CN117379602B - 镍钛合金表面壳聚糖-丹酚酸b涂层及其制备方法与应用 - Google Patents

镍钛合金表面壳聚糖-丹酚酸b涂层及其制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种镍钛合金表面壳聚糖‑丹酚酸B涂层及其制备方法与应用。本发明的涂层是以聚多巴胺为基底，将包裹有丹酚酸B的壳聚糖微球粘附在镍钛合金表面，本发明的涂层为药物释放涂层。本发明还提供了上述涂层的制备方法，同时本发明的涂层可以应用于血管内植入器械的涂层。本发明的镍钛合金表面壳聚糖‑丹酚酸B涂层不仅可以在支架覆盖部位促进内皮细胞的再生和增殖，维持良好的内皮功能，还能同时抑制平滑肌细胞的过度增殖，降低再狭窄和血栓形成的风险，因此可以实现内皮化的促进和平滑肌细胞增殖的抑制的作用。本发明的涂层具有良好的生物相容性和多功能性，在脑血管疾病治疗中可以发挥重要作用。

Description

镍钛合金表面壳聚糖-丹酚酸B涂层及其制备方法与应用
技术领域
本发明属于生物医用材料技术领域，具体地是涉及镍钛合金表面壳聚糖-丹酚酸B涂层及其制备方法与应用。
背景技术
脑血管疾病位居全球死亡率和发病率的第二位，仅次于缺血性心脏病。在脑血管疾病的治疗中，颅内支架发挥着重要作用。随着时间的推移，支架技术已从最初的裸金属支架发展到更先进的药物洗脱支架及生物可吸收支架。然而，当前的方法仍然存在一些显著限制。尽管药物洗脱支架能减少支架内再狭窄的问题，但其使用也伴随着不良反应，特别是血管壁的内皮化延迟。延迟的内皮化可能成为晚期血栓形成和再狭窄的潜在诱因。支架植入后的动脉愈合在预防支架相关并发症方面至关重要，而内皮细胞的修复在支架植入后的愈合过程中起着关键作用。因此，支架涂层的设计焦点亟需从单一目标转向如何解决延迟的内皮化、血栓形成、再狭窄等多重问题的目标。
因此，支架涂层如何具备高度的生物相容性、多功能性是亟待解决的问题。
发明内容
本发明就是针对上述问题，弥补现有技术的不足，提供一种镍钛合金表面壳聚糖-丹酚酸B涂层的制备方法，所述制备方法的具体步骤如下：
①使用Tris-HCl缓冲液稀释盐酸多巴胺，制备得到2g/L-4g/L的聚多巴胺溶液；
②将镍钛合金浸泡在上述聚多巴胺溶液中，振荡24小时得镍钛合金样品，用去离子水冲洗镍钛合金样品，风干24小时，得覆有聚多巴胺的镍钛合金样品；
③将壳聚糖溶解于醋酸溶液中，在室温下，搅拌溶液直至壳聚糖完全溶解，得浓度为2.5g/L的壳聚糖溶液；
④将丹酚酸B固体加入上述壳聚糖溶液中，搅拌至丹酚酸B固体溶解，得丹酚酸B质量浓度为2g/L的混合溶液；
⑤在转速为4000转/分钟的搅拌下，缓慢地向步骤④制得的混合溶液中注入三聚磷酸钠溶液，并在室温下继续搅拌30分钟，得壳聚糖-丹酚酸B纳米粒子溶液，壳聚糖-丹酚酸B纳米粒子溶液中三聚磷酸钠的浓度为0.2g/L-1g/L；
⑥将壳聚糖-丹酚酸B纳米粒子溶液通过透析膜进行过滤，得第一溶液；
⑦将步骤②所得的覆有聚多巴胺的镍钛合金样品在4℃的条件下浸泡在第一溶液中，静置48小时后，经过后处理后，得到镍钛合金表面壳聚糖-丹酚酸B涂层。
优选地，所述Tris-HCl缓冲液的浓度为10mM，pH值为8.5。
优选地，所述醋酸溶液的pH值为4.5。
优选地，所述透析膜的孔径为0.22um。
优选地，所述用去离子水冲洗镍钛合金样品为用去离子水冲洗至镍钛合金样品表面无残留物。
优选地，所述后处理为使用PBS缓冲溶液清洗至表面无残留物，然后晾干的过程。
本发明的另一目的是提供一种如上述的制备方法制得的镍钛合金表面壳聚糖-丹酚酸B涂层，所述涂层以聚多巴胺为基底，将包裹有丹酚酸B的壳聚糖微球以均匀分布的方式粘附在镍钛合金表面，从而形成的药物释放涂层。
由壳聚糖包裹的丹酚酸B微球以均匀分布的方式附着在镍钛合金表面，丹酚酸B被封装在壳聚糖微球内部，实现药物的持续释放。
本发明中壳聚糖起到一个包裹药物缓释的作用，丹酚酸B为所释放出的药物。
本发明的又一目的是提供一种血管内植入器械，所述血管内植入器械包括器械涂层，所述器械涂层是上述的制备方法制得的镍钛合金表面壳聚糖-丹酚酸B涂层。
血管内植入器械可以是颅内支架、弹簧圈、血流导向装置、瘤内扰流装置中的一种。
本发明有益效果：
本发明方法制得的镍钛合金表面壳聚糖-丹酚酸B涂层可以同时实现内皮化的促进和平滑肌细胞增殖的抑制。
1、本发明中的镍钛合金表面壳聚糖-丹酚酸B涂层在28天内可以在支架表面持续释放丹酚酸B，延长药物的释放时间，为血管再内皮化提供持续的刺激。
2、丹酚酸B具有促进内皮细胞增殖、粘附和迁移的作用，本发明通过复合药物涂层中丹酚酸B的持续释放，可以促进支架覆盖部位内皮细胞的再生和增殖，有利于形成完整的内皮层，减少血管壁的损伤和炎症反应。
3、平滑肌细胞的过度增殖是导致血管再狭窄的主要原因之一，本发明通过复合涂层中丹酚酸B对平滑肌细胞的抑制作用，减少平滑肌细胞的增生和迁移，从而降低再狭窄的风险。
本发明的镍钛合金表面壳聚糖-丹酚酸B涂层与传统的药物洗脱支架相比，不仅可以在支架覆盖部位促进内皮细胞的再生和增殖，维持良好的内皮功能，还能同时抑制平滑肌细胞的过度增殖，降低再狭窄和血栓形成的风险，可以同时实现内皮化的促进和平滑肌细胞增殖的抑制。
附图说明
镍钛合金表面壳聚糖-丹酚酸B涂层组实验，图中简称为壳聚糖-丹酚酸B涂层组，以下简称涂层组；未涂层镍钛合金平片组实验，以下简称未涂层组。
图1为涂层组电镜扫描图；
图2为未涂层组电镜扫描图；
图3为丹酚酸B的释放标准曲线；
图4为涂层组药物释放曲线；
图5为未涂层组的表面水接触角图片；
图6为涂层组的表面水接触角图片；
图7为未涂层组和涂层组的表面水接触角测量结果；
图8为未涂层组和涂层组的表面PT与APTT测量结果；
图9为未涂层组和涂层组的表面蛋白质吸附量的测量结果；
图10为未涂层组和涂层组对HUVECs增殖能力的影响结果图；
图11为未涂层组和涂层组对SMCs增殖能力的影响结果图；
图12为未涂层组和涂层组对HUVECs和SMCs细胞迁移能力的影响图；
图13为未涂层组和涂层组对HUVECs细胞迁移数量比较图；
图14为未涂层组和涂层组的对SMCs细胞迁移数量比较图；
图15为未涂层组和涂层组的Transwell实验中样品对HUVECs和SMCs细胞迁移能力的影响；
图16为未涂层组和涂层组的HUVECs迁移到下室的细胞数量；
图17为未涂层组和涂层组的SMCs迁移到下室的细胞数量；
图18为未涂层组和涂层组的表面粘附的HUVECs和SMCs的荧光照片；
图19为未涂层组和涂层组的表面粘附的HUVECs的细胞数量条形图；
