CN117402881A - 一种特异性识别mmp-13的dna适配体及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种特异性识别MMP‑13的DNA适配体及其应用。本发明通过SELEX技术筛选到了一组可以特异性识别MMP‑13的DNA适配体。所述DNA适配体具为SEQ ID NO:1～5。该特异性识别MMP‑13的DNA适配体可用于从复杂体系中捕获MMP‑13，实现对MMP‑13的检测、纯化、体内成像和药物递送等。
Description
技术领域
本发明属于分子生物学技术领域，更具体地说，涉及一种特异性识别MMP-13的DNA适配体及其应用。
背景技术
适配体是单链寡核苷酸（DNA或RNA），可以通过自身折叠形成高级结构与靶标特异性结合。适配体主要通过指数富集的配基系统进化（Systematic Evolution of Ligandsby Exponential Enrichment，SELEX）筛选获得。适配体与抗体原理类似，但适配体的优势是易筛选、可化学合成、修饰简单、成本低、毒性小、保存方便等。与抗体相比，适配体的靶物质也更为广泛，包括金属离子、氨基酸、多肽、蛋白等单一靶标以及完整的病毒颗粒及细胞等复合物靶标。适配体可用作靶向配体，实现靶标检测和纯化、成像和药物的体内递送等，具有广泛的应用前景。
MMP-13（Matrix Metallopeptidase 13）属于基质金属蛋白酶家族，基于其结构特征，可分为分泌型和膜稳定型。该家族蛋白参与如胚胎发育、组织重塑等正常生理过程，还参与疾病过程中的细胞外基质分解。该蛋白的主要功能除了参与骨关节中的II型胶原降解外，还可以降解软骨中其他类型的胶原如IV型、IX型，和软骨基质成分蛋白多糖等。在多种关节炎中，MMPs的表达增加与关节炎的进程有明显的相关性，会随着疾病的进展而表达增高，并不可逆地降解II型胶原，造成关节软骨的破坏和炎症的发生。
目前针对MMP-13的检测主要以抗体为主，价格高昂，尚无基于适配体的检测方法。
发明内容
本发明要解决的技术问题在于，针对目前尚无可以特异性识别MMP-13的DNA适配体的缺陷，提供一组可以特异性识别MMP-13的DNA适配体。
本发明的第一方面提供了一种特异性识别MMP-13的DNA适配体，其包含以下序列中的至少一种：
（1）SEQ ID NO: 1所示序列或其衍生物；
（2）SEQ ID NO: 2所示序列或其衍生物；
（3）SEQ ID NO: 3所示序列或其衍生物；
（4）SEQ ID NO: 4所示序列或其衍生物；
（5）SEQ ID NO: 5所示序列或其衍生物；
其中，SEQ ID NO: 1: GGCTTTCCCGTTGGAAGGGAACCTACAACC
SEQ ID NO: 2: AGGCTCCTTTAGCGGCTTTGCCCGATCCGG
SEQ ID NO: 3: GGGCAATTCTTGATCGGCTGGCTGCGGTCC
SEQ ID NO: 4: AAGCGGTCGCATGGCTTGAACTGGGCCATC
SEQ ID NO: 5: CCCATATCGGCTGGCTACTTTGCAACGGAA。
优选地，所述衍生物包括：SEQ ID NO: 1所示序列的至少一个碱基被修饰获得的衍生物、SEQ ID NO: 2所示序列的至少一个碱基被修饰获得的衍生物、SEQ ID NO: 3所示序列的至少一个碱基被修饰获得的衍生物、SEQ ID NO: 4所示序列的至少一个碱基被修饰获得的衍生物、SEQ ID NO: 5所示序列的至少一个碱基被修饰获得的衍生物、与SEQ IDNO: 1所示序列的同源性在60%以上的序列、与SEQ ID NO: 2所示序列的同源性在60%以上的序列、与SEQ ID NO: 3所示序列的同源性在60%以上的序列、与SEQ ID NO: 4所示序列的同源性在60%以上的序列、与SEQ ID NO: 5所示序列的同源性在60%以上的序列、在严格条件下与SEQ ID NO: 1所示序列进行杂交的序列、在严格条件下与SEQ ID NO: 2所示序列进行杂交的序列、在严格条件下与SEQ ID NO: 3所示序列进行杂交的序列、在严格条件下与SEQ ID NO:4所示序列进行杂交的序列、在严格条件下与SEQ ID NO:5所示序列进行杂交的序列、SEQ ID NO: 1所示序列的骨架衍生出的硫代磷酸酯骨架序列、SEQ ID NO: 2所示序列的骨架衍生出的硫代磷酸酯骨架序列、SEQ ID NO: 3所示序列的骨架衍生出的硫代磷酸酯骨架序列、SEQ ID NO: 4所示序列的骨架衍生出的硫代磷酸酯骨架序列、SEQ ID NO: 5所示序列的骨架衍生出的硫代磷酸酯骨架序列、SEQ ID NO: 1所示序列改造成的肽核酸、SEQ ID NO: 2所示序列改造成的肽核酸、SEQ ID NO: 3所示序列改造成的肽核酸、SEQ IDNO: 4所示序列改造成的肽核酸或SEQ ID NO: 5所示序列改造成的肽核酸；其中所述衍生物均具有特异性识别MMP-13的功能。
优选地，所述至少一个碱基被修饰包括磷酸化、甲基化、氨基化、巯基化或同位素化。优选地，所述功能基团包括荧光基团、放射性基团、治疗性药物、生物素、地高辛、纳米发光材料、核酸物质或酶标记物中的至少一种。
在本发明中，可以采用任何已知方法，采用任何已知基团对SEQ ID NO: 1~5所示序列进行修饰和功能基团连接，只要其不影响所获序列的性能即可，即对SEQ ID NO: 1~5所示序列进行修饰或功能基团连接获得的衍生物并不会丧失其基本功能，即特异性识别MMP-13。例如可以对SEQ ID NO: 1~5所示序列的3’端或5’端进行修饰或者连接功能基团。这些修饰或者功能基团可以用于提高适配体的稳定性、提供检测信号，或者用于连接适配体与其他物质形成组合物。修饰用的功能基团包括但不限于：荧光基团、放射性基团、治疗性药物、生物素、地高辛、纳米发光材料、核酸物质或酶标记物中。
优选地，与SEQ ID NO: 1所示序列的同源性在60%以上的序列可以包括与SEQ IDNO: 1所示序列的同源性为60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％的且能够特异性识别MMP-13的DNA序列。类似地，与SEQ ID NO: 2所示序列的同源性在60%以上的序列可以包括与SEQ ID NO: 2所示序列的同源性为60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％的且能够特异性识别MMP-13的DNA序列。与SEQ ID NO: 3所示序列的同源性在60%以上的序列可以包括与SEQ ID NO: 3所示序列的同源性为60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％的且能够特异性识别MMP-13的DNA序列。与SEQ ID NO: 4所示序列的同源性在60%以上的序列可以包括与SEQ ID NO: 4所示序列的同源性为60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％的且能够特异性识别MMP-13的DNA序列。与SEQ ID NO: 5所示序列的同源性在60%以上的序列可以包括与SEQ ID NO: 5所示序列的同源性为60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％的且能够特异性识别MMP-13的DNA序列。
硫代磷酸酯修饰是最简单和广泛使用的可应用于增加核酸酶抗性的化学修饰，未经修饰的核酸适配体可以显示活性，但他们会被核酸酶迅速降解，因此作用有限。在寡核苷酸的磷酸酯骨架上，硫代磷酸酯键用硫原子取代了非桥键氧原子，使得核苷酸间键抵抗核酸酶的降解从而更稳定。
肽核酸(peptide nucleic acids，PNA)是一类以多肽骨架取代糖磷酸主链的DNA类似物，以中性的肽链酰胺2-氨基乙基甘氨酸键取代了DNA中的戊糖磷酸二酯键骨架，其余的与DNA相同。PNA可以通过Watson-Crick碱基配对的形式识别并结合DNA或RNA序列，形成稳定的双螺旋结构，有很高的杂交稳定性、优良的特异序列识别能力、不被核酸酶和蛋白酶水解，并可以与配基相连共转染进入细胞。
在本发明中，上述硫代磷酸酯骨架序列和肽核酸可以采用SEQ ID NO: 1~5所示序列按照本领域常规方法制得。
