CN117402809A - 一种三角梅的液体培养基及其应用 - Google Patents
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Abstract
本申请涉及一种三角梅的液体培养基及其应用，属于植物繁殖栽培技术领域。本申请所述液体培养基包括以下组分：Ca(NO3)2·4H2O、H3BO3、MgSO4·7H2O、KNO3和蔗糖，所述液体培养基的pH为6.5‑7.5。本申请通过采用上述各组分制得的液体培养基，适用于三角梅，所述液体培养基提高了三角梅花粉离体萌发率，增加了花粉管长度，收集方便，可以广泛应用于进一步的相关科研试验中。
Description
技术领域
本申请涉及植物繁殖栽培技术领域，尤其涉及一种三角梅的液体培养基及其应用。
背景技术
花粉能够产生雄性配子，是具有独特结构和生物学功能的微小生命有机体，由于其结构简单，易于离体操作，是研究植物细胞生长发育、物质转运、信号传递等生命过程的理想实验体系；同时，花粉萌发和花粉管生长又是完成种子植物有性生殖的重要环节，这一过程是植物生殖生物学研究领域的重点，因此建立合适的离体培养方法非常重要。
三角梅的花被管细长，花丝纤细，花粉量少，且多数品种花粉活力较低，这严重制约了三角梅杂交育种的进程。而常规的无性繁殖方法又不利于三角梅种质资源库的扩大及品种创新，要培育出性状更优良、花色更丰富以及花型更奇特的品种仍然要靠杂交育种手段。因此，为了提高三角梅的花粉萌发率，开发一种更适合三角梅花粉培养的培养基是十分必要的，这对后续花粉育性研究及新品种培育都至关重要。
针对上述三角梅花粉培养过程中存在的问题，寻找一种能够提高三角梅花粉的离体萌发率的液体培养基是目前植物繁殖栽培领域研究的重点。
发明内容
本申请的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种能够提高三角梅花粉的离体萌发率，增加花粉管长度的三角梅的液体培养基及其应用。
为实现上述目的，本申请采取的技术方案为：
第一方面，本申请提供了一种三角梅的液体培养基，所述液体培养基包括以下组分：Ca(NO3)2·4H2O、H3BO3、MgSO4·7H2O、KNO3和蔗糖，所述液体培养基的pH为6.5-7.5。
目前有关三角梅花粉培养的培养方法均为固体培养方法，这种方法导致花粉收集起来比较困难，给后续对于三角梅的细胞学、分子生物学及代谢组学的相关研究带来不便。
针对上述问题，本申请通过采用上述各组分制得的液体培养基，适用于三角梅，所述液体培养基提高了三角梅花粉离体萌发率，增加了花粉管长度，收集方便，可以广泛的应用于进一步的相关科研试验中。
作为本申请所述三角梅的液体培养基的优选实施方式，所述液体培养基中下述组分的重量份为：H3BO3 100-500份、蔗糖100-300份；发明人通过大量实验发现，在本申请中，H3BO3和蔗糖的重量份对最终三角梅花粉的萌发率和花粉管长度具有至关重要的影响，只有在上述重量份范围内，才可以保证最终液体培养基可提高三角梅花粉离体萌发率，增加花粉管长度。
作为本申请所述三角梅的液体培养基的更优选实施方式，所述液体培养基中下述组分的重量份为：H3BO3 100份、蔗糖300份；发明人通过大量实验发现，上述重量份范围内的H3BO3和蔗糖，可以保证最终液体培养基对三角梅花粉离体萌发率最高，花粉管长度增长最多。
作为本申请所述三角梅的液体培养基的优选实施方式，所述液体培养基的pH为7，发明人通过大量实验发现，在本申请中，所述液体培养基的pH对最终三角梅花粉的萌发率和花粉管长度也具有至关重要的影响，上述优选液体培养基的pH条件下，可以保证最终液体培养基对三角梅花粉离体萌发率最高，花粉管长度增长最多。
作为本申请所述三角梅的液体培养基的优选实施方式，所述液体培养基中下述组分的重量份为：Ca(NO3)2·4H2O 300份、MgSO4·7H2O 200份、KNO3 100份。
作为本申请所述三角梅的液体培养基的优选实施方式，所述液体培养还包括溶剂。
作为本申请所述三角梅的液体培养基的更优选实施方式，所述溶剂为双蒸水。
第二方面，本申请提供了上述三角梅的液体培养基在培养三角梅中的应用。
作为本申请所述三角梅的液体培养基在培养三角梅中的应用的优选实施方式，所述三角梅花粉的培养方法为：
将预处理后的三角梅花粉置于所述液体培养基中，震荡混匀，随后在恒温箱中离体培养。
作为本申请所述三角梅的液体培养基在培养三角梅中的应用的更优选实施方式，所述三角梅花粉的预处理为：采集当天盛开的三角梅花朵，用消毒后的镊子划开花被管，取下花药装入1.5ml离心管中备用。
作为本申请所述三角梅的液体培养基在培养三角梅中的应用的更优选实施方式，离体培养的培养条件为：放置在28℃的恒温培养箱中培养12h。
与现有技术相比，本申请的有益效果为：
通过采用上述各组分制得的液体培养基，适用于三角梅，所述液体培养基提高了三角梅花粉离体萌发率，增加了花粉管长度，收集方便，可以广泛的应用于进一步的相关科研试验中。
附图说明
图1为本申请其中一实施例所述三角梅花粉的萌发情况；
图2为本申请其中一实施例所述三角梅花粉的萌发情况；
图3为本申请其中一实施例所述三角梅花粉的萌发情况；
图4为本申请其中一实施例所述三角梅花粉的萌发情况；
