CN117379544A - 一种抗体组合物及其在制备抗新冠病毒的药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明本发明公开了一种抗体药物组合物及其应用。该抗体药物组合物包括抗体和肝素。本发明中的抗体药物组合物首次采用抗体和肝素钠联合使用，肝素钠与XY4抗体(0.64ng/ml)、XY10抗体(0.08ng/ml)、XY15抗体(10ng/ml)的抗体组合物给药对表达SARS‑CoV‑2S蛋白的假病毒的抑制率，均优于单用给药，具有显著性差异(p<0.05)，产生了叠加的效果，可应用于制备防治新冠病毒的药物。
Description
技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及一种抗体组合物及其在制备抗新冠病毒的药物中的应用。
背景技术
COVID-19传染性强，早期症状不典型，且目前尚无用于治疗的特效药物。因此开发新型预防新冠病毒感染的方法，具有重大的公共卫生意义。
中国发明专利CN113150130B公开了一种新型冠状病毒单克隆抗体，通过筛选SARS-Cov-2康复者体内针对SARS-Cov-2的有效中和抗体，通过基因工程和蛋白表达技术，体外大规模生产单克隆抗体XY4抗体，然而我们在后续的研究中发现单克隆抗体XY4抗体对SARS-CoV-2的治疗效果还可进一步改进。
发明内容
基于现有技术可进一步改进的技术问题，本发明提出一种新的抗体组合物及其在制备抗新冠病毒的药物中的应用。
本发明提供一种抗体组合物，所述抗体组合物为抗体与肝素钠的组合物，所述抗体为通过筛选SARS-Cov-2康复者体内针对SARS-Cov-2的有效中和抗体，通过基因工程和蛋白表达技术，体外大规模生产得到的单克隆抗体。
优选的，所述抗体组合物为XY4抗体(0.64ng/ml)与肝素钠(500mg/L)的组合物；
所述XY4抗体的序列为：
XY4抗体重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述SEQ ID NO.1为：
GSTGDQVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSIAINWVRQAPGQGLAWMGKIIPIFGTANYAQKFQGRVTMTADESTNTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDVIEATIYGMDVWGQGTTVTVSS；
XY4抗体轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述SEQ ID NO.2为：
GSTGDADIVMTQSPSSLPASVGDRVTITCRTSQSISTYVNWYQQKSGNAPELLMYGASILQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSAPYTFAQGTKLEIR。
优选的，所述抗体组合物为XY10抗体(0.08ng/ml)与肝素钠(500mg/L)的组合物；
所述XY10抗体的序列为：
XY10抗体重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述SEQ ID NO.3为：
GSTGDQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCRASEDTFTSHYIHWVRQAPGQGLEWMGIINPTGGSISYAQKFQGRVAMTKDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGFTPDTSAPMDVWGQGTMVTVSS；
XY10抗体轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述SEQ ID NO.4为：
GSTGDASYELTQLPSASGTPGQRVTISCSGSSSDIGRSSVNWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRLSGSKSGTSGSLAISGLQSEDEADYYCAAWDNTLRGYVFGTGTKVTVLGQPKA。
优选的，所述抗体组合物为XY15抗体(10ng/ml)与不同浓度肝素钠(0.5～500mg/L)的组合物；
具体地，所述抗体组合物为XY15抗体(10ng/ml)与肝素钠(0.5mg/L)的组合物或XY15抗体(10ng/ml)与肝素钠(5mg/L)的组合物或XY15抗体(10ng/ml)与肝素钠(50mg/L)的组合物或XY15抗体(10ng/ml)与肝素钠(500mg/L)的组合物；
所述XY15抗体，其序列如下：
XY15抗体重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，所述SEQ ID NO.5为：