在本发明中，前述特异性识别MMP-13的DNA适配体可以特异性识别MMP-13，因此用于MMP-13的检测、纯化、体内成像、药物递送等。
因此，本发明的第二方面涉及前述特异性识别MMP-13的DNA适配体在MMP-13的检测、纯化、体内成像、药物递送中的应用。
本发明的第三方面提供了一种用于检测MMP-13的产品，所述产品含有前述的特异性识别MMP-13的DNA适配体。
有益效果：与现有技术相比，本发明通过SELEX技术筛选到了一组可以特异性识别MMP-13的DNA适配体。相对于抗体，DNA适配体具有成本低、无免疫原性、体内稳定，不易被降解等优点，更适合体内应用。并且该可以特异性识别MMP-13的DNA适配体可用于从复杂体系中捕获MMP-13，实现对MMP-13的检测、纯化、体内成像、药物递送等。
附图说明
下面将结合附图及实施例对本发明作进一步说明，附图中：
图1是本发明实施例1中的SELEX筛选可以特异性识别MMP-13的DNA适配体的流程图；
图2是本发明实施例2中的SELEX富集的可以特异性识别MMP-13的DNA适配体与MMP-13和MMP-9结合的结果图；
图3是本发明实施例2中的MMP-13和MMP-9与SELEX富集的可以特异性识别MMP-13的DNA适配体结合的结果图；
图4是本发明实施例3中筛选获得的可以特异性识别MMP-13和MMP-9的DNA适配体与MMP-13结合的结果图；
图5是本发明实施例3中MMP-13和MMP-9与筛选获得的可以特异性识别MMP-13的DNA适配体结合的结果图；
图6a-6e分别是ApMMP1、ApMMP2、ApMMP3、ApMMP4、ApMMP5的二级结构预测示意图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均从常规生化试剂公司购买得到。
本发明通过SELEX（-Systematic Evolution of Ligands by ExponentialEnrichment-指数富集的配基系统进化）技术筛选到了一组特异性识别MMP-13的DNA适配体（ApMMP1、ApMMP2、ApMMP3、ApMMP4、ApMMP5）。
ApMMP1：GGCTTTCCCGTTGGAAGGGAACCTACAACC
ApMMP2：AGGCTCCTTTAGCGGCTTTGCCCGATCCGG
ApMMP3：GGGCAATTCTTGATCGGCTGGCTGCGGTCC
ApMMP4：AAGCGGTCGCATGGCTTGAACTGGGCCATC
ApMMP5：CCCATATCGGCTGGCTACTTTGCAACGGAA
ApMMP1、ApMMP2、ApMMP3、ApMMP4、ApMMP5可以特异性识别MMP-13。这些适配体可以用于MMP-13的检测、纯化、体内成像、药物递送等。所述产品包括试剂盒或检测芯片等。
为了筛选这些适配体，本发明首先合成一个两端序列已知、中间含有30个碱基的DNA文库。将MMP-13作为靶蛋白，MMP-9作为对照蛋白，采用SELEX技术筛选具有高特异性的DNA适配体。通过结构预测软件mfold预测适配体的二级结构，通过PCR、磁珠富集技术鉴定适配体对靶蛋白的结合。
实施例1：
通过SELEX筛选可以特异性识别MMP-13的DNA适配体。
化学合成初始随机单链DNA文库，序列如下：
tagggaagagaaggacatatgat-N(30)-ttgactagtacatgaccacttga；其中N(30)为30个随机寡核苷酸。
引物P1：5’-TAGGGAAGAGAAGGACATATGAT-3’
引物P2：5’-phosphorylation-TCAAGTGGTCATGTACTAGTCAA-3’