图5为本申请其中一实施例所述三角梅花粉的萌发情况；
图6为本申请其中一实施例所述三角梅花粉的萌发情况。
具体实施方式
为更好地说明本申请的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本申请作进一步说明。
实施例、对比例、效果例所用的其他材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1
本实施例所述三角梅的液体培养基的配方如表1所示，所述液体培养基的溶剂为1L双蒸水；本实施例三角梅花粉的培养方法为：
收集三角梅花粉，用消毒后的镊子撕开花被管，取下花药装入1.5ml离心管中，待其花粉自然爆开；将收集的三角梅花粉置于所述液体培养基中震荡混匀，吸取含有花粉的悬浮液置于载玻片凹槽内，将载玻片放置在装有湿纸巾的一次性灭菌塑料培养皿中培养；培养时，往装有花粉的离心管中加入250μl培养液，置于漩涡震荡器上震荡混匀，用移液枪吸取60μl悬浮液置于载玻片凹槽内，将载玻片放置在装有湿纸巾的一次性灭菌塑料培养皿中，盖上培养皿的盖子，将培养基放置在28℃恒温箱中离体培养；培养温度为28℃；培养时间为12h。
实施例2-25
本发明实施例2-25与实施例1的区别仅在于，所述三角梅的液体培养基的配方不同，具体见表1；
实施例2-25所述液体培养基的溶剂为1L双蒸水；实施例2-25所述三角梅花粉的培养方法为：
收集三角梅花粉，用消毒后的镊子撕开花被管，取下花药装入1.5ml离心管中，待其花粉自然爆开；将收集的三角梅花粉置于所述液体培养基中震荡混匀，吸取含有花粉的悬浮液置于载玻片凹槽内，将载玻片放置在装有湿纸巾的一次性灭菌塑料培养皿中培养；培养时，往装有花粉的离心管中加入250μl培养液，置于漩涡震荡器上震荡混匀，用移液枪吸取60μl悬浮液置于载玻片凹槽内，将载玻片放置在装有湿纸巾的一次性灭菌塑料培养皿中，盖上培养皿的盖子，将培养基放置在28℃恒温箱中离体培养；培养温度为28℃；培养时间为12h。
表1
效果例
将实施例培养得到的三角梅花粉进行萌发率和花粉管长度的测试，结果如下表2所示；实施例1所述三角梅花粉的萌发情况见图1，实施例17所述三角梅花粉的萌发情况见图2，实施例13所述三角梅花粉的萌发情况见图3，实施例10所述三角梅花粉的萌发情况见图4，实施例2所述三角梅花粉的萌发情况见图5，实施例24所述三角梅花粉的萌发情况见图6。
萌发率的计算公式如下：
花粉萌发率＝萌发花粉数/培养基中花粉粒总数×100％
表2
根据表2的结果可知，本发明实施例所述液体培养基的配方均可使三角梅花粉的萌发率有所提高，也可使其花粉管长度增长，其中，实施例1所述1L的液体液体培养基中含有300mg的蔗糖、100mg的硼酸，300mg Ca(NO3)2·4H2O、200mg MgSO4·7H2O、100mg KNO3，PH＝7，对花粉萌发率及花粉管长度的提升效果最好。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本申请的技术方案而非对本申请保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本申请作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本申请的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本申请技术方案的实质和范围。
Claims (9)
1.一种三角梅的液体培养基，其特征在于，所述液体培养基包括以下组分：Ca(NO3)2·4H2O、H3BO3、MgSO4·7H2O、KNO3和蔗糖；所述液体培养基的pH为6.5-7.5。
2.根据权利要求1所述的三角梅的液体培养基，其特征在于，所述液体培养基中下述组分的重量份为：H3BO3 100-500份，蔗糖100-300份。
3.根据权利要求1所述的三角梅的液体培养基，其特征在于，所述液体培养基中下述组分的重量份为：H3BO3 100份，蔗糖300份。
4.根据权利要求1所述的三角梅的液体培养基，其特征在于，所述液体培养基的pH为7。
5.根据权利要求1-4任一项所述的三角梅的液体培养基，其特征在于，所述液体培养基中下述组分的重量份为：Ca(NO3)2·4H2O 300份、MgSO4·7H2O 200份、KNO3100份。
6.权利要求1-5任一项所述三角梅的液体培养基在培养三角梅中的应用。
7.根据权利要求6所述的三角梅的液体培养基在培养三角梅中的应用，其特征在于，所述三角梅花粉的培养方法为：
将预处理后的三角梅花粉置于所述液体培养基中，震荡混匀，随后在恒温箱中离体培养。
8.根据权利要求7所述的三角梅的液体培养基在培养三角梅中的应用，其特征在于，所述三角梅花粉的预处理具体为：采集当天盛开的三角梅花朵，用消毒后的镊子划开花被管，取下花药装入1.5ml离心管中备用。
9.根据权利要求7所述的三角梅的液体培养基在培养三角梅中的应用，其特征在于，所述离体培养的培养条件为：放置在28℃的恒温培养箱中培养12h。
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