图20为未涂层组和涂层组的表面粘附的SMCs的细胞数量条形图；
图21为未涂层组和涂层组的表面粘附的HUVECs与SMCs的细胞形态图。
具体实施方式
为了使本发明所解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合具体的实施方式，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施方式仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1
①使用浓度为10mM，pH值为8.5的Tris-HCl缓冲液稀释盐酸多巴胺，制备得到2g/L的聚多巴胺溶液；
②将镍钛合金浸泡在上述聚多巴胺溶液中，振荡24小时得镍钛合金样品，用去离子水冲洗镍钛合金样品，风干24小时，得覆有聚多巴胺的镍钛合金样品；
③将壳聚糖溶解于pH值为4.5的醋酸溶液中，在室温下，搅拌溶液直至壳聚糖完全溶解，得浓度为2.5g/L的壳聚糖溶液；
④将丹酚酸B固体加入上述壳聚糖溶液中，搅拌至丹酚酸B固体溶解，得丹酚酸B质量浓度为2g/L的混合溶液；
⑤在转速为4000转/分钟的搅拌下，缓慢地向步骤④制得的混合溶液中注入2g/L的三聚磷酸钠溶液，并在室温下继续搅拌30分钟，得壳聚糖-丹酚酸B纳米粒子溶液，壳聚糖-丹酚酸B纳米粒子溶液中三聚磷酸钠的浓度为0.2g/L；
⑥将壳聚糖-丹酚酸B纳米粒子溶液通过透析膜进行过滤，透析膜的孔径为0.22um，得第一溶液；
⑦将步骤②所得的覆有聚多巴胺的镍钛合金样品在4℃的条件下浸泡在第一溶液中，静置48小时后，使用PBS缓冲溶液清洗至表面无残留物，然后晾干，得到镍钛合金表面壳聚糖-丹酚酸B涂层。
制得的镍钛合金表面壳聚糖-丹酚酸B涂层可以作为颅内支架、弹簧圈、血流导向装置、瘤内扰流装置的涂层。
实施例2
①使用浓度为10mM，pH值为8.5的Tris-HCl缓冲液稀释盐酸多巴胺，制备得到4g/L的聚多巴胺溶液；
②将镍钛合金浸泡在上述聚多巴胺溶液中，振荡24小时得镍钛合金样品，用去离子水冲洗镍钛合金样品，风干24小时，得覆有聚多巴胺的镍钛合金样品；
③将壳聚糖溶解于pH值为4.5的醋酸溶液中，在室温下，搅拌溶液直至壳聚糖完全溶解，得浓度为2.5g/L的壳聚糖溶液；
④将丹酚酸B固体加入上述壳聚糖溶液中，搅拌至丹酚酸B固体溶解，得丹酚酸B质量浓度为2g/L的混合溶液；
⑤在转速为4000转/分钟的搅拌下，缓慢地向步骤④制得的混合溶液中注入2g/L的三聚磷酸钠溶液，并在室温下继续搅拌30分钟，得壳聚糖-丹酚酸B纳米粒子溶液，其中壳聚糖-丹酚酸B纳米粒子溶液中三聚磷酸钠的浓度为1g/L；
⑥将壳聚糖-丹酚酸B纳米粒子溶液通过透析膜进行过滤，透析膜的孔径为0.22um，得第一溶液；
⑦将步骤②所得的覆有聚多巴胺的镍钛合金样品在4℃的条件下浸泡在第一溶液中，静置48小时后，使用PBS缓冲溶液清洗至表面无残留物，然后晾干，得到镍钛合金表面壳聚糖-丹酚酸B涂层。
制得的镍钛合金表面壳聚糖-丹酚酸B涂层可以作为颅内支架、弹簧圈、血流导向装置、瘤内扰流装置的涂层。
实验例
实施例1和实施例2制得的镍钛合金表面壳聚糖-丹酚酸B涂层的表征及性能基本一致，因此，以实施例1制得的镍钛合金表面壳聚糖-丹酚酸B涂层进行如下检测。为了说明实验结果将未涂层镍钛合金平片组，即未涂层组设置为对比组。