GSTGDQVQLVQSGSELKKPGASVKVSCRASEDTFTSHYIHWVRQAPGQGLEWMGIINPTGGSISYAQKFQGRVAMTKDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGFTPDTSAPMDVWGQGTMVTVSS；
XY15抗体轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示，所述SEQ ID NO.6为：
GSTGDAEIVLTQSPATLSLSPGETATLSCRASESVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHHYGSSPRPFGQGTKVEIK。
本发明还提供如前所述的抗体组合物在制备预防和/或治疗新冠病毒感染的药物中的应用，所述新冠病毒为SARS-COV-2。
本发明的积极进步效果在于：本发明的抗体组合物首次采用单克隆抗体和肝素钠联合使用，意外发现了通过筛选SARS-Cov-2康复者体内针对SARS-Cov-2的有效中和抗体，通过基因工程和蛋白表达技术，体外大规模生产得到的不同单克隆抗体，与肝素钠联合使用对表达SARS-CoV-2S蛋白的假病毒的抑制率显著高于单独使用普通肝素钠或单独使用所述的单克隆抗体(p<0.05)，证明了上述单克隆抗体和肝素钠的组合物产生了叠加的效果，该抗体组合物可用于制备防治新冠病毒(SARS-CoV-2S)药物的用途。
附图说明
图1为肝素钠(500mg/L)、XY4抗体(0.64ng/ml)、XY4抗体(0.64ng/ml)+肝素钠(500mg/L)的抑制率对比图(*表示抗体组合物与肝素钠相比，P＜0.05；#表示抗体组合物与抗体相比，P＜0.05)；
图2为肝素钠(500mg/L)、XY10抗体(0.08ng/ml)、XY10抗体(0.08ng/ml)+肝素钠(500mg/L)的抑制率对比图(*表示抗体组合物与肝素钠相比，P＜0.05；#表示抗体组合物与抗体相比，P＜0.05)。
具体实施方式
1.实验材料：
普通肝素钠购自罗恩(185USP units/mg)、抗体(参照中国发明专利CN 113150130B制备)、过表达ACE2的293T细胞和SARS-Cov-2 S蛋白的假病毒购买自长沙君意华湘生物科技有限公司。
XY4抗体重链可变区氨基酸序列为：
GSTGDQVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSIAINWVRQAPGQGLAWMGKIIPIFGTANYAQKFQGRVTMTADESTNTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDVIEATIYGMDVWGQGTTVTVSS；
XY4抗体轻链可变区氨基酸序列为：
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XY10抗体重链可变区氨基酸序列为：
GSTGDQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCRASEDTFTSHYIHWVRQAPGQGLEWMGIINPTGGSISYAQKFQGRVAMTKDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGFTPDTSAPMDVWGQGTMVTVSS；
XY10抗体轻链可变区氨基酸序列为：
GSTGDASYELTQLPSASGTPGQRVTISCSGSSSDIGRSSVNWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRLSGSKSGTSGSLAISGLQSEDEADYYCAAWDNTLRGYVFGTGTKVTVLGQPKA。
XY15抗体重链可变区氨基酸序列：
GSTGDQVQLVQSGSELKKPGASVKVSCRASEDTFTSHYIHWVRQAPGQGLEWMGIINPTGGSISYAQKFQGRVAMTKDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGFTPDTSAPMDVWGQGTMVTVSS；
XY15抗体轻链可变区氨基酸序列：
GSTGDAEIVLTQSPATLSLSPGETATLSCRASESVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHHYGSSPRPFGQGTKVEIK。
2.实验方法：
将表达SARS-Cov-2 S蛋白的假病毒200个TCID50与不同浓度的药物组合物等体积进行混合，总体积为200μl，加入到96孔细胞培养板，37℃孵育1h，加入100μl含20000个过表达ACE2的293T细胞；对照不加入抗体，等量假病毒与过表达ACE2的293T混合；本底等量假病毒与293T细胞混合；37℃，5％的CO2放置48h后，检测荧光强度。
