化合价的二价以上的基团，例如“环烷基”包括从环烷烃中去除一个氢原子而得到的一价基团，也包括从其中的相同的碳原子或不同的两个以上碳原子上去除两个以上氢原子而得到的二价以上的基团。当“环烷基”作为末端基团时，其自然为一价基团，当环烷基在结构中作为连接基团时，其为二价以上的基团。本发明中，一价或二价以上的基团通常是指一价基团或二价基团，但是根据需要，该基团可以为更高的化合价(例如三价、四价、五价、六价等)。
本发明中，“Cd-e”(d和e表示1以上的整数，d＜e)包括d至e个碳的任何一种具体情况，例如C1-6包括C1、C2、C3、C4、C5、C6，也包括d至e中的任何一个范围，例如C1-6包括C1-3、C1-4、C1-5、C2-5、C2-4、C3-6等；同理，“d-e元”(d和e表示3以上的整数，d＜e)表示环原子数为d至e个，例如3-6元环包括3元环、4元环、5元环、6元环，也包括d至e中的任何一个范围，例如3-6元环包括3-4元环、3-5元环、4-6元环、4-5元环等。本领域技术人员可以毫无疑义地且毫无困难地对d和e进行组合。
本发明中，“卤素原子”是指氟原子、氯原子、溴原子、碘原子等，优选氟原子、氯原子、溴原子，更优选氟原子、氯原子。
本发明中，“C1-6烷基”是指从含有1-6个碳原子的烷烃部分去除一个氢原子而衍生得到的直链或支链的烷基，具体地，C1-6烷基包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、2-甲基丁基、新戊基、1-乙基丙基、正己基、异己基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、3，3-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、1，1-二甲基丁基、1，2-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基、2，3-二甲基丁基、2-乙基丁基、1-甲基-2-甲基丙基等；所述“C1-4烷基”是指从含有1-4个碳原子的烷烃部分去除一个氢原子而衍生得到的直链或支链的烷基，具体地，C1-4烷基包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基。
本发明中，“C2-6烯基”是指从含有至少一个碳碳双键的2-6个碳原子的烯烃部分去除一个氢原子而衍生得到的直链或支链的烯烃基，具体地，C2-6烯基包括但不限于乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、1，3-丁二烯-1-基、1-戊烯-3-基、2-戊烯-1-基、3-戊烯-1-基、3-戊烯-2-基、1，3-戊二烯-1-基、1，4-戊二烯-3-基、1-己烯-3-基。优选的是，“C2-6烯基”中含有一个碳碳双键。另外，本发明中，“C2-4烯基”是指上述“C2-6烯基”中，碳原子为2-4的情况。
本发明中，“C2-6炔基”是指从含有至少一个碳碳叁键的2-6个碳原子的炔烃部分去除一个氢原子而衍生得到的直链或支链的炔烃基，例如，可以列举乙炔基、丙炔基、2-丁炔-1-基、2-戊炔-1-基、3-戊炔-1-基、4-甲基-2-戊炔-1-基、2-己炔-1-基、2-己炔-2-基、3-己炔-1-基、3-己炔-2-基等。优选的是，“C2-6炔基”中含有一个碳碳叁键。另外，本发明中，“C2-4炔基”是指上述“C2-6炔基”中，碳原子为2-4的情况。
本发明中，“羧基”是指基团-C(O)OH所表示的基团。
本发明中，“氘代C1-6烷基”是指上文所定义的“C1-6烷基”中的至少一个氢原子被氘原子替代的基团，氘代的数目以“C1-6烷基”中所能被取代的氢原子的总数目为上限。
本发明中，“C1-6烷基氨基”、“(C1-6烷基)2氨基”是指上文所定义的“C1-6烷基”分别连接于NH-和N-的情况，各自形成(C1-6烷基)NH-和(C1-6烷基)2N-。此时，“C1-6烷基”通过NH-、N-连接于分子其余部分。具体地，C1-6烷基氨基包括但不限于甲氨基、乙氨基、正丙氨基、异丙氨基、正丁基氨基、异丁基氨基、仲丁基氨基、叔丁基氨基、正戊基氨基、异戊基氨基、2-甲基丁基氨基、新戊基氨基、1-乙基丙基氨基、正己基氨基、异己基氨基、4-甲基戊基氨基。(C1-6烷基)2氨基中的两个C1-6烷基彼此可以相同也可以不同，作为其实例包括但不限于二甲氨基、二乙氨基、二正丙氨基、二异丙氨基、二正丁基氨基、二异丁基氨基、二正戊基氨基、二正己基氨基、甲基乙基氨基、甲基丙基氨基、乙基丙基氨基、甲基丁基氨基。
本发明中，“C1-6烷基-SOn-(n表示1或2)”是指上文所定义的“C1-6烷基”连接于-SOn-的情况，此时，“C1-6烷基”通过-SOn-连接于分子其余部分。具体地，C1-6烷基-SOn-(n表示1或2)包括但不限于甲磺酰基、乙磺酰基、丙磺酰基、丁磺酰基、甲基亚磺酰基、乙基亚磺酰基、丙基亚磺酰基、丁基亚磺酰基。
本发明中，“C1-6烷氧基”是指上文所定义的“C1-6烷基”通过氧原子与分子其余部分连接的基团，即“C1-6烷基-O-”基团，包括但不限于，例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、新戊氧基、正己氧基等；所述的“C1-4烷氧基”是指上文所定义的“C1-4烷基”通过氧原子与分子其余部分连接的基团，即“C1-4烷基-O-”基团，包括但不限于，甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基。
本发明中，“C1-6烷硫基”是指上文所定义的“C1-6烷基”通过硫原子与分子其余部分连接的基团，即“C1-6烷基-S-”基团，包括但不限于，例如甲硫基、乙硫基、正丙硫基、异丙硫基、正丁硫基、异丁硫基、仲丁硫基、叔丁硫基、新戊硫基、正己硫基等；所述的“C1-4烷硫基”是指上文所定义的“C1-4烷基”通过硫原子与分子其余部分连接的基团，即“C1-4烷基-S-”基团，包括但不限于，甲硫基、乙硫基、正丙硫基、异丙硫基、正丁硫基、异丁硫基、仲丁硫基、叔丁硫基。
本发明中，“被1-5个独立地选自卤素原子、羟基、氰基、C2-6烯基、C2-6炔基、任选被C1-4烷基取代的3-8元的杂环基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的C1-6烷基”是指用1-5个(优选1-4个，更优选1、2或3个)选自卤素原子、羟基、氰基、C2-6烯基、C2-6炔基、任选被C1-4烷基取代的3-8元的杂环基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基替代上文所定义的“C1-6烷基”上相应个数的氢原子所形成的基团，其中当具有多个取代基时，各取代基可以相同或不同。例如，具体地，作为“被1-5个卤素原子取代的C1-6烷基”包括但不限于一氟甲基、三氟甲基、三氯甲基、二氟甲基、二氯甲基、一氯甲基、CF3CH2-、CHF2CH2-、CH2FCH2-、CH3CHF-、CH2FCHCl-、CF3CH2CH2-、(CH3)2CF-、CF3CH2CH(CH3)CH2-等；相应地，作为“被1-5个羟基取代的C1-6烷基”，可以列举上述“被1-5个卤素原子取代的C1-6烷基”中举出的卤素原子被羟基替代的情况(只要所得基团在化学上是稳定的)；作为“被1-5个氰基取代的C1-6烷基”，可以列举上述“被1-5个卤素原子取代的C1-6烷基”中举出的卤素原子被氰基替代的情况(只要所得基团在化学上是稳定的)；作为“被1-5个C2-6烯基取代的C1-6烷基”，可以列举上述“被1-5个卤素原子取代的C1-6烷基”中举出的卤素原子被C2-6烯基替代的情况(只要所得基团在化学上是稳定的)；作为“被1-5个C2-6炔基取代的C1-6烷基”，可以列举上述“被1-5个卤素原子取代的C1-6烷基”中举出的卤素原子被C2-6炔基替代的情况(只要所得基团在化学上是稳定的)；作为“被1-5个任选被C1-4烷基取代的3-8元的杂环基取代的C1-6烷基”，可以列举上述“被1-5个卤素原子取代的C1-6烷基”中举出的卤素原子任选被C1-4烷基取代的3-8元的杂环基替代的情况(只要所得基团在化学上是稳定的)；作为“被1-5个任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基取代的C1-6烷基”，可以列举上述“被1-5个卤素原子取代的C1-6烷基”中举出的卤素原子任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基替代的情况(只要所得基团在化学上是稳定的)。应予说明，存在多个羟基、多个氰基、多个C2-6烯基、多个C2-6炔基、多个任选被C1-4烷基取代的3-8元的杂环基、多个任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基时，优选多个取代基不键合于C1-6烷基的相同碳原子上。“被1-5个选自卤素原子、羟基、氰基、C2-6烯基、C2-6炔基、任选被C1-4烷基取代的3-8元的杂环基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的C1-4烷基”是指用1-5个(优选1-4个，更优选1、2或3个)选自卤素原子、羟基、氰基、C2-6烯基、C2-6炔基、任选被C1-4烷基取代的3-8元的杂环基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基替代上文所定义的“C1-4烷基”上相应个数的氢原子所形成的基团，其中当具有多个取代基时，各取代基可以相同或不同。例如，具体地，作为“被1-5个卤素原子取代的C1-4烷基”包括但不限于一氟甲基、三氟甲基、三氯甲基、二氟甲基、二氯甲基、一氯甲基、CF3CH2-、CHF2CH2-、CH2FCH2-、CH3CHF-、CH2FCHCl-、CF3CH2CH2-、(CH3)2CF-等；相应地，作为“被1-5个羟基取代的C1-4烷基”，可以列举上述“被1-5个卤素原子取代的C1-4烷基”中举出的卤素原子被羟基替代的情况(只要所得基团在化学上是稳定的)；作为“被1-5个氰基取代的C1-4烷基”，可以列举上述“被1-5个卤素原子取代的C1-4烷基”中举出的卤素原子被氰基替代的情况(只要所得基团在化学上是稳定的)；作为“被1-5个C2-6烯基取代的C1-4烷基”，可以列举上述“被1-5个卤素原子取代的C1-4烷基”中举出的卤素原子被C2-6烯基替代的情况(只要所得基团在化学上是稳定的)；作为“被1-5个C2-6炔基取代的C1-4烷基”，可以列举上述“被1-5个卤素原子取代的C1-4烷基”中举出的卤素原子被C2-6炔基替代的情况(只要所得基团在化学上是稳定的)；作为“被1-5个任选被C1-4烷基取代的3-8元的杂环基取代的C1-4烷基”，可以列举上述“被1-5个卤素原子取代的C1-4烷基”中举出的卤素原子任选被C1-4烷基取代的3-8元的杂环基替代的情况(只要所得基团在化学上是稳定的)；作为“被1-5个任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基取代的C1-4烷基”，可以列举上述“被1-5个卤素原子取代的C1-4烷基”中举出的卤素原子任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基替代的情况(只要所得基团在化学上是稳定的)。应予说明，存在多个羟基、多个氰基、多个C2-6烯基、多个C2-6炔基、多个任选被C1-4烷基取代的3-8元的杂环基、多个任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基时，优选多个取代基不键合于C1-4烷基的相同碳原子上。以上的例子中，“C1-6烷基”、“C1-4烷基”被相同的基团取代，但并不限定于此，如上所述，“C1-6烷基”、“C1-4烷基”可以被1-5个(优选1-4个，更优选1、2或3个)选自卤素原子、羟基、氰基、C2-6烯基、C2-6炔基、任选被C1-4烷基取代的3-8元的杂环基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代，其中当具有多个取代基时，各取代基可以相同或不同。
本发明中，“被1-5个独立地选自卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的C1-6烷氧基”是指用1-5个(优选1-4个，更优选1、2或3个)选自卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基替代上文所定义的“C1-6烷氧基”上相应个数的氢原子所形成的基团，其中当具有多个取代基时，各取代基可以相同或不同。例如，具体地，作为“被1-5个卤素原子取代的C1-6烷氧基”包括但不限于一氟甲氧基、三氟甲氧基、三氯甲氧基、二氟甲氧基、二氯甲氧基、一氯甲氧基、CF3CH2-O-、CHF2CH2-O-、CH2FCH2-O-、CF3CH2CH2-O-等；相应地，作为“被1-5个羟基取代的C1-6烷氧基”，可以列举上述“被1-5个卤素原子取代的C1-6烷氧基”中举出的卤素原子被羟基替代的情况(只要所得基团在化学上是稳定的)；作为“被1-5个任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基取代的C1-6烷氧基”，可以列举上述“被1-5个卤素原子取代的C1-6烷氧基”中举出的卤素原子任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基替代的情况(只要所得基团在化学上是稳定的)；应予说明，存在多个羟基、多个任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基时，优选多个羟基、多个任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基不键合于C1-6烷氧基的同一碳原子上。“被1-5个选自卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的C1-4烷氧基”是指用1-5个(优选1-4个，更优选1、2或3个)选自卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基替代上文所定义的“C1-4烷氧基”上相应个数的氢原子所形成的基团，其中当具有多个取代基时，各取代基可以相同或不同。例如，具体地，作为“被1-5个卤素原子取代的C1-4烷氧基”包括但不限于一氟甲氧基、三氟甲氧基、三氯甲氧基、二氟甲氧基、二氯甲氧基、一氯甲氧基、CF3CH2-O-、CHF2CH2-O-、CH2FCH2-O-、CF3CH2CH2-O-等；相应地，作为“被1-5个羟基取代的C1-4烷氧基”，可以列举上述“被1-5个卤素原子取代的C1-4烷氧基”中举出的卤素原子被羟基替代的情况；作为“被1-5个任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基取代的C1-4烷氧基”，可以列举上述“被1-5个卤素原子取代的C1-4烷氧基”中举出的卤素原子任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基替代的情况；应予说明，存在多个羟基、多个任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基时，优选多个羟基、多个任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基不键合于C1-4烷氧基的同一碳原子上。以上例子中，“C1-6烷氧基”、“C1-4烷氧基”被相同的基团取代，但并不限定于此，如上所述，“C1-6烷氧基”、“C1-4烷氧基”可以被1-5个(优选1-4个，更优选1、2或3个)选自卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代，其中当具有多个取代基时，各取代基可以相同或不同。
同样地，“被1-5个独立地选自C1-4烷基、卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的3-6元环烷基”；“被1-5个独立地选自C1-4烷基、卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的3-8元杂环基”；“被1-5个独立地选自C1-4烷基、卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的苯基”；“被1-5个独立地选自C1-4烷基、卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的5-10元杂芳基”各自表示本文下述定义的“3-6元环烷基”、“3-8元杂环基”、“苯基”、“5-10元杂芳基”被1-5个(优选1-4个，更优选1、2或3个)选自C1-4烷基、卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代，其中当具有多个取代基时，各取代基可以相同或不同。
本发明中，“环原子”是指形成环的原子，包括但不限于C、N、O、P和S；“环碳原子”是指形成环的C原子；“环杂原子”是指除C原子之外的成环原子，包括但不限于环原子N、O、P和S。
本发明中，“环烷基”是指饱和的或部分不饱和的环状烃基，它可以是一价基团或二价以上的基团，包括单环环烷基和多环环烷基，多环环烷基包括螺环环烷基、稠环环烷基和桥环环烷基，所述“螺环环烷基”是指单环之间共用一个环碳原子(称螺原子)的多环环烷基，所述“稠环环烷基”是指基团中的每个环与其他环共用相邻的一对环碳原子的多环环烷基，所述“桥环环烷基”是指任意两个环共用两个不直接连接的环碳原子的多环环烷基。
本发明中，“3-6元环烷基”是指包括3至6个环碳原子的环烷基，包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基等。“3-4元环烷基”是指包括3至4个环碳原子的环烷基，包括但不限于环丙基、环丁基等。
本发明中，“杂环基”是指其中一个或多个(优选1个、2个、3个或4个)环原子为选自N、O或S中的环杂原子的饱和或部分不饱和的环状基团，它可以是一价基团或二价以上的基团，其可以是饱和的，也可以是不饱和的(例如，在环上具有1、2、3或4个以上的碳碳双键、碳碳三键)包括单环杂环基和多环杂环基，多环杂环基包括螺环杂环基、稠环杂环基和桥环杂环基，所述“螺环杂环基”是指单环之间共用一个环原子(称螺原子)的多环杂环基，所述“稠环杂环基”是指基团中的每个环与其他环共用相邻的一对环原子的多环杂环基，所述“桥环杂环基”是指任意两个环共用两个不直接连接的环原子的多环杂环基。另，杂环基同时还包括环原子C、S被氧代的情况，如环原子C、S被C(＝O)、S(＝O)、S(＝O)2替代。
本发明中，“3-10元杂环基”是指包括3至10个环原子的杂环基，优选含有1个、2个或3个选自N、O或S中的环杂原子，其可以为单环基团，也可以为芳(杂)环与非芳(杂)环的稠合后而形成的基团(其中至少包含一个环杂原子)，其可以是饱和的，也可以是不饱和的(例如，在环上具有1、2或3个以上的碳碳双键、碳碳三键)。具体地，3-10元杂环基包括但不限于氮杂环丙基、氧杂环丙基、氮杂环丁基、氧杂环丁基、硫杂环丁基、四氢呋喃基、四氢吡咯基、吡咯烷酮基、四氢噻吩基、咪唑烷基、吡唑烷基、1，2-噁唑烷基、1，3-噁唑烷基、1，2-噻唑烷基、1，3-噻唑烷基、四氢-2H-吡喃基、四氢-2H-噻喃基、哌啶基、哌啶酮基、哌嗪基、吗啉基、1，4-二氧杂环己烷基、1，4-氧硫杂环己烷基、4，5-二氢异噁唑基、4，5-二氢噁唑基、2，5-二氢噁唑基、2，3-二氢噁唑基、3，4-二氢-2H-吡咯基、2，3-二氢-1H-吡咯基、2，5-二氢-1H-咪唑基、4，5-二氢-1H-咪唑基、4，5-二氢-1H-吡唑基、4，5-二氢-3H-吡唑基、4，5-二氢噻唑基、2，5-二氢噻唑基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、2H-噻喃基、3，6-二氢-2H-吡喃、6，7--二氢-5H-吡咯并[1，2-a]咪唑、4H-噻喃基、2，3，4，5-四氢吡啶基、1，2-异噁嗪基、1，4-异噁嗪基、6H-1，3-噁嗪基、 等。
本发明中，“3-8元杂环基”是指包括3至8个环原子的杂环基，优选含有1个、2个或3个选自N、O或S的环杂原子，其可以是饱和的，也可以是不饱和的(例如，在环上具有1、2或3个以上的碳碳双键、碳碳三键)。具体地，3-8元杂环基包括但不限于上述“3-10元杂环基”中环原子为3-8的基团。本发明中，“3-6元杂环基”是指包括3至6个环原子的杂环基，优选含有1个、2个或3个选自N、O或S的环杂原子，具体地，3-6元杂环基包括但不限于上述“3-10元杂环基”中环原子为3-6的基团。本发明中，“3-4元杂环基”是指包括3至4个环原子的杂环基，优选含有1个或2个选自N、O或S的环杂原子，具体地，3-4元杂环基包括但不限于上述“3-10元杂环基”中环原子为3-4的基团。
本发明中，“芳基”是指具有芳香性的环状烃基，它可以是一价基团或二价以上的基团，包括单环芳基和稠环芳基，“稠环芳基”是指基团中的每个环与其他环共用相邻的一对环碳原子的含有多个环(优选含有2个或3个环)的芳基。本发明中，“C6-10芳基”是指包括6至10个环碳原子的芳基，包括苯基、萘基。
本发明中，“杂芳基”是指其中一个或多个(优选1-5个，更优选1个、2个、3个或4个)环原子为选自N、O或S中的环杂原子的具有芳香性的环状基团，它可以是一价基团或二价以上的基团，包括单环杂芳基和稠环杂芳基，所述“稠环杂芳基”是指基团中的每个环与其他环共用相邻的一对环原子的含有多个环(优选含有2个或3个环)的杂芳基。本发明中，“5-12元杂芳基”是指包括5至12个环原子的杂芳基，优选含有1个、2个、3个或4个选自N、O或S的环杂原子，具体地，5-12元杂芳基包括但不限于呋喃基、咪唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、噁二唑基、噁唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吡唑基、吡咯基、四唑基、噻二唑基、噻吩基、三唑基、三嗪基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噁二唑基、苯并噻二唑基、苯并噻唑基、呋喃并吡啶基、吲唑基、吲哚基、异吲哚基、异喹啉基、嘌呤基、喹啉基、喹喔啉基、噻吩并吡啶基、吡咯并吡啶基、吡唑并吡啶基、等，优选/> 等。
本发明中，“5-10元杂芳基”是指包括5至10个环原子的杂芳基，优选含有1个、2个或3个选自N、O或S的环杂原子的具有芳香性的环状烃基。具体地，5-10元杂芳基包括但不限于上述“5-12元杂芳基”中环原子为5-10的基团。在本发明中，“含氮5-9元杂芳基”是指包括5至9个环原子的、至少一个环原子为氮原子的杂芳基，除氮原子之外，还可以包含1个、2个或3个选自O或S的环杂原子，具体地，含氮5-9元杂芳基包括但不限于上述“5-12元杂芳基”中环原子为5-9的、含有成环氮原子的基团。本发明中，“5-6元杂芳基”是指包括5至6个环原子的杂芳基，优选含有1个、2个或3个选自N、O或S的环杂原子，具体地，5-6元杂芳基包括但不限于呋喃基、咪唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、噁二唑基、噁唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吡唑基、吡咯基、四唑基、噻二唑基、噻吩基、三唑基、三嗪基等，优选/> 等。
本发明中，“氨基保护基”是指连接在氨基上且在一定条件下容易脱除的化学基团，其包括但不限于烷氧羰基类、酰基类、烷基类；例如叔丁氧羰基、苄氧羰基、芴甲氧羰基、烯丙氧羰基、邻苯二甲酰基、苄基、对甲氧基苄基、三苯甲基等。本领域技术人员可以参照本领域常用教科书Greene’s Protective Groups in Organic Synthesis(4th edition)进行适当的选择和操作。
本发明中，“药学上可接受的”指其在合理的医学判断范围内，适于接触人类和动物的组织而没有过度毒性、刺激或其它问题或并发症，与合理的益处/风险比相称的那些化合物、物质、组合物和剂型。
本发明中，“药学上可接受的载体”指的是一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组分能与本发明化合物以及它们之间相互掺和，而不明显降低化合物的药效。药理上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素、甲基纤维素、羟丙甲纤维素其及衍生物、醋酸纤维素及其衍生物、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁/钙、氢化植物油、硬脂酸富马酸钠)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂、润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂等。
本发明中，针对药物或药理学活性剂而言，“有效量”是指无毒的但能达到预期效果的药物或药理学活性剂的足够用量。有效量的确定因受试者而异，取决于受试者的身体和病症情况，也取决于具体的活性物质，个案中合适的有效量可以由本领域技术人员根据常规试验确定。
本发明中，“活性成分”、“活性物质”或“活性剂”是指一种化学实体，它可以有效地治疗目标紊乱、疾病或病症。
本发明中，“患者”、“受试者”、“个体”或“对象”包括人、动物、脊椎动物、哺乳动物、啮齿动物(例如豚鼠、仓鼠、大鼠、小鼠)、鼠科动物(例如小鼠)、犬科动物(例如狗)、灵长目动物、类人猿(如猴或无尾猿)、猴(如狨猴、狒狒)、无尾猿(例如大猩猩、黑猩猩、猩猩、长臂猿)。在一些实施方案中，“患者”为人。在本发明中，“患者”、“受试者”、“个体”、“对象”的表述可以任意替换使用。
本发明中，“预防和/或治疗”意为将本发明所述化合物或制剂进行给药以预防、改善或消除疾病或与所述疾病相关的一个或多个症状，且包括：
(i)预防疾病或疾病状态在哺乳动物中出现，特别是当这类哺乳动物易患有该疾病或疾病状态，但尚未被诊断为已患有该疾病或疾病状态时；
(ii)抑制疾病或疾病状态，即，遏制其发展；
(iii)缓解疾病或疾病状态，即，使该疾病或疾病状态消退。
具体而言，本发明提供了下述式(I)所示的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，
其中：
X1、X2、X3、X4、X5、X6各自独立地选自CR6或N；
R1选自氢、氘、氰基、羧基、卤素原子、-NR7R8、硝基或任选取代的C1-6烷基；
R2选自任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-12元杂芳基、任选取代的3-8元杂环基、任选取代的C1-6烷基、任选取代的C1-6烷氧基、任选取代的C1-6烷硫基、任选取代的C2-6烯基、任选取代的C2-6炔基或-NR7R8；
R3和R4各自独立地选自氢、氘、羟基、氰基、卤素原子、硝基、任选取代的C1-6烷基、任选取代的C1-6烷氧基、任选取代的C1-6烷硫基、任选取代的C2-6烯基、任选取代的C2-6炔基、-NR7R8、-C(O)-NR7R8、任选取代的3-6元环烷基、任选取代的3-8元杂环基、任选取代的C1-6烷基-SOn-、任选取代的C1-6烷基-OC(O)-、任选取代的C1-6烷基-C(O)O-或任选取代的C1-6烷基-C(O)-；或者R3和R4与所相连的原子一起形成任选取代的3-8元杂环基、任选取代的3-6元环烷基或R3和R4一起形成氧代基；n表示1或2；
R5选自氢、氘、羟基、氰基、卤素原子、硝基、任选取代的C1-6烷基、任选取代的C1-6烷氧基、任选取代的C1-6烷硫基、任选取代的C2-6烯基、任选取代的C2-6炔基、任选取代的3-6元环烷基、任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-12元杂芳基或任选取代的3-10元杂环基；
L1选自O、S、NR7、-NR7-C(O)-、-C(O)-NR7-或-(CR9R10)m-，m表示0-3的整数；
每个R6独立地选自氢、氘、卤素原子、任选取代的C1-6烷基或任选取代的C1-6烷氧基；
每个R7独立地选自氢、氘或任选取代的C1-6烷基；
每个R8独立地选自氢、氘或任选取代的C1-6烷基；
每个R9独立地选自氢、氘、卤素原子、羟基、氰基、任选取代的C1-6烷基或任选取代的C1-6烷氧基；
每个R10独立地选自氢、氘、卤素原子、羟基、氰基、任选取代的C1-6烷基或任选取代的C1-6烷氧基；
作为上述任选取代的取代基，为选自以下的至少一个基团：氘、卤素原子、羟基、氰基、氨基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、氘代C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基氨基-、(C1-6烷基)2氨基-、3-8元的杂环基、5-10元杂芳基、C1-6烷基-C(O)-、任选被C1-6烷基取代的3-6元环烷基-C(O)-、任选被C1-6烷基取代的3-8元杂环基-C(O)-、被1-5个独立地选自卤素原子、羟基、氰基、C2-6烯基、C2-6炔基、任选被C1-4烷基取代的3-8元的杂环基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的C1-6烷基、被1-5个独立地选自卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的C1-6烷氧基、被1-5个独立地选自C1-4烷基、卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的3-6元环烷基、被1-5个独立地选自C1-4烷基、卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的3-8元杂环基、被1-5个独立地选自C1-4烷基、卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的苯基、被1-5个独立地选自C1-4烷基、卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的5-10元杂芳基。
在本发明的一个实施方式中，X1、X2、X3优选为CR6。在本发明的一个实施方式中，X4优选为N。在本发明的一个实施方式中，优选X5、X6中的一个为N，更优选X5、X6均为N。
在本发明的一个实施方式中，R1优选为氰基、硝基、卤素原子或任选取代的C1-6烷基，更优选为氰基。
在本发明的一个实施方式中，R2为任选取代的5-12元杂芳基、任选取代的3-8元杂环基、任选取代的C1-6烷基、任选取代的C2-6炔基或-NR7R8。在本发明的一个实施方式中，R2为任选取代的5-12元含氮杂芳基、任选取代的3-8元含氮杂环基、任选取代的C2-4炔基或-NR7R8。在本发明的一个实施方式中，R2为任选取代的吡唑基、任选取代的咪唑基、任选取代的噻吩基、任选取代的噻唑基、任选取代的吡咯基、任选取代的吲哚基、任选取代的吡咯并吡啶基、任选取代的吡唑并吡啶基、任选取代的吡咯并咪唑基、任选取代的2H吡喃基、任选取代的吡咯烷基、任选取代的氮杂环丁基、任选取代的C1-6烷基、任选取代的C2-4炔基或-NR7R8。作为R2基团中的R7、R8，优选各自独立地选自氢、任选取代的C1-6烷基；更优选R7和R8中的一个为H，另一个为任选取代的C1-4烷基。
在本发明的一个实施方式中，作为R2基团中的“任选取代”中的取代基，优选为选自以下的至少一个基团：C1-6烷基、氰基、羟基、卤素原子、C1-6烷基氨基-、(C1-6烷基)2氨基-、任选被1-5个独立地选自卤素原子、羟基、氰基、C2-6烯基、C2-6炔基、任选被C1-4烷基取代的3-8元的杂环基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的C1-6烷基、任选被1-5个选自卤素原子和羟基中的取代基取代的C1-6烷氧基、C1-6烷基-C(O)-、任选被C1-6烷基取代的3-6元环烷基-C(O)-、任选被C1-6烷基取代的3-8元杂环基-C(O)-、被1-5个选自卤素原子、任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基和羟基中的取代基取代的3-6元环烷基、任选被1-5个独立地选自卤素原子、羟基和C1-4烷基中的取代基取代的3-8元杂环烷基、被1-5个选自C1-4烷基、卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的5-10元杂芳基。
在本发明的一个实施方式中，作为R2基团中的“任选取代”中的取代基，更优选为选自以下的至少一个基团：C1-4烷基、氰基、羟基、卤素原子、C1-4烷基氨基-、(C1-4烷基)2氨基-、任选被1-3个独立地选自卤素原子、羟基、氰基、C2-4烯基、C2-4炔基、任选被C1-4烷基取代的3-8元的杂环基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的C1-4烷基、任选被1-3个选自卤素原子和羟基中的取代基取代的C1-4烷氧基、C1-4烷基-C(O)-、任选被C1-4烷基取代的3-6元环烷基-C(O)-、任选被C1-4烷基取代的3-8元杂环基-C(O)-、被1-3个选自卤素原子、任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基和羟基中的取代基取代的3-4元环烷基、任选被1-3个独立地选自卤素原子、羟基和C1-4烷基中的取代基取代的3-4元杂环烷基、被1-5个选自C1-4烷基、卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的5-10元杂芳基。