在此，前述文库和引物P1、P2可以由上海生工生物有限公司合成。在阳性筛选中，1nmol文库95度加热5 min再冰浴10 min，加入50 pmol含有6×His标签的MMP-13蛋白，25℃孵育1 h。随后加入50 μl Mag-Beads His-Tag蛋白纯化磁珠，25℃孵育30 min。磁珠用洗涤缓冲液（137 mM NaCl，2.7 mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4，5 mM MgCl2，5 mM咪唑，0.02% tween-20）洗三次，每次1 ml。磁珠中加入50 μl 500 mM咪唑，室温静置1 min，取上清液。在500 μl PCR体系中预扩增6个循环。随后用循环数梯度实验确定扩增最适的循环数，以部分预扩增产物为模板，配4管50 μl PCR体系，分别扩增6、9、12、15个循环。PCR产物进行电泳，挑选最合适的循环数并对筛选产物进行扩增制备双链。扩增产物经过纯化，用Nanodrop定量。每2 μg产物中加入5 μl 10×酶切缓冲液，1 μl lambda外切酶，并用水补足至50 μl，37℃酶切30 min，获得的单链DNA用于阴性筛选。在阴性筛选中，1 nmol上述单链DNA95度加热5 min再冰浴10 min，加入50 pmol含有6×His标签的MMP-9蛋白，再加入50 μlMag-Beads His-Tag蛋白纯化磁珠，25℃孵育30 min，取上清。同样进行上述PCR预扩增，挑选最合适的循环数并对筛选产物进行扩增、纯化、定量并制备单链。重复上述过程10轮，将最后一轮PCR产物进行克隆和测序（见图1）。通过筛选，获得一组MMP-13特异性DNA适配体（ApMMP1、ApMMP2、ApMMP3、ApMMP4、ApMMP5）。通过结构预测软件mfold预测ApMMP1、ApMMP2、ApMMP3、ApMMP4、ApMMP5的二级结构，结果如图6a-6e所示。ApMMP1、ApMMP2、ApMMP3、ApMMP4、ApMMP5分别形成特殊的茎环结构和发卡结构，其吉布斯自由能(ΔG)分别为-4.66、-2.32、-1.10、-3.75、-2.67。
在本发明的进一步的优选实施例中，可以针对获得的MMP-13特异性DNA适配体ApMMP1、ApMMP2、ApMMP3、ApMMP4、ApMMP5，对其至少一个碱基进行磷酸化、甲基化、氨基化、巯基化或同位素化，以获得其衍生物。
在本发明的进一步的优选实施例中，可以针对获得的MMP-13特异性DNA适配体ApMMP1、ApMMP2、ApMMP3、ApMMP4、ApMMP5，在任何其任何位置连接功能基团，例如荧光基团、放射性基团、治疗性药物、生物素、地高辛、纳米发光材料、核酸物质或酶标记物。例如，可以在ApMMP1、ApMMP2、ApMMP3、ApMMP4、ApMMP5的末端修饰不同的化学基团，使之与药物载体连接，制备出不同功能的药物传递系统，例如ApMMP1、ApMMP2、ApMMP3、ApMMP4、ApMMP5可以和聚合物、无机纳米粒子、树枝状分子、脂质体、胶束连接形成不同的药物传递系统。另外，ApMMP1、ApMMP2、ApMMP3、ApMMP4、ApMMP5也可连接多种标记物，应用于样本细胞、组织或生物大分子的检测与鉴定。也可以将标记物标记于ApMMP1、ApMMP2、ApMMP3、ApMMP4、ApMMP5的5′端和/或3′后导入待检测样品，可使用多种手段检测适配体与待测样品的结合情况，例如采用流式细胞仪，共聚焦显微镜检测标记了荧光的核酸适配体，采用免疫化学发光检测方法检测标记了地高辛的适配体，从而适用于多种检测方法和系统。并且，将药物分子嵌入ApMMP1、ApMMP2、ApMMP3、ApMMP4、ApMMP5是一种简单而有效的靶向递药方式，药物也可经化学修饰形成稳定的酯、胺和二硫键结合至适配体上或通过连接子共价结合。
在本发明的进一步的优选实施例中，可以基于获得的MMP-13特异性DNA适配体ApMMP1、ApMMP2、ApMMP3、ApMMP4、ApMMP5，获得与其同源性在60%以上，例如同源性为60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％的且能够特异性识别MMP-13的DNA序列。
在本发明的进一步的优选实施例中，可以基于获得的MMP-13特异性DNA适配体ApMMP1、ApMMP2、ApMMP3、ApMMP4、ApMMP5，获得在严格条件下可以分别与其进行杂交的序列。
在本发明的进一步的优选实施例中，可以针对获得的MMP-13特异性DNA适配体ApMMP1、ApMMP2、ApMMP3、ApMMP4、ApMMP5，获得由其骨架衍生出的硫代磷酸酯骨架序列或改造成的肽核酸。