1、表面形貌分析：通过扫描电子显微镜500倍放大对涂层组及未涂层组的样品的表面形貌进行了详细观察。
如图1所示，壳聚糖-丹酚酸B纳米微球以均匀分布的方式附着在镍钛合金表面上，壳聚糖-丹酚酸B呈现出球形结构，同时还展现出均匀的粒径大小分布。相反的，如图2所示，镍钛合金平片的表面相对光滑，仅有微小的抛光痕迹可辨。
2、药物释放控制实验：采取以下步骤来评估涂层组的药物释放行为。
首先，将装有3毫升PBS溶液的试管中浸入含有涂层组样品的平片。在37℃和60转/分的条件下进行持续振荡。在预定的时间间隔内，从试管中取出1毫升溶液，并添加等体积的PBS溶液以维持总体积稳定。收集的样品时间点包括：6小时、12小时、18小时、24小时和36小时，以及2天、4天、7天、14天和28天。经超声处理后，将从试管中收集的溶液进行过滤，然后使用酶标仪在280纳米处测量吸光度。在建立了丹酚酸B的释放标准曲线后，根据吸光度值计算了药物的释放量。体外实验表明，涂层组的复合微球在28天内可以持续释放药物，从而延长了药物的释放时间。
结果方面，使用GraphPadPrism软件对丹酚酸B浓度进行了线性拟合，生成了如图3所示的标准曲线。通过将吸光度值与标准曲线进行比较，确定了在特定时间点从样品表面释放出的丹酚酸B的数量。体外药物释放行为的结果显示，药物载体微球呈现出持续释放药物的特性。图4呈现了涂层组的药物释放曲线，药物在最初的2天内迅速释放，随后随着释放时间的增加，药物的释放速率显著减缓。在28天内，累积释放了80％以上的丹酚酸B。
3、生物相容性评估实验：
①通过水接触角实验评估涂层表面的亲水性。
使用水接触角测量仪器对镍钛合金基底表面的水接触角进行了测量。将样品固定在台上，滴入一滴蒸馏水，并在2秒后拍照并测量水接触角。接触角越小，证明亲水性越好。
图5为未涂层组的表面水接触角图片，图6为涂层组的表面水接触角图片；
通过Image J软件对接触角图片测量得到图7的数据，从图7中可以看出未涂层组水接触角值为(90.57±1.32)°，涂层组的水接触角值为(51.33±0.83)°。与未涂层组相比，涂层组显示出明显增强的亲水性。
②通过凝血时间评价涂层对血液凝血的影响。
使用凝血分析仪检测活化部分凝血活酶时间(APTT)和凝血酶原时间(PT)。在PBS溶液中浸泡样品1小时后，加入500μl贫血小板血浆，37℃下孵育30分钟，然后进行APTT和PT测试。
结果如图8所示。涂层组的活化部分凝血活酶时间(APTT)较未涂层组明显延长，而凝血酶原时间(PT)无显著差异。这说明涂层组对材料进行表面负载可以提高生物相容性并降低凝血活性，从而潜在地降低血栓形成的风险。
③通过蛋白吸附实验检测涂层表面是否容易吸附蛋白质，以评估其与血液的相互作用。
将样品浸入1毫升含BSA(1毫克/毫升)的PBS溶液中，在37℃下培养1小时。通过比较浸泡前后BSA溶液浓度的差异来计算吸附的蛋白质量。结果如图9所示，未涂层组的蛋白质吸附量为(890.92±3.94)ug/cm2，而涂层组的蛋白质吸附量为(775.82±4.47)ug/cm2。涂层组显示出显著较低的蛋白质吸附，表明其具有更好的血液相容性。
4、细胞实验：