抑制效率＝(实验组-本底)/(对照-本底)*100％。
3.实验分组：
所述的药物组合物分为三个类别：肝素钠(不加抗体)、抗体(不加肝素钠)、抗体+肝素钠的抗体组合物；所述的药物组合物的给药体积为100μl。
具体地，所述的药物组合物分为：
不同浓度的肝素钠(0.005、0.05、0.5、5、50、500mg/L)，每个浓度有4个复空；
不同浓度的XY15抗体(0.3125、0.625、1.25、2.5、5、10ng/ml)，每个浓度有4个复空；
不同浓度的肝素(0.5、5、50、500mg/L)+XY15抗体(10ng/ml)，每个浓度有4个复空；
XY4抗体(0.64ng/ml)，有5个复空；
XY4抗体(0.64ng/ml)+肝素钠(500mg/L)，有5个复空；
XY10抗体(0.08ng/ml)，有4个复空；
XY10抗体(0.08ng/ml)+肝素钠(500mg/L)，有4个复空。
4.实验效果数据：通过不同浓度抗体与不同浓度肝素钠的组合进行考察对表达SARS-Cov-2S蛋白的假病毒的抑制率，判断抗体组合物的抗病毒效果。
4.1.不同浓度的肝素钠(0.005、0.05、0.5、5、50、500mg/L)的抗病毒效果
4.2.不同浓度的XY15抗体(0.3125、0.625、1.25、2.5、5、10ng/ml)；
4.3.不同浓度的肝素(0.5、5、50、500mg/L)+XY15抗体(10ng/ml)
4.4.XY4抗体(0.64ng/ml)、XY4抗体(0.64ng/ml)+肝素钠(500mg/L)
4.5.XY10抗体(2.56ng/ml、0.08ng/ml)、XY10抗体(0.08ng/ml)+肝素钠(500mg/L)
5.统计分析：各给药组组间采用t检验，以P＜0.05表示组间有显著性差异。
5.1.不同浓度肝素钠、XY15抗体、不同浓度肝素钠+XY15抗体的抑制率对比分析
从上表分析可知，不同浓度的肝素钠(0.5mg/L～500mg/L)与XY15抗体(10ng/ml)的抗体组合物给药对表达SARS-CoV-2S蛋白的假病毒的抑制率明显高于单用肝素钠或单用XY15抗体(10ng/ml)的抑制率，具有显著性差异(P＜0.05)。说明肝素钠(0.5mg/L～500mg/L)与XY15抗体(10ng/ml)的组合产生了叠加的效果。
5.2.肝素钠(500mg/L)、XY4抗体(0.64ng/ml)、XY4抗体(0.64ng/ml)+肝素钠(500mg/L)的抑制率对比。
如上表和图1所示，XY4抗体(0.64ng/ml)+肝素钠(500mg/L)的抗体组合物给药对表达SARS-CoV-2S蛋白的假病毒的抑制率明显高于单用肝素钠(500mg/L)或单用XY4抗体(0.64ng/ml)的抑制率，具有显著性差异(P＜0.05)。说明XY4抗体(0.64ng/ml)+肝素钠(500mg/L)的组合产生了叠加的效果。
5.3.肝素钠(500mg/L)、XY10抗体(0.08ng/ml)、XY10抗体(0.08ng/ml)+肝素钠(500mg/L)的抑制率对比。
如上表和图2所示，XY10抗体(0.08ng/ml)+肝素钠(500mg/L)的抗体组合物给药对表达SARS-CoV-2S蛋白的假病毒的抑制率明显高于单用肝素钠(500mg/L)或单用XY10抗体(0.08ng/ml)的抑制率，具有显著性差异(P＜0.05)。说明XY10抗体(0.08ng/ml)+肝素钠(500mg/L)的组合产生了叠加的效果。
6.实验结论：
6.1.XY15抗体(10ng/ml)与不同浓度肝素钠(0.5mg/L～500mg/L)的组合产生了叠加的效果。
6.2.XY4抗体(0.64ng/ml)与肝素钠(500mg/L)的组合产生了叠加的效果。
6.3.XY10抗体(0.08ng/ml)与肝素钠(500mg/L)的组合产生了叠加的效果。
总结：XY15抗体(10ng/ml)与不同浓度肝素钠(0.5mg/L～500mg/L)、XY4抗体(0.64ng/ml)与肝素钠(500mg/L)、XY10抗体(0.08ng/ml)与肝素钠(500mg/L)的这三种抗体组合物给药对表达SARS-CoV-2S蛋白的假病毒的抑制率，均产生了叠加的效果，具有较好的抑制表达SARS-CoV-2S蛋白的假病毒的效果，可应用于新冠病毒(SARS-CoV-2S)的防治与抗新冠病毒(SARS-CoV-2S)药物的开发。
以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明。优选实施例并没有详尽描述所有的细节内容，也不限制该发明仅为所述的具体实施方式。显然，根据本说明书的内容，可作其他相关的修改。本说明书选取并具体描述这些实施例，是为了更好地解释本发明的原理和实际应用，从而使所属技术领域技术人员能很好地理解和利用本发明。本发明仅受权利要求书及其全部范围和等效物的限制。
Claims (6)