在本发明的一个实施方式中，R2为下式(2-i)所示的杂芳基，
式中，X21和X23各自独立地选自N、CR21，X22选自O、S、CR21R21、NR21，R21各自独立地选自氢、卤素原子、氰基、任选被1-5个独立地选自卤素原子、羟基、氰基、C2-6烯基、C2-6炔基、任选被C1-4烷基取代的3-8元的杂环基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基-C(O)-、任选被C1-6烷基取代的3-6元环烷基-C(O)-、任选被C1-6烷基取代的3-8元杂环基-C(O)-；R26选自氢、卤素原子或C1-6烷基。
在本发明的一个实施方式中，R2为-NR27R28，R27、R28各自独立地选自氢、氘或任选被1-5个独立地选自卤素原子的取代基取代的C1-6烷基。
在本发明的一个实施方式中，R2为式(2-i)所示的杂芳基，所述式(2-i)所示的杂芳基为下式(2-i′)、(2-i″)和(2-i″′)中的至少一种所示的杂芳基，
式(2-i′)、式(2-i″)和式(2-i″′)中，各基团的定义与上述式(2-i)中的定义相同。
在本发明的一个实施方式中，式(2-i)所示的杂芳基为选自任选被R21和/或R26取代的以下基团中的至少一种：噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、噁二唑基、噁唑基、吡唑基、三唑基，例如可以为选自任选被R21和/或R26取代的以下基团中的至少一种：
在本发明的一个实施方式中，R2为选自式(2-ii)、(2-iii)和(2-iv)中的至少一种；
式中，X24为NR22，X25为N或CR22，R22各自独立地选自氢或C1-6烷基，R26选自氢、卤素原子或C1-6烷基。其中，R26可以在式(2-ii)、(2-iii)和(2-iv)的稠环的任意环原子上取代。
在本发明的一个实施方式中，R2为选自式(2-ii′)、式(2-ii″)、(2-iii′)和(2-iv′)中的至少一种；
式(2-ii′)、式(2-ii″)、式(2-iii′)和式(2-iv′)中，各基团的定义与上述式(2-ii)、(2-iii)和(2-iv)中的定义相同。
在本发明的一个实施方式中，R2为式(2-v)所示的基团：
式中，X26为O、S或NR22，R22各自独立地选自氢或C1-6烷基，R23选自氢或C1-6烷基。
在本发明的一个实施方式中，R2为式(2-v)所示的基团，所述式(2-v)所示的基团为式(2-v′)所示的基团：
/>
式(2-v′)中，各基团的定义与上述式(2-v)中的定义相同。
在本发明的一个实施方式中，R2为式(2-vi)所示的基团：
式中，p表示1-3的整数，优选1或2，q表示0-3的整数，优选1或2，R24各自独立地选自氢、羟基、卤素原子、氰基、任选被1-5个独立地选自卤素原子、羟基、氰基中的取代基取代的C1-6烷基、任选被1-5个独立地选自卤素原子、羟基、氰基中的取代基取代的C1-6烷氧基。
在本发明的一个实施方式中，R2为式(2-vii)所示的基团：
式中，R25选自氢、羟基、卤素原子、氰基、任选被1-5个独立地选自卤素原子、羟基、氰基、任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的C1-6烷基、任选被1-5个独立地选自C1-4烷基、卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的3-6元环烷基、任选被1-5个独立地选自C1-4烷基、卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的5-10元杂芳基。
在本发明的一个实施方式中，式(2-i)、式(2-i′)、式(2-i″)和式(2-i″′)所示的杂芳基中，X21为N，X22为NR21，X23为CR21。
在本发明的一个实施方式中，式(2-i)、式(2-i′)、式(2-i″)和式(2-i″′)所示的杂芳基中，X21为CR21，X22为S，X23为CR21。
在本发明的一个实施方式中，式(2-i)、式(2-i′)、式(2-i″)和式(2-i″′)所示的杂芳基中，X21为CR21，X22为S，X23为N。
在本发明的一个实施方式中，式(2-i)、式(2-i′)、式(2-i″)和式(2-i″′)所示的杂芳基中，X21为CR21，X22为NR21，X23为N。
在本发明的一个实施方式中，式(2-i)、式(2-i′)、式(2-i″)和式(2-i″′)所示的杂芳基中，X21为CR21，X22为NR21，X23为CR21。
在本发明的一个实施方式中，式(2-i)、式(2-i′)、式(2-i″)和式(2-i″′)所示的杂芳基中，R21各自独立地选自氢、卤素原子、氰基、任选被1-3个独立地选自卤素原子、羟基、氰基、C2-4烯基、C2-4炔基、任选被C1-4烷基取代的3-8元的杂环基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷基-C(O)-、任选被C1-4烷基取代的3-6元环烷基-C(O)-、任选被C1-4烷基取代的3-8元杂环基-C(O)-。
在本发明的一个实施方式中，式(2-i)、式(2-i′)、式(2-i″)和式(2-i″′)所示的杂芳基中，R21各自独立地选自氢、卤素原子、氰基、C1-4烷氧基、C1-4烷基-C(O)-、任选被C1-4烷基取代的任选被C1-4烷基取代的/>任选被1-3个独立地选自卤素原子、羟基、氰基、C2-4烯基、C2-4炔基、/>和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的C1-4烷基，其中，每个R7独立地选自氢或C1-4烷基。
在本发明的一个实施方式中，式(2-i)、式(2-i′)、式(2-i″)和式(2-i″′)所示的杂芳基中，R21选自氢、氟原子、氯原子、溴原子、氰基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、甲基-C(O)-、乙基-C(O)-、丙基-C(O)-、任选被1-3个独立地选自氟原子、氯原子、羟基、氰基、乙烯基、乙炔基、/>和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的甲基、乙基或丙基，其中，每个R7独立地选自氢或C1-4烷基。
在本发明的一个实施方式中，式(2-i)、式(2-i′)、式(2-i″)和式(2-i″′)所示的杂芳基中，R26选自氢或C1-4烷基。
在本发明的一个实施方式中，R27、R28各自独立地选自氢、氘或任选被1-3个独立地选自卤素原子的取代基取代的C1-4烷基。在本发明的一个实施方式中，R27和R28中的一个为氢，另一个为被1-3个独立地选自氟原子、氯原子中的取代基取代的C1-4烷基。
在本发明的一个实施方式中，式(2-ii)、式(2-ii′)和式(2-ii″)所示的基团中，X24为NR22，R22各自独立地选自氢或C1-4烷基。
在本发明的一个实施方式中，式(2-ii)、式(2-ii′)和式(2-ii″)所示的基团中，X25为CR22或N，R22各自独立地选自氢或C1-4烷基。
在本发明的一个实施方式中，式(2-ii)、式(2-iii)、式(2-iv)、式(2-ii′)、式(2-ii″)、(2-iii′)和(2-iv′)所示的基团中，R26选自氢或C1-4烷基。
在本发明的一个实施方式中，式(2-v)、式(2-v′)所示的基团中，X26为NR22，R22各自独立地选自氢或C1-4烷基。
在本发明的一个实施方式中，式(2-v)、式(2-v′)所示的基团中，X26为O或S。
在本发明的一个实施方式中，式(2-v)、式(2-v′)所示的基团中，R23选自氢或C1-4烷基。
在本发明的一个实施方式中，式(2-vi)所示的基团中，R24各自独立地选自氢、羟基、卤素原子、氰基、任选被1-3个独立地选自卤素原子、羟基、氰基中的取代基取代的C1-4烷基、任选被1-3个独立地选自卤素原子、羟基、氰基中的取代基取代的C1-4烷氧基。
在本发明的一个实施方式中，式(2-vii)所示的基团中，R25表示任选被1-3个独立地选自卤素原子、羟基、氰基、任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的C1-4烷基、任选被1-3个独立地选自C1-4烷基、卤素原子和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的3-6元环烷基、任选被1-3个独立地选自C1-4烷基、卤素原子和羟基的取代基取代的5-10元杂芳基。
在本发明的一个实施方式中，式(2-vii)所示的基团中，R25表示任选被1-3个独立地选自卤素原子、羟基、氰基、任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的C1-4烷基、任选被1-3个独立地选自C1-4烷基、卤素原子和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的环丙基或环丁基、任选被1-3个独立地选自C1-4烷基、卤素原子和羟基的取代基取代的5-6元杂芳基。
在本发明的一个实施方式中，式(2-vii)所示的基团中，R25表示任选被1-3个独立地选自卤素原子、羟基、任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的C1-4烷基、任选被1-3个独立地选自C1-4烷基、卤素原子和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的环丙基或环丁基、任选被1-3个独立地选自C1-4烷基和卤素原子中的取代基取代的吡唑基或咪唑基。
在本发明的一个实施方式中，R3和R4优选不同时为氢。
在本发明的一个实施方式中，R3和R4基团中，至少一者是含有O、N中的至少一种的基团。含有O、N中的至少一种的基团是指基团中含有氧原子、氮原子的基团，例如可以列举氰基、含氰基的C1-4烷基、羟基、含羟基的C1-4烷基、羧基、含羧基的C1-4烷基、酯基、含酯基的C1-4烷基、氨基、含氨基的C1-4烷基、酰胺基、氧杂环丙基、氧杂环丁基、氮杂环丙基、氮杂环丁基等，但不限于此。
在本发明的一个实施方式中，R3和R4基团中，至少一者是包含选自任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基、羟基、氰基、任选被选自羟基、氰基中的取代基取代的C1-4烷基、氮杂环丁基或-C(O)-NR7R8中的至少一个基团的基团。更优选，R3和R4基团中，至少一者是选自任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基、羟基、氰基、任选被选自羟基、氰基中的取代基取代的C1-4烷基、氮杂环丁基、或-C(O)-NR7R8中的至少一个基团。
在本发明的一个实施方式中，优选R3和R4各自独立地选自氢、羟基、-NR7R8、氰基、-C(O)-NR7R8和任选被选自卤素原子、羟基、氰基、任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的C1-6烷基，其中R3和R4不同，且不同时为氢。
在本发明的一个实施方式中，R3和R4与其所键合的碳原子一起形成任选取代的3-6元杂环基，优选其与所键合的碳原子一起形成任选取代的3-6元含氮杂环基，更优选其与所键合的碳原子一起形成任选取代的氮杂环丁基、任选取代的氮杂环戊基。
在本发明的一个实施方式中，作为R3和R4基团中的“任选取代”中的取代基，优选为羟基、氯原子、氟原子、氰基、任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基。
在本发明的一个实施方式中，R5优选选自任选取代的3-6元环烷基、任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基或任选取代的3-10元杂环基。在本发明的一个实施方式中，R5更优选选自任选取代的含氮5-9元杂芳基或任选取代的含氮5-9元杂环基。在本发明的一个实施方式中，作为R5基团中的“任选取代”中的取代基，优选为任选被1-3个选自卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的C1-6烷基、任选被1-3个选自卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的C1-6烷氧基、卤素原子；更优选为任选被1-3个卤素原子取代的C1-4烷氧基或氟原子。
在本发明的一个实施方式中，R5为下式(5-i)所示的基团，
其中，R51表示任选被1-3个选自卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的C1-6烷氧基；更优选R51表示任选被1-3个卤素原子取代的C1-6烷氧基；R52表示氢或卤素原子，更优选R52表示氢、氟原子或氯原子。
在本发明的一个实施方式中，R5为式(5-i)所示的基团，所述式(5-i)所示的基团为下式(5-i′)所示的基团，
式(5-i′)中，各基团的定义与式(5-i)中相同。
在本发明的一个实施方式中，L1优选为-NR7-C(O)-或-(CR9R10)m-，m表示0、1或2。m为0时，表示R5基团直接连接于X6。
在本发明的一个实施方式中，优选每个R9独立地选自氢、氘、卤素原子。
在本发明的一个实施方式中，优选每个R10独立地选自氢、氘、卤素原子。
在本发明的一个实施方式中，R6每次出现时为H。
在本发明的一个实施方式中，每个R7独立地选自氢、C1-4烷基。
在本发明的一个实施方式中，每个R8独立地选自氢、C1-4烷基。
在本发明的一个实施方式中，作为“任选取代”中的取代基，优选为选自以下的至少一个基团：氟原子、氯原子、羟基、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、3-8元杂环基、C1-6烷基-C(O)-、3-6元环烷基-C(O)-、C1-6烷基取代的3-8元杂环基-C(O)-、被1-3个选自卤素原子、羟基、氰基、C2-6烯基、C2-6炔基、3-8元的杂环基、C1-6烷基取代的3-8元的杂环基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的C1-4烷基、被1-3个选自卤素原子和羟基中的取代基取代的C1-4烷氧基、被1-5个选自C1-4烷基、卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的3-6元环烷基、被1-5个选自C1-4烷基、卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的5-10元杂芳基。
在本发明的一个实施方式中，作为“任选取代”中的取代基，优选为选自以下的至少一个基团：氟原子、氯原子、羟基、氰基、氨基、硝基、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、氘代C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷基氨基-、(C1-4烷基)2氨基-、3-6元的杂环基、5-6元杂芳基、C1-4烷基-C(O)-、任选被C1-4烷基取代的3-6元环烷基-C(O)-、任选被C1-4烷基取代的3-6元杂环基-C(O)-、被1-3个独立地选自卤素原子、羟基、氰基、C2-4烯基、C2-4炔基、任选被C1-4烷基取代的3-6元的杂环基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的C1-4烷基、被1-3个独立地选自卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的C1-4烷氧基、被1-3个独立地选自C1-4烷基、卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的3-6元环烷基、被1-3个独立地选自C1-4烷基、卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的3-8元杂环基、被1-3个独立地选自C1-4烷基、卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的苯基、被1-3个独立地选自C1-4烷基、卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的5-6元杂芳基。
在本发明的一个实施方式中，作为R6、R7、R8、R9、R10基团中的“任选取代”中的取代基，可以为选自以下的至少一个基团：卤素原子、羟基、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、被1-3个选自卤素原子和羟基中的取代基取代的C1-4烷基、被1-3个选自卤素原子和羟基中的取代基取代的C1-4烷氧基。
本发明还提供下述式(II)所示的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，
其中，各基团定义如上所述。
本发明进一步提供下述式(III)所示的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，
其中，各基团定义如上所述。
本发明进一步提供下述式(IV)所示的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，
其中，各基团定义如上所述。
本发明进一步提供下述化合物或其药学上可接受的盐，
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/>
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本发明还提供了药物组合物，包括本发明上述化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐以及任选的药学上可接受的载体。本发明的药物组合物包括任选的药学上可接受的载体是指，该组合物可以含有药学上可接受的载体，也可以不含有药学上可接受的载体。
本发明还提供了上述化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐或上述药物组合物用于预防和/或治疗由RET异常表达介导的疾病的应用。
本发明还提供了上述化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐或上述药物组合物在制备用于预防和/或治疗由RET异常表达介导的疾病的药物中的应用。
在本发明的一个实施方式中，所述由RET异常表达介导的疾病为癌症。
在本发明的一个实施方式中，所述癌症是血液学癌症。
在本发明的一个实施方式中，所述癌症是实体瘤。
在本发明的一个实施方式中，所述癌症是肺癌(例如，小细胞肺癌或非小细胞肺癌)，乳头状甲状腺癌，甲状腺髓样癌，分化型甲状腺癌，复发性甲状腺癌，难治性分化型甲状腺癌，肺腺癌，细支气管肺癌，2A或2B型多发性内分泌肿瘤(分别为MEN2A或MEN2B)，嗜铬细胞瘤，甲状旁腺增生，乳腺癌，结直肠癌(例如转移性结肠直肠癌)，乳头状肾细胞癌，胃肠粘膜的神经节细胞瘤病，炎性肌纤维母细胞瘤或宫颈癌。
在本发明的一个实施方式中，所述癌症选自：急性淋巴细胞白血病(ALL)，急性髓性白血病(AML)，青少年癌症，肾上腺皮质癌，肛门癌、阑尾癌，星形细胞瘤，非典型性畸胎瘤/横纹肌样瘤，基底细胞癌，胆管癌，膀胱癌，骨癌，脑干胶质瘤，脑肿瘤，乳腺癌，支气管肿瘤，伯基特淋巴瘤，类癌瘤，未知原发癌，心脏肿瘤，宫颈癌，儿童癌症，脊索瘤，慢性淋巴细胞白血病(CLL)，慢性骨髓性白血病(CML)，慢性骨髓增殖性肿瘤，结肠癌，结肠直肠癌，颅咽管瘤，皮肤T细胞淋巴瘤，胆管癌，原位导管癌，胚胎性肿瘤，子宫内膜癌，室管膜瘤，食道癌，成感觉神经细胞瘤，尤因肉瘤，颅外生殖细胞肿瘤，性腺外生殖细胞瘤，肝外胆管癌，眼癌，输卵管癌，骨纤维组织细胞瘤，胆囊癌，胃癌，胃肠类癌瘤，胃肠道间质瘤(GIST)，生殖细胞瘤，妊娠滋养细胞疾病，神经胶质瘤，多毛细胞瘤，多毛细胞白血病，头颈癌，心脏癌，肝细胞癌，组织细胞增多症，霍奇金淋巴瘤，下咽癌，眼内黑色素瘤，胰岛细胞瘤，胰腺神经内分泌瘤，卡波西肉瘤，肾癌，朗格汉斯细胞组织细胞增多症，喉癌，白血病，唇和口腔癌，肝癌，肺癌，淋巴瘤，巨球蛋白血症，骨恶性纤维组织细胞瘤，骨癌，黑色素瘤，梅克尔细胞癌，间皮瘤，转移性鳞状颈癌，中线状癌，口癌，多发性内分泌瘤综合征，多发性骨髓瘤，真菌病蕈样肉芽肿，骨髓增生异常综合征，骨髓增生异常/骨髓增殖性肿瘤，髓性白血病，骨髓性白血病，多发性骨髓瘤，骨髓增殖性肿瘤，鼻腔和鼻窦癌，鼻咽癌，成神经细胞瘤，非霍奇金淋巴瘤，非小细胞肺癌，口部癌，口腔癌，唇癌，口咽癌，骨肉瘤，卵巢癌，胰腺癌，乳头状瘤病，副神经节瘤，鼻旁窦和鼻腔癌，甲状旁腺癌，阴茎癌，咽癌，嗜铬细胞瘤，垂体癌，浆细胞瘤，胸膜肺胚细胞瘤，妊娠和乳腺癌，原发性中枢神经系统淋巴瘤，原发腹膜癌，前列腺癌，直肠癌，肾细胞癌，视网膜母细胞瘤，横纹肌肉瘤，唾液腺癌，肉瘤，塞扎里综合征，皮肤癌，小细胞肺癌，小肠癌，软组织肉瘤，鳞状细胞癌，鳞状颈癌，胃癌，T细胞淋巴瘤，睾丸癌，咽喉癌，胸腺瘤和胸腺癌，甲状腺癌症，肾盂和输尿管的移行细胞癌，未知原发癌，尿道癌，子宫癌，子宫肉瘤，阴道癌，外阴癌和威尔姆氏瘤。
在本发明的一个实施方式中，所述血液学癌症选自白血病，淋巴瘤(非霍奇金淋巴瘤)，霍奇金病(也称霍奇金淋巴瘤)和骨髓瘤，例如，急性淋巴细胞白血病(ALL)，急性骨髓性白血病(AML)，急性早幼粒细胞白血病(APL)，慢性淋巴细胞白血病(CLL)，慢性粒细胞白血病(CML)，慢性髓单核细胞白血病(CMML)，慢性嗜中性白血病(CNL)，急性未分化型白血病(AUL)，间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)，幼淋巴细胞白血病(PML)，幼年型单核细胞白血病(JMML)，成人T细胞ALL，三联型骨髓发育不良的AML(AML/TMDS)，混合谱系白血病(MLL)，骨髓增生异常综合征(MDS)，骨髓增殖性疾病(MPD)和多发性骨髓瘤(MM)。血液癌症的其它示例包括骨髓增`殖性疾病(MPD)，如真性红细胞增多症(PV)，原发性血小板减少症(ET)和特发性原发性骨髓纤维化(IMF/IPF/PMF)。在本发明的一个实施方式中，所述血液学癌症是AML或CMML。
在本发明的一个实施方式中，所述癌症是实体瘤。实体瘤的示例包括例如甲状腺癌(例如乳头状甲状腺癌，甲状腺髓样癌)，肺癌(例如肺腺癌，小细胞肺癌)，胰腺癌，胰腺导管癌，乳腺癌，结肠癌，结直肠癌，前列腺癌，肾细胞癌，头颈肿瘤，神经母细胞瘤和黑素瘤。参见，例如，NatureReviewsCancer，2014，14，173-186。
在本发明的一个实施方式中，所述癌症选自肺癌，乳头状甲状腺癌，甲状腺髓样癌，分化的甲状腺癌，复发性甲状腺癌，难治性分化型甲状腺癌，2A或2B型多发性内分泌瘤(分别为MEN2A或MEN2B)，嗜铬细胞瘤，甲状旁腺增生，乳腺癌，结直肠癌，乳头状肾细胞癌，胃肠粘膜神经节细胞瘤和宫颈癌。
本发明还提供了用于在有需要的患者中治疗癌症(例如，上述由RET异常表达介导的癌症)的药物组合物，其包含(a)上述化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，(b)其他治疗剂，和(c)任选的至少一种药学上可接受的载体，其中上述化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐和所述其他治疗剂被配制成单独的组合物或剂量用于同时、分开或顺序用于治疗癌症，其中上述化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐和所述治疗剂一起有效治疗所述癌症。
本发明还提供了上述组合物在制备用于治疗癌症的药物中的应用。
在本发明的一个实施方式中，所述由RET异常表达介导的疾病为肠易激综合征(IBS)。
本发明还提供了上述化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐或者上述药物组合物用于预防和/或治疗肠易激综合征(IBS)的方法，所述方法包括(a)确定IBS是否与下述的失调有关：RET基因、RET激酶、或其中任何一者的表达或活性或水平；(b)如果确定IBS与下述的失调有关：RET基因、RET激酶、或其中任何一者的表达或活性或水平，向患者施用治疗有效量的上述化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐或上述药物组合物。
本发明还提供了用于在有需要的患者中治疗肠易激综合征(IBS)(例如，上述由RET异常表达介导的肠易激综合征(IBS))的药物组合物，其包含(a)上述化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，(b)其他治疗剂，和(c)任选的至少一种药学上可接受的载体，其中上述化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐和所述其他治疗剂被配制成单独的组合物或剂量用于同时、分开或顺序用于治疗IBS，其中上述化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐和所述治疗剂在治疗IBS方面共同有效。
本发明还提供式(I)所示化合物、其立体异构体的药学上可接受的盐。所述“药学上可接受的盐”是指相对无毒的化合物的酸加成盐或碱加成盐。所述酸加成盐为本发明式(I)所示化合物、其立体异构体与合适的无机酸或者有机酸形成的盐，这些盐可通过使式(I)所示化合物、其立体异构体与适宜的有机酸或无机酸在适当的溶剂中进行反应来制备。代表性酸加成盐包括氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、乙酸盐、草酸盐、戊酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月硅酸盐、硼酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、硝酸盐、磷酸盐、磷酸氢盐、碳酸盐、碳酸氢盐、甲苯甲酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、苹果酸盐、抗坏血酸盐、鞣酸盐、扑酸盐、藻酸盐、萘磺酸盐、酒石酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐、葡萄糖酸盐、乳糖酸盐和月桂基磺酸盐等。所述碱加成盐为式(I)所示化合物、其立体异构体与合适的无机碱或者有机碱形成的盐，这些盐可通过使式(I)所示化合物、其立体异构体与适宜的无机碱或者有机碱在适当的溶剂中进行反应来制备。代表性碱加成盐包括例如与碱金属、碱土金属、季铵阳离子形成的盐，例如钠盐、锂盐、钾盐、钙盐、镁盐、四甲基季铵盐、四乙基季铵盐等；胺盐，包括与氨(NH3)、伯胺、仲胺或叔胺形成的盐，如甲胺盐、二甲胺盐、三甲胺盐、三乙胺盐、乙胺盐等。
除了盐的形式，本发明所提供的化合物还存在前药形式。本发明所描述的前药是指可在生理学条件下或通过溶剂分解而转化成本发明所述的生物学活性化合物(如式(I)化合物)的化合物。因此，术语“前药”是指药物可接受的生物学活性化合物的前体。
本发明化合物可以在一个或多个构成该化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素标记化合物，比如氘(D)，氚(3H)，碘-125(125I)或C-14(14C)。本发明化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本发明的范围之内。
本发明化合物可以存在特定的立体异构体形式。本发明设想所有的这类化合物，包括顺反异构体、(-)-和(+)-对映体、(R)-和(S)-对映体、非对映异构体、(D)-异构体、(L)-异构体、阻转异构体，及其外消旋混合物和其他混合物，例如对映异构体或非对映体富集的混合物，所有这些混合物都属于本发明的范围之内。所有这些立体异构体以及它们的混合物，均包括在本发明的范围之内。
可以通过的手性合成或手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(R)-和(S)-异构体以及D和L异构体。如果想得到本发明某化合物的一种对映体，可以通过不对称合成或者具有手性助剂的衍生作用来制备，其中将所得非对映体混合物分离，并且辅助基团裂开以提供纯的所需对映异构体。或者，当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如羧基)时，与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐，然后通过本领域所公知的常规方法进行非对映异构体拆分，然后回收得到纯的对映体。此外，对映异构体和非对映异构体的分离通常是通过使用色谱法完成的，所述色谱法采用手性固定相，并任选地与化学衍生法相结合(例如由胺生成氨基甲酸盐)。
本发明所述的药物组合物，可以采用本领域众所周知的方法来制备，如常规的混合法、溶解法、制粒法、制糖衣药丸法、磨细法、乳化法和冷冻干燥法等。本发明所述药物组合物可以通过任何方便的给药途径施用给预防和/或治疗对象，包括但不限于，经口服、直肠、肠胃外(例如注射，包括皮下、皮内、肌肉内、静脉内等)、局部(包括例如透皮、鼻内、眼部、口腔和舌下)、肺部(例如利用气溶胶经口或鼻的吸入或吹入治疗)等。
适于口服给药的固体剂型包括片剂、丸剂、胶囊剂、散剂、粉剂、颗粒剂等。制备这些固体剂型时，除了本发明所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐外，可以加入本领域常规采用的赋形剂、填料或增容剂、粘合剂、崩解剂、稳定剂、润湿剂、吸附剂、润滑剂或包封材料中的一种或多种。
适于口服给药的液体剂型包括溶液剂、悬浮剂、乳浊剂、糖浆剂或酊剂等。除了本发明所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐外，液体剂型可包含本领域常规采用的稀释剂、增溶剂、乳化剂、润湿剂、悬浮剂、甜味剂、矫味剂、芳香剂或防腐剂中的一种或多种。
适于局部给药的剂型包括软膏剂、散剂、贴剂、滴剂、喷射剂、吸入剂等，作为活性成分的本发明所述化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐在无菌条件下和药学上可接受的载体一起混合。
适于直肠给药的剂型包括栓剂，包括本发明所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐以及合适的基质。
适于肠胃外注射的剂型包括生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，以及用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。
药物制剂优选为单位剂量形式。在该形式中，制剂被细分成含有适当量的活性组分的单位剂量。可以将单位剂量形式包装成含有离散量的制剂的包装，如包装的片剂、胶囊剂。
在对受试者给药时，是将有效量的本发明化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐或包含其的药物组合物施用于需要预防和/或治疗的受试者(如人)。在一些实施方案中，本发明化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐的预防和/或治疗的有效量将视给药途径、化合物被施用时的形式、待预防和/或治疗的受试者的健康状况和主治医师的经验等而定。
在制备本发明的组合物时，通常将活性成分与赋形剂混合，通过赋形剂稀释或装入例如胶囊、小药囊、纸或其它容器形式的这种载体内。当赋形剂用作稀释剂时，它可以是固体、半固体或液体物质，用作溶媒、载体或活性成分的介质。因此，组合物可以是以下形式：片剂、丸剂、散剂、锭剂、小药囊、扁囊剂、酏剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、糖浆剂、气雾剂(固体或溶于液体溶媒)；含例如高达10％重量活性化合物的软膏剂、软和硬明胶胶囊、栓剂、无菌注射溶液和无菌包装粉末。
适宜的赋形剂的某些实例包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙、藻酸盐、黄蓍胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆和甲基纤维素。制剂还可含有：润滑剂例如滑石粉、硬脂酸镁和矿物油；湿润剂；乳化剂和悬浮剂；防腐剂例如苯甲酸甲酯和苯甲酸羟基丙酯；甜味剂和矫味剂。可通过使用本领域中已知的方法配制本发明组合物，以便在给予患者后提供速释、缓释或延迟释放活性成分的作用。