采用细胞实验证明本发明涂层的效果。通过体外细胞培养，将人脐静脉内皮细胞(简称HUVECs)和平滑肌细胞(简称SMCs)暴露于涂层表面，评估涂层对细胞的影响。HUVECs是内皮细胞中的一种，实验中用的是这种细胞来代表内皮细胞。
①HUVECs和SMCs增殖实验：
进行细胞培养时，HUVECs和SMCs分别在含有10％FBS的DMEM培养基中培养。培养在37℃的环境中，并置于浓度为5％的CO2的培养箱中。待测试样品被放置于24孔培养板中。每个孔中加入1毫升含有2×103个细胞的HUVECs或SMCs悬浮液。在培养期内，分别在1天、3天和5天后，去除培养基，加入含有100μL细胞计数试剂盒(CCK-8)的DMEM中，并在37℃下孵育2小时。随后使用酶标仪在波长为450纳米的条件下测量吸光度(简称OD)，以评估各组的细胞数。
结果：见图10和图11。由此可以得出，在培养期为5天的情况下，所有样品表现出细胞的持续增殖。在培养1天后，涂层组和未涂层组的HUVECs或SMCs的增殖并未呈现出显著差异。然而，当培养时间达到第3天和第5天时，涂层组内的HUVECs显示出明显高于未涂层组的细胞增殖率。在培养时间为5天时，涂层组对SMCs的增殖抑制效果明显高于未涂层组。
②HUVECs和SMCs的迁移实验：
划痕实验：在划痕实验中，首先将经过环氧乙烷灭菌的各组样品浸泡在2毫升无血清DMEM培养基中，培养72小时，以获取相应的浸提液。然后，将密度为5×105cells/mL的HUVECs或SMCs接种到6孔板中，使用10％FBS的DMEM培养基培养直至形成单层细胞。接下来，使用200μL移液管吸头轻轻刮擦细胞层表面，形成一个无细胞的划痕区域。然后，用含有各组样本浸提液的无血清DMEM代替之前的10％FBS的DMEM。将培养板置于37℃、5％CO2的培养箱中，培养24小时。在相应的时间点，使用光学显微镜观察划痕区域中细胞的迁移情况。使用Image J软件对两组划痕进行分析，以评估细胞迁移的程度。
结果：如图12、图13、图14所示，经过24小时培养，涂层组的HUVECs明显显示出更高的迁移细胞数量，相比之下未涂层组则显示较少的细胞迁移。此外，在培养24小时后，涂层组对SMCs的迁移抑制效果明显高于未涂层组。
③Transwell实验：
在Transwell实验中，使用Transwell小室来评估两组样品对HUVECs和SMCs迁移的影响。
首先，将经过环氧乙烷灭菌的样品放入Transwell小室的下室。然后，在Transwell小室的上室中加入含有HUVECs或SMCs(200μL，1.0×105cells/mL)的无血清DMEM培养液。用棉签轻轻擦去细胞，用PBS冲洗，然后将小室置于37℃、5％的CO2的培养箱中培养24小时。在培养结束后，将培养液倒掉，使用浓度为4％的多聚甲醛固定细胞。随后，用PBS冲洗细胞，并使用0.1％的水晶紫溶液对细胞进行染色。在显微镜下观察细胞的情况，并拍照记录。最后，使用Image J软件对细胞迁移到Transwell小室下室的数量进行计数和分析。
结果：实验结果如图15、图16所示，从图中可以看出Transwell实验中样品对HUVECs和SMCs迁移能力的影响。在24小时的培养后，涂层组中迁移到下室的HUVECs数量明显高于未涂层组，这表明涂层可能促进了细胞的迁移。另一方面，图17显示，涂层组明显抑制了SMCs从上室到下室的迁移，与未涂层组相比，迁移细胞数量较少。