1.一种抗体组合物，其特征在于：所述抗体组合物为抗体与肝素钠的组合物，所述抗体为通过筛选SARS-Cov-2康复者体内针对SARS-Cov-2的有效中和抗体，通过基因工程和蛋白表达技术，体外大规模生产得到的单克隆抗体。
2.根据权利要求1所述的抗体组合物，其特征在于：所述抗体组合物为XY4抗体(0.64ng/ml)与肝素钠(500mg/L)的组合物；
所述XY4抗体的序列为：
XY4抗体重链可变区氨基酸序列为：
GSTGDQVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSIAINWVRQAPGQGLAWMGKIIPIFGTANYAQKFQGRVTMT ADESTNTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDVIEATIYGMDVWGQGTTVTVSS；
XY4抗体轻链可变区氨基酸序列为：
GSTGDADIVMTQSPSSLPASVGDRVTITCRTSQSISTYVNWYQQKSGNAPELLMYGASILQSGVPSRFSGSGSGTD FTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSAPYTFAQGTKLEIR。
3.根据权利要求1所述的抗体组合物，其特征在于：所述抗体组合物为XY10抗体(0.08ng/ml)与肝素钠(500mg/L)的组合物；
所述XY10抗体的序列为：
XY10抗体重链可变区氨基酸序列为：
GSTGDQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCRASEDTFTSHYIHWVRQAPGQGLEWMGIINPTGGSISYAQKFQGRVAMT KDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGFTPDTSAPMDVWGQGTMVTVSS；
XY10抗体轻链可变区氨基酸序列为：
GSTGDASYELTQLPSASGTPGQRVTISCSGSSSDIGRSSVNWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRLSGSKSGTSGSL AISGLQSEDEADYYCAAWDNTLRGYVFGTGTKVTVLGQPKA。
4.根据权利要求1所述的抗体组合物，其特征在于：所述抗体组合物为XY15抗体(10ng/ml)与不同浓度肝素钠(0.5～500mg/L)的组合物；
所述XY15抗体，其序列如下：
XY15抗体重链可变区氨基酸序列：
GSTGDQVQLVQSGSELKKPGASVKVSCRASEDTFTSHYIHWVRQAPGQGLEWMGIINPTGGSISYAQKFQGRVAMT KDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGFTPDTSAPMDVWGQGTMVTVSS；
XY15抗体轻链可变区氨基酸序列：
GSTGDAEIVLTQSPATLSLSPGETATLSCRASESVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLT ISRLEPEDFAVYYCHHYGSSPRPFGQGTKVEIK。
5.根据权利要求4所述的抗体组合物，其特征在于：所述抗体组合物为XY15抗体(10ng/ml)与肝素钠(0.5)的组合物或XY15抗体(10ng/ml)与肝素钠(5mg/L)的组合物或XY15抗体(10ng/ml)与肝素钠(50mg/L)的组合物或XY15抗体(10ng/ml)与肝素钠(500mg/L)的组合物。
6.如权利要求1-5任一项所述的抗体组合物在制备预防和/或治疗新冠病毒感染的药物中的应用，所述新冠病毒为SARS-COV-2。
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2023
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|---|---|---|---|---|
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Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| LIN, L.ET AL.: "Hypothesis for potential pathogenesis of SARS-CoV-2 infection-a review of immune changes in patients with viral pneumonia", EMERGING MICROBES & INFECTIONS, vol. 9, 31 December 2020 (2020-12-31), pages 729 * |
Also Published As
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