对于制备固体组合物例如片剂，将本发明化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐与药物赋形剂混合，形成含本发明化合物的均匀混合物的固体预制剂组合物。当称这些预制剂组合物为均匀时，是指活性成分通常均匀地分布在整个组合物中，致使该组合物可容易地划分为同等有效的单位剂型例如片剂、丸剂和胶囊剂。然后将该固体预制剂划分为上述类型的含本发明活性成分的单位剂型。
可将本发明片剂或丸剂包衣或复合，得到提供长效作用优点的剂型。例如，片剂或丸剂含内剂量和外剂量组分，后者是前者的被膜形式。可通过肠溶层将两种组分隔离，肠溶层用于在胃中阻止崩解，以使内组分完整通过十二指肠或延迟释放。多种物质可用于此类肠溶层或包衣剂，此类物质包括多种高分子酸和高分子酸与此类物质如虫胶、鲸蜡醇和醋酸纤维素的混合物。
其中可掺入本发明化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐和/或组合物，用于口服或注射给药的液体形式包括水溶液、适当矫味的糖浆剂、水或油混悬液；和用食用油例如棉子油、芝麻油、椰子油或花生油矫味的乳剂；以及酏剂和类似的药用溶媒。
用于吸入或吹入的组合物包括溶于药学上可接受的水或有机溶剂或其混合物的溶液剂、混悬液和散剂。液体或固体组合物可含有如上所述适宜的药学上可接受的赋形剂。在某些实施方案中，通过口服或鼻呼吸途径给予组合物，实现局部或全身作用。可通过使用惰性气体，使组合物成雾化。可直接由雾化装置吸入雾化溶液，或雾化装置可与面罩帷或间歇正压呼吸机连接。可通过口服或由按适当方式递送制剂的装置通过鼻给予溶液、混悬液或粉末组合物。
实施例
下面结合具体实施例，对本发明的方案进行解释。应理解，这些实施例仅用于举例说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内公知的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
本发明化合物结构是通过核磁共振(NMR)或/和质谱(MS)来确定的。核磁共振化学位移(δ)以百万分之一(ppm)的单位给出。核磁共振的测定是用布鲁克(Bruker)AVANCE-400核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)或氘代氯仿(CDCl3)，内标为四甲基硅烷(TMS)。质谱的测定是用安捷伦(Agilent)1260-6125单四极杆液质联用仪，采用的是电喷雾离子源(ESI)。
对于硅胶柱层析，使用的是拜泰齐(Biotage)Selekt快速制备色谱仪以及适当规格的拜泰齐生产的BK-SIL硅胶预填充柱或艾杰尔(Agela)生产的Claricep Flash硅胶预填充柱。
薄层层析色谱硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，采用的规格是0.15mm～0.20mm，制备薄层色谱采用的规格是0.4mm～0.5mm。
中间体制备
制备1：6-溴-4-(6-氟吡啶-3-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(中间体1)
向500mL三口瓶中加入4，6-二溴吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(33.0g，0.11mol)、2-氟-5-吡啶硼酸(14.1g，0.10mmol)、[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(2.7g，3.70mmol)、二水合氟化钾(31.0g，0.33mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(150mL)，氩气保护下，60℃反应过夜。反应完冷却至室温，加入500mL水，析出固体。抽滤，固体用乙腈、乙酸乙酯淋洗，减压干燥得到6-溴-4-(6-氟吡啶-3-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(30g，收率86％)。ESI-MS m/z：317.0，319.0[M+1]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.48(d，J＝1.6Hz，1H)，8.73(s，1H)，8.51(d，J＝2.5Hz，1H)，8.27(td，J＝8.1，2.6Hz，1H)，7.86(d，J＝1.6Hz，1H)，7.40(dd，J＝8.4，2.8Hz，1H)。
制备2：4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈 (中间体2)
向250mL单口瓶中分别加入6-溴-4-(6-氟吡啶-3-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(中间体1，10g，31.5mmol)、1-甲基吡唑-4-硼酸频哪醇酯(13g，62.5mmol)、[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(1.2g，1.64mmol)、碳酸钾(13.2g，96.6mmol)、1，4-二氧六环(60mL)和水(15mL)。氩气保护下，置于80℃油浴反应过夜。冷却到室温，搅拌下向反应物中加入200mL水，过滤，固体用水淋洗。固体置于50℃鼓风烘箱干燥过夜，再以200mL乙酸乙酯打浆处理，得到4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(7.5g，收率75％)。ESI-MS m/z：319.1[M+1]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.34(d，J＝1.5Hz，1H)，8.68(s，1H)，8.55(d，J＝2.6Hz，1H)，8.40(s，1H)，8.31(td，J＝8.1，2.6Hz，1H)，8.14(s，1H)，7.98-7.91(m，1H)，7.41(dd，J＝8.4，2.7Hz，1H)，3.89(s，3H)。
制备3：叔丁基(3-氰基-4-(6-氟吡啶-3-基)吡唑[1，5-a]吡啶-6-基)氨基甲酸酯 (中间体3)
向250mL茄形瓶中加入6-溴-4-(4-氟苯基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(中间体1，7.6g，24.05mmol)、氨基甲酸叔丁酯(8.4g，72.15mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(2.2g，2.40mmol)、2-(二环己基膦)-3，6-二甲氧基-2′-4′-6′-三异丙基-1，1′-联苯(1.28g，2.40mmol)、碳酸铯(23.52g，72.15mmol)和1，4-二氧六环(100mL)，氮气保护，置于90℃油浴反应6小时。反应液冷却至室温，过滤，滤液减压浓缩，残留物硅胶柱柱层析(石油醚-乙酸乙酯＝2：1)得到叔丁基(3-氰基-4-(6-氟吡啶-3-基)吡唑[1，5-a]吡啶-6-基)氨基甲酸酯(5.2g，收率62％)。ESI-MS m/z：354.1[M+1]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.88(s，1H)，9.13(s，1H)，8.62(s，1H)，8.47(d，J＝2.2Hz，1H)，8.24(td，J＝8.2，2.5Hz，1H)，7.52(d，J＝1.5Hz，1H)，7.40(dd，J＝8.5，2.4Hz，1H)，1.51(s，9H)。
制备4：叔丁基(3-氰基-4-(6-氟吡啶-3-基)吡唑[1，5-a]吡啶-6-基)(2-氟乙基) 氨基甲酸酯(中间体4)
向100mL茄形瓶中加入叔丁基(3-氰基-4-(6-氟吡啶-3-基)吡唑[1，5-a]吡啶-6-基)氨基甲酸酯(中间体3，5.2g，14.25mmol)、碳酸铯(9.3g，28.50mmol)、1-氟-2-碘乙烷(2.5g，14.25mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(40mL)，氮气保护，置于80℃油浴反应1小时。反应液减压蒸干，残留物通过硅胶柱柱层析(石油醚-乙酸乙酯＝2∶1)得到叔丁基(3-氰基-4-(6-氟吡啶-3-基)吡唑[1，5-a]吡啶-6-基)(2-氟乙基)氨基甲酸酯(3.1g，收率54％)。ESI-MS m/z：400.2[M+1]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.11(d，J＝1.6Hz，1H)，8.74(s，1H)，8.49(d，J＝2.0Hz，1H)，8.26(td，J＝8.2，2.5Hz，1H)，7.66(d，J＝1.6Hz，1H)，7.41(dd，J＝8.4，2.5Hz，1H)，4.68(t，J＝4.8Hz，1H)，4.56(t，J＝4.8Hz，1H)，4.05(dd，J＝6.4，3.0Hz，1H)，3.99(t，J＝4.8Hz，1H)，1.42(s，9H)。
制备5：(R)-2-(羟甲基)-2，5-二氢-1H-吡咯-1-羧酸叔丁酯(中间体5)
3L三口瓶加入1-叔丁基2-甲基(R)-2，5-二氢-1H-吡咯-1，2-二羧酸酯(85.0g，0.37mol)和四氢呋喃(900mL)，氮气保护，反应液冷却至-20℃，缓慢滴加1N四氢铝锂的四氢呋喃溶液(412mL，0.41mol)，维持滴加温度在-20℃到-10℃之间。滴加完毕后维持在-10℃反应2小时。缓慢滴加入水(30mL)、15％氢氧化钠溶液(30mL)和水(60mL)，室温下搅拌0.5h。反应液通过硅藻土过滤，滤饼用四氢呋喃(150mL)洗三次。滤液用无水硫酸钠干燥，减压蒸干得淡黄色油状物(R)-2-(羟甲基)-2，5-二氢-1H-吡咯-1-羧酸叔丁酯(74.4g，收率99％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ5.75(ddd，J＝17.7，14.3，5.8Hz，2H)，4.62(m，2H)，4.21(dd，J＝26.7，15.7Hz，1H)，4.07(d，J＝16.1Hz，1H)，3.76-3.57(m，2H)，1.49(s，9H)。
制备6：叔丁基(R)-2-((叔丁基二苯基硅烷氧基)甲基)-2，5-二氢-1H-吡咯-1-羧 酸酯(中间体6)
2L茄形瓶中加入(R)-2-(羟甲基)-2，5-二氢-1H-吡咯-1-羧酸叔丁酯(74.4g，0.37mol)和二氯甲烷(750mL)，氮气保护，反应液冷却至0℃，加入咪唑(30.5g，0.44mol)，缓慢加入叔丁基二苯基氯硅烷(102.4g，0.37mol)。加入完毕，室温反应2小时。反应液过滤除去白色固体，滤饼用二氯甲烷(200mL)洗一次。滤液用10％的柠檬酸溶液(300mL)洗一次，饱和碳酸氢钠水溶液(300mL)洗一次，饱和食盐水(300mL)洗一次，无水硫酸钠干燥，减压蒸干得到叔丁基(R)-2-((叔丁基二苯基硅烷氧基)甲基)-2，5-二氢-1H-吡咯-1-羧酸酯(161.2g，收率98％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.64(dd，J＝5.9，4.4Hz，4H)，7.44-7.31(m，6H)，5.96-5.74(m，2H)，4.58(d，J＝44.0Hz，1H)，4.22(dd，J＝32.5，15.2Hz，1H)，4.08(dd，J＝15.2，5.1Hz，1H)，3.85(dddd，J＝59.9，15.8，9.6，5.7Hz，2H)，1.42(d，J＝50.5Hz，9H)，1.03(s，9H)。
制备7：叔丁基(2S，3S，4R)-2-((叔丁基二苯基硅烷氧基)甲基)-3，4-二羟基吡咯 烷-1-羧酸酯(中间体7)
3L茄形瓶中加入叔丁基(R)-2-((叔丁基二苯基硅烷氧基)甲基)-2，5-二氢-1H-吡咯-1-羧酸酯(161.2g，0.36mol)、丙酮(2000mL)、水(400mL)和N-甲基-N-氧化吗啉(94.8g，0.81mol)，再加入锇酸钾二水合物(13.5g，36.8mmol)，室温反应3小时。减压除去丙酮，乙酸乙酯(800mL)提取两次，无水硫酸钠干燥，减压蒸干，残留物用石油醚打浆得白色固体叔丁基(2S，3S，4R)-2-((叔丁基二苯基硅烷氧基)甲基)-3，4-二羟基吡咯烷-1-羧酸酯(146.0g，收率84％)。ESI-MS m/z：472.2[M+1]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.60(t，J＝8.3Hz，4H)，7.43(tt，J＝14.0，6.9Hz，6H)，4.95-4.87(m，2H)，4.22-4.10(m，2H)，3.86(ddd，J＝15.1，10.1，4.6Hz，1H)，3.68(dd，J＝15.4，9.6Hz，1H)，3.53(d，J＝11.5Hz，1H)，3.37(dd，J＝10.6，5.8Hz，1H)，3.23(dd，J＝10.6，5.4Hz，1H)，1.40(s，4H)，1.23(s，5H)，0.98(d，J＝6.8Hz，9H)。
制备8：叔丁基(2S，3S，4R)-4-(苯甲酰氧基)-2-((叔丁基二苯基硅烷氧基)甲基)- 3-羟基吡咯烷-1-羧酸酯(中间体8)
2L三口瓶加入叔丁基(2S，3S，4R)-2-((叔丁基二苯基硅烷氧基)甲基)-3，4-二羟基吡咯烷-1-羧酸酯(146.0g，0.31mol)、二氯甲烷(1L)和吡啶(500mL)，氮气保护，反应液冷却至-70℃，缓慢滴加苯甲酰氯(47.7g，0.34mol)，加入完毕，-15℃反应16小时。反应液恢复至室温，饱和柠檬酸溶液(600mL)洗两次，饱和碳酸氢钠水溶液(500mL)洗一次，饱和食盐水(500mL)洗一次，无水硫酸钠干燥，减压蒸干后通过硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯＝8∶1)得无色油状物叔丁基(2S，3S，4R)-4-(苯甲酰氧基)-2-((叔丁基二苯基硅烷氧基)甲基)-3-羟基吡咯烷-1-羧酸酯(93.2g，收率52％)。ESI-MS m/z：576.3[M+1]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.03(d，J＝3.3Hz，2H)，7.69-7.60(m，5H)，7.54(t，J＝7.7Hz，2H)，7.50-7.38(m，6H)，5.55-5.44(m，2H)，4.61-4.52(m，1H)，4.03-3.83(m，1H)，3.78-3.56(m，4H)，1.40(d，J＝6.1Hz，5H)，1.27(s，4H)，1.01(d，J＝4.1Hz，9H)。
制备9：(2S，3S，4R)-叔丁基4-(苯甲酰氧基)-2-((叔丁基二苯基硅烷氧基)甲基)- 3-(甲磺酰氧基)吡咯烷-1-羧酸酯(中间体9)
2L茄形瓶中加入叔丁基(2S，3S，4R)-4-(苯甲酰氧基)-2-((叔丁基二苯基硅烷氧基)甲基)-3-羟基吡咯烷-1-羧酸酯(93.2g，0.16mol)、二氯甲烷(1000mL)和三乙胺(67.5mL，0.48mol)，氮气保护，反应液冷却至0℃，滴加甲磺酰氯(18.8mL，0.24mol)，加入完毕，室温反应0.5小时。反应液倒入水(1L)中，乙酸乙酯(1L)提取两次，有机相用10％柠檬酸溶液(400mL)洗一次，饱和碳酸氢钠水溶液(400mL)洗一次，饱和食盐水(400mL)洗一次，无水硫酸钠干燥，减压蒸干后得淡黄色油状物(2S，3S，4R)-叔丁基4-(苯甲酰氧基)-2-((叔丁基二苯基硅烷氧基)甲基)-3-(甲磺酰氧基)吡咯烷-1-羧酸酯(粗品，109g)。ESI-MS m/z：654.2[M+1]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.03(d，J＝7.9Hz，2H)，7.69(q，J＝7.3Hz，3H)，7.62(t，J＝6.8Hz，2H)，7.56(t，J＝7.7Hz，2H)，7.46(tt，J＝13.5，6.8Hz，6H)，5.84(dd，J＝11.3，7.0Hz，1H)，5.56-5.45(m，1H)，4.05(d，J＝30.1Hz，1H)，3.96-3.77(m，3H)，3.60-3.49(m，1H)，3.29(s，3H)，1.41(d，J＝12.6Hz，5H)，1.25(s，4H)，1.04(s，9H)。
制备10：(2S，3S，4R)-4-(苯甲酰氧基)-2-(羟甲基)-3-(甲磺酰氧基)吡咯烷-1-羧 酸叔丁酯(中间体10)
2L茄形瓶中加入(2S，3S，4R)-叔丁基4-(苯甲酰氧基)-2-((叔丁基二苯基硅烷氧基)甲基)-3-(甲磺酰氧基)吡咯烷-1-羧酸酯(109g，0.16mol)和四氢呋喃(162mL)，氮气保护，反应液冷却至0℃，缓慢加入1N四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(324mL，0.32mol)，加入完毕，室温反应0.5小时。反应液倒入水(500mL)中，乙酸乙酯(500mL)提取两次，有机相用饱和食盐水(400mL)洗一次，无水硫酸钠干燥，减压蒸干后得淡黄色油状物(2S，3S，4R)-4-(苯甲酰氧基)-2-(羟甲基)-3-(甲磺酰氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(粗品，115.9g)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.99(d，J＝7.7Hz，2H)，7.69(t，J＝7.4Hz，1H)，7.55(t，J＝7.7Hz，2H)，5.64(d，J＝5.6Hz，1H)，5.39-5.08(m，2H)，3.93(d，J＝29.4Hz，1H)，3.83-3.61(m，3H)，3.47-3.41(m，1H)，3.23(d，J＝11.6Hz，3H)，1.41(t，J＝6.4Hz，9H)。
制备11：(2S，3S，4R)-叔丁基4-(苯甲酰氧基)-3-(甲磺酰氧基)-2-((甲磺酰氧基) 甲基)吡咯烷-1-羧酸酯(中间体11)
2L茄形瓶中加入(2S，3S，4R)-4-(苯甲酰氧基)-2-(羟甲基)-3-(甲磺酰氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(115.9g，0.16mol)、二氯甲烷(1L)和三乙胺(67.5mL，0.48mol)，氮气保护，反应液冷却至0℃，滴加甲磺酰氯(18.8mL，0.24mol)，加入完毕，室温反应0.5小时。反应液倒入水(600mL)中，乙酸乙酯(600mL)提取两次，有机相用10％柠檬酸溶液(400mL)洗一次，饱和碳酸氢钠水溶液(400mL)洗一次，饱和食盐水(400mL)洗一次，无水硫酸钠干燥，减压蒸干后用石油醚：乙酸乙酯＝10：1打浆得白色固体(2S，3S，4R)-叔丁基4-(苯甲酰氧基)-3-(甲磺酰氧基)-2-((甲磺酰氧基)甲基)吡咯烷-1-羧酸酯(67.9g)。ESI-MS m/z：494.1[M+1]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.00(d，J＝7.6Hz，2H)，7.70(t，J＝7.4Hz，1H)，7.56(t，J＝7.7Hz，2H)，5.61(s，1H)，5.38(s，1H)，4.54(s，1H)，4.46(dd，J＝10.6，2.3Hz，1H)，4.21(d，J＝20.3Hz，1H)，3.64(ddd，J＝28.1，18.8，5.9Hz，2H)，3.32(s，3H)，3.26(s，3H)，1.43(d，J＝11.1Hz，9H)。
制备12：(1S，4R，5R)-叔丁基4-(苯甲酰氧基)-6-苄基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚 烷-2-羧酸酯(中间体12)
2L茄形瓶中加入(2S，3S，4R)-叔丁基4-(苯甲酰氧基)-3-(甲磺酰氧基)-2-((甲磺酰氧基)甲基)吡咯烷-1-羧酸酯(67.9g，0.13mol)、二甲苯(1500mL)和苄胺(52.0g，0.39mol)，160℃反应16小时。减压浓缩除去二甲苯，残留物通过硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯＝3：1)得淡黄色油状物(1S，4R，5R)-叔丁基4-(苯甲酰氧基)-6-苄基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(36.1g，收率68％)。ESI-MS m/z：409.2[M+1]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.93(d，J＝7.8Hz，2H)，7.65(t，J＝7.4Hz，1H)，7.51(t，J＝7.7Hz，2H)，7.33(d，J＝2.2Hz，4H)，7.27(dd，J＝4.8，3.0Hz，1H)，5.02(dd，J＝9.7，4.0Hz，1H)，4.40(dt，J＝48.7，5.0Hz，1H)，4.03(dt，J＝12.2，4.9Hz，2H)，3.82(dt，J＝12.9，8.5Hz，2H)，3.67(dd，J＝13.0，5.4Hz，1H)，3.26-3.10(m，2H)，1.40(d，J＝5.7Hz，9H)。
制备13：(1S，4R，5R)-叔丁基6-苄基-4-羟基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧 酸酯(中间体13)
2L茄形瓶中加入(1S，4R，5R)-叔丁基4-(苯甲酰氧基)-6-苄基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(36.1g，88.48mmol)、甲醇(300mL)、四氢呋喃(300mL)和水(300mL)，反应液冷却至0℃，缓慢加入氢氧化钠固体(7.0g，0.17mol)，加入完毕，室温反应0.5小时。反应液倒入水(300mL)中，乙酸乙酯(500mL)提取两次，有机相用饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，减压蒸干得淡黄色油状物(1S，4R，5R)-叔丁基6-苄基-4-羟基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(22.3g，收率82％)。ESI-MS m/z：305.2[M+1]+。1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ7.26(m，5H)，4.36 m，1H)，3.87(s，2H)，3.77-3.56(m，4H)，3.27(m，1H)，3.15(m，1H)，2.35(m，1H)，1.43(d，J＝15.4Hz，9H)。
制备14：(1S，4R，5R)-叔丁基6-苄基-4-(甲磺酰氧基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚 烷-2-羧酸酯(中间体14)
500mL茄形瓶中加入(1S，4R，5R)-叔丁基6-苄基-4-羟基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(22.3g，73.35mmol)、二氯甲烷(200mL)和三乙胺(30.5mL，0.22mol)，氮气保护，反应液冷却至0℃，滴加甲磺酰氯(8.5mL，0.11mol)，加入完毕，室温反应0.5小时。反应液倒入水(300mL)中，乙酸乙酯(400mL)提取两次，有机相用10％柠檬酸溶液(300mL)洗一次，饱和碳酸氢钠水溶液(300mL)洗一次，饱和食盐水(300mL)洗一次，无水硫酸钠干燥，减压蒸干，残留物通过硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯＝4∶1)得淡黄色油状物(1S，4R，5R)-叔丁基6-苄基-4-(甲磺酰氧基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(22.2g，收率79％)。ESI-MS m/z：383.2[M+1]+。1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ7.34-7.23(m，5H)，4.70(dd，J＝14.2，3.3Hz，1H)，4.31(dt，J＝32.0，5.1Hz，1H)，4.04(t，J＝5.8Hz，1H)，3.92(td，J＝12.7，3.8Hz，1H)，3.83-3.72(m，2H)，3.65(dd，J＝12.7，6.7Hz，1H)，3.21(s，1H)，3.09(t，J＝8.8Hz，4H)，1.39(d，J＝16.8Hz，9H)。
制备15：(1S，4S，5S)-叔丁基6-苄基-4-氰基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧 酸酯(中间体15)
500mL茄形瓶中加入(1S，4R，5R)-叔丁基6-苄基-4-(甲磺酰氧基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(22.0g，57.59mmol)、氰化钠(14.1g，287.95mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(220mL)，氮气保护，100℃反应16小时。反应液倒入水(600mL)中，二氯甲烷(400mL)提取两次，有机相用饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，减压蒸干后通过硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯＝4∶1)得淡黄色油状物(1S，4S，5S)-叔丁基6-苄基-4-氰基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(16.2g，收率89％)。ESI-MS m/z：314.2[M+1]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.32(dd，J＝8.4，4.4Hz，4H)，7.24(dd，J＝8.4，4.5Hz，1H)，4.53(d，J＝24.9Hz，1H)，3.93-3.61(m，3H)，3.46-3.25(m，3H)，2.79-2.47(m，2H)，1.43-1.39(m，9H)。
制备16：(1S，5S)-6-苄基-2-(叔丁氧羰基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-羧酸 (中间体16)
500mL茄形瓶中加入(1S，4S，5S)-叔丁基6-苄基-4-氰基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(16.2g，51.75mmol)、氢氧化钠(41.4g，1.03mol)、水(172mL)和乙醇(172mL)，90℃反应16小时。减压除去乙醇，剩余物0℃下用浓盐酸调pH为5，二氯甲烷(200mL)提取四次，有机相用无水硫酸钠干燥，减压蒸干得白色固体(1S，5S)-6-苄基-2-(叔丁氧羰基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-羧酸(15.4g，收率89％)。ESI-MS m/z：333.2[M+1]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.51(s，1H)，7.40-7.15(m，5H)，4.37-4.16(m，1H)，3.70(ddd，J＝53.1，37.4，12.2Hz，3H)，3.42-2.92(m，4H)，2.35-1.98(m，1H)，1.48-1.34(m，9H)。
制备17：2-(叔丁基)4-甲基(1S，5S)-6-苯基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2，4- 二羧酸酯(中间体17)
500mL茄形瓶中加入(1S，5S)-6-苄基-2-(叔丁氧羰基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-羧酸(7.5g，22.59mmol)、无水碳酸钾(6.2g，45.18mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(75mL)，氮气保护，0℃下加入碘甲烷(3.8g，27.10mmol)，室温反应1小时。反应液倒入水(200mL)中，乙酸乙酯(100mL)提取两次，有机相用饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，减压蒸干后通过硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯＝4∶1)得淡黄色油状物2-(叔丁基)4-甲基(1S，5S)-6-苯基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2，4-二羧酸酯(7.1g，收率91％)。ESI-MSm/z：347.2[M+1]+。
制备18：(1S，5S)-2-叔丁基4-甲基6-苄基-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷- 2，4-二羧酸酯(中间体18)
500mL三口瓶加入2-(叔丁基)4-甲基(1S，5S)-6-苯基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2，4-二羧酸酯(7.1g，20.52mmol)和无水四氢呋喃(70mL)，氮气保护，-70℃下滴加1N双三甲基硅基胺基锂的四氢呋喃溶液(27mL，26.67mmol)，滴加完毕后维持在-70℃反应0.5小时，然后再加入碘甲烷(3.5g，30.62mmol)，室温反应1小时。反应液倒入水(100mL)中，乙酸乙酯(100mL)提取两次，有机相用饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，减压蒸干后通过硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯＝4：1)得淡黄色油状物(1S，5S)-2-叔丁基4-甲基6-苄基-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2，4-二羧酸酯(6.2g，收率85％)。ESI-MS m/z：361.2[M+1]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.31(dd，J＝9.8，5.8Hz，3H)，7.26-7.20(m，2H)，4.03(dd，J＝28.4，12.4Hz，1H)，3.83(dd，J＝20.4，14.0Hz，1H)，3.73-3.56(m，5H)，3.32-3.07(m，3H)，2.22(dt，J＝13.6，8.5Hz，1H)，1.44-1.15(m，12H)。
制备19：(1S，5S)-6-苄基-2-(叔丁氧羰基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚 烷-4-羧酸(中间体19)
500mL三口瓶加入(1S，5S)-2-叔丁基4-甲基6-苄基-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2，4-二羧酸酯(6.2g，17.22mmol)、氢氧化钠固体(6.8g，0.17mol)、水(29mL)和乙醇(29mL)，90℃反应16小时。减压除去乙醇，剩余物0℃下用浓盐酸调pH为5，二氯甲烷(100mL)提取四次，有机相用无水硫酸钠干燥，减压蒸干得白色固体(1S，5S)-6-苄基-2-(叔丁氧羰基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-羧酸(5.8g，收率98％)。ESI-MS m/z：347.2[M+1]+。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.59-7.28(m，5H)，4.55-4.15(m，2H)，4.13-3.55(m，4H)，3.54-3.30(m，1H)，3.03-2.55(m，1H)，1.68-1.30(m，12H)。
制备20：(1S，5S)-2-(叔丁氧羰基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-羧酸 (中间体20)
500mL茄形瓶中加入(1S，5S)-6-苄基-2-(叔丁氧羰基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-羧酸(5.8g，17.22mmol)、5％钯炭(1.2g)和甲醇(120mL)，氢气体系下室温反应3小时。反应液过滤，减压蒸干得白色固体(1S，5S)-2-(叔丁氧羰基)-4-甲基-2，6--二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-羧酸(4.1g，收率93％)。ESI-MS m/z：257.1[M+1]+。
制备21：叔丁基(1S，4R，5R)-4-羟基-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(中 间体21)
100mL茄形瓶中加入叔丁基(1S，4R，5R)-6-苄基-4-羟基-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(1.3g，4.35mol)、10％钯炭(790mg)和无水甲醇(20mL)，氢气氛围下室温反应16小时。硅藻土过滤，滤饼甲醇洗涤两次(50mL)，滤液蒸干得叔丁基(1S，4R，5R)-4-羟基-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯粗品850mg。ESI-MS m/z：215.2[M+1]+。
制备22：叔丁基(1S，4S，5R)-4-苯甲酰氧基-6-苄基-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚 烷-2-羧酸酯(中间体22)
100mL茄形瓶中加入叔丁基(1S，4R，5R)-6-苄基-4-羟基-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(3.7g，12.2mol)、苯甲酸(1.79g，14.6mol)、三苯基膦(3.84g，14.6mol)和四氢呋喃(70mL)，缓慢加入偶氮二甲酸二乙酯(2.54g，14.6mol)，室温下搅拌2小时。加水稀释(150mL)，乙酸乙酯(150mL)萃取，有机相饱和碳酸氢钠(100mL)洗涤，饱和食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸干，硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯＝5∶1)得淡黄色油状物叔丁基(1S，4S，5R)-4-苯甲酰氧基-6-苄基-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(4.49g，收率90％)。ESI-MS m/z：215.2[M+1]+。
制备23：叔丁基(1S，4S，5R)-6-苄基-4-羟基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧 酸酯(中间体23)
250mL茄形瓶中加入叔丁基(1S，4S，5R)-4-(苯甲酰氧基)-6-苄基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(3.43g，8.4mmol)、甲醇(20mL)、四氢呋喃(20mL)和水(20mL)，反应液冷却至0℃，加入氢氧化钠(672mg，16.8mol)，加入完毕，室温反应0.5小时。反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取两次，有机相用饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，减压蒸干，硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯＝3∶1)淡黄色油状物叔丁基(1S，4S，5R)-6-苄基-4-羟基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(2.42g，收率95％)。ESI-MS m/z：305.2[M+1]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.40-7.28(m，4H)，7.24(d，J＝6.5Hz，1H)，5.49(s，1H)，4.20(s，1H)，3.82(m，3H)，3.52-3.44(m，1H)，3.32(t，J＝11.3Hz，1H)，3.16(s，1H)，3.01(d，J＝6.9Hz，1H)，2.49(m，1H)，1.40(d，J＝12.2Hz，9H)。
制备24：叔丁基(1S，4S，5R)-4-羟基-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(中 间体24)
100mL茄形瓶中加入叔丁基(1S，4S，5R)-6-苄基-4-羟基-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(3.9g，12.8mol)、10％钯炭(1.5g)和无水甲醇(30mL)，氢气氛围下室温反应3小时。硅藻土过滤，滤饼甲醇洗涤两次(60mL)，滤液蒸干，得叔丁基(1S，4S，5R)-4-羟基-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯粗品2.19g，直接用于下一步反应。ESI-MS m/z：215.1[M+1]+。
制备25：叔丁基(1S，4S，5R)-6-苄基-4-(甲磺酰氧基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚 烷-2-羧酸酯(中间体25)
100mL茄形瓶中加入叔丁基(1S，4S，5R)-6-苄基-4-羟基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(2.23g，7.35mmol)、二氯甲烷(35mL)和三乙胺(3.1mL，22mol)，氮气保护，反应液冷却至0℃，滴加甲磺酰氯(0.85mL，11mol)，加入完毕，室温反应0.5小时。反应液倒入水(30mL)中，二氯甲烷(40mL)提取两次，有机相用10％柠檬酸溶液(30mL)洗一次，饱和碳酸氢钠水溶液(30mL)洗一次，饱和食盐水(30mL)洗一次，无水硫酸钠干燥，减压蒸干后通过硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯＝4：1)得淡黄色油状物叔丁基(1S，4S，5R)-6-苄基-4-(甲磺酰氧基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(2.52g，收率90％)。ESI-MS m/z：383.2[M+1]+。
制备26：叔丁基(1S，4R，5S)-6-苄基-4-氰基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧 酸酯(中间体26)
500mL茄形瓶中加入叔丁基(1S，4S，5R)-6-苄基-4-(甲磺酰氧基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(2.52g，6.6mmol)、氰化钠(1.62g，33mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(25mL)，氮气保护，100℃反应16小时。反应液倒入水(60mL)中，二氯甲烷(40mL)提取两次，有机相用饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，减压蒸干后通过硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯＝4∶1)得淡黄色油状物叔丁基(1S，4R，5S)-6-苄基-4-氰基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(1.86g，收率89％)。ESI-MS m/z：314.2[M+1]+。
制备27：(1S，5S)-2-(叔丁氧羰基)-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-4-羧酸(中间体 27)
500mL茄形瓶中加入(1S，5S)-6-苄基-2-(叔丁氧羰基)-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-4-羧酸(16g，48.2mol)、10％钯炭(4g)和无水甲醇(300mL)，氢气氛围下室温反应2小时。通过硅藻土过滤，滤饼甲醇洗涤两次(500mL)，滤液蒸干，甲苯带水两次，得(1S，5S)-2-(叔丁氧羰基)-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-4-羧酸粗品11.6g，直接用于下一步反应。ESI-MS m/z：314.2[M+1]+。
制备28：(1S，4R，5S)-4-氰基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸叔丁酯(中间 体28)
向25mL单口瓶中加入叔丁基(1S，4R，5S)-6-苄基-4-氰基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(50mg，0.16mmol)，10％钯炭(20mg)和5mL甲醇，氢气环境下，20℃反应18小时。通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到(1S，4R，5S)-4-氰基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸叔丁酯粗品35mg。ESI-MS m/z：224.2[M+1]+。
制备29：(1S，4R，5S)-6-苄基-4-氨甲酰基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸 叔丁酯(中间体29)
向10mL单口瓶中加入叔丁基(1S，4R，5S)-6-苄基-4-氰基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(80mg，0.25mmol)，3mL饱和碳酸钾水溶液，3mL 30％双氧水和3mL乙醇，20℃反应0.5小时。加水淬灭，乙酸乙酯萃取，饱和氯化钠水溶液洗，有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到(1S，4R，5S)-6-苄基-4-氨甲酰基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸叔丁酯85mg。ESI-MS m/z：332.2[M+1]+。
制备30：(1S，4R，5S)-4-氨甲酰基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸叔丁酯 (中间体30)
向50mL单口瓶中加入(1S，4R，5S)-6-苄基-4-氨甲酰基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸叔丁酯(85mg，0.25mmol)，10％钯炭(20mg)和10mL甲醇，氢气环境下，20℃反应2小时。通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到(1S，4R，5S)-4-氨甲酰基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸叔丁酯60mg。ESI-MS m/z：242.1[M+1]+。
制备31：(1S，5S)-6-苄基-4-(羟甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸叔丁 酯(中间体31)
向25mL单口瓶中加入(1S，5S)-6-苄基-4-(叔丁氧羰基)-4，7-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸(中间体16，181mg，0.54mmol)和10mL四氢呋喃，冷却至0℃，加入10M硼烷二甲硫醚的四氢呋喃溶液(0.54mL，5.4mmol)，20℃反应0.5小时。冰浴下加入甲醇淬灭，旋干，加入饱和的碳酸氢钠水溶液，乙酸乙酯萃取，饱和氯化钠水溶液洗，有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到(1S，5S)-6-苄基-4-(羟甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸叔丁酯(145mg。收率84％)。ESI-MS m/z：319.3[M+1]+。
制备32：(1S，5S)-4-(羟甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸叔丁酯(中间 体32)
向50mL单口瓶中加入(1S，5S)-6-苄基-4-(羟甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸叔丁酯(145mg，0.45mmol)，10％钯炭(50mg)和10mL甲醇，氢气环境下，20℃反应2小时。通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到(1S，5S)-4-(羟甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸叔丁酯80mg。ESI-MS m/z：229.2[M+1]+。
制备33：2-(叔丁基)4-甲基(1S，5R)-6-苄基-4-羟基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚 烷-2，4-二羧酸酯(中间体33)
2-(叔丁基)4-甲基(1S，5S)-6-苄基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2，4-二羧酸酯(中间体17，50mg，0.144mmol)溶于THF(2mL)中，冷却至-70℃，加入1N二异丙基氨基锂(0.216mL，0.216mmol)，-70℃下搅拌0.5小时，加入(1S)-(+)-10-樟脑磺哑嗪(40mg，0.173mmol)，缓慢升至室温，室温搅拌1小时。加入乙酸乙酯和饱和氯化铵溶液，分层萃取，有机相依次用水、饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯＝4∶1)得到2-(叔丁基)4-甲基(1S，5R)-6-苄基-4-羟基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2，4-二羧酸酯(40mg，收率77％)。ESI-MS m/z：363.2[M+1]+。
制备34：叔丁基(1S，5R)-4-氨甲酰基-4-羟基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧 酸酯(中间体34)
步骤1：2-(叔丁基)4-甲基(1S，5R)-6-苄基-4-羟基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2，4-二羧酸酯(400mg，1.15mmol)溶于4mol/L的氨-甲醇溶液(10mL)中，在耐压反应管内100℃反应48小时。减压浓缩得到产物粗品，直接用于下一步反应。ESI-MS m/z：348.2[M+1]+。
步骤2：将步骤1得到的产物粗品溶于甲醇(10mL)中，加入10％钯炭(200mg)，室温下氢化反应4小时。通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到叔丁基(1S，5R)-4-氨甲酰基-4-羟基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(160mg)，直接用于下一步反应。ESI-MS m/z：258.1[M+1]+。
制备35：(1S，5R)-4-(羟甲基)-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂双环 [3.2.0]庚烷-4-醇(中间体35)
步骤1：2-(叔丁基)4-甲基(1S，5R)-6-苯基-4-羟基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2，4-碳酸酯(中间体33，500mg，1.38mmol)溶于甲醇(20mL)中，加入10％钯炭(0.2g)，氢气氛围下在20℃下搅拌4小时。过滤，滤液减压浓缩，得到产物粗品，直接用于下一步反应。ESI-MS m/z：273.1[M+1]+。
步骤2：将步骤1得到的产物粗品溶于二氯甲烷(20mL)中，在室温下加入二异丙基乙胺(418mg，4.174mmol)和芴甲氧羰酰氯(427mg，1.65mmol)，搅拌反应1.5小时，减压蒸干溶剂，残留物通过硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯＝4：1)得到6-((9H-芴-9-基)甲基)2-(叔丁基)4-甲基(1S，5R)-4-羟基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2，4，6-三羧酸酯(500mg，两步收率73％)。ESI-MS m/z：495.2[M+1]+。
步骤3：将步骤2得到的产物6-((9H-芴-9-基)甲基)2-(叔丁基)4-甲基(1S，5R)-4-羟基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2，4，6-三羧酸酯(500mg，1mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入三氟乙酸(2mL)，室温下搅拌反应1.5小时。减压浓缩，得到产物粗品，直接用于下一步反应。ESI-MS m/z：395.2[M+1]+。
步骤4：将步骤3得到的粗产物溶于四氢呋喃(10mL)中，加入6-甲氧基-3-吡啶甲醛(400mg，3mmol)，室温搅拌0.5小时，加入三醋酸基硼氢化钠(600mg，3mmol)，反应继续在室温下搅拌3小时。反应液中加入饱和碳酸氢钠溶液，乙酸乙酯萃取，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯＝4：1)得到6-((9H-芴-9-基)甲基)4-甲基(1S，5R)-4-羟基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4，6-二羧酸酯(400mg，两步收率77％)。ESI-MS m/z：516.2[M+1]+。
步骤5：将步骤4得到的6-((9H-芴-9-基)甲基)4-甲基(1S，5R)-4-羟基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4，6-二羧酸酯(400mg，0.77mmol)溶于四氢呋喃(30mL)中，加入硼烷二甲硫醚络合物(2.0mol/l in THF，3.85mL，7.7mmol)，50℃下搅拌反应2小时。冷却至室温，加入甲醇淬灭反应，减压浓缩，得到产物粗品，直接用于下一步反应。ESI-MS m/z：488.2[M+1]+。
步骤6：将步骤5得到的产物粗品溶于4mol/L的氨-甲醇溶液(20mL)中，室温下搅拌12小时，减压浓缩，得到(1S，5R)-4-(羟甲基)-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-醇粗品400mg。直接用于下一步反应。ESI-MS m/z：266.1[M+1]+。
制备36：叔丁基(1S，4R，5R)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5- a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-羟基-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(中间体36)
100mL茄形瓶中加入叔丁基(1S，4R，5R)-4-羟基-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(中间体21，700mg，3.27mmol)、4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(中间体2，832mg，2.6mmol)、N，N-二异丙基乙胺(2.1g，16.3mmol)和二甲亚砜(20mL)，于140℃反应16小时。反应液倒入80mL的水中，搅拌10分钟，过滤收集固体，干燥，硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯＝4∶1)得淡黄色固体叔丁基(1S，4R，5R)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-羟基-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(1.0g，收率76％)。ESI-MS m/z：513.2[M+1]+。
制备37：叔丁基(1S，4S，5R)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5- a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-羟基-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(中间体37)
由叔丁基(1S，4S，5R)-4-羟基-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(中间体24)和4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(中间体2)参照制备36的过程合成。ESI-MS m/z：513.2[M+1]+。
制备38：4-苄基2-(叔丁基)(1S，5S)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡 唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2，4-二羧酸酯(中间体 38)
500mL茄形瓶中加入(1S，5S)-2-(叔丁氧羰基)-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-4-羧酸(中间体27，4.87g，20.12mmol)、4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(中间体2，6.3g，20.12mmol)、碳酸钾(9.7g，70.42mmol)和N，N-二甲基乙酰胺(250mL)，于140℃反应16小时。冷却到室温，加入苄基溴(2.72g，16mmol)，室温反应1小时，反应液倒入200mL的水中，搅拌10分钟，过滤收集固体，硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯＝4∶1)得淡黄色固体4-苄基2-(叔丁基)(1S，5S)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2，4-二羧酸酯7.5g(收率60％)。ESI-MS m/z：631.3[M+1]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.23(dd，J＝3.5，1.5Hz，1H)，8.65(d，J＝5.7Hz，1H)，8.44-8.32(m，2H)，8.12(d，J＝2.6Hz，1H)，7.90-7.75(m，2H)，7.44-7.19(m，5H)，6.78(d，J＝8.9Hz，1H)，5.29-5.01(m，3H)，4.77-4.53(m，1H)，3.88(s，3H)，3.73(t，J＝8.2Hz，1H)，3.60-3.37(m，3H)，3.30-3.16(m，1H)，1.46-1.30(m，9H)。
制备39：叔丁基(1S，4R，5R)-6-(5-(6-溴-3-氰基吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2- 基)-4-羟基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(中间体39)
由叔丁基(1S，4R，5R)-4-羟基-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(中间体21)和6-溴-4-(6-氟吡啶-3-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(中间体1)参照制备36的过程合成。ESI-MS m/z：511.1，513.1[M+1]+。
制备40：6-溴-4-(6-((1S，4R，5R)-4-羟基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6- 二氮杂二环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(中间体40)
步骤1：叔丁基(1S，4R，5R)-6-(5-(6-溴-3-氰基吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-羟基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(中间体39，512mg，1.0mmol)溶于二氯甲烷(10mL)，加入三氟乙酸(5mL)，室温搅拌1小时。减压浓缩，得到淡黄色固体产物粗品(412mg)，直接用于下一步反应。ESI-MS m/z：411.0，413.0[M+1]+。
步骤2：将步骤1得到的产物粗品溶于1，2-二氯乙烷(10mL)，加入6-甲氧基-3-吡啶甲醛(205mg)、三乙酰氧基硼氢化钠(1.06g)，室温搅拌反应过夜，加入饱和碳酸氢钠溶液，二氯甲烷萃取，有机相无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯＝4：1)得到淡黄色固体6-溴-4-(6-((1S，4R，5R)-4-羟基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(238mg，两步总收率44.5％)。ESI-MS m/z：532.1，534.1[M+1]+。
制备41：叔丁基(1S，4S，5R)-6-(5-(6-溴-3-氰基吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2- 基)-4-羟基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(中间体41)
由叔丁基(1S，4S，5R)-4-羟基-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(中间体24)和6-溴-4-(6-氟吡啶-3-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(中间体1)参照制备36的过程合成。ESI-MS m/z：511.1，513.1[M+1]+。
制备42：6-溴-4-(6-((1S，4S，5R)-4-羟基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6- 二氮杂二环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(中间体42)
由叔丁基(1S，4S，5R)-6-(5-(6-溴-3-氰基吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-羟基-2，6--二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(中间体41)参照制备40的过程合成。ESI-MS m/z：532.1，534.1[M+1]+。
制备43：(1S，5R)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4- 基)吡啶-2-基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-基)氨基甲酸苄酯(中间体43)
步骤1：向100mL三口瓶中加入4-苄基2-(叔丁基)(1S，5S)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2，4-二羧酸酯(中间体38，1260mg，2.0mmol)和30mL四氢呋喃，干冰-丙酮浴冷却至-70℃，加入1.0M双三甲基硅基胺基锂的四氢呋喃溶液(4.0mL，4.0mmol)，反应0.5小时后，加入碘甲烷(568mg，4.0mmol)，继续-70℃反应1小时。加入饱和氯化铵溶液淬灭，乙酸乙酯萃取，饱和氯化钠水溶液洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析(二氯甲烷∶甲醇＝20∶1洗脱)，得到产物4-苄基2-(叔丁基)(1S，5S)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2，4-二羧酸酯(856mg，收率66％)。ESI-MS m/z：645.3[M+1]+。
步骤2：向100mL单口瓶中加入4-苄基2-(叔丁基)(1S，5S)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2，4-二羧酸酯(856mg，1.3mmol)，10％钯炭(500mg)和50mL甲醇，氢气环境下，60℃反应6小时。通过硅藻土过滤，减压浓缩，得到产物(1S，5S)-2-(叔丁氧羰基)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-羧酸(725mg，收率99％)。ESI-MS m/z：555.2[M+1]+。
步骤3：向100mL单口瓶中加入(1S，5S)-2-(叔丁氧羰基)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-羧酸(725mg，1.3mmol)，三乙胺(328mg，3.2mmol)，叠氮磷酸二苯酯(537mg，1.9mmol)和30mL甲苯，80℃反应1小时后，加入苯甲醇(562mg，5.2mmol)，升温至100℃反应16小时。减压蒸干溶剂，残留物通过硅胶柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20∶1洗脱)，得到产物叔丁基(1S，5R)-4-(苄氧羰基氨基)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(700mg，收率81％)。ESI-MS m/z：660.2[M+1]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.23(s，1H)，8.65(s，1H)，8.44-8.37(m，2H)，8.15-8.09(m，1H)，8.02-7.90(m，1H)，7.86-7.74(m，2H)，7.45-7.25(m，5H)，6.67(s，1H)，5.14-4.96(m，2H)，4.96-4.56(m，2H)，4.56-4.42(m，1H)，3.88(s，3H)，3.73-3.62(m，1H)，3.56-3.44(m，1H)，3.27-3.10(m，1H)，1.50-1.30(m，12H)。
步骤4：向100mL单口瓶中加入叔丁基(1S，5R)-4-(苄氧羰基氨基)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(500mg，0.76mmol)，6mL二氯甲烷和3mL三氟乙酸，室温反应1小时。减压蒸干溶剂，得到(1S，5R)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-基)氨基甲酸苄酯粗产物700mg，直接用于下一步。ESI-MS m/z：560.2[M+1]+。
制备44：叔丁基(1S，4R，5S)-4-氰基-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡 唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(中间体44)
由(1S，4R，5S)-4-氰基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸叔丁酯(中间体28)和4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(中间体2)参照制备36的过程合成。ESI-MS m/z：522.2[M+1]+。
制备45：叔丁基(1S，4R，5S)-4-氨甲酰基-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4- 基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(中间体 45)
由(1S，4R，5S)-4-氨甲酰基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸叔丁酯(中间体30)和4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(中间体2)参照制备36的过程合成。ESI-MS m/z：540.2[M+1]+。
制备46：叔丁基(1S，5S)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a] 吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-羟甲基-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(中间体46)
由(1S，5S)-4-(羟甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸叔丁酯(中间体32)和4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(中间体2)参照制备36的过程合成。ESI-MS m/z：527.2[M+1]+。
制备47：叔丁基(1S，5R)-4-氨甲酰基-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基) 吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-羟基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(中 间体47)
由叔丁基(1S，5R)-4-氨甲酰基-4-羟基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(中间体34)和4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(中间体2)参照制备36的过程合成。ESI-MS m/z：556.2[M+1]+。
制备48：4-(6-((1S，4S，5R)-4-叠氮基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮 杂二环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)-6-溴吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(中间体48)
步骤1：6-溴-4-(6-((1S，4R，5R)-4-羟基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(中间体40，237mg)和三乙胺(67mg)溶于二氯甲烷(10mL)，冰水浴冷却到零度，加入甲磺酰氯(76mg)，然后在室温下搅拌反应2小时。加入二氯甲烷和饱和碳酸氢钠溶液，分出有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到6-溴-4-(6-((1S，4R，5R)-4-甲磺酰氧基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈，粗品直接进行下一步反应。ESI-MS m/z：610.1，612.1[M+1]+。
步骤2：将步骤1所得产物粗品和叠氮化钠(160mg)溶于N，N-二甲基甲酰胺(10mL)中，于130℃下搅拌反应3小时。加入乙酸乙酯和水，分出有机层，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯＝2∶1)得到中间体48(240mg)。ESI-MS m/z：557.1，559.1[M+1]+。
制备49：((1S，5R)-6-(5-(3-氰基-6-((2-氟乙基)氨)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡 啶-2-基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-基)氨基甲酸苄酯(中间体49)
步骤1：向50mL单口瓶中加入叔丁基(3-氰基-4-(6-氟吡啶-3-基)吡唑[1，5-a]吡啶-6-基)(2-氟乙基)氨基甲酸酯(中间体4，470mg，1.18mmol)、(1S，5S)-2-(叔丁氧羰基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-羧酸(中间体20，300mg，1.17mmol)、碳酸铯(0.76g，2.34mmol)及N，N-二甲基甲酰胺(15mL)，140℃搅拌反应12小时。反应物减压蒸去溶剂，残留物溶于50mL水中，用浓盐酸酸化至pH到5，二氯甲烷(60mL)萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析(二氯甲烷：甲醇＝10：1洗脱)，得到(1S，5S)-2-(叔丁氧羰基)-6-(5-(6-((叔丁氧羰基)(2-氟乙基)氨基)-3-氰基吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-羧酸200mg。ESI-MS m/z：636.3[M+1]+。
步骤2：向50mL单口瓶中加入(1S，5S)-2-(叔丁氧羰基)-6-(5-(6-((叔丁氧羰基)(2-氟乙基)氨基)-3-氰基吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-羧酸(200mg，0.31mmol)、叠氮磷酸二苯酯(140mg，0.51mmol)、三乙胺(70mg，0.69mmol)和甲苯(10mL)中，在90℃下搅拌反应1小时，然后再加入苯甲醇(134mg，1.24mmol)，继续在90℃下搅拌反应1小时。将反应物直接旋干，残留物通过硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1洗脱)，得到(1S，5R)-4-(((苄氧)羰基)氨基)-6-(5-(6-((叔丁氧羰基)(2-氟乙基)氨基)-3-氰基吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸叔丁酯136mg。ESI-MS m/z：741.3[M+1]+。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.59(s，1H)，8.27(dd，J＝8.9，2.4Hz，2H)，7.75(d，J＝8.5Hz，1H)，7.39-7.28(m，6H)，6.54(s，1H)，5.21-4.98(m，2H)，4.74(t，J＝4.8Hz，2H)，4.62(t，J＝4.6Hz，1H)，4.01-3.94(m，1H)，3.90(t，J＝4.1Hz，1H)，3.71(s，1H)，3.65-3.56(m，1H)，3.53-3.38(m，3H)，1.56(s，3H)，1.53-1.39(m，18H)。
步骤3：向25mL单口瓶中加入(1S，5R)-4-(((苄氧)羰基)氨基)-6-(5-(6-((叔丁氧羰基)(2-氟乙基)氨基)-3-氰基吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸叔丁酯(130mg，0.17mmol)、二氯甲烷(4mL)及三氟乙酸(2mL)。室温下搅拌反应2小时，反应物减压浓缩，得到中间体49，未经纯化直接用于下一步反应。ESI-MS m/z：541.2[M+1]+。
制备50：((1S，5R)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶- 4-基)吡啶-2-基)-4-氟甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-基)氨基甲酸苄酯(中间体 50)
步骤1：实验操作同制备43的步骤1，将原料碘甲烷替换为氟碘甲烷。得到4-苄基2-(叔丁基)(1S，5S)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-氟甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2，4-二羧酸酯。ESI-MS m/z：663.3[M+1]+。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.65(dd，J＝4.5，1.5Hz，1H)，8.37-8.30(m，1H)，8.27(d，J＝6.0Hz，1H)，7.83-7.72(m，2H)，7.72-7.66(m，1H)，7.43-7.30(m，4H)，7.24(s，1H)，6.54(d，J＝8.5Hz，1H)，6.42(d，J＝12.2Hz，1H)，5.41-4.96(m，3H)，4.93-4.61(m，3H)，3.99(d，J＝3.1Hz，3H)，3.89-3.26(m，4H)，1.50-1.38(m，9H)。
步骤2：实验操作同制备43的步骤2，得到(1S，5S)-2-(叔丁氧羰基)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-氟甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-羧酸。ESI-MS m/z：573.2[M+1]+。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.66(d，J＝1.5Hz，1H)，8.33(dd，J＝17.8，2.4Hz，1H)，8.28-8.17(m，1H)，7.84-7.67(m，3H)，7.41(q，J＝10.8，10.3Hz，1H)，6.58(d，J＝8.9Hz，1H)，5.30-4.59(m，4H)，4.06-3.91(m，3H)，3.84-3.70(m，1H)，3.63-3.50(m，10H)，1.54-1.37(m，9H)。
步骤3：实验操作同制备43的步骤3，得到叔丁基(1S，5R)-4-(苄氧羰基氨基)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-氟甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯。ESI-MS m/z：678.3[M+1]+。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.64(d，J＝1.4Hz，1H)，8.32(dd，J＝10.1，2.4Hz，1H)，8.26(d，J＝2.2Hz，1H)，7.83-7.72(m，2H)，7.69(d，J＝2.7Hz，1H)，7.43-7.29(m，6H)，6.52(d，J＝9.1Hz，1H)，5.62-5.03(m，4H)，5.03-4.46(m，2H)，3.99(d，J＝1.4Hz，3H)，3.86-3.39(m，4H)，1.51-1.39(m，10H)。
步骤4：实验操作同制备43的步骤4，得到中间体50，不经纯化直接用于下一步反应。ESI-MS m/z：578.2[M+1]+。
制备51：(9H-芴-9-基)甲基((1S，5R)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基) 吡唑并[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-(羟甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-基) 氨基甲酸酯(中间体51)
步骤1：实验操作同制备43的步骤1，将原料碘甲烷替换为2-(三甲硅烷基)乙氧甲基氯。得到4-苄基2-叔丁基(1S，5S)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2，4-二羧酸酸酯。ESI-MS m/z：761.4[M+1]+。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.64(d，J＝3.0Hz，1H)，8.31(s，1H)，8.26(d，J＝4.5Hz，1H)，7.83-7.64(m，3H)，7.36-7.40(m，3H)，7.20-7.29(m，3H)，6.47(d，1H，J＝4.0Hz)，5.46-4.91(m，3H)，4.68(d，J＝43.3Hz，1H)，3.99(d，J＝2.3Hz，3H)，3.80-3.27(m，8H)，1.41(s，9H)，0.75-0.90(m，2H)，0.02(s，9H)。
步骤2：实验操作同制备43的步骤2，得到(1S，5S)-2-(叔丁氧羰基)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-甲酸。ESI-MS m/z：671.3[M+1]+。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.62(d，J＝12.2Hz，1H)，8.35-8.12(m，2H)，7.89-7.59(m，3H)，7.38(s，1H)，6.51(d，J＝9.0Hz，1H)，4.99(s，3H)，4.80-4.55(m，1H)，4.09-3.25(m，9H)，2.00(s，1H)，1.46(d，J＝11.6Hz，8H)，0.91(dt，J＝18.6，8.4Hz，2H)，0.04--0.05(m，12H)。
步骤3：实验操作同制备43的步骤3，将原料苯甲醇替换为三甲基硅乙醇。得到叔丁基(1S，5R)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-yl)吡唑并[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-(((2-(三甲基硅基)乙氧基)羰基)氨基)-4-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯。ESI-MS m/z：786.4[M+1]+。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.63(s，1H)，8.30(s，1H)，8.24(s，1H)，7.77(d，J＝3.0Hz，2H)，7.67(d，J＝5.4Hz，1H)，7.42-7.32(m，1H)，6.51(s，1H)，5.42-5.09(m，1H)，4.89(d，J＝40.9Hz，1H)，4.12(d，J＝11.9Hz，2H)，3.97(s，3H)，3.75-3.67(m，2H)，3.64-3.29(m，6H)，1.51-1.38(m，9H)，1.03-0.86(m，4H)，-0.01(s，18H)。
步骤4：将步骤3得到的叔丁基(1S，5R)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-yl)吡唑并[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-(((2-(三甲基硅基)乙氧基)羰基)氨基)-4-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(300mg，0.382mmol)溶于四氢呋喃(4mL)中，加入1N四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(3.8mL，3.82mmol)，在室温下搅拌反应1小时。减压蒸干溶剂，加入乙酸乙酯和水，分层萃取，有机相依此水洗、饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到产物叔丁基(1S，5R)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-(羟甲基)-4-(((2-(三甲基硅基)乙氧基)羰基)氨基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(240mg)，直接用于下一步反应。ESI-MS m/z：642.3[M+1]+。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.64(s，1H)，8.32(s，1H)，8.26(d，J＝3.9Hz，1H)，7.79(d，J＝3.2Hz，1H)，7.75(d，J＝8.9Hz，1H)，7.69(s，1H)，7.42-7.36(m，1H)，6.58(d，J＝8.7Hz，1H)，4.28(d，J＝27.4Hz，1H)，3.99-4.13(m，1H)，3.99(s，3H)，4.01-3.24(m，8H)，1.39-1.45(m，9H)，1.03-0.78(m，2H)，-0.00(s，9H)。
步骤5：将步骤4得到的叔丁基(1S，5R)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-(羟甲基)-4-(((2-(三甲基硅基)乙氧基)羰基)氨基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(240mg，0.374mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，在室温下加入二异丙基乙胺(145mg，1.12mmol)和芴甲氧羰酰氯(145mg，0.562mmol)，搅拌反应1.5小时，将溶剂蒸干，残留物通过制备薄层色谱纯化(二氯甲烷∶甲醇＝15∶1展开)得到叔丁基(1S，5R)-4-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(220mg)。ESI-MS m/z：864.4[M+1]+。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.64(s，1H)，8.34(s，1H)，8.26(s，1H)，7.88-7.64(m，5H)，7.64-7.50(m，1H)，7.22-7.60(m，6H)，6.53(s，1H)，5.54-5.27(m，1H)，4.89(d，J＝42.0Hz，1H)，4.40(s，2H)，4.31-4.15(m，1H)，3.82-3.92(m，1H)，3.76-3.35(m，7H)，1.46(d，J＝7.0Hz，9H)，1.01-0.84(m，2H)，0.01(dd，J＝6.8，1.7Hz，9H)。
步骤6：实验操作同制备43的步骤4，得到中间体51，不经纯化直接用于下一步反应。ESI-MS m/z：664.3[M+1]+。
制备52：苄基(1′R，5′S)-7′-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a] 吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4′，7′-二氮杂螺环[氮杂环丁烷-2，2′-二环[3.2.0]庚烷]-1-羧酸 酯(中间体52)
步骤1：实验操作同制备43的步骤1，将原料碘甲烷替换为溴乙酸乙酯。得到4-苄基2-(叔丁基)(1S，5S)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2，4-二羧酸酯。ESI-MS m/z：717.3[M+1]+。
步骤2：实验操作同制备43的步骤2，得到(1S，5S)-2-(叔丁氧羰基)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-羧酸。ESI-MS m/z：627.3[M+1]+。
步骤3：实验操作同制备43的步骤3，将原料苯甲醇替换为三甲基硅乙醇。得到叔丁基(1S，5R)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-4-(((2-(三甲基硅基)乙氧基)羰基)氨基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯。ESI-MS m/z：742.3[M+1]+。
步骤4：将步骤3得到的叔丁基(1S，5R)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-4-(((2-(三甲基硅基)乙氧基)羰基)氨基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(741mg，1.0mmol)溶于四氢呋喃(20mL)中，干冰-丙酮浴冷却至-70℃，滴加1mol/L四氢铝锂的四氢呋喃溶液(2mL，2mmol)，滴加完毕后缓慢升至-20℃，在该温度下搅拌反应1小时。加入水淬灭反应，再加入乙酸乙酯萃取，有机层水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到产物叔丁基(1S，5R)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4--基)吡唑并[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-(2-羟基乙基)-4-(((2-(三甲基硅基)乙氧基)羰基)氨基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯，直接用于下一步反应。ESI-MS m/z：700.3[M+1]+。
步骤5：将步骤4得到的叔丁基(1S，5R)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-(2-羟基乙基)-4-(((2-(三甲基硅基)乙氧基)羰基)氨基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯粗品溶于四氢呋喃(10mL)中，加入1N四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(6mL，6.0mmol)，在室温下搅拌反应1小时。减压蒸干溶剂，加入乙酸乙酯和水，分层萃取，有机相依此水洗、饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯＝4∶1)得到产物叔丁基(1S，5R)-4-氨基-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-(2-羟基乙基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(250mg)。ESI-MS m/z：556.3[M+1]+。
步骤6：将步骤5得到的产物叔丁基(1S，5R)-4-氨基-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-(2-羟基乙基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(555mg，1mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，在0℃下加入二异丙基乙胺(303mg，3mmol)和甲磺酰氯(114mg，1mmol)，继续0℃下搅拌反应1.5小时，加入二氯甲烷和水，分层萃取，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到产物叔丁基(1S，5R)-4-氨基-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-(2-(甲磺酰氧)乙基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯。直接用于下一步反应。ESI-MS m/z：634.3[M+1]+。
步骤7：将步骤6得到的产物叔丁基(1S，5R)-4-氨基-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-(2-(甲磺酰氧)乙基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯粗品溶于乙腈(20mL)，加入碳酸钾(400mg，3mmol)，于80℃下搅拌反应4小时。减压蒸干溶剂，加入乙酸乙酯和水，分层萃取，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯＝4∶1)得到叔丁基(1′R，5′S)-7′-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4′，7′-二氮杂螺环[氮杂环丁烷-2，2′-二环[3.2.0]庚烷]-4′-羧酸酯(200mg)。ESI-MS m/z：538.3[M+1]+。
步骤8：将步骤7得到的叔丁基(1′R，5′S)-7′-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4′，7′-二氮杂螺环[氮杂环丁烷-2，2′-二环[3.2.0]庚烷]-4′-羧酸酯(200mg，0.37mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，在0℃下加入二异丙基乙胺(112mg，1.11mmol)和氯甲酸苄酯(94mg，0.562mmol)，继续搅拌反应1.5小时，加入二氯甲烷和水，分层萃取，有机相依次用水洗、饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物通过制备薄层色谱纯化(二氯甲烷∶甲醇＝15∶1展开)得到产物1-苄基4′-叔丁基(1′R，5′S)-7′-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4′，7′-二氮杂螺环[氮杂环丁烷-2，2′-二环[3.2.0]庚烷]-1，4′-二羧酸酯(200mg)。ESI-MS m/z：672.3[M+1]+。
步骤9：实验操作同制备43的步骤4，得到中间体52，不经纯化直接用于下一步反应。ESI-MS m/z：572.2[M+1]+。
制备53：(1S，4S，5R)-6-(5-(6-((叔丁氧羰基)(2-氟乙基)氨基)-3-氰基吡唑[1， 5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-羟基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸叔丁酯(中间体 53)
向25mL单口瓶中加入叔丁基(3-氰基-4-(6-氟吡啶-3-基)吡唑[1，5-a]吡啶-6-基)(2-氟乙基)氨基甲酸酯(中间体4，100mg，0.25mmol)、碳酸钾(114mg，0.84mmol)、叔丁基(1S，4S，5R)-4-羟基-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(中间体24，159mg，0.55mmol)和3mL二甲基亚砜，氩气保护下，120℃反应18小时。反应液加水稀释，乙酸乙酯萃取，饱和氯化钠水溶液洗，有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析(二氯甲烷∶甲醇＝15∶1)，得到(1S，4S，5R)-6-(5-(6-((叔丁氧羰基)(2-氟乙基)氨基)-3-氰基吡唑[1，5-a]吡啶-4--基)吡啶-2-基)-4-羟基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸叔丁酯(中间体53，50mg，收率33.7％)。ESI-MS m/z：594.2[M+1]+。
制备54：叔丁基(1S，5S)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a] 吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-氰甲基-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(中间体54)
步骤1：叔丁基(1S，5S)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-(羟甲基)-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(中间体46，211mg)和三乙胺(81mg)溶于二氯甲烷(10mL)，冰水浴冷却到0℃，加入甲磺酰氯(76mg)，然后在室温下搅拌反应2小时。加入二氯甲烷和饱和碳酸氢钠溶液，分出有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到叔丁基(1S，5S)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-(((甲磺酰)氧)甲基)-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯粗品，直接进行下一步反应。ESI-MS m/z：605.2[M+1]+。
步骤2：25mL茄形瓶中加入叔丁基(1S，5S)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-(((甲磺酰)氧)甲基)-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(242mg，0.4mmol)、氰化钠(98mg，2.0mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(8mL)，氮气保护，100℃反应16小时。反应液倒入水(20mL)中，二氯甲烷(20mL)提取两次，有机相用饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，减压蒸干，残留物通过硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯＝2∶1洗脱)得中间体54(201mg，收率94％)。ESI-MS m/z：536.2[M+1]+。
制备55：叔丁基(1S，4S，5S)-4-氰基-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡 唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(中间体55)
步骤1：由(1S，4S，5S)-叔丁基6-苄基-4-氰基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(中间体15)参照制备28的过程合成。ESI-MS m/z：224.2[M+1]+。
步骤2：100mL茄形瓶中加入叔丁基(1S，4S，5S)-4-氰基-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(733mg，3.27mmol)、4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(中间体2，832mg，2.6mmol)、N，N-二异丙基乙胺(2.1g，16.3mmol)和二甲亚砜(20mL)，于140℃反应16小时。反应液倒入80mL的水中，搅拌10分钟，过滤收集固体，减压干燥，经硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯＝2∶1洗脱)得到中间体55(0.5g，收率37％)。ESI-MS m/z：522.2[M+1]+。
制备56：叔丁基(1S，5S)-4-氰基-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑 [1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(中间体 56)
50mL三口瓶加入叔丁基(1S，4S，5S)-4-氰基-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(中间体55，95mg，0.18mmol)和无水四氢呋喃(10mL)，氮气保护，-70℃下滴加1N双三甲基硅基胺基锂的四氢呋喃溶液(0.25mL，0.25mmol)，滴加完毕后维持在-70℃反应0.5小时，然后再加入碘甲烷(36mg，0.25mmol)，室温反应1小时。反应液倒入水(10mL)中，乙酸乙酯(10mL)提取两次，有机相用饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，减压蒸干后残留物通过硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯＝2∶1洗脱)得到中间体56(30mg，收率33％)。ESI-MS m/z：536.2[M+1]+。
制备57：叔丁基(1S，5S)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a] 吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-羟甲基-4-甲基-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(中间 体57)
步骤1：向50mL单口瓶中加入(1S，5S)-2-(叔丁氧羰基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-羧酸(中间体20，514mg，2.0mmol)和30mL四氢呋喃，冷却至0℃，加入10M硼烷二甲硫醚的四氢呋喃溶液(1.6mL，16.0mmol)，20℃反应16小时。冰浴下加入甲醇淬灭，加入饱和的碳酸氢钠水溶液，乙酸乙酯萃取，有机相用饱和氯化钠水溶液洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到叔丁基(1S，5S)-4-(羟甲基)-4-甲基-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(412mg。收率85％)。ESI-MS m/z：243.2[M+1]+。
步骤2：叔丁基(1S，5S)-4-(羟甲基)-4-甲基-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(315mg，1.3mmol)、4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(中间体2，416mg，1.3mmol)、N，N-二异丙基乙胺(1.05g，8.15mmol)和二甲亚砜(20mL)，于160℃反应16小时。反应液倒入80mL的水中，搅拌10分钟，过滤收集固体，减压干燥，经硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯＝2∶1洗脱)得到中间体57(0.3g，收率43％)。ESI-MSm/z：540.2[M+1]+。
制备58：叔丁基(1S，5S)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a] 吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-氰甲基-4-甲基-2，6-三氮杂三环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(中间 体58)
步骤1：叔丁基(1S，5S)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-羟甲基-4-甲基-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(中间体57，216mg)和三乙胺(81mg)溶于二氯甲烷(10mL)，冰水浴冷却到零度，加入甲磺酰氯(76mg)，然后在室温下搅拌反应2小时。加入二氯甲烷和饱和碳酸氢钠溶液，分出有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到叔丁基(1S，5S)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基-4-(((甲磺酰)氧)甲基)-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯粗品，直接进行下一步反应。ESI-MS m/z：541.3[M+1]+。
步骤2：50mL茄形瓶中加入叔丁基(1S，5S)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基-4-(((甲磺酰)氧)甲基)-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(216mg，0.4mmol)、氰化钠(98mg，2.0mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(10mL)，氮气保护，100℃反应16小时。反应液倒入水(10mL)中，二氯甲烷(10mL)提取两次，有机相用饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，减压蒸干后通过硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯＝4∶1)得到中间体58(196mg，收率89％)。ESI-MS m/z：550.3[M+1]+。
制备59：(1S，5S)-6-(5-(6-溴-3-氰基吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2-(叔 丁氧羰基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-羧酸(中间体59)
向100mL单口瓶中加入(1R，5R)-2-(叔丁氧羰基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-羧酸(中间体20，2.6g，10.1mmol)、6-溴-4-(6-氟吡啶-3-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(中间体1，4.1g，13.2mmol)、碳酸钾(2.8g，20.3mmol)及二甲亚砜(40mL)，140℃搅拌反应6小时。反应物冷却至室温，加入水和二氯甲烷，萃取分层，有机相再用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯＝1∶1洗脱)，得到(1S，5S)-6-(5-(6-溴-3-氰基吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2-(叔丁氧羰基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-羧酸(2.0g)。ESI-MS m/z：553，555[M+1]+。
制备60：(1S，5S)-6-(5-(6-溴-3-氰基吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2- ((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-羧酸(中间体60)
步骤1：向100mL单口瓶中加入(1S，5S)-6-(5-(6-溴-3-氰基吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2-(叔丁氧羰基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-羧酸(中间体59，700mg，1.26mmol)，6mL二氯甲烷和3mL三氟乙酸，室温反应1小时。减压蒸干溶剂，得到(1S，5S)-6-(5-(6-溴-3-氰基吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-羧酸粗产物，直接用于下一步反应。ESI-MS m/z：453，455[M+1]+。
步骤2：将步骤1所得(1S，5S)-6-(5-(6-溴-3-氰基吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-羧酸粗品溶于1，2-二氯乙烷(10mL)，加入6-甲氧基-3-吡啶甲醛(694mg)、三乙酰氧基硼氢化钠(1.34g)，室温搅拌反应过夜，加入饱和碳酸氢钠溶液，二氯甲烷萃取，有机相干燥，浓缩，残留物通过硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1洗脱)得到中间体60(636mg，两步总收率87％)。ESI-MS m/z：574，576[M+1]+。
制备61：2-(三甲基硅基)乙基((1S，5R)-6-(5-(6-溴-3-氰基吡唑[1，5-a]吡啶-4- 基)吡啶-2-基)-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4- 基)氨基甲酸酯(中间体61)
向100mL单口瓶中加入(1S，5S)-6-(5-(6-溴-3-氰基吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-羧酸(中间体60，636mg，1.1mmol)，三乙胺(224mg，2.2mmol)，叠氮磷酸二苯酯(305mg，1.1mmol)和15mL甲苯，80℃反应1小时后，加入三甲基硅乙醇(1.3g，11mmol)，升温至100℃反应16小时。减压蒸干溶剂，残留物通过硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1洗脱)纯化，得到产物中间体61(507mg)。ESI-MS m/z：689，691[M+1]+。
制备62：2-(三甲基硅基)乙基((1S，5R)-6-(5-(3-氰基-6-(4，4，5，5-四甲基-1，3， 2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2-((6-甲氧基吡啶-3-基) 甲基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-基)氨基甲酸酯(中间体62)
向25mL单口瓶中加入2-(三甲基硅基)乙基((1S，5R)-6-(5-(6-溴-3-氰基吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-基)氨基甲酸酯(中间体61，500mg，0.68mmol)、联硼酸频那醇酯(254mg，1.0mmol)、[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(30mg，0.04mmol)、醋酸钾(133mg，1.36mmol)和无水1，4-二氧六环(12mL)。氩气保护下，置于90℃油浴反应4小时。反应物冷却到室温，搅拌下向反应物中加入60mL乙酸乙酯，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1洗脱)，得到中间体62(360mg，收率72％)。ESI-MS m/z：737[M+1]+。
制备63：苄基((1S，5R)-6-(5-(6-溴-3-氰基吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)- 2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-基)氨基甲酸酯 (中间体63)
向100mL单口瓶中加入(1S，5S)-6-(5-(6-溴-3-氰基吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-羧酸(中间体60，200mg，0.36mmol)，三乙胺(73mg，0.72mmol)，叠氮磷酸二苯酯(100mg，0.36mmol)和5mL甲苯，80℃反应1小时后，加入苯甲醇(400mg，3.6mmol)，升温至100℃反应16小时。减压蒸干溶剂，残留物通过硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1洗脱)，得到中间体63(120mg)。ESI-MS m/z：679，681[M+1]+。
化合物合成实施例
实施例1
4-(6-((1S，4R，5R)-4-羟基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(化合物1)
步骤1：叔丁基(1S，4R，5R)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-羟基-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(中间体36，200mg，0.39mmol)溶于二氯甲烷(4mL)中，加入三氟乙酸(1mL)，室温下搅拌反应1.5小时。将反应液减压浓缩，残留物直接用于下一步反应。ESI-MS m/z：413.2[M+H]+。
步骤2：将步骤1所得产物粗品(200mg)溶于1，2-二氯乙烷(10mL)中，加入6-甲氧基-3-吡啶甲醛(200mg，1.44mmol)、三乙酰氧基硼氢化钠(303mg，1.44mmol)，室温下搅拌反应3小时。向反应液中加入饱和碳酸氢钠溶液(20mL)，再用乙酸乙酯(50mL)萃取，有机相依次以水(50mL)、饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用制备薄层色谱纯化(二氯甲烷/甲醇＝25∶1展开)得到化合物1(50mg，收率19.4％)。ESI-MS m/z：534.2[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.23(d，J＝1.4Hz，1H)，8.65(s，1H)，8.39(s，1H)，8.33(d，J＝2.3Hz，1H)，8.12(t，J＝2.2Hz，1H)，8.10(d，J＝2.1Hz，1H)，7.81(dd，J＝8.6，2.4Hz，1H)，7.76(d，J＝1.4Hz，1H)，7.69(dd，J＝8.5，2.4Hz，1H)，6.81(d，J＝8.4Hz，1H)，6.51(d，J＝8.6Hz，1H)，5.03(d，J＝4.1Hz，1H)，4.56(d，J＝5.6Hz，1H)，4.22-4.14(m，1H)，4.06(dt，J＝7.0，3.6Hz，1H)，4.03-3.97(m，1H)，3.88(s，3H)，3.85(s，3H)，3.75(s，2H)，3.67(dd，J＝9.1，6.2Hz，1H)，2.95(s，2H)。
实施例2
4-(6-((1S，4S，5R)-4-羟基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(化合物2)
化合物2以叔丁基(1S，4S，5R)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-羟基-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(中间体37)为原料，参照实施例1的方法制备。ESI-MS m/z：534.2[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.25-9.23(m，1H)，9.24(dd，J＝7.0，1.3Hz，1H)，8.65(d，J＝3.7Hz，1H)，8.41(s，1H)，8.36(d，J＝11.2Hz，1H)，8.13(s，2H)，7.93-7.61(m，3H)，6.73(d，J＝56.7Hz，2H)，4.31(s，4H)，3.92-3.77(m，7H)，3.71-3.41(m，3H)，1.95(d，2H)。
实施例3
4-(6-((1S，4S，5S)-4-氨基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(化合物3)
步骤1：4-(6-((1S，4R，5R)-4-羟基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(化合物1，534mg，1.0mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，冰水浴冷却到0℃，加入三乙胺(330mg，3.0mmol)和甲磺酰氯(137mg，1.1mmol)。然后在室温下搅拌反应1小时。加入二氯甲烷(20mL)和水(20mL)分层萃取，有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物4-(6-((1S，4R，5R)-4-甲磺酰氧基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈粗品直接用于下一步反应。ESI-MS m/z：612.2[M+H]+。
步骤2：将步骤1得到的4-(6-((1S，4R，5R)-4-甲磺酰氧基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6--二氮杂双环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈粗品和叠氮化钠(330mg，5mmol)溶于N，N-二甲基乙酰胺(10mL)中，在140℃下搅拌反应4小时。冷却到室温，加入乙酸乙酯(100mL)和水(80mL)，分出有机层，再用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝10：1洗脱)得到4-(6-((1S，4S，5R)-4-叠氮基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(300mg，两步收率56％)。ESI-MS m/z：559.2[M+H]+。
步骤3：将步骤2得到的4-(6-((1S，4S，5R)-4-叠氮基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(300mg，0.55mmol)溶于THF(15mL)和水(15mL)中，再加入三苯基膦(281mg，1.07mmol)，然后在50℃搅拌12小时。将溶剂减压蒸干，残留物溶于乙酸乙酯(60mL)，再依次用水、饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝20∶1洗脱)得到化合物3(100mg，收率33％)。ESI-MS m/z：533.2[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.29(s，1H)，8.68(s，1H)，8.53-8.22(m，3H)，8.11(d，J＝15.7Hz，2H)，7.93(t，J＝15.8Hz，1H)，7.82(s，1H)，7.02(s，1H)，6.89(dd，J＝20.2，8.4Hz，1H)，5.17(d，J＝21.3Hz，1H)，4.68-3.63(m，16H)。
实施例4
4-(6-((1S，4R，5S)-4-氨基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(化合物4)
化合物4以4-(6-((1S，4S，5R)-4-羟基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(化合物2)为原料，参照实施例3的方法制备。ESI-MS m/z：533.2[M+H]+。
实施例5
4-(6-((1S，4R，5S)-4-氰基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(化合物5)
化合物5以叔丁基(1S，4R，5S)-4-氰基-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(中间体44)为原料，参照实施例1的方法制备。ESI-MS m/z：543.2[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.24(s，1H)，8.65(s，1H)，8.40(s，1H)，8.37(d，J＝2.4Hz，1H)，8.13(s，1H)，8.11-8.06(m，1H)，7.88-7.82(m，1H)，7.81-7.76(m，1H)，7.70-7.63(m，1H)，6.86-6.72(m，2H)，5.32(t，J＝4.8Hz，1H)，5.13-5.08(m，1H)，4.05-4.00(m，1H)，3.88(s，3H)，3.83(s，3H)，3.78-3.69(m，2H)，3.52-3.40(m，2H)，2.08-1.92(m，2H)。
实施例6
4-(6-((1S，4S，5S)-4-氰基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(化合物6)
化合物6以叔丁基(1S，4R，5S)-4-氰基-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(中间体55)为原料，参照实施例1的方法制备。ESI-MS m/z：543.2[M+H]+。
实施例7
(1S，4R，5S)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-甲酰胺(化合物7)
化合物7以叔丁基(1S，4R，5S)-4-氨甲酰基-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(中间体45)为原料，参照实施例1的方法制备。ESI-MS m/z：561.2[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.22(d，J＝1.2Hz，1H)，8.64(s，1H)，8.40(s，1H)，8.37-8.33(m，1H)，8.13(s，1H)，8.04(s，1H)，7.87-7.72(m，2H)，7.65-7.57(m，1H)，7.48(s，1H)，7.04(s，1H)，6.80-6.74(m，1H)，6.72-6.61(m，1H)，4.86(s，1H)，3.88(s，3H)，3.82(s，3H)，3.79-3.58(m，3H)，3.45(d，J＝9.2Hz，1H)，3.26(d，J＝8.4Hz，1H)，2.96(s，1H)，2.37-2.25(m，1H)，2.05-1.92(m，1H)。
实施例8
4-(6-((1S，5S)-4-羟甲基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(化合物8)
化合物8以叔丁基(1S，5S)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-羟甲基-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(中间体46)为原料，参照实施例1的方法制备。ESI-MS m/z：548.2[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.22(s，1H)，8.65(s，1H)，8.40(s，1H)，8.37-8.30(m，1H)，8.13(s，1H)，8.12-8.04(m，1H)，7.85-7.75(m，2H)，7.70-7.62(m，1H)，6.81-6.60(m，2H)，5.32(t，J＝4.8Hz，1H)，4.70-4.58(m，1H)，4.00-3.92(m，1H)，3.88(s，3H)，3.82(s，3H)，3.73-3.60(m，2H)，3.55-3.42(m，3H)，3.00-2.90(m，1H)，2.10-1.92(m，3H)。
实施例9
4-(6-((1S，4S，5S)-4-羟甲基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈和4-(6-((1S，4R，5S)-4-羟甲基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(化合物9a、9b)
化合物9a和9b以叔丁基(1S，5S)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-羟甲基-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(中间体54)为原料，参照实施例1的方法制备。经制备薄层色谱纯化(二氯甲烷∶甲醇＝30∶1展开)，得到化合物9，其为化合物9a和化合物9b的外消旋体，对化合物9并进行光学拆分，得到一对非对映异构体化合物9a(异构体1)和化合物9b(异构体2)。ESI-MS m/z：557.2[M+H]+。
实施例10
4-(6-((1S，4S，5R)-4-氨基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-2，6--二氮杂双环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈和4-(6-((1S，4R，5R)-4-氨基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(化合物10a、10b)
步骤1：向100mL单口瓶中加入(1S，5R)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-基)氨基甲酸苄酯(中间体43，425mg，0.76mmol)，6-甲氧基-3-吡啶甲醛(313mg，2.28mmol)，三乙酰氧基硼氢化钠(322mg，1.52mmol)和四氢呋喃(30mL)，氮气保护下，室温下搅拌反应2小时。加入饱和碳酸氢钠水溶液，乙酸乙酯萃取，有机层干燥减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析(二氯甲烷∶甲醇＝15∶1洗脱)纯化，得到(1S，5R)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-基)氨基甲酸苄酯(428mg，收率83％)。ESI-MS m/z：681.2[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.25-9.19(m，1H)，8.69-8.62(m，1H)，8.43-8.29(m，2H)，8.16-8.02(m，1H)，7.87-7.67(m，3H)，7.66-7.57(m，1H)，7.45-7.21(m，5H)，6.82-6.55(m，3H)，5.20-4.91(m，3H)，4.47-4.38(m，1H)，3.88(s，3H)，3.83(s，3H)，3.82-3.66(m，2H)，3.65-3.41(m，3H)，3.25-3.11(m，1H)，2.35-2.25(m，1H)，1.37-1.20(m，2H)。
步骤2：向100mL单口瓶中加入(1S，5R)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-基)氨基甲酸苄酯(428mg，0.63mmol)，10％钯碳(106mg)，甲酸铵(3424mg，54.3mmol)和30mL甲醇，30℃反应16小时。反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱层析(二氯甲烷∶甲醇＝10∶1)和制备薄层色谱纯化(二氯甲烷∶甲醇＝30∶1展开)，得到化合物10，其为化合物10a和化合物10b的外消旋体，对化合物10进行光学拆分，得到一对非对映异构体化合物10a(异构体1)和化合物10b(异构体2)。ESI-MS m/z：547.3[M+H]+。
化合物10a和化合物10b的核磁数据如下：
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.60(s，1H)，8.29(s，1H)，8.21(s，1H)，7.99(s，1H)，7.77(s，1H)，7.70(d，J＝9.9Hz，2H)，7.47(d，J＝8.7Hz，1H)，7.42(s，1H)，6.63(t，J＝8.5Hz，2H)，4.36(s，1H)，3.97(s，3H)，3.89(s，3H)，3.81(s，2H)，3.72(d，J＝13.3Hz，1H)，3.56(d，J＝13.4Hz，1H)，3.37(s，1H)，3.27(d，J＝9.8Hz，1H)，2.42(d，J＝9.9Hz，1H)，1.71(s，3H).13CNMR(101MHz，CDCl3)δ163.54，157.67，147.94，146.75，146.12，139.26，138.98，137.99，136.64，130.43，127.53，126.96，126.92，123.61，121.25，120.16，117.87，114.15，110.69，106.91，82.38，65.71，62.87，62.44，55.70，53.36，52.25，46.59，39.33，17.65.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.64(d，J＝1.5Hz，1H)，8.37(d，J＝2.5Hz，1H)，8.25(s，1H)，8.16(d，J＝2.3Hz，1H)，7.92(dd，J＝8.6，2.4Hz，1H)，7.79(s，1H)，7.76(dd，J＝8.7，2.5Hz，2H)，7.70(s，1H)，7.41(d，J＝1.5Hz，1H)，6.70(d，J＝8.5Hz，1H)，6.60(d，J＝8.7Hz，1H)，4.73(s，1H)，3.98(s，3H)，3.88(d，J＝13.3Hz，2H)，3.83(s，3H)，3.80(d，J＝12.7Hz，3H)，3.72(d，J＝8.2Hz，1H)，3.56(d，J＝10.7Hz，1H)，3.42(s，1H)，2.66(d，J＝10.7Hz，1H)，1.72(s，3H).13C NMR(101MHz，CDCl3)δ163.71，156.94，148.26，146.82，146.51，140.00，139.20，138.15，136.70，130.47，127.41，126.98，126.33，123.71，121.20，120.31，117.95，114.20，110.84，105.77，82.55，63.83，62.42，61.68，55.50，53.39，51.11，45.26，39.34，16.34。
实施例11
4-(6-((1S，5R)-4-氨基-2-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(化合物11)
化合物11以(1S，5R)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-基)氨基甲酸苄酯(中间体43)为原料，参照实施例10的方法制备。ESI-MS m/z：565.3[M+H]+。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.67-8.54(m，1H)，8.29(d，J＝8.6Hz，1H)，8.24(s，1H)，8.18(s，1H)，7.95(d，J＝11.3Hz，1H)，7.82(d，J＝12.2Hz，1H)，7.78-7.64(m，2H)，7.38(s，1H)，6.66(dd，J＝69.5，8.8Hz，1H)，3.99(d，J＝4.3Hz，3H)，3.95(d，J＝5.8Hz，3H)，3.87-3.71(m，1H)，3.68-3.54(m，1H)，3.53-3.44(m，1H)，3.42-3.36(m，1H)，3.27(d，J＝10.0Hz，1H)，2.55(dd，J＝49.3，10.4Hz，1H)，1.66(s，3H)。
实施例12
4-(6-((1S，5R)-4-氨基-2-((6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(化合物12)
化合物12以(1S，5R)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-基)氨基甲酸苄酯(中间体43)为原料，参照实施例10的方法制备。ESI-MS m/z：583.2[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.23(s，1H)，8.65(s，1H)，8.40(s，1H)，8.38-8.33(m，1H)，8.28-8.10(m，2H)，8.01-7.75(m，3H)，7.70-7.47(m，1H)，7.09-7.01(m，1H)，6.76-6.65(m，1H)，4.21(s，1H)，3.88(s，3H)，3.85-3.69(m，2H)，3.68-3.56(m，1H)，3.52-3.35(m，1H)，3.29-3.09(m，3H)，2.36-2.21(m，2H)，1.58-1.20(m，3H)。
实施例13
4-(6-((1S，4S，5R)-4-氨基-4-氟甲基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈和4-(6-((1S，4R，5R)-4-氨基-4-氟甲基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(化合物13a、13b)
化合物13a、13b以((1S，5R)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-氟甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-基)氨基甲酸苄酯(中间体50)为原料，参照实施例10的方法制备。化合物经制备薄层色谱纯化(二氯甲烷∶甲醇＝30∶1展开)，得到化合物13，其为化合物13a和化合物13b的外消旋体，对化合物13进行光学拆分，得到一对非对映异构体化合物13a(异构体1)和化合物13b(异构体2)ESI-MS m/z：565.3[M+H]+。
化合物13a和化合物13b的核磁数据如下：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.21(s，1H)，8.64(s，1H)，8.41(s，1H)，8.38-8.31(m，1H)，8.13(s，1H)，8.06-8.01(m，1H)，7.84-7.73(m，2H)，7.62(dd，J＝8.5，2.4Hz，1H)，6.77(d，J＝8.5Hz，1H)，6.70(d，J＝8.8Hz，1H)，5.00-4.73(m，2H)，4.34(s，1H)，3.88(s，3H)，3.81(s，3H)，3.93-3.68(m，1H)，3.64(dd，J＝33.9，12.0Hz，1H)，3.37-3.09(m，5H)，2.33(d，J＝9.7Hz，1H).13C NMR(101MHz，DMSO-d6)δ163.22，157.83，148.40，147.58，146.36，139.74，138.70，138.39，137.11，130.14，129.34，128.12，127.18，123.86，121.78，119.59，117.51，114.93，110.72，106.25，87.20，85.58，81.59，64.74，61.51，56.89，53.49，52.17，46.83.
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.22(s，1H)，8.65(s，1H)，8.40(s，1H)，8.36(s，1H)，8.11(d，J＝11.6Hz，2H)，7.80(d，J＝12.4Hz，2H)，7.70(d，J＝8.5Hz，1H)，6.77(d，J＝8.5Hz，1H)，6.68(d，J＝8.8Hz，1H)，4.62(dd，J＝47.3，6.0Hz，2H)，4.30(s，1H)，3.88(s，3H)，3.82(s，3H)，3.95-3.66(m，2H)，3.49(d，J＝11.4Hz，1H)，3.42-3.22(m，2H)，3.17(d，J＝7.0Hz，2H)，2.38(d，J＝9.6Hz，1H).13C NMR(101MHz，DMSO-d6)δ163.23，148.47，147.57，146.53，139.96，138.72，138.51，137.12，130.03，129.35，128.40，127.29，123.93，121.78，119.92，117.50，114.92，110.69，106.11，86.57，85.00，81.58，63.72，60.98，56.48，53.49，52.13，47.75。
实施例14
4-(6-((1S，4R，5R)-4-羟基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈和4-(6-((1S，4R，5R)-4-羟基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(化合物14a、14b)
将化合物10a、10b混合物(100mg，0.18mmol，为一对非对映异构体)溶于乙酸(4mL)和水(2mL)，冰水浴冷却到0℃，慢慢加入亚硝酸钠(50mg，0.72mmol)溶于2mL水的溶液，反应自然升温至室温搅拌2小时。向反应物中加入饱和碳酸氢钠溶液中和，乙酸乙酯萃取，有机相无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物溶于甲醇(4mL)中，加入1N氢氧化钠(4mL)，在室温下搅拌反应1小时。加入乙酸乙酯和水，分层萃取，有机相水洗、饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物经柱层析纯化(二氯甲烷∶甲醇＝10∶1洗脱)和制备薄层色谱纯化(二氯甲烷∶甲醇＝30：1展开)，得到化合物14，其为化合物14a和化合物14b的外消旋体，对化合物14进行光学拆分，得到一对非对映异构体化合物14a(异构体1)和化合物14b(异构体2)。(ESI-MS m/z：548.2[M+H]+。
化合物14a和化合物14b的核磁数据如下：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.21(d，J＝1.3Hz，1H)，8.64(s，1H)，8.39(d，J＝4.8Hz，1H)，8.31(d，J＝2.1Hz，1H)，8.12(s，1H)，8.04(d，J＝1.8Hz，1H)，7.76(d，J＝1.3Hz，2H)，7.62(dd，J＝8.5，2.3Hz，1H)，6.77(d，J＝8.4Hz，1H)，6.61(d，J＝8.7Hz，1H)，5.18(s，1H)，4.15(s，1H)，3.88(s，3H)，3.86-3.71(m，5H)，3.66-3.48(m，2H)，3.18(t，J＝7.6Hz，1H)，3.03(s，1H)，2.26(d，J＝9.4Hz，1H)，1.57(s，3H).
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.21(s，1H)，8.64(s，1H)，8.36(d，J＝27.5Hz，2H)，8.10(d，J＝15.7Hz，2H)，7.83-7.65(m，3H)，6.75(d，J＝8.5Hz，2H)，5.08(s，1H)，3.84(dd，J＝23.1，9.6Hz，8H)，3.59-3.39(m，2H)，3.25(d，J＝8.2Hz，1H)，2.97(s，1H)，2.61(s，1H)，1.38-1.31(m，3H)。
实施例15
4-(6-((1S，4S，5R)-4-氨基-4-羟甲基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈和4-(6-((1S，4R，5R)-4-氨基-4-羟甲基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(化合物15a、15b)
步骤1：以(9H-芴-9-基)甲基((1S，5R)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-(羟甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-基)氨基甲酸酯(中间体51)为原料，实验过程参照实施例10的步骤1，得到(9H-芴-9-基)甲基((1S，5R)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-(羟甲基)-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-基)氨基甲酸酯。ESI-MS m/z：785.3[M+H]+。
步骤2：将步骤1得到的(9H-芴-9-基)甲基((1S，5R)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-(羟甲基)-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-基)氨基甲酸酯(100mg，0.13mmol)溶于6mL二氯甲烷中，加入哌啶(0.2mL)，室温下搅拌反应5小时，减压浓缩，残留物经制备薄层色谱纯化(二氯甲烷∶甲醇＝30∶1展开)，得到化合物15，其为化合物15a和化合物15b的外消旋体，对化合物15并进行光学拆分，得到一对非对映异构体化合物15a(异构体1)和化合物15b(异构体2)ESI-MS m/z：563.3[M+H]+。
化合物15a和化合物15b的核磁数据如下：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.31-9.18(m，1H)，8.71-8.59(m，1H)，8.42(d，J＝3.8Hz，2H)，8.13(d，J＝2.8Hz，1H)，8.04(d，J＝2.4Hz，1H)，7.91(dd，J＝8.6，2.5Hz，1H)，7.84-7.75(m，1H)，7.63(dd，J＝8.5，2.4Hz，1H)，6.79(dd，J＝8.6，5.6Hz，2H)，5.60(s，1H)，4.67(d，J＝11.0Hz，2H)，4.51-4.35(m，1H)，4.07-3.99(m，1H)，3.89(s，3H)，3.82(s，3H)，3.92-3.75(m，2H)，3.70-3.51(m，3H)，2.33(d，J＝9.8Hz，1H).13C NMR(101MHz，DMSO-d6)δ163.32，157.26，148.33，147.67，146.46，139.82，138.62，137.14，129.84，129.37，127.71，127.43，124.09，121.78，120.86，117.46，114.94，110.79，107.66，81.57，72.98，66.80，63.53，62.38，59.44，53.52，51.59，46.25.
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.21(s，1H)，8.64(s，1H)，8.37(d，J＝20.7Hz，2H)，8.11(d，J＝9.8Hz，2H)，7.79(d，J＝8.5Hz，2H)，7.71(d，J＝8.7Hz，1H)，6.78(d，J＝8.4Hz，1H)，6.65(d，J＝8.6Hz，1H)，4.56(s，1H)，3.89(s，3H)，3.83(s，3H)，3.96-3.75(m，2H)，3.72-3.41(m，3H)，3.40-3.17(m，3H)，3.06(s，1H)，2.34(d，J＝9.3Hz，1H).13C NMR(101MHz，DMSO-d6)δ163.19，157.51，148.47，147.57，146.53，139.98，138.68，138.22，137.11，130.10，129.33，128.44，127.20，123.85，121.77，119.57，117.51，114.95，110.67，81.56，74.27，67.08，63.50，62.15，56.77，53.49，52.06，47.28。
实施例16
4-(6-((1S，5S)-4-氰基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(化合物16)
化合物16以叔丁基(1S，5S)-4-氰基-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(中间体56)为原料，参照实施例1的方法制备。ESI-MS m/z：557.2[M+H]+。
实施例17
4-(6-((1S，5S)-4-氰甲基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(化合物17)
化合物17以叔丁基(1S，5S)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-氰甲基-4-甲基-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(中间体58)为原料，参照实施例1的方法制备。ESI-MS m/z：571.3[M+H]+。
实施例18
4-(6-((1′R，5′S)-4′-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-4′，7′-二氮杂螺环[氮杂环丁烷-2，2′-二环[3.2.0]庚烷]-7′-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲腈(化合物18)
化合物18以苄基(1′R，5′S)-7′-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4′，7′-二氮杂螺环[氮杂环丁烷-2，2′-二环[3.2.0]庚烷]-1-羧酸酯(中间体52)为原料，参照实施例10的方法制备。ESI-MS m/z：559.3[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.24(s，1H)，8.65(s，1H)，8.40(d，J＝2.8Hz，2H)，8.13(s，1H)，8.06(s，1H)，7.86(dd，J＝8.6，1.8Hz，1H)，7.79(s，1H)，7.63(dd，J＝8.5，1.8Hz，1H)，6.77(t，J＝8.6Hz，2H)，4.71(s，1H)，3.89(s，3H)，3.82(s，3H)，3.79-3.53(m，7H)，3.15(d，J＝9.0Hz，1H)，2.71-2.54(m，2H)，2.39(d，J＝9.7Hz，1H)。
实施例19
(1S，5R)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-羟基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-甲酰胺(化合物19)
化合物19以叔丁基(1S，5R)-4-氨甲酰基-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-羟基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸酯(中间体47)为原料，参照实施例1的方法制备。ESI-MS m/z：577.2[M+H]+。
实施例20
6-((2，2-二氟乙基)氨基)-4-(6-((1S，4S，5R)-4-羟基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(化合物20)
向25mL茄形瓶加入6-溴-4-(6-((1S，4S，5R)-4-羟基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(中间体42，37mg，0.07mmol)、2，2-二氟乙胺(113mg，1.4mmol)、三二亚苄基丙酮二钯(6.4mg，0.007mmol)、2-(二环己基膦)-3，6-二甲氧基-2′，4′，6′-三异丙基-1，1′-联苯(BrettPhos，7.5mg，0.014mmol)、碳酸铯(68mg，0.21mmol)和1，4-二氧六环(4mL)，氩气保护下于90℃反应16小时。反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，残留物用制备薄层色谱纯化(二氯甲烷/甲醇＝25∶1展开)得到化合物20，淡黄色固体(15mg，收率40％)。ESI-MS m/z：533.2[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.43(s，1H)，8.34(s，1H)，8.24(s，1H)，8.07(s，1H)，7.70(s，1H)，7.15(s，1H)，6.77(s，1H)，6.62(s，2H)，4.39(m，3H)，4.15-4.03(m，2H)，3.84(s，4H)，3.60(s，1H)，3.47(m，1H)，3.12(s，1H)，2.67(s，1H)。
实施例21
4-(6-((1S，4S，5R)-4-羟基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)-6-((2，2，2-三氟乙基)氨基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(化合物21)
化合物21以6-溴-4-(6-((1S，4S，5R)-4-羟基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(中间体42)和2，2，2-三氟乙胺为原料，参照实施例20的方法制备。ESI-MS m/z：551.2[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.41(s，1H)，8.23(s，2H)，8.07(s，1H)，7.70(s，1H)，7.13(s，1H)，6.82(m，1H)，6.65(s，1H)，6.35(s，1H)，4.80-4.13(m，3H)，3.84(s，5H)，3.71-3.40(m，5H)，3.11(s，1H)。
实施例22
6-((2-氟乙基)氨基)-4-(6-((1S，4S，5R)-4-羟基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(化合物22)
化合物22以(1S，4S，5R)-6-(5-(6-((叔丁氧羰基)(2-氟乙基)氨基)-3-氰基吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-羟基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸叔丁酯(中间体53)为原料，参照实施例1的方法制备。ESI-MS m/z：515.2[M+H]+。
实施例23
4-(6-((1S，4S，5S)-4-氨基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)-6-((2，2-二氟乙基)氨基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(化合物23)
/>
步骤1：向25mL茄形瓶加入4-(6-((1S，4S，5R)-4-叠氮基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)-6-溴吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(中间体48，120mg)、2，2-二氟乙胺(348mg)、三二亚苄基丙酮二钯(19mg)、2-(二环己基膦)-3，6-二甲氧基-2′，4′，6′-三异丙基-1，1′-联苯(BrettPhos，11.5mg)、碳酸铯(210mg)和1，4-二氧六环(8mL)，氩气保护下于90℃反应12小时。反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，残留物用制备薄层色谱纯化(二氯甲烷/甲醇＝10∶1展开)得到4-(6-((1S，4S，5R)-4-叠氮基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)-6-((2，2-二氟乙基)氨基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈，(13mg，收率11％)。ESI-MS m/z：558.2[M+H]+。
步骤2：4-(6-((1S，4S，5R)-4-叠氮基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)-6-((2，2-二氟乙基)氨基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(13mg)溶于THF(5mL)和水(1mL)中，在室温下加入三苯基膦(13mg)，然后在50℃搅拌12小时，减压蒸干溶剂，加入乙酸乙酯和水，分出有机层，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用制备薄层色谱纯化(二氯甲烷/甲醇＝10∶1展开)得到化合物23(5mg)。ESI-MS m/z：532.2[M+H]+。
实施例24
4-(6-((1S，4S，5S)-4-氨基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)-6-((2，2，2-三氟乙基)氨基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(化合物24)
化合物24以4-(6-((1S，4S，5R)-4-叠氮基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)-6-溴吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(中间体48)和2，2，2-三氟乙胺为原料，参照实施例23的方法制备。ESI-MS m/z：550.2[M+H]+。
实施例25
4-(6-((1S，4S，5S)-4-氨基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)-6-((2-氟乙基)氨基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(化合物25)
步骤1：向25mL茄形瓶加入6-溴-4-(6-((1S，4R，5R)-4-羟基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(中间体40，440mg)、三二亚苄基丙酮二钯(75mg)、2-(二环己基膦)-3，6-二甲氧基-2′，4′，6′-三异丙基-1，1′-联苯(44mg)，氨基甲酸叔丁酯(290mg)、碳酸铯(806mg)和1，4-二氧六环(10mL)，反应物在氮气保护下于90℃加热反应12小时。反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝10∶1)得到(3-氰基-4-(6-((1S，4R，5R)-4-羟基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚基-6-基)吡啶-3-基)吡唑[1，5-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯，棕褐色固体(375mg，收率79％)。ESI-MS m/z：569.3[M+H]+。
步骤2：将步骤1得到的产物(3-氰基-4-(6-((1S，4R，5R)-4-羟基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚基-6-基)吡啶-3-基)吡唑[1，5-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯(375mg)溶于N，N-二甲基甲酰胺(10mL)，加入碳酸铯(640mg)和1-氟-2-碘乙烷(137mg)，反应物在80℃加热反应12小时。加入水和乙酸乙酯，分出有机层，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝10：1)得到(3-氰基-4-(6-((1S，4R，5R)-4-羟基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚基-6-基)吡啶-3-基)吡唑[1，5-a]吡啶-6-基)(2-氟乙基)氨基甲酸叔丁酯，为黄色固体(368mg，收率91％)。ESI-MS m/z：615.3[M+H]+。
步骤3：参照实施例3的步骤1的方法，制备得到(3-氰基-4-(6-((1S，4R，5R)-4-甲磺酰氧基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚基-6-基)吡啶-3-基)吡唑[1，5-a]吡啶-6-基)(2-氟乙基)氨基甲酸叔丁酯粗品，直接用于下一步反应。ESI-MS m/z：693.3[M+H]+。
步骤4：参照实施例3的步骤2的方法，制备得到(3-氰基-4-(6-((1S，4R，5R)-4-叠氮基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚基-6-基)吡啶-3-基)吡唑[1，5-a]吡啶-6-基)(2-氟乙基)氨基甲酸叔丁酯。ESI-MS m/z：640.3[M+H]+。
步骤5：参照实施例3的步骤3的方法，制备得到(4-(6-((1S，4R，5R)-4-氨基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚基-6-基)吡啶-3-基)-3-氰基吡唑[1，5-a]吡啶-6-基)(2-氟乙基)氨基甲酸叔丁酯。ESI-MS m/z：614.3[M+H]+。
步骤6：将步骤5得到的(4-(6-((1S，4R，5R)-4-氨基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚基-6-基)吡啶-3-基)-3-氰基吡唑[1，5-a]吡啶-6-基)(2-氟乙基)氨基甲酸叔丁酯(60mg)溶于二氯甲烷(5mL)，加入三氟乙酸(3mL)，室温搅拌2小时。反应物减压浓缩，残留物用制备薄层色谱纯化(二氯甲烷/甲醇＝10∶1展开)，得到化合物25，为淡黄色固体(23mg，收率48％)。ESI-MS m/z：514.2[M+H]+。
实施例26
4-(6-((1S，5R)-4-氨基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(化合物26，制备方法A)
步骤1：将2-(三甲基硅基)乙基((1S，5R)-6-(5-(6-溴-3-氰基吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-基)氨基甲酸酯(中间体61，100mg，0.14mmol)、1-甲基吡唑-3-硼酸频哪醇酯(45mg，0.22mmol)、[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(10mg，0.014mmol)和碳酸钾(42mg，0.3mmol)溶于1，4-二氧六环-水混合溶剂(6mL，体积比4：1)中。氩气保护下，置于80℃油浴反应过夜。反应液冷却到室温，加入二氯甲烷(30mL)，搅拌数分钟后滤除不溶物，滤液再依次用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到2-(三甲基硅基)乙基((1S，5R)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-基)氨基甲酸酯粗品，未作进一步纯化，直接用于下一步反应。ESI-MS m/z：691.3[M+H]+。
步骤2：将步骤1得到的2-(三甲基硅基)乙基((1S，5R)-6-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-基)氨基甲酸酯粗品溶于四氢呋喃(4mL)中，加入1N四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(2mL，2mmol)，在室温下搅拌反应1小时。减压蒸干溶剂，加入乙酸乙酯和水，分层萃取，有机相依此水洗、饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物经制备薄层色谱纯化(二氯甲烷/甲醇＝20∶1展开)，得到化合物26。ESI-MS m/z：547.2[M+H]+。
实施例27
4-(6-((1S，5R)-4-氨基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)-6-(3-氟-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(化合物27，制备方法B)
步骤1：将2-(三甲基硅基)乙基((1S，5R)-6-(5-(3-氰基-6-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-基)氨基甲酸酯(中间体62，150mg，0.20mmol)、4-溴-3-氟-1-甲基-1H-吡唑(54mg，0.30mmol)、[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(15mg，0.02mmol)和碳酸钾(55mg，0.4mmol)溶于1，4-二氧六环-水混合溶剂(8mL，体积比4：1)中。氩气保护下，置于80℃油浴反应过夜。反应液冷却到室温，加入二氯甲烷(50mL)，搅拌数分钟后滤除不溶物，滤液再依次用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到2-(三甲基硅基)乙基((1S，5R)-6-(5-(3-氰基-6-(3-氟-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-基)氨基甲酸酯粗品，未作进一步纯化，直接用于下一步反应。ESI-MS m/z：709.3[M+H]+。
步骤2：将步骤1得到的2-(三甲基硅基)乙基((1S，5R)-6-(5-(3-氰基-6-(3-氟-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-基)氨基甲酸酯粗品溶于四氢呋喃(4mL)中，加入1N四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(2mL，2mmol)，在室温下搅拌反应1小时。减压蒸干溶剂，加入乙酸乙酯和水，分层萃取，有机相依此水洗、饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物经制备薄层色谱纯化(二氯甲烷/甲醇＝20∶1展开)，得到化合物27。ESI-MS m/z：565.3[M+H]+。
以下实施例化合物(表1)参照实施例26由中间体61和相应的硼酸频哪醇酯衍生物为原料制备(制备方法A)，或者参照实施例27由中间体62和相应的芳基溴代物为原料制备(制备方法B)。
表1
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实施例61
4-(6-((1S，5R)-4-氨基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)-6-(3-氰基-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(化合物61)
步骤1：向50mL单口瓶中加入2-(三甲基硅基)乙基((1S，5R)-6-(5-(6-溴-3-氰基吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-基)氨基甲酸酯(中间体61，103mg，0.15mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(13.7mg，0.015mmol)，4，5-双(二苯基膦)-9，9-二甲基氧杂蒽(8.7mg，0.015mmol)，碳酸铯(195mg，0.60mmol)，2-甲基-2-氰基氮杂环丁烷(58mg，0.60mmol)和10mL甲苯，氩气保护下，130℃反应6小时。反应液冷却到室温，通过硅藻土过滤，二氯甲烷淋洗不溶物，滤液减压蒸干，残留物通过硅胶柱层析(二氯甲烷∶甲醇＝15∶1洗脱)纯化，得到2-(三甲基硅基)乙基((1S，5R)-6-(5-(3-氰基-6-(3-氰基-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-基)氨基甲酸酯(35mg，收率33％)。ESI-MS m/z：705.3[M+H]+。
步骤2：向25mL单口瓶中加入2-(三甲基硅基)乙基((1S，5R)-6-(5-(3-氰基-6-(3-氰基-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-基)氨基甲酸酯(35mg，0.05mmol)，5mL三氟乙酸和2mL二氯甲烷，室温搅拌反应4小时。减压蒸干溶剂，残留物通过硅胶柱层析(二氯甲烷∶甲醇＝15∶1洗脱)后再用制备薄层色谱纯化(二氯甲烷∶甲醇＝30∶1展开)，得到化合物61(15mg，收率54％)。ESI-MS m/z：561.3[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.51(s，1H)，8.32(d，J＝2.0Hz，1H)，8.21(d，J＝1.6Hz，1H)，8.03(d，J＝1.6Hz，1H)，7.83-7.75(m，1H)，7.61(dd，J＝8.4Hz，2.4Hz，1H)，7.02(d，J＝2.0Hz，1H)，6.82-6.70(m，2H)，4.26(d，J＝7.6Hz，3H)，3.90(d，J＝8.0Hz，2H)，3.86-3.72(m，5H)，3.66-3.47(m，3H)，3.26-3.17(m，2H)，1.67(s，3H)，1.56(s，3H)。
以下实施例化合物(表2)参照实施例61由中间体61和相应的胺衍生物为原料制备。
表2
实施例67
4-(6-((1S，5R)-4-氨基-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-6-基)吡啶-3-基)-6-(3-羟基-3-甲基-1-丁炔-1-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-甲腈(化合物67)
步骤1：向25mL单口瓶中加入2-(三甲基硅基)乙基((1S，5R)-6-(5-(6-溴-3-氰基吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-基)氨基甲酸酯(中间体61，40mg，0.058mmol)，2-甲基-3-丁炔-2-醇(9.76mg，0.116mmol)，碘化亚铜(1.1mg，0.0058mmol)，二(三苯基膦)二氯化钯(8mg，0.0116mmol)和三乙胺(3mL)，氩气保护下，置于65℃油浴中反应12小时。反应物减压浓缩，得到的2-(三甲基硅基)乙基((1S，5R)-6-(5-(6-(3-羟基-3-甲基-1-丁炔-1-基)-3-氰基吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-基)氨基甲酸酯，粗品直接用于下一步反应。ESI-MS m/z：693.3[M+H]+。
步骤2：将步骤1得到的产物2-(三甲基硅基)乙基((1S，5R)-6-(5-(6-(3-羟基-3-甲基-1-丁炔-1-基)-3-氰基吡唑[1，5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-2，6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-4-基)氨基甲酸酯粗品溶于5mL四氢呋喃中，加入1mol/L四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(1.0mL)，室温反应5小时。反应物加水稀释，乙酸乙酯萃取，有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析(二氯甲烷∶甲醇＝15∶1)后再用制备薄层色谱纯化(二氯甲烷∶甲醇＝30∶1展开)，得到化合物67(20mg，两步收率64％)。ESI-MS m/z：549.2[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.07(s，1H)，8.73(s，1H)，8.31(s，1H)，8.02(s，1H)，7.77(d，J＝8.2Hz，1H)，7.60(d，J＝8.4Hz，1H)，7.39(s，1H)，6.72(dd，J＝32.5，8.6Hz，2H)，5.57(s，1H)，3.82(s，3H)，3.75(d，J＝13.6Hz，2H)，3.58(dd，J＝40.0，11.7Hz，3H)，3.20(dd，J＝17.7，7.8Hz，2H)，2.22(d，J＝9.5Hz，1H)，1.50(s，9H)。
以下实施例化合物(表3)参照实施例67由中间体61和相应的炔基衍生物为原料制备。
表3
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生物测试实施例
测试实施例1：对RET激酶的抑制活性
利用Caliper公司研发的基于微流体芯片技术的迁移率检测技术(CaliperMobility Shift Assay)方法检测化合物对RET激酶(购自Carna Biosciences，Inc.，货号08-159)的抑制效果。
本发明化合物、LOXO-292和BLU-667的测试终浓度为2μM或10μM起始，3倍稀释的10个浓度。使用分液器Echo 550向384孔反应板中转移250nL的100倍终浓度的各化合物，加入10μL激酶溶液(将RET激酶用缓冲液稀释至终浓度为1nM；缓冲液购自桑迪亚医药技术(上海)有限责任公司)，室温预孵育10分钟(阴性对照孔含10μL缓冲液和250nL 100％DMSO；阳性对照孔含10μL的激酶溶液和250nL100％DMSO)。在上述384孔反应板上加入15μL终浓度为16μM的腺苷三磷酸(ATP)和3μM荧光标记底物2号肽(购自吉尔生化(上海)有限公司，货号112394)，该混合溶液起始反应。室温反应60分钟，加入30μL终止检测液(缓冲液中加入乙二胺四乙酸)停止激酶反应。用Caliper公司EZ Reader平台读取转化率，换算抑制率。
抑制率％＝(阳性对照转化率均值％-各化合物转化率均值％)/(阳性对照转化率均值％-阴性对照转化率均值％)。
以浓度的log值作为X轴，抑制率％为Y轴，采用分析软件GraphPad Prism 5的log(inhibitor)vs.response-Variable slope拟合量效曲线，从而得出各个化合物对酶活性的IC50值。结果见表4。
表4
注：LOXO-292参考WO2018071447A1实施例163的方法制备；BLU-667参考WO2017079140A1实施例130的方法制备。
测试结果表明，本发明化合物对RET激酶具有良好的抑制活性。这表明，本发明化合物可以用于治疗/预防由RET激酶介导的疾病。
测试实施例2：对稳转细胞Ba/F3 KIF5B-RET、Ba/F3 KIF5B-RET-G810R增殖抑制活性
用于测定本发明化合物在体外对小鼠原B细胞Ba/F3稳定表达KIF5B-RET融合蛋白的Ba/F3 KIF5B-RET细胞株以及小鼠原B细胞Ba/F3稳定表达KIF5B-RET融合蛋白(RET区域发生G810R点突变)的Ba/F3 KIF5B-RET-G810R细胞株的增殖抑制活性。
细胞来源：Ba/F3 KIF5B-RET细胞购自康源博创生物科技(北京)有限公司，货号KC-1041；Ba/F3 KIF5B-RET-G810R细胞购自康源博创生物科技(北京)有限公司，货号KC-1448。
取处于对数生长期的Ba/F3 KIF5B-RET、Ba/F3 KIF5B-RET细胞接种在96孔板中(135μl/孔)，置于37℃含有5％CO2的恒温培养箱中培养24小时。本发明化合物、LOXO-292和BLU-667已事先溶解在二甲基亚砜(DMSO)中配制成10mM的储存液，当检测时再用完全培养基在另一96孔板中稀释到目的浓度的10倍，然后在接种细胞的96孔板中加入各化合物15μl/孔，即到达目的浓度。每个浓度设3个复孔，并设DMSO空白对照。继续于37℃含有5％CO2的恒温培养箱中培养72小时。从二氧化碳恒温培养箱中取出接种96孔细胞培养板，每孔加入已事先溶解在0.9％生理盐水中配制成5mg/ml并过滤除菌的噻唑蓝(即MTT)储存液20μl，然后于37℃含有5％CO2的恒温培养箱中孵育4小时。每孔加入100μl的三联液(按十二烷基硫酸钠(SDS)10g、异丁醇5ml、36％-38％盐酸0.1ml用纯化水溶解配成100ml配制溶液)，37℃孵育至沉淀完全溶解，在570nm波长处检测光密度值OD并进行数据整理计算抑制率。使用GraphPad Prism 5.0软件分析抑制率数据，利用非线性S曲线回归来拟合得出剂量-效应曲线，并由此计算IC50值，结果见表5。
抑制率％＝[(OD72小时含DMSO培养基对照组-OD72小时化合物组)/(OD72小时含DMSO培养基对照组-OD0小时含DMSO培养基对照组)]×100％。
表5
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注：LOXO-292参考WO2018071447A1实施例163的方法制备；BLU-667参考WO2017079140A1实施例130的方法制备。
测试结果表明本发明化合物对稳转细胞Ba/F3 KIF5B-RET、特别是对于Ba/F3KIF5B-RET-G810R具有良好的增殖抑制活性；相对于BLU-667、LOXO-292，本发明化合物对Ba/F3 KIF5B-RET-G810R具有更好的增殖抑制活性。
产业实用性
本发明化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，以及本发明的药物组合物为对于RET激酶表现出更为优异的抑制活性。因此，本发明化合物对于由RET异常表达介导的疾病具有更优异的治疗效果。

Claims (18)

1.下述式(I)所示的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，
其中：
X1、X2、X3、X4、X5、X6各自独立地选自CR6或N；
R1选自氢、氘、氰基、羧基、卤素原子、-NR7R8、硝基或任选取代的C1-6烷基；
R2选自任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-12元杂芳基、任选取代的3-8元杂环基、任选取代的C1-6烷基、任选取代的C1-6烷氧基、任选取代的C1-6烷硫基、任选取代的C2-6烯基、任选取代的C2-6炔基或-NR7R8；
R3和R4各自独立地选自氢、氘、羟基、氰基、卤素原子、硝基、任选取代的C1-6烷基、任选取代的C1-6烷氧基、任选取代的C1-6烷硫基、任选取代的C2-6烯基、任选取代的C2-6炔基、-NR7R8、-C(O)-NR7R8、任选取代的3-6元环烷基、任选取代的3-8元杂环基、任选取代的C1-6烷基-SOn-、任选取代的C1-6烷基-OC(O)-、任选取代的C1-6烷基-C(O)O-或任选取代的C1-6烷基-C(O)-；或者R3和R4与所相连的原子一起形成任选取代的3-8元杂环基、任选取代的3-6元环烷基或R3和R4一起形成氧代基；n表示1或2；
R5选自氢、氘、羟基、氰基、卤素原子、硝基、任选取代的C1-6烷基、任选取代的C1-6烷氧基、任选取代的C1-6烷硫基、任选取代的C2-6烯基、任选取代的C2-6炔基、任选取代的3-6元环烷基、任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-12元杂芳基或任选取代的3-10元杂环基；
L1选自O、S、-NR7-、-NR7-C(O)-、-C(O)-NR7-或-(CR9R10)m-，m表示0-3的整数；
每个R6独立地选自氢、氘、卤素原子、任选取代的C1-6烷基或任选取代的C1-6烷氧基；
每个R7独立地选自氢、氘或任选取代的C1-6烷基；
每个R8独立地选自氢、氘或任选取代的C1-6烷基；
每个R9独立地选自氢、氘、卤素原子、羟基、氰基、任选取代的C1-6烷基或任选取代的C1-6烷氧基；
每个R10独立地选自氢、氘、卤素原子、羟基、氰基、任选取代的C1-6烷基或任选取代的C1-6烷氧基；
作为上述任选取代的取代基，为选自以下的至少一个基团：氘、卤素原子、羟基、氰基、氨基、硝基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、氘代C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基氨基-、(C1-6烷基)2氨基-、3-8元的杂环基、5-10元杂芳基、C1-6烷基-C(O)-、任选被C1-6烷基取代的3-6元环烷基-C(O)-、任选被C1-6烷基取代的3-8元杂环基-C(O)-、被1-5个独立地选自卤素原子、羟基、氰基、C2-6烯基、C2-6炔基、任选被C1-4烷基取代的3-8元的杂环基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的C1-6烷基、被1-5个独立地选自卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的C1-6烷氧基、被1-5个独立地选自C1-4烷基、卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的3-6元环烷基、被1-5个独立地选自C1-4烷基、卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的3-8元杂环基、被1-5个独立地选自C1-4烷基、卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的苯基、被1-5个独立地选自C1-4烷基、卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的5-10元杂芳基。
2.根据权利要求1所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，其中，R1为氰基、硝基、卤素原子或任选取代的C1-6烷基，优选为氰基。
3.根据权利要求1或2所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，其中，R2为任选取代的5-12元杂芳基、任选取代的3-8元杂环基、任选取代的C1-6烷基、任选取代的C2-6炔基或-NR7R8，R7、R8各自独立地选自氢、任选取代的C1-6烷基；优选R7和R8中的一个为H，另一个为任选取代的C1-4烷基；
作为R2基团中的“任选取代”中的取代基，为选自以下的至少一个基团：C1-6烷基、氰基、羟基、卤素原子、C1-6烷基氨基-、(C1-6烷基)2氨基-、任选被1-5个独立地选自卤素原子、羟基、氰基、C2-6烯基、C2-6炔基、任选被C1-4烷基取代的3-8元的杂环基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的C1-6烷基、任选被1-5个选自卤素原子和羟基中的取代基取代的C1-6烷氧基、C1-6烷基-C(O)-、任选被C1-6烷基取代的3-6元环烷基-C(O)-、任选被C1-6烷基取代的3-8元杂环基-C(O)-、被1-5个选自卤素原子、任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基和羟基中的取代基取代的3-6元环烷基、任选被1-5个独立地选自卤素原子、羟基和C1-4烷基中的取代基取代的3-8元杂环烷基、被1-5个选自C1-4烷基、卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的5-10元杂芳基；优选为选自以下的至少一个基团：C1-4烷基、氰基、羟基、卤素原子、C1-4烷基氨基-、(C1-4烷基)2氨基-、任选被1-3个独立地选自卤素原子、羟基、氰基、C2-4烯基、C2-4炔基、任选被C1-4烷基取代的3-8元的杂环基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的C1-4烷基、任选被1-3个选自卤素原子和羟基中的取代基取代的C1-4烷氧基、C1-4烷基-C(O)-、任选被C1-4烷基取代的3-6元环烷基-C(O)-、任选被C1-4烷基取代的3-8元杂环基-C(O)-、被1-3个选自卤素原子、任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基和羟基中的取代基取代的3-4元环烷基、任选被1-3个独立地选自卤素原子、羟基和C1-4烷基中的取代基取代的3-4元杂环烷基、被1-5个选自C1-4烷基、卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的5-10元杂芳基，
作为R7、R8基团中的“任选取代”中的取代基，为选自以下的至少一个基团：卤素原子、羟基、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、被1-3个选自卤素原子和羟基中的取代基取代的C1-4烷基、被1-3个选自卤素原子和羟基中的取代基取代的C1-4烷氧基。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，其中，R2为下式(2-i)所示的杂芳基，
优选为下式(2-i′)、(2-i″)和(2-i″′)中的至少一种所示的杂芳基，
式(2-i)、式(2-i′)、式(2-i″)和式(2-i″′)中，X21和X23各自独立地选自N、CR21，X22选自O、S、CR21R21、NR21，R21各自独立地选自氢、卤素原子、氰基、任选被1-5个独立地选自卤素原子、羟基、氰基、C2-6烯基、C2-6炔基、任选被C1-4烷基取代的3-8元的杂环基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基-C(O)-、任选被C1-6烷基取代的3-6元环烷基-C(O)-、任选被C1-6烷基取代的3-8元杂环基-C(O)-；R26选自氢、卤素原子或C1-6烷基，
优选的是，式(2-i)所示的杂芳基为任选被R21和/或R26取代的选自以下的基团中的至少一种：噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、噁二唑基、噁唑基、吡唑基、三唑基中的至少一种，例如任选被R21和/或R26取代的选自以下的基团中的至少一种：
或者，
R2为-NR27R28，R27、R28各自独立地选自氢、氘或任选被1-5个独立地选自卤素原子的取代基取代的C1-6烷基，或者，
R2为选自式(2-ii)、(2-iii)和(2-iv)中的至少一种；
优选为选自式(2-ii′)、式(2-ii″)、(2-iii′)和(2-iv′)中的至少一种；
式(2-ii)、式(2-iii)、式(2-iv)、式(2-ii′)、式(2-ii″)、式(2-iii′)和式(2-iv′)中，X24为NR22，X25为N或CR22，R22各自独立地选自氢或C1-6烷基，R26选自氢、卤素原子或C1-6烷基，或者，
R2为式(2-v)所示的基团：
优选为式(2-v′)所示的基团：
式(2-v)、式(2-v′)中，X26为O、S或NR22，R22各自独立地选自氢或C1-6烷基，R23选自氢或C1-6烷基，或者，
R2为式(2-vi)所示的基团：
式中，p表示1-3的整数，优选1或2，q表示0-3的整数，优选1或2，R24各自独立地选自氢、羟基、卤素原子、氰基、任选被1-5个独立地选自卤素原子、羟基、氰基中的取代基取代的C1-6烷基、任选被1-5个独立地选自卤素原子、羟基、氰基中的取代基取代的C1-6烷氧基，或者，
R2为式(2-vii)所示的基团：
式中，R25选自氢、羟基、卤素原子、氰基、任选被1-5个独立地选自卤素原子、羟基、氰基、任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的C1-6烷基、任选被1-5个独立地选自C1-4烷基、卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的3-6元环烷基、任选被1-5个独立地选自C1-4烷基、卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的5-10元杂芳基。
5.根据权利要求4所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，其中，
式(2-i)、式(2-i′)、式(2-i″)和式(2-i″′)所示的杂芳基中，R21各自独立地选自氢、卤素原子、氰基、C1-4烷氧基、C1-4烷基-C(O)-、任选被C1-4烷基取代的任选被C1-4烷基取代的/>任选被1-3个独立地选自卤素原子、羟基、氰基、C2-4烯基、C2-4炔基、/>和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的C1-4烷基，更优选为，R21选自氢、氟原子、氯原子、溴原子、氰基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、甲基-C(O)-、乙基-C(O)-、丙基-C(O)-、/>任选被1-3个独立地选自氟原子、氯原子、羟基、氰基、乙烯基、乙炔基、/>和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的甲基、乙基或丙基，其中，每个R7独立地选自氢或C1-4烷基，
式(2-i)、式(2-i′)、式(2-i″)和式(2-i″′)所示的杂芳基中，R26选自氢或C1-4烷基，
R27、R28各自独立地选自氢、氘或任选被1-3个独立地选自卤素原子的取代基取代的C1-4烷基，优选的是，R27和R28中的一个为氢，另一个为被1-3个独立地选自氟原子、氯原子中的取代基取代的C1-4烷基，
式(2-ii)、式(2-ii′)和式(2-ii″)所示的基团中，X24为NR22，R22各自独立地选自氢或C1-4烷基，
式(2-ii)、式(2-ii′)和式(2-ii″)所示的基团中，X25为CR22或N，R22各自独立地选自氢或C1-4烷基，
式(2-ii)、式(2-iii)、式(2-iv)、式(2-ii′)、式(2-ii″)、(2-iii′)和(2-iv′)所示的基团中，R26选自氢或C1-4烷基，
式(2-v)、式(2-v′)所示的基团中，X26为NR22，R22各自独立地选自氢或C1-4烷基，或者，式(2-v)、式(2-v′)所示的基团中，X26为O或S，
式(2-v)、式(2-v′)所示的基团中，R23选自氢或C1-4烷基，
式(2-vi)所示的基团中，R24各自独立地选自氢、羟基、卤素原子、氰基、任选被1-3个独立地选自卤素原子、羟基、氰基中的取代基取代的C1-4烷基、任选被1-3个独立地选自卤素原子、羟基、氰基中的取代基取代的C1-4烷氧基，
式(2-vii)所示的基团中，R25表示任选被1-3个独立地选自卤素原子、羟基、氰基、任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的C1-4烷基、任选被1-3个独立地选自C1-4烷基、卤素原子和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的3-6元环烷基、任选被1-3个独立地选自C1-4烷基、卤素原子和羟基中的取代基取代的5-10元杂芳基，优选的是，R25表示任选被1-3个独立地选自卤素原子、羟基、氰基、任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的C1-4烷基、任选被1-3个独立地选自C1-4烷基、卤素原子和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的环丙基或环丁基、任选被1-3个独立地选自C1-4烷基、卤素原子和羟基中的取代基取代的5-6元杂芳基，更优选的是，R25表示任选被1-3个独立地选自卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的C1-4烷基、任选被1-3个独立地选自C1-4烷基、卤素原子和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的环丙基或环丁基、任选被1-3个独立地选自C1-4烷基和卤素原子中的取代基取代的吡唑基或咪唑基。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，其中，R3和R4基团中，至少一者是含有O、N中的至少一种的基团，优选的是，R3和R4基团中，至少一者是包含选自任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基、羟基、氰基、任选被选自羟基、氰基中的取代基取代的C1-4烷基、氮杂环丁基、或-C(O)-NR7R8中的至少一个基团的基团，更优选的是，R3和R4基团中，至少一者是选自任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基、羟基、氰基、任选被选自羟基、氰基中的取代基取代的C1-4烷基、氮杂环丁基、或-C(O)-NR7R8中的至少一个基团，R7和R8各自独立地选自氢、C1-6烷基，或者，
R3和R4各自独立地选自氢、羟基、-NR7R8、氰基、-C(O)-NR7R8和任选被选自卤素原子、羟基、氰基、任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的C1-6烷基，其中R3和R4不同，且不同时为氢，R7和R8各自独立地选自氢、C1-4烷基，或者，
R3和R4与其所键合的碳原子一起形成任选取代的3-6元杂环基，优选其与所键合的碳原子一起形成任选取代的3-6元含氮杂环基，优选其与所键合的碳原子一起形成任选取代的氮杂环丁基、任选取代的氮杂环戊基，
作为R3和R4基团中的“任选取代”中的取代基，为以下的基团中的至少一种：羟基、氯原子、氟原子、氰基、任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，其中，R5选自任选取代的3-6元环烷基、任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基或任选取代的3-10元杂环基，优选选自任选取代的含氮5-9元杂芳基、任选取代的C6-10芳基、或任选取代的含氮5-9元杂环基，
作为R5基团中的“任选取代”中的取代基，为选自以下的至少一个基团：任选被1-3个选自卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的C1-6烷基、任选被1-3个选自卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的C1-6烷氧基、卤素原子；优选为任选被1-3个卤素原子取代的C1-4烷氧基或氟原子。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，其中，
R5为下式(5-i)所示的基团，
优选为下式(5-i′)所示的基团，
式(5-i)和式(5-i′)中，R51表示任选被1-3个选自卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的C1-6烷氧基；优选R51表示任选被1-3个卤素原子取代的C1-6烷氧基；R52表示氢或卤素原子，更优选R52表示氢、氟原子或氯原子。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，其中，L1为-NR7-C(O)-或-(CR9R10)m-，m表示0、1或2，优选R9和R10各自独立地选自氢、氘、卤素原子。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，其中，
作为“任选取代”中的取代基，为选自以下的至少一个基团：氟原子、氯原子、羟基、氰基、氨基、硝基、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、氘代C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷基氨基-、(C1-4烷基)2氨基-、3-6元的杂环基、5-6元杂芳基、C1-4烷基-C(O)-、任选被C1-4烷基取代的3-6元环烷基-C(O)-、任选被C1-4烷基取代的3-6元杂环基-C(O)-、被1-3个独立地选自卤素原子、羟基、氰基、C2-4烯基、C2-4炔基、任选被C1-4烷基取代的3-6元的杂环基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的C1-4烷基、被1-3个独立地选自卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的C1-4烷氧基、被1-3个独立地选自C1-4烷基、卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的3-6元环烷基、被1-3个独立地选自C1-4烷基、卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的3-8元杂环基、被1-3个独立地选自C1-4烷基、卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的苯基、被1-3个独立地选自C1-4烷基、卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的5-6元杂芳基，或者，
作为“任选取代”中的取代基，为选自以下的至少一个基团：氟原子、氯原子、羟基、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、3-8元杂环基、C1-6烷基-C(O)-、3-6元环烷基-C(O)-、C1-6烷基取代的3-8元杂环基-C(O)-、被1-3个选自卤素原子、羟基、氰基、C2-6烯基、C2-6炔基、3-8元的杂环基、C1-6烷基取代的3-8元的杂环基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的C1-4烷基、被1-3个选自卤素原子和羟基中的取代基取代的C1-4烷氧基、被1-5个选自C1-4烷基、卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的3-6元环烷基、被1-5个选自C1-4烷基、卤素原子、羟基和任选被1-2个C1-4烷基取代的氨基中的取代基取代的5-10元杂芳基。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，其为下式(II)所示的化合物
其中，各基团的定义如权利要求1-10任一项所述。
12.根据权利要求1-10中任一项所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，其为下式(III)所示的化合物
其中，各基团的定义如权利要求1-10任一项所述。
13.根据权利要求1-10中任一项所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，其为下式(IV)所示的化合物
其中，各基团的定义如权利要求1-10任一项所述。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，其为以下化合物：
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15.药物组合物，其包含权利要求1-14中任一项所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，和任选的药学上可接受的载体。
16.根据权利要求15所述的药物组合物，其进一步包括其他治疗剂，所述治疗剂为用于预防和/或治疗由RET异常表达介导的疾病和肠易激综合征的治疗剂中的至少一种。
17.权利要求1-14中任一项所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，或者权利要求15或16所述的药物组合物在制备用于和/或治疗由RET异常表达介导的疾病和肠易激综合征的药物中的用途。
18.根据权利要求17所述的用途，其中，所述由RET异常表达介导的疾病为癌症，优选所述癌症是血液学癌症或者实体瘤，优选所述血液学癌症选自急性淋巴细胞白血病(ALL)，急性骨髓性白血病(AML)，急性早幼粒细胞白血病(APL)，慢性淋巴细胞白血病(CLL)，慢性粒细胞白血病(CML)，慢性髓单核细胞白血病(CMML)，慢性嗜中性白血病(CNL)，急性未分化型白血病(AUL)，间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)，幼淋巴细胞白血病(PML)，幼年型单核细胞白血病(JMML)，成人T细胞ALL，三联型骨髓发育不良的AML(AML/TMDS)，混合谱系白血病(MLL)，骨髓增生异常综合征(MDS)，骨髓增殖性疾病(MPD)和多发性骨髓瘤(MM)，血液癌症的其它示例包括骨髓增`殖性疾病(MPD)，如真性红细胞增多症(PV)，原发性血小板减少症(ET)和特发性原发性骨髓纤维化(IMF/IPF/PMF)；优选所述实体瘤选自甲状腺癌(例如乳头状甲状腺癌，甲状腺髓样癌)，肺癌(例如肺腺癌，小细胞肺癌)，胰腺癌，胰腺导管癌，乳腺癌，结肠癌，结直肠癌，前列腺癌，肾细胞癌，头颈肿瘤，神经母细胞瘤和黑素瘤。
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