④HUVECs和SMCs的粘附实验：
通过HUVECs和SMCs的粘附实验，来评估涂层对细胞粘附的影响。
首先，将样品放入含有1mL的HUVECs(1×104个细胞/mL)或SMCs悬浮液(2×104个细胞/mL)的24孔培养板中。将培养板放置在37℃、5％的CO2的培养箱中培养。在培养3天后，将培养基倒掉，用PBS冲洗样品，然后使用浓度为4％的多聚甲醛固定细胞30分钟。接下来，将每个孔中加入含有DAPI染色剂的抗荧光淬灭封片液，在黑暗中培养5分钟。使用荧光显微镜观察细胞的分布情况，并进行拍照记录。随后，使用Image J软件对细胞的粘附数量进行分析。
结果：实验结果通过DAPI染色观察细胞的分布情况，如图18所示，图中展示了样品表面粘附的HUVECs和SMCs的荧光照片。图19展示了样品表面粘附的HUVECs的细胞数量，如图19显示，在培养3天后，涂层组显示出显著增加的粘附HUVECs数量。另一方面，图20显示，在相同时间内，涂层组的SMCs粘附数量显著减少，与未涂层组相比，其粘附能力明显下降。
⑤细胞形态观察和荧光显微镜分析：
在培养3天后，按以下步骤进行细胞形态的观察和荧光显微镜的分析。将培养基从孔板中吸出，然后用PBS缓冲液轻轻冲洗样品，以去除残留的培养基。使用浓度为4％的多聚甲醛溶液对两组样本进行固定，将多聚甲醛溶液加入样品中，固定细胞30分钟。在4℃条件下，使用浓度为0.2％的Triton X-100溶液处理细胞15分钟，以使细胞透明，增强荧光染色效果。用PBS缓冲液轻轻冲洗细胞，以去除残留的Triton X-100溶液。使用含浓度为1％的BSA的PBS溶液在37℃下培养样品1小时，以阻止非特异性的蛋白质结合。在室温下，使用含有1％荧光标记的鬼笔环肽的染色溶液对样品进行荧光染色，避光下染色60分钟。使用PBS缓冲液轻轻冲洗样品，去除多余的染色溶液。使用含DAPI的抗荧光淬灭封片液在黑暗中孵育样品5分钟，以染色细胞核。使用荧光显微镜观察样品表面的细胞形态，并进行相应的荧光成像拍照。
结果：图21通过DAPI染色观察细胞核，图21中展示了两组样品表面粘附细胞的形态。HUVECs细胞在两组样品表面上呈现出多边形的形态。与此不同的是，未涂层组的SMCs在表面粘附良好，显示出其正常的形态。而涂层组的SMCs则呈现出梭形并变窄的形态，表明涂层对SMCs的粘附和形态有一定的影响。这些观察结果表明涂层在调节细胞的形态和粘附中起到一定的调控作用。
总结：在生物相容性评估方面，通过水接触角实验、凝血时间评价以及蛋白吸附实验，证明了涂层组在材料表面的亲水性、凝血功能和蛋白吸附方面具有优越性，表明其具备良好的血液相容性。
细胞实验方面，在HUVECs和SMCs中进行了增殖、迁移和粘附实验。实验结果表明，在细胞增殖方面，涂层组促进了HUVECs的增殖，同时对SMCs具有抑制作用，表明涂层对不同类型细胞的影响具有选择性。划痕实验和Transwell实验进一步证实了本发明的涂层组促进HUVECs迁移，并抑制SMCs的迁移。粘附实验结果显示，涂层组的样品HUVECs的粘附数量明显增加，而SMCs的粘附数量减少。