在此，本领域技术人员可以根据本领域中的任何已知方法，基于前述MMP-13特异性DNA适配体ApMMP1、ApMMP2、ApMMP3、ApMMP4、ApMMP5，获得其衍生物，这些都落入本发明的保护范围。
实施例2：
SELEX富集的DNA序列可以特异性结合MMP-13。
取100 pmol第4、6、8、10轮富集的DNA序列，95度加热5 min再冰浴10 min，分别加入25 pmol 6×His标签的MMP-13和MMP-9蛋白，25℃孵育1 h。随后加入25 μl His-Mag磁珠，25℃孵育30 min。磁珠用洗涤缓冲液（137 mM NaCl，2.7 mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mMKH2PO4，5 mM MgCl2，5 mM咪唑，0 .02% tween-20）洗三次，每次1 ml。磁珠中加入25 μl 500mM咪唑，室温静置1 min，取上清液。使用下述引物进行PCR扩增。扩增产物进行核酸电泳，条带亮度用Quantity One软件进行定量。
引物P1：5’-TAGGGAAGAGAAGGACATATGAT-3’
引物P3：5’-TCAAGTGGTCATGTACTAGTCAA-3’
在此，引物P3、P4可以由上海生工生物有限公司合成。结果显示，筛选过程中富集的DNA序列与MMP-13的结合随筛选轮数的增加而增强，但与MMP-9无明显结合（见图2）。
使用如下引物对第4、6、8、10轮富集的DNA序列进行PCR扩增，扩增产物经过纯化，用Nanodrop定量。每2 μg产物中加入5 μl 10×酶切缓冲液，1 μl lambda外切酶，并用水补足至50 μl，37℃酶切30 min，获得biotin标记的单链DNA。取200 pmol biotin标记的单链DNA，95度加热5 min再冰浴10 min，与50 pmol含有6×His标签的MMP-13和MMP-9蛋白在25℃孵育1 h。使用磁珠对DNA进行磁珠富集实验，电泳检测与DNA结合的MMP-13和MMP-9，条带用Quantity One软件进行定量。
引物P4：5’-biotin-TAGGGAAGAGAAGGACATATGAT-3’
引物P2：5’-phosphorylation-TCAAGTGGTCATGTACTAGTCAA-3’
结果显示，MMP-13与富集的DNA序列的结合随筛选轮数的增加而增强，但MMP-9与富集的DNA序列无明显结合（见图3）。
实施例3：
筛选获得的DNA适配体（ApMMP1、ApMMP2、ApMMP3、ApMMP4、ApMMP5）与MMP-13特异性结合。
取200 pmol ApMMP1、ApMMP2、ApMMP3、ApMMP4、ApMMP5，95度加热5 min再冰浴10min，分别加入50 pmol 6×His标签的MMP-13和MMP-9蛋白，25℃孵育1 h。随后加入50 μl磁珠，25℃孵育30 min。磁珠用洗涤缓冲液（137 mM NaCl，2.7 mM KCl，10 mM Na2HPO4，1.8 mMKH2PO4，5 mM MgCl2，5 mM咪唑，0 .02% tween-20）洗三次，每次1 ml。磁珠中加入25 μl 500mM咪唑，室温静置1 min，取上清。95℃加热10 min进行核酸电泳，条带亮度用Quantity One软件进行定量。
结果显示，ApMMP1、ApMMP2、ApMMP3、ApMMP4、ApMMP5均可以与MMP-13结合，但与MMP-9无明显结合（见图4）。
取200 pmol biotin标记的ApMMP1、ApMMP2、ApMMP3、ApMMP4、ApMMP5，95度加热5min再冰浴10 min，分别加入50 pmol 6×His标签的MMP-13和MMP-9蛋白，25℃孵育1 h。使用磁珠对DNA进行磁珠富集实验，蛋白电泳检测与DNA结合的MMP-13，条带用Quantity One软件进行定量。结果显示，MMP-13可以与ApMMP1、ApMMP2、ApMMP3、ApMMP4、ApMMP5结合，但MMP-9与ApMMP1、ApMMP2、ApMMP3、ApMMP4、ApMMP5无明显结合（见图5）。