综上所述，本发明的壳聚糖-丹酚酸B涂层在生物相容性评估和细胞实验中具有优越性能。壳聚糖-丹酚酸B涂层在促进HUVECs增殖和迁移方面表现出积极作用，可以推断出对内皮细胞增殖和迁移方面表现出积极作用，并对SMCs的迁移和粘附产生抑制效应，为其在生物医学领域的应用提供了有力支持。本发明所述的涂层具有潜在的应用前景，可用于生物医学器械等领域，具有广阔的市场前景和经济价值。
可以理解的是，以上关于本发明的具体描述，仅用于说明本发明而并非受限于本发明实施例所描述的技术方案，本领域的普通技术人员应当理解，仍然可以对本发明进行修改或等同替换，以达到相同的技术效果；只要满足使用需要，都在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种镍钛合金表面壳聚糖-丹酚酸B涂层的制备方法，其特征在于：所述制备方法的具体步骤如下：
①使用Tris-HCl缓冲液稀释盐酸多巴胺，制备得到2g/L-4g/L的聚多巴胺溶液；
②将镍钛合金浸泡在上述聚多巴胺溶液中，振荡24小时得镍钛合金样品，用去离子水冲洗镍钛合金样品，风干24小时，得覆有聚多巴胺的镍钛合金样品；
③将壳聚糖溶解于醋酸溶液中，在室温下，搅拌溶液直至壳聚糖完全溶解，得浓度为2.5g/L的壳聚糖溶液；
④将丹酚酸B固体加入上述壳聚糖溶液中，搅拌至丹酚酸B固体溶解，得丹酚酸B质量浓度为2g/L的混合溶液；
⑤在转速为4000转/分钟的搅拌下，缓慢地向步骤④制得的混合溶液中注入三聚磷酸钠溶液，并在室温下继续搅拌30分钟，得壳聚糖-丹酚酸B纳米粒子溶液，壳聚糖-丹酚酸B纳米粒子溶液中三聚磷酸钠的浓度为0.2g/L-1g/L；
⑥将壳聚糖-丹酚酸B纳米粒子溶液通过透析膜进行过滤，得第一溶液；
⑦将步骤②所得的覆有聚多巴胺的镍钛合金样品在4℃的条件下浸泡在第一溶液中，静置48小时后，经过后处理后，得到镍钛合金表面壳聚糖-丹酚酸B涂层。
2.根据权利要求1所述的一种镍钛合金表面壳聚糖-丹酚酸B涂层的制备方法，其特征在于：所述Tris-HCl缓冲液的浓度为10mM，pH值为8.5。
3.根据权利要求1所述的一种镍钛合金表面壳聚糖-丹酚酸B涂层的制备方法，其特征在于：所述醋酸溶液的pH值为4.5。
4.根据权利要求1所述的一种镍钛合金表面壳聚糖-丹酚酸B涂层的制备方法，其特征在于：所述透析膜的孔径为0.22um。
5.根据权利要求1所述的一种镍钛合金表面壳聚糖-丹酚酸B涂层的制备方法，其特征在于：所述用去离子水冲洗镍钛合金样品为用去离子水冲洗至镍钛合金样品表面无残留物。
6.根据权利要求1所述的一种镍钛合金表面壳聚糖-丹酚酸B涂层的制备方法，其特征在于：所述后处理为使用PBS缓冲溶液清洗至表面无残留物，然后晾干的过程。
7.一种如权利要求1-6中任一项所述的制备方法制得的镍钛合金表面壳聚糖-丹酚酸B涂层，其特征在于：所述涂层是以聚多巴胺为基底，聚多巴胺均匀涂覆于镍钛合金表面，包裹有丹酚酸B的壳聚糖微球以均匀分布的方式粘附在聚多巴胺基底上。
8.一种血管内植入器械，其特征在于：所述血管内植入器械包括器械涂层，所述器械涂层是权利要求1-6中任一项所述的制备方法制得的镍钛合金表面壳聚糖-丹酚酸B涂层。
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