因此，ApMMP1、ApMMP2、ApMMP3、ApMMP4、ApMMP5是MMP-13特异性DNA适配体，而对MMP-9没有特异性。
由于ApMMP1、ApMMP2、ApMMP3、ApMMP4、ApMMP5可以特异性识别MMP-13。这些适配体可以用于MMP-13的检测、纯化、体内成像、药物递送等。
例如，ApMMP1、ApMMP2、ApMMP3、ApMMP4、ApMMP5经修饰后可直接使用多种方式检测，例如采用流式细胞仪，共聚焦显微镜检测标记了荧光的ApMMP1、ApMMP2、ApMMP3、ApMMP4、ApMMP5，采用IVIS活体成像系统检测ApMMP1、ApMMP2、ApMMP3、ApMMP4、ApMMP5的体内分布，采用免疫化学发光检测方法检测标记了地高辛的ApMMP1、ApMMP2、ApMMP3、ApMMP4、ApMMP5，因此ApMMP1、ApMMP2、ApMMP3、ApMMP4、ApMMP5适用于多种检测方法和试剂盒， 用于MMP-13的检测、纯化、体内成像。
又例如，可以将药物嵌入ApMMP1、ApMMP2、ApMMP3、ApMMP4、ApMMP5，从而实现药物递送，这种嵌入条件通常是温和的，且不需要对药物或配体进行任何化学修饰，药物和核酸适配体都能保持生物活性，且能达到高的载药量。药物也可经化学修饰形成稳定的酯、胺和二硫键结合至适配体上或通过连接子共价结合。
虽然本发明是通过具体实施例进行说明的，本领域技术人员应当明白，在不脱离本发明范围的情况下，还可以对本发明进行各种变换及等同替代。另外，针对特定情形或材料，可以对本发明做各种修改，而不脱离本发明的范围。因此，本发明不局限于所公开的具体实施例，而应当包括落入本发明权利要求范围内的全部实施方式。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种特异性识别MMP-13的DNA适配体，其特征在于，所述DNA适配体选自以下序列中的一种或多种：
（1）SEQ ID NO: 1所示序列或其衍生物；
（2）SEQ ID NO: 2所示序列或其衍生物；
（3）SEQ ID NO: 3所示序列或其衍生物；
（4）SEQ ID NO: 4所示序列或其衍生物；
（5）SEQ ID NO: 5所示序列或其衍生物。
2.根据权利要求1所述的特异性识别MMP-13的DNA适配体，其特征在于，所述衍生物包括：在（1）～（5）任一序列的基础上进行修饰得到的衍生物、与（1）～（5）任一序列的同源性在60%以上的序列、在严格条件下与（1）～（5）任一序列进行杂交的序列、（1）～（5）任一序列的骨架衍生出的硫代磷酸酯骨架序列和（1）～（5）任一序列改造成的肽核酸。
3.根据权利要求2所述的特异性识别MMP-13的DNA适配体，其特征在于，所述修饰包括：磷酸化、甲基化、氨基化、巯基化或同位素化。
4.根据权利要求2所述的特异性识别MMP-13的DNA适配体，其特征在于，所述在（1）～（5）任一序列的基础上进行修饰得到的衍生物，包括：所述在（1）～（5）任一序列的至少一个碱基被修饰获得的衍生物。
5.根据权利要求1-4中任意一项所述的特异性识别MMP-13的DNA适配体在制备检测和/或纯化MMP-13蛋白的产品中的应用。
6.根据权利要求1-4中任意一项所述的特异性识别MMP-13的DNA适配体在制备MMP-13相关疾病中的体内成像、药物递送的产品中的应用。
7.根据权利要求1-4中任意一项所述的特异性识别MMP-13的DNA适配体在制备识别MMP-13的产品中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述产品包含试纸条、试剂盒。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311206481.7A CN117402881A (zh) | 2023-09-19 | 2023-09-19 | 一种特异性识别mmp-13的dna适配体及其应用